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CN119173536A - 抗cd94抗体和其使用方法 - Google Patents

抗cd94抗体和其使用方法 Download PDF

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CN119173536A
CN119173536A CN202380040037.4A CN202380040037A CN119173536A CN 119173536 A CN119173536 A CN 119173536A CN 202380040037 A CN202380040037 A CN 202380040037A CN 119173536 A CN119173536 A CN 119173536A
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antibody
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CN202380040037.4A
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N·托马舍维奇
史若师
X·邓
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Original Assignee
Durham Biology
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Abstract

本公开涉及与人CD94结合的抗体，以及与所述抗体相关的方法、用途、多核苷酸、载体、宿主细胞和药物组合物。在一些实施方案中，所述抗体是与人CD94结合并且不阻断CD94与HLA‑E之间的结合的人抗体或人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体与食蟹猴CD94交叉反应。在一些实施方案中，所述抗体不会将表面表达的CD94的内化促进至现有抗体的程度。在一些实施方案中，所述抗体促进靶向例如在细胞表面上表达人CD94的细胞的ADCC。

Description

抗CD94抗体和其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2022年3月25日提交的美国临时申请号63/323,959的优先权，所述临时申请的公开内容以引用的方式整体并入本文中。
对电子序列表的引用
电子序列表(186542000740SEQLIST.xml；大小：69,347字节；和创建日期：2023年3月20日)的内容以引用的方式整体并入本文中。
发明领域
本公开涉及与CD94结合的抗体和所述抗体用于治疗与NK细胞和/或T细胞相关的疾病和病症的用途。
发明背景
自然杀伤(NK)/T细胞淋巴瘤和白血病的特征在于NK和/或CD8+和CD4+T细胞的克隆扩增。NK/T细胞淋巴瘤占非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的一小部分，并且具有低于50％的5年生存率(Kwong,2012)。仅美国每年就有大约4,000-7,000名新患者，其中亚洲人群中的频率较高(Bajaj,A.(2019)Int.J.Hemat..Ther 5:1-7)。NK/T细胞淋巴瘤可发生于任何年龄，并且超过一半的NHL患者为65岁或更老(Bajaj,2019)。还存在基于NK和T细胞的白血病，诸如LGL和侵袭性NK白血病。其中NK细胞发挥作用的疾病和病症的其他实例包括LGL白血病(例如，T细胞LGL白血病)、NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK，先前称为NK-LGL)、类风湿性关节炎、费尔蒂氏综合征、侵袭性NK白血病(例如，侵袭性自然杀伤性白血病(ANKL)和结外NKL鼻型(ENKL))、IBM和IBD。
有13种不同的疾病涉及NK/T细胞淋巴瘤：结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL和皮下脂膜炎TCL(Bajaj,2019)。NK/T细胞淋巴瘤的主要亚型主要是细胞毒性细胞驱动的(NK/CD8+T细胞)，包括结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL、肠病相关TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL和皮下脂膜炎TCL。NK/T细胞淋巴瘤影响多种器官，诸如皮肤、胃肠(GI)道、肝、脾和骨髓。症状包括颈部淋巴结肿大。大多数NK/T细胞淋巴瘤亚型是由Epstein bar病毒感染驱动的。
目前的治疗包括化学疗法(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松)，随后是干细胞移植；但无进展生存率保持在40-50％。目前正在研究的治疗包括阿仑单抗、卡非佐米(蛋白酶体抑制剂)、罗米地辛(HDAC抑制剂)、贝伐单抗、贝伦妥单抗维多汀(抗体-药物缀合物)、硼替佐米(蛋白酶体抑制剂)、贝利诺他(HDAC抑制剂)、普拉曲沙、伏立诺他(HDAC抑制剂)和阿维鲁单抗。尽管正在开发的药物种类繁多，但其中多种经常在标签外使用，并且结果喜忧参半。
目前还没有用于治疗NK/T细胞淋巴瘤的有效疗法，并且尚未开发出选择性靶向NK/T细胞淋巴瘤的疗法。目前针对NK/T细胞淋巴瘤的疗法可产生脱靶效应，而且并不完全有效。高疾病死亡率加上缺乏有效治疗强调了NK/T细胞淋巴瘤的治疗进展的必要性。
因此，本领域需要开发安全并且有效的疗法来治疗由表达CD94的NK细胞和/或T细胞介导的疾病，诸如NK/T细胞淋巴瘤。
本文所引用的所有参考文献(包括专利申请和公布)均以引用的方式整体并入。
发明内容
为了满足这些和其他需要，本公开尤其提供与CD94(例如，人CD94)特异性结合的抗体，治疗与表达CD94的NK细胞和/或T细胞相关的疾病或损伤(例如，NK/T细胞淋巴瘤和白血病(例如，LGL白血病))的方法，以及在施用与CD94特异性结合的抗体后耗竭或减少受试者中表达CD94的NK细胞和/或T细胞的数目的方法。本公开的这些抗体可具有以下特征中的一种或多种：与人CD94的高亲和力结合(例如，在表面上表达人CD94的细胞)，与食蟹猴CD94的交叉反应性(可用于临床前研究)，结合人CD94而不阻断其与HLA-E的相互作用的能力，与CD94结合后的最小内化，和/或针对表达CD94的细胞(诸如白血病细胞)诱导ADCC。这些特征被认为是有利的，例如，以测试、开发和用于治疗基于NK/T细胞的疾病，诸如淋巴瘤和白血病。例如，不希望受理论束缚，人们认为靶向NK细胞上的CD94进行ADCC可诱导癌细胞(例如，LGL白血病或淋巴瘤细胞)杀伤其他癌细胞。
在一些方面，本文提供了与人CD94结合(例如，特异性结合)的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域；其中所述VH结构域包含氨基酸序列EVQLX1ESGGGLVKPGGS LRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISX2SSX3X4IYY ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLGRYY YYMDVWGKGTTVTVSS，其中X1是L或V；其中X2是T或S；其中X3是N或S；并且其中X4是F或Y(SEQ ID NO:69)；其中所述VL结构域包含氨基酸序列DIX1MTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQS ISSWLAWX2QQKPX3KX4PKX5LIYAASSLQSGVPSX6FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDX7ATYYCQX8YNSX9PFTFGPGTKVDIK，其中X1是V或Q；其中X2是Y或F；其中X3是G或E；其中X4是A或V；其中X5是S或L；其中X6是K或R；其中X7是V或F；其中X8是K或Q；并且其中X9是A或Y(SEQ ID NO:70)；并且其中所述抗体不包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ IDNO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。在一些实施方案中，所述抗体不包含包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VH结构域和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL结构域。
在一些方面，本文提供了与人CD94结合(例如，特异性结合)的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域；其中所述VH结构域包含：包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1；包含选自由SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)、SISSSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:18)、SISTSSSFIYY ADSVKG(SEQ ID NO:21)和SISTSSNYIYYADSVKG(SEQ ID NO:24)组成的组的氨基酸序列的CDR-H2；和包含氨基酸序列DLGR YYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3；其中所述VL结构域包含：包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1；包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2；和包含选自由QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)、QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)和QKYNSYPFT(SEQ IDNO:28)组成的组的氨基酸序列的CDR-L3；并且其中所述抗体不包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ IDNO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISSSSNFIY YADSVKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGR YYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSSFIYYADSVK G(SEQ ID NO:21)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMD V(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNYIYYADSVKG(SEQ ID NO:24)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述VH结构域还包含：(a)包含选自由EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:48)和EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:49)组成的组的氨基酸序列的FR1；(b)包含WVRQAPGKGLEWV S(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列的FR2；(c)包含RFTISRDNAKNSL YLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:51)的氨基酸序列的FR 3；以及(d)包含WGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:52)的氨基酸序列的FR4。在一些实施方案中，所述VH结构域还包含：(a)包含EVQLLES GGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:48)的氨基酸序列的FR1；(b)包含WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列的FR2；(c)包含RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:51)的氨基酸序列的FR3；以及(d)包含WGKGTTVTVS S(SEQ ID NO:52)的氨基酸序列的FR4。在一些实施方案中，所述VH结构域还包含：(a)包含EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGF TFS(SEQ ID NO:49)的氨基酸序列的FR1；(b)包含WVRQAPGKG LEWVS(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列的FR2；(c)包含RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:51)的氨基酸序列的FR3；以及(d)包含WGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:52)的氨基酸序列的FR4。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QQY NSAPFT(SEQ ID NO:27)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISS WLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SE Q ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述VL结构域还包含：(a)包含选自由DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:53)和DI QMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:54)组成的组的氨基酸序列的FR1；(b)包含选自由WYQQKPGKAPKSLIY(SEQ ID NO:55)、WFQQKPGKAPKSLIY(SEQ ID NO:56)、WYQQKPEKAPKSLI Y(SEQ ID NO:57)、WYQQKPGKVPKSLIY(SEQ ID NO:58)和WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:59)组成的组的氨基酸序列的FR 2；(c)包含选自由GVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC(SEQ ID NO:60)、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC(SE Q ID NO:61)和GVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SE Q ID NO:62)组成的组的氨基酸序列的FR3；以及(d)包含FGPGTKV DIK(SEQ ID NO:63)的氨基酸序列的FR4。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。
在一些方面，本文提供了与人CD94结合(例如，特异性结合)的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域；其中所述VH结构域包含：包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1；包含选自由ISTSSNFI(SEQ ID NO:8)、ISSSSNFI(SEQID NO:19)、ISTSSSFI(SEQ ID NO:22)和ISTSSNYI(SEQ IDNO:25)组成的组的氨基酸序列的CDR-H2；和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3；其中所述VL结构域包含：包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1；包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2；和包含选自由QKYNSAPFT(SEQ ID NO:12)、QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)和QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)组成的组的氨基酸序列的CDR-L3；并且其中所述抗体不包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSNFI(SEQ ID NO:8)的CDR-H2、包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3、包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:12)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSNFI(SEQ ID NO:8)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISSSSNFI(SEQ ID NO:19)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSSFI(SEQ ID NO:22)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ IDNO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSNYI(SEQ ID NO:25)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ IDNO:12)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。
在一些方面，本文提供了与人CD94结合(例如，特异性结合)的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域；其中所述VH结构域包含：包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1；包含选自由STSSNF(SEQ ID NO:14)、SSSS NF(SEQ IDNO:20)、STSSSF(SEQ ID NO:23)和STSSNY(SE Q ID NO:26)组成的组的氨基酸序列的CDR-H2；和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3；其中所述VL结构域包含：包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1；包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2；和包含选自由QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)、QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)和QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)组成的组的氨基酸序列的CDR-L3；并且其中所述抗体不包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSNF(SEQ ID NO:14)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSNF(SEQ ID NO:14)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLG RYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTF SSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列SSSSNF(SEQ ID NO:20)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSSF(SEQ ID NO:23)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSNY(SEQ ID NO:26)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAP FT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。
在根据本文所述的任何实施方案的一些实施方案中，所述VH结构域包含选自由SEQ ID NO:16和29-32组成的组的氨基酸序列和/或所述VL结构域包含选自由SEQ ID NO:17和33-41组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体不包含包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VH结构域和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL结构域。
在根据本文所述的任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体为抗原结合抗体片段或单链抗体。在一些实施方案中，所述抗体还包含Fc区，例如人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，所述抗体包含非岩藻糖基化的人Fc区。在一些实施方案中，所述抗体在缺乏α-1,6-岩藻糖基转移酶基因的细胞系(例如，CHO细胞系)中产生，诸如FUT8。在一些实施方案中，所述抗体与人细胞Fcγ受体IIIA的结合程度大于包含野生型人IgG1 Fc区的抗体。在一些实施方案中，所述抗体能够诱导针对在表面上表达人CD94的细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。
在其他方面，本文提供编码根据以上实施方案中任一者的抗体的多核苷酸。本文进一步提供包含根据以上实施方案中任一者的多核苷酸的载体(例如，表达载体)。本文进一步提供包含根据以上实施方案中任一者的多核苷酸或载体的宿主细胞(例如，分离的宿主细胞或细胞系)。本文进一步提供用于产生抗体的方法，所述方法包括在适合产生所述抗体的条件下培养根据以上实施方案中任一者的宿主细胞。在一些实施方案中，所述方法还包括从宿主细胞回收所述抗体。
本文进一步提供包含根据以上实施方案中任一者的抗体和药学上可接受的载体的组合物(例如，药物组合物)。
在其他方面，本文提供用于治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的外周血LGL或NK细胞的数目减少。在一些实施方案中，所述疾病或病症为费尔蒂氏综合征，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种费尔蒂氏综合征症状减轻。在一些实施方案中，所述疾病或病症为包涵体肌炎，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种包涵体肌炎症状减轻。在一些实施方案中，所述疾病或病症为侵袭性NK白血病，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种侵袭性NK白血病症状减轻。在一些实施方案中，所述疾病或病症为类风湿性关节炎，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种类风湿性关节炎症状减轻。在一些实施方案中，所述疾病或病症为LGL白血病，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种LGL白血病症状减轻。在一些实施方案中，所述疾病或病症为CLPD-NK，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种CLPD-NK症状减轻。在一些实施方案中，所述疾病或病症为自然杀伤(NK)细胞或T细胞淋巴瘤，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种淋巴瘤症状减轻。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL或肠病相关TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为显微镜下结肠炎，并且其中向受试者施用所述抗体导致受试者的一种或多种显微镜下结肠炎症状减轻。
在其他方面，本文提供用于减少受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物。在其他方面，本文提供用于诱导受试者的ADCC活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物。在其他方面，本文提供用于治疗有需要的人受试者的CLPD-NK的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的一种或多种CLPD-NK症状的改进。
在其他方面，本文提供治疗自然杀伤(NK)细胞或T细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物。在一些实施方案中，所述抗体不与抗CD94抗体克隆HP-3D9、HP-3B1、DX22、131412或12K45结合人CD94上的相同表位。在一些实施方案中，所述抗体以大于抗CD94抗体克隆HP-3D9、HP-3B1、DX22、131412和12K45的亲和力与人CD94结合。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL、血管免疫母细胞性TCL或成人TCL。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL或肠病相关TCL。
在其他方面，本文提供增强有需要的人受试者的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物，接着向所述受试者施用CAR-T治疗。在一些实施方案中，所述抗体或组合物的施用导致在施用CAR-T治疗之前受试者的NK细胞耗竭。
在其他方面，本文提供用于耗竭有需要的人受试者的CD8+CD94+T细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物。在一些实施方案中，所述抗体或组合物的施用导致受试者的CD8+CD94+T细胞的耗竭。
在根据本文所述的任何实施方案的一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用IL-2多肽。
在根据本文所述的任何实施方案的一些实施方案中，所述受试者为人。
在其他方面，本文提供根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物，用于：治疗受试者的疾病或病症，减少受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目，治疗有需要的人类受试者的CLPD-NK，治疗自然杀伤(NK)细胞或T细胞淋巴瘤，治疗受试者的显微镜下结肠炎，或增强有需要的受试者的CAR-T疗法。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL或肠病相关TCL。
在其他方面，本文提供根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物用于制造药剂的用途，所述药剂例如用于：治疗受试者的疾病或病症，减少受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目，治疗有需要的人类受试者的CLPD-NK，治疗自然杀伤(NK)细胞或T细胞淋巴瘤，治疗受试者的显微镜下结肠炎，或增强有需要的受试者的CAR-T疗法。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL、血管免疫母细胞性TCL或成人TCL。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL或肠病相关TCL。
在其他方面，本文提供包含根据以上实施方案中任一者的抗体或组合物的试剂盒或制品。在一些实施方案，所述试剂盒还包括关于使用所述试剂盒的说明书，例如用于治疗受试者的疾病或病症，减少受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目，治疗有需要的人类受试者的CLPD-NK，治疗自然杀伤(NK)细胞或T细胞淋巴瘤，治疗受试者的显微镜下结肠炎，或增强有需要的受试者的CAR-T疗法。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL或肠病相关TCL。
应了解，本文所述的各种实施方案的一种、一些或全部性质可加以组合以形成本公开的其他实施方案。本公开的这些和其他方面对于本领域技术人员来说将变得显而易见。本公开的这些和其他实施方案通过以下详细说明进一步描述。
附图说明
本发明的新颖特征具体地阐述于所附权利要求书中。参考以下阐述说明性实施方案的具体实施方式将获得对本发明的特征和优点的更好理解，其中使用本发明的原理，并且其中附图为：
图1示出如通过流式细胞术所测量的抗CD94抗体18H3对人原代自然杀伤(NK)细胞的亲和力。使用健康供体HD-40的外周血单核细胞(PBMC)进行抗体染色。将18H3抗体以1:3稀释度从100nM滴定至0.046nM，并与PBMC一起孵育。使用CD3和CD56抗体来鉴定流动散射上的NK细胞。使用CD3+和CD56明亮NK细胞上的18H3抗体结合来评估18H3的亲和力。使用Graphpad Prism生成滴定曲线和EC50。18H3以2.6nM的亲和力与CD3+CD56明亮NK细胞结合。具有二级抗体的人IgG1同种型对照(hIgG1)和仅山羊(Fab)2片段抗人Fcy特异性二级抗体AF647(2级Ab)用作对照。
图2示出如通过流式细胞术所测量的抗CD94抗体与人原代NK细胞的结合。通过流式细胞术在人原代NK细胞上筛选抗CD94杂交瘤上清液。HP-3D9为商业抗CD94抗体，它用作阳性对照。小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3用作阴性对照。抗CD94抗体18H3、1M4和1E4与在人原代NK细胞上表达的CD94结合。
图3A-3B示出抗CD94抗体与食蟹猴CD94的交叉反应性。图3A示出杂交瘤抗体与食蟹猴CD94的交叉反应性。通过流式细胞术在表达食蟹猴CD94的HEK293细胞上筛选抗CD94杂交瘤上清液，以确定与食蟹猴CD94的交叉反应性。HP-3D9为商业抗CD94抗体，它用作阴性对照。小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3用作阴性对照。18H3、1M4和1E4与食蟹猴CD94交叉反应，而20F2是与人CD94反应但不与食蟹猴CD94交叉反应的另一CD94抗体克隆的实例。图3B示出商业抗体对食蟹猴CD94的交叉反应性。使用市售抗CD94抗体来测试食蟹猴的交叉反应性。18H3用作阳性对照。将每种抗体的MFI标准化为其各自同种型的MFI。与18H3不同，HP-3B1、131412、12K45、DX22和HP-3D9不与食蟹猴CD94交叉反应。
图4示出使用流式细胞术用抗CD94和市售抗CD94抗体执行的HLA-E四聚体阻断分析的结果。将健康供体PBMC与抗CD94抗体一起孵育。接着将PE标记的HLA-E四聚体与所述细胞和抗体混合物一起孵育，并使用流式细胞术进行检测。对于HP-3B1、131412、12K45、DX22、1M4和1E4，使用2.5μl HLA-E四聚体试剂，而对于18H3和HP-3D9使用5μl。在这一分析中使用每种抗体的饱和浓度。阻断百分比是计算为100–((抗CD94抗体的HLA-E阳性百分比)/(同种型的HLA-E阳性百分比)*100)。所述18H3和1E4抗体不阻断HLA-E与CD94的结合。
图5A-5B示出为评估18H3抗CD94抗体而执行的竞争分析的结果。对于所有竞争分析，将18H3与浓度为1.3μg/ml的PBMC一起孵育。图5A示出18H3与市售抗CD94抗体之间的竞争分析。对市售抗CD94抗体进行滴定，并与18H3同时，与PBMC一起孵育。图5B示出18H3和本文所公开的其他杂交瘤抗CD94抗体(1M4和1E4)的竞争分析。为了测试18H3与1M4/1E4之间的竞争，将1M4和1E4分别与浓度为8.5μg/ml和11μg/ml的细胞一起孵育。用AF647对18H3进行荧光标记，并与18H3-AF647同时，与细胞一起孵育。18H3仅部分地与HP-3D9竞争，并且不与DX22、HP-3B1、131412、12K45、1E4和1M4竞争。这些结果表明，18H3抗体结合的表位不与市售抗体共享。
图6A-6B示出为评估1M4抗CD94抗体而执行的竞争分析的结果。对于所有竞争分析，将1M4与浓度为8.5μg/ml的PBMC一起孵育。图6A示出1M4与市售抗CD94抗体之间的竞争分析。对市售抗CD94抗体进行滴定，并且与1M4同时，与PBMC一起孵育。图6B示出1M4和1E4抗体的竞争分析。为了测试1M4与1E4之间的竞争，将1E4与浓度为11μg/ml的细胞一起孵育。与1E4同时，将具有抗小鼠二级抗体的1M4与细胞一起孵育。1M4抗体不与市售抗体竞争，但与1E4竞争。
图7示出为评估1E4抗CD94抗体而执行的竞争分析的结果。对于所有竞争分析，将1E4与浓度为11μg/ml的PBMC一起孵育。对市售抗CD94抗体进行滴定，并且与1E4同时，与PBMC一起孵育。1E4抗体不与所测试的五种市售抗CD94抗体中的四种竞争，但部分地与12K45竞争。
图8A-8B示出抗CD94抗体内化分析的结果。在介于30分钟至24小时范围内的多个时间点，将健康供体外周血单核细胞(PBMC)与未缀合的抗CD94抗体一起孵育。使细胞保持于4℃下以防止内化，或保持于37℃下以诱导内化。图8A示出市售抗体HP-3D9和DX22的结果。市售抗CD94抗体以时间依赖性方式内化。图8B示出18H3、1M4和1E4抗体的结果。18H3、1M4和1E4抗体在与CD94结合后并未显著内化。
图9A-9B示出使用健康供体PBMC对抗CD94抗体进行的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)分析的结果。所述18H3抗体是在几夫碱存在下培养的Expi-CHO细胞中产生的，几夫碱是甘露糖苷酶I酶的有效抑制剂，用于产生模拟非岩藻糖基化抗体的18H3-KIF。使用岩藻糖基化1E4抗体来进行ADCC分析。将PBMC接种于96孔板中，并在10倍稀释液中介于1×10-6至10μg/ml范围内的抗CD94抗体存在下孵育过夜。通过流式细胞术量化NK细胞的数目。将人IgG1和抗CD94抗体处理条件下的NK细胞的数目标准化为人IgG1处理孔中的NK细胞数目。图9A示出使用人IgG1 18H3抗体进行的ADCC分析的结果，而图9B示出使用岩藻糖基化1E4抗体进行的ADCC分析的结果。人IgG1 18H3和岩藻糖基化1E4均以浓度依赖性方式耗竭人原代NK细胞。
图10示出使用CLPD-NK患者PBMC进行的抗CD94抗体ADCC分析的结果。18H3是在几夫碱存在下培养的Expi-CHO细胞中产生的，几夫碱是甘露糖苷酶I酶的有效抑制剂，以产生模拟非岩藻糖基化抗体的18H3-KIF。将PBMC接种于96孔板中，并在10倍稀释液中介于1×10-6至10ug/ml范围内的抗CD94抗体存在下孵育过夜。通过流式细胞术量化CD3-CD16+白血病细胞的数目。将人IgG1和抗CD94抗体处理条件下的白血病细胞的数目标准化为人IgG1处理孔中的白血病细胞数目。部分非岩藻糖基化的人IgG1 18H3以浓度依赖性方式耗竭人CLPD-NK白血病细胞。
图11描绘抗CD94抗体特征和相对于市售抗CD94抗体的功能评估的概述。
图12A示出检查ATK-130或同种型对照对植入健康人供体PBMC的人源化IL-15转基因小鼠的影响的研究设计。
图12B示出IL-15转基因小鼠中正常人NK和CD8 T细胞的耗竭。对小鼠植入健康供体PBMC持续三天。将一个剂量的人IgG1同种型对照或ATX-130(5mg/kg)注射至小鼠(每组5只小鼠)中，并在给药后48小时，通过流式细胞术评估血液、脾和骨髓中的NK细胞(上部图)和CD8 T细胞(下部图)的耗竭。通过各自样品中剩余的NK和CD8 T细胞的数目来量化耗竭。
图13示出IL-15转基因小鼠的血液、脾、骨髓和肝中的LGLL细胞的耗竭。对小鼠植入LGLL PBMC持续28天。将一个剂量的人IgG1同种型对照或ATX-130(5mg/kg)注射至小鼠(每组5只小鼠)中，并在给药后48小时，通过流式细胞术评估血液、脾、骨髓和肝中的LGLL细胞的耗竭。通过各自样品中剩余的CD94+LGLL细胞的数目来量化耗竭。
图14A示出在非人灵长类动物中进行的探索性药效学(PD)研究的设计以评估ATK-130的体内功效。
图14B示出如通过流式细胞术所评估在ATX-130-KIF以2mg/kg给药时体内食蟹猴NK细胞的耗竭。经由静脉内(IV)输注向两只幼稚食蟹猴(Cyno#1和Cyno#2)施用ATX-130-KIF(2mg/kg)持续60分钟。在8周时向Cyno#1和在16周时向Cyno#2施用额外2mg/kg ATX-130-KIF。定期记录体重和临床观察结果。从每个时间点在每只动物中抽取的5mL血液中分离出PBMC。以技术三重复每孔接种0.3×106个细胞，并用抗体组进行染色。使用CD3-CD8+门控策略来鉴定食蟹猴NK细胞。通过计算细胞群体占总PBMC的百分率来量化NK细胞。箭头指示施用剂量的时间点。
图15A-15B示出对食蟹猴CD4 T、CD8 T和B细胞耗竭的评估。对于Cyno#1和Cyno#2，从每个时间点抽取的5mL血液中分离出PBMC。以技术三重复每孔接种0.3×106个细胞，并用抗体组进行染色。分别使用CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3-CD20+门控策略来鉴定Cyno#1(图15A)和Cyno#2(图15B)CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞。通过计算细胞群体占总PBMC的百分率来量化细胞。
图16示出通过流式细胞术评估单核细胞耗竭的结果。对于Cyno#1(左图)和Cyno#2(右图)，从每个时间点抽取的5mL血液中分离出PBMC。以技术三重复每孔接种0.3×106个细胞，并用抗体组进行染色。使用CD3-CD14+门控策略来鉴定单核细胞。通过计算细胞群体占总PBMC的百分率来量化细胞。
图17示出通过流式细胞术评估单核细胞上的CD16表达的结果。对于Cyno#1(左图)和Cyno#2(右图)，从每个时间点抽取的5mL血液中分离出PBMC。以技术三重复每孔接种0.3×106个细胞，并用抗体组进行染色。使用CD3-CD14+门控策略来鉴定单核细胞。在单核细胞上评估CD16 MFI。
具体实施方式
下文参考示例性应用来描述数个方面以进行说明。应理解，已陈述众多具体细节、关系和方法以提供对本文所述的特征的全面理解。然而，相关领域的普通技术人员将容易地认识到，可以在一个或多个具体细节不存在下或使用其他方法来实践本文所述的特征。本文所述的特征不受所说明的动作或事件顺序限制，因为一些动作可以不同的顺序发生和/或与其他动作或事件同时发生。此外，并非所有所说明的动作或事件都是实施根据本文所述的特征的方法所必需的。
除非上下文另外明确指示，否则如本文所用，单数形式“一个(a/an)”和“所述”也意图包括复数形式。此外，在具体实施方式和/或权利要求书中使用术语“包括(including/includes)”、“具有(having/has/“with)”或其变体的情况下，此类术语意图以类似于术语“包含(comprising)”的方式具有包括性。如本文所用，术语“包含”与“包括”或“含有”同义，并且是包括性的或开放式的。
除非另有说明，否则本文中对“或”的任何提及均意图涵盖“和/或”。如本文所用，关于数字的术语“约”是指所述数字加上或减去所述数字的10％。关于范围的术语“约”是指所述范围减去其最低值的10％并加上其最大值的10％。
I.抗体
在一些实施方案中，本文提供与CD94(例如，在NK细胞或T细胞的表面上表达的人CD94)结合的抗体。本文还提供与CD94结合并且具有经修饰的免疫球蛋白Fc部分的抗体，所述修饰包括减少的岩藻糖基化、非岩藻糖基化或增强ADCC活性和/或改进Fc区对诸如CD16(例如，CD16a)的Fc受体的亲和力的突变。本文还提供与CD94结合并具有一种或多种以下特征的抗体：与人CD94和食蟹猴CD94结合，不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的靶标(例如，CD94)内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导或促进ADCC活性。
A.抗体靶标和亲和力
在一些实施方案中，本文所提供的抗体与CD94结合。在一些实施方案中，本文所提供的抗体与人CD94(例如，人CD94的细胞外结构域)结合。在一些实施方案中，本文所提供的抗体与食蟹猴CD94(例如，食蟹猴CD94的细胞外结构域)结合。在一些实施方案中，本文所提供的抗体与人CD94结合并且与食蟹猴CD94结合。在一些实施方案中，本公开的抗体与NK细胞和/或T细胞的表面上的CD94结合。
在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94蛋白或其部分，或与人CD94蛋白或其部分具有至少80％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％中任一者)同源性的蛋白质结合。示例性人CD94蛋白的氨基酸序列提供于SEQ ID NO:64-66的序列中：
MAVFKTTLWRLISGTLGIICLSLMSTLGILLKNSFTKLSIEPAFTPGPNIELQKDSDCCSCQEKWVGYRCNCYFISSEQKTWNESRHLCASQKSSLLQLQNTDELDFMSSSQQFYWIGLSYSEEHTAWLWENGSALSQYLFPSFETFNTKNCIAYNPNGNALDESCEDKNRYICKQQLI(SEQ ID NO:64)
MAVFKTTLWRLISGTLGIICLSLMSTLGILLKNSFTKLSIEPAFTPGPNIELQKDSDCCSCQEKWVGYRCNCYFISSEQKTWNESRHLCASQKSSLLQLQNTDELQDFMSSSQQFYWIGLSYSEEHTAWLWENGSALSQYLFPSFETFNTKNCIAYNPNGNALDESCEDKNRYICKQQLI(SEQ ID NO:65)
MAAFTKLSIEPAFTPGPNIELQKDSDCCSCQEKWVGYRCNCYFISSEQKTWNESRHLCASQKSSLLQLQNTDELDFMSSSQQFYWIGLSYSEEHTAWLWENGSALSQYLFPSFETFNTKNCIAYNPNGNALDESCEDKNRYICKQQLISYSEEHTAWLWENGSALSQYLFPSFETFNTKNCIAYNPNGNALDESCEDKNRYICKQQLI(SEQ ID NO:66)
在一些实施方案中，术语结合、与......特异性结合或对……具有特异性是指靶标与抗体之间的可测量并且可重现的相互作用(诸如结合)，它决定了在包括生物分子的异质分子群体存在下所述靶标的存在。举例来说，与靶标(其可为表位)结合或特异性结合的抗体是相比于它与其他靶标的结合，以较大亲和力、亲合力、更容易地和/或以较长持续时间结合这一靶标的抗体。在一个实施方案中，抗体与无关靶标结合的程度小于所述抗体与靶标的结合的约10％，如例如通过放射免疫分析(RIA)所测量。在某些实施方案中，与靶标特异性结合的抗体具有<1μM、<100nM、<10nM、<1nM或<0.1nM的解离常数(KD)。在某些实施方案中，抗体与蛋白质上在来自不同物种的蛋白质之间保守的表位特异性结合。在另一实施方案中，特异性结合可包括但不要求排他性结合。
在一些实施方案中，本文所提供的抗体与人CD94(自然杀伤细胞抗原CD94；CD94Entrez Gene ID:3824；KLRD1(HGNC Symbol)；UniProtKB标识符：Q13241；HGNC:6378；Ensembl:ENSG00000134539OMIM:602894；KP43)结合。
在一些实施方案中，本公开的抗体与食蟹猴CD94蛋白或其部分，或与食蟹猴CD94蛋白或其部分具有至少80％(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％中任一者)同源性的蛋白质结合。食蟹猴CD94蛋白的氨基酸序列为本领域中已知的，例如UniProtKB标识符：Q68VD4。
在某些实施方案中，抗体对其靶标(例如，CD94)的亲和力可由解离常数(KD)表示。可通过本领域中已知的常见方法，诸如流式细胞术或Western印迹，并使用本文所述的分析(例如，在实施例中)来测量亲和力。在一些实施方案中，使用放射性标记的抗原结合分析(RIA)来测量KD，所述分析用本公开的抗体的Fab形式和其靶标(例如，CD94)执行。在一些实施方案中，使用表面等离子体共振分析来测量KD。示例性分析描述于例如Drake,A.W.和Klakamp,S.L.(2007)J.Immunol.Methods 318:147-152中。
在一些实施方案中，可以使用本领域中已知的任何方法来评估本公开的抗体与CD94(例如，人CD94和/或食蟹猴CD94)的结合。例如，可以在离体基于流式细胞术的分析中使用外周血单核细胞(PMBC)和/或NK细胞来评估本公开的抗体与人CD94的结合，例如，如实施例中所述。可以使用本领域中已知的方法，诸如使用Graphpad prism来生成并评估滴定曲线和EC50。在另一实施例中，可以在离体或体外基于流式细胞术的分析中使用表达食蟹猴CD94的细胞(诸如表达食蟹猴CD94的HEK293细胞)来评估本公开的抗体与食蟹猴CD94的结合，例如，如实施例中所述。
在某些实施方案中，本公开的抗体具有小于约10μM的与其靶标(例如，人和/或食蟹猴CD94)结合的KD。在某些实施方案中，本公开的抗体具有小于约1μM的与其靶标(例如，人和/或食蟹猴CD94)结合的KD。在某些实施方案中，本公开的抗体具有小于约1000nM、小于约900nM、小于约800nM、小于约700nM、小于约600nM、小于约500nM、小于约400nM、小于约300nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约90nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约0.5nM或小于约0.1nM中任一者的与其靶标(例如，人和/或食蟹猴CD94)结合的KD。在一些实施方案中，本公开的抗体具有小于约100pM、小于约75pM、小于约50pM、小于约25pM、小于约10pM、小于约5pM、小于约1pM、小于约0.5pM或小于约0.1pM中任一者的与其靶标(例如，人和/或食蟹猴CD94)结合的KD。
在某些实施方案中，本公开的抗体具有小于约100nM、小于约90nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约0.5nM或小于约0.1nM的与人NK细胞或T细胞上的人CD94结合的KD。在某些实施方案中，本公开的抗体具有小于约75nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约0.5nM或小于约0.1nM的与人NK细胞或T细胞上的人CD94结合的KD。在某些实施方案中，本公开的抗体具有约2nM与约80nM之间的与人NK细胞或T细胞上的人CD94结合的KD。
在某些实施方案中，本公开的抗体具有小于约100nM、小于约90nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约0.5nM或小于约0.1nM的与表达食蟹猴CD94的细胞上的食蟹猴CD94结合的KD。在某些实施方案中，本公开的抗体具有小于约75nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约0.5nM或小于约0.1nM的与表达食蟹猴CD94的细胞上的食蟹猴CD94结合的KD。在某些实施方案中，本公开的抗体具有约2nM与约80nM之间的与表达食蟹猴CD94的细胞上的食蟹猴CD94结合的KD。
在一些实施方案中，本公开的抗体与针对其靶标(例如，CD94)的本领域中已知的抗体结合所述靶标上的相同或不同表位。在一些实施方案中，本公开的抗体与本领域中已知的抗体结合于不同表位。在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体不与抗CD94抗体克隆HP-3D9、DX22、HP-3B1、131412或12K45结合人CD94上的相同表位。在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体不与抗CD94抗体克隆DX22、HP-3B1或131412结合人CD94上的相同表位。在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体与抗CD94抗体克隆HP-3D9、DX22、HP-3B1、131412或12K45结合人CD94上的相同表位。在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体与抗CD94抗体克隆HP-3D9结合人CD94上的相同表位。在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体与抗CD94抗体克隆12K45结合人CD94上的相同表位。
在一些实施方案中，如果本公开的抗体不与针对其靶标(例如，CD94)的另一抗体(例如，针对所述靶标的市售抗体或本领域中已知的抗体)结合所述靶标上的相同表位，那么本公开的抗体在竞争分析中不会阻断所述另一抗体与靶标的结合(例如，如实施例中所述)，例如阻断50％或更多。
在一些实施方案中，本公开的抗体与其靶标(例如，CD94)以高于针对所述靶标的本领域中已知的抗体的亲和力结合。在一些实施方案中，本公开的抗体以高于抗CD94抗体克隆HP-3D9、DX22、HP-3B1、131412或12K45的亲和力与其靶标(例如，CD94)结合。在一些实施方案中，本公开的抗体以高于抗CD94抗体克隆HP-3B1、131412或12K45的亲和力与其靶标(例如，CD94)结合。
在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体以高于抗CD94抗体克隆HP-3D9、DX22、HP-3B1、131412或12K45的亲和力与人CD94结合。在一些实施方案中，本公开的抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体以高于抗CD94抗体克隆HP-3B1、131412或12K45的亲和力与人CD94结合。
在一些实施方案中，本公开的抗体与其靶标(例如，CD94)以比针对所述靶标的本领域中已知的另一抗体高至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少5.5倍、至少6倍、至少6.5倍、至少7倍、至少7.5倍、至少8倍、至少8.5倍、至少9倍、至少9.5倍、至少10倍或更多倍中任一者的亲和力结合。
B.示例性抗CD94抗体
本公开的某些方面涉及与人CD94结合(例如，特异性结合)的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。在一些实施方案中，本文提供了抗CD94抗体ATX-130的变体，所述抗体在2021年9月29日提交的国际申请号PCT/US2021/052668中有所描述。
在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含氨基酸序列EVQLX1ESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSM NWVRQAPGKGLEWVSSISX2SSX3X4IYYADSVKGRFTISRDNAKN SLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLGRYYYYMDVWGKGTTVTVS S，其中X1是L或V；其中X2是T或S；其中X3是N或S；并且其中X4是F或Y(SEQ ID NO:69)；和/或VL结构域，所述VL结构域包含氨基酸序列DIX1MTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSWL AWX2QQKPX3KX4PKX5LIYAASSLQSGVPSX6FSGSGSGTDFTLTIS SLQPEDX7ATYYCQX8YNSX9PFTFGPGTKVDIK，其中X1是V或Q；其中X2是Y或F；其中X3是G或E；其中X4是A或V；其中X5是S或L；其中X6是K或R；其中X7是V或F；其中X8是K或Q；并且其中X9是A或Y(SEQ ID NO:70)；其中所述抗体不包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AAS SLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列存在于SEQ ID No:29-32中的1、2、3或4个氨基酸取代；和/或所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含相对于SEQ ID NO:17的氨基酸序列存在于SEQ IDNo:33-41中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸取代。
在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含：包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1；包含选自由SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)、SISSSSNFIYYA DSVKG(SEQ ID NO:18)、SISTSSSFIYYADSVKG(SEQ ID NO:21)和SISTSSNYIYYADSVKG(SEQ ID NO:24)组成的组的氨基酸序列的CDR-H2；和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3；和/或VL结构域，所述VL结构域包含：包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1；包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2；和包含选自由QKYNSA PFT(SEQ ID NO:6)、QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)和QKYNS YPFT(SEQ ID NO:28)组成的组的氨基酸序列的CDR-L3；其中所述抗体不包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。
在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISSSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSSFIYYADSVKG(SEQID NO:21)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNYIYYADSVKG(SEQ ID NO:24)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3。本公开的任何VH结构域或VH结构域中的三个CDR的集合可以与本公开的任何VL结构域或VL结构域中的三个CDR的集合组合。
如本领域中已知，抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有类似结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个互补决定区(CDR)。(参见例如Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007)。)框架(或如本文所用的“FR”)可以指除CDR残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，CD R和FR序列通常按以下序列出现于VH(或VL)中：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在一些实施方案中，本公开的FR1、FR2、FR3和/或FR4是指人框架区(即，在VH或VL结构域中)。
在一些实施方案中，所述VH结构域还包含：(a)包含选自由EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:48)和EVQL VESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:49)组成的组的氨基酸序列的FR1；(b)包含WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列的FR2；(c)包含RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDT AVYYCAR(SEQ ID NO:51)的氨基酸序列的FR3；以及(d)包含WG KGTTVTVSS(SEQ ID NO:52)的氨基酸序列的FR4。在一些实施方案中，所述VH结构域还包含：(a)包含EVQLLESGGGLVKPGGSLR LSCAASGFTFS(SEQ ID NO:48)的氨基酸序列的FR1；(b)包含WV RQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列的FR2；(c)包含RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:51)的氨基酸序列的FR3；以及(d)包含WGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:52)的氨基酸序列的FR4。在一些实施方案中，所述VH结构域还包含：(a)包含EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:49)的氨基酸序列的FR1；(b)包含WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列的FR2；(c)包含RFTISRDNAKNSLYLQMNSLR AEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:51)的氨基酸序列的FR3；以及(d)包含WGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:52)的氨基酸序列的FR4。
在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)的CDR-L3。本公开的任何VL结构域或VL结构域中的三个CDR的集合均可以与本公开的任何VH结构域或VH结构域中的三个CDR的集合组合。
在一些实施方案中，所述VL结构域还包含：(a)包含选自由DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:53)和DIQMTQSPSSL SASVGDRVTITC(SEQ ID NO:54)组成的组的氨基酸序列的FR1；(b)包含选自由WYQQKPGKAPKSLIY(SEQ ID NO:55)、WFQQKPGKAPKSLIY(SEQ ID NO:56)、WYQQKPEKAPKSLIY(SEQ ID NO:57)、WYQQKPGKVPKSLIY(SEQ IDNO:58)和WYQQKPGKAPKL LIY(SEQ ID NO:59)组成的组的氨基酸序列的FR2；(c)包含选自由GVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC(SEQ ID NO:60)、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC(SEQ ID NO:61)和GVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:62)组成的组的氨基酸序列的FR3；以及(d)包含FGPGTKVDIK(SEQ ID NO:63)的氨基酸序列的FR4。
在一些实施方案中，所述VH结构域包含选自由SEQ ID NO:16和29-32组成的组的氨基酸序列和/或所述VL结构域包含选自由SEQ ID NO:17和33-41组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体不包含包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VH结构域和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL结构域。
在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ IDNO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗体包含VH结构域，其包含来自表1中所列的单个VH结构域的1、2或3个CDR；和/或VL结构域，其包含来自表1中所列的单个VL结构域的1、2或3个CDR。在一些实施方案中，本公开的抗体包含VH结构域，其包含来自表2中所列的单个VH结构域的1、2或3个CDR；和/或VL结构域，其包含来自表2中所列的单个VL结构域的1、2或3个CDR。在一些实施方案中，本公开的抗体包含表2中所列的VH和/或VL结构域。如下文所示和本文所述，在一些实施方案中，在本公开的抗体中，表1中所示的任何3个VH CDR的集合均可以与表1中所示的任何3个VL CDR的集合组合。在一些实施方案中，在本公开的抗体中，表2中所示的VH结构域中的任何3个CDR的集合均可以与表2中所示的VL结构域中的任何3个CDR的集合组合。在一些实施方案中，在本公开的抗体中，表2中所示的任何VH结构域均可以与表2中所示的任何VL结构域组合。
表1.抗CD94抗体CDR序列
表2.抗CD94抗体可变结构域序列
抗体可变结构域的CDR序列的许多定义是本领域中已知的并且可以用于描述本公开的抗体，例如通过CDR序列。在一些实施方案中，抗体CDR序列是如Kabat中所定义(参见例如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)。在一些实施方案中，抗体CDR序列是如Chothia中所定义(参见例如Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。在一些实施方案中，抗体CDR序列是如IMGT中所定义(参见例如Lefranc,M.P.(1999)The Immunologist 7:132-136)。在一些实施方案中，通过混合两种或更多种定义(例如，Kabat、Chothia和/或IMGT)来定义单一抗体的CDR序列。
在一些实施方案中，所述VH结构域包含：包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1；包含选自由ISTSSNFI(SEQ ID NO:8)、ISSSSNFI(SEQ ID NO:19)、ISTSSSFI(SEQID NO:22)和ISTSSNYI(SEQ ID NO:25)组成的组的氨基酸序列的CDR-H2；和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3；和/或所述VL结构域包含：包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1；包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2；和包含选自由QKYNSAPFT(SEQ ID NO:12)、QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)和QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)组成的组的氨基酸序列的CDR-L3；其中所述抗体不包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ IDNO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSNFI(SEQ ID NO:8)的CDR-H2、包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3、包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ IDNO:12)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSNFI(SEQ ID NO:8)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISSSSNFI(SEQ ID NO:19)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQID NO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSSFI(SEQ ID NO:22)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSYS(SEQ ID NO:7)的CDR-H1、包含氨基酸序列ISTSSNYI(SEQ ID NO:25)的CDR-H2和包含氨基酸序列ARDLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:9)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:12)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列QSISSW(SEQ ID NO:10)的CDR-L1、包含氨基酸序列ASS(SEQ ID NO:11)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)的CDR-L3。
在一些实施方案中，所述VH结构域包含：包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1；包含选自由STSSNF(SEQ ID NO:14)、SSSSNF(SEQ ID NO:20)、STSSSF(SEQ IDNO:23)和STSSNY(SEQ ID NO:26)组成的组的氨基酸序列的CDR-H2；和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3；和/或所述VL结构域包含：包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1；包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2；和包含选自由QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)、QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)和QKYNSYPFT(SEQ IDNO:28)组成的组的氨基酸序列的CDR-L3；其中所述抗体不包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSNF(SEQ ID NO:14)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSNF(SEQ ID NO:14)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列SSSSNF(SEQ ID NO:20)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSSF(SEQ ID NO:23)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含包含氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:13)的CDR-H1、包含氨基酸序列STSSNY(SEQ ID NO:26)的CDR-H2和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:15)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ IDNO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ IDNO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)的CDR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗体包含Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区为人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，所述抗体包含非岩藻糖基化的人Fc区。在一些实施方案中，所述抗体与人细胞Fcγ受体IIIA的结合程度大于包含野生型人IgG1 Fc区的抗体。在一些实施方案中，所述抗体能够诱导针对在表面上表达人CD94的细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。
在一些实施方案中，术语抗体以最广泛含义使用并涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们展现所需抗原结合活性即可。在一些实施方案中，本公开的抗体为分离的抗体。“分离的”抗体是已经鉴定并且从其自然环境的组分中分离和/或回收的抗体。其自然环境的污染物组分是将干扰所述抗体的研究、诊断和/或治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，抗体经纯化(1)至超过95重量％的抗体，如通过例如Lowry方法所确定，并且在一些实施方案中，至超过99重量％；(2)至足以通过使用例如转杯式测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)至在还原或非还原条件下使用例如考马斯蓝或银染色通过SDS-PAGE发现均质性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为所述抗体的自然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。
在一些实施方案中，单克隆抗体是从大体上同质抗体的群体获得的抗体，即构成所述群体的个别抗体是同一的和/或结合相同表位，除了可能的变异抗体，例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间出现，此类变异体一般以微量存在。与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂形成对比，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体是针对抗原上的单一决定簇。因此，在一些实施方案中，单克隆抗体是从大体上同质抗体群体获得的。可以使用本领域中已知的任何方法产生单克隆抗体。例如，可以通过多种技术制备待根据本公开使用的单克隆抗体，所述技术包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法以及利用含有全部或部分的人类免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法。
C.HLA-E结合的阻断
主要组织相容性复合物I类E(HLA-E)是CD94/NKG2A异源二聚体的配体，并且当与CD94/NKG2A异源二聚体结合时，在抑制NK细胞和CD8+T细胞活性方面发挥至关重要的作用。因此，不希望受理论束缚，阻断HLA-E和CD94/NKG2A相互作用可以导致靶标细胞(例如，表达CD94的细胞)的活化和增生。因此，抗CD94抗体不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的相互作用可能是有益的，例如，在施用抗CD94抗体的患有NK/T细胞淋巴瘤的受试者中。在一些实施方案中，HLA-E为人HLA-E，也称为QA1和HLA-6.2。对于示例性HLA-E基因，参见例如NCBIGene ID No.3133；对于示例性HLA-E多肽，参见例如NP_005507.3。
在一些实施方案中，阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合是指阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合、阻断HLA-E与CD94的结合和/或阻断HLA-E与NKG2A的结合。
可以使用本领域中已知的任何方法来评估本公开的抗体对HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合的阻断。例如，可以使用离体分析来评估本公开的抗体对HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合的阻断，所述离体分析使用PBMC和/或NK细胞，例如，如实施例中所述。在示例性分析中，将例如获自健康供体的PBMC与人Fc阻断剂(Biolegend,San Diego,CA)和细胞活力染料(Thermo Fisher,Carlsbad,CA)一起在冰上孵育30分钟并避光。接着用FACS缓冲液(含2％ IgG低FBS的PBS)洗涤细胞一次。将饱和浓度的抗CD94抗体或同种型对照抗体与细胞一起在冰上孵育30分钟并避光。接着洗涤细胞并与HLA-E四聚体PE(CreativeBiolabs,Shirley,NY)、CD3太平洋蓝和CD56 FITC抗体(Biolegend,San Diego,CA)一起在冰上孵育30分钟并避光。接着，在流式细胞仪上进行量化之前，细胞在FACS缓冲液中进行最后一次洗涤。可以使用本领域中已知的方法，诸如使用CytoFlex流式细胞仪(BeckmanCoulter,Chaska,MN)来执行数据采集和荧光补偿。可以使用本领域中已知的任何方法，诸如使用FlowJo软件来执行数据分析。通过在前向和侧向散射上对淋巴细胞进行门控，接着进行双重和死细胞排除，并在CD3-CD56+群体上进行门控来鉴定NK细胞。接着在CD3-CD56+NK细胞群体上对HLA-E进行量化。与对照抗体(例如同种型对照抗体)相比，抗CD94抗体对HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合的阻断百分比是计算为：100–((对抗CD94抗体呈阳性的HLA-E百分比)/(对同种型呈阳性的HLA-E百分比)*100)。
在一些实施方案中，如果例如与同种型对照抗体相比，抗体阻断超过约20％的HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，那么所述抗体阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合。在一些实施方案中，如果例如与对照抗体(例如同种型对照抗体)相比，抗体阻断约21％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或100％的HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，那么所述抗体阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合。
在一些实施方案中，如果例如与同种型对照抗体相比，抗体阻断约20％或更少的HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，那么所述抗体不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合。在一些实施方案中，如果例如与对照抗体(例如同种型对照抗体)相比，抗体阻断约20％、约18％、约16％、约14％、约12％、约10％、约8％、约6％、约4％、约2％、约1％、约0.5％或0％的HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，那么所述抗体不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合。
在一些实施方案中，本文所提供的抗体不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合。在一些实施方案中，与对照抗体(例如同种型对照抗体)相比，本文所提供的抗体阻断约20％或更少、约19％或更少、约18％或更少、约17％或更少、约16％或更少、约15％或更少、约14％或更少、约13％或更少、约12％或更少、约11％或更少、约10％或更少、约9％或更少、约8％或更少、约6％或更少、约5％或更少、约4％或更少、约3％或更少、约2％或更少、约1％或更少、约0.5％或更少或0％的HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合。在一些实施方案中，与对照抗体(例如同种型对照抗体)相比，本文所提供的抗体阻断0％的HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合。
D.增强的ADCC活性
在一些实施方案中，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性、抗体依赖性细胞毒性、抗体定向细胞毒性或ADCC是指细胞介导的反应，其中产生Fc受体的非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤细胞(NK细胞)、中性粒细胞和巨噬细胞)识别与靶标细胞结合的抗体并且接着引起靶标细胞的溶解。主要的介体细胞为自然杀伤(NK)细胞。NK细胞表达FcγRIII(Ravetch等人(1991)Annu.Rev.Immunol.,9:457-92)。在一些实施方案中，ADCC活性是指抗体或Fc融合蛋白引发ADCC反应的能力。
在一些实施方案中，本文所提供的抗体具有增强的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，增强的ADCC活性是指体外或体内在效应细胞存在下抗体或抗体的Fc区比原生或野生型抗体和/或抗体的原生或野生型Fc区更高效地和/或更有效地介导或诱导ADCC，这可以使用ADCC分析来确定，例如，如本文所述或如本领域中通常已知。在一些实施方案中，效应细胞是产生一种或多种Fc受体并执行效应功能的白细胞。在一些实施方案中，此类细胞至少产生FcγRIII并执行ADCC效应功能。ADCC介导的人类白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤细胞(NK)、单核细胞、细胞毒性T细胞和中性粒细胞。
在一些实施方案中，可使用体外分析直接地评估ADCC活性，使用51Cr释放分析使用外周血单核细胞(PBMC)和/或NK效应细胞，参见例如Shields等人(2001)J.Biol.Chem.,276:6591-6604，或另一合适方法。ADCC活性可以表述为ADCC分析后剩余细胞的数目，或在靶标细胞的溶解达到半最大时抗体或Fc融合蛋白的浓度(例如，EC50或IC50)。在一些实施方案中，使用离体分析使用PBMC、LGL细胞和/或NK细胞来确定ADCC活性，例如，如实施例中所述，并且本公开的抗体的ADCC活性是描述为ADCC分析后剩余的靶标细胞的百分比和/或抗体的IC50或EC50(即，在实现半最大靶标细胞耗竭或细胞溶解时本公开的抗体的浓度)。可以使用本领域中已知的任何方法，例如使用剂量反应曲线和GraphPad Prism来确定抗体的IC50或EC50。
在一些实施方案中，本文所提供的抗体诱导ADCC活性，其中使用离体分析所测量的IC50或EC50在约1ng/ml至约100ng/ml之间(例如，约1ng/ml、约2ng/ml、约3ng/ml、约4ng/ml、约5ng/ml、约10ng/ml、约15ng/ml、约20ng/ml、约25ng/ml、约30ng/ml、约35ng/ml、约40ng/ml、约45ng/ml、约50ng/ml、约55ng/ml、约60ng/ml、约65ng/ml、约70ng/ml、约75ng/ml、约80ng/ml、约85ng/ml、约90ng/ml、约95ng/ml或约100ng/ml中任一者)。在一些实施方案中，本文所提供的抗体诱导ADCC活性，其中使用离体分析所测量的IC50或EC50为约20ng/ml或更低。在一些实施方案中，本文所提供的抗体诱导ADCC活性，其中使用离体分析所测量的IC50或EC50为约60ng/ml或更低。在一些实施方案中，本公开的抗体展现比对照抗体(例如野生型对照抗体，或本领域中已知或市售的针对相同靶标的抗体)的IC50或EC50低至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的IC50或EC50。
在一些实施方案中，IC50或EC50是指在规定的暴露时间后诱导在基线与最大值之间的中间反应的化合物(例如，抗体)的浓度。例如，IC50或EC50可以用于测量抗体介导和/或诱导效应功能(例如，ADCC活性)的效力。在一些实施方案中，剂量反应曲线的IC50或EC50表示观察到其最大效应的50％时化合物(例如，抗体)的浓度。
在一些实施方案中，与对照抗体(例如野生型对照抗体，或本领域中已知或市售的针对相同靶标的抗体)相比，本公开的抗体具有较高的最大靶标细胞溶解。例如，本公开的抗体可以展现比对照抗体(例如野生型对照抗体，或本领域中已知或市售的针对相同靶标的抗体)的最大靶标细胞溶解高至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％的最大靶标细胞溶解。
(i)增强与Fc受体的结合
在一些实施方案中，本文所提供的抗体包括与野生型Fc区相比具有增强的ADCC活性的人免疫球蛋白Fc区。在一些实施方案中，本文所提供的抗体与人细胞Fc受体的结合程度大于包含野生型Fc区的抗体。在一些实施方案中，Fc受体(FcR)是能够与抗体的Fc区结合的受体。某些Fc受体可与IgG(即，γ受体)结合；此类受体包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII的亚类，以及它们的等位基因变体和替代剪接事件。关于Fc受体的概述，参见Ravetch和China:Annu.Port.Immunol.9,457(1991)；Capel等人Immunomethods,4,25(1994)；和deHaas等人,J.Leg.Clin.Med.126,330(1995)。
在一些实施方案中，本文所提供的抗体与人细胞Fcγ受体IIIA的结合程度大于包含野生型Fc区的抗体。在一些实施方案中，所述人细胞Fcγ受体IIIA包含在氨基酸残基位置158处的缬氨酸残基或苯丙氨酸残基。参见例如UniProt登录P08637或VAR_003960。在一些实施方案中，所述人细胞Fcγ受体IIIA包含SEQ ID NO:67或68的序列。
人细胞Fcγ受体IIIA 158F
MWQLLLPTALLLLVSAGMRTEDLPKAVVFLEPQWYRVLEKDSVTLKCQGAYSPEDNSTQWFHNESLISSQASSYFIDAATVDDSGEYRCQTNLSTLSDPVQLEVHIGWLLLQAPRWVFKEEDPIHLRCHSWKNTALHKVTYLQNGKGRKYFHHNSDFYIPKATLKDSGSYFCRGLFGSKNVSSETVNITITQGLAVSTISSFFPPGYQVSFCLVMVLLFAVDTGLYFSVKTNIRSSTRDWKDHKFKWRKDPQDK(SEQ ID NO:67)
人细胞Fcγ受体IIIA 158V
MWQLLLPTALLLLVSAGMRTEDLPKAVVFLEPQWYRVLEKDSVTLKCQGAYSPEDNSTQWFHNESLISSQASSYFIDAATVDDSGEYRCQTNLSTLSDPVQLEVHIGWLLLQAPRWVFKEEDPIHLRCHSWKNTALHKVTYLQNGKGRKYFHHNSDFYIPKATLKDSGSYFCRGLVGSKNVSSETVNITITQGLAVSTISSFFPPGYQVSFCLVMVLLFAVDTGLYFSVKTNIRSSTRDWKDHKFKWRKDPQDK(SEQ ID NO:68)
在一些实施方案中，本文所提供的抗体属于IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA(IgA1或IgA2)、IgD、IgM或IgE同种型。在一些实施方案中，本文所提供的抗体属于IgG同种型。在一些实施方案中，本文所提供的抗体属于IgG1同种型。在一些实施方案中，本文所提供的抗体与人细胞Fcγ受体IIIA(FcγRIIIA)的结合程度大于包含野生型人IgG1 Fc区的抗体。在一些实施方案中，所述人细胞Fcγ受体IIIA包含在氨基酸残基位置158处的缬氨酸残基或苯丙氨酸残基。用于确定与人细胞Fcγ受体IIIA的结合的示例性分析是本领域中已知的；参见例如Lazar,G.A.等人(2006)Proc.Natl.Acad.Sci.103:4005-1010；和Ferrara,C.等人(2011)Proc.Natl.Acad.Sci.108:12669-12674。
在一些实施方案中，Fc区是免疫球蛋白重链中含有恒定区的至少一部分的C末端区域。在一些实施方案中，Fc区包括原生Fc区或变异Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以或可以不存在。在一些实施方案中，Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，所述系统还称为EU指数，如Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991中所述。在一些实施方案中，野生型Fc区或原生Fc区是包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列同一的氨基酸序列的Fc区。在一些实施方案中，变异Fc区是包含不同于至少一种氨基酸中的Fc区的原生或野生型序列的氨基酸序列的Fc区。在一些实施方案中，变异Fc区具有至少一个氨基酸取代，例如大约1-10或1-5个氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区变体与原生或野生型序列Fc区和/或原始多肽的Fc区至少大约80％(例如，至少约90％，或至少约95％)同源。在一些实施方案中，与原生或野生型Fc区相比，变异Fc区中的所述至少一个氨基酸取代增强了变异Fc区的效应功能。在一些实施方案中，效应功能是可归因于抗体的Fc区的生物活性，其随抗体同种型而异。抗体效应功能的实例包括：Clq结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；和B细胞激活。
可以使用本领域中已知的任何方法，诸如使用表面等离子体共振和/或ELISA来评估抗体对Fc受体的结合亲和力，例如，如Shields等人(2001)J.Biol.Chem.,276:6591-6604中所述。在一些实施方案中，本公开的抗体对FcγRIIIA的亲和力可以比野生型对照的亲和力高至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍或更高中任一者。
在一些实施方案中，亲和力是指分子(例如，抗体)的单一结合位点与其结合搭配物(例如，抗原或靶标)之间的非共价相互作用的合计强度。例如，分子X对其搭配物Y的亲和力一般可由解离常数(KD)表示。可通过本领域中已知的常见方法(包括本文所述的那些)来测量亲和力。
在一些实施方案中，关于分子(例如，抗体和/或Fc区)的结合程度大于另一分子(例如，抗体和/或Fc区)，或分子(例如，抗体和/或Fc区)的结合亲和力大于另一分子(例如，抗体和/或Fc区)，或其他语法等效物的陈述是指在结合分析(例如，如本文所述和/或如本领域中通常已知)中，在大体上相同条件下，分子(例如，抗体和/或Fc区)与靶标(例如，Fc受体、细胞表面蛋白)的结合比另一分子(例如，抗体和/或Fc区)更紧密(例如，具有较低解离常数)。例如，关于抗体“X”与Fc受体的结合程度大于抗体“Y”的陈述指示在结合分析(例如，如本文所述和/或如本领域中通常已知)中，在大体上相同条件下，抗体“X”与Fc受体的结合比抗体“Y”更紧密(例如，具有较低解离常数)。在另一实施例中，关于抗体“X”与靶标(例如细胞表面蛋白，诸如CD94)的结合亲和力大于抗体“Y”的陈述指示在结合分析(例如，如本文所述和/或如本领域中通常已知)中，在大体上相同条件下，抗体“X”与靶标(例如细胞表面蛋白，诸如CD94)的结合比抗体“Y”更紧密(例如，具有较低解离常数)。
(ii)减少岩藻糖基化
在一些实施方案中，本公开的抗体是非岩藻糖基化的或岩藻糖缺乏的，例如包含Fc区的糖基化抗体变体，其中附接至所述Fc区的碳水化合物结构具有减少的岩藻糖或缺乏岩藻糖。在一些实施方案中，具有减少的岩藻糖或缺乏岩藻糖的抗体具有改进的ADCC功能。相对于细胞系中产生的相同抗体上的岩藻糖的量，非岩藻糖基化或岩藻糖缺乏抗体具有减少的岩藻糖。在一些实施方案中，本公开的非岩藻糖基化或岩藻糖缺乏抗体组合物为如下组合物，其中附接至所述组合物中的抗体的Fc区的N-连接聚糖的少于约50％包含岩藻糖。
在一些实施方案中，岩藻糖基化(fucosylation/fucosylated)是指附接至本公开的抗体的肽主链的寡糖内的岩藻糖残基。具体说来，岩藻糖基化抗体包含附接至抗体Fc区的一个或两个N-连接寡糖中的最内层N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)残基处的α(l,6)连接的岩藻糖，例如人IgG1Fc结构域的位置Asn 297(Fc区残基的EU编号)处。由于免疫球蛋白的微小序列变异，Asn297也可以位于位置297上游或下游的约+3个氨基酸处，即位置294与300之间。
在一些实施方案中，岩藻糖基化程度是岩藻糖基化寡糖相对于所有寡糖的百分率，例如，如通过本领域中已知的方法所鉴定，诸如在通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)所评估的N-糖苷酶F处理的抗体组合物中。在完全岩藻糖基化抗体的组合物中，至少90％或基本上所有寡糖包含岩藻糖残基，即岩藻糖基化。因此，此类组合物中的个别抗体典型地在Fc区中的两个N-连接寡糖中的每一者中均包含岩藻糖残基。在一些实施方案中，在完全非岩藻糖基化抗体的组合物中，少于约10％或基本上没有寡糖是岩藻糖基化的，并且此类组合物中的个别抗体在Fc区中的两个N-连接寡糖中的任一者中均不含岩藻糖残基。在部分岩藻糖基化抗体的组合物中，仅一部分寡糖包含岩藻糖。此类组合物中的个别抗体可在Fc区中的零个、一个或两个N-连接寡糖中包含岩藻糖残基，条件是所述组合物不包含Fc区中的N-连接寡糖中缺乏岩藻糖残基的基本上所有个别抗体，或Fc区中的两个N-连接寡糖中均含有岩藻糖残基的基本上所有个别抗体。在一个实施方案中，部分岩藻糖基化抗体的组合物具有约10％至约80％(例如，约50％至约80％、约60％至约80％或约70％至约80％)的岩藻糖基化程度。
在一些实施方案中，糖基化抗体变体包含Fc区，其中附接至所述Fc区的碳水化合物结构缺乏岩藻糖。此类变体具有改进的ADCC功能。脱岩藻糖基化或岩藻糖缺乏抗体的实例描述于：US2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US2003/0115614；US2002/0164328；US2004/0093621；US2004/0132140；US2004/0110704；US2004/0110282；US2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；Okazaki等人J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohn uki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)中。
具有减少的岩藻糖基化的抗体或非岩藻糖基化的抗体可以使用本领域中已知的任何方法产生。在本公开的抗体的一些实施方案中，所述抗体的至少一条或两条重链可为非岩藻糖基化的。例如，具有减少的岩藻糖基化的本公开的抗体或非岩藻糖基化的本公开的抗体可以在具有α1,6-岩藻糖基转移酶(Fut8)敲除和/或过表达β1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnT-III)和/或过表达高尔基体μ-甘露糖苷酶II(ManII)的细胞系中产生。具有减少的岩藻糖基化的抗体或非岩藻糖基化的抗体也可以使用缺乏‘FUT8’(α-1,6岩藻糖基转移酶)的细胞系，所述酶催化岩藻糖的转移；使用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，例如缺乏FUT8的细胞(Yamane-Ohnuki等人,2004)；或使用小干扰RNA(siRNA)来阻断FUT8基因的表达(Mori等人,2004)而产生。可以用于产生非岩藻糖基化或脱岩藻糖基化抗体或具有减少的岩藻糖基化的抗体的其他细胞系是本领域中已知的，例如，包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13CHO细胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请号US2003/0157108 A1，Presta,L；和WO 2004/056312A1，Adams等人，尤其实施例11)，和敲除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除CHO细胞(Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004))，以及过表达β1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnT-III)和高尔基体μ-甘露糖苷酶II(ManII)的细胞。
在一些实施方案中，相对于野生型CHO细胞中产生的相同抗体上的岩藻糖的量，本公开的抗体具有减少的岩藻糖。例如，相对于在由原生CHO细胞(例如产生原生糖基化模式的CHO细胞，诸如含有原生FUT8基因的CHO细胞)产生的情况下抗体将具有的岩藻糖相比，抗体可具有较少量的岩藻糖。在一些实施方案中，本文所提供的抗体为如下抗体，其中其上少于约50％、40％、30％、20％、10％、5％或1％的N-连接聚糖包含岩藻糖。在某些实施方案中，本文所提供的抗体为如下抗体，其中其上的N-连接聚糖均不包含岩藻糖，即，其中所述抗体完全不含岩藻糖，或不具有岩藻糖，或非岩藻糖基化，或无岩藻糖基化。岩藻糖的量可由本领域技术人员确定，例如，相对于附接至Asn297的所有糖结构(例如，复合、杂合和高甘露糖结构)的总和，计算糖链内的Asn297处的岩藻糖的平均量，如通过MALDI-TOF质谱法所测量，如例如WO 2008/077546中所述。Asn297是指位于Fc区中的约位置297(Fc区残基的Eu编号)处的天冬酰胺残基；然而，由于抗体中的微小序列变异，Asn297也可以位于位置297上游或下游的约±3个氨基酸处，即位置294与300之间。在一些实施方案中，所述抗体的至少一条或两条重链是非岩藻糖基化的。
在其重链糖基化上缺乏1,6-岩藻糖的抗体可以具有增强的对FcγRIII受体的结合亲和力以及增加的ADCC活性(参见例如Shields等人,2002；Shinkawa等人,2002；Okazaki,2004；Dall'Ozzo,2004)。在一些实施方案中，本文所提供的抗体包括经修饰的Fc区，所述修饰包括减少的岩藻糖基化、非岩藻糖基化和/或增强ADCC活性和/或改进Fc区对诸如FcγRIII和CD16(例如，CD16a)的Fc受体的亲和力的突变。在一些实施方案中，所述分子(例如，本文所提供的抗体)诱导抗体定向细胞毒性(ADCC)并耗竭或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的数目，其程度高于岩藻糖基化或野生型抗体。
在一些实施方案中，对本公开的抗体进行工程改造以通过减少岩藻糖基化来改进ADCC活性。在一些实施方案中，本文所提供的分子(例如，本文所提供的抗体)可诱导抗体定向细胞毒性(ADCC)并耗竭或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的数目，其程度高于岩藻糖基化或野生型抗体。在一些实施方案中，本公开的抗体的至少一条或两条重链是非岩藻糖基化的。在一些实施方案中，对本公开的抗体进行修饰，使得所述抗体的碳水化合物是非岩藻糖基化的。在一些实施方案中，对本公开的抗体进行修饰，使得所述抗体的少于约90％(例如，少于约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％、约10％、约5％或约1％中任一者)的碳水化合物含有岩藻糖。在一些实施方案中，对本公开的抗体进行修饰，使得所述抗体的少于约40％的碳水化合物含有岩藻糖。在一些实施方案中，本文所提供的抗体是非岩藻糖基化的。
在一些实施方案中，本文所提供的分子(例如，抗体)诱导抗体定向细胞毒性(ADCC)并耗竭或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的数目，其程度高于岩藻糖基化或野生型抗体。
(iii)增强ADCC活性的突变
本公开的抗体可以包含变异Fc区。在一些实施方案中，所述变异Fc区包括Fc区中改进ADCC活性的至少一个氨基酸取代。例如，本公开的抗体可以具有变异IgG1 Fc区，其包含选自S239D、A330L、I332E、F243L和G236A的一种或多种Fc突变。在另一实施例中，本公开的抗体可以具有人IgG1 Fc变异体区，其包含选自S239D、A330L、I332E、F243L和G236A的一种或多种Fc突变。可以使用已知增强ADCC活性的其他氨基酸取代，例如，如Lazar等人,PNAS103,4005–4010(2006)；Shields等人,J.Biol.Chem.276,6591–6604(2001)；Stewart等人,Protein Engineering,Design and Selection 24,671–678(2011)，以及Richards等人,Mol Cancer Ther 7,2517–2527(2008)中所述。
(iv)减少的内化
在一些实施方案中，本公开的抗体具有低程度的内化，例如，受体诱导的内化或靶标内化(即，表面表达的CD94的内化)，例如，如与野生型对照抗体或本领域中已知或市售的针对相同靶标的抗体相比。具有较低内化的抗体具有细胞表面上较高的受体(例如，CD94)占有率和细胞表面上较高水平的受体-抗体复合物，这可能增强ADCC活性。可以体外测试本公开的抗体的内化能力。可以在离体分析中，例如使用PBMC和/或NK细胞来测试本公开的抗体的内化能力，例如，如实施例中所述。靶标(例如，CD94)的内化可以使用基于流式细胞术的分析表述为一段时间内平均荧光强度(MFI)的降低百分比，例如，如实施例中所述。例如，靶标的内化(即，本公开的抗体的内化能力)可以表述为MFI的降低百分比，通过计算在37摄氏度下与所述抗体一起孵育的细胞中在24小时时期内(例如，0.5与24小时之间)的MFI差异并乘以100来计算，例如，如实施例中所述。
在一些实施方案中，如果抗体导致MFI降低超过50％，那么所述抗体具有高程度的内化，所述MFI降低通过计算在37℃下与抗体一起孵育的细胞中在24小时时期内(例如，0.5与24小时之间)的MFI差异并乘以100来计算，如通过离体分析，例如使用PBMC和/或NK细胞所测量，如实施例中所述。在一些实施方案中，将抗体与在表面上表达人CD94的细胞一起在37℃下孵育24小时，使用本领域中已知和/或如上文所述的方法进行评估，如果由于内化作用而导致表面抗体染色减少超过50％，那么所述抗体具有高程度的内化。
在一些实施方案中，如果抗体导致MFI降低少于50％(例如，约50％或更低、45％或更低、40％或更低、35％或更低、30％或更低、25％或更低、20％或更低、15％或更低、10％或更低、5％或更低、1％或更低或0％中任一者)，那么所述抗体具有低程度的内化，所述MFI降低通过计算在37℃下与抗体一起孵育的细胞中在24小时时期内(例如，0.5与24小时之间)的MFI差异并乘以100来计算，如通过离体分析，例如使用PBMC和/或NK细胞所测量，如实施例中所述。在一些实施方案中，本公开的抗体具有低程度的内化并导致如上文所述而计算的约50％或更低、约40％或更低、约35％或更低、约30％或更低、约25％或更低、约20％或更低、约15％或更低、约10％或更低、约5％或更低、约2.5％或更低、约1％或更低或约0％的MFI降低。在一些实施方案中，将抗体与在表面上表达人CD94的细胞一起在37℃下孵育24小时，使用本领域中已知和/或如上文所述的方法进行评估，如果由于内化作用而导致表面抗体染色减少不足50％，那么所述抗体具有低程度的内化。
在一些实施方案中，本公开的抗体具有或导致比对照抗体(例如，商业或野生型对照抗体，或同种型对照抗体)的内化低至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约99％或约100％的内化活性，其中内化作用如上文所述和/或使用本领域中已知的任何合适方法进行评估。
可以进一步测试无内化活性或具有低内化活性的抗体候选物与来自食蟹猴和/或来自人的靶标(例如，食蟹猴和/或人CD94)的结合。与食蟹猴和/或人靶标结合的抗体可以用于体外和体内细胞杀伤分析(例如，ADCC分析)。可以将所选抗体的细胞杀伤活性(例如，ADCC活性)与市售抗体或本领域中已知的抗体进行比较。
E.抗体的生成
可以使用本领域中已知的任何技术和/或方法生成本公开的抗体。用于制备针对几乎任何靶标抗原的抗体(例如，单克隆抗体(mAb))的技术是本领域中众所周知的。参见例如和Milstein,Nature256:495(1975)，和Coligan等人(编),CURRENT PROTOCOLSIN IMMUNOLOGY,第1卷,第2.5.1-2.6.7页(John Wiley&Sons 1991)。简言之，可通过用包含抗原(例如，CD94或其部分)的组合物注射小鼠，去除脾以获得B-淋巴细胞，使B-淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤，克隆所述杂交瘤，选择产生针对所述抗原的抗体的阳性克隆，培养产生针对所述抗原的抗体的克隆并从杂交瘤培养物中分离抗体来获得单克隆抗体。普通技术人员将认识到，在将抗体施用于人受试者的情况下，抗体将与人抗原(例如，人CD94或其部分)结合。
可通过各种已确立的技术从杂交瘤培养物中分离并纯化MAb。此类分离技术包括使用蛋白-A或蛋白-G琼脂糖的亲和色谱法、尺寸排阻色谱法和离子交换色谱法。参见例如Coligan的第2.7.1-2.7.12页和第2.9.1-2.9.3页。还参见Baines等人,“Purification ofImmunoglobulin G(IgG),”METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,第10卷,第79-104页(TheHumana Press,Inc.1992)。
在初始生成针对免疫原(例如，CD94或其部分)的抗体之后，可对所述抗体测序并且随后通过重组技术来制备。鼠科动物抗体和抗体片段的人源化和嵌合是本领域技术人员众所周知的，如下文所论述。
在生成本公开的抗体的示例性方法中，重组靶标(例如，CD94)可以用于小鼠的免疫。可以通过ELISA和流式细胞术分析小鼠免疫(例如，如上文所述)后生成的抗体与其靶标(例如，CD94)的特异性或选择性结合。可以基于抗体与靶标(例如CD94)结合的能力来选择抗体。
在一些实施方案中，可以生成非人灵长类动物抗体。用于在狒狒中生成治疗上可用抗体的一般技术可见于例如Goldenberg等人,WO 91/11465(1991)和Losman等人,Int.J.Cancer 46:310(1990)中。
在一些实施方案中，抗体可以是人抗体。在一些实施方案中，抗体可以是单克隆人抗体。在一些实施方案中，人抗体具有对应于由人或人细胞产生或来源于利用人抗体谱或其他人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列。此类抗体可以获自转基因小鼠，所述转基因小鼠已进行工程改造以回应于抗原挑战(例如，CD94或其部分)而产生特异性人抗体。使用组合方法或用人免疫球蛋白基因座转化的转基因动物来产生完全人抗体的方法是本领域中已知的(例如，Mancini等人,2004,New Microbiol.27:315-28；Conrad和Scheller,2005,Comb.Chem.High Throughput Screen.8:117-26；Brekke和Loset,2003,Curr.Opin.Phamacol.3:544-50)。在某些实施方案中，要求保护的方法和程序可以利用通过此类技术产生的人抗体。产生完全人抗体的其他方法包括噬菌体展示，例如，如Dantas-Barbosa等人,2005,Genet.Mol.Res.4:126-40中所述；在正常人或展现特定疾病状态的人中生成抗体，例如，如Dantas-Barbosa等人,2005中所述；或使用转基因动物(例如，小鼠)，所述转基因动物已进行基因工程改造以使用如上文所论述的标准免疫方案产生人抗体，例如，如Green等人,1999,J.Immunol.Methods 231:11-23，Green等人,NatureGenet.7:13(1994)，Lonberg等人,Nature 368:856(1994)，和Taylor等人,Int.Immun.6:579(1994)中所述。
(i)体外细胞杀伤分析
本公开的抗体的生成可涉及测试所述抗体的体外ADCC活性。可以如上文所述、如实施例中所述和/或使用本领域中已知的方法来测试本公开的抗体的改进的细胞杀伤或ADCC活性。可以针对表达CD94的NK细胞和/或T细胞的耗竭测试本公开的抗体的改进的细胞杀伤或ADCC活性。可以使用再现人类活动的示例性体外模型来测试表达CD94的NK细胞和/或T细胞的耗竭(Tomasevic等人,Growth Factors,2014；32(6):223–235；Huang等人,JCIinsight,2016；1(7):e86689)。将从正常(即，健康)供体的血液中分离出的外周血淋巴细胞(PBL)与具有人Fc区(含和不含岩藻糖和/或含和不含Fc区突变)的抗体一起孵育。使用本领域中已知的任何方法，诸如流式细胞术(例如，如实施例中所述)来测量PBL中(例如，PBL样品中)表达CD94的NK细胞和/或T细胞的杀伤水平。抗体的细胞杀伤活性(例如，ADCC活性)可以如上文所述进行测试，例如，使用上述分析，使用多种生物样本，诸如来自患者的血液、滑液、骨髓和脾完整细胞匀浆，所述患者患有诸如NK/T细胞淋巴瘤的疾病，例如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK)、LGL白血病、费尔蒂氏综合征、CLPD-NK、IBM以及RA伴LGL和/或侵袭性NK白血病。
除了上文所述的细胞杀伤分析以外，也可以执行体外ADCC和抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)分析来分析本公开的抗体的细胞杀伤、ADCC和/或ADCP活性，所述分析使用本公开的抗体、纯化的靶标细胞(例如，表达CD94的NK细胞和/或T细胞)和/或效应细胞(诸如NK细胞或单核细胞/巨噬细胞)。可以使用细胞杀伤、ADCC和/或ADCP分析以及本领域中已知的其他分析方法，例如，如Kolbeck等人,J Allergy Clin Immunol.2010；125(6):1344-1353.e2；Gomez-Roman等人,J.Immunol.Methods,2006,308,第53-67页；以及Ackerman等人,J.Immunol.Methods,2011,366,第8-19页中所述。可以将本公开的抗体的体外活性与市售抗体或本领域中已知的针对相同靶标的抗体进行比较。
(ii)体内细胞杀伤分析
本公开的抗体的生成可涉及测试所述抗体的体内ADCC活性，例如以显示所选抗体候选物在体内耗竭或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的水平的活性。可以使用本领域中已知的任何方法来确定本公开的抗体的体内细胞杀伤活性(例如，ADCC和/或ADCP活性)。例如，可以使用本领域中已知的方法在食蟹猴中测试本公开的抗体在体内耗竭或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的能力。例如，在测试本公开抗体的体内细胞杀伤活性(例如，ADCC和/或ADCP活性)的示例性方法中，在施用单一剂量的本公开的抗体(例如，抗体治疗)之前一天对食蟹猴群组放血以通过流式细胞术鉴定表达CD94的NK细胞和/或T细胞的给药前水平。在施用本公开的抗体后，例如，在用本公开的抗体治疗后，在以下时间点对所述猴放血：1小时、1天、7天、14天和30天。在每个时间点，通过流式细胞术确定血液和其他生物样本(诸如滑液、骨髓和脾)中表达CD94的NK细胞和/或T细胞的水平。可以将本公开的抗体的体内活性与市售抗体或本领域中已知的针对相同靶标的抗体进行比较。可以将本公开的抗CD94抗体与抗CD94抗体克隆DX22、HP-3D9、HP-3B1、131412或12K45进行比较。
熟练技术人员将容易理解，本领域中已知的用于测试体内ADCC活性的其他方法可以用于分析本公开的抗体的体内ADCC活性(例如转基因动物，诸如转基因小鼠)。
其他已知的针对靶标(例如，CD94)的抗体也可以用于本文所提供的方法中。例如，本公开的抗CD94抗体可以与以下抗CD94抗体一起进行测试(例如，体外或体内ADCC活性，或本文所述的任何其他特征)：HP-3D9(LSBio目录#LS-C134679-100；Abnova目录#:MAB6947)；2I2；131412(R&D Systems目录#:MAB1058)；13B146(US Biological目录#:030068)；13B147(USBiological目录#:030069)；1H1(Abnova目录#:MAB10543)；3G2(Biorbyt目录#:orb69389)；DX22(Biolegend目录#305502)；REA113(Miltenyi Biotec目录#:130-098-967)；KP43；EPR21003；AT13E3(ATGen目录:ATGA0487)；HP-3B1；12K45；和B-D49。
(iii)人源化
可以根据本领域中已知的任何方法将本公开的抗体人源化。在一些实施方案中，人源化抗体是包含来自非人高变区(HVR)的氨基酸残基和来自人构架区(FR)的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包含至少一个并且典型地两个可变结构域中的大体上所有，其中所有或大体上所有的HVR(例如，CDR)对应于非人抗体的那些HVR，并且所有或大体上所有的FR对应于人抗体的那些FR。人源化抗体任选地可以包含抗体恒定区中来源于人抗体的至少一部分。在一些实施方案中，抗体(例如，非人抗体)的人源化形式是指已经进行人源化的抗体。
举例说来，可以通过将来自小鼠免疫球蛋白的可变重链和轻链的小鼠CDR转移至人抗体的相应可变结构域中来使单克隆抗体人源化。嵌合单克隆抗体中的小鼠构架区(FR)也可以经人FR序列置换。为了保持人源化单克隆抗体的稳定性和抗原特异性，可以由小鼠对应物残基置换一个或多个人FR残基。人源化单克隆抗体可以用于受试者的治疗性治疗。用于产生人源化单克隆抗体的技术是本领域中众所周知的，例如，如Jones等人,1986,Nature,321:522；Riechmann等人,Nature,1988,332:323；Verhoeyen等人,1988,Science,239:1534；Carter等人,1992,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,89:4285；Sandhu,Crit.Rev.Biotech.,1992,12:437；Tempest等人,1991,Biotechnology 9:266；Singer等人,J.Immun.,1993,150:2844中所述。
本公开的抗体可以具有一种或多种上文所述的特征，例如，增强的体外和/或体内细胞杀伤活性(例如，ADCC和/或ADCP活性)、增强的与一种或多种Fc受体的结合、减少的岩藻糖基化或非岩藻糖基化、交叉反应性(例如，与人CD94和食蟹猴CD94结合)、不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体结合、与市售抗体(例如，市售抗CD94抗体)竞争、低内化和/或所需的对其靶标蛋白(例如，CD94、人CD94和/或食蟹猴CD94)的亲和力。
在一些实施方案中，本公开的抗体在高于约10mg/mL的浓度下是可溶的。在一些实施方案中，本公开的抗体形成低水平的可溶性聚集体(例如，少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的可溶性聚集体)。在一些实施方案中，本公开的抗体具有在存储期间维持与其靶标(例如，CD94)的结合的能力，例如在约2℃、约3℃、约4℃、约5℃、约6℃、约7℃、约8℃中之任一者下持续至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月或更久。在一些实施方案中，本公开的抗体在存储期间具有稳定性(例如缺乏降解产物，例如，如通过SDS-PAGE所测量)，例如在约2℃、约3℃、约4℃、约5℃、约6℃、约7℃或约8℃中之任一者下持续至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月或更久。
在一些实施方案中，测试本公开的抗体的毒理学。可以使用本领域中已知的任何方法进行本公开的抗体的毒理学分析。在示例性毒理学分析中，在食蟹猴中在比预期用于人受试者的剂量高超过5倍(例如，高约5倍、高约10倍、高约15倍、高约20倍、高约25倍、高约30倍、高约35倍、高约40倍、高约45倍、高约50倍、高约55倍、高约60倍、高约65倍、高约70倍、高约75倍、高约80倍、高约85倍、高约90倍、高约95倍、高约100倍或更高中任一者)的剂量下测试本公开的抗体的毒性。
在一些实施方案中，本公开的抗体能够在体外和/或体内耗竭或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的水平。可以使用本领域中已知的任何方法测量表达CD94的NK细胞和/或T细胞的水平的耗竭或减少。例如，可以使用细胞杀伤、ADCC和/或ADCP分析来测量表达CD94的NK细胞和/或T细胞的耗竭，例如，如上文所述和/或如实施例中所述。
在一些实施方案中，本公开的抗体在高于10mg/mL的浓度下可溶，具有低水平的可溶性聚集体(<5％)，如通过ELISA所测量维持它与靶标的结合(>90％效力)，当在2-8℃下孵育3个月时如通过SDS PAGE所测量无降解产物。在一些实施方案中，可在食蟹猴中在比预期用于人受试者的剂量高超过5倍的剂量下执行本公开的抗体的毒理学分析。
在一些实施方案中，与CD94结合的抗体可以耗竭或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的水平并且可能对患有疾病或病症的患者(例如，人类患者)具有明显益处，所述疾病或病症诸如LGL白血病、类风湿性关节炎、费尔蒂氏综合征、CLPD-NK、侵袭性NK白血病、IBM、IBD或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。此外，所述抗体治疗可能具有比一线和二线疗法更好的耐受性和更少的副作用，所述一线和二线疗法包括化学疗法，诸如环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松；干细胞移植；脾切除术；阿仑单抗；贝伐珠单抗；普拉曲沙；阿维鲁单抗；蛋白酶体抑制剂，诸如卡非佐米和硼替佐米；HDAC抑制剂，诸如罗米地辛、贝利诺他和伏立诺他；和抗体-药物缀合物，诸如贝伦妥单抗维多汀。与目前的非选择性疗法相比，所述抗体治疗可以证明更有选择性地耗竭疾病诱导细胞。其中表达CD94的NK细胞和/或T细胞可以发挥作用的疾病和病症的非限制性实例为：LGL白血病、类风湿性关节炎、费尔蒂氏综合征、CLPD-NK、侵袭性NK白血病、IBM、IBD或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。因此，本发明提供一种通过施用分子来减少人受试者中表达CD94的IEL的数目或耗竭IEL的方法，所述分子与CD94结合并且包含(a)与靶标(例如，CD94)特异性结合的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。
II.用途和治疗方法
如上文所论述，NK细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和/或CD8+和CD4+T细胞已经已经参与诸如NK/T细胞淋巴瘤的多种疾病和病症的发病机制。这些病症或疾病中的多种的特征在于NK细胞和/或CD8+和CD4+T细胞的克隆扩增。
在一些实施方案中，本文提供与CD94(例如，在NK细胞或T细胞的表面上表达)结合的分子(例如，抗体)。本文还提供与CD94结合并且具有减少的岩藻糖基化、非岩藻糖基化(例如，具有经修饰或突变的免疫球蛋白Fc部分，所述修饰或突变减少或消除岩藻糖基化)的分子(例如，抗体)。本文还提供与CD94结合并且具有修饰或突变的分子(例如，抗体)，所述修饰或突变增强ADCC活性和/或改进Fc区对诸如CD16(例如，CD16a)的Fc受体的亲和力。本文还提供与CD94结合并具有一种或多种以下特征的分子(例如，抗体)：与人CD94和食蟹猴CD94结合，不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、促进或增强ADCC活性。
在一些实施方案中，本文提供一种用于治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的抗体，所述抗体与人CD94特异性结合。在一些实施方案中，本文提供一种用于治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的与人CD94特异性结合的抗体，其中所述抗体具有一种或多种以下特征：不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、促进或增强ADCC活性。在一些实施方案中，所述疾病或病症是选自NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK)、LGL白血病、费尔蒂氏综合征、类风湿性关节炎、侵袭性NK白血病、包涵体肌炎、炎症性肠病或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL、皮下脂膜炎TCL或显微镜下结肠炎。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致表达CD94的NK细胞和/或T细胞的数目减少。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的外周血NK细胞、CD8+、CD4+或CD8+/CD4+T细胞和/或LGL细胞(例如，表达CD94)的数目减少。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的外周血LGL细胞(例如，表达CD94)的数目减少。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的外周血NK细胞(例如，表达CD94)的数目减少。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的外周血CD8+/CD4+T细胞(例如，表达CD94)的数目减少。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的外周血CD8+T细胞(例如，表达CD94)的数目减少。在一些实施方案中，所述抗体的施用导致受试者的外周血CD4+T细胞(例如，表达CD94)的数目减少。
本文还提供一种用于减少表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本公开的抗体，所述抗体与人CD94特异性结合。在一些实施方案中，所述抗体具有一种或多种以下特征：不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、促进或增强ADCC活性。在一些实施方案中，所述受试者具有选自以下的疾病或病症：NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK)、LGL白血病、费尔蒂氏综合征、类风湿性关节炎、侵袭性NK白血病、包涵体肌炎、炎症性肠病或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL、皮下脂膜炎TCL或显微镜下结肠炎。在一些实施方案中，向受试者施用所述抗体导致与施用所述抗体之前相比，表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少。
本文还提供一种用于诱导受试者的ADCC活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的抗体，所述抗体与人CD94特异性结合。在一些实施方案中，所述抗体具有一种或多种以下特征：不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、增强或促进ADCC活性。在一些实施方案中，所述受试者具有选自以下的疾病或病症：NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK)、LGL白血病、费尔蒂氏综合征、类风湿性关节炎、侵袭性NK白血病、包涵体肌炎、炎症性肠病或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL、皮下脂膜炎TCL或显微镜下结肠炎。在一些实施方案中，向受试者施用所述抗体导致与施用所述抗体之前相比，表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少。
在一些实施方案中，所述疾病或病症为CLPD-NK。在一些实施方案中，所述疾病或病症为LGL白血病。在一些实施方案中，所述疾病或病症为费尔蒂氏综合征。在一些实施方案中，所述疾病或病症为类风湿性关节炎。在一些实施方案中，所述疾病或病症为侵袭性NK白血病。在一些实施方案中，所述疾病或病症为包涵体肌炎。在一些实施方案中，所述疾病或病症为炎症性肠病。在一些实施方案中，所述疾病或病症为T-大颗粒淋巴细胞白血病(T-LGLL)。在一些实施方案中，所述疾病或病症为自然杀伤-大颗粒淋巴细胞白血病(NK-LGLL)。在一些实施方案中，所述疾病或病症为NK/T细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述疾病或病症为结外NK/T细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述疾病或病症为肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)。在一些实施方案中，所述疾病或病症为肠病相关TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为皮肤TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)。在一些实施方案中，所述疾病或病症为间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)。在一些实施方案中，所述疾病或病症为外周TCL(未另外规定)。在一些实施方案中，所述疾病或病症为血管免疫母细胞性TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为成人TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为单形性亲上皮性肠TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为亲表皮性CD8+皮肤TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为原发性皮肤γ/δTCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为皮下脂膜炎TCL。在一些实施方案中，所述疾病或病症为显微镜下结肠炎。
本文还提供一种用于治疗有需要的人受试者的CLPD-NK的方法，所述方法包括向所述人受试者施用有效量的本公开的抗体，其中所述抗体与人CD94特异性结合。在一些实施方案中，向人受试者施用所述抗体导致此人的CLPD-NK症状的改进。
本文还提供一种用于治疗有需要的人受试者的NK/T细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述人受试者施用有效量的本公开的抗体，其中所述抗体与人CD94特异性结合。在一些实施方案中，向人受试者施用所述抗体导致此人的NK/T细胞淋巴瘤症状的改进。在一些实施方案中，所述NK/T细胞淋巴瘤是选自结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。
本文还提供一种用于治疗有需要的人受试者的CLPD-NK的方法，所述方法包括向所述人受试者施用有效量的本公开的抗体，其中所述抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体具有一种或多种以下特征：不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、增强或促进ADCC活性。在一些实施方案中，向人受试者施用所述抗体导致此人的CLPD-NK症状的改进。
本文还提供一种用于治疗有需要的人受试者的NK/T细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述人受试者施用有效量的本公开的抗体，其中所述抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体具有一种或多种以下特征：不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、增强或促进ADCC活性。在一些实施方案中，向人受试者施用所述抗体导致此人的NK/T细胞淋巴瘤症状的改进。在一些实施方案中，所述NK/T细胞淋巴瘤是选自结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL或肠病相关TCL。在一些实施方案中，所述NK细胞或T细胞淋巴瘤的特征在于NK细胞和/或T细胞表达CD94(例如，人CD94)。
本文还提供一种用于治疗有需要的人受试者的显微镜下结肠炎的方法，所述方法包括向所述人受试者施用有效量的本公开的抗体，其中所述抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体具有一种或多种以下特征：不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、增强或促进ADCC活性。在一些实施方案中，向人受试者施用所述抗体导致此人的显微镜下结肠炎症状的改进。显微镜下结肠炎是一种胃肠疾病，其特征在于结肠炎症导致持续的非血性水样腹泻。它被称为显微镜下的，因为仅可在显微镜下而非通过肉眼检查看到组织破坏。这些患者的结肠在宏观上看起来正常或具有接近正常的结肠粘膜。目前存在两种显微镜下结肠炎亚型：胶原性结肠炎，其特征在于肠衬里的胶原蛋白层的堆积；和淋巴细胞性结肠炎，其特征在于结肠组织中的淋巴细胞的增加。目前，它影响全球100/100,000人，其中39.3％的病例属于淋巴细胞亚型(Hisamatsu等人(2016)Inflamm.Intest.Dis.2:52-62)。目前显微镜下结肠炎的病因尚不清楚，但常见因素包括药物、细菌和病毒感染、自身免疫性疾病(诸如类风湿性关节炎、乳糜泻或牛皮癣)以及胆汁酸堆积。目前的诊断方法是肠组织的组织学检查，因为如果没有活检材料的组织病理学检查，就无法诊断所述疾病。显微镜下结肠炎的常见症状包括持续的水样腹泻，从而导致体重减轻、肿胀、贫血、营养不良等。显微镜下结肠炎没有治愈或适当治疗，除了抗腹泻药物、低脂肪、低纤维和低乳饮食、类固醇、胆汁酸阻断剂、消炎药、TNF抑制剂或在极少数情况下进行手术来去除部分或全部的结肠。尽管尚不清楚显微镜下结肠炎的主要致病细胞是什么，但研究表明，显微镜下结肠炎患者的结肠中的CD8+上皮内淋巴细胞(IEL)升高(Goranzon等人(2013)J.Crohns Colitis 7:e434-442)。文献中有证据表明，CD94在显微镜下结肠炎的IEL上高度表达(Barmeyer等人(2016)Inflamm.BowelDis.22:539-547)。不希望受理论束缚，认为抗CD94(例如，非岩藻糖基化的IgG1抗体)可能经由自相残杀对IEL细胞执行ADCC。文献还表明，与正常对照相比，显微镜下结肠炎活检中的CD16高度升高，表明IEL可能衔接抗CD94以诱导其他IEL细胞上的ADCC(Barmeyer等人(2016)Inflamm.Bowel Dis.22:539-547)。不希望受理论束缚，认为IEL细胞具有细胞毒性并且可能充当效应细胞以及靶标细胞。
本文还提供一种用于增强有需要的人受试者的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法的方法，所述方法包括向所述人受试者施用有效量的本公开的抗体，接着向所述受试者施用CAR-T治疗，其中所述抗体与人CD94特异性结合，其中所述抗体具有一种或多种以下特征：不阻断HLA-E与CD94/NKG2A异源二聚体的结合，具有低程度的内化，非岩藻糖基化或具有减少的岩藻糖基化，和/或诱导、增强或促进ADCC活性。在一些实施方案中，向所述人受试者施用所述抗体导致在施用CAR-T治疗之前受试者的NK细胞耗竭。在一些实施方案中，所述CAR-T疗法是用于治疗癌症，即，所述受试者已经/正在进行癌症治疗。用于治疗各种血液癌和实体癌的CAR-T细胞短半衰期显著阻碍细胞疗法的发展。淋巴细胞耗竭化学疗法通常在CAR-T治疗之前使用，诸如环磷酰胺联合或不联合氟达拉滨(Flu)。然而，这些标准化学疗法并不能充分耗竭NK细胞，从而导致现成的CAR-T细胞在输注后不久即消除。不希望受理论束缚，认为抗CD94抗体治疗有可能暂时耗竭NK细胞，从而实现HLA I类缺乏细胞(“通用CAR T细胞”)或器官的植入，以防止NK细胞介导的排斥。NK细胞的暂时耗竭应为HLA I类阴性细胞的植入提供一个窗口，并且不会造成安全风险。在CD94耗竭抗体消失后，NK细胞数目可能恢复正常。新出现的NK细胞应该对转移的HLA I类阴性细胞具有耐受性(基于混合骨髓嵌合体实验)。因此，抗CD94抗体治疗可能为增强CAR-T疗法提供机会，例如在癌症患者中。
在一些实施方案中，术语治疗(treat/treating/treatment)、改善(ameliorate/ameliorating)、减轻一种或多种症状(reducing one or more symptoms)、减轻症状(reducing symptoms)、减轻一种或多种症状(reduce one or more symptoms)、减轻症状(reduce symptoms)以及其他语法等效物是指缓解、消除或改善疾病或病症的一种或多种症状，预防另外的症状，改善或预防症状的根本原因，抑制疾病或病症，举例说来，阻止疾病或病症的发展，减轻疾病或病症，引起疾病或病症的消退，缓解由疾病或病症引起的疾患，或停止疾病或病症的症状，并且意图包括预防。在一些实施方案中，所述术语还包括实现治疗益处和/或预防益处。在一些实施方案中，治疗益处是指根除或改善所治疗的潜在疾病或病症。此外，通过根除或改善与潜在疾病或病症相关的一种或多种生理症状来实现治疗益处，使得在患者中观察到改进，不过在一些实施方案中，患者仍然患有潜在的疾病或病症。关于预防益处，将药物组合物施用于处于发展特定疾病或病症的风险中的患者，或施用于报告疾病或病症的一种或多种生理症状的患者，即使尚未对所述疾病或病症作出诊断。
在一些实施方案中，有效量、治疗有效量或药学有效量可以是所施用的至少一种药物组合物或化合物(例如，本公开的抗体)的足够量，它将在一定程度上减轻所治疗的疾病或疾患的一种或多种症状。
在一些实施方案中，在向受试者施用抗体后，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少发生在最初24小时内，例如，约1小时内、约22小时内、约3小时内、约4小时内、约5小时内、约6小时内、约7小时内、约8小时内、约9小时内、约10小时内、约11小时内、约12小时内、约13小时内、约14小时内、约15小时内、约16小时内、约17小时内、约18小时内、约19小时内、约20小时内、约21小时内、约22小时内、约23小时内或约24小时内中任一者。
在一些实施方案中，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目(例如，在获自受试者的外周血样品中)减少至低于所述疾病或病症的临床诊断的极限。在一些实施方案中，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少至低于或等于2×109个细胞/L(例如，在获自受试者的外周血样品中)。参见例如Lamy,T.等人(2017)Blood 129:1082-1094。在一些实施方案中，在向受试者施用抗体后，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少至低于疾病或病症的临床诊断的极限在受试者中存在至少约1周，例如至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月或更久中任一者。在一些实施方案中，在向受试者施用抗体后，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少至低于或等于受试者的2×109个细胞/L(例如，在获自受试者的外周血样品中)在受试者中存在至少约1周，例如至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月或更久中任一者。
在一些实施方案中，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少至低于受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的检测极限。在一些实施方案中，在向受试者施用抗体后，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少至低于表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的检测极限在受试者中存在至少约1周，例如至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月或更久中任一者。在一些实施方案中，通过流式细胞术(例如，如对来自受试者的外周血样品所执行)检测表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞。
在一些实施方案中，表达CD94的外周血NK细胞为CD3+CD56明亮。在一些实施方案中，表达CD94的外周血T细胞为CD4+、CD8+或CD8+和CD4+。
在一些实施方案中，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少是可逆的。在一些实施方案中，在向受试者施用抗体后，受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目减少在约1周、约2周、约3周、约4周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月或更久中任一者内是可逆的。
在一些实施方案中，关于细胞或细胞群体对特定标记物(例如，CD3、CD4、CD8、CD16、CD94、NKG2A等)呈阳性(+)或进行表达的陈述是指所述特定标记物在细胞上或细胞中的可检测存在。在一些实施方案中，关于细胞或细胞群体对表面标记物(例如，细胞表面蛋白)呈阳性(+)或进行表达的陈述是指所述特定标记物的细胞表面表达的存在，例如，如通过流式细胞术所检测，例如通过用与所述标记物特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体来进行，其中所述染色可通过流式细胞术来检测，其水平大体上高于在其他方面相同条件下用同种型匹配对照和/或荧光减一(FMO)门控对照进行相同程序所检测到的染色，和/或其水平与已知对所述标记物呈阳性的细胞的水平大体上相似，和/或其水平大体上高于已知对所述标记物呈阴性的细胞的水平。
在一些实施方案中，关于细胞或细胞群体对特定标记物(例如，CD3、CD4、CD8、CD16、CD94、NKG2A等)呈阴性(-)或不进行表达的陈述是指不存在所述特定标记物在细胞上或细胞中的可检测存在。在一些实施方案中，关于细胞或细胞群体对表面标记物(例如，细胞表面蛋白)呈阴性(-)或不进行表达的陈述是指不存在所述特定标记物的细胞表面表达，例如，如通过流式细胞术所检测，例如通过用与所述标记物特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体来进行，其中所述染色可通过流式细胞术来检测，其水平大体上类似或低于在其他方面相同条件下用同种型匹配对照和/或荧光减一(FMO)门控对照进行相同程序所检测到的染色，和/或其水平低于已知对所述标记物呈阳性的细胞的水平，和/或其水平大体上类似或低于已知对所述标记物呈阴性的细胞的水平。
在一些实施方案中，所述抗体对于减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的EC50或IC50在约1ng/ml与约100ng/ml之间，例如约1ng/ml、约5ng/ml、约10ng/ml、约15ng/ml、约20ng/ml、约25ng/ml、约30ng/ml、约35ng/ml、约40ng/ml、约45ng/ml、约50ng/ml、约55ng/ml、约60ng/ml、约65ng/ml、约70ng/ml、约75ng/ml、约80ng/ml、约85ng/ml、约90ng/ml、约95ng/ml或约100ng/ml中任一者。在一些实施方案中，所述抗体对于减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的IC50或EC50在约10ng/ml与约80ng/ml之间。在一些实施方案中，所述抗体对于减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的IC50或EC50为约20ng/ml。在一些实施方案中，所述抗体对于减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的IC50或EC50为约60ng/ml。EC50或IC50可以使用本领域中已知的任何方法来测量，例如，如实施例中所述。
在一些实施方案中，所述受试者为人、灵长类动物、非人灵长类动物(例如，非洲绿猴、食蟹猴、恒河猴等)、农场哺乳动物、狩猎哺乳动物或家养哺乳动物。在一些实施方案中，所述受试者为人。在一些实施方案中，所述人受试者为婴儿、蹒跚学步的幼儿、儿童、年轻人、成年人或老年人。在一些实施方案中，所述受试者具有涉及表达CD94的T细胞和/或NK细胞的疾病，例如CLPD-NK、LGL白血病、费尔蒂氏综合征、类风湿性关节炎、侵袭性NK白血病、包涵体肌炎、炎症性肠病或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。
在一些实施方案中，向受试者施用所述抗体不会导致受试者的肿瘤溶解综合征。肿瘤溶解综合征可以根据本领域中已知的任何方法进行测量或诊断，诸如用于肿瘤溶解综合征的Cairo-Bishop分类系统(参见例如Cairo和Bishop(2004)Br J Haematol,127(1):3-11。)
在一些实施方案中，本公开的抗体与CD94结合。在一些实施方案中，本公开的抗体耗竭和/或减少表达CD94的NK细胞和/或T细胞的水平。在一些实施方案中，本公开的抗体对具有疾病或病症的患者(例如，人类患者)具有显现的益处，所述疾病或病症诸如CLPD-NK、LGL白血病、类风湿性关节炎、费尔蒂氏综合征、侵袭性NK白血病、IBM、IBD或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL、皮下脂膜炎TCL或与LGL、T细胞和/或NK细胞相关的其他疾病。在一些实施方案中，本公开的抗体具有比针对所述疾病或病症(例如，CLPD-NK、LGL白血病、费尔蒂氏综合征、类风湿性关节炎、侵袭性NK白血病、包涵体肌炎、炎症性肠病或NK/T细胞淋巴瘤，诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL或成人TCL)的一线和二线疗法更好的耐受性和更少的副作用，所述一线和二线疗法诸如化学疗法，诸如环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松；干细胞移植；脾切除术；阿仑单抗；贝伐珠单抗；普拉曲沙；阿维鲁单抗；蛋白酶体抑制剂，诸如卡非佐米和硼替佐米；HDAC抑制剂，诸如罗米地辛、贝利诺他和伏立诺他；和抗体-药物缀合物，诸如贝伦妥单抗维多汀。在一些实施方案中，与目前的非选择性疗法(诸如化学疗法，诸如环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松；干细胞移植；脾切除术；阿仑单抗；贝伐珠单抗；普拉曲沙；阿维鲁单抗；蛋白酶体抑制剂，诸如卡非佐米和硼替佐米；HDAC抑制剂，诸如罗米地辛、贝利诺他和伏立诺他；和抗体-药物缀合物，诸如贝伦妥单抗维多汀)相比，本公开的抗体证明更有选择性地耗竭疾病诱导细胞，例如表达CD94的NK细胞和/或T细胞。因此，在一些实施方案中，本公开提供一种在施用分子(例如，本公开的抗体)后减少人类受试者中表达CD94的NK细胞和/或T细胞的数目或耗竭所述细胞的方法，所述分子与NK细胞和/或T细胞上的细胞表面蛋白(诸如CD94)结合，并且包含(a)与靶标特异性结合的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。
在一些实施方案中，本文所提供的方法还包括向受试者施用IL-2多肽，例如治疗性IL-2多肽。适合根据本文所提供的方法施用于受试者(例如，患有本文所述的疾病或病症的受试者)的IL-2多肽(例如，治疗性IL-2多肽)是本领域中已知的。示例性IL-2多肽包括但不限于阿地白介素、Interking和Neoleukin 2/15。
A.施用和给药方案
(i)施用途径
在一些实施方案中，施用(administer/administering/administration)等是指用于使得能够将治疗或药物组合物递送至所需生物作用位点的方法。在一些实施方案中，用于本文所提供的任何方法中的本公开的抗体(和任何另外的治疗剂)可以通过包括肠胃外、肺内、鼻内和病灶内施用在内的任何合适的方式施用于受试者(例如，人)。胃肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，本公开的抗体通过静脉内输注施用。本公开的抗体的给药可通过任何合适的途径，例如通过注射(诸如静脉内或皮下注射)进行，这部分地取决于施用是短暂或长期的。
(ii)给药方案
可以使用各种给药时程或方案，包括但不限于经过多个时间点的单次或多次施用、推注施用和脉冲输注，将用于本文所提供的任何方法中的本公开的抗体施用于受试者。待施用的本公开的抗体的具体剂量将根据特定靶标特异性、疾病或病症的类型、受试者以及疾病的性质和严重程度、受试者的身体状况、治疗方案(例如，是否使用组合治疗剂)以及所选择的施用途径而变化。在一些实施方案中，本公开的抗体的剂量可以介于约0.0001mg/kg至100mg/kg受试者的体重的范围内。本公开的抗体的示例性剂量方案需要在一段延长的时期(例如，至少六个月)内以多种剂量施用所述抗体。
其他已知的针对CD94的抗体也可以用于本文所提供的方法中。例如，可以使用以下抗CD94抗体：HP-3D9(LSBio目录#LS-C134679-100；Abnova目录#:MAB6947)；2I2；131412(R&D Systems目录#:MAB1058)；13B146(USBiological目录#:030068)；13B147(USBiological目录#:030069)；1H1(Abnova目录#:MAB10543)；3G2(Biorbyt目录#:orb69389)；DX22(Biolegend目录#305502)；REA113(Miltenyi Biotec目录#:130-098-967)；KP43；EPR21003；AT13E3(ATGen目录:ATGA0487)；HP-3B1；12K45；和B-D49。
B.疾病
有9种不同的疾病涉及NK/T细胞淋巴瘤：结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL和成人TCL。参见例如Bajaj,2019。NK/T细胞淋巴瘤影响多种器官，诸如皮肤、GI、肝、脾、骨髓。NK/T细胞淋巴瘤的症状包括颈部淋巴结肿大。有利的是，本文所述的方法可以用于例如经由使用NK细胞的机制(诸如ADCC)来减少表达CD94的异常或病理性NK细胞和/或T细胞(例如，CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+和CD8+T细胞)的数目，基本上使用病理细胞相互消除。
本文所述的方法也可以用于例如经由使用NK细胞的机制(诸如ADCC)来减少表达CD94并且与NK/T细胞淋巴瘤(诸如结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL(未另外规定)、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL)相关的异常或病理性NK和/或T细胞的数目，基本上使用病理细胞相互消除。
有3种不同的疾病涉及LGL：T细胞LGL(T-LGL)白血病；NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK，先前称为NK-LGL)；和侵袭性NK细胞白血病，诸如侵袭性自然杀伤性白血病(ANKL)和结外NKL鼻型(ENKL)。
除了NK或T LGL白血病以外，NK或LGL细胞也在类风湿性关节炎(RA)、费尔蒂氏综合征、侵袭性NK白血病、包涵体肌炎(IBM)、炎症性肠病(IBD)和其他疾病中发挥关键作用。其中LGL和NK细胞发挥作用的疾病和病症的非限制性实例包括LGL白血病、类风湿性关节炎、费尔蒂氏综合征、侵袭性NK白血病、IBM和IBD。有利的是，本文所述的方法可以用于例如经由使用NK细胞的机制(诸如ADCC)来减少异常或病理性NK细胞(例如，CLPD-NK、ANKL或ENKL细胞)的数目，基本上使用病理细胞相互消除。关于这些疾病的症状的示例性描述，参见例如Lamy等人,Blood,2017x第129卷,第9期；Loughran Blood,第82卷,第1期(7月I),1993:第1-14页；Semenzato G等人,Blood.1997；89(1):256-260；和Bourgault-Rouxel等人,Leuk Res.2008；32(1):45-48。
(i)CLPD-NK
NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK)也称为NK-LGL白血病、慢性NK细胞淋巴细胞增多症、慢性NK-LGL淋巴增生性病症(LPD)、NK细胞谱系颗粒淋巴细胞增生性病症、NK细胞LGL淋巴细胞增多症或惰性颗粒NK细胞LPD，它的特征一般是外周血NK细胞的持续(例如，6个月或更久)增加(例如，≥2×109/L)。
CLPD-NK的症状包括各种血细胞减少症，诸如中性粒细胞减少和贫血、疲劳、发烧、盗汗、反复感染、类风湿性关节炎、淋巴结病、肝脾肿大、皮肤病变、血液系统肿瘤、血管炎、神经病和自身免疫性病症。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为CLPD-NK，并且所述抗体的施用导致受试者的一种或多种CLPD-NK症状减轻。在一些实施方案中，在施用所述抗体后受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目减少导致受试者的一种或多种CLPD-NK症状减轻。
CLPD-NK的症状可以通过本领域中已知的任何方法来测量，诸如使用测量贫血、中性粒细胞减少、全血细胞计数的实验室测试和/或磁共振成像(MRI)、CT扫描、触诊或超声波(例如，以确定肝脾肿大)、骨髓检查和流式细胞术。用于测量CLPD-NK的症状的方法描述于例如Swerdlow,S.H.等人(2016)Blood 127:2375-2390中。
(ii)LGL白血病
大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病是一种慢性淋巴细胞增生性病症，它展现外周血中的大颗粒淋巴细胞(LGL)的慢性升高并且称为T细胞LGL白血病。
LGL白血病的症状包括脾肿大、B症状(例如全身症状，诸如发烧、盗汗和体重减轻)、贫血、中性粒细胞减少和反复感染。类风湿性关节炎也常见于患有T细胞LGL白血病的人。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为LGL白血病，并且所述抗体的施用导致受试者的一种或多种LGL白血病症状减轻。在一些实施方案中，在施用所述抗体后受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目减少导致受试者的一种或多种LGL白血病症状减轻。
LGL白血病的症状可以通过本领域中已知的任何方法来测量，诸如使用测量贫血、中性粒细胞减少和其他血细胞减少症、全血细胞计数的实验室测试、磁共振成像(MRI)、CT扫描、触诊或超声波(例如，以确定脾肿大)、骨髓检查和流式细胞术。用于测量LGL白血病的症状的方法描述于例如Swerdlow,S.H.等人(2016)Blood127:2375-2390中。
(iii)费尔蒂氏综合征
费尔蒂氏综合征是一种自身免疫性疾病，其特征在于类风湿性关节炎、脾肿大(例如，炎症性脾肿大)和血液中的中性粒细胞数目减少。费尔蒂氏综合征的症状包括关节疼痛、僵硬和/或肿胀、与类风湿性关节炎相关的身体表现、脾肿大、中性粒细胞减少、感染、干燥性角膜结膜炎、发烧、体重减轻、疲劳、皮肤变色、疮(例如溃疡)、肝肿大、贫血、血小板减少、肝功能异常、淋巴结肿大和血管炎。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为费尔蒂氏综合征，并且所述抗体的施用导致受试者的一种或多种费尔蒂氏综合征症状减轻。在一些实施方案中，在施用所述抗体后受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目减少导致受试者的一种或多种费尔蒂氏综合征症状减轻。费尔蒂氏综合征的症状包括但不限于关节炎症、关节疼痛和脾肿大。
费尔蒂氏综合征的症状可以通过本领域中已知的任何方法来测量，诸如使用测量贫血、中性粒细胞减少、血小板减少和其他血细胞减少症、全血细胞计数的实验室测试、磁共振成像(MRI)、CT扫描或超声波(例如，以确定脾肿大和/或肝肿大)、针对肝功能异常的实验室测试、确定脾肿大和/或肝肿大的触诊、流式细胞术、疾病活动分数-28(DAS-28，例如，如用于监测类风湿性关节炎症状)以及DAS-28联合红细胞沉降率(ESR)。
(iv)类风湿性关节炎
类风湿性关节炎是一种自身免疫性病症，它主要影响关节，但也可影响其他器官并且可与心血管疾病、骨质疏松症、间质性肺病、感染、癌症、疲劳和抑郁症相关。类风湿性关节炎的症状包括关节肿胀、压痛和温热、关节炎症、关节疼痛、关节僵硬、脾肿大、类风湿结节(例如，在皮肤中)、坏死性肉芽肿、血管炎、坏疽性脓皮病、Sweet氏综合征、药物反应、结节性红斑、肺叶脂膜炎、手指皮肤萎缩、手掌红斑、皮肤脆性、弥漫性斑秃、肺纤维化、卡普兰氏综合征、渗出性胸腔积液、动脉粥样硬化、心肌梗塞、中风、心包炎、心内膜炎、左心衰竭、瓣膜炎、心脏和/或血管纤维化、贫血、增加的血小板计数、低白细胞计数、肾淀粉样变性、巩膜外层炎、巩膜炎、干燥性角膜结膜炎、角膜炎、视力丧失、肝脏问题、周围神经病变、多发性单神经炎、腕管综合征、脊髓病、寰枢椎半脱位、脊椎滑脱、疲劳、低烧、不适、晨僵、食欲不振、体重减轻、骨质疏松症、癌症(例如，淋巴瘤、皮肤癌)和牙周炎。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为类风湿性关节炎，并且所述抗体的施用导致受试者的一种或多种类风湿性关节炎症状减轻。在一些实施方案中，在施用所述抗体后受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目减少导致受试者的一种或多种类风湿性关节炎症状减轻。
在一些实施方案中，根据2010ACR/EULAR类风湿性关节炎分类标准来测量类风湿性关节炎的症状和疾病状态/进展(参见例如Aletaha等人,(2010)Annals of RheumaticDiseases,69(9):1580-8)。类风湿性关节炎的症状也可以通过本领域中已知的任何方法来测量，诸如使用测量红细胞沉降率、C反应性蛋白、类风湿因子、抗瓜氨酸化蛋白抗体、贫血和其他血细胞减少症、增加的血小板计数、低白细胞计数、全血细胞计数、肾淀粉样变性的实验室测试、医学成像(诸如X射线、MRI)、CT扫描、超声波(例如，使用高频换能器的超声波检查；多普勒超声波)、流式细胞术、疾病活动分数-28(DAS-28)以及DAS-28联合红细胞沉降率(ESR)。
(v)侵袭性NK白血病
侵袭性NK细胞白血病是一种侵袭性疾病，具有NK细胞的全身性增生和快速下降的临床病程。侵袭性NK白血病也可以称为侵袭性NK细胞淋巴瘤。侵袭性NK细胞白血病的症状包括全身症状(例如不适、体重减轻、疲劳)、肝脾肿大、淋巴结肿大、凝血病、噬血细胞综合征、多器官衰竭、诸如EB病毒(Epstein-Barr virus)的感染、过敏反应(例如对昆虫叮咬的过敏反应，诸如蚊虫叮咬)，所述过敏反应可能导致坏死和全身症状，诸如发烧、淋巴结肿大、腹痛、腹泻和过敏。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为侵袭性NK细胞白血病，并且所述抗体的施用导致受试者的一种或多种侵袭性NK细胞白血病症状减轻。在一些实施方案中，在施用所述抗体后受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目减少导致受试者的一种或多种侵袭性NK细胞白血病症状减轻。
侵袭性NK白血病的症状可以通过本领域中已知的任何方法来测量，诸如使用例如测量贫血、中性粒细胞减少和其他血细胞减少症、全血细胞计数的实验室测试和/或磁共振成像(MRI)、CT扫描、触诊或超声波(例如，以确定脾肿大)、骨髓检查和流式细胞术。用于测量侵袭性NK白血病的症状的方法描述于例如Swerdlow,S.H.等人(2016)Blood 127:2375-2390中。
(vi)包涵体肌炎
包涵体肌炎(IBM)也称为散发性包涵体肌炎，是一种炎症性肌肉疾病，其特征在于自身免疫和退行性过程，所述过程导致远端和/或近端肌肉的进行性无力和消瘦。一般来说，IBM的特征在于免疫细胞侵入肌肉组织中。在一些情况下，IBM患者的血液中的肌酸激酶水平升高。IBM的症状包括进行性肌无力、肌肉消瘦/萎缩、频繁绊倒和跌倒、手指操作困难、足下垂、活动受限、平衡受损、肌肉疼痛、吞咽困难和疲劳。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为IBM，并且所述抗体的施用导致受试者的一种或多种IBM症状减轻。在一些实施方案中，在施用所述抗体后受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目减少导致受试者的一种或多种IBM症状减轻。
IBM的症状可以通过本领域中已知的任何方法来测量，诸如肌肉活检、血液测试(例如，测量肌酸激酶)、肌电图(EMG)研究、测量NT5C1A抗体的血液测试、流式细胞术和肌炎疾病活动评估工具，所述肌炎疾病活动评估工具包括但不限于肌炎意向治疗活动指数(MITAX)和肌炎疾病活动评估视觉模拟量表(MYOACT)。
(vii)炎症性肠病
炎症性肠病(IBD)是指结肠和小肠的一类炎症性疾患。IBD的类型包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病。IBD的症状包括腹泻、发烧、疲劳、腹痛、腹部绞痛、便血、食欲下降和体重减轻。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为IBD，并且所述抗体的施用导致受试者的一种或多种IBD症状减轻。在一些实施方案中，在施用所述抗体后受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目减少导致受试者的一种或多种IBD症状减轻。
IBD的症状可以通过本领域中已知的任何方法来测量，诸如针对贫血、其他血细胞减少症或感染的实验室血液测试、粪便潜血测试、结肠镜检查、可屈性乙状结肠镜检查、上消化道内窥镜检查、胶囊内窥镜检查、球囊辅助肠镜检查、X射线、CT扫描、MRI扫描、超声波和流式细胞术。
III.药物制剂
在一些实施方案中，药物组合物、组合物或药物制剂是指生物活性化合物(例如，本公开的抗体)，任选地与至少一种药学上可接受的化学组分混合，所述化学组分诸如但不限于载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂、赋形剂等。
用于如本文所述的任何方法中的本公开的任何抗体的药物组合物、药物制剂和/或组合物可以通过混合具有所需纯度程度的此类抗体与一种或多种任选的药学上可接受的载体(Remington'sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980))而以冻干制剂或水溶液的形式制备。
药学上可接受的载体在所用剂量和浓度下对接受者通常是无毒的，并且包括但不限于：缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁基或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属错合物(例如，Zn-蛋白质错合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文中的示例性的药学上可接受的载体还包括间质药物分散剂，诸如可溶性在中性条件下具有活性的(neutral-active)透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(Baxter International,Inc.)。某些示例性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)描述于美国专利公布号2005/0260186和2006/0104968中。一方面，sHASEGP与一种或多种其他糖胺聚糖酶(诸如软骨素酶)组合。
本文中的制剂还可以含有所治疗的特定适应症(例如，疾病或病症)所必需的超过一种活性成分，优选的是具有不会不利地相互影响的互补活性的那些。
活性成分可以包埋于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如，分别为羟基甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中、包埋于胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)中或包埋于粗乳液中。此类技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)中。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有所述抗体或免疫缀合物的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质是呈成形物品(例如，膜或微胶囊)的形式。
待用于体内施用的制剂通常是无菌的。例如，通过经由无菌过滤膜过滤可容易地实现无菌性。
IV.试剂盒和制品
在本公开的另一方面，提供含有可用于本文所提供的方法(例如，治疗上述疾病或病症、减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目或诱导受试者的ADCC活性)的材料的试剂盒或制品。所述试剂盒或制品可以包含容器以及在所述容器上或与所述容器相关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可以由多种材料(诸如玻璃或塑料)形成。所述容器容纳组合物本身或与可有效用于本文所提供的方法(例如，治疗上述疾病或病症、减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目或诱导受试者的ADCC活性)的另一组合物组合的组合物，并且可以具有无菌接取口(例如，所述容器可以是静脉内溶液袋或具有皮下注射针可刺穿的塞子的小瓶)。所述组合物中的至少一种活性剂为本公开的抗体。所述标签或包装插页指示所述组合物是用于本文所提供的方法(例如，治疗上述疾病或病症、减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目或诱导受试者的ADCC活性)。此外，所述试剂盒或制品可以包含(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本公开的抗体；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包含另一治疗剂。在本发明的这一实施方案中的试剂盒或制品还可包含包装插页，所述包装插页指示所述组合物可用于治疗特定疾病或病症(例如，如本文所述)、减少受试者中表达CD94的外周血NK细胞和/或T细胞的数目或诱导受试者的ADCC活性。或者或另外，所述试剂盒或制品还可以包含第二(或第三)容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲液，诸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲生理盐水、林格氏溶液或右旋糖溶液。它还可以包括就商业和使用者观点可需要的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针和注射器。
提供以下描述以使得本领域的普通技术人员能够制作并使用各种实施方案。特定装置、技术和应用的描述仅作为实施例提供。本文所述的实施例的各种修改对于本领域的普通技术人员来说将是显而易见的，并且在不脱离各种实施方案的精神和范围的情况下，可以将本文所定义的一般原理应用于其他实施例和应用。因此，各种实施方案不意图限于本文所述和示出的实施例，而是要符合与权利要求书一致的范围。
实施例
实施例1：抗CD94抗体产生和评估
这一实施例描述人CD94的特异性抗体的产生和表征。
材料和方法
抗CD94抗体产生和筛选
用C末端His标记的CD94对4周龄的ATX-Gx Alloy转基因小鼠(产生人抗体的小鼠)进行皮下免疫持续五周，每周一次抗原加强。在加强前和加强后期间，经由ELISA和流式细胞术评估小鼠血清中的抗体效价。选择具有最高血清抗体效价的小鼠来提供用于产生杂交瘤的B细胞。
在细胞融合之前，向小鼠施用CD94-His抗原的一次额外加强。接着处死小鼠并收集它们的脾。使脾细胞和SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞混合，并且接着通过在聚乙二醇(PEG)存在下在37℃下孵育或电穿孔来诱导融合。接着收集细胞并在有限稀释的情况下接种至96孔板中以实现每孔一个细胞。随后用次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)培养基处理细胞，并选择细胞以培养超过2周。
使用ELISA和流式细胞术来筛选杂交瘤上清液以鉴定对CD94具有特异性的候选物。关于ELISA，将CD94-His抗原固定于板上，并将100μl的每种上清液与抗原一起孵育。使用荧光标记的二级抗体来检测ELISA板上捕获的抗体，并通过使用流式细胞术分析抗体在人原代NK细胞上的结合来验证阳性命中。使用流式细胞术通过抗体与表达cyno-CD94的BaF3细胞的结合来评估食蟹猴CD94交叉反应性。
使用杂交瘤的标准RNA提取来执行VH和VL序列的验证，随后将RNA逆转录为cDNA并使用Alloy ATC-Gx特异性引物进行PCR。
健康供体和患者样品
从斯坦福血液中心(Stanford Blood Center)获得新鲜的健康供体血沉棕黄层。经由ficoll-paque(GE Healthcare,Chicago,IL)分离来分离外周血单核细胞(PBMC)，并冷冻保存于Bambanker细胞冷冻培养基(Bulldog-Bio,Portsmouth,NH)中。简言之，将血沉棕黄层以1:1比率稀释于磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中，接着将稀释的血沉棕黄层分层并在ficoll中以760g离心。在下游分析之前，分离PBMC层并在PBS中洗涤。通过红细胞溶解来分离外周血白细胞(PBL)。
抗体亲和力分析
将健康供体PBMC以每孔100,000个细胞的密度接种于96孔板中，与人Fc阻断剂(Biolegend)和细胞活力染料(Thermo Fisher)一起在冰上孵育30分钟并避光。用FACS缓冲液(含2％ IgG低FBS的PBS)洗涤细胞一次。将浓度为100nM至0.046nM、1:3倍稀释的抗CD94抗体与细胞一起在冰上孵育30分钟并避光。接着洗涤细胞，并与山羊IgG抗小鼠Fcy特异性AF647二级抗体或山羊(Fab)2片段抗人Fcy特异性AF647二级抗体(Jackson immunoresearch)、抗CD3太平洋蓝标记和抗CD56 FITC标记的抗体(Biolegend)一起在冰上孵育30分钟并避光。孵育后，所述细胞在FACS缓冲液中接受最后一次洗涤，接着在Cytoflex(Beckman Coulter)上进行量化。所有数据采集和荧光补偿均使用CytoFlex(BeckmanCoulter,Atlanta,GA)执行。使用FlowJo软件执行数据分析。通过在前向和侧向散射上对淋巴细胞进行门控，接着进行双重和死细胞排除，并在CD3-CD56+群体上进行门控来鉴定NK细胞。接着在CD3-CD56+NK细胞群体上对CD94表达进行量化。使用Graphpad Prism生成抗体滴定曲线和EC50。
抗体食蟹猴CD94交叉反应性分析
将表达食蟹猴CD94的HEK293细胞以每孔100,000个细胞的密度接种于96孔板中，与细胞活力染料(Thermo Fisher)一起在冰上孵育30分钟并避光。用FACS缓冲液(含2％IgG低FBS的PBS)洗涤细胞一次。将杂交瘤上清液、抗CD94抗体和同种型对照与细胞一起在冰上孵育30分钟并避光。接着洗涤细胞，并与山羊IgG抗小鼠Fcy特异性AF647二级抗体或山羊(Fab)2片段抗人Fcy特异性AF647二级抗体(Jackson ImmunoResearch)一起在冰上孵育30分钟并避光。孵育后，所述细胞在FACS缓冲液中接受最后一次洗涤，接着在Cytoflex(Beckman Coulter)上进行量化。所有数据采集和荧光补偿均使用CytoFlex(BeckmanCoulter,Atlanta,GA)执行。使用FlowJo软件执行数据分析。通过使用前向和侧向散射对主要细胞群体进行门控，接着进行双重和死细胞排除来鉴定HEK293细胞。接着在这一群体上对CD94表达进行量化。使用Graphpad Prism生成MFI条形图。
HLA-E阻断分析
将健康供体PBMC以每孔100,000个细胞的密度接种于96孔板中，与人Fc阻断剂(Biolegend)和细胞活力染料(Thermo Fisher)一起在冰上孵育30分钟并避光。用FACS缓冲液(含2％ IgG低FBS的PBS)洗涤细胞一次。将EC80浓度下的抗CD94抗体与细胞一起在冰上孵育30分钟并避光。与抗CD94抗体一起孵育后，洗涤细胞并与HLA-E四聚体PE(CreativeBiolabs)、抗CD3太平洋蓝标记和抗CD56 FITC标记抗体(Biolegend)一起在冰上孵育30分钟并避光。所述细胞接着在FACS缓冲液中接受最后一次洗涤，随后在Cytoflex(BeckmanCoulter)上进行量化。所有数据采集和荧光补偿均使用CytoFlex(Beckman Coulter,Atlanta,GA)执行。使用FlowJo软件执行数据分析。通过在前向和侧向散射上对淋巴细胞进行门控，接着进行双重和死细胞排除，并在CD3-CD56+群体上进行门控来鉴定NK细胞。接着在CD3-CD56+NK细胞群体上对HLA-E表达进行量化。阻断百分比是计算为100–((对抗CD94抗体呈阳性的HLA-E百分比)/(对同种型呈阳性的HLA-E百分比)*100)。
抗体竞争分析
将健康供体PBMC以每孔100,000个细胞的密度接种于96孔板中，与人Fc阻断剂(Biolegend)和细胞活力染料(Thermo Fisher)一起在冰上孵育30分钟并避光。用FACS缓冲液(含2％ IgG低FBS的PBS)洗涤细胞一次。将EC80浓度下的未缀合抗CD94抗体、CD3 FITC和CD56 PE抗体以及APC标记的抗CD94抗体与细胞一起在冰上孵育30分钟并避光。所述细胞接着在FACS缓冲液中接受最后一次洗涤，随后在Cytoflex(Beckman Coulter)上进行量化。所有数据采集和荧光补偿均使用CytoFlex(Beckman Coulter,Atlanta,GA)执行。使用FlowJo软件执行数据分析。通过在前向和侧向散射上对淋巴细胞进行门控，接着进行双重和死细胞排除，并在CD3-CD56+群体上进行门控来鉴定NK细胞。接着在CD3-CD56+NK细胞群体上对抗CD94APC进行量化。使用Graphpad Prism生成所有滴定曲线和EC50。
抗体内化分析
将健康供体PBMC在含10％ IgG低FBS的RPMI中以每孔100,000个细胞的密度接种于96孔板中，在室温下与人Fc阻断剂(Biolegend)一起孵育10分钟。在4℃和37℃下，将EC80浓度下的未缀合的抗CD94抗体与细胞一起孵育30分钟至24小时。用FACS缓冲液(含2％ IgG低FBS的PBS)洗涤细胞一次并保持在冰上以用于剩余程序。将山羊抗小鼠Fcy特异性抗体与细胞一起在冰上孵育30分钟并避光。接着将细胞洗涤一次并在Cytoflex上对CD94表达进行量化。所有数据采集和荧光补偿均使用CytoFlex(Beckman Coulter,Atlanta,GA)执行。使用FlowJo软件执行数据分析。通过在前向和侧向散射上对淋巴细胞进行门控，接着进行双重和死细胞排除，并在CD3-CD56+群体上进行门控来鉴定NK细胞。接着在CD3-CD56+NK细胞群体上对抗CD94 APC进行量化。通过计算在37℃下在0.5与24小时之间的MFI差异并乘以100来计算MFI的降低百分比。
抗体依赖性细胞毒性分析
将大约1×105–2×105个新鲜或冷冻的PBMC在含10％低IgG FBS的RPMI中接种于组织培养物处理的96孔U型底板中。使所述细胞在101–10-6ug/ml的人IgG1同种型对照抗体或1E4岩藻糖基化和18H3-KIF抗体的10倍稀释液中孵育过夜。接着用针对CD3、CD56和CD16的荧光标记抗体对细胞进行染色，以鉴定剩余的NK细胞(参见流式细胞术分析)。在淋巴细胞群体中，流式细胞仪收集最少10,000个事件。通过用同种型处理条件下的细胞数目标准化绝对计数来计算剩余NK/白血病细胞百分比。使用GraphPad Prism确定IC50。
结果
如上文所述，使用标准杂交瘤技术生成抗CD94抗体。简言之，用C末端His标记的CD94对ATX-Gx Alloy转基因小鼠进行免疫持续五周。使用五周后具有最高血清抗体效价的小鼠B细胞来生成杂交瘤。通过ELISA筛选杂交瘤以鉴定对CD94具特异性的候选物。
通过利用流式细胞术分析评估与人NK细胞的结合来验证阳性命中。通过流式细胞术分析来评估抗CD94抗体克隆与原代人NK细胞的结合。使用来自抗CD94杂交瘤的上清液来测试抗CD94抗体克隆的结合。还测试市售抗CD94抗体HP-3D9和数种IgG同种型对照在NK细胞上的结合。
还通过流式细胞术分析来评估抗体克隆的亲和力。图1示出抗CD94抗体克隆18H3生成的滴定曲线。抗CD94抗体18H3显示对人原代NK细胞的亲和力为2.6nM。针对其他抗CD94抗体所测定的亲和力在图11中列出。如图2所示，杂交瘤上清液筛选揭露出18H3、1M4和1E4与人原代NK细胞结合，如通过流式细胞术所测量。
还测试抗CD94杂交瘤上清液与食蟹猴CD94的交叉反应性。使用表达食蟹猴CD94的HEK293细胞，通过流式细胞术来筛选杂交瘤与食蟹猴CD94的交叉反应性。如图3A所示，这一分析揭露出克隆18H3、1M4和1E4与食蟹猴CD94交叉反应。来自克隆20F2的上清液不与食蟹猴CD94交叉反应，不过对人CD94具有反应性。还评估市售抗CD94抗体的交叉反应性。如图3B所示，所测试的市售抗CD94抗体(HP-3D9、HP-3B1、131412、12K45、DX22)均未展现与食蟹猴CD94的交叉反应性。
这些结果指示，新生成的抗CD94抗体结合的表位不与HP-3D9、HP-3B1、131412、12K45、DX22和20F2(非商业)抗体共享。所述18H3、1M4和1E4抗体的交叉反应性表明，它们可能在人类受试者的I期试验之前用于食蟹猴毒性研究。
验证后，确定所验证的抗体克隆的VH和VL序列。表A概述实施例1-3中使用的抗CD94克隆的VH和VL序列。使用Kabat编号方案确定框架和CDR序列(在表A中呈粗体)。
表A.抗CD94抗体克隆的序列
进一步评估所验证的抗CD94抗体阻断HLA-E结合的能力(或缺乏所述能力)。HLA-E是CD94/NKG2A异源二聚体的配体，并且当与CD94/NKG2A结合时，在抑制NK细胞和CD8+T细胞活性方面发挥至关重要的作用。不希望受理论束缚，认为HLA-E与CD94/NKG2A之间的相互作用可以导致靶标细胞的激活和增生。因此，抗CD94抗体候选物在疾病环境中不阻断CD94:HLA-E相互作用是有益的。
通过流式细胞术来评估抗CD94抗体克隆和市售抗CD94抗体对HLA-E的阻断。如图4所示，18H3和1E4抗体不阻断HLA-E结合。针对市售抗CD94抗体观察到超过40％的HLA-E阻断，而针对所述抗CD94抗体观察到0％阻断。因为CD94的表达水平从暗淡(约10,000个受体)至明亮(>100,000个受体)不等，我们建议如果抗体阻断超过20％的HLA-E结合，那么它可以被视为配体阻断抗体。总之，这种HLA-E阻断分析表明18H3和1E4抗体不阻断CD94与HLA-E的相互作用，而市售CD94抗体阻断这种相互作用。
执行竞争分析以确定新鉴定的抗体是否结合于与自身和现有抗体共享的表位。分析抗CD94抗体18H3、1M4和1E4的相互竞争以及与市售抗体的竞争。如图5A-5B所示，18H3抗体与独特的表位结合。18H3仅与HP-3D9部分地竞争，并且不与DX22、HP-3B1、131412、12K45、1E4和1M4抗体竞争。因此，18H3抗体结合的表位不与市售抗体共享。
同样，1M4抗体不与市售抗体竞争。如图6A-6B所示，1M4与1E4抗体竞争，但不与DX22、131412、HP-3D9、12K45和HP-3B1竞争。
1E4抗体不与所测试的五种市售抗CD94抗体中的四种竞争。如图7所示，1E4与12K45部分地竞争，但不与HP-3D9、DX22、131412和HP-3B1竞争。
执行抗体内化分析以评估当由抗CD94抗体结合时CD94受体的内化。在这种分析中，超过50％的截止值将被视为高度内化。不希望受理论束缚，认为低水平的内化将有利于抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，因为CD94受体将保留在细胞表面上并维持效应细胞的高受体密度以执行ADCC。描绘于图8A-8B中的结果示出，CD94受体在与商业抗CD94抗体结合时变得内化，但在与18H3、1M4和1E4抗体结合时却未内化。18H3、1M4和1E4抗体在与CD94结合后并未内化超过50％。相比之下，与37℃下0.5小时至24小时相比，针对HP-3D9、DX22、18H3、1M4和1E4分别观察到MFI的54％、56％、24％、32％、18％降低百分比。
为了测试抗CD94抗体诱导NK细胞的ADCC的能力，使用健康供体PBMC来执行ADDC分析。关于这种分析，18H3抗体是在几夫碱存在下培养的Expi-CHO细胞中产生的，几夫碱是甘露糖苷酶I酶的有效抑制剂，以产生模拟非岩藻糖基化抗体的18H3-KIF。还测试岩藻糖基化的1E4抗体的ADCC。如图9A-9B所示，部分非岩藻糖基化的人IgG1 18H3和岩藻糖基化的1E4在孵育24小时后，耗竭离体培养的健康供体的PBMC池中的人NK细胞。人IgG1 18H3和1E4对NK细胞的耗竭具有浓度依赖性。18H3-KIF的IC50经测定为0.02μg/ml，而1E4抗体的IC50则未测定。
最后，使用来自NK细胞慢性淋巴增生性病症(CLPD-NK)患者的细胞，通过ADCC分析来评估18H3抗体诱导人白血病细胞的ADCC的能力。关于这种分析，18H3抗体是在几夫碱存在下培养的Expi-CHO细胞中产生的，以产生模拟非岩藻糖基化抗体的18H3-KIF。如图10所示，部分非岩藻糖基化的人IgG1 18H3在孵育24小时后，耗竭离体培养的CLPD-NK患者的PBMC池中的人CLPD-NK白血病细胞。18H3抗体以浓度依赖性方式耗竭人CLPD-NK白血病细胞，其中IC50为0.059μg/ml。这种耗竭是选择性的，因为没有其他细胞类型受到影响。
图11概述所述抗CD94抗体相对于如上文所述的市售抗体进行的特征和功能评估。
实施例2：抗CD94抗体表征的体内小鼠研究
这一实施例描述使用体内小鼠研究来表征对人CD94具有特异性的抗体。
材料和方法
体内人源化IL-15转基因小鼠研究
从Jackson Lab获得人源化NSGTM-IL-15转基因小鼠。对小鼠植入健康供体和LGLL供体PBMC分别持续3天和28天。将一个剂量的人IgG1同种型对照或ATX-130(5mg/kg)注射至小鼠中，并在给药后48小时，通过流式细胞术评估血液、脾、骨髓和肝中的正常NK细胞、正常CD8 T细胞和CD8 T白血病细胞的耗竭(图12A)。
结果
在IL-15转基因小鼠(NSGTM-IL-15)中评估抗CD94抗体耗竭人NK和CD8 T细胞的能力(或缺乏所述能力)。所述人源化NSGTM-IL-15转基因小鼠是一种小鼠品系，它完全缺乏小鼠IL-2Rγ基因，导致适应性和先天性免疫系统缺陷。人IL-15的表达使得能够有效植入来自健康供体和白血病患者的人免疫细胞，特别是细胞毒性免疫细胞。如图12B所示，相对于同种型对照，用ATX-130处理(5mg/kg)观察到完全NK细胞耗竭。观察到CD8 T细胞的部分耗竭(约50％)。剩余的CD8 T细胞呈CD94阴性，并且因此未被耗竭。总之，ATX-130会耗竭CD94+细胞，包括所有人NK细胞和50％的CD8 T细胞。
在IL-15转基因小鼠(NSGTM-IL-15)中评估ATX-130-KIF耗竭血液、脾、骨髓和肝中的LGLL的能力(或缺乏所述能力)。如图13所示，相对于同种型对照，用ATX-130处理(5mg/kg)观察到超过50％的LGLL细胞耗竭。剩余的LGLL细胞呈CD94阴性，并且因此未被耗竭。总之，抗CD94抗体能够在小鼠体内有效地耗竭CD94+LGLL细胞。
实施例3：在非人灵长类动物中进行的抗CD94抗体表征
这一实施例描述食蟹猴的探索性药效学(PD)，以评估抗CD94抗体处理在体内的功效。
材料和方法
体内非人灵长类动物探索性研究
选择两只健康的雄性食蟹猴进行所述研究，它们的年龄分别为6.5岁和9.2岁并且体重为6.54和7.18kg，在研究开始前未接触过所有化合物，并且没有既往病史。如图14A所示，在第0周和第8周，在60分钟内通过静脉内(IV)输注以大约0.25mL/min的速率将两个剂量的ATX-130-KIF(2mg/kg)施用于Cyno#1。在第0周和第16周，在60分钟内通过IV输注以大约0.25mL/min的速率将两个剂量的ATX-130-KIF(2mg/kg)施用于Cyno#2。如图14A所示，在给药前和给药后以不同时间间隔收集血液、血清和PBMC。通过流式细胞术分析经由靶标细胞耗竭来确定PD。研究终点预计为22周。
结果
为了评估ATX-130-KIF在体内的功效，在非人灵长类动物(NHP)中完成PD研究。选择两只健康的雄性食蟹猴进行所述研究，它们的年龄分别为6.5岁和9.2岁并且体重为6.54和7.18kg(Cyno#1和Cyno#2)，在研究开始前未接触过所有化合物，并且没有既往病史。通过流式细胞术分析经由靶标细胞耗竭来确定药效学(PD)活性。所有生物分析数据均呈现至18周，其中研究终点预计为22周。
通过流式细胞术分析来评估ATX-130-KIF耗竭血液中的食蟹猴NK细胞的能力(或缺乏所述能力)。如图14B所示，Cyno#1(左图)和Cyno#2(右图)中的总PBMC中的NK细胞组成在基线时分别为20％和25％。对于每种剂量，在ATX-130-KIF施用后6小时，在两只动物中均检测到靶标细胞(NK细胞)耗竭至<5％的PBMC。在Cyno#1中，从6小时至336小时观察到NK细胞百分比的稳步增加，接着稳定在基线的50％，直至在1008小时施用第二剂量。在第二剂量后的168小时后观察到NK细胞计数稳定在基线的50％。在Cyno#2中，NK细胞恢复比Cyno#1中慢。NK细胞计数在第1剂量后6周保持在低水平，并在第8周至第14周内增加。在第16周施用ATX-130-KIF降低了给药后6小时的NK细胞水平，并且直至最新样品收集仍保持低水平。总之，目前的结果示出，抗CD94抗体可在食蟹猴的体内展示功效。
通过流式细胞术分析来评估ATX-130-KIF耗竭血液中的食蟹猴CD4 T、CD8 T和B细胞的能力(或缺乏所述能力)。如图15A所示，Cyno#1中的总PBMC的CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞的组成在基线时分别为27％、40％和4％。如图15B所示，Cyno#2中的总PBMC的CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞的组成在基线时分别为26％、40％和5％。在ATX-130-KIF施用后6小时，在两只动物中均检测到T和B细胞的耗竭。然而，这些免疫细胞群体在给药后24小时恢复至基线水平。这项研究的结果示出，抗CD94抗体仅短暂地耗竭其他免疫细胞，而不会耗竭非CD94表达细胞。
通过流式细胞术评估食蟹猴耗竭。如图16所示，在给药后6小时观察到单核细胞升高，但在7天后恢复至基线水平。所述研究的结果示出，ATX-130-KIF短暂地升高单核细胞，这表明抗CD94抗体可使单核细胞参与执行ADCC并有助于NK细胞的靶向耗竭。
通过流式细胞术评估单核细胞上的食蟹猴CD16表达。如图17所示，在给药后24小时观察到单核细胞上的CD16升高，但在7天后恢复至基线水平。所述研究的结果示出，ATX-130-KIF短暂地升高单核细胞上的CD16，这表明抗CD94抗体使单核细胞参与执行ADCC并有助于NK细胞的靶向耗竭。
实施例4：抗CD94抗体变体的表征
生成了抗CD94抗体ATX-130的变体并测试它们与人CD94的结合。每种变异抗体的VH和VL结构域在表B中示出。这些可变结构域的序列提供于表2中。
表B.测试了抗CD94抗体变体。
抗体 VH结构域 VL结构域
Ab.22 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:17
Ab.23 SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:17
Ab.24 SEQ ID NO:31 SEQ ID NO:17
Ab.25 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:17
Ab.26 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:33
Ab.27 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:34
Ab.28 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:35
Ab.29 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:36
Ab.30 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:37
Ab.31 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:38
Ab.32 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:39
Ab.33 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:40
Ab.34 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:41
生成每种抗体的Fab形式，并通过生物层干涉术(BLI)系统来评估每种Fab与人CD94蛋白的结合。结果在表C中示出。如与原始ATX-130抗体相比，变体显示出相似的与人CD94的结合，这表明在变体可变结构域中引入的突变不会显著影响结合(即，解离速率)。
表C.抗CD94 Fab变体与人CD94蛋白的结合。
样品ID k解离(1/s)
ATX-130 2.90E-03
Ab.22 2.38E-03
Ab.23 3.37E-03
Ab.24 6.95E-03
Ab.25 3.87E-03
Ab.26 4.46E-03
Ab.27 4.21E-03
Ab.28 4.25E-03
Ab.29 3.38E-03
Ab.30 2.82E-03
Ab.31 3.52E-03
Ab.32 3.10E-03
Ab.33 4.81E-03
Ab.34 5.76E-03
还测试了变异抗体与表达人CD94的HEK细胞的结合。生成呈人IgG1形式的变体和ATX-130抗体，并使用流式细胞术来评估与表达人CD94的HEK细胞的结合。一式两份进行实验，并计算2次实验的平均EC50。结果在表D中示出。如与原始ATX-130抗体相比，13种变体中有11种显示出相似的与表达人CD94的细胞的结合(如通过EC50所衡量)，但13种变体中有2种(Ab.23和Ab.30)失去了与表达人CD94的细胞的结合。
表D.抗CD94人IgG1变体抗体与表达人CD94的细胞的结合。
虽然出于清楚理解的目的已通过说明和实施例相当详细地描述了本公开，但所述描述和实施例不应被视为限制本公开的范围。本文所引用的所有专利和科学文献的公开内容均明确地以引用的方式整体并入。

Claims (43)

1.一种与人CD94结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域；
其中所述VH结构域包含氨基酸序列EVQLX1ESGGGLVKPGGS LRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISX2SSX3X4IYY ADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLGRYYYYMDVWGKGTTVTVSS，其中X1是L或V；其中X2是T或S；其中X3是N或S；并且其中X4是F或Y(SEQID NO:69)；
其中所述VL结构域包含氨基酸序列DIX1MTQSPSSLSASVGDR VTITCRASQSISSWLAWX2QQKPX3KX4PKX5LIYAASSLQSGVPSX6FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDX7ATYYCQX8YNSX9PFTFGPGTKVDI K，其中X1是V或Q；其中X2是Y或F；其中X3是G或E；其中X4是A或V；其中X5是S或L；其中X6是K或R；其中X7是V或F；其中X8是K或Q；并且其中X9是A或Y(SEQ ID NO:70)；并且
其中所述抗体不包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。
2.一种与人CD94结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域；
其中所述VH结构域包含：包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1；包含选自由SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)、SISSSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:18)、SISTSSSFIYYADSVKG(SEQ ID NO:21)和SISTSSNYIYYADSVKG(SEQ ID NO:24)组成的组的氨基酸序列的CDR-H2；和包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3；
其中所述VL结构域包含：包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1；包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2；和包含选自由QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)、QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)和QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)组成的组的氨基酸序列的CDR-L3；并且
其中所述抗体不包含包含氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2、包含氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ ID NO:3)的CDR-H3、包含氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。
3.如权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述VH结构域包含：
(a)包含所述氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含所述氨基酸序列SISTSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的CDR-H2和包含所述氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ IDNO:3)的CDR-H3；
(b)包含所述氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含所述氨基酸序列SISSSSNFIYYADSVKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2和包含所述氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ IDNO:3)的CDR-H3；
(c)包含所述氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含所述氨基酸序列SISTSSSFIYYADSVKG(SEQ ID NO:21)的CDR-H2和包含所述氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ IDNO:3)的CDR-H3；或
(d)包含所述氨基酸序列SYSMN(SEQ ID NO:1)的CDR-H1、包含所述氨基酸序列SISTSSNYIYYADSVKG(SEQ ID NO:24)的CDR-H2和包含所述氨基酸序列DLGRYYYYMDV(SEQ IDNO:3)的CDR-H3。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述VH结构域还包含：
(a)包含选自由EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:48)和EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO:49)组成的组的氨基酸序列的FR1；
(b)包含WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列的FR2；
(c)包含RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:51)的氨基酸序列的FR3；和
(d)包含WGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:52)的氨基酸序列的FR4。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述VH结构域包含选自由SEQ ID NO:16和29-32组成的组的氨基酸序列。
6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中所述VL结构域包含：
(a)包含所述氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含所述氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含所述氨基酸序列QKYNSAPFT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3；
(b)包含所述氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含所述氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含所述氨基酸序列QQYNSAPFT(SEQ ID NO:27)的CDR-L3；或
(c)包含所述氨基酸序列RASQSISSWLA(SEQ ID NO:4)的CDR-L1、包含所述氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO:5)的CDR-L2和包含所述氨基酸序列QKYNSYPFT(SEQ ID NO:28)的CDR-L3。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体，其中所述VL结构域还包含：
(a)包含选自由DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:53)和DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:54)组成的组的氨基酸序列的FR1；
(b)包含选自由WYQQKPGKAPKSLIY(SEQ ID NO:55)、WF QQKPGKAPKSLIY(SEQ ID NO:56)、WYQQKPEKAPKSLIY(SEQ ID NO:57)、WYQQKPGKVPKSLIY(SEQ ID NO:58)和WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:59)组成的组的氨基酸序列的FR2；
(c)包含选自由GVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC(SEQ ID NO:60)、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC(SEQ ID NO:61)和GVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SE Q IDNO:62)组成的组的氨基酸序列的FR3；和
(d)包含FGPGTKVDIK(SEQ ID NO:63)的氨基酸序列的FR4。
8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述VL结构域包含选自由SEQ ID NO:17和33-41组成的组的氨基酸序列。
9.如权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中：
(a)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列；
(b)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:34的氨基酸序列；
(c)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:35的氨基酸序列；
(d)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列；
(e)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:37的氨基酸序列；
(f)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列；
(g)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:39的氨基酸序列；
(h)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列；
(i)所述VH结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列；
(j)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列；
(k)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列；
(l)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:34的氨基酸序列；
(m)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:35的氨基酸序列；
(n)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列；
(o)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:37的氨基酸序列；
(p)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列；
(q)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:39的氨基酸序列；
(r)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列；
(s)所述VH结构域包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列；
(t)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列；
(u)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列；
(v)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:34的氨基酸序列；
(w)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:35的氨基酸序列；
(x)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列；
(y)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:37的氨基酸序列；
(z)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列；
(aa)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:39的氨基酸序列；
(bb)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列；
(cc)所述VH结构域包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列；
(dd)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列；
(ee)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列；
(ff)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:34的氨基酸序列；
(gg)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:35的氨基酸序列；
(hh)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列；
(ii)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:37的氨基酸序列；
(jj)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列；
(kk)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:39的氨基酸序列；
(ll)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列；
(mm)所述VH结构域包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列；
(nn)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列；
(oo)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列；
(pp)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:34的氨基酸序列；
(qq)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:35的氨基酸序列；
(rr)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列；
(ss)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:37的氨基酸序列；
(tt)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列；
(uu)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:39的氨基酸序列；
(vv)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列；或
(ww)所述VH结构域包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，并且所述VL结构域包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列。
10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗原结合抗体片段或单链抗体。
11.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体还包含Fc区。
12.如权利要求11所述的抗体，其中所述Fc区是人IgG1 Fc区。
13.如权利要求11或权利要求12所述的抗体，其中所述抗体包含非岩藻糖基化的人Fc区。
14.如权利要求11-13中任一项所述的抗体，其中所述抗体与人细胞Fcγ受体IIIA的结合程度大于包含野生型人IgG1 Fc区的抗体。
15.如权利要求11-14中任一项所述的抗体，其中所述抗体能够诱导针对在表面上表达人CD94的细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。
16.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码如权利要求1-15中任一项所述的抗体。
17.一种载体，所述载体包含如权利要求16所述的多核苷酸。
18.如权利要求17所述的载体，其中所述载体是表达载体。
19.一种分离的宿主细胞，所述分离的宿主细胞包含如权利要求16所述的多核苷酸或如权利要求17或权利要求18所述的载体。
20.一种产生抗体的方法，所述方法包括在适合产生所述抗体的条件下培养如权利要求19所述的宿主细胞。
21.如权利要求20所述的方法，所述方法还包括从所述宿主细胞回收所述抗体。
22.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-15中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。
23.一种用于治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1-15中任一项所述的抗体或如权利要求22所述的组合物。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述抗体的施用导致所述受试者的外周血LGL或NK细胞的数目减少。
25.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为费尔蒂氏综合征，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种费尔蒂氏综合征症状减轻。
26.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为包涵体肌炎，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种包涵体肌炎症状减轻。
27.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为侵袭性NK白血病，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种侵袭性NK白血病症状减轻。
28.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为类风湿性关节炎，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种类风湿性关节炎症状减轻。
29.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为LGL白血病，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种LGL白血病症状减轻。
30.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为CLPD-NK，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种CLPD-NK症状减轻。
31.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为自然杀伤(NK)细胞或T细胞淋巴瘤，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种淋巴瘤症状减轻。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤(TCL)、肠病相关TCL、皮肤TCL、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)、外周TCL、血管免疫母细胞性TCL、成人TCL、单形性亲上皮性肠TCL、亲表皮性CD8+皮肤TCL、原发性皮肤γ/δTCL或皮下脂膜炎TCL。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述NK细胞或T细胞淋巴瘤为结外NK/T细胞淋巴瘤、肝脾TCL或肠病相关TCL。
34.如权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症为显微镜下结肠炎，并且其中向所述受试者施用所述抗体导致所述受试者的一种或多种显微镜下结肠炎症状减轻。
35.一种用于减少受试者的外周血LGL和/或NK细胞的数目的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1-15中任一项所述的抗体或如权利要求22所述的组合物。
36.一种用于诱导受试者的ADCC活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1-15中任一项所述的抗体或如权利要求22所述的组合物。
37.一种用于治疗有需要的人受试者的CLPD-NK的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1-15中任一项所述的抗体或如权利要求22所述的组合物。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述抗体的施用导致所述受试者的一种或多种CLPD-NK症状的改进。
39.一种用于增强有需要的人受试者的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1-15中任一项所述的抗体或如权利要求22所述的组合物。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述抗体或组合物的施用导致在施用所述CAR-T治疗之前所述受试者的NK细胞耗竭。
41.一种用于耗竭有需要的人受试者的CD8+CD94+T细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1-15中任一项所述的抗体或如权利要求22所述的组合物。
42.如权利要求23-41中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用IL-2多肽。
43.如权利要求23-42中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
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AU2015201622A1 (en) * 2005-10-14 2015-04-16 Innate Pharma Compositions and methods for treating proliferative disorders
EP3946455A4 (en) * 2019-03-29 2022-12-21 Dren Bio, Inc. METHODS OF REDUCING LEVELS OF LARGE GRANULOUS LYMPHOCYTES AND NATURAL KILLER CELLS
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