CN118879848A

CN118879848A - 一种用于糖尿病视网膜病变诊断的生物标志物、检测试剂盒及其应用

Info

Publication number: CN118879848A
Application number: CN202410887662.9A
Authority: CN
Inventors: 颜标; 姚进; 张荟颖; 张秋阳; 刘青; 王逢圣; 祝悦
Original assignee: Eye Hospital Nanjing Medical University; Shanghai First Peoples Hospital
Current assignee: Eye Hospital Nanjing Medical University; Shanghai First Peoples Hospital
Priority date: 2024-07-03
Filing date: 2024-07-03
Publication date: 2024-11-01
Anticipated expiration: 2044-07-03
Also published as: CN118879848B

Abstract

本发明涉及生物医疗领域，尤其涉及一种用于糖尿病视网膜病变(DR)诊断的生物标志物、检测试剂盒及其应用。本发明提出了一种创新性解决方案，利用生物标志物TFF2对DR进行诊断和辅助诊断。本发明通过检测患者房水样本中TFF2的表达水平，验证了其在DR诊断中的有效性。研究数据显示，TFF2作为DR诊断指标的ROC曲线AUC值高达0.9122，表明其具有极高的灵敏度、特异性和准确性。这一结果显著提升了DR早期诊断的可靠性和精确度。此外，本发明研究发现TFF2通过促进视网膜血管内皮细胞的增殖、迁移、成管、出芽以及增加内皮细胞通透性等过程，显著促进了新生血管的形成，从而加剧了DR的进展。因此，本发明不仅提出了一种高效、精准的DR诊断方法，还为未来DR的治疗策略提供了重要的理论支持和实践指导。

Description

一种用于糖尿病视网膜病变诊断的生物标志物、检测试剂盒及其应用

技术领域

本发明涉及生物医疗领域，尤其涉及一种用于糖尿病视网膜病变诊断的生物标志物、检测试剂盒及其应用。

背景技术

糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy，DR)是糖尿病最常见和严重的微血管并发症之一，是导致糖尿病患者视力下降的主要原因。随着糖尿病发病率的增长，DR的发病率正在迅速上升，预计到2045年全球糖尿病患者人数将达到7亿。血糖的异常升高导致视网膜微血管损害，造成视网膜出血、渗出、黄斑水肿、玻璃体积血，视网膜脱离等一系列眼底表现。目前临床上常用影像学方法(如广角视网膜成像、光学相干断层扫描等)来筛查和诊断DR。然而，由于DR在病变前期存在一定隐匿性，临床症状在眼底图像上往往难以察觉，导致很多患者就医时病情已到中晚期，视力已受到了不可逆地损害。目前，糖尿病视网膜病变的治疗方式主要是激光、药物和手术三大类。此类治疗主要针对已有视力损伤、眼底增殖性血管病变的晚期患者，起到延缓疾病进展的作用。然而，对于恢复DR患者视觉质量的效果有限，并且存在有创性操作、疗效不佳和费用高昂等问题。因此，针对糖尿病视网膜病变的诊断和干预，找到灵敏且应用方便的检测标记物，具有十分重要的临床意义。

分泌蛋白是指在细胞内合成后分泌到细胞外起作用的蛋白质，主要包括细胞因子、生长因子、补体、降解酶类、抗体、肽类激素和免疫球蛋白等具有重要生理功能的蛋白质。在各种疾病发生过程中，疾病相关细胞会分泌出诸如细胞因子和蛋白水解酶等多种蛋白质，参与调控疾病的发生发展。房水属于眼内液，处于动态循环中，其成分与眼部的局部生理及病理环境密切相关。房水比血液更能反映眼内微环境的变化，对房水中分泌蛋白的表达进行检测可以反映疾病的状态。

三叶因子家族(Trefoil Factor Family，TFF)是一类含有一个或几个三叶因子结构域的小分子多肽，又称三叶肽(Trefoil Peptide)。TFF2是TFF家族的一员，是一种具有耐酸、耐热和抗蛋白酶水解作用的分泌蛋白。目前的报道显示，在肿瘤浸润和已出现淋巴结和血行转移的患者中，TFF2的表达明显增加。持续分泌的TFF2通过介导癌基因和抑癌基因的改变，影响肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等病理进程。但TFF2在糖尿病视网膜病变中的作用尚未得到广泛探索。

发明内容

鉴于此，本发明提出了一种诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的生物标志物TFF2。所述生物标志物在糖尿病视网膜病变患者房水中的表达水平高于非糖尿病视网膜病变患者，差异具有统计学意义。采用TFF2的表达水平检测糖尿病视网膜病变时，其ROC曲线的AUC值为0.9122，诊断值为864.534pg/mL。由此可知，TFF2作为DR的诊断标志物，具有较高的诊断灵敏度、特异性和准确性。检测样本中TFF2可早期发现DR并采取相应的治疗措施，可以有效延缓疾病的进展，减少并发症的发生。

在体外细胞实验中，本发明发现TFF2可促进视网膜血管内皮细胞增殖、迁移、成管及出芽，从而加速新生血管的形成；TFF2还通过影响内皮细胞通透性，增加视网膜新生血管的渗透性，加剧疾病进展。因此，TFF2可能成为DR治疗的潜在靶点。通过干预TFF2的表达，有望拮抗内皮细胞的促血管生成相关表型，从而延缓DR的发生发展。

本发明的技术方案是这样实现的：

第一方面，本发明提供了一种检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的产品中的应用，所述生物标志物为TFF2。

在一些优选的实施例中，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、蛋白免疫技术、色谱技术、质谱技术检测所述生物标志物水平的试剂。

在一些优选的实施例中，所述试剂包括如下中的一种或多种：(1)特异性识别所述生物标志物的探针；(2)特异性扩增所述生物标志物的引物；(3)特异性结合所述生物标志物编码的蛋白的结合剂。

进一步地，在一些优选的实施例中，所述样本为房水。

房水是前房中的无色透明的液体，可为眼内组织提供营养和氧气、排出代谢产物以及维持眼压。由于房水直接与眼内组织接触，能够直接反映眼内微环境的变化，更好地揭示眼部病变情况。此外，正常情况下房水的成分相对稳定，不容易受到外界因素的干扰，检测结果的准确性高。

在一些优选的实施例中，所述试剂盒包括qPCR试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒、免疫组化检测试剂盒、ELISA试剂盒和电化学发光检测试剂盒中的一种或多种。

在一些优选的实施例中，所述试剂盒选自ELISA试剂盒，组分包括：辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体、标准品、显色液和终止液。

更进一步地，在一些优选的实施例中，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。

在一些优选的实施例中，所述诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的步骤包括：S1采集待测患者的房水样本；S2检测房水样本中的生物标志物的蛋白表达量，若蛋白表达量高于864.534pg/mL，则待测患者为糖尿病视网膜病变。

第二方面，本发明提供了检测样本中生物标志物的试剂在制备预后评估糖尿病视网膜病变的产品中的应用，所述生物标志物为TFF2，根据所述生物标志物的蛋白表达水平的变化，对糖尿病视网膜病变的预后进行评估，所述样本为房水。

第三方面，本发明还提供了TFF2抑制剂在制备治疗和预防糖尿病视网膜病变药物中的应用，其特征在于，所述治疗和预防糖尿病视网膜病变药物用于抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管、出芽、通透性增加中的一种或多种病理行为，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为糖尿病视网膜病变患者和非糖尿病视网膜病变患者房水中ELISA检测的结果；横坐标代表不同患者房水标本，纵坐标代表TFF2的相对表达水平；

图2为TFF2在糖尿病视网膜病变诊断中的ROC分析结果；

图3为糖尿病视网膜病变患者治疗前后房水中ELISA检测的结果；横坐标代表不同患者房水标本，纵坐标代表TFF2的相对表达水平；

图4为EdU增殖实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞增殖能力的影响；

图5为Transwell细胞迁移实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞迁移能力的影响；

图6为基质胶成管实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞管形成能力的影响；

图7为3D内皮细胞球体出芽实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞出芽能力的影响；

图8为EB-Transwell实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞通透性的影响。

具体实施方式

为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。本申请中未详细单独说明的试剂均为常规试剂，均可从商业途径获得；未详细特别说明的方法均为常规实验方法，可从现有技术中获知。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。

实施例1TFF2作为糖尿病视网膜病变诊断的生物标志物的应用

在本实施例中，分别采集了30例糖尿病视网膜病变患者和30例非糖尿病视网膜病变患者的房水样本，采用ELISA试剂盒对房水样本的TFF2表达水平进行检测。然后对TFF2在糖尿病视网膜病变患者和与非糖尿病视网膜病变患者房水中的表达差异进行统计学分析。此外，本发明还通过GraphPad Prism 9.0分别绘制单一ROC曲线，分析TFF2蛋白用于糖尿病视网膜病变诊断的特异性、准确性和灵敏度。具体如下：

1.1实验材料

TFF2蛋白的96孔酶标板(8行×12列)购于江苏酶免实业有限公司；TFF2 ELISA试剂盒购于江苏酶免实业有限公司(CatNo：MM-61899H1)，其试剂组分如下表所示：

1.2实验步骤

(1)采集房水样本

收集30例糖尿病视网膜病变患者的房水，同时收集30例非糖尿病视网膜病变患者的房水(对照组)。其中，30例糖尿病视网膜病变患者房水来源于经影像学确诊的患者；30例非糖尿病视网膜病变患者房水来源于无任何眼底病变的患者。采集的房水置于1.5mL的EP管中，在EP管的顶部和侧面均标记样本编号，放于-80℃冰箱进行冷冻保存，记录采集日期以及储存位置。在使用之前，取出房水放于4℃冰箱解冻并分装，避免反复冻融。

(2)ELISA检测TFF2蛋白含量

A)设置标准孔品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

B)样本孔先加待测样本10μL加入样本孔，再加样本稀释液40μL。

C)每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住D)反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

E)弃去液体，吸水纸拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。

F)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

G)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

(3)统计分析

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本TFF2的浓度值。通过t检验法分析糖尿病视网膜病变组和非糖尿病视网膜病变组的TFF2蛋白水平是否具有显著差异。检测结果如图1所示。

(4)ROC曲线分析

采用GraphPad Prism 9.0绘制ROC曲线，分析TFF2蛋白用于糖尿病视网膜病变诊断的价值。基于30例糖尿病视网膜病变患者和30例非糖尿病视网膜病变患者房水样本中TFF2蛋白的表达水平，绘制ROC曲线，通过ROC曲线来评估TFF2诊断区分糖尿病视网膜病变和非糖尿病视网膜病变患者的能力。

根据TFF2蛋白诊断区分糖尿病视网膜病变和非糖尿病视网膜病变患者的ROC曲线，以约登指数最大的OD值为截断值(即诊断值)，同时计算相应的AUC以及95％置信区间、灵敏度和特异度。检测结果如图2所示。

1.3结果分析

(1)如图1所示，收集糖尿病视网膜病变和非糖尿病视网膜病变患者房水，采用ELISA检测TFF2的蛋白水平差异，结果表明，与非糖尿病视网膜病变患者相比，糖尿病视网膜病变患者房水中TFF2蛋白水平明显升高，说明TFF2的表达水平与糖尿病视网膜病变有紧密连锁，可作为糖尿病视网膜病变诊断的生物标志物。

(2)如图2所示，采用TFF2进行糖尿病视网膜病变诊断时，诊断值为864.534pg/mL，其ROC曲线的AUC值为0.9122。结果表明，人体房水中TFF2的表达水平在用于糖尿病视网膜病变的诊断中，具有非常高的特异性、准确性和灵敏性。

实施例2TFF2作为糖尿病视网膜病变预后评估的生物标志物的应用

本实施例中，采集了20例糖尿病视网膜病变患者治疗前和治疗后的房水，采用ELISA试剂盒对房水样本的TFF2表达水平进行检测。然后对TFF2在糖尿病视网膜病变患者房水中治疗前后的表达差异进行统计学分析。

2.1实验材料

本实施例的实验材料同实施例1中实验材料1.1。

2.2实验步骤

(1)采集房水样本

收集20例糖尿病视网膜病变患者治疗前和治疗后的房水，采集的房水置于1.5mL的EP管中，在EP管的顶部和侧面均标记样本编号，放于-80℃冰箱进行冷冻保存，记录采集日期以及储存位置。在使用之前，取出房水放于4℃冰箱解冻并分装，避免反复冻融。

(2)ELISA检测TFF2蛋白含量

D)弃去液体，吸水纸拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。

E)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

F)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

(3)统计分析

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本TFF2的浓度值。通过t检验法分析糖尿病视网膜病变患者治疗前后房水中的TFF2蛋白水平是否具有显著差异。检测结果如图3所示。

2.3结果分析

与治疗前相比，如图3所示，糖尿病视网膜病变患者治疗后房水中TFF2蛋白水平下降。说明TFF2蛋白有望成为评估糖尿病视网膜病变患者预后情况的生物标志物。

实施例3研究TFF2在糖尿病视网膜病变中的作用机制

实验材料

视网膜血管内皮细胞(HRVECs)购于美国ATCC细胞库，DMEM培基(CatNo：C11995)购于美国Gibco生物技术公司；胎牛血清(CatNo：FBS500-s)购于澳大利亚AusGeneX公司；重组TFF2蛋白(CatNO：HY-P71929A)购于美国MCE公司；胰蛋白酶-EDTA(CatNo：25200114)购于美国Thermo Fisher科技公司；BeyoClick^TMEdU-488细胞增殖检测试剂盒(CatNo：C0075S)购于中国碧云天生物科技有限公司；结晶紫(CatNo：C805211)购于上海麦克林生化科技有限公司；Matrigel Matrix Basement Membrance(CatNo：356234)购于美国康宁公司；羧甲基纤维素(CatNo：419273)购于美国Sigma生物科技公司。I型鼠尾胶原(CatNo：354236)购于美国康宁公司；Evans Blue(CatNo：K29136)购于北京克尔慧。

(一)EdU细胞增殖实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞增殖的作用

(1)实验步骤

A)将HRVECs接种于24孔板内，待细胞融合度达到约60％时，处理组使用TFF2重组蛋白液刺激培养48h，对照组则未采取任何处理措施；

B)弃去旧培养基，用PBS缓冲液洗两次，将5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)工作液(EdU原液：完全培养基＝1:1000)以1mL/孔体积加入24孔板中，孵育2-4h；

C)孵育结束后，弃去EdU工作液，每孔加入1mL 4％多聚甲醛，室温固定15min；

D)弃去多聚甲醛，每孔加入500μL洗涤液(含3％BSA的PBS)，洗3次，每次3-5min；

E)弃去洗涤液，每孔加入500μL通透液(含0.3％Triton X-100的PBS)，室温孵育10-15min；

F)弃去通透液，每孔加入500μL洗涤液洗1-2次，每次3-5min；

G)弃去洗涤液，根据制造商说明配置Click反应液，每孔加入200μL Click反应液，室温避光孵育30min；

H)弃去反应液，每孔加入500μL洗涤液洗1-2次，每次3-5min；

I)弃去洗涤液，每孔加入200μL DAPI，室温避光孵育10min；

J)弃去DAPI染液，每孔加入500mLPBST洗3次，每次3-5min。

K)使用荧光显微镜进行观察记录。

(2)实验结果

如图4所示，TFF2处理后，处理组细胞增殖率比对照组高。TFF2具有促进HRVECs增殖的作用。

(二)Transwell细胞迁移实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞迁移的作用

(1)实验步骤

B)制备0.2％结晶紫溶液：称取0.08g结晶紫粉末溶于40mLPBS中，摇床过夜，滤纸过滤2次后用于染色；

C)收集处理后的HRVECs，重悬于不含胎牛血清(FBS)的DMEM中，调整细胞密度至1×10⁵个/mL；

D)向24孔板下室加入500μL含10％FBS的DMEM完全培养基，选择孔径8.0μm小室置于24孔板内，去除小室与液体间气泡，向上室加入200μL细胞悬液，注意避免产生气泡；

E)CO₂培养箱中继续培养24h，用棉签轻轻擦除上室未迁移的细胞；

F)向24孔板干净的孔内加入500μL 4％多聚甲醛，将小室放入其中固定15min，取出小室倒置于桌面上，风干20min；

G)弃去固定液，加入500μL 0.2％结晶紫溶液，染色5min；

H)弃去结晶紫，加入500μLPBS，洗3次，每次2min；

I)用棉签轻轻擦拭上室，去除上室中未穿过的结晶紫，利用倒置显微镜进行观察记录。

(2)实验结果

如图5所示，TFF2处理后，处理组细胞迁移数目比对照组高。TFF2具有促进HRVECs迁移的作用。

(三)基质胶成管实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞成管的作用

(1)实验步骤

B)将分装后的Matrigel Matrix从-20℃取出，放入4℃碎冰中融化，24孔板及枪头-20℃预冷；

C)取出4℃冰箱中基质胶、24孔板、枪头放在超净台碎冰上，冷PBS润洗24孔板，每孔加入50μL基质胶Matrigel Matrix，避免产生气泡，37℃孵育30min；

D)收集处理后的HRVECs,调整细胞密度至8×10⁴个/mL；

E)向预涂基质胶的24孔板中加入1mL细胞悬液，37℃孵育4h，倒置显微镜观察记录。

(2)实验结果

如图6所示，TFF2处理后，处理组细胞管成形的能力比对照组强。TFF2具有促进HRVECs成管的作用。

(四)3D内皮细胞球体出芽实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞出芽的作用

(1)实验步骤

B)制备甲基纤维素原液：称取3g甲基纤维素加入500mL培养瓶中，并加入干净的磁力搅拌转子，121℃高压灭菌20min，随后加入250mL预热至60℃的DMEM，室温搅拌20min，4℃摇床过夜，5000rpm离心30min后取上层液用于细胞球培养；

C)收集处理后的HRVECs,调整细胞密度至2×10⁴个/mL,将细胞悬液与甲基纤维素原液混匀(混合比例4：1)，以25μL/滴接种于培养皿盖上，注意避免产生气泡；

D)CO₂培养箱中倒置孵育24h，使用移液管吸取10mL PBS轻轻洗去悬挂的球体，将液体转移至15mL离心管中，800rpm离心3min沉淀细胞球体，弃去上层液，加入2mL含20％FBS的甲基纤维素原液以及2mL胶原蛋白原液，小心混匀避免产生气泡；

E)将细胞球体混合液以1mL/孔体积加入24孔板中，CO₂培养箱孵育30min促进胶原蛋白聚合。

F)待胶原蛋白聚合后，向每孔中加入200μL的DMEM，继续孵育24h。

(2)实验结果

如图7所示，TFF2处理后，处理组细胞出芽的能力比对照组强。TFF2具有促进HRVECs出芽的作用。

(五)Evans Blue-Transwell实验检测TFF2对视网膜血管内皮细胞通透性的作用

(1)实验步骤

A)提前准备4％牛血清白蛋白(BSA)溶液和2％伊文斯蓝(EB)溶液。

B)将HRVECs接种于24孔板内，待细胞融合度达到约60％时，处理组使用TFF2重组蛋白液刺激培养48h，对照组则未采取任何处理措施；

C)收集处理后的HRVECs,将0.4μm孔径的Transwell小室架在24孔板上，上室加入100μL细胞悬液培养，下室中加入600μL10％FBS；

D)8h后，除去小室中的液体，将100μL的EBA溶液添加到上室，将600μL的4％BSA溶液添加到下室；

E)在黑暗中孵育1h后，取出小室。使用酶标仪在595nm波长处检测下室中溶液的OD值。

(2)实验结果

如图8所示，TFF2处理后，处理组细胞通透性较对照组升高。TFF2具有促进HRVECs通透性的作用。

综上所述，在体外细胞实验中，TFF2通过调节促进视网膜血管内皮细胞增殖、迁移、成管及出芽的能力，从而促进新生血管的形成；TFF2还通过增加内皮细胞通透性，加剧视网膜病变的进展。因此，TFF2可能成为DR治疗的潜在靶点。通过干预TFF2的表达，有望拮抗内皮细胞的促血管生成相关表型，从而延缓DR的发生发展。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为TFF2。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、蛋白免疫技术、色谱技术、质谱技术检测所述生物标志物水平的试剂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括如下中的一种或多种：(1)特异性识别所述生物标志物的探针；(2)特异性扩增所述生物标志物的引物；(3)特异性结合所述生物标志物编码的蛋白的结合剂。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述样本采集自房水。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括qPCR试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒、免疫组化检测试剂盒、ELISA试剂盒和电化学发光检测试剂盒中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒选自ELISA试剂盒，组分包括：辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体、标准品、显色液和终止液。

7.根据权利要求1-3、5-6中任一项所述的应用，其特征在于，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。

8.根据权利要求1-3、5-6中任一项所述的应用，其特征在于，所述诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的步骤包括：S1采集待测患者的房水样本；S2检测房水样本中的生物标志物的蛋白表达量，若蛋白表达量高于864.534pg/mL，则待测患者为糖尿病视网膜病变。

9.检测样本中生物标志物的试剂在制备预后评估糖尿病视网膜病变的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为TFF2，根据所述生物标志物的蛋白表达水平的变化，对糖尿病视网膜病变的预后进行评估，所述样本为房水。

10.TFF2抑制剂在制备治疗和预防糖尿病视网膜病变药物中的应用，其特征在于，所述治疗和预防糖尿病视网膜病变药物用于抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管、出芽、通透性增加中的一种或多种病理行为，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。