CN118598874A

CN118598874A - 一种取代的9h嘌呤类化合物、药物组合物及其用途

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Publication number: CN118598874A
Application number: CN202410629549.0A
Authority: CN
Inventors: 范为正; 王栋; 龙欣怡; 王华冰; 唐春雷
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2024-05-21
Filing date: 2024-05-21
Publication date: 2024-09-06

Abstract

本发明公开了一种取代的9H嘌呤类化合物、药物组合物及其用途，属于化学医药领域。本发明提供了具有通式(I)所示结构的取代的9H嘌呤类化合物或其盐，该类化合物可以选择性的抑制细胞周期蛋白依赖型激酶9通常称作CDK9，具有良好的癌细胞增殖抑制作用，从而可以作为治疗肿瘤和相关疾病的治疗剂。

Description

一种取代的9H嘌呤类化合物、药物组合物及其用途

技术领域

本发明属于化学医药领域，具体涉及一种取代的9H嘌呤类化合物、药物组合物及其用途。

背景技术

据Cancer Today网站截止至2020年的最新统计数据，全世界范围内预估新增病例数为19292789例，其中处于亚洲的新增病例数为49.3％，几乎占据总数的一半，其次是欧洲与北美洲，分别为22.8％和13.3％。其中除了目前广为人知的常见疾病如乳腺癌，肺癌，肺癌，结直肠癌，前列腺癌，胃癌，肝癌和子宫癌以外，还存在很多新增或已有的罕见癌症，其新增病例数总和占比高达46％(世界卫生组织(World Health Organization)，今日癌症(Cancer Today)2020)。

人类基因组编码20种不同的CDKs和15种细胞周期蛋白，其中细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，每个激酶由一个催化CDK亚基和一个激活细胞周期蛋白亚基组成。CDKs依据功能分类：一类CDK参与细胞周期调控，主要包括CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6等；一类CDK参与转录调节，如CDK7、CDK8、CDK9、CDK11等，参与转录的CDK与相应细胞周期蛋白形成CDK7/cyclinH，CDK8/cyclinC，CDK9/cyclinT和CDK11/cyclin的异源二聚体组成了转录过程中的转录因子。

CDK9可以调控下游MCL-1、BCL-2等抗凋亡蛋白的表达，间接抑制CDK9介导的转录过程可以减少抗凋亡蛋白的表达从而致使肿瘤细胞凋亡。B细胞淋巴瘤2(BCL-2)蛋白家族控制着癌细胞的内在凋亡，其中抑凋亡因子和促凋亡因子之间的相互牵制平衡决定细胞是否会经历程序性死亡。MCL-1是一种BCL-2家族中的抗凋亡因子，通过阻断促凋亡蛋白BAK和BAX的结合，阻止细胞凋亡。研究表明，CDK9活性的增加往往是MCL-1充分转录表达所必需的，因此抑制CDK9从而抑制MCL-1的转录及表达是一种间接但高效的靶向MCL1的方法。

在CDK9靶点的早期研究中发现，之前的候选药物存在严重的脱靶效应，因此研究热度逐渐下降。但通过对CDK9在各个信号通路中的分子机制研究发现，特异性抑制CDK9可以有效阻遏相关细胞异常增生。CDK9抑制剂针对常见的乳腺癌化疗药阿霉素也可起到协同作用。此外，该类型小分子抑制剂在器官移植过程中可通过调节淋巴细胞在特定时期的反应性，从而一定程度上起到免疫抑制作用。总之，CDK9抑制剂具有针对电离辐射或诱导DNA损害的化疗药剂敏化肿瘤细胞的潜力，具有诱导选择性杀死肿瘤细胞以及在具有DNA损害反应缺陷的肿瘤细胞亚群(subsets)中诱导合成致死的潜力。

发明内容

发明要解决的问题

为了解决上述技术问题，本发明人发现了一类新的9H嘌呤类衍生物，其可用作CDK9抑制剂。

进一步地，本发明提供了具有通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，药物组合物以及用途。

用于解决问题的方案

本发明提供如下方案：

一种具有通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

式中，

R₁为其中，R₄和R₅各自独立地为氢或C_1-8烷基，其中包含不同光学异构构型，分为S或R构型；或R₄和R₅与其所连接的原子一起形成环A；环A为C_3-6环烷基或含有一个选自O或N的杂原子的饱和4-6元杂环；n1为0到4；

或者，R₁为其中，X选自CH₂、O或S；R₆和R₇各自独立选自氢、C_1-8烷基、三氟甲基或C_3-6环烷基，其中包含不同光学异构构型，分为S或R构型；或R₆和R₇与其所连接的原子一起形成环B；环B为含有一个选自O或S的杂原子的饱和5-6元杂环或内酯环；n2为0到3；

或者，R₁为其中，R₈和R₉为氢、C_1-8烷基；或R₈和R₉与其所连接的原子一起形成环C；环C为含有一个选自O或S的杂原子的饱和5-6元杂环；

R₂选自

R₃选自：C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷基酰基、C2-6烯基；

其中，X₁、X₄、X₇各自独立地为CH₂、NH或O；X₂、X₃、X₅、X₆各自独立地选自碳原子或者氮原子；R₁₁独立地选自：胺基酰基-CONR₁₄R₁₅、酰胺基-NHCOR₁₆、烷氧基-OR₁₇、酰基-COR₁₈；R₁₂独立地选自：酰胺基-NHCOR₁₆、烷氧基-OR₁₇、酰基-COR₁₈、磺酰基-SO₂R₁₉、4-磺酰基-哌嗪基酰基R₁₃独立地选自：胺基酰基-CONR₁₄R₁₅、酰胺基-NHCOR₁₆、烷氧基-OR₁₇、磺酰基-SO₂R₁₉；

R₁₄、R₁₅各自独立地选自：H、C2-6烷基、C3-6环烷基、羟基取代的C1-6链式烷基、羟基取代的C3-6环烷基，且R₁₄、R₁₅不同时为H；或者R₁₄、R₁₅与其所连接的原子一起形成5-6元杂环；环为含有N、O或S的杂原子的饱和5-6元杂环；

R₁₆选自：C1-6烷基、C3-6环烷基、呋喃基；

R₁₇选自：取代或未取代的C1-4烷基，取代的基团选自羟基、胺基、或者吗啉基；

R₁₈、R₁₉各自独立地选自：C1-6烷基、C3-6环烷基、羟基取代的C1-6链式烷基、羟基取代的C3-6环烷基、苯基。

在本发明的一种实施方式中，n1为0时，R₁为R₄和R₅各自独立地为氢或C_1-8烷基，其中包含不同光学异构构型，分为S或R构型；或R₄和R₅与其所连接的原子一起形成环A；环A为C_3-6环烷基或含有一个选自O或N的杂原子的饱和4-6元杂环。

在本发明的一种实施方式中，胺基酰基-CONR₁₄R₁₅具体可选：

n3为1-4之间的自然数，R’为C1-4烷基。

在本发明的一种实施方式中，酰胺基-NHCOR₁₆具体可选：

在本发明的一种实施方式中，烷氧基-OR₁₇具体可选：

在本发明的一种实施方式中，酰基-COR₁₈具体可选：

在本发明的一种实施方式中，磺酰基-SO₂R₁₉具体可选：

在本发明的一种实施方式中，所述化合物具体选自

在本发明的一种实施方式中，所述的药学上可接受的盐为无机盐或有机盐，无机盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述有机盐选自甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。

在本发明的一种实施方式中，所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、硫酸盐、琥珀酸盐或甲磺酸盐。

本发明还提供一种药物组合物，包括所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。

本发明还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌症、结直肠癌(CRC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、膀胱癌、基底样乳腺癌(BLBC)、胰腺癌(PC)、骨髓增生异常综合征(MDS)、B细胞慢性淋巴性白血病(B-CLL)、急性髓性白血病(AML)和细菌以及HIV-1病毒感染的药物中的用途。

本发明还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗和/或预防选自头部、颈部、眼睛、口腔、咽喉、食道、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、子宫颈、乳房、卵巢、睾丸或其他生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、膜腺、脑、中枢神经系统、实体瘤和血液传播肿瘤的癌症的疾病。

本发明还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗对抑制CDK9敏感的肿瘤药物中的用途。

发明的效果

本发明提供通式(I)化合物，在治疗由高表达CDK9介导的疾病中具有优异的药效学性能，该化合物或其药学上可接受的盐适合用于制备治疗癌症药物，本发明的化合物具有优异的癌细胞增殖抑制作用，尤其适合制备癌症脑转移或原发性脑癌药物中的用途，在一些具体实施方式中，本发明的化合物特别适合制备脑部肿瘤放疗辅助药物。

具体实施方式

本发明人在研究CDK9抑制剂的过程中发现了一类新的9H嘌呤类衍生物，对细胞周期蛋白表达水平过高及CDK9表达水平过高具有良好的抑制作用，为CDK9介导的疾病提供一种治疗方案，预期此类抑制剂具有良好的开发前景。

在本发明中C_1-8烷基是指具有1至8个碳原子的直链或支链的单价饱和烃基，其实例包括，但不限于甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、叔丁基、1-己基、2-乙基丁基等。

在本发明中C_1-6烷基是指具有1至6个碳原子的直链或支链的单价饱和烃基，其实例包括，但不限于甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、叔丁基、1-己基等。

C3-6环烷基是指3至6个碳原子的环烷基，其实例包括，但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、烷基取代环烷基；

C_4-6环烷基是指4至6个碳原子的环烷基，其实例包括，但不限于环丁基、环戊基、环己基、烷基取代环烷基；

C2-6烯基是指2至6个碳原子的烯基，其实例包括，但不限乙烯基、1-甲基-1-乙烯基、2-甲基-1-乙烯基、1-乙基-1-乙烯基、2-乙基-1-乙烯基、1-正丙基-1-乙烯基、2-正丙基-1-乙烯基、1-异丙基-1-乙烯基、2-异丙基-1-乙烯基、1-正丁基-1-乙烯基、2-正丁基-1-乙烯基、1-异丁基-1-乙烯基、2-异丁基-1-乙烯基、1-叔丁基-1-乙烯基、2-叔丁基-1-乙烯基等。

表示取代基从该处连接。

如本文使用的术语“疾病”是指损害或干扰细胞、器官或组织的正常功能的任何病症或紊乱。

如本文所使用的术语“抑制剂”是指化合物或试剂具有抑制靶向蛋白或多肽的生物学功能的能力，例如通过抑制蛋白质或多肽的活性或表达。

如本文使用的术语“抗肿瘤剂”是指在肿瘤病症治疗中有用的任何试剂。

如本文使用的术语“药学可接受的”是指在合理的医学范围内，适用于与人和其他哺乳动物的组织接触而没有过度毒性、剌激、过敏反应等，并且有合理的利益/风险比的组分。“药学上可接受的盐”是指任何无毒性的盐，其在施用于受者后，能够直接或间接地提供本发明的化合物或化合物的前药。

如本文所使用的术语“有效量”或“有效治疗量”是指本文所述的化合物或药物组合物的量是足以达到预期的应用，包括，但不限于治疗疾病。在一些实施方案中，所述量是检测到的有效用于杀伤或抑制癌细胞生长或扩散；肿瘤的大小或数量；或癌症的严重性水平，阶段和进展。有效治疗量可以根据预定应用发生变化，例如体外或者体内，疾病的状况和严重程度，受试者年龄，重量，或给药方式等。该术语也适用于剂量将诱导靶细胞，例如，减少细胞迁移的一个特定的响应。具体剂量将取决于，例如，特定的化合物中选取，受试者物种和他们的年龄/现有的健康状况或健康状况的风险，给药途径，疾病的严重程度，与其他药剂组合给药，给药时间，给其施用的组织，和给药装置等。

在本发明中“给药”或“给予”个体化合物是指向需要治疗的个体提供本发明的化合物。

本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并且因此作为外消旋物和外消旋混合物、单一对映体、单独的非对映体和非对映体混合物出现。这些化合物的所有此类异构体形式均明确地包括在本发明中。本发明的化合物还可以表现为多种互变异构形式，在此情况下，本发明明确地包括本文所述的化合物的所有互变异构形式。此类化合物的所有此类异构体形式包括在本发明中。本文所述的化合物的所有结晶形式明确地包括在本发明中。

<化合物或其药学上可接受的盐>

本发明提供一种9H嘌呤类衍生物、它们的制备方法、含有它们的药物组合物、以及它们的治疗用途。该化合物作为CDK9抑制剂，药效学性能更好。根据本发明的第一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐:

式中，

R₂选自

R₃选自：C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷基酰基、C2-6烯基；

R₁₆选自：C1-6烷基、C3-6环烷基、呋喃基；

n3为1-4之间的自然数，R’为C1-4烷基。

在本发明的一种实施方式中，酰胺基-NHCOR₁₆具体可选：

在本发明的一种实施方式中，烷氧基-OR₁₇具体可选：

在本发明的一种实施方式中，酰基-COR₁₈具体可选：

在本发明的一种实施方式中，磺酰基-SO₂R₁₉具体可选：

通式(I)的化合物包括其药学上可接受的盐。本发明所述药学上可接受的盐为无机盐或有机盐，无机盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述有机盐选自甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、以乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。优选地，从成药性角度考虑，本发明所述盐为盐酸盐、硫酸盐、琥珀酸盐或甲磺酸盐，但这并不代表着限制。

<药物组合物>

本发明提供了一种药物组合物，包括本发明所述式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配制为用于口服给药的固体制剂，包括，但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂等。在这些固体剂型中，本发明通式(I)化合物作为活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，例如与柠檬酸钠或磷酸二钙。或与下属成分混合：(1)填料或增溶剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(2)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶等；(3)保湿剂，例如，甘油等；(4)崩解剂、例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些符合硅酸盐和碳酸钠等；(5)缓溶剂，例如石蜡等；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物等；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；(8)吸附剂，例如，高岭土等；(9)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠等，或其混合物。胶囊剂、片剂、丸剂中也可包含缓冲剂。

所述固体剂型例如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材料如肠溶衣和其他本领域公知的材料晶型包衣或微囊化。他们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性成分也可与上述赋形剂中的一种或者多种形成微胶囊形式。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配制为用于口服给药的液体剂型，包括，但不限于药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆、酊剂等。除了作为活性成分的通式(I)化合物或其药学上可接受的盐外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，例如水和其他溶剂，增溶剂和乳化剂、例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油类，特别是棉籽油、花生油、玉米油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油等或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，本发明液体剂型也可包括常规助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料等。

所述悬浮剂包括，例如，乙氧基化十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇、和脱水山梨醇、微晶纤维素、琼脂等或这些物质的混合物。

本发明化合物和其药学上可接受的盐可以配置为用于胃肠外注射的剂型，包括，但不限于生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液和分散液的无菌粉末。适宜的载体、稀释剂、溶剂、赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配置为用于局部给药的剂型，包括如软膏剂、散剂、栓剂、滴剂、喷射剂和吸入剂等。作为活性成分的本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐在无菌条件下和生理上可接受的载体及任选的防腐剂、缓冲剂，和必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明式(I)的化合物或其药学上可接受的盐将以0.01-2000mg/kg、特别是2.5-1000mg/kg、特别是5-500mg/kg范围内的单位剂量向哺乳动物给予，并且这应该提供一个有效剂量。然而，每日剂量将必然取决于被治疗宿主、具体的给药途径、以及正在被治疗的疾病的严重性而变化。因此，可以由治疗任何具体患者的从业者决定最适剂量。

<用途>

本发明提供一种如上述定义的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗哺乳动物尤其是人类由EGFR激活型或耐药型突变体介导的疾病，特别是癌症的药物中的用途应用。

在本发明中，所述抑制剂包括但不局限于CDK9，还包括CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6等参与细胞周期调控的CDK，参与转录调节的CDK7、CDK8、CDK9、CDK11等。可能易受使用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐影响的治疗影响的癌症类型包括，但不限于：卵巢癌、宫颈癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤以及间皮瘤。优选地，其中所述的癌症包括非小细胞肺癌、转移性非小细胞肺癌。

本发明所述癌症的治疗，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐将被给予哺乳动物，更具体的是人。

本发明所述CDK9抑制剂可作为单独的疗法应用或除本发明化合物之外，可以涉及常规的手术或放射疗法(例如本发明所述的WBRT)，可与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，与其他抗肿瘤药物组合，此联合治疗可通过同时、顺序或分开使用治疗的各组分来实现。所述治疗剂肿瘤剂包括但不限于：作用于DNA化学结构的抗肿瘤药物，如顺铂，影响核苷酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶等，影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等，芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、来曲唑、瑞宁德等，其它如去甲基化药物瓜地西坦、Bcl-2蛋白的选择性抑制剂维奈克拉、FLT3抑制剂吉瑞替尼、异柠檬酸脱氢酶抑制剂艾伏尼布、恩西地平等或其药学上可接受的盐。免疫疗法，例如单克隆抗体吉妥珠单抗、CD123/CD3双抗Flotetuzumab、T细胞衔接器UMG2-BTCE、免疫抑制剂PD-1、PD-L1、OX40激动剂抗体等。异基因造血干细胞移植(Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation,allo-HSCT)技术等。组合的各成分可同时或顺序的给予，以单一制剂形式或者以不同制剂的形式给予。所述组合不仅包括本发明化合物的一种或其他活性剂的组合，而且也包括本发明化合物的两种或更多的其他活性剂的组合。

下列实施例用于说明而非限定通式(I)化合物的合成方法。温度均为摄氏度。如果没有另外说明，所有的蒸发均在减压下进行。如果没有另外说明，否则试剂是自商业供货商购得且未经进一步纯化即使用。终产物、中间体和原料的结构通过标准分析方法确认，例如元素分析、光谱特征分析，例如MS、NMR。使用的缩写是本领域常规缩写。

实施例涉及到的一些中间体的制备：

中间体A

2，6二氯-9-异丙基-9H-嘌呤

向装有2，6二氯-9H-嘌呤(10.00g，53.19mmol)的三颈瓶中加入无水DMF(100mL)，再加入无水K₂CO₃(25.18g，300mmol)，N₂保护下于室温缓慢加入异丙基溴(Cl-3，25.14g，300mmol)，室温反应24h。TLC监测原反应完全，加水(200mL×1)加EA(250mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(250mL×3)洗。无水Na₂SO₄干燥，有机相被减压蒸除溶剂后残留物经硅胶柱层析[洗脱剂：PE：EA＝10:1(v/v)]分离纯化，得到白色固体中间体A(7.50g)，收率61.4％。HRMS(m/z):231.1123[M+H]⁺(理论值：231.0126)；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.32(s,1H),3.99-3.93(m,1H),1.57(d,J＝6.8Hz,6H)。

中间体B

N-(3-氨基苄基)-2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-胺

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入3-氨基苄胺(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干，得到1.20g黄色固体，收率87.3％。

中间体C

N-(4-氨基苄基)-2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-胺

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入4-氨基苄胺(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到黄色固体(1.18g，收率85.8％)。

中间体D

3-(((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)苯甲酸

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入3-氨甲基苯甲酸(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.3g，收率86.7％)。

中间体E

4-(((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)苯甲酸

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入4-氨甲基苯甲酸(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.1g，收率81.7％)。

中间体F

3-(((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)苯酚

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入3-氨甲基苯酚(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.2g，收率87.3％)

中间体G

4-(((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)苯酚

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入4-氨甲基苯酚(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.1g，收率86.3％)

中间体H

3-叔丁基-((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)哌啶-1-羧酸酯

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.68g，收率82.8％)。

中间体I

3-叔丁基-((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)哌啶-1-羧酸酯

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入1-叔丁氧羰基-4-氨基哌啶(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.38g，收率77.8％)。

中间体J

叔丁基-3-(((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入3-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10min，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.80g，收率84.8％)。

中间体K

叔丁基-4-(((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯

将中间体A(1.01g，4.35mmol)溶于异丙醇10ml后，加入4-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.50mmol)，随后加入三乙胺(0.45g，4.50mmol)，升温到80℃回流反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加入石油醚(5ml)后有黄色固体析出，用石油醚打浆10mi n，过滤后的固体再用二氯甲烷(5ml)溶解，将分层的上层红色油状物杂质去除，将剩余有机相旋干得到白色固体(1.36g，收率67.8％)。

实施例1

N-4-((2-((2R,3S)-2-羟基戊-3-基))氨基)-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)氨基)甲基)苯基)环己酰胺

步骤一：将中间体C(0.20g，0.56mmol)溶于DCM(5ml)后，随后加入三乙胺(0.06g，0.6mmol)，在0℃下，氮气保护下加入环己基酰氯(0.047g，0.6mmol)，室温反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物经柱层析[洗脱剂：DCM：MeOH＝20:1(v/v)]分离纯化得到黄色油状物N-(4-((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)苯基)环己酰胺0.18g。

步骤二：向装有N-(4-((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基))氨基)甲基)苯基)环己酰胺(0.18g，0.50mmol)的微波反应瓶中加入1,2-丙二醇(2mL)溶清，再加入DIPEA(0.21g，1.65mmol)做碱，最后加入(2R,3S)-3-氨基戊-2-醇(0.28g，3.00mmol)。放入微波反应器中，设置反应温度为140℃，反应20min。TLC监测反应完全后加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物硅胶板层析[展开剂：DCM：MeOH＝20:1(v/v)]分离纯化得到实施例1(0.10g)，收率为48.6％。HRMS(m/z):480.4517[M+H]⁺(理论值：480.3009)；¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.76(s,1H),7.58(t,J＝1.9Hz,1H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),7.08(d,J＝7.6Hz,1H),4.77-4.64(m,2H),4.62(p,J＝6.7Hz,1H),3.94(dq,J＝8.1,5.2Hz,1H),3.60(t,J＝4.7Hz,2H),2.32(tt,J＝11.9,3.4Hz,1H),1.88-1.75(m,4H),1.67(ddd,J＝13.5,7.4,5.6Hz,2H),1.53(d,J＝6.8Hz,6H),1.51-1.44(m,2H),1.40-1.17(m,4H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H)0.94(t,J＝7.4Hz,3H).

按与实施例1基本操作相似的操作合成实施例2-5(参见表1)，从而得到期望的产物。

表1实施例2-5的结构和质谱数据

实施例6

(S)-1-(4-(4-((2-((1-羟基丁-2-基)氨基)-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)氨基)甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮

步骤一：将中间体E(0.2g，0.8mmol)加入3ml乙腈中，0℃下，氮气保护下加入缩合剂HATU(0.35g，1.0mmol)，反应0.5h后，依次加入DIPEA(0.13g，1.0mmol)，1-乙酰哌嗪(0.06g，1.0mmol)，室温反应3h后。TLC监测反应完全加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物柱层析[洗脱剂：DCM：MeOH＝20:1(v/v)]分离纯化得到黄色油状物(S)-1-(4-(4-((2氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)氨基)甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(0.17g)。

步骤二：向装有(S)-1-(4-(4-((2氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)氨基)甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的微波反应瓶中加入1,2-丙二醇(2mL)溶清，再加入DIPEA(0.21g，1.65mmol)做碱，最后加入(S)-2-氨基-1-丁醇(0.27g，3.00mmol)。放入微波反应器中，设置反应温度为140℃，反应20min。TLC监测反应完全后加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物硅胶板层析[展开剂：DCM：MeOH＝20:1(v/v)]分离纯化得到实施例6(0.05g，收率30.0％)HRMS(m/z):509.2974[M+H]⁺(理论值：509.2910)；¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.45(s,1H),7.38(d,J＝8.1Hz,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),6.38(s,1H),4.90(d,J＝6.5Hz,1H),4.75(s,2H),4.56(p,J＝6.8Hz,1H),3.92-3.80(m,1H),3.78-3.74(m,1H),3.70-3.32(m,8H),2.09(s,3H),1.65-1.51(m,2H),1.49(d,J＝6.8Hz,6H),0.97(t,J＝7.5Hz,3H).

按与实施例6基本操作相似的操作合成实施例7-9(参见表2)，从而得到期望的产物。

表2实施例7-9的结构和质谱数据

实施例10

(S)-2-((9-异丙基-6-(4-(2-吗啉基乙氧基))苯基)氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)丁-1-醇

步骤一：将中间体G(0.20g，0.63mmol)加至5ml DMF中，再加入碳酸钾(0.27g，2.03mmol)，最后加入4-(2-氯乙基)吗啉(0.15g，1.03mmol)，80℃反应3h后。TLC监测反应完全加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物柱层析[洗脱剂：DCM：MeOH＝15:1(v/v)]分离纯化得到白色固体2-氯-9-异丙基-N-(4-(2-吗啉乙氧基)苄基)-9H-嘌呤-6-胺0.16g。

步骤二：向装有2-氯-9-异丙基-N-(4-(2-吗啉乙氧基)苄基)-9H-嘌呤-6-胺的微波反应瓶中加入1,2-丙二醇(2mL)溶清，再加入DIPEA(0.21g，1.65mmol)做碱，最后加入(S)-2-氨基-1-丁醇(0.27g，3.00mmol)。放入微波反应器中，设置反应温度为140℃，反应20min。TLC监测反应完全后加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物硅胶板层析[展开剂：DCM：MeOH＝20:1(v/v)]分离纯化得到实施例10(0.06g，收率31.5％)HRMS(m/z):484.4867[M+H]⁺(理论值：484.2958)；¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.44(s,1H),7.26(d,J＝8.5Hz,2H),6.89-6.80(m,2H),6.14(s,1H),4.93(d,J＝6.2Hz,1H),4.68(s,2H),4.61-4.52(m,2H),4.09(t,J＝5.7Hz,2H),3.90(ddd,J＝7.4,5.1,2.2Hz,1H),3.82(dd,J＝10.7,2.6Hz,1H),3.77-3.68(m,4H),3.63(dd,J＝10.6,7.6Hz,1H),2.79(t,J＝5.7Hz,2H),2.57(dd,J＝5.7,3.7Hz,4H),1.71-1.54(m,2H),1.51(d,J＝6.8Hz,6H),1.02(t,J＝7.5Hz,3H).

实施例11

1-(3-((2-(((S)-1-羟基丁烷-2-基)氨基)-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)氨基)哌啶-1-基)-乙基-1-酮

步骤一：将中间体I(1.88g，4.77mmol)溶于15ml DCM：TFA＝4：1的混合溶剂中，室温搅拌3h，得到2-氯-9-异丙基-N-(哌啶-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.18g，收率84.1％)。

步骤二：将2-氯-9-异丙基-N-(哌啶-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(0.20g，0.56mmol)溶于DCM(5ml)后，随后加入三乙胺(0.06g，0.6mmol)，在0℃下，氮气保护下加入乙酰氯(0.047g，0.6mmol)，室温反应3h，反应结束后旋干除去溶剂，加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物经柱层析[洗脱剂：DCM：MeOH＝20:1(v/v)]分离纯化得到1-(3-((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)氨基)哌啶-1-基)-乙基-1-酮0.18g。

步骤三：向装有1-(3-((2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)氨基)哌啶-1-基)-乙基-1-酮的微波反应瓶中加入1,2-丙二醇(2mL)溶清，再加入DIPEA(0.21g，1.65mmol)做碱，最后加入(S)-2-氨基-1-丁醇(0.27g，3.00mmol)。放入微波反应器中，设置反应温度为140℃，反应20min。TLC监测反应完全后加水(25mL×1)加DCM(25mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(25mL×1)洗。有机相经减压蒸馏除去有机相溶剂后，残留物硅胶板层析[展开剂：DCM：MeOH＝20:1(v/v)]分离纯化得到实施例11(0.06g，收率28.8％)。HRMS(m/z):390.2682[M+H]⁺(理论值：390.2539)；¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.48(d,J＝8.5Hz,1H),5.28(s,1H),4.58(p,J＝6.8Hz,1H),4.16-4.04(m,1H),3.95(s,1H),3.84-3.74(m,1H),3.63(ddd,J＝11.8,8.0,3.5Hz,1H),3.19-2.94(m,2H),2.09(d,J＝5.8Hz,3H),1.90-1.72(m,3H),1.60-1.53(m,4H),1.51(d,J＝7.0Hz,6H),0.93(s,3H).

按与实施例11基本操作相似的操作合成实施例12-20(参见表3)，从而得到期望的产物。

表3实施例11-20的结构和质谱数据

实施例21：生物活性测试

通过CDK9-cyclinT1来确定IC₅₀值。该测定包含两个步骤:酶促反应和检测步骤。首先，将CDK9-cyclinT1、不同浓度的待测化合物、作为底物蛋白的p53和三磷酸腺苷(ATP)的混合物在测定缓冲液中温育。CDK9-cyclinT1在Thr160和其他残基处磷酸化肽底物。然后使用特异性抗体和TR-FRET测定技术检测磷酸化肽底物的量。

具体测试说明：CDK9-cyclinT1测定作为基于TR-FRET-(HTRFTM,CisbioBioassays)的384孔测定进行。在第一步中，将纯化的人CDK9-cyclinT1在22℃下在含有不同浓度的待测化合物或不含待测化合物(作为阴性对照)的测定缓冲液中温育15分钟。测定缓冲液含有25mM HEPES pH 8.0,10mM Mg(CH₃COO)₂,1mM MnCl₂，0.1％ BSA，0.01％35和5mM二硫苏糖醇(DTT)。Echo 555(Labcyte)用于分配化合物溶液。然后，在第二步中，加入纯化的肽底物和ATP，并将反应混合物在22℃温育25-35分钟(通常25分钟)。药理学相关的测定体积为5μl。在反应混合物的温育期间，测定中的最终浓度为0.3-0.5nM(通常为0.3nM)CDK9-cyclinT1，50nM肽底物和0.5μM ATP。通过加入EDTA终止酶促反应。通过使用能够实现FRET的特异性抗体[标记有荧光团铺(Eu)作为供体和d2作为受体(CisbioBioassays)]检测由于在ATP存在下的ATR介导的反应丽产生的磷酸化肽底物。为此目的，将2μl含有抗体的终止溶液(12.5mM HEPES pH 8.0，125mM EDTA，30mM氧化纳，300mM氟化钾，0.006％ Tween-20，0.005％35，0.21nM抗磷酸化-p53(Ser15)-Eu抗体，15nM抗cmyc-d2抗体)加入到反应混合物中。在信号发展2小时后，使用TRF模式和激光激发在EnVision(PerkinElmer)酶标仪中分析板。在340nm激发供体铕后，测量受体d2在665nm处以及在615nm处从供体Eu发射的荧光。磷酸化肽底物的量与在665nm和615nm下发射光的量的比率(即相对荧光单位(rfu)的比率)直接成正比。使用XLFit Excel软件处理数据。特别地，通过使用非线性回归分析将剂量-响应曲线拟合到数据点，以常规方式确定IC₅₀值。

实验结果显示在表格4：

表4实施例以及参照化合物(商购Fadraciclib(CYC065))活性测定的IC₅₀(nM)数据

待测化合物	CDK9-cyclinT IC₅₀(μM)
		实施例1	0.1092
实施例2	0.0625
		实施例3	0.0845
实施例4	0.0936
		实施例5	0.0856
实施例6	0.0524
		实施例7	0.0285
实施例8	0.0054
		实施例9	0.1333
实施例10	0.1155
		实施例11	0.2236
实施例12	0.1334
		实施例13	0.1508
实施例14	0.2119
		实施例15	0.0964
实施例16	0.0753
		实施例17	0.0912
实施例18	0.0601
		实施例19	0.1592
实施例20	0.0708
		CYC065(对比例)	0.0398

其中，CYC065(Fadraciclib)的结构如下所示：

实施例22：细胞抗增殖活性测定

MV4-11细胞接种密度为每毫升1×105个，96孔板中细胞悬浮液(100μL)，加入稀释成不同浓度的待测化合物(150μL)，同时设置空白对照和阴性对照，于培养箱中培养72h。加入CCK-8溶液(10μL)，于培养箱中培养4h，振板后用酶标仪在450nM下读取吸光值。

采用GraphPad Prism 5软件计算不同浓度下的抑制率，根据抑制率曲线拟合成对应的函数，计算IC₅₀值。

计算公式：细胞生长抑制率％＝1-(实验孔吸光值-空白吸光值)/(阴性对照吸光值-空白吸光值)×100％

在下表中显示了针对本发明的实施例测定的数据以及针对Fadraciclib获得的数据：

表5实施例以及参照化合物Fadraciclib(CYC065)的MV4-11细胞抗增殖活性实验数据

由上表可知，除实施例6、实施例14和实施例18，其他实施例均具有比CYC065显著较优的效价。其中，实施例7、8具有更加优异的抑制活性。

尽管本发明通过之前的特定实施例说明，但不应将其解释为受此限制；而是本发明涵盖之前公开的一般方面。可在不背离本发明的精神和范围下进行多种修饰并具有多种实施方案。

Claims

1.一种具有通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，

式中，

R₂选自

R₃选自：C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷基酰基、C2-6烯基；

R₁₆选自：C1-6烷基、C3-6环烷基、呋喃基；

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，胺基酰基-CONR₁₄R₁₅具体选自：

n3为1-4之间的自然数，R’为C1-4烷基。

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，酰胺基-NHCOR₁₆具体选自：

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，烷氧基-OR₁₇具体为：

5.如权利要求1-4任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中所述的药学上可接受的盐为无机盐或有机盐，无机盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述有机盐选自甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。

6.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。

7.权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用作CDK9抑制剂的药物中的应用。

8.权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗对抑制CDK9敏感的肿瘤药物中的用途。

9.权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防细菌以及HIV-1病毒感染的药物中的应用。

10.权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用；所述癌症包括头部、颈部、眼睛、口腔、咽喉、食道、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、子宫颈、乳房、卵巢、睾丸或其他生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、膜腺、脑、中枢神经系统、实体瘤和血液传播肿瘤的癌症。