CN119198891A - 一种麦冬中化学成分的可视化检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分析检测技术领域，提供了一种麦冬中化学成分的可视化检测方法。本发明将麦冬根部待测样品包埋后进行切片，得到切片样品；对切片样品进行基质喷涂，得到喷涂切片；对喷涂切片进行基质辅助激光解吸电离质谱成像，得到可视化结果；所述基质喷涂的基质为2,5‑二羟基苯甲酸溶液，其中2,5‑二羟基苯甲酸的浓度为20~40mg/mL；2,5‑二羟基苯甲酸溶液中还含有三氟乙酸，三氟乙酸的体积浓度为0.05~0.15%；溶剂为乙腈水溶液（乙腈和水的体积比为6~8:4~2）。本发明利用基质辅助激光解吸电离质谱成像对麦冬中化学成分进行清晰的原位分析，从而获得麦冬中成分的空间分布和含量差异，空间上的呈现使结果更直观。
Description
技术领域
本发明涉及中药分析检测技术领域，尤其涉及一种麦冬中化学成分的可视化检测方法。
背景技术
麦冬，是百合科沿阶草属植物麦冬的干燥块根，始载于《神农本草经》，列为上品，其主要功效为养阴生津、润肺清心。麦冬在临床上广泛应用于心肌缺血、血栓、糖尿病、神经退化等疾病，药典中含麦冬的成方制剂有130余个，约占治疗心脑血管疾病中药制剂的17%，如参麦注射液、参松养心胶囊等。麦冬为常用大宗中药材，具有悠久的用药历史，其传统主产地为四川和浙江两省，分别称为川麦冬和浙麦冬。
目前，对麦冬进行检测的方法主要是液相色谱和质谱联用，具体为：对麦冬进行浸渍，对得到的浸提物进行液相色谱和质谱联用检测，但是，这种检测方法仅能够获得麦冬的相关物质的含量，对于相关物质的分布情况不得而知。即目前迫切需要一种精准、可视化的检测方法。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种麦冬中化学成分的可视化检测方法。本发明提供的检测方法能够对麦冬中的物质成分实现空间上的呈现，结果更直观。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种麦冬中化学成分的可视化检测方法，包括以下步骤：
将麦冬根部待测样品包埋后，进行切片，得到切片样品；
对所述切片样品进行基质喷涂，得到喷涂切片；
对所述喷涂切片进行基质辅助激光解吸电离质谱成像，得到可视化结果；
所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中2,5-二羟基苯甲酸的浓度为20~40mg/mL；所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中还含有三氟乙酸，三氟乙酸的体积浓度为0.05~0.15%；所述2,5-二羟基苯甲酸溶液的溶剂为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈和水的体积比为6~8:4~2。
优选地，所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中，乙腈和水的体积比为7:3，三氟乙酸的体积浓度为0.1%。
优选地，所述基质喷涂的参数包括：喷雾器在60℃时的流量为0.04~0.06mL/min，轨道速度为800~1000mm/min，喷嘴移动的距离为0.5~1.5mm，喷涂循环次数为7~8次。
优选地，所述麦冬根部待测样品包埋前还包括：进行清洗和冷冻，所述冷冻的温度为-90~-70℃。
优选地，所述包埋的包埋剂为含有羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液，所述水溶液中，羟丙基甲基纤维素的质量浓度为7~8%，聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度为2~3%。
优选地，所述切片的固定方式为沿轴向固定，所述切片的温度为-30~-10℃。
优选地，所述切片后，还包括：将得到的薄片转移至玻璃片表面后，进行干燥，得到切片样品。
优选地，所述切片样品的厚度为40~60μm。
优选地，所述基质辅助激光解吸电离质谱成像的参数包括：正离子模式扫描，扫描范围为150~1250m/z；空间分辨率为40~60μm；喷雾电压为为3000~5000V；离子源温度为200~300℃；激光衰减为27~29°。
优选地，所述基质辅助激光解吸电离质谱成像后，还包括将得到的质谱数据转换成Udp文件后，经Mirion数据分析软件，得到可视化结果。
本发明提供了一种麦冬中化学成分的可视化检测方法。
本发明利用基质辅助激光解吸电离质谱成像对浙麦冬进行检测，能够对麦冬中的物质成分实现空间上的呈现，结果更直观。尤其是，对于生长年限长的麦冬，本发明的可视化检测方法能够直观获得相关物质随着年限不同而发生位置和含量的变化。同时，基质的选择，能够准确、高效实现对麦冬中化学成分的检测。
附图说明
图1~图5为不同生长年限的浙麦冬中不同物质的可视化分析结果图；
图6为不同生长年限的浙麦冬成分色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种麦冬中化学成分的可视化检测方法，包括以下步骤：
将麦冬根部待测样品包埋后，进行切片，得到切片样品；
对所述切片样品进行基质喷涂，得到喷涂切片；
对所述喷涂切片进行基质辅助激光解吸电离质谱成像，得到可视化结果；
所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中2,5-二羟基苯甲酸的浓度为20~40mg/mL；所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中还含有三氟乙酸，三氟乙酸的体积浓度为0.05~0.15%；所述2,5-二羟基苯甲酸溶液的溶剂为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈和水的体积比为6~8:4~2。
如无特殊说明，本发明所用原料均优选为市售产品。
本发明将麦冬根部待测样品包埋后，进行切片，得到切片样品。
在本发明中，所述麦冬根部待测样品包埋前，优选还包括进行清洗和冷冻。在本发明中，所述清洗的试剂优选为水。在本发明中，所述冷冻的温度优选为-90~-70℃，进一步优选为-80℃。
在本发明中，所述包埋的包埋剂优选为含有羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液，所述水溶液中，羟丙基甲基纤维素的质量浓度优选为7~8%，进一步优选为7.5%；聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度优选为2~3%，进一步优选为2.5%。在本发明中，所述包埋的方式优选包括：将所述麦冬根部待测样品置于包埋剂中。
在本发明中，所述切片的固定方式优选为沿轴向固定。在本发明中，所述切片的温度优选为-30~-10℃，进一步优选为-20℃。
所述切片后，本发明优选还包括：将得到的薄片转移至玻璃片表面后，进行干燥，得到切片样品。
在本发明中，所述干燥优选在干燥箱中进行，本发明对所述干燥的时间不做具体限定，只要能够使玻璃片的水汽完全蒸干即可。
在本发明中，所述切片样品的厚度优选为40~60μm，具体优选为40μm、50μm或60μm。
得到切片样品后，本发明对所述切片样品进行基质喷涂，得到喷涂切片。
在本发明中，所述基质喷涂的基质为2,5-二羟基苯甲酸溶液。在本发明中，所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中2,5-二羟基苯甲酸的浓度为20~40mg/mL，优选为30mg/mL，具体可以为20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL或40mg/mL。在本发明中，所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中还含有三氟乙酸，三氟乙酸的体积浓度为0.05~0.15%，优选为0.1%，具体可以为0.05%、0.1%或0.15%。在本发明中，所述2,5-二羟基苯甲酸溶液的溶剂为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈和水的体积比为6~8:4~2，优选为7:3，具体可以为6:4、7:3或8:2。
在本发明中，所述基质喷涂的参数包括：喷雾器在60℃时的流量优选为0.04~0.06mL/min，具体可以为0.04mL/min、0.05mL/min或0.06mL/min；轨道速度优选为800~1000mm/min，具体可以为800mm/min、900mm/min或1000mm/min；喷嘴移动的距离优选为0.5~1.5mm，具体可以为0.5mm、1mm或1.5mm；喷涂循环次数优选为7~9次，具体可以为7次、8次或9次。
得到喷涂切片后，本发明对所述喷涂切片进行基质辅助激光解吸电离质谱成像，得到可视化结果。
在本发明中，所述基质辅助激光解吸电离质谱成像的参数包括：正离子模式扫描，扫描范围优选为150~1250m/z；空间分辨率优选为40~60μm，具体可以为40μm、45μm、50μm、55μm或60μm；喷雾电压优选为3000~5000V，具体可以为3000V、3500V、4000V、4500V或5000V；离子源温度优选为200~300℃，具体可以为200℃、220℃、250℃、270℃或300℃；激光衰减优选为27~29°，具体可以为27°、28°或29°。
所述基质辅助激光解吸电离质谱成像后，本发明优选还包括将得到的质谱数据转换成Udp文件后，经Mirion数据分析软件，得到可视化结果。
下面结合实施例对本发明提供的麦冬中化学成分的可视化检测方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
下述实施例中涉及的实验材料如表1所示，实验仪器如表2所示。
表1 实验材料
表2 实验仪器
实施例1
在浙江德清分别从一年生、两年生和三年生的新鲜麦冬收集其块根，每个生长年限收集三株。将收集到的浙麦冬简单清洗后，在-80℃下快速冷冻。接着使用包埋剂（7.5%羟丙基甲基纤维素（Hypromellose，HMPC）+2.5%聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpyrrolidone，PVP））将样品延轴向固定在冷冻切片机的样品托架上，并在-20℃下切为50μm厚度的组织切片。被切下来的薄片迅速转移至玻璃片表面，同时融化贴紧。
取出浙麦冬药材切片后，敞开置于干燥器中干燥15min，待玻片水汽完全干燥后将玻片置于基质喷涂仪内，选择使用含有体积浓度为0.1%三氟乙酸（乙腈：水=7/3，v/v）的DHB（2,5-二羟基苯甲酸）溶液30mg/mL的基质进行基质喷涂。基质喷涂参数设置如下：喷雾器在60℃时的流量设置为0.05mL/min，轨道速度设置为900mm/min，喷嘴移动的距离为1mm，喷涂循环次数为8次。
取出喷涂完基质的浙麦冬药材切片后，通过质谱成像平台控制程序软件设定扫描参数：正离子模式扫描，扫描范围为150~1250m/z；空间分辨率为50μm；喷雾电压为4000V；离子源温度为250℃；激光衰减为28°。
将原始的质谱数据转换成Udp文件后经Mirion数据分析软件将数据可视化呈现，结果如图1~图5所示。
从图1~图5可以看出：25种成分5,7-dihydroxy-6-methyl-3-(4'-hydroxybenzyl)chromone-4-one（5,7-二羟基-6-甲基-3-对羟基苄基黄酮）、5-hydroxy-3-(3-hydroxy-4-methoxybenzyl)-7-methoxy-6-methyl-4H-chromen-4-one（5-羟基-3-(3-羟基-4-甲氧基苯甲基)-7-甲氧基-6-甲基-四氢黄酮）、N-p-trans-Coumaroyltyramine（N-反式-对香豆酰酪胺）、N-trans-Feruloyltyramine（N-反式阿魏酰酪胺）、Ophiopogonanone B（麦冬黄烷酮B）、Borneol 7-O-[beta-D-apiofuranosyl-(1->6)]-beta-D-glucopyranoside-2（龙脑次苷）、Ophiopogonone A（麦冬黄酮A）、Methylophiopogonanone B（甲基麦冬二氢高异黄酮B）、Ophiop acidamide（麦冬酰胺）、6-aldehydo-isoophipogonone B（6-醛基异麦冬黄酮B）、Methylophiopogonanone A（甲基麦冬二氢高异黄酮A）、5,7,4'-trihydroxy,3’-methoxyl-6,8-dimethyl-homisoflavanone（5,7,4'-三羟基-3’-甲氧基-6,8-二甲基高异黄酮）、6-aldehydo-isoophipogonone A（6-醛基异麦冬黄酮A）、5-Hydroxy-7-methoxy-3',4'-methoxy-6,8-dimethylhomoisoflavanone（5-羟基-7-甲氧基-3’,4’-亚甲氧基-6,8-二甲基高异黄烷酮）、6-Formyl-isoophiopogonanone A（6-醛基异麦冬黄烷酮A）、Ophiopogonanone C（麦冬黄烷酮C）、2-HydroxymethylMethylophiopogonanone A（2-羟基甲基甲基麦冬二氢高异黄酮A）、5,7,2'-Trihydroxy-8,4'-dimethoxy-6-methylhomoisoflavone（5,7,2’-三羟基-8,4’-二甲氧基-6-甲基高异黄酮）、Ophiopogonanone E（麦冬黄烷酮E）、Ophiopogonanone D（麦冬黄烷酮D）、Stigmasterol（豆固醇）、Ruscogenin（鲁斯可皂苷元）、Borneol 7-O-[beta-D-apiofuranosyl-(1->6)]-beta-D-glucopyranoside（龙脑苷）、Ophiofurospiside B（蛇床环氧苷B）、OphiopogoninRa（麦冬皂苷Ra）随生长时间的改变，在麦冬中的分布位置和含量存在显著变化。
验证例
对实施例1中不同生长年限的浙麦冬样品进行液质联用分析，不同生长年限的浙麦冬成分色谱图如图6所示，色谱图检测到的化合物信息如表3所示。
表3 不同生长年限的浙麦冬提取物中化合物信息
上述液质联用结果所得成分的变化趋势与实施例1所得成分含量1趋势相同，说明，本发明提供的检测方法结果可信。
虽然传统的液质联用分析也可以筛选出不同生长年限浙麦冬的差异成分，但与质谱成像分析相比，缺乏空间上的呈现，不够直观。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种麦冬中化学成分的可视化检测方法，包括以下步骤：
将麦冬根部待测样品包埋后，进行切片，得到切片样品；
对所述切片样品进行基质喷涂，得到喷涂切片；
对所述喷涂切片进行基质辅助激光解吸电离质谱成像，得到可视化结果；
所述基质喷涂的基质为2,5-二羟基苯甲酸溶液，所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中2,5-二羟基苯甲酸的浓度为20~40mg/mL；所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中还含有三氟乙酸，三氟乙酸的体积浓度为0.05~0.15%；所述2,5-二羟基苯甲酸溶液的溶剂为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈和水的体积比为6~8:4~2。
2.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述2,5-二羟基苯甲酸溶液中，乙腈和水的体积比为7:3，三氟乙酸的体积浓度为0.1%。
3.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述基质喷涂的参数包括：喷雾器在60℃时的流量为0.04~0.06mL/min，轨道速度为800~1000mm/min，喷嘴移动的距离为0.5~1.5mm，喷涂循环次数为7~8次。
4.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述麦冬根部待测样品包埋前还包括：进行清洗和冷冻，所述冷冻的温度为-90~-70℃。
5.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述包埋的包埋剂为含有羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液，所述水溶液中，羟丙基甲基纤维素的质量浓度为7~8%，聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度为2~3%。
6.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述切片的固定方式为沿轴向固定，所述切片的温度为-30~-10℃。
7.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述切片后，还包括：将得到的薄片转移至玻璃片表面后，进行干燥，得到切片样品。
8.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述切片样品的厚度为40~60μm。
9.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述基质辅助激光解吸电离质谱成像的参数包括：正离子模式扫描，扫描范围为150~1250m/z；空间分辨率为40~60μm；喷雾电压为3000~5000V；离子源温度为200~300℃；激光衰减为27~29°。
10.根据权利要求1所述的可视化检测方法，其特征在于，所述基质辅助激光解吸电离质谱成像后，还包括将得到的质谱数据转换成Udp文件后，经Mirion数据分析软件，得到可视化结果。
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