CN118900639A - 柯林斯菌属细菌的增殖控制用组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

提供在肠道内控制柯林斯菌(Collinsella)属细菌的增殖的手段。课题在于，提供能够控制柯林斯菌属细菌的增殖的新材料。提供肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增殖控制用组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。

Description

柯林斯菌属细菌的增殖控制用组合物及其应用

技术领域

本发明涉及柯林斯菌(Collinsella)属细菌的增殖控制用组合物及其应用。

背景技术

已知柯林斯菌属细菌是存在于人类肠道的肠道细菌，其中，产气柯林斯菌(C.aerofaciens)在癌症免疫疗法中是肠道常见抗PD-1抗体应答物(responder)(非专利文献1)，具有与应对复发性艰难梭菌感染症的粪便移植疗法的奏效性相关的关键基因(非专利文献2)。另外，最近报道了：制作使用肠道菌群预测各国的COVID-19死亡率的机器学习模型(generalized linear model；GLM)，并且利用GLM进行分析，结果显示肠道菌群中柯林斯菌属的比率越低则COVID-19的死亡率越高(非专利文献3)。

关于柯林斯菌属细菌，已知全纤维素(WholeFiber)、菊粉是可使柯林斯菌属细菌在肠道中增殖的材料(非专利文献4)。另外，专利文献1记载了一种胆汁酸吸附方法，其特征在于，使用具有在糖源的存在下将胆汁酸摄入菌体内的性质的肠道细菌，作为所使用的肠道细菌之一，记载了柯林斯菌(Collinsella)属菌。另外，专利文献2记载了一种组合物，其用于在治疗被检体的肝内胆汁淤积或降低肝内胆汁淤积风险的方法中使用，所述组合物包含至少一种具有胆汁酸脱结合活性和/或7-差向异构化活性的细菌菌株，作为该组合物中所含的细菌菌株之一，记载了产气柯林斯菌(Collinsella aerofaciens)ATCC25986。另外，专利文献3记载了一种制造L-鸟氨酸和雌马酚的方法，其包括：(1)在包含异黄酮类和糊精的培养基中培养厌氧性微生物的工序；以及(2)回收在工序(1)中得到的L-鸟氨酸和雌马酚的工序，作为该厌氧性微生物之一，记载了柯林斯菌(Collinsella)属细菌。专利文献4记载了一种能够有效地治疗和预防炎症、特别是溃疡性大肠炎的组合物，其特征在于，包含单形巨单胞菌(Megamonasfuniformis)和/或其代谢物且包含粪厌氧棒形菌(Anaerofustisstercorihominis)和/或其代谢物，并且记载了该组合物还包含深圳柯林斯菌(Collinsella shenzhenensis)和/或其代谢物，优选上述深圳柯林斯菌是保藏编号为GDMCC60090的深圳柯林斯菌TF06-26。专利文献5记载了一种人肠道菌群模型，其用于评价对象食品组合物的人肠道中的短链脂肪酸增加促进作用和/或多样性增加促进作用，所述人肠道菌群模型由包含至少9个以上菌种的细菌的评价用菌体培养物构成，其中不含属于变形菌门、乳杆菌属的细菌且包含属于双歧杆菌属的细菌，作为该模型可包含的细菌之一，记载了柯林斯菌属细菌。

另一方面，人乳低聚糖(HMO)是母乳所含的固体成分中仅次于乳糖、脂质的第三多的成分。已知如果提供作为人乳低聚糖之一的2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳糖-二岩藻四糖，则双歧杆菌会增殖(非专利文献5)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2006-314219号公报

专利文献2：WO2017/102816(日本特表2018-537484号公报)

专利文献3：日本特开2014-54234号公报

专利文献4：WO2019/227418(日本特表2021-524751号公报)

专利文献5：WO2021/206106

非专利文献

非专利文献1：Matson V,Fessler J,Bao R,et al.The commensal microbiomeis associated with anti-PD-1efficacy in metastatic melanomapatients.Science.2018；359(6371):104-108.doi:10.1126/science.aao3290

非专利文献2：Mullish BH,McDonald JAK,Pechlivanis A,et al.Microbialbile salt hydrolases mediate the efficacy of faecal microbiota transplant inthe treatment of recurrent Clostridioides difficile infection.Gut.2019；68(10):1791-1800.doi:10.1136/gutjnl-2018-317842

非专利文献3：Hirayama1 M,Nishiwaki H,et al.Intestinal Collinsella maymitigate infection and exacerbation of COVID-19by producingursodeoxycholate.PLoS One.2021Nov 23；16(11):e0260451.doi:10.1371/journal.pone.0260451.eCollection 2021.

非专利文献4：Carlson JL,Erickson JM,Hess JM,Gould TJ,SlavinJL.Prebiotic Dietary Fiber and Gut Health:Comparing the in VitroFermentations of Beta-Glucan,Inulin and Xylooligosaccharide.Nutrients.2017；9(12):1361.Published 2017Dec 15.doi:10.3390/nu9121361

非专利文献5：Yu ZT,Chen C,Newburg DS.Utilization of major fucosylatedand sialylated human milk oligosaccharides by isolated human gutmicrobes.Glycobiology.2013；23(11):1281-1292.doi:10.1093/glycob/cwt065

发明内容

发明要解决的问题

柯林斯菌属细菌被认为是有用肠道细菌之一。期望能够在肠道内促进柯林斯菌属细菌增殖的新材料。

用于解决问题的方案

本发明提供以下：

[1]一种肠道内的菌群中的柯林斯菌(Collinsella)属细菌的增殖控制用组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。

[2]根据1所述的组合物，其包含选自由以岩藻糖基化人乳低聚糖、唾液酸化人乳低聚糖、以乳糖为构成糖的人乳低聚糖、以唾液酸为构成糖的人乳低聚糖、乳糖和唾液酸组成的组中的任意者。

[3]根据1或2所述的组合物，其包含选自由2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳糖和N-乙酰神经氨酸组成的组中的任意者。

[4]根据1-3中任一项所述的组合物，其用于作为益生元或合生元而使用。

[5]一种用于通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态的处置的组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。

[6]根据5所述的组合物，其中，通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态为呼吸系统感染症。

[7]一种用于呼吸系统感染症的处置的组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。

[8]根据6或7所述的组合物，其中，呼吸系统感染症为冠状病毒感染症。

[9]根据6或7所述的组合物，其中，呼吸系统感染症为新型冠状病毒感染症(COVID-19)。

[10]根据1至5中任一项所述的组合物，其中，增殖控制为增殖促进。

[11]一种包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物，其用于在通过控制肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增殖的方法中使用。选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者在制造用于控制肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增殖的组合物中的用途。一种控制肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增殖的方法或非治疗性方法，其包括下述工序：将包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物给予至对象。包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物的用于控制肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增殖的用途或非治疗性用途。

[12]根据11所述的组合物，其包含选自由以岩藻糖基化人乳低聚糖、唾液酸化人乳低聚糖、以乳糖为构成糖的人乳低聚糖、以唾液酸为构成糖的人乳低聚糖、乳糖和唾液酸组成的组中的任意者；选自由以岩藻糖基化人乳低聚糖、唾液酸化人乳低聚糖、以乳糖为构成糖的人乳低聚糖、以唾液酸为构成糖的人乳低聚糖、乳糖和唾液酸组成的组中的任意者在11所述的制造中的用途；根据11所述的方法或非治疗性方法，其包括下述工序：将包含选自由以岩藻糖基化人乳低聚糖、唾液酸化人乳低聚糖、以乳糖为构成糖的人乳低聚糖、以唾液酸为构成糖的人乳低聚糖、乳糖和唾液酸组成的组中的任意种的组合物给予至对象；或，这样的组合物的、11所述的用途或非治疗性用途。

[13]根据7或8所述的组合物，其包含选自由2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳糖和N-乙酰神经氨酸组成的组中的任意者；或，选自由2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳糖和N-乙酰神经氨酸组成的组中的任意者在11或12所述的制造中的用途；根据11或12所述的方法或非治疗性方法，其包括下述工序：将包含选自由2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳糖和N-乙酰神经氨酸组成的组中的任意者的组合物给予至对象；或，这样的组合物的、11或12所述的用途或非治疗性用途。

[14]根据11至13中任一项所述的组合物、制造中的用途、方法或非治疗性方法、或者用途或非治疗性用途，其中，组合物用于作为益生元或合生元使用。

[15]一种包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物，其用于在通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态的处置的方法中使用。选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者在制造用于通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态的处置的组合物中的用途。一种通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态的处置的方法或非治疗性方法，其包括下述工序：将包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物给予至对象。包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物的、用于通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态的处置的用途或非治疗性用途。

[16]根据15所述的组合物、组合物的制造中的用途、方法或非治疗性方法、或者用途或非治疗性用途，其中，通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态为呼吸系统感染症。

[17]一种用于呼吸系统感染症的处置的组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。一种包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物，其用于在呼吸系统感染症的处置的方法中使用。一种用于呼吸系统感染症的处置的组合物，其为选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。在制造用于呼吸系统感染症的处置的组合物中的用途。一种呼吸系统感染症的处置的方法或非治疗性方法，其包括下述工序：将包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物给予至对象。包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者的组合物的、用于呼吸系统感染症的处置的用途或非治疗性用途。

[18]根据16或17所述的组合物、组合物的制造中的用途、方法或非治疗性方法、或者用途或非治疗性用途，其中，呼吸系统感染症为冠状病毒感染症。

[19]根据16～18中任一项所述的组合物、组合物的制造中的用途、方法或非治疗性方法、或者用途或非治疗性用途，其中，呼吸系统感染症为新型冠状病毒感染症(COVID-19)。

[20]根据11至16中任一项所述的组合物、组合物的制造中的用途、方法或非治疗性方法、或者用途或非治疗性用途，其中，增殖控制为增殖促进。

发明的效果

通过本发明，能够控制肠道内的菌群。特别地，能够控制肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增加。

通过控制肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增加，可以期待能够处置可借此而改善的各种疾病或状态、例如COVID-19之类的呼吸系统感染症。

通过添加本发明的有效成分，由此可以提供各种形态的具有功能性的食品。

附图说明

图1为人粪便培养体系中的各种糖质所引起的柯林斯菌属细菌的占有率变化。基于配对t检验(paired t-test)。

具体实施方式

以下对本发明进行详细说明。

本发明涉及以选自由人乳低聚糖(有时也称为HMO。)和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者为有效成分的、肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增殖控制用组合物。

[有效成分]

本发明的组合物包含选自由人乳低聚糖(有时也称为HMO。)和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者作为有效成分。人乳低聚糖为人乳中所含的低聚糖，是仅次于乳糖、脂质的第三多的固体成分。人乳低聚糖除了少数例外者以外均具有如下化学结构：在还原末端侧具有乳糖单元、并且在其上添加有岩藻糖、唾液酸和半乳糖等。

需要说明的是，关于本发明，乳低聚糖的简称和结构遵循Nutr Rev.2017Nov 1；75(11):920-933.doi:10.1093/nutrit/nux044.和Nutrients 2021,13(8),2737；https://doi.org/10.3390/nu13082737。如果这些文献中有分歧，则遵循后者。

组合物中使用的人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖只要具有目标效果，就没有特别限定。另外，组合物中使用的人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖可以是一种，也可以是两种以上的组合。

作为组合物中所含的人乳低聚糖的例子，可列举出下述中性低聚糖和酸性低聚糖。

中性低聚糖：2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)、3-岩藻糖基乳糖(3-FL)、二岩藻糖基乳糖(Lacto-difucotetraose)(DFL、LDFT)、乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-岩藻五糖I(LNFP I)、乳糖-N-岩藻五糖II(LNFP II)、乳糖-N-岩藻五糖III(LNFP III)、乳糖-N-岩藻五糖V(LNFP V)、乳糖-N-岩藻五糖VI(LNFP VI)、乳糖-N-二岩藻六糖I(LNDFHI)、乳糖-N-二岩藻六糖II(LNDFH II)、乳糖-N-六糖(LNH)、对-乳糖-N-六糖(pLNH)、乳糖-N-新六糖(LNnH)、对-乳糖-N-新六糖(pLNnH)、岩藻糖基乳糖-N-六糖I(F-LNH I)、岩藻糖基-对-乳糖-N-六糖I(F-para-LNH I)、岩藻糖基乳糖-N-六糖II(F-LNH II)、岩藻糖基-乳糖-N-六糖III(F-LNH III)、二岩藻糖基-乳糖-N-六糖I(DF-LNH I)、二岩藻糖基-乳糖-N-六糖II(DF-LNH II)、二岩藻糖基-乳糖-N-六糖III(DF-LNH III)、二岩藻糖基-对-乳糖-N-新六糖(DF-pLNnH)、二岩藻糖基-对-乳糖-N-六糖(DF-para-LNH)、二岩藻糖基-对-乳糖-N-新六糖(DF-para-LNnH)、三岩藻糖基-乳糖-N-六糖(TF-LNH)。

酸性低聚糖：3’-唾液酸乳糖(3’-SL)、6’-唾液酸乳糖(6’-SL)、6′-唾液酸-N-乙酰基乳糖胺(6’-SLN)、LS-四糖a(唾液酸乳糖-N-四糖a)(LST a)、LS-四糖b(唾液酸乳糖-N-四糖b)(LST b)、LS-四糖c(唾液酸乳糖-N-四糖c)(LST c)、二唾液酸乳糖-N-四糖(DS-LNT)、岩藻糖基-唾液酸乳糖-N-四糖a(F-LST a)、岩藻糖基-唾液酸乳糖-N-四糖b(F-LST b)、岩藻糖基-唾液酸乳糖-N-六糖(FS-LNH)、岩藻糖基-唾液酸乳糖-N-新六糖(FS-LNnH I)、岩藻糖基-二唾液酸乳糖-N-六糖(FDS-LNH)、二唾液酸乳糖-N-六糖(DS-LNH)。

作为组合物中所含的人乳低聚糖的优选例子，可列举出下述中性低聚糖和酸性低聚糖。

中性低聚糖：2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)、3-岩藻糖基乳糖(3-FL)、二岩藻糖基乳糖(乳糖-二岩藻四糖)(DFL、LDFT)、乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-岩藻五糖I(LNFP I)、乳糖-N-岩藻五糖II(LNFP II)、乳糖-N-岩藻五糖III(LNFP III)、乳糖-N-岩藻五糖V(LNFP V)、乳糖-N-岩藻五糖VI(LNFP VI)、乳糖-N-二岩藻六糖I(LNDFH I)、乳糖-N-二岩藻六糖II(LNDFH II)、乳糖-N-六糖(LNH)、乳糖-N-新六糖(LNnH)、对-乳糖-N-新六糖(pLNnH)、岩藻糖基乳糖-N-六糖I(F-LNH I)、岩藻糖基-对-乳糖-N-六糖I(F-para-LNHI)、岩藻糖基乳糖-N-六糖II(F-LNH II)、岩藻糖基乳糖-N-六糖III(F-LNH III)、二岩藻糖基乳糖-N-六糖I(DF-LNH I)、二岩藻糖基乳糖-N-六糖II(DF-LNH II)、二岩藻糖基乳糖-N-六糖III(DF-LNH III)、二岩藻糖基-对-乳糖-N-新六糖(DF-pLNnH)、三岩藻糖基乳糖-N-六糖(TF-LNH)。

酸性低聚糖：3’-唾液酸乳糖(3’-SL)、6’-唾液酸乳糖(6’-SL)、LS-四糖a(唾液酸乳糖-N-四糖a)(LST a)、LS-四糖b(唾液酸乳糖-N-四糖b)(LST b)、LS-四糖c(唾液酸乳糖-N-四糖c)(LST c)、二唾液酸乳糖-N-四糖(DS-LNT)、岩藻糖基-唾液酸乳糖-N-新六糖(FS-LNnH I)、二唾液酸乳糖-N-六糖(DS-LNH)。

作为组合物中所含的人乳低聚糖的更优选的例子，可列举出下述中性低聚糖和酸性低聚糖。

中性低聚糖：2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)、二岩藻糖基乳糖(乳糖-二岩藻四糖)(DFL、LDFT)、乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNnT)

酸性低聚糖：3’-唾液酸乳糖(3’-SL)、6’-唾液酸乳糖(6’-SL)

关于本发明，在提及人乳低聚糖的构成糖时是指：构成人乳低聚糖的糖(人乳低聚糖分解产生的糖)且不包括葡萄糖和半乳糖。作为组合物中所含的人乳低聚糖的构成糖的例子，可列举出乳糖、岩藻糖、唾液酸、N-乙酰葡糖胺。唾液酸是神经氨酸的修饰体的总称。作为唾液酸的例子，可列举出神经氨酸经乙酰基修饰而成的N-乙酰基神经氨酸(Neu5Ac)。

根据本发明人等的研究，确认乳糖、Neu5Ac、2’-FL、3’-SL、6’-SL具有优异的柯林斯菌属细菌增殖促进作用。在此，摄取人乳低聚糖后在人的消化道内可能生成乳糖。另外，摄取包含含有Neu5Ac作为构成糖的人乳低聚糖的人乳低聚糖后，在人的消化道内可能生成Neu5Ac(参照后述的非专利文献6～8)。进而，对于2’-FL、3’-SL、6’-SL中每一者都确认到目标效果，因此如果为岩藻糖基化人乳低聚糖、和唾液酸化人乳低聚糖则能够充分获得目标效果。

从这样的观点出发，组合物中使用的人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖的优选例为选自由以岩藻糖基化人乳低聚糖、唾液酸化人乳低聚糖、以乳糖为构成糖的人乳低聚糖、以唾液酸为构成糖的人乳低聚糖、乳糖和唾液酸组成的组中的任意者。以唾液酸为构成糖的人乳低聚糖包括唾液酸化人乳低聚糖(例如3’-SL、6’-SL)、含有唾液酸的人乳低聚糖(例如LST a、DS-LNT)。

组合物中使用的人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖的具体例为选自由2’-FL、3’-SL、6’-SL、乳糖和Neu5Ac组成的组中的任意者。

[用途]

本发明的组合物可以用于肠道内的菌群中的柯林斯菌属细菌的增殖控制。增殖控制包括增殖促进和增殖抑制。优选的组合物用于增殖促进。

作为肠道内菌群中所含的细菌的例子，可列举如下：

栖粪杆菌(Faecalibacterium)属细菌、例如普氏栖粪杆菌(Faecalibacteriumprausnitzii)；

阿克曼氏菌(Akkermansia)属细菌、例如嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansiamuciniphila)；

布劳特氏菌(Blautia)属细菌、例如球形布劳特氏菌(Blautia coccoides)、Blautia intestinalis、栖粪布劳特氏菌(Blautia faecicola)；

罕见小球菌(Subdoligranulum)属细菌、例如变异罕见小球菌(Subdoligranulumvariabile)；

嗜胆菌(Bilophila)属细菌、例如沃氏嗜胆菌(Bilophila wadsworthia)；

柯林斯菌(Collinsella)属细菌、例如产气柯林斯菌(Collinsellaaerofaciens)、肠道柯林斯菌(Collinsella intestinalis)；

霍尔德曼氏菌(Holdemania)属细菌、例如纤维状霍尔德曼氏菌(Holdemaniafiliformis)；

副萨特氏菌(Parasutterella)属细菌、例如Parasutterellaexcrementihominis、Parasutterella secunda；

颤杆菌(Oscillibacter)属细菌、例如缬草颤杆菌(Oscillibactervalericigenes)；

埃格特菌(Eggerthella)属细菌、例如迟缓埃格特菌(Eggerthella lenta)；

萨特氏菌(Sutterella)属细菌、例如Sutterella parvirubra、华德萨特氏菌(Sutterella wadsworthensis)；

双歧杆菌属细菌(双歧杆菌)、例如青春双歧杆菌(B.adolescentis)、两歧双歧杆菌(B.bifidum)、短双歧杆菌(B.breve)、链状双歧杆菌(B.catenulatum)、婴儿双岐杆菌(B.infantis)、乳酸双歧杆菌(B.lactis)、长双歧杆菌(B.longum)、假链状双歧杆菌(B.pseudocatenulatum)。

关于本发明，在提及柯林斯菌属细菌时，是指通过基于16S rRNA基因的分子系统分析而鉴定为柯林斯菌属的细菌。通过基于16S rRNA基因的分子系统分析来判断菌属的标准是本领域技术人员熟知的(Stackebrandt E,Ebers J.Taxonomic parametersrevisited:tarnished gold standards.Microbiol Today2006；33:152-155.)。

关于本发明，控制菌群中的特定细菌的增殖是指控制菌群中特定细菌所占的比例(占有率)。

某种成分是否控制肠道内菌群中的特定细菌的增殖这一点可以如下进行评价。将健康人提供的粪便加入合适的培养基中，根据需要培养一定时间后，加入要评价的成分，在合适的条件下进行培养(例如在与肠道内条件类似的37℃、厌氧条件下培养48小时)，测定培养物中菌群中的特定细菌的占有率。然后，将测定结果与在相同条件下培养的仅在添加对照(例如灭菌水)来代替要评价的成分这一点上不同的培养物的测定结果进行比较，当占有率高于对照时，可以判断为增殖得到促进，当占有率低于对照时，可以判断为增殖被抑制。

菌群中所含的特定细菌的占有率可以通过公知的方法求出。优选方法之一是对从培养物中提取的DNA进行16S宏基因组分析(16S rRNA基因扩增子的序列分析)。在实施16S宏基因组分析的情况下，DNA的提取可以使用市售的试剂盒进行。被分析的基因组区域，只要能够判定细菌就没有特别限制，但可以使用16S rRNA基因的V3-V4区域。用于进行细菌分析的引物、扩增条件、扩增子的纯化等方法也可以使用本领域技术人员所熟知的方法。序列的解读优选用性能更高的下一代测序仪来进行。得到的数据分析可以利用QIIME 2^TM等新一代微生物组生物信息学平台。关于16S宏基因组分析，本领域技术人员可以参照Sanschagrin S,Yergeau E.Next-generation sequencing of16S ribosomal RNA geneamplicons.J Vis Exp.2014；(90):51709.Published2014Aug 29.doi:10.3791/51709等信息。

本发明涉及的柯林斯菌属细菌为存在于人肠道的肠道细菌，其中，产气柯林斯菌在癌症免疫疗法中是肠道常见抗PD-1抗体应答物(responder)(前述非专利文献1)，具有与应对复发性艰难梭菌感染症的粪便移植疗法的奏效性相关的关键基因(前述非专利文献2)，这些是众所周知的。因此，组合物可期待用于这样的疾病或状态的处置。

另外，组合物可以用于通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态的处置。作为这样的疾病或状态，可以为各种疾病或状态。

最近有报道指出，肠道菌群中柯林斯菌属的比率越低则COVID-19的死亡率越高(非专利文献3)。并且已知柯林斯菌属具有与作为次级胆汁酸的熊去氧胆酸的产生相关的基因(非专利文献9)，已知熊去氧胆酸可防止感染SARS-CoV-2时与首先结合的受体血管紧张素转换酶2(ACE2)进行结合(非专利文献10、11)。进而还已知，熊去氧胆酸抑制炎症诱导性细胞因子(非专利文献12、13)，具有抗氧化/抗凋亡作用(非专利文献14、15)，在急性呼吸系统综合征(ARDS)的情况下提高肺泡液清除率(非专利文献16)。因此，控制肠道的柯林斯菌属的增殖的组合物可用于COVID-19感染之类的呼吸系统感染症的处置。

非专利文献9.Liu L,Aigner A,Schmid RD.Identification,cloning,heterologous expression,and characterization of a NADPH-dependent7β-hydroxysteroid dehydrogenase from Collinsella aerofaciens.Appl MicrobiolBiotechnol.2011；90(1):127-135.doi:10.1007/s00253-010-3052-y

非专利文献10.Poochi SP,Easwaran M,Balasubramanian B,Anbuselvam M,Meyyazhagan A,Park S,et al.Employing bioactive compounds derived from Ipomoeaobscura(L.)to evaluate potential inhibitor for SARSCoV-2main protease andACE2 protein.Food Front.2020.Epub 2020/08/25.https://doi.org/10.1002/fft2.29PMID:32838301；PubMed Central PMCID:PMC7361879.

非专利文献11.Carino A,Moraca F,Fiorillo B,Marchiano S,Sepe V,BiagioliM,et al.Hijacking SARS-CoV-2/ACE2 Receptor Interaction by Natural and Semi-synthetic Steroidal Agents Acting on Functional Pockets on the ReceptorBinding Domain.Front Chem.2020；8:572885.Epub 2020/11/17.doi:10.3389/fchem.2020.572885；PubMed Central PMCID:PMC7645072.

非专利文献12.Ko WK,Lee SH,Kim SJ,Jo MJ,Kumar H,Han IB,et al.Anti-inflammatory effects of ursodeoxycholic acid by lipopolysaccharide-stimulatedinflammatory responses in RAW 264.7macrophages.PLoS One.2017；12(6):e0180673.Epub 2017/07/01.doi:10.1371/journal.pone.0180673；PubMed CentralPMCID:PMC5493427.

非专利文献13.Ko WK,Kim SJ,Jo MJ,Choi H,Lee D,Kwon IK,etal.Ursodeoxycholic Acid Inhibits Inflammatory Responses and PromotesFunctional Recovery After Spinal Cord Injury in Rats.Mol Neurobiol.2019；56(1):267–77.Epub 2018/04/25.doi:10.1007/s12035-018-0994-z.

非专利文献14.Lapenna D,Ciofani G,Festi D,Neri M,Pierdomenico SD,Giamberardino MA,et al.Antioxidant properties of ursodeoxycholic acid.BiochemPharmacol.2002；64(11):1661–7.Epub 2002/11/14.doi:10.1016/s0006-2952(02)01391-6.

非专利文献15.Kim YJ,Jeong SH,Kim EK,Kim EJ,Cho JH.Ursodeoxycholicacid suppresses epithelial-mesenchymal transition and cancer stem cellformation by reducing the levels of peroxiredoxin II and reactive oxygenspecies in pancreatic cancer cells.Oncol Rep.2017；38(6):3632–8.Epub2017/11/14.doi:10.3892/or.2017.6045.

非专利文献16.Niu F,Xu X,Zhang R,Sun L,Gan N,Wang A.Ursodeoxycholicacid stimulates alveolar fluid clearance in LPS-induced pulmonary edema viaALX/cAMP/PI3K pathway.J Cell Physiol.2019；234(11):20057–65.Epub 2019/04/12.doi:10.1002/jcp.28602.

关于本发明，在提及呼吸系统感染症时，包括选自由冠状病毒、流感病毒、鼻病毒、RS病毒、副流感病毒和腺病毒组成的组中的任意病毒所引起的感染症。一个方式中，组合物可用于呼吸系统感染症中的冠状病毒感染症。冠状病毒感染症包括选自由HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)和新型冠状病毒(SARS-CoV-2)组成的组中的任意病毒所引起的感染症。新型冠状病毒感染症也被称为COVID-19。在优选方式之一中，组合物用于新型冠状病毒感染症(COVID-19)的处置。

关于本发明，在提及关于疾病或状态的处置时是指包括发病风险的降低、发病的延迟、预防、治疗、病情发展的停止、延迟。治疗包括根治疗法(消除病因的治疗)以及对症疗法(改善症状的治疗)。用于改善或处置的行为包括由医生或接受医生指示的护士、助产士等进行的医疗行为，以及由医生以外的人员、例如药剂师、营养师(包括管理营养师、运动营养师)、保健师、助产士、护士、临床检查技师、体育教练员、药物制造商、药物销售商、食品制造商、食品销售商等进行的非治疗行为。进而预防或降低发病风险包括推荐摄入特定食品、营养指导(包括对伤病员进行疗养所需的营养指导，以及为了保持和增进健康的营养指导)。

[组合物]

(食品组合物等)

本发明的组合物可以制成食品组合物或药物组合物。除另有说明外，食品和药物不仅包括供人使用的食品和药物，还包括供人以外的动物使用的食品和药物。除另有说明外，食品包括一般食品、功能性食品、营养组合物，另外包括治疗食品(用于治疗目的的食品。基于医生开具膳食食谱、依据其营养师等制作的菜单而烹调出的食品)、食疗食品、配方食品、护理食品、治疗辅助食品。除另有说明外，食品不仅包括固体物食品，还包括液态的食品、例如饮料、保健饮料、流食和汤。功能性食品是指能够对生物体赋予规定的功能性的食品，例如包括特定保健用食品(包括附加条件的特保[特定保健用食品])、功能性标示食品、包括营养功能食品在内的保健功能食品、特殊用途食品、营养辅助食品、健康辅助食品、营养补充剂(例如片剂、包衣片剂、糖衣片剂、胶囊、液体制剂等各种剂型的食品)、美容食品(例如减肥食品)等所有健康食品。另外，本发明中“功能性食品”包括基于法典(FAO/WHO联合食品标准委员会)的适用食品标准的健康声明(Health claim)的健康食品。

(对象)

本发明的组合物适合于对下述对象进行给予：希望或需要控制肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖的对象；和处于可通过控制肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖而改善的疾病或状态的对象；有感染呼吸系统感染症的致病病毒风险者、有感染SARS-CoV-2等冠状病毒风险者、呼吸系统感染症的患者、COVID-19等冠状病毒感染症的患者。希望或需要控制肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖的对象包括肠道内的柯林斯菌属细菌数少者。需要说明的是，关于本发明，给予以将药品给予至对象的含义使用，还以使对象摄取除药品以外的食品等的含义使用。

对象的年龄没有特别限制，对象例如可以为新生儿(出生28天以内)；婴儿(未满1岁)；幼儿(1～6岁)；小儿(7岁以上且未满15岁)；成人(15岁以上)；65岁以上者。

(给予途径等)

本发明的组合物可以经口给予，也可以非经口地、例如经管(胃造瘘、肠造瘘)给予，还可以经鼻给予，但优选为经口给予。

组合物可以重复给予对象，也可以长时间连续给予对象。持续时间没有特别限制，但为了充分观察效果，在相对较长的时间内连续给予即可，例如3天以上、1周以上、2周以上、1个月以上、3个月以上、6个月以上、1年以上。

组合物可以日常给予，也可以在高风险时等提前给予，或者在需要时给予。组合物可以作为膳食给予，也可以在餐前、餐后、餐间给予，还可以在想要通过组合物改善的疾病或状态发生时给予。

(用量、含量)

本发明的组合物的给予量为可发挥目标效果的量即可。给予量可以考虑对象的年龄、体重、症状等各种因素适当地进行设定。

组合物的日剂量可以为使得以有效成分量计成为0.1mg以上的量，优选为0.3mg以上，更优选为0.6mg以上，进一步优选为1mg以上。日剂量的有效成分的上限值在下限值为任意的情况下均可以设为10g以下，可以设为5g以下，可以设为1g以下，可以设为100mg以下，可以设为60mg以下，也可以设为30mg以下，还可以设为15mg以下。需要说明的是，在组合物中包含多个有效成分的情况下，有效成分的量是指所含的有效成分的总量。

给予可以为一日一次，也可以为一日多次，例如2～10次。每次的有效成分的剂量例如可以设为0.01mg以上，优选设为0.03mg以上，更优选设为0.06mg以上，进一步优选设为0.1mg以上。每次的有效成分的上限值在下限值为任意的情况下均可以设为3g以下，可以设为1g以下，可以设为100mg以下，可以设为33mg以下，可以设为20mg以下，也可以设为10mg以下，还可以设为5mg以下。

组合物中的有效成分的含量可以根据组合物的形态适当地设定。例如，相对于组合物的固体成分，有效成分的含量可以设为0.1％以上，优选设为0.3％以上，更优选设为0.6％以上，进一步优选设为1％以上。相对于固体成分的有效成分的上限值在下限值为任意的情况下均可以设为50％以下，可以设为30％以下，可以设为20％以下，也可以设为10％以下，还可以设为5％以下。需要说明的是，关于本发明，除非另有说明，否则％是指质量％。

在组合物为液态的情况下，有效成分的含量例如可以设为0.01％以上，优选设为0.03％以上，更优选设为0.06％以上，进一步优选设为0.1％以上。在为液态的情况下，有效成分的含量的上限值在下限值为任意的情况下均可以设为5％以下，可以设为3％以下，可以设为2％以下，也可以设为1％以下，还可以设为0.5％以下。

(其他成分、添加剂)

关于本发明，组合物可以包含允许作为食品或药物的其它有效成分、营养成分。这样的成分的例子是脂质(例如乳脂、植物油脂、含中链脂肪酸的油脂)、蛋白质(例如乳蛋白、乳蛋白浓缩物(MPC)、乳清蛋白浓缩物(WPC)、乳清蛋白分离物(WPI)、α-乳清蛋白(α-La)、β-乳球蛋白(β-Lg)、热变性乳清蛋白和酶处理乳清蛋白)、氨基酸类(例如赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸)、除人乳低聚糖以外的糖质或除人乳低聚糖的构成糖以外的糖质(葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、海藻糖、赤藓糖醇、麦芽糖醇、帕拉金糖、木糖醇、糊精)、电解质(例如钠、钾、钙、镁)、维生素(例如维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、生物素、叶酸、泛酸和烟酸类)、矿物质(例如铜、锌、铁、钴、锰)、抗生素、食物纤维等。

关于本发明，组合物可以包含除人乳低聚糖以外的的益生元。益生元可以说是一种难消化性食物成分，通过选择性地改变大肠中特定细菌的增殖和活性，对宿主产生有利的影响，改善宿主的健康。组合物中作为除人乳低聚糖以外的的益生元，可以使用一种，也可以使用两种以上。

除人乳低聚糖以外的益生元只要不妨碍组合物中所含的有效成分的效果，就没有特别限制。作为除人乳低聚糖以外的益生元的例子，可列举出低聚半乳糖、低聚果糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、棉子糖、乳果糖、低聚乳果糖、大豆低聚糖、咖啡低聚糖、食物纤维、葡萄糖酸。

另外，组合物还可以包含允许作为食品或药物的添加物。这样的添加物的例子为非活性载体(固体、液体载体)、赋形剂、表面活性剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、助溶剂、悬浮剂、涂层剂、着色剂、保存剂、缓冲剂、pH调节剂、乳化剂、稳定剂、甜味剂、抗氧化剂、香料、酸味剂、天然物。更具体而言，为水、其它水性溶剂、制药上可接受的有机溶剂、胶原、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、羧乙烯基聚合物、海藻酸钠、水溶性葡聚糖、水溶性糊精、羧甲基淀粉钠、果胶、黄原胶、阿拉伯胶、酪蛋白、明胶、琼脂、甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、三氯蔗糖、甜菊糖、阿斯巴甜、安赛蜜、柠檬酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、磷酸、乙酸、果汁、蔬菜汁等。

(剂型/形态)

本发明的食品组合物可以制成固体、液体、混合物、悬浮液、粉末、颗粒、糊剂、啫喱、凝胶、胶囊等任意形态。另外，本发明涉及的食品组合物可以制成乳制品、营养补充剂、点心、饮料、保健饮料、调味剂、加工食品、配菜、汤等任意形态。更具体而言，本发明的组合物可以制成流食、半流食、啫喱、凝胶、粉末、配方奶粉、配方液态奶、孕产妇/哺乳期妇女用奶粉/液态奶、发酵乳、棒、慕斯、巧克力、饼干、冰淇淋、发酵乳、乳酸菌饮料、乳性饮料、乳饮料、清凉饮料、片状物、乳酪、面包、饼干、薄脆饼干、比萨饼皮、病人食品、营养食品、冷冻食品、加工食品等形态，另外也可以制成用于混合在饮料、食品中给予的颗粒、粉末、糊剂、浓缩液等形态。颗粒、粉末可以制成立方体或棒状(单次剂量份的小包装)。关于本发明，配方奶粉如日本的“关于乳及乳制品的成分标准等的省令(以下简称为“乳等省令”。)”中所定义的那样，是指将鲜奶、牛奶、特殊牛奶或鲜水牛奶或以它们为原料制造而成的食品进行加工或者作为主要原料，向其中添加婴幼儿所需的营养素而制成的粉末状产品。关于本发明，配方液态奶如乳等省令中所定义的那样，是指将鲜奶、牛奶、特殊牛奶或鲜水牛奶或以它们为原料制造而成的食品进行加工或者作为主要原料，向其中添加婴幼儿所需的营养素而制成的液态产品。

配方奶粉或配方液态奶(有时将它们统称为配方奶粉类。另外在配方奶粉类的说明中，有时以配方奶粉为例进行说明，但该说明也适用于配方液态奶)可以为婴儿用、较大婴儿用(断奶辅食补充用)、低出生体重婴儿用、儿童用、成人用、孕产妇用、哺乳期妇女用、老年人用、过敏人群用、乳糖不耐受人群用、先天性代谢异常人群用。配方奶粉类的优选例子为婴儿用、较大婴儿用、低出生体重婴儿用、儿童用奶粉。

本发明的药物组合物可以制成适合于经口给予的片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂等固体制剂；液剂、悬浮剂、糖浆剂等液体制剂；凝胶剂、气雾剂等任意剂型。

(其他)

本发明的组合物的制造中，配混有效成分的阶段可以适当选择。只要不显著损害有效成分的特性，则配混的阶段没有特别限制。例如可以在原材料中混合有效成分并进行配混。或者，可以通过在制造的最后阶段添加有效成分来制造包含有效成分的组合物。

本发明的组合物可以标示使用目的(用途)，另外可以标示推荐对特定对象进行给予的内容。

本发明的组合物可以标示出：通过组合物或有效成分，可以控制肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖、可以促进肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖、可以处置可通过肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖控制(优选为增殖促进)而改善的疾病或状态、可用作益生元、可用作合生元(益生菌与益生元的组合物)、或可处置相关疾病的意思、可处置冠状病毒感染症等呼吸系统感染症的意思。标示可以为直接标示或间接标示，直接标示的例子为在产品本身、包装、容器、标签、标牌等实体物上的记载，间接标示的例子包括利用网站、店铺、宣传册、展览会、媒体研讨会等研讨会、书籍、报纸、杂志、电视、广播、邮寄物、电子邮件、音频等场所或手段进行的广告/宣传活动。

以下使用实施例对本发明进一步进行具体说明。但本发明的保护范围不限于这些实施例。

【实施例】

[糖溶液调制]

将2’-FL(Jennewein Biotechnologie GmbH.)、3’-SL(Carbosynth)、6’-SL(东京化成工业#S0886)、乳糖(富士胶片和光纯药株式会社、#128-00095)和Neu5Ac(富士胶片和光纯药株式会社、#011-26173)以成为10质量％的方式溶解于灭菌水后，利用0.22μm的过滤器(Merck Millipore、#0369)进行灭菌。

[人粪便培养系统中的人乳低聚糖对肠道菌群的影响]

将8名健康成人提供的粪便冷冻液在37℃的水浴中解冻。将各粪便融化液70μL添加到7mL的用于GAM糖分解的半流动培养基(Nissui#05460)中，在37℃、厌氧条件下培养24小时。将各粪便培养液向96孔深孔板(deepwell plate)的共6个孔中各分装900μL。向6个孔中添加各个糖溶液(5种)或灭菌水各100μL(糖溶液的终浓度为1质量％)。在37℃、厌氧条件下培养24小时后，利用Maxwell(公司名：Promega)提取DNA，进行利用MiSeq(公司名：Illumina)的V3-V4区域的扩增子测序。将得到的.fastq文件利用QIIME2(https://qiime2.org/)进行分析，算出各肠道细菌的占有率。

将结果示于图1。与作为对照的灭菌水组相比，2’-FL、3’-SL、6’-SL、乳糖和Neu5Ac给予组中，柯林斯菌属细菌的占有率显著增加或有增加倾向。该结果表明，2’-FL、3’-SL、6’-SL、乳糖和Neu5Ac可促进人的肠道内的柯林斯菌属细菌的增殖。需要说明的是，全部粪便融化液中都检测到双歧杆菌属细菌。

本实施例中对于乳糖确认到柯林斯菌属细菌的增殖促进效果。认为HMO包含乳糖作为构成糖、另外HMO被摄取后在人的消化道内生成乳糖(非专利文献6)。由此认为，若为HMO，则可得到柯林斯菌属细菌增殖促进效果。

本实施例中，对于Neu5Ac确认到柯林斯菌属细菌增殖促进效果。认为包含Neu5Ac作为构成糖的HMO在被摄取后在人的消化道内生成Neu5Ac(非专利文献6～8)。由此认为，以Neu5Ac为构成糖的HMO(唾液酸化HMO、含有唾液酸的HMO)可得到柯林斯菌属细菌增殖促进效果。

本实施例中，对于2’-FL、3’-SL、6’-SL均确认到柯林斯菌属细菌增殖促进效果。由此认为，若为岩藻糖基化HMO、另外若为唾液酸化HMO，则可得到柯林斯菌属细菌增殖促进效果。

[实施例中引用的论文]

非专利文献6：Masi AC,Stewart CJ.Untangling human milk oligosaccharidesand infant gut microbiome.iScience.2021；25(1):103542.Published 2021Dec 1.doi:10.1016/j.isci.2021.103542

非专利文献7：Nishiyama K,Yamamoto Y,Sugiyama M,et al.Bifidobacteriumbifidum Extracellular Sialidase Enhances Adhesion to the Mucosal Surface andSupports Carbohydrate Assimilation.mBio.2017；8(5):e00928-17.Published 2017Oct3.doi:10.1128/mBio.00928-17

非专利文献8：Kiyohara M,Tanigawa K,Chaiwangsri T,Katayama T,Ashida H,Yamamoto K.An exo-alpha-sialidase from bifidobacteria involved in thedegradation of sialyloligosaccharides in human milk and intestinal glycoconjugates.Glycobiology.2011；21(4):437-447.doi:10.1093/glycob/cwq175

Claims (10)

1.一种肠道内的菌群中的柯林斯菌(Collinsella)属细菌的增殖控制用组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。

2.根据权利要求1所述的组合物，其包含选自由以岩藻糖基化人乳低聚糖、唾液酸化人乳低聚糖、以乳糖为构成糖的人乳低聚糖、以唾液酸为构成糖的人乳低聚糖、乳糖和唾液酸组成的组中的任意者。

3.根据权利要求2所述的组合物，其包含选自由2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳糖和N-乙酰神经氨酸组成的组中的任意者。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其用于作为益生元或合生元而使用。

5.一种用于通过肠道内的柯林斯属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态的处置的组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中，通过肠道内的柯林斯属细菌的增殖控制来改善的疾病或状态为呼吸系统感染症。

7.一种用于呼吸系统感染症的处置的组合物，其包含选自由人乳低聚糖和人乳低聚糖的构成糖组成的组中的任意者。

8.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，呼吸系统感染症为冠状病毒感染症。

9.根据权利要求6或7所述的组合物，其中，呼吸系统感染症为新型冠状病毒感染症，即，COVID-19。

10.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中，增殖控制为增殖促进。