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CN118813439B - 一株小菜蛾肠杆菌PxGF1及其应用 - Google Patents

一株小菜蛾肠杆菌PxGF1及其应用

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CN118813439B
CN118813439B CN202410170556.9A CN202410170556A CN118813439B CN 118813439 B CN118813439 B CN 118813439B CN 202410170556 A CN202410170556 A CN 202410170556A CN 118813439 B CN118813439 B CN 118813439B
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plutella xylostella
pxgf1
enterobacter
strain
cry1ac
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廖文宇
朱江玥
莫赟飞
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Hunan Agricultural University
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Abstract

本发明属于农业害虫治理领域，涉及一株小菜蛾肠杆菌PxGF1及其应用，其分类命名为肠杆菌（Enterobacter asburiae）PxGF1，该菌株已于2023年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2023056，保藏地址武汉市武汉大学。实验证明本发明的菌株PxGF1可以提高Cry1Ac毒杀小菜蛾效率。同时，相较于仅使用Cry1Ac原毒素饲喂小菜蛾，试虫的化蛹率、蛹重都显著降低，肠组织已被严重破坏，无法观察到完整的肠道上皮细胞，这说明PxGF1促进了Cry1Ac对小菜蛾杀伤能力。

Description

一株小菜蛾肠杆菌PxGF1及其应用
技术领域
本发明属于农业害虫治理领域，涉及一株小菜蛾肠杆菌PxGF1及其应用。
背景技术
小菜蛾Plutella xylostella(L)是为害十字花科作物最为严重的虫害之一，通常造成甘蓝、西兰花和花菜等多种重要蔬菜严重的经济损失。小菜蛾对防治鳞翅目害虫的大部分化学杀虫剂及微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌B.thuringiensis(Bt)均产生了严重的抗药性，其防治越来越困难。
现有技术CN112175861B公开了一株小菜蛾蒙氏肠球菌Enterococcus mundtiiPxG1菌株及其应用，所述菌株于2020年06月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，菌种保藏号为GDMCC No：61067。该发明研究表明，饲喂Enterococcus mundtiiPxG1菌株的小菜蛾，羽化率显著降低；同时表明Enterococcus mundtii PxG1菌株具有提高Bt毒素杀虫活性、增效Cry1A原毒素快速致死小菜蛾的作用，Enterococcus mundtii PxG1菌株可以作为新型生物防治的细菌，用于十字花科蔬菜害虫的防控，具有很好的生物防治潜力和应用前景。但其原理是在清除小菜蛾余肠道微生物后，添加了Cry1Ac毒素，从而验证出PxG1具有加快Cry1Ac原毒素致死小菜蛾幼虫的作用，该技术应用时在一定程度上会受到户外环境或小菜蛾肠道中其余微生物的影响。
发明内容
本发明的目的在于提供一株小菜蛾肠杆菌PxGF1及其应用，以进一步提高小菜蛾对Bt蛋白的敏感性。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
一株小菜蛾肠杆菌PxGF1，其分类命名为肠杆菌(Enterobacter asburiae)PxGF1，该菌株已于2023年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2023056，保藏地址武汉市武汉大学。
具体地，所述菌株的16s rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
所述小菜蛾肠杆菌PxGF1是从小菜蛾田间种群DBM-F肠道中分离纯化得到。该菌株PxGF1菌落呈圆形，淡黄色，有凸起，边缘平整，表面光滑。
进一步的，本发明还要求保护所述小菜蛾肠杆菌PxGF1在提高Bt蛋白杀虫活性中的应用。
在其中一个优选的实施例中，所述小菜蛾肠杆菌PxGF1在提高Bt蛋白杀小菜蛾活性中的应用。
进一步的，本发明还要求保护所述小菜蛾肠杆菌PxGF1在防治十字花科蔬菜害虫中的应用。
在其中一个优选的实施例中，所述十字花科蔬菜害虫为小菜蛾。
本发明还提供一种用于防治十字花科蔬菜害虫的方法，是将所述小菜蛾肠杆菌PxGF1与Bt蛋白混合共同饲喂害虫。
本发明还提供所述小菜蛾肠杆菌PxGF1在制备防治十字花科蔬菜害虫的药剂中的应用。
本发明还提供一种用于防治十字花科蔬菜害虫的药剂，所述药剂包含所述小菜蛾肠杆菌PxGF1和Bt蛋白，利用PxGF1菌株对Bt蛋白原毒素的增效作用提高对害虫的致死率。
在其中一个优选的实施例中，所述Bt蛋白为Cry1Ac原毒素。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
实验证明，同时添加本发明的菌株PxGF1与Cry1Ac毒素喂养小菜蛾时，小菜蛾在48小时死亡率急剧上升，约为37.78％，72小时死亡率达到最高，约为95.55％。本发明的菌株PxGF1可以提高Cry1Ac毒杀小菜蛾效率。同时，相较于仅使用Cry1Ac原毒素饲喂小菜蛾，试虫的化蛹率、蛹重都显著降低，肠组织已被严重破坏，无法观察到完整的肠道上皮细胞，这说明PxGF1促进了Cry1Ac对小菜蛾杀伤能力。
附图说明
图1为小菜蛾各组间肠道微生物丰度柱状结果；
图2为小菜蛾各组间肠道微生物丰度热图；
图3为5种菌株的菌落形态；
图4为肠杆菌Enterobacter asburiae PxGF1的基因树；
图5为处理的小菜蛾的死亡率；
图6为处理的小菜蛾的蛹重；
图7为处理的小菜蛾的化蛹率；
图8为处理的小菜蛾的肠道组织。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
实施例1
首先随机切取小菜蛾Cry1Ac敏感品系(DBM1Ac-S)、Cry1Ac抗性品系(DBM1Ac-R)、田间种群F(F-CK)以及Cry1Ac毒素处理田间种群(F-Cry1Ac)3龄幼虫置于冰上5min后用75％无水乙醇浸泡20s，用灭菌水冲洗虫体表面两次，分别解剖取出肠道放在PBS缓冲溶液中保持细胞活性，全部小菜蛾解剖完后的肠道放入提前灭菌除RNA酶的1.5mL离心管中，密封管盖放于液氮中迅速冷冻，随后置于-80℃冰柜中冻存，备用。每个种群10个重复，将组织片段交至上海生工基于Miseq2x300bp测序平台进行细菌16s宏基因组测序，扩增区域为细菌16S rRNA基因V3-V4。小菜蛾敏感(DBM1Ac-S)最初于2003年由赵建周研究员和A.M.Shelton教授(Cornell University,USA)赠予中国农科院花卉蔬菜研究所，培养方式参考Tang J.D.,Gilboa S.,Roush R.T.,etal.Inheritance,stability,and lack-of-fitness costs of field-selected resistance to Bacillus thuringiensis indiamondback moth(Lepidoptera:Plutellidae)from Florida[J].Journal of EconomicEntomology,1997.90(3):732–741，至今从未使用过任何杀虫剂。于本实验室饲养期间一直使用实验室自培养的萝卜苗或自栽培的甘蓝叶片饲喂，未接触任何杀虫剂。抗性(DBM1Ac-R)采自美国佛罗里达州克萨哈奇地区(Loxahatchee,Florida,USA)。由于此片甘蓝栽植区域经常大剂量地使用Bt制剂，导致该种群对Bt产生大约1600倍抗性，该小菜蛾品系由赵建新研究员和A.M.Shelton教授于2003年惠赠于中国农科院蔬菜花卉研究所培养至今。培养方式参考Shelton A.M.,Robertson J.L.,Tang J.D.,et al.Resistance of diamondbackmoth(Lepidoptera:Plutellidae)to Bacillus thuringiensis subspecies in thefield[J].Journal of Economic Entomology,1993.86(3):697–705。该品系从中国农科院受赠所得，于本实验室持续汰选饲养，并维持其对敏感种群3000倍的抗性倍数。田间种群F(F-CK)于2019年采自湖南常德田间甘蓝地，该甘蓝地常年喷洒多种化学或生物农药，在实验室内以萝卜苗及甘蓝饲育。Cry1Ac毒素处理田间种群(F-Cry1Ac)的构建方法为：参照浸叶法，将洗净的甘蓝叶片裁成直径为8.5cm左右的圆形，用Cry1Ac溶液(10μg/mL)双面浸泡各10～20s，置于保鲜膜上室温晾干；将直径为6cm的滤纸，用水轻微润湿，上面再垫一层干的滤纸，防止湿度过大，连同上述晾干后的叶片，装入新培养皿中，每个皿中接入小菜蛾3龄幼虫10头，用2层卫生纸交叉折叠，堵住培养皿上下盖的缝隙，防止小菜蛾逃跑；于25±2℃，相对湿度50％，自然光周期下饲养；每个处理(F-CK/F-Cry1Ac)5个生物学重复。处理30h后，挑取剩下的活虫进行实验。测序后得出小菜蛾各组间肠道微生物丰度柱状结果和小菜蛾各组间肠道微生物丰度热图分别如图1和图2所示。
从测序结果中，发现小菜蛾敏感(DBM1Ac-S)、抗性(DBM1Ac-R)、田间种群F(F-CK)与Cry1Ac毒素处理田间种群(F-Cry1Ac)在肠杆菌科中存在显著差异。F-CK种群中的优势种群为Burkholderia sp.伯克氏菌属、Phenylobacterium sp.苯基杆菌属、Streptophytasp.菌属；F-Cry1Ac中的优势种群为unclssified_Enterobacteriaceae未分类的肠杆菌科、Klebsiella sp.克雷伯菌属、Streptophyta sp.菌属、Enterococcus sp.肠球菌属。F-CK与F-Cry1Ac相比，毒素处理之后的F-Cry1Ac种群未分类的肠杆菌科unclassified_Enterobacteriaceae丰度显著上升。推测肠杆菌科的某些细菌可能参与了Cry1Ac的杀虫过程。DBM1Ac-S和DBM1Ac-R的优势微生物群落高度单一，为Klebsiellasp.克雷伯菌属。说明实验室种群由于长期地生活在养虫室内，稳定的外部环境与食物结构，使中肠内的微生物群落组成趋于固定。DBM1Ac-S和DBM1Ac-R中肠肠道微生物虽然优势种群同为克雷伯菌属Klebsiella sp.，但是DBM1Ac-R种群中的肠球菌属Enterococcus sp.丰度显著高于DBM1Ac-S种群。故接下来从小菜蛾Cry1Ac敏感品系、Cry1Ac抗性品系、田间种群F肠道中进行分离培养目的菌株进行后续实验。
小菜蛾肠道细菌提取过程均在超净工作台中完成，所用器具、耗材及试剂等均已灭菌处理。取小菜蛾Cry1Ac敏感品系、Cry1Ac抗性品系、田间种群健康3龄幼虫各15头，饥饿处理2h；用75％乙醇分别浸泡各组试虫3min，用ddH2O漂洗虫体2次，去除残留乙醇；下一步，一手轻轻抓住小菜蛾的前半截虫体，另一手用镊子夹住小菜蛾最后一节体节后方的臀叉，轻轻连同其肠道扯出，尽量保证其肠道组织结构的完整；取出后的小菜蛾肠道组织放入装有200μL PBS的1.5mL离心管中用研磨棒研磨成无明显组织碎片的匀浆后，PBS补足1mL。
将上述匀浆置于恒温培养箱中37℃静止1h，使肠道微生物尽可能充分地扩散到PBS中。在超净工作台中将静置后的匀浆按10倍梯度连续稀释102、103、104、105倍，每个稀释梯度各取200μL匀浆，重复2次，分别涂布于提前备好的LB、NA固体培养基上，同时设置一个PBS对照组做为阴性对照。待上述平板表面菌液干燥后，倒置于恒温培养箱中培养(35～37℃)24h或至菌落清晰可见。依据细菌形态学特征将不同菌株分别转移至新的固体LB、NA培养基上划线培养，并分别挑取单菌落继续培养、纯化至少3次。挑取纯化后的单菌落于1.5mL离心管中富集培养(30℃，200rpm，12h)。取部分菌液用于后续PCR扩增，其余菌液加入甘油(终浓度40％)后于-20℃条件下密封保存。
以上述菌液为PCR模板进行普通PCR扩增，条件如下：引物16S rDNA通用引物27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；1492R：5’-GGCTACCTTGTTACGACTT-3’。PCR反应体系：Max Master Mix(Dye Plus)12.5μL、ddH2O 10.5μL、F/R 0.5μL、cDNA 1μL。反应条件：98℃预变性10min；98℃10s；55℃30s；72℃2min循环30次，72℃延伸7min；4℃保存。
PCR扩增产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，在凝胶成像系统中观察PCR效果。利用琼脂糖凝胶回收试剂盒E.Z.N.A.Gel Extraction Kit回收纯化目的片段，方法如下：
1、用手术刀片精准地切下包含完整目的条带的胶块，转移至干净的1.5mL离心管中；
2、向上述离心管中加入Binding Buffer(XP2)(每1g上述胶块加入1mLBindingBuffer(XP2))，56℃金属浴10min，期间每隔4～5min取出离心管，振荡混匀，直至含有目的片段的琼脂糖凝胶完全融于Binding Buffer；
3、将第2步获得的混合溶液全部转移至试剂盒中附送的结合柱中，室温12000g离心2min，将下层液体重新倒入回结合柱，12000g，室温再离心2min，弃废液。
4、向结合柱加入300μL Binding Buffer(XP2)，室温12000rpm，离心2min，弃废液；
5、向结合柱加入700μL SPW Wash Buffer(使用前需加入无水乙醇)，室温13000rpm离心1min，弃滤液；
6、上述空的结合柱室温13000rpm离心两次，置于35℃金属浴上开盖风干2min，以完全去除管壁及滤膜上残留的乙醇；
7、将结合柱转移至新的干净的1.5mL离心管中。加入20-30μL(根据目的条带亮度决定)Elution Buffer悬空滴在膜上，室温静置2min，12000g离心2min即为纯化后的DNA，并置于-20℃保存。
利用pClone007 Versatile Simple Vector Kit对回收纯化的目的片段进行克隆，具体方法如下：
1、连接：配置10μL反应体系：上述DNA xx ng(1μL-8μL)；pClone007 VersatileSimple Vector Kit 4μL；ddH2O Up to 10μL。置于金属浴中25℃反应5min，反应之后立即转化。
2、转化：取100μL冰上融化的TreliefTM5αChemically Competent Cell，加入上述10μL连接产物，轻轻混匀，冰上静置25min。
3、上述感受态混合溶液置于42℃金属浴上热激45s，迅速转移至冰浴，静置2min。
4、向离心管中加入500μL不含抗生素AMP的LB液体培养基，200rpm，37℃培养1h。
5、取200μL的菌液均匀涂布于含有Amp的LB固体培养基上，待待上述平板表面菌液干燥后，倒置放入恒温培养箱37℃过夜培养。
(4)阳性克隆检测及测序
6、次日挑取生长正常的单菌落，LB液体富集培养后，使用M13引物(M13F：5’-TGTAAAACGACGGCCAGT-3’,M13R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC-3’，检测阳性克隆。
根据PCR检测情况，挑取对应阳性克隆的菌液送至上海生工进行测序，每个样本送测5-8个重复，保证其准确性。
经检测得出，目的片段长度约为1542bp。目的产物送至上海生工测序。其中肠杆菌Enterobacter asburiae PxGF1的序列如SEQ ID NO.1所示。
SEQ ID NO.1：tgcaagtcga gcggcagcgg aagtagcttg ctactttgcc ggcgagcggcggacgggtgagtaatgtctg ggaaactgcc tgatggaggg ggataactac tggaaacggtatctaataccgcataacgtcgcaagaccaa agagggggac cttcgggcct cttgccatcatatgtgcccatatgggatta tctagtaggt ggggtaacggctcacctagg cgacgatccctatctggtctgagaggatga ccacccactc tggaactgag acacggtccacactcctacgggaggcagcagtggggaata ttgcacagtg ggcgcaagcc tgatgcaccc atgccgcgtgtatgaaaaaggccttcgggttgtaaagtac tttcagcggg gaggaaggcg ataaggttaataaccttgtcgattgacgtt acccgcaaaa aaagcaccggctaactccgt gccagcagccgcggtaatacggagggtgca agcgttaatc ggaattactg ggcgtaaagcgcacgcaggcggtctgtcaagtcggatgtg aaatccccgg gctcaacctg ggaactgcat tcgaaactggcaggctagagtcttgtagaggggggtagaa ttccaggtgt agcggtgaaa tgcgtagagatctggaggaataccggtggc gaaggcggcc ccctggacaaagactgacgc tcaggtgcgaaagcgtggggagcaaacagg attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaacgatgtcgacttggaggttgtgcccttgag gcgtggcttc cggagctaac gcgttaagtc gaccgcctggggagtacggccgcaaggttaaaactcaaat gaattgacgg gggcccgcac aagcggtggagcatgtggtttaattcgatg caacgcgaag aaccttacctactcttgaca tccagagaactttccagagatggattggtg ccttcgggaa ctctgagaca ggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgttgtgaaatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt atcctttgttgccagcggttcggccgggaactcaaaggag actgccagtg ataaactgga ggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatg gcccttacga gtagggctacacacgtgcta caatggcgcatacaaagagaagcgacctcg cgagagcaag cggacctcat aaagtgcgtcgtagtccggattggagtctgcaactcgact ccatgaagtc ggaatcgcta gtaatcgtag atcagaatgctacggtgaatacgttcccgggccttgtaca caccgcccgt cacaccatgg gagtgggttgcaaaagaagtaggtagctta accttcggga gggcgc。
肠杆菌Enterobacter asburiae PxGF1的基因树如图4所示。
上海生工测序完成后得到的碱基序列使用3.2.1将序列拼接起来后，利用NCBI数据库Blast(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)工具查找所克隆目的条带的相似序列，确定其为哪个属的微生物。小菜蛾种群肠道细菌的分类如表1所示。
表1小菜蛾种群肠道细菌的分类
从小菜蛾Cry1Ac敏感品系、Cry1Ac抗性品系、田间种群肠道中分离培养出了变形菌门(Proteobacteria)中3个属的9种细菌和厚壁菌门(Fimicutes)中2属的5种细菌，其菌株的菌落形态如图3所示，其中A-Enterobacter asburiae，B-Enterococcus mundtii，C-Enterococcus malodoratus，D-Pantoea vagans，E-Enterobacter hormaechei。菌株PxGF1菌落呈圆形，淡黄色，有凸起，边缘平整，表面光滑。不同品系小菜蛾种群肠道微生物种群之间存在着差异，肠杆菌属(Enterobacter sp.)微生物广泛分布于小菜蛾Cry1Ac敏感品系、Cry1Ac抗性品系、田间种群中肠中，同时芽孢杆菌属(Bacillus sp.)微生物也存在于三个种群(品系)肠道中，但是分离培养出来的数量明显少于肠杆菌属(Enterobacter sp.)。值得一提的是，肠球菌属(Enteroco-ccus sp.)微生物只在小菜蛾田间种群中肠中分离培养出来，小菜蛾Cry1Ac敏感品系、Cry1Ac抗性品系中均没有分离培养出来。结合小菜蛾三个种群(品系)之间的肠道微生物测序结果分析，Cry1Ac敏感品系、抗性品系肠道微生物中几乎没有肠杆菌，而实验室抗性品系中肠微生物中的肠杆菌占比丰度远远高于实验室敏感品系中肠微生物中的肠杆菌，同时田间种群小菜蛾肠道微生物中肠杆菌科的占比远远高于其他种群(品系)。结合以上三个种群(品系)小菜蛾肠道微生物的宏基因组测序分析以及分离培养的差异，挑选肠杆菌Enterobacter asburiae(PxGF1)开展后续的试验。
实施例2
首先将Cry1Ac原毒素配置成16ppm的母液，然后梯度稀释成8ppm、4ppm、2ppm、1ppm的五个梯度。然后将五个梯度的Cry1Ac原毒素分别加入1000：1的TritonX-100、CK对照组也一样。放入提前裁好尺寸(比9cm培养皿小一点)的甘蓝叶片，每一面浸泡10s拿出翻面，室温晾干；在新培养皿中放入6cm用水润湿的滤纸，上面再垫一层干的滤纸，防止湿度过大，放入上述晾干后的叶片，每个皿中接入小菜蛾3龄幼虫10头，用2层卫生纸封住培养皿盖的缝隙，防止小菜蛾逃跑；于25±2℃，相对湿度50％。自然光周期下饲养，每隔24小时记录一次死亡情况，72小时结束试验。上述试验空白对照以及处理组(五个梯度浓度Cry1Ac毒素)设置4个重复。使用Statistics23计算毒力回归方程，求得LC50值(LethalConcentration 50，即致死中浓度)。
通过毒力测定试验，我们得到Cry1Ac毒素对DBM-F的毒力回归方程为y＝1.213x-1.260；R2＝0.990，其中x为Cry1Ac毒素浓度以10为底的对数，y为死亡率(表2)，从而可以通过方程计算出Cry1Ac毒素对DBM-F的LC50为10.94μg/mL。
表2Cry1Ac对小菜蛾田间种群的毒力方程
*x为浓度以10为底的对数，y为死亡率
使用浸叶法进行试验，将小菜蛾3龄幼虫分成若干组，其中，1×107CFU/mL的PxGF1与浓度为2.5μg/mL的Cry1Ac原毒素混合后饲喂为一组，浓度为2.5μg/mL的Cry1Ac原毒素饲喂为一组，水饲喂为对照组，每组设置三个重复，每组30头虫，记录各组72h死亡率、蛹重、化蛹率。另外将刚死亡的小菜蛾放入4％多聚甲醛固定液中，固定24小时后送至武汉市皮诺飞生物科技有限公司，进行包埋，连续切片，挑选质量较好的切片进行HE染色，扫描成像，观察各处理组小菜蛾肠道组织。使用Statistics 23进行数据处理，采用单因素方差分析及LSD法两两比较各组处理间死亡率是否存在显著差异(P<0.05)，结果如图5-8所示。
可见，当仅使用Cry1Ac原毒素饲喂小菜蛾，小菜蛾在48小时死亡率约为5.56％，72小时死亡率为53.33％；而同时添加PxGF1与Cry1Ac毒素时，小菜蛾在48小时死亡率急剧上升，约为37.78％，72小时死亡率达到最高，约为95.55％；综上，PxGF1可以提高Cry1Ac毒杀小菜蛾效率，48小时约提高32.22％，72小时约提高42.22％。同时添加PxGF1与Cry1Ac毒素时，相较于仅使用Cry1Ac原毒素饲喂小菜蛾，试虫的化蛹率、蛹重都显著降低。表明本发明分离鉴定到的PxGF1具有增效Cry1Ac原毒素快速致死小菜蛾的作用。
同时，对照组肠道结构完整，肠道上皮细胞排列整齐、紧密(图8A)。Cry1Ac组部分中肠组织被破坏(图8B)，上皮细胞脱落。PxGF1+Cry1Ac组中肠组织已被严重破坏，无法观察到完整的肠道上皮细胞(图8C)，这说明PxGF1促进了Cry1Ac对小菜蛾肠道的破坏。
同时，还按照相同的方法测试了现有技术中已经公开的类似菌的致死率，现有技术CN 116925961A公开的成团泛菌(Pantoea agglomerans)PxG45菌株在同等测试条件下，72h死亡率比单独饲喂Bt提高了21.14％；现有技术CN 112322541 A公开的小菜蛾桂林不动杆菌Acinetobacter guillouiae PxCG3菌株在同等测试条件下，72h死亡率提高了25.00％；现有技术CN 112410252 A公开的Carnobacterium maltaromaticum PxCG2菌株在同等测试条件下，72h死亡率提高了26.66％；现有技术CN 112175861 B公开的小菜蛾蒙氏肠球菌Enterococcus mundtii PxG1菌株在同等测试条件下，72h死亡率提高了30％。
同时，现有技术(POLENOGOVA O V,NOSKOV Y A,YAROSLAVTSEVAO N,etal.Influence of Bacillus thuringiensis and avermectins on gut physiology andmicrobiota in Colorado potato beetle:Impact of enterobacteria onsusceptibility to insecticides.[J].PLOS ONE,2021,16(3):e0248704)公开的Enterobacter ludwigii在同等测试条件下，72h死亡率比单独饲喂Bt提高了20％；现有技术(CHUNMEI X,YANBIN S,YUEHUAZ 2018.Influence of synergism with Bacillusthuringiensis and Beauveria bassiana on diamondback moth larvae[C]//,AtlantisPress；City.340-343)公开的Beauveria bassiana以1：1，1：2，2：1，1：3，3：1的比例与Bt混合饲喂小菜蛾，72h死亡率比单独饲喂Bt提高不超过20％。

Claims (7)

1.一株小菜蛾肠杆菌PxGF1，其特征在于，其分类命名为肠杆菌Enterobacterasburiae PxGF1，该菌株已于2023年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2023056，保藏地址武汉市武汉大学。
2.根据权利要求1所述的小菜蛾肠杆菌PxGF1在提高Bt蛋白杀虫活性中的应用。
3.根据权利要求1所述的小菜蛾肠杆菌PxGF1在防治十字花科蔬菜害虫中的应用；所述十字花科蔬菜害虫为小菜蛾。
4.一种用于防治小菜蛾的方法，其特征在于，是将权利要求1所述的小菜蛾肠杆菌PxGF1与Bt蛋白共同饲喂小菜蛾。
5.根据权利要求1所述的小菜蛾肠杆菌PxGF1在制备防治小菜蛾的药剂中的应用。
6.一种用于防治小菜蛾的药剂，其特征在于，所述药剂包含权利要求1所述的小菜蛾肠杆菌PxGF1和Bt蛋白，利用PxGF1菌株对Bt蛋白原毒素的增效作用提高对小菜蛾的致死率。
7.根据权利要求6所述的药剂，其特征在于，所述Bt蛋白为Cry1Ac原毒素。
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