CN118511837A - 一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”的培育方法，属于水产养殖育种技术领域。本发明采用群体选育、多倍体育种和杂交育种相结合的方法，开展卵圆形近江牡蛎速生系选育；速生选育系采用二倍体直接诱导四倍体以及三倍体诱导四倍体两种方法诱导出不同四倍体群体，以壳长、体重和壳型作为选育目标对不同四倍体群体进行定向选育，通过群体间杂交培育出四倍体倍化率稳定的四倍体近江牡蛎速生选育系；通过二倍体和四倍体速生选育系之间杂交，培育出卵圆形速生近江牡蛎三倍体。本发明速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”具有壳型规则(呈卵圆形)、生长速度快、出肉率高、抗逆性强、品质优良等优点，非常适合沿海养殖，推广应用前景广阔。

Description

一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”的培育方法

技术领域

本发明属于水产养殖育种技术领域，尤其涉及一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”的培育方法。

背景技术

近江牡蛎隶属于双壳纲(Bivalvia)，珍珠贝目(Pterioida)，牡蛎科(Ostreidae)，巨蛎属(Crassostrea)，是一种广温广盐性的海水经济贝类，主要栖息于我国沿海盐度较低的河口潮下带区域。虽然近江牡蛎具有生长速度快、广温广盐、抗病能力强、成活率高等优点，但是因近江牡蛎出肉率低、软体部呈红色或黄色、壳型不规则等不利因素影响导致消费市场认可度较低，从而未能够大面积推广养殖。

通过采用细胞工程技术培育出体细胞内含三套染色体的三倍体牡蛎可以有效提高其生产性能，由于三套染色体遗传杂合度高且在减数分裂时出现紊乱导致育性差，因此三倍体牡蛎具有生长速度快、出肉率高、抗逆性强、个体大、育性差、糖原含量高和肉质好等优点，正好可以弥补二倍体近江牡蛎的自身缺陷。因此，培育出壳型规则、生长速度快、出肉率高、养殖周期短、品质好的三倍体近江牡蛎新品系对于推动我国牡蛎养殖产业转型升级以及助力乡村振兴都具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”的培育方法，采用本发明方法能够大规模生产得到壳型规则、生长速度快、出肉率高、抗逆性强、品质优良且有明显优势的速生近江牡蛎三倍体新品系。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”的培育方法，包括：

(1)选择体重200-300g、壳长8-10cm、壳呈卵圆形的近江牡蛎作为亲本，进行定向选育，获得近江牡蛎速生选育系F；

(2)以F为亲本，抑制第一极体直接诱导得到四倍体近江牡蛎a；以以F为亲本，通过抑制第二极体诱导三倍体近江牡蛎，再抑制第一极体诱导得到四倍体近江牡蛎群体b；通过连续2代群体选育，分别获得四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb；

(3)将Ga和Gb杂交，获得倍性稳定的四倍体近江牡蛎速生选育系Gab；

(4)以Gab为父本、F作为母本进行倍性杂交，培育得到卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”。

优选的，步骤(1)所述近江牡蛎为2-3龄的二倍体近江牡蛎。

优选的，步骤(1)所述定向选育的代数为4代以上。

优选的，步骤(2)所述诱导方法为：采用细胞松弛素B处理受精卵后，用二甲基亚砜溶液浸泡。

更优选的，所述细胞松弛素B体积浓度为0.6-0.8mg/L；所述细胞松弛素B抑制第一极体的时间为10min或15min；所述细胞松弛素B抑制第二极体的时间为30min或45min。

更优选的，所述二甲基亚砜的体积浓度为0.05％～0.2％，浸泡的时间为15～25min。

优选的，步骤(1)、步骤(2)中选育的标准为：体重200-300g、壳长8-10cm、壳呈卵圆形。

相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

本发明采用群体选育、多倍体育种和杂交育种相结合的方法，开展卵圆形近江牡蛎速生系选育；速生选育系采用二倍体直接诱导四倍体以及三倍体诱导四倍体两种方法诱导出不同四倍体群体，以壳长、体重和壳型作为选育目标对不同四倍体群体进行定向选育，通过群体间杂交培育出四倍体倍化率稳定的四倍体近江牡蛎速生选育系；通过二倍体和四倍体速生选育系之间杂交，培育出卵圆形速生近江牡蛎“世倍4号”三倍体。本发明方法培育的速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”具有壳型规则(呈卵圆形)、生长速度快、出肉率高、抗逆性强、品质优良等优点，非常适合沿海养殖，推广应用前景广阔。

附图说明

图1为速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”培育方法技术路线图；

图2为速生近江牡蛎二倍体诱导四倍体的流式细胞仪检测峰值图；

图3为速生近江牡蛎三倍体诱导四倍体的流式细胞仪检测峰值图；

图4为速生近江牡蛎三倍体的流式细胞仪检测峰值图。

具体实施方式

本发明提供了一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎近江牡蛎“世倍4号”的培育方法，包括：

(1)选择体重200-300g、壳长8-10cm、壳呈卵圆形的近江牡蛎作为亲本，进行定向选育，获得近江牡蛎速生选育系F；

(2)以F为亲本，抑制第一极体直接诱导得到四倍体近江牡蛎a；以以F为亲本，通过抑制第二极体诱导三倍体近江牡蛎，再抑制第一极体诱导得到四倍体近江牡蛎群体b；通过连续2代群体选育，分别获得四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb；

(3)将Ga和Gb杂交，获得倍性稳定的四倍体近江牡蛎速生选育系Gab；

(4)以Gab为父本、F作为母本进行倍性杂交，培育得到卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”。

本发明对于近江牡蛎的具体来源没有特殊限定，包括养殖牡蛎和野生牡蛎，在本发明中，所述近江牡蛎优选为2-3龄近江牡蛎，更优选为2龄近江牡蛎。

本发明对近江牡蛎亲本进行筛选时，以体重、壳长和壳型作为目标性状，其中体重优选为200-300g，更优选为230-270g，所述壳长优选为8-10cm，更优选为9cm，所述壳型呈卵圆形。

本发明所述定向选育的方法优选为收集选择的繁殖亲本的精子和卵子，采用人工授精方法获得D形幼虫，将D形幼虫在室内养殖池中培育至眼点幼虫，投放附着基，生长至壳高为2-3mm时的牡蛎稚贝，移到自然海区进行养殖至牡蛎成贝，以体重、壳长和壳型作为目标性状再次进行筛选，如此连续，即为定向选育。

在本发明中，所述定向选育的代数优选为4代，得到近江牡蛎速生选育系F。本发明以体重、壳长和壳型作为选育目标，截取壳型卵圆形、体重和壳长前10％的个体作为繁殖亲本，经过连续4代群体选育，得到速生选育系F。

本发明通过两种方法诱导四倍体：

(1)四倍体群体a：以F为亲本，通过抑制第一极体直接诱导得到四倍体，所述诱导的方法优选为采用细胞松弛素B处理受精卵后，用二甲基亚砜溶液浸泡；所述细胞松弛素B的体积浓度优选为0.6-0.8mg/L，更优选为0.7mg/L，所述细胞松弛素B的处理第一极体时间优选为10-15min，更优选为12min；所述二甲基亚砜溶液的体积浓度优选为0.05％-0.2％，所述浸泡的时间优选为15-25min，更优选为20min。

(2)四倍体群体b：以F代为亲本，通过抑制第二极体诱导得到三倍体，所述诱导的方法优选为采用细胞松弛素B处理受精卵后，用二甲基亚砜溶液浸泡；所述细胞松弛素B的体积浓度优选为0.6-0.8mg/L，更优选为0.7mg/L，所述处理第二极体时间优选为30-45min，更优选为40min，所述二甲基亚砜溶液的体积浓度优选为0.05％-0.2％，所述浸泡的时间优选为15-25min，更优选为20min；然后以F为父本，以三倍体为母本，通过抑制第一极体诱导得到四倍体，诱导方法同F为亲本时直接诱导得到四倍体的方法。

本发明对于细胞松弛素B和二甲基亚砜的具体来源没有特殊限定。

在本发明中，用细胞松弛素B处理受精卵的方法优选为：将性腺成熟的速生选育系F的雌贝或三倍体的雌贝和速生选育系F代的雄贝分别解剖，分别收集精子和卵子，人工授精，待受精卵发育至第一极体或第二极体时，用所述细胞松弛素B处理。所述人工授精时，卵子和精子的数量比优选为1:5-10，更优选为1:6-8，最优选为1:7。用细胞松弛素B处理受精卵后，优选的用二甲基亚砜溶液浸泡受精卵，再进行常规孵化、幼虫培育及海区养殖。所述二甲基亚砜溶液的体积浓度优选为0.1％，所述浸泡的时间优选为20min。

在所述诱导后，优选还包括对诱导后的受精卵进行流式细胞筛选，得到倍性为3N的三倍体近江牡蛎和倍性为4N的四倍体近江牡蛎。

在获得四倍体群体a和群体b后，以体重、壳长和壳型作为选育目标连续2代群体选育分别获得四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb，然后通过四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb之间杂交，获得倍性稳定(四倍体率90％以上)的四倍体近江牡蛎速生选育系Gab。

在本发明中，所述群体选育的方法优选为分别收集速生四倍体近江牡蛎Ga和Gb的卵子和精子进行杂交，得到的受精卵发育至D形幼虫时，调整密度培育，当幼虫发育至眼点时，投放附着基；当稚贝生长壳高至2-3mm时，放入上升流系统进行养殖；当稚贝生长壳高至1cm以上时脱基，获得单体牡蛎装笼移至自然海区养成；所述D形幼虫培育密度优选为1-3个/ml，更优选为2个/ml；所述附着基优选包括牡蛎壳、扇贝壳、塑料片、薄膜等。

在得到倍性稳定的四倍体近江牡蛎速生选育系Gab后，以四倍体Gab作为父本，以F代作为母本进行杂交，培育得到卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”。本发明对于所述杂交的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的体外杂交方法即可。

本发明对未提及原料的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1

(1)近江牡蛎速生选育系F选育：从广西、山东等沿海地区收集2000个近江牡蛎养殖和野生2～3龄群体，然后截取壳呈卵圆形、体重和壳长前10％的个体200个作为繁殖亲贝，所述繁殖亲贝的体重为200～265g，壳长为8～9cm，壳型卵圆形。在水温25℃、盐度20条件下，通过人工授精方法获得D形幼虫，在室内育苗池中培育至眼点幼虫，投放水泥绳作为附着基；当牡蛎稚贝生长至2～3mm时，移到自然海区进行养成。最后以相同选育目标、育苗技术和养成方法等，经过连续4代群体选育出近江牡蛎速生选育系F4。

(2)四倍体近江牡蛎群体a的诱导：解剖200个性腺成熟的近江牡蛎速生选育系F4亲本，用生物显微镜分出雌(56个)雄(88个)；筛选30对性腺发育最好的雌雄亲本，分别挤出精、卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；在受精5min后，马上加入0.8mg/L细胞松弛素B，处理受精卵10min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测D形幼虫，保留四倍体诱导率在60％以上的诱导组；幼虫发育至眼点幼虫时投放薄膜附着基(采用分段附苗筛选)，每天检测四倍体诱导率，当四倍体诱导率在60％以上时，移除前期投放薄膜重新投放新的薄膜附苗，直到诱导四倍体诱导率低于60％时结束附苗，将诱导率60％的薄膜苗移到上升流系统进行稚贝养殖；当稚贝生长壳高至1cm以上时脱基，获得单体牡蛎装笼移至自然海区养成，获得群体a约2000个。

四倍体近江牡蛎群体b的诱导：①三倍体诱导：解剖200个性腺成熟的近江牡蛎速生选育系F4亲本，用生物显微镜分出雌(43个)雄(67个)；筛选30对性腺发育最好的雌雄亲本，分别挤出精、卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当50％受精卵发育第一极体时，马上加入0.8mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测保留三倍体诱导率在90％以上的诱导组；发育至眼点幼虫时，投放牡蛎壳附着基，最后在海区养成。②四倍体诱导：解剖性腺成熟的三倍体近江牡蛎，利用流式细胞仪检测出倍性为3N的个体100个，通过生物显微镜观察，筛选出30个卵子发育良好的雌性3N个体作为母本；解剖60个性腺成熟的近江牡蛎速生选育系F4亲本，用生物显微镜辨别雌雄，选择性腺饱满、精子活力强的30个个体作为父本；分别挤出精、卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；在受精10min后，马上加入0.7mg/L细胞松弛素B，处理受精卵20min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测保留四倍体诱导率在80％以上的诱导组；发育至眼点幼虫时，投放薄膜附着基，附苗结束后移到上升流系统进行稚贝养殖；当稚贝生长壳高至1cm以上时脱基，获得单体牡蛎装笼移至自然海区养成，获得群体b约3000个。

(3)四倍体近江牡蛎速生选育系Gab：在近江牡蛎繁殖季节，以四倍体近江牡蛎群体a或群体b作为亲本，截取壳呈卵圆形、体重和壳长前10％的个体200个作为繁殖亲贝，采用流式细胞仪鉴定倍性均为4N。在水温25℃、盐度20条件下，通过人工授精方法获得D形幼虫，在室内育苗池中培育至眼点幼虫，投放聚乙烯塑料片作为附着基；当稚贝生长至2～3mm时，将聚乙烯塑料片分散放入上升流系统进行养殖；当稚贝生长至1cm以上时，采用脱基方法获得单体牡蛎，并将单体牡蛎装笼移至自然海区养成。采用相同方法进行连续2代四倍体群体选育，获得四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb。最后以四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb作为亲本进行群体间杂交，从而获得倍性稳定(四倍体率90％以上)的四倍体近江牡蛎速生选育系Gab。

(4)速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”新品系生产：将1000个近江牡蛎速生选育系F4个体和200个四倍体近江牡蛎速生选育系Gab个体移到室内亲贝培育池进行促熟(水温23℃，盐度20)，生物饵料为人工培育的金藻、角毛藻、小硅藻、扁藻等；当亲本性腺成熟后，通过流式细胞仪检测(4N)和生物显微镜观察获得四倍体近江牡蛎速生选育系Gab的雄性个体90个，备用；解剖950个近江牡蛎速生选育系F4个体，通过显微镜观察，挑选出雌性个体550个，备用；以Gab雄性个体为父本，以F4雌性个体为母本，进行杂交，具体从亲本中分别挤出精卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；在人工授精过程中，控制每个卵子周围有3-5个精子；受精后，将受精卵平均分到11口30m²育苗池中进行孵化，孵化密度20-30个/ml；发育至D形幼虫时，检测倍性(防止污染)，然后用400目筛绢网收集并获得D形幼虫2500g(约125亿D形幼虫)；将D形幼虫平均分到100口消毒好的30m²育苗池中进行幼虫培育，控制培育密度1～3个/ml；待幼虫发育至眼点幼虫时，投放水泥绳附着基，幼虫变态率30％以上；当稚贝生长至2～3mm时，移到自然海区进行暂养；海区暂养25天后进行人工分苗，再移到自然海区养成。

对比例1

在近江牡蛎繁殖季节，从山东沿海地区收集200个性腺成熟的近江牡蛎养殖和野生2～3龄群体。经过1个月室内水泥池促熟后，解剖近江牡蛎亲贝筛选出20对性腺发育最好的雌雄亲本，分别挤出精、卵。卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当50％受精卵发育第一极体时，马上加入0.8mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测保留三倍体诱导率在95％以上的实验组；发育至眼点幼虫时，投放牡蛎壳附着基，最后在海区养成，即为普通三倍体近江牡蛎对照组。

试验例1

将实施例1得到的三倍体近江牡蛎“世倍4号”与对比例1的普通三倍体近江牡蛎于海区养殖一周年后，统计平均全重、壳长、出肉率和存活率，具体结果见表1。

表1实施例1与对比例1普通三倍体近江牡蛎生长指标对比

由表1结果可知，经过海区1周年养殖后，“世倍4号”平均全重达71.54g，较对比例1普通三倍体近江牡蛎提高20.78％；“世倍4号”平均壳长7.62cm，较对比例1普通三倍体近江牡蛎提高19.62％；“世倍4号”平均出肉率19.68％，较对比例1普通三倍体近江牡蛎提高45.35％；“世倍4号”平均存活率86.50％，较对比例1普通三倍体近江牡蛎提高10.19％。

实施例2

(1)近江牡蛎速生选育系F选育：从广西、广东等沿海地区收集3000个近江牡蛎养殖和野生2～3龄群体，然后截取壳呈卵圆形、体重和壳长前10％的个体300个作为繁殖亲贝，所述繁殖亲贝的体重为220～300g，壳长为9～10cm，壳型卵圆形。在水温25℃、盐度20条件下，通过人工授精方法获得D形幼虫，在室内育苗池中培育至眼点幼虫，投放水泥绳作为附着基；当牡蛎稚贝生长至2～3mm时，移到自然海区进行养成。最后以相同选育目标、育苗技术和养成方法等，经过连续4代群体选育出近江牡蛎速生选育系F4。

(2)四倍体近江牡蛎群体a的诱导：解剖200个性腺成熟的近江牡蛎速生选育系F4亲本，用生物显微镜分出雌(72个)雄(56个)；筛选30对性腺发育最好的雌雄亲本，分别挤出精、卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；在受精10min后，马上加入0.6mg/L细胞松弛素B，处理受精卵20min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测D形幼虫，保留四倍体诱导率在60％以上的诱导组；幼虫发育至眼点幼虫时投放聚乙烯塑料片附着基(采用分段附苗筛选)，每天检测四倍体诱导率，当四倍体诱导率在60％以上时，移除前期投放聚乙烯塑料片重新投放新的聚乙烯塑料片附苗，直到诱导四倍体诱导率低于60％时结束附苗，将诱导率60％的聚乙烯塑料片分散并移到上升流系统进行稚贝养殖；当稚贝生长壳高至1cm以上时脱基，获得单体牡蛎装笼移至自然海区养成，获得群体a约5000个。

四倍体近江牡蛎群体b的诱导：①三倍体诱导：解剖200个性腺成熟的近江牡蛎速生选育系F4亲本，用生物显微镜分出雌(60个)雄(56个)；筛选30对性腺发育最好的雌雄亲本，分别挤出精、卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当50％受精卵发育第一极体时，马上加入0.6mg/L细胞松弛素B，处理受精卵45min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测保留三倍体诱导率在90％以上的诱导组；发育至眼点幼虫时，投放牡蛎壳附着基，最后在海区养成。②四倍体诱导：解剖性腺成熟的三倍体近江牡蛎，利用流式细胞仪检测出倍性为3N的个体150个，通过生物显微镜观察，筛选出30个卵子发育良好的雌性3N个体作为母本；解剖80个性腺成熟的近江牡蛎速生选育系F4亲本，用生物显微镜辨别雌雄，选择性腺饱满、精子活力强的30个个体作为父本；分别挤出精、卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；在受精8min后，马上加入0.7mg/L细胞松弛素B，处理受精卵15min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测保留四倍体诱导率在80％以上的诱导组；发育至眼点幼虫时，投放薄膜附着基，附苗结束后移到上升流系统进行稚贝养殖；当稚贝生长壳高至1cm以上时脱基，获得单体牡蛎装笼移至自然海区养成，获得群体b约8000个。

(3)四倍体近江牡蛎速生选育系Gab：在近江牡蛎繁殖季节，以四倍体近江牡蛎群体a或群体b作为亲本，截取壳呈卵圆形、体重和壳长前10％的个体500个作为繁殖亲贝，采用流式细胞仪鉴定倍性均为4N。在水温25℃、盐度20条件下，通过人工授精方法获得D形幼虫，在室内育苗池中培育至眼点幼虫，投放聚乙烯塑料片作为附着基；当稚贝生长至2～3mm时，将聚乙烯塑料片分散放入上升流系统进行养殖；当稚贝生长至1cm以上时，采用脱基方法获得单体牡蛎，并将单体牡蛎装笼移至自然海区养成。采用相同方法进行连续2代四倍体群体选育，获得四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb。最后以四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb作为亲本进行杂交，从而获得倍性稳定(四倍体率90％以上)的四倍体近江牡蛎速生选育系Gab。

(4)速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”新品系生产：将1500个近江牡蛎速生选育系F4个体和500个四倍体近江牡蛎速生选育系Gab个体移到室内亲贝培育池进行促熟(水温24℃，盐度19)，生物饵料为人工培育的金藻、角毛藻、小球藻、扁藻等；当亲本性腺成熟后，通过流式细胞仪检测(4N)和生物显微镜观察获得四倍体近江牡蛎速生选育系Gab的雄性个体250个，备用；解剖1400个近江牡蛎速生选育系F4个体，通过显微镜观察，挑选出雌性个体800个，备用；以Gab雄性个体为父本，以F4雌性个体为母本，进行杂交，具体从亲本中分别挤出精卵，卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；在人工授精过程中，控制每个卵子周围有3-5个精子；受精后，将受精卵平均分到16口30m²水泥池中进行孵化，孵化密度20-30个/ml；发育至D形幼虫时，检测倍性(防止污染)，然后用400目筛绢网收集并获得D形幼虫3000g(约150亿D形幼虫)；将D形幼虫平均分到120口消毒好的30m²育苗池中进行幼虫培育，控制培育密度1～3个/ml；待幼虫发育至眼点幼虫时，投放牡蛎壳附着基，幼虫变态率30％以上；当稚贝生长至2～3mm时，移到自然海区进行暂养；海区暂养20天后进行人工分苗，再移到自然海区养成。

对比例2

在近江牡蛎繁殖季节，从广西沿海地区收集200个性腺成熟的近江牡蛎养殖和野生2～3龄群体。经过1个月室内水泥池促熟后，解剖近江牡蛎亲贝筛选出20对性腺发育最好的雌雄亲本，分别挤出精、卵。卵子先用150目筛绢网过滤再用450目筛绢网收集，精子直接用450目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当50％受精卵发育第一极体时，马上加入0.8mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用含0.1％二甲基亚砜的海水浸泡20min；在水温25℃、盐度20条件下，将各组受精卵收集放入室内育苗池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测保留三倍体诱导率在95％以上的实验组；发育至眼点幼虫时，投放牡蛎壳附着基，最后在海区养成，即为普通三倍体近江牡蛎对照组。

试验例2

将实施例2得到的三倍体近江牡蛎“世倍4号”与对比例2的普通三倍体近江牡蛎于海区养殖一周年后，统计平均全重、壳长、出肉率和存活率，具体结果见表2。

表2实施例2与对比例2普通三倍体近江牡蛎生长指标对比

由表2结果可知，经过海区1周年养殖后，“世倍4号”平均全重达78.26g，较对比例2普通三倍体近江牡蛎提高30.04％；“世倍4号”平均壳长7.79cm，较对比例2普通三倍体近江牡蛎提高26.87％；“世倍4号”平均出肉率17.25％，较对比例2普通三倍体近江牡蛎提高39.34％；“世倍4号”平均存活率80.65％，较对比例2普通三倍体近江牡蛎提高12.09％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”的培育方法，其特征在于，包括：

(1)选择体重200-300g、壳长8-10cm、壳呈卵圆形的近江牡蛎作为亲本，进行定向选育，获得近江牡蛎速生选育系F；

(2)以F为亲本，抑制第一极体直接诱导得到四倍体近江牡蛎a；以以F为亲本，通过抑制第二极体诱导三倍体近江牡蛎，再抑制第一极体诱导得到四倍体近江牡蛎群体b；通过连续2代群体选育，分别获得四倍体近江牡蛎速生选育系Ga和Gb；

(3)将Ga和Gb杂交，获得倍性稳定的四倍体近江牡蛎速生选育系Gab；

(4)以Gab为父本、F作为母本进行倍性杂交，培育得到卵圆形速生三倍体近江牡蛎“世倍4号”。

2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤(1)所述近江牡蛎为2-3龄的二倍体近江牡蛎。

3.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤(1)所述定向选育的代数为4代以上。

4.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤(2)所述诱导方法为：采用细胞松弛素B处理受精卵后，用二甲基亚砜溶液浸泡。

5.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，所述细胞松弛素B体积浓度为0.6-0.8mg/L；所述细胞松弛素B抑制第一极体的时间为10min或15min；所述细胞松弛素B抑制第二极体的时间为30min或45min。

6.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，所述二甲基亚砜的体积浓度为0.05％～0.2％，浸泡的时间为15～25min。

7.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(2)中选育的标准为：体重200-300g、壳长8-10cm、壳呈卵圆形。