CN118388409B

CN118388409B - 一种hdac6/jnk3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂及其制备方法与应用

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Publication number: CN118388409B
Application number: CN202410617220.2A
Authority: CN
Inventors: 吴敬德; 牛浩乾; 刘靖倩; 薛浩宇
Original assignee: Shandong University
Current assignee: Shandong University
Priority date: 2024-05-17
Filing date: 2024-05-17
Publication date: 2025-08-12
Anticipated expiration: 2044-05-17
Also published as: CN118388409A

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂及其制备方法与应用。化学结构如式I所示：

Description

一种HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂及其制备方法与应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

目前，虽然已有被批准的用于缓解阿尔茨海默病(AD)症状的药物，但是这些药物并不能逆转病理进展。近两年针对Aβ寡聚体开发的阿杜那单抗和仑卡奈单抗能够有效地降低Aβ水平，不过需要注意的是，在服用该类药物后可能会出现淀粉样蛋白相关成像异常和精神错乱等不良反应，因而需要继续探索更加安全有效、副作用小的新型治疗手段。

单靶点药物治疗AD效果不佳，而通过结合不同靶点抑制剂的关键药效团，使得药物能同时抑制多种靶点从而产生协同作用。相比联合用药，它们具有更好的患者依从性和药代动力学参数，因而越来越多的药物化学家开始关注多靶点药物。然而，多靶点药物同时选择性地作用于两个或多个分子靶点的单一组分的药物，开发一款同时具有多个靶点活性且具有良好成药性的多靶点药物，在技术层面的难度远远高于联合用药，其难度包括：靶点组合的选择、药效团的选择以及药效团的拼接、融合等。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂及其制备方法与应用。本发明以吲唑母核作为表面识别基团(Cap)，使用异羟肟酸作为锌离子螯合基团(ZBG)，更换不同长度和类型的Linker合成了一系列化合物，可以作为HDAC6/JNK3双靶点抑制剂，从而有效治疗阿尔茨海默病。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

第一方面，一种HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂，其化学结构如式I所示：

其中，R为H或卤素；X为连接片段，所述连接片段选自、

HDAC6在阿尔兹海默症患者脑组织中过度表达，能够引起组蛋白去乙酰化导致染色体结构紧密无法正常转录，其次造成α微管蛋白去乙酰化影响线粒体正常运输，诱导产生氧自由基以及Tau蛋白高磷酸化聚集形成神经纤维缠结，产生神经毒性。JNK3主要在人脑内表达，并与认知障碍关系密切。经过研究表明，HDAC6和JNK3的激活会导致淀粉样蛋白异常分裂和Tau蛋白过度磷酸化。同时，HDAC6和JNK3还能够分别通过引起微管蛋白去乙酰化和c-Jun磷酸化导致神经细胞凋亡。另外，HDAC6抑制剂可以抑制JNK上游激酶MKK7的转录，并显著降低JNK和c-Jun的磷酸化水平。因此，本发明以HDAC6和JNK3作为双靶点。

基于HDAC6/JNK3双靶点，本发明以HDAC药效团模型，保留JNK3抑制剂25c的吲唑母核作为Cap，使用异羟肟酸作为ZBG，并通过连接片段连接合成了一系列化合物，可以作为HDAC6/JNK3双靶点抑制剂，从而有效治疗阿尔茨海默病。

在一些实施例中，R为H、F或Cl。

研究表明，连接片段的类型与化合物的HDAC混酶抑制活性有关，，在一些实施例中，所述连接片段选自研究表明，选择该连接片段时，具有更好的HDAC混酶抑制活性。更为具体地，化学结构式分别如所示：

具体地，选自下表所示化合物：

第二方面，一种本发明第一方面中所述HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂的制备方法，包括以原料1和原料2作为起始原料按照如下反应路线获得式I所示化合物的步骤；

在一些实施例中，原料1与原料2进行亲核取代反应生成中间体3，，中间体3脱除保护基团获得中间体4，中间体4与哌嗪-1-甲酸叔丁酯进行酰胺缩合反应生成中间体5，中间体5脱除保护基团获得中间体6，中间体6与羧酸衍生物酰胺缩合反应生成中间体7，中间体7在羟胺醇钾的甲醇溶液中生成异羟肟酸，即得式I所示化合物；

其中，羧酸衍生物的化学结构式为其中，X如上所述。

具体地，原料1与原料2在碘化钾和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)的作用下进行酰胺缩合反应生成中间体3。

具体地，脱除保护基团的反应在三氟乙酸的作用条件下进行。

具体地，中间体4与哌嗪-1-甲酸叔丁酯进行酰胺缩合反应在HOBT、EDC.HCl和NMM的作用条件下进行。

具体地，中间体6与羧酸衍生物酰胺缩合反应在HOBT、EDC.HCl和NMM的作用条件下进行。

第三方面，一种组合物，其包含本发明第一方面中所述的HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂或其药学上可接受的盐。

本发明中所述的“药学上可接受的盐”是指在可靠的医药评价范围内，化合物的盐类适于与人或较低等动物的组织相接触而无不适当的毒性、刺激及过敏反应等，具有相当合理的收益与风险比例，通常是水或油可溶的或可分散的，并可有效地用于其预期的用途。包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐，在这里是可做预期的用途并与式I化合物的化学性质相容的。适宜的盐的列表参见S.M.Birge等，J.Pharm.Sci.,1977,66,1-19页。

本发明所述的药物组合物，可以选自以下任意方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。

第四方面，一种药物制剂，其包含本发明第一方面所述的HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂或本发明第三方面所述的组合物，与至少一种药学上可接受的载体或辅料。

本发明所述的药物组合物通常安全、无毒且为生物学上所需要的，本发明中所述药学上可接受的载体或辅料是无毒且安全的，而且其与本发明所述化合物的组合也是无毒且安全的。本发明所述的药学上可接受的载体和辅料通常为本领域人员所熟知的，或者可由本领域技术人员根据实际情况能够确定的。合适的载体和辅料的实例包括葡萄糖、水、甘油、乙醇、丙二醇、玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、海藻酸、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠、交联羧甲基纤维素钠和淀粉羟乙酸钠等，聚山梨酯80、聚乙二醇300、聚乙二醇400、环糊精或其衍生物，比如(2-羟基丙基)-环糊精)和(2-羟基乙基)-环糊精，其又称为HPCD、聚乙二醇化蓖麻油、泊洛沙姆(比如泊洛沙姆407或188)；亲水载体、疏水载体，或其组合等。疏水载体包括，例如脂肪乳剂、脂质、聚乙二醇化磷脂、生物相容的聚合物、脂质球、脂质体、小囊泡、聚合物基质、颗粒等。此外，本领域技术人员理解的是，稀释剂包括在术语载体和辅料的范围之内。

载体或辅料在药物组合物中的含量可以是1wt％-98wt％，通常大约占到80wt％。为方便起见，局部麻醉剂、防腐剂、缓冲剂等可直接溶于载体中。

药物剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。

第五方面，一种本发明第一方面所述的HDAC6/JNK3双靶点抗阿尔茨海默症抑制剂或本发明第三方面所述的组合物或本发明第四方面所述的药物制剂在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

本发明的有益效果为：

本发明提供的化合物能够有效地抑制组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)和c-Jun氨基末端激酶(JNK3)的活性。同时，本发明提供的部分化合物还能够有效抑制Cu²⁺诱导的Aβ_1-42聚集，对PC12神经细胞的保护明显。

具体实施方式

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。

实施例1：式I化合物N1-N30和先导化合物25c的合成：

(1)中间体化合物6a,6b,6c的合成步骤：

试剂与条件：(i)KI，DIPEA，二氯甲烷，80℃；(ii)三氟乙酸，二氯甲烷，室温；(iii)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，HOBT，EDC.HCl，NMM，DMF，0℃至室温；(iv)三氟乙酸，二氯甲烷，室温。

步骤一：3a的合成。将4-(氯甲基)苯甲酸叔丁酯(1.87g，8.26mmol)添加至含有1H-吲唑-3-胺(1g，7.51mmol)、KI(124..7mg，0.751mmol)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA，2.91g，22.53mmol)的30mL DMF中，并将混合物在氮气保护下加热到80℃搅拌过夜，通过TLC监测反应。将乙酸乙酯(125mL)和水(100mL)加入到混合物中进行萃取，并分离有机层。再用乙酸乙酯(125mL×3)洗涤水层，合并有机层，用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。粗品经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1～4:1)纯化，得白色固体3a(1.25g，产率51.4％)。

步骤二：4a的合成。将CF₃COOH(0.7g，6.19mmol)滴加到含有中间体3a(0.4g，1.24mmol)的10mL二氯甲烷中，在室温下搅拌3-4小时。反应完成后，真空除去反应溶剂，得到粗产物，通过柱层析(DCM:MeOH＝30:1)纯化，得到白色固体4a(0.3g，产率90.9％)。

步骤三：5a的合成。将哌嗪-1-甲酸叔丁酯(69.8mg，0.38mmol)加到含有中间体4a(50mg，0.19mmol)、HOBT(32.9mg，0.24mmol)、EDC.HCl(46.6mg，0.24mmol)和NMM(83.3mg，0.82mmol)的10mL DMF中。在室温下搅拌4小时。然后，通过TLC监测反应，并添加乙酸乙酯(30mL)和水(60mL)。分离有机层，水层用乙酸乙酯(30mL×3)继续萃取；然后，合并有机层，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，真空浓缩，得到粗产物5a。

步骤四：6a的合成，无需纯化直接将中间体5a溶解于DCM(30mL)中，然后滴加TFA(68.1mg，0.59mmol)并在室温下搅拌2h。真空除去溶剂，加入适量饱和NaHCO₃水溶液调节pH值至5。然后用DCM(120mL×3)萃取反应溶液。合并有机层，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，真空浓缩，通过柱层析(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到白色固体6a(40mg，产率62.9％)。6b、6c的合成类似上述合成路线。

(2)式I化合物N1-N30和先导化合物25c的合成：

试剂与条件：(i)HOBT,EDC.HCl,NMM,DMF,0℃至室温；(ii)NH₂OK,MeOH，0℃至室温。

8-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-N-羟基-8-氧代辛酰胺(N1)

冰浴条件下，将中间体6a(0.15g，0.82mmol)、HOBT(0.144g，1.07mmol)、EDC.HCl(0.20g，1.07mmol)和NMM(0.47g，4.70mmol)加入到12mL DMF中搅拌活化半小时。然后将辛二酸单甲酯(0.33g，0.99mmol)添加到上述溶液中，室温反应2h。然后，通过TLC监测反应完全后，加入乙酸乙酯(20mL)和水(50mL)。分离有机层，水层用乙酸乙酯(20mL×3)继续萃取；然后，合并有机层，用饱和食盐水(30mL×3)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，真空浓缩，得到粗产物7a-X1,ESI-MS m/z:506.31[M+H]⁺，504.57[M-H]^-。

制备NH₂OK溶液：首先制备A液，将14.18g(0.25mol)的氢氧化钾研磨成粉末，然后在冰浴条件下用35ml甲醇溶液超声振荡溶解；然后制备B液，将11.68g(0.16mol)的NH₂OH·HCl溶于60mL甲醇中；最后在冰浴条件下缓慢将A液加入到B液中，室温条件搅拌15min，过滤得到的羟胺醇钾溶液，放于4℃冰箱中保存。

将8mL NH₂OK溶液加入7a-X1中，然后使用HPLC(MeOH:H₂O＝3:2)进行纯化，旋蒸干燥得到30mg白色固体N1，产率为41％，熔点88-90℃。ESI-MS m/z:507.21[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.39(s,1H),10.32(s,1H),8.65(s,1H),7.75(d,J＝8.2Hz,1H),7.50–7.41(m,2H),7.40–7.33(m,2H),7.22(d,J＝2.8Hz,2H),6.90(s,1H),6.61(s,1H),4.55–4.48(m,2H),3.47(s,8H),2.29(s,2H),2.01–1.88(m,2H),1.46(s,4H),1.24(s,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ171.36,169.78,169.59,150.15,143.39,142.28,134.27,127.80,127.45,126.80,120.50,117.90,114.09,109.83,46.85,32.70,28.92,28.89,25.49,25.07.

3-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基环戊烷-1-甲酰胺(N2)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和3-(乙氧羰基)环戊烷-1-羧酸为原料，得到95mg白色固体产物，产率50.10％，熔点194-196℃。ESI-MS m/z:491.28[M+H]⁺，488.35[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.33(s,1H),10.36(s,1H),8.65(s,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(d,J＝7.9Hz,2H),7.30(d,J＝7.8Hz,2H),7.17(d,J＝3.7Hz,2H),6.89–6.80(m,1H),6.56(t,J＝6.1Hz,1H),4.45(d,J＝6.1Hz,2H),3.44(s,8H),2.95(s,1H),2.31(d,J＝37.4Hz,1H),1.80(t,J＝10.4Hz,2H),1.64(dd,J＝19.7,11.9Hz,4H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ173.24,171.71,170.80,169.75,150.13,143.38,142.26,134.25,127.79,127.45,126.78,120.49,117.88,114.08,109.82,46.84,42.21,40.87,34.16,29.84,29.36.

4-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基环己烷-1-甲酰胺(N3)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和4-(甲氧羰基)环己烷-1-羧酸为原料，得到85mg白色固体产物，产率55.40％，熔点188-190℃。ESI-MS m/z:505.36[M+H]⁺，503.42[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.40(s,1H),10.35(d,J＝17.1Hz,1H),8.64(d,J＝23.4Hz,1H),7.79–7.72(m,1H),7.51–7.44(m,2H),7.37(dd,J＝8.1,2.3Hz,2H),7.24(t,J＝2.9Hz,2H),6.91(d,J＝8.2Hz,1H),6.63(s,1H),4.52(d,J＝6.6Hz,2H),3.47(s,8H),2.68(s,1H),1.90(d,J＝30.8Hz,1H),1.67(t,J＝13.5Hz,3H),1.47(s,3H),1.40–1.19(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ173.85,172.42,169.71,150.13,143.40,142.26,134.23,127.78,127.45,126.78,120.49,117.88,114.08,109.82,46.83,28.68,28.56,26.42,26.28.

4-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基苯甲酰胺(N4)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和4-(甲氧羰基)苯甲酸为原料，得到60mg白色固体产物，产率55.40％，熔点178-180℃。ESI-MS m/z:499.34[M+H]⁺，497.43[M-H]^-.1H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.37(s,1H),11.30(s,1H),9.11(s,1H),7.80(d,J＝7.8Hz,2H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(t,J＝8.2Hz,4H),7.37(d,J＝7.7Hz,2H),7.26–7.20(m,2H),6.90(ddd,J＝7.9,4.7,2.9Hz,1H),6.60(t,J＝6.1Hz,1H),4.51(d,J＝6.1Hz,2H),3.65(s,4H),3.36(s,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ169.81,169.00,150.12,143.48,142.24,138.57,134.09,127.78,127.51,126.81,120.50,117.90,114.05,109.83,46.80.

3-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基苯甲酰胺(N5)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和3-(甲氧羰基)苯甲酸为原料，得到50mg白色固体产物，产率52.30％，熔点170-172℃。ESI-MS m/z:499.34[M+H]⁺，497.42[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.38(s,1H),11.20(s,1H),9.13(s,1H),7.82(d,J＝7.2Hz,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,2H),7.53(d,J＝8.1Hz,2H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),7.37(d,J＝7.6Hz,2H),7.23(d,J＝3.9Hz,2H),6.90(dt,J＝8.0,3.9Hz,1H),6.61(t,J＝6.1Hz,1H),4.51(d,J＝6.1Hz,2H),3.64(s,8H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ169.82,169.08,163.83,150.13,143.46,142.26,136.20,134.13,133.59,130.02,129.13,128.51,127.79,127.49,126.78,125.88,120.49,117.88,114.08,109.82,46.82.

4-(2-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-N-羟基苯甲酰胺(N6)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和2-(4-(甲氧羰基)苯基)乙酸为原料，得到15mg白色固体产物，产率22.10％，熔点142-144℃。ESI-MS m/z:513.35[M+H]⁺，511.34[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.39(s,1H),11.15(s,1H),9.01(s,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.68(d,J＝7.9Hz,2H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),7.35(d,J＝7.9Hz,2H),7.28(d,J＝7.9Hz,2H),7.25–7.21(m,2H),6.91(ddd,J＝7.8,4.5,3.2Hz,1H),6.61(t,J＝6.0Hz,1H),4.51(d,J＝6.1Hz,2H),3.78(s,2H),3.52(s,8H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ169.80,169.23,150.13,143.39,142.26,139.45,134.20,131.48,129.60,127.79,127.44,127.32,126.79,120.50,117.89,114.08,109.82,46.83.

2-(4-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基乙酰胺(N7)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸为原料，得到15mg白色固体产物，产率20.10％，熔点150-152℃。ESI-MS m/z:513.25[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.39(s,1H),10.68(s,1H),8.87(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,2H),7.37(d,J＝8.9Hz,4H),7.32(s,2H),7.24(s,2H),6.91(s,1H),6.61(s,1H),4.52(d,J＝6.0Hz,2H),3.51(d,8H),3.24–3.18(m,2H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.80,169.66,167.06,150.14,143.45,142.27,138.25,134.22,134.14,129.43,127.78,127.58,127.50,126.79,120.49,117.89,114.08,109.83,46.83.

6-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基烟酰胺(N8)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和5-(甲氧羰基)吡啶甲酸为原料，得到35mg白色固体产物，产率30.20％，熔点128-130℃。ESI-MS m/z:500.30[M+H]⁺,498.52[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.38(s,1H),8.89(s,1H),8.22(d,J＝7.6Hz,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,2H),7.38(d,J＝7.8Hz,2H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H),7.23(d,J＝3.8Hz,2H),6.91(dt,J＝7.9,3.8Hz,1H),6.60(q,J＝6.6Hz,1H),4.51(t,J＝5.3Hz,2H),3.70(s,4H),3.45(s,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.82,166.80,162.24,155.99,150.14,147.29,143.46,142.27,136.41,134.12,127.78,127.51,127.26,126.79,123.50,120.49,117.89,114.08,109.83,46.86.

(E)-3-(4-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(N9)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和(E)-4-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯甲酸为原料，得到20mg白色固体产物，产率50.30％，熔点172-174℃。ESI-MSm/z:525.37[M+H]⁺,523.30[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.38(s,1H),10.82(s,1H),9.11(s,1H),7.75(d,J＝8.2Hz,1H),7.63(d,J＝7.9Hz,2H),7.48(q,J＝7.0Hz,5H),7.38(d,J＝7.8Hz,2H),7.23(t,J＝3.0Hz,2H),6.91(s,1H),6.62(d,J＝6.5Hz,1H),6.52(d,J＝15.8Hz,1H),4.52(d,J＝5.9Hz,2H),3.61(s,8H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ169.80,169.20,150.13,143.47,142.26,136.57,134.13,128.21,127.93,127.78,127.50,126.78,120.86,120.49,117.88,114.08,109.82,46.82.

(E)-3-(3-(4-(4-(((1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(N10)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6a和(E)-3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯甲酸为原料，得到20mg白色固体产物，产率51.20％，熔点168-170℃。ESI-MSm/z:525.33[M+H]⁺,523.86[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.38(s,1H),10.81(s,1H),9.12(s,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.63(d,J＝7.9Hz,2H),7.49(d,J＝6.6Hz,1H),7.46(s,2H),7.44(s,2H),7.37(d,J＝7.8Hz,2H),7.23(d,J＝3.8Hz,2H),6.95–6.86(m,1H),6.62(t,J＝6.1Hz,1H),6.52(d,J＝15.8Hz,1H),4.52(d,J＝6.1Hz,2H),3.62(s,8H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ169.79,169.21,162.84,150.13,143.47,142.26,137.70,136.62,134.13,128.20,127.91,127.78,127.50,126.78,120.93,120.49,117.88,114.08,109.82,46.82.

8-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-N-羟基-8-氧代辛酰胺(N11)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和辛二酸单甲酯为原料，得到13mg白色固体产物，产率15.20％，熔点80-82℃。ESI-MS m/z:541.56[M+H]⁺,539.38[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.85(s,1H),10.32(s,1H),8.66(s,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,2H),7.36(d,J＝9.4Hz,2H),7.20(d,J＝4.6Hz,2H),6.92(d,J＝5.5Hz,1H),6.07(s,1H),4.54(d,J＝6.1Hz,2H),3.47(s,8H),2.29(s,2H),1.92(t,J＝7.4Hz,2H),1.47(d,J＝8.8Hz,4H),1.27–1.13(m,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ171.34,169.77,169.59,149.06,143.55,143.25,134.22,127.93,127.64,127.46,125.75,118.33,110.88,109.27,46.92,32.70,28.92,28.89,25.49,25.07.

3-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基环戊烷-1-甲酰胺(N12)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和3-(乙氧羰基)环戊烷-1-羧酸为原料，得到75mg白色固体产物，产率65.20％，熔点138-140℃。ESI-MS m/z:525.26[M+H]⁺,523.41[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H),10.41(s,1H),8.69(s,1H),7.47(d,J＝7.4Hz,2H),7.36(dd,J＝8.4,2.1Hz,2H),7.20(dd,J＝5.1,2.2Hz,2H),6.92(dd,J＝5.4,2.7Hz,1H),6.06(t,J＝6.1Hz,1H),4.54(d,J＝6.0Hz,2H),3.50(s,8H),3.02(s,1H),2.42(s,1H),1.91–1.82(m,2H),1.73(d,J＝21.0Hz,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ173.26,171.73,169.77,149.06,143.55,143.25,134.21,127.93,127.65,127.46,125.76,118.33,110.88,109.28,46.93,42.22,40.89,34.16,29.84,29.37.

4-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基环己烷-1-甲酰胺(N13)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和4-(甲氧羰基)环己烷-1-羧酸为原料，得到95mg白色固体产物，产率55.60％，熔点160-162℃。ESI-MS m/z:539.28[M+H]⁺,536.36[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.85(s,1H),10.37(s,1H),8.66(s,1H),7.51–7.45(m,2H),7.37(s,1H),7.35(d,J＝2.3Hz,2H),7.22–7.20(m,1H),6.93(dd,J＝5.3,2.8Hz,1H),6.08(t,J＝6.1Hz,1H),4.54(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,8H),1.87(s,1H),1.67(t,J＝13.2Hz,4H),1.47(s,3H),1.39–1.30(m,2H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ173.86,172.44,169.73,149.05,143.55,143.26,134.20,127.92,127.64,127.47,125.75,118.33,110.88,109.27,46.93,28.68,28.57,26.43,26.29.

4-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基苯甲酰胺(N14)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和4-(甲氧羰基)苯甲酸为原料，得到20mg白色固体产物，产率17.20％，熔点174-176℃。ESI-MS m/z:533.25[M+H]⁺,530.32[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.85(s,1H),11.33(s,1H),9.16(s,1H),7.81(d,J＝7.7Hz,2H),7.48(t,J＝8.1Hz,4H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),7.24–7.16(m,2H),6.92(dd,J＝5.5,2.7Hz,1H),6.08(s,1H),4.54(d,J＝6.1Hz,2H),3.64(s,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.82,169.02,149.05,143.55,143.33,138.58,134.08,127.92,127.65,127.52,125.75,118.33,110.87,109.28,46.93.

3-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基苯甲酰胺(N15)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和3-(甲氧羰基)苯甲酸为原料，得到15mg白色固体产物，产率45.20％，熔点162-164℃。ESI-MS m/z:533.21[M+H]⁺,531.32[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H),11.40(s,1H),9.15(s,1H),7.89–7.80(m,1H),7.76(s,1H),7.53(d,J＝8.6Hz,2H),7.47(d,J＝7.6Hz,2H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),7.21(t,J＝2.9Hz,2H),6.92(dt,J＝5.1,2.8Hz,1H),6.05(d,J＝7.3Hz,1H),4.57–4.50(m,2H),3.54(d,J＝76.6Hz,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.83,169.10,149.05,143.55,143.32,136.20,134.10,129.13,127.92,127.65,127.51,125.86,125.75,118.33,110.87,109.28,46.93.

4-(2-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-N-羟基苯甲酰胺(N16)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和2-(4-(甲氧羰基)苯基)乙酸为原料，得到25mg白色固体产物，产率35.20％，熔点138-140℃。ESI-MS m/z:547.17[M+H]⁺,545.30[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H),11.28(s,1H),9.02(s,1H),7.68(d,J＝7.8Hz,2H),7.46(d,J＝7.4Hz,2H),7.35(dd,J＝8.3,2.2Hz,2H),7.28(d,J＝7.8Hz,2H),7.24–7.18(m,2H),6.92(dt,J＝5.1,2.3Hz,1H),6.06(t,J＝6.3Hz,1H),4.53(d,J＝6.1Hz,2H),3.78(s,2H),3.51(s,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.81,169.24,149.05,143.54,143.27,139.47,134.15,131.46,129.62,127.94,127.64,127.46,127.32,125.75,118.33,110.86,109.28,46.91.

2-(4-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基乙酰胺(N17)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸为原料，得到45mg白色固体产物，产率55.12％，熔点150-152℃。ESI-MS m/z:547.18[M+H]⁺,545.38[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H),10.71(s,1H),8.87(s,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),7.37(s,2H),7.36–7.28(m,4H),7.25–7.15(m,2H),6.92(dd,J＝5.3,2.8Hz,1H),6.05(t,J＝6.3Hz,1H),4.54(d,J＝6.1Hz,2H),3.67(s,2H),3.57(s,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.81,169.66,167.06,149.06,143.56,143.30,138.26,134.23,134.11,129.43,127.92,127.64,127.59,127.52,125.75,118.33,110.88,109.28,46.94.

6-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基烟酰胺(N18)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和5-(甲氧羰基)吡啶甲酸为原料，得到45mg白色固体产物，产率15.20％，熔点180-182℃。ESI-MS m/z:534.43[M+H]⁺,532.35[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(s,1H),11.45(s,1H),9.29(s,1H),8.89(s,1H),8.21(d,J＝8.1Hz,1H),7.68(d,J＝8.1Hz,1H),7.47(d,J＝7.6Hz,2H),7.37(d,J＝7.8Hz,2H),7.20(dd,J＝5.2,2.4Hz,2H),6.91(d,J＝5.4Hz,1H),6.05(s,1H),4.57–4.50(m,2H),3.70(s,3H),3.45(s,5H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.82,166.80,155.99,149.05,147.29,143.55,143.30,136.40,134.09,127.92,127.64,127.52,125.75,123.49,118.33,110.88,109.27,46.93.

(E)-3-(4-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(N19)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和(E)-4-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯甲酸为原料，得到31mg白色固体产物，产率35.20％，熔点190-192℃。ESI-MSm/z:559.32[M+H]⁺,557.44[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,2H),7.46(t,J＝8.6Hz,5H),7.37(d,J＝7.9Hz,2H),7.25–7.18(m,2H),6.92(dd,J＝5.3,2.7Hz,1H),6.52(d,J＝15.8Hz,1H),6.06(s,1H),4.53(d,J＝6.1Hz,2H),3.61(s,8H).¹³CNMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.81,169.22,149.05,143.55,143.31,136.63,134.10,128.20,127.91,127.65,127.51,125.75,118.32,110.87,109.28,46.92.

(E)-3-(3-(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(N20)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6b和为(E)-3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯甲酸原料，得到75mg白色固体产物，产率65.30％，熔点188-190℃。ESI-MSm/z:559.20[M+H]⁺,557.39[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.85(s,1H),10.78(s,1H),9.26(d,J＝94.5Hz,1H),7.65(d,J＝7.6Hz,1H),7.60(s,1H),7.56–7.44(m,4H),7.39(dd,J＝15.1,7.6Hz,3H),7.21(d,J＝4.4Hz,2H),6.97–6.87(m,1H),6.52(d,J＝15.8Hz,1H),6.08(s,1H),4.54(d,J＝6.1Hz,2H),3.56(d,J＝67.7Hz,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.83,169.23,162.91,149.06,143.56,143.32,137.93,136.77,135.63,134.09,129.58,128.98,128.29,127.92,127.66,127.52,126.45,125.76,120.71,118.33,110.88,109.28,46.93.

8-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-N-羟基-8-氧代辛酰胺(N21)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和辛二酸单甲酯为原料，得到40mg白色固体产物，产率45.10％，熔点78-80℃。ESI-MS m/z:525.39[M+H]⁺，523.49[M-H]^-.1HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),10.32(s,1H),8.65(s,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),7.36(d,J＝7.8Hz,2H),7.26–7.16(m,1H),7.05(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(dd,J＝10.7,7.8Hz,1H),6.31–6.24(m,1H),4.49(d,J＝6.1Hz,2H),3.48(s,8H),2.30(s,2H),1.93(t,J＝7.5Hz,2H),1.51–1.43(m,4H),1.25(s,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ171.35,169.79,169.59,157.36,155.72,148.01,144.98,143.27,134.18,128.16,128.11,127.73,127.41,106.42,103.14,102.58,102.46,46.89,32.70,28.91,28.88,25.48,25.07.

3-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基环戊烷-1-甲酰胺(N22)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和3-(乙氧羰基)环戊烷-1-羧酸为原料，得到45mg白色固体产物，产率30.10％，熔点118-120℃。ESI-MS m/z:509.20[M+H]⁺，506.41[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),10.41(s,1H),8.70(s,1H),7.51–7.44(m,2H),7.36(dd,J＝8.1,2.1Hz,2H),7.21(q,J＝7.6Hz,1H),7.05(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.64(ddd,J＝10.2,7.6,2.2Hz,1H),6.32–6.24(m,1H),4.52–4.46(m,2H),3.51(s,8H),3.02(s,1H),2.43(s,1H),1.87(t,J＝10.1Hz,2H),1.78–1.65(m,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ173.25,171.73,169.79,157.37,155.73,145.05,144.99,143.28,134.19,128.16,128.10,127.74,127.41,106.41,103.30,103.16,102.58,102.46,46.91,42.23,40.89,34.16,29.84,29.37.

4-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基环己烷-1-甲酰胺(N23)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和4-(甲氧羰基)环己烷-1-羧酸为原料，得到25mg白色固体产物，产率25.41％，熔点130-132℃。ESI-MS m/z:523.17[M+H]⁺，520.41[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),10.35(s,1H),8.65(s,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,2H),7.36(d,J＝7.6Hz,2H),7.21(d,J＝7.0Hz,1H),7.05(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(s,1H),6.28(s,1H),4.49(d,J＝6.1Hz,2H),3.48(s,8H),3.22–3.17(m,3H),1.73–1.62(m,3H),1.46(s,3H),1.35(t,J＝12.4Hz,1H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ173.88,172.45,169.76,157.37,155.73,148.02,145.06,143.29,134.17,128.11,127.73,127.41,106.42,103.16,102.58,102.46,46.90,28.68,28.56,26.43,26.29.

4-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基苯甲酰胺(N24)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和4-(甲氧羰基)苯甲酸为原料，得到55mg白色固体产物，产率55.40％，熔点168-170℃。ESI-MS m/z:517.22[M+H]⁺，515.32[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),11.32(s,1H),9.15(s,1H),7.81(d,J＝7.8Hz,2H),7.53–7.44(m,4H),7.36(d,J＝7.8Hz,2H),7.21(td,J＝8.0,5.1Hz,1H),7.05(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(dd,J＝10.7,7.6Hz,1H),6.29(t,J＝5.8Hz,1H),4.49(d,J＝6.1Hz,2H),3.65(s,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.85,169.03,157.37,155.73,148.02,145.03,143.36,138.59,134.05,128.16,127.74,127.52,127.46,106.42,103.29,103.16,102.59,102.47,46.90.

3-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基苯甲酰胺(N25)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和3-(甲氧羰基)苯甲酸为原料，得到35mg白色固体产物，产率50.30％，熔点148-150℃。ESI-MS m/z:517.22[M+H]⁺，515.47[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),11.30(s,1H),9.13(s,1H),7.83(s,1H),7.77(s,1H),7.56(s,2H),7.48(d,J＝7.9Hz,2H),7.37(d,J＝7.6Hz,2H),7.21(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝8.1Hz,1H),6.64(t,J＝9.2Hz,1H),6.27(s,1H),4.49(d,J＝6.1Hz,2H),3.44(s,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.86,169.07,157.37,155.72,148.02,145.05,143.35,136.23,134.07,133.47,130.11,129.16,128.55,128.16,127.75,127.45,125.90,106.42,103.15,102.58,102.46,46.90.

4-(2-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-N-羟基苯甲酰胺(N26)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和2-(4-(甲氧羰基)苯基)乙酸为原料，得到50mg白色固体产物，产率52.30％，熔点144-146℃。ESI-MS m/z:531.18[M+H]⁺，529.42[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),11.16(s,1H),9.00(s,1H),7.68(d,J＝7.8Hz,2H),7.47(d,J＝7.6Hz,2H),7.40–7.32(m,2H),7.29(d,J＝7.8Hz,2H),7.21(d,J＝6.9Hz,1H),7.05(d,J＝8.1Hz,1H),6.64(t,J＝8.9Hz,1H),6.27(t,J＝6.3Hz,1H),4.49(d,J＝6.1Hz,2H),3.79(s,2H),3.69–3.38(m,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.83,169.24,157.37,155.72,148.02,145.00,143.29,139.49,134.14,131.44,129.62,128.16,128.11,127.74,127.40,127.34,106.40,103.29,103.16,102.59,102.47,46.91.

2-(4-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基乙酰胺(N27)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸为原料，得到35mg白色固体产物，产率40.05％，熔点138-140℃。ESI-MS m/z:531.28[M+H]⁺，529.41[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),10.70(s,1H),8.88(s,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,2H),7.40–7.29(m,6H),7.21(td,J＝8.0,5.0Hz,1H),7.05(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(dd,J＝10.8,7.6Hz,1H),6.29(t,J＝6.1Hz,1H),4.49(d,J＝6.2Hz,2H),3.64(d,J＝27.4Hz,8H),3.33(s,2H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.84,169.67,167.10,157.37,155.73,148.02(d,J＝2.4Hz),145.06,143.33,138.24,134.23,134.08,129.43,128.16,128.11,127.74,127.59,127.46,106.43,103.29,103.16,102.59,102.47,46.91.

6-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)-N-羟基烟酰胺(N28)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和5-(甲氧羰基)吡啶甲酸为原料，得到15mg白色固体产物，产率20.10％，熔点190-192℃。ESI-MS m/z:518.13[M+H]⁺,516.36[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),11.46(s,1H),9.31(s,1H),8.89(s,1H),8.22(d,J＝8.1Hz,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,2H),7.38(d,J＝7.5Hz,2H),7.21(q,J＝7.2Hz,1H),7.05(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(t,J＝9.4Hz,1H),6.27(s,1H),4.49(d,J＝6.0Hz,2H),3.70(s,2H),3.48(d,J＝20.9Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.83,166.80,157.36,155.98,155.72,148.01,147.29,143.34,136.40,134.06,128.10,127.73,127.46,123.49,106.42,103.28,103.15,102.58,102.46,46.90.

(E)-3-(4-(4-(4-(4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(N29)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和(E)-4-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯甲酸为原料，得到65mg白色固体产物，产率60.03％，熔点182-184℃。ESI-MSm/z:543.17[M+H]⁺,541.37[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.74(s,1H),10.82(s,1H),9.11(s,1H),7.63(d,J＝7.7Hz,2H),7.50(s,1H),7.47(d,J＝7.3Hz,4H),7.37(d,J＝7.7Hz,2H),7.26–7.15(m,1H),7.05(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(dd,J＝10.6,7.8Hz,1H),6.52(d,J＝15.8Hz,1H),6.27(s,1H),4.49(d,J＝6.1Hz,2H),3.61(s,8H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.83,169.22,157.37,155.72,148.01,143.35,136.59,134.07,128.20,127.92,127.74,127.46,120.88,106.42,103.29,103.15,102.58,102.46,46.90.

(E)-3-(3-(4-(4-(((4-氟-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-羰基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(N30)

标题化合物的合成同目标化合物N1，以中间体6c和(E)-3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯甲酸为原料，得到35mg白色固体产物，产率55.80％，熔点168-170℃。ESI-MSm/z:543.18[M+H]⁺,541.48[M-H]^-.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.74(s,1H),10.77(s,1H),9.10(s,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(s,1H),7.55–7.44(m,4H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,2H),7.24–7.16(m,1H),7.05(d,J＝8.2Hz,1H),6.64(dd,J＝10.8,7.9Hz,1H),6.52(d,J＝15.8Hz,1H),6.28(d,J＝6.6Hz,1H),4.49(d,J＝6.1Hz,2H),3.63(s,8H).¹³CNMR(150MHz,DMSO-d₆)δ169.85,169.22,162.99,157.36,155.72,148.00,145.05,144.99,143.35,138.02,136.76,135.60,134.05,129.59,128.99,128.30,128.16,128.11,127.74,127.46,120.67,106.41,106.40,103.28,103.14,102.58,102.46,46.89.

(4-(4-(((4-氯-1H-吲唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)(2,4-二氯苯基)甲酮(25c)

冰浴条件下，将中间体6b(0.086g，0.45mmol)、HOBT(0.079g，0.59mmol)、EDC.HCl(0.11g，0.59mmol)和NMM(0.20g，1.99mmol)加入到12mL DMF中搅拌半小时。将2,4-二氯苯甲酸(0.086g，0.99mmol)添加到溶液中，室温反应2h。通过TLC监测反应，并添加乙酸乙酯(20mL)和水(50mL)。分离有机层，水层用乙酸乙酯(20mL×3)继续萃取；然后，合并有机层，用盐水(30mL×3)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，真空浓缩，得到粗产物,然后柱层析纯化得到纯度为97％的白色固体产物25c，熔点为188-190℃。ESI-MS m/z:543.17[M+H]⁺，541.36[M-H]^-。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(s,1H),7.73(s,1H),7.52(d,J＝8.3Hz,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,3H),7.36(d,J＝7.6Hz,2H),7.23–7.14(m,2H),6.91(dt,J＝5.2,2.6Hz,1H),6.05(s,1H),4.56–4.50(m,2H),3.68(s,3H),3.45(s,3H),3.20(s,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ169.83,165.41,149.03,143.52,143.36,134.88,134.82,133.97,130.85,129.88,129.57,128.41,127.93,127.63,127.53,125.74,118.32,110.84,109.26,46.89.

实施例2：通式(I)所示化合物体外HDACs抑酶活性实验

采用HeLa细胞核提取物(主要含HDAC1和HDAC2)为酶源，对所有的目标化合物进行了初步的HDACs酶抑制活性筛选。HDAC荧光分析方法(两步法)，快速、方便检测HDAC活性，操作简单。第一步，HDAC荧光底物(含一个乙酰化的赖氨酸侧链-Boc-Lys(acetyl)-AMC)用含HDAC活性的样本孵育，使底物去乙酰基化，激活底物。第二步，用胰酶水解Boc-Lys-AMC，产生AMC这一荧光基团(或发色团)，在激发波长/发射波长(390nm/460nm)测定荧光强度。

设立空白组、100％对照组、化合物组和阳性药组，每组平行三次：

空白组：60μL的空白HDACs buffer先37℃孵育5min，加入40μL底物后，在37℃下反应30min，然后加入100μL Trypsin solution，并在37℃下再孵育20min，于390nm/460nm测定荧光强度。

100％对照组：50μL的空白HDACs buffer与10μL HDACs酶液混合，预先37℃孵育5min，加入40μL底物后，在37℃下反应30min，然后加入100μL Trypsin solution终止上述反应，并在37℃下反应20min，于390nm/460nm测定荧光强度。

化合物组：50μL含有不同浓度化合物的HDACs buffer与10μL HDACs酶液混合，预先37℃孵育5min，加入40μL底物后，在37℃下反应30min，然后加入100μL Trypsinsolution终止上述反应，并在37℃下反应20min，于390nm/460nm测定荧光强度。

阳性药组：选用SAHA、PXD101为阳性对照药物，方法同化合物组。

抑制率(％)＝(A₁-A₂)/(A₁-A₀)×100％

A₀:空白对照荧光强度；A₁:100％荧光强度；A₂:化合物荧光强度。

根据公式计算抑制率，使用Graphpad Prism 8进行非线性曲线拟合，进一步得到待测化合物的IC₅₀值，结果见表1。

表1目标化合物和阳性药的体外HDACs抑酶活性

^a数值表示方式：三次实验平均值±标准差(mean±SD)。

^b化合物在5μM下的抑制率。

实验结论分析：

从实验结果看到，所设计的30个化合物的HDACs混酶活性与Linker类型有关。拥有正己基和苯乙烯基linker的化合物(N1、N9、N10、N11、N19、N20、N21、N29、N30)IC₅₀达到亚微摩尔级，具有较好的HDAC混酶抑制活性。其中N19、N20、N30的活性表现最佳，IC₅₀分别为311.1nM、146.6nM、182.6nM。

实施例3：N19、N20和N30的体外HDAC6抑酶活性实验

采用HDAC6为酶源，对部分化合物进行了抑酶活性测试，采用HDAC荧光分析方法(两步法)，快速、方便检测HDAC活性，操作简单。第一步，HDAC6荧光底物(含一个乙酰化的赖氨酸侧链-Boc-Lys(acetyl)-AMC)用含HDAC6活性的样本孵育，使底物去乙酰基化，激活底物。第二步，用胰酶水解Boc-Lys-AMC，产生AMC这一荧光基团(或发色团)，在激发波长/发射波长(360nm/460nm)测定荧光强度。

空白组：40μL的空白HDAC6 buffer先30℃孵育1h，加入10μL的20μM底物后，在30℃下反应2h，然后加入含35mg/mL胰蛋白酶和5μM曲古抑菌素A(TSA)的10μL溶液，并在30℃下再孵育30min，于360nm/460nm测定荧光强度。

100％对照组：20μL的空白HDAC6 buffer与20μL HDAC6酶液混合，预先30℃孵育5min，加入10μL的20μM底物后，在30℃下反应30min，然后加入含35mg/mL胰蛋白酶和5μM曲古抑菌素A(TSA)的10μL溶液终止上述反应，并在30℃下反应30min，于360nm/460nm测定荧光强度。

化合物组：20μL含有不同浓度化合物的HDACs buffer与20μL HDAC6酶液混合，预先30℃孵育1h，加入10μL的20μM底物后，在30℃下反应2h，加入含35mg/mL胰蛋白酶和5μM曲古抑菌素A(TSA)的10μL溶液终止上述反应，并在30℃下反应30min，于360nm/460nm测定荧光强度。

阳性药组：选用ACY-1215为阳性对照药物，方法同化合物组。

抑制率(％)＝[(A¹-A⁰)-(A²-A³)]/(A¹-A⁰)×100％

A⁰:100％荧光强度。A¹:100％荧光强度。A²:化合物荧光强度。A³:空白荧光强度。

根据公式计算抑制率，使用Graphpad Prism 8进行非线性曲线拟合，进一步得到待测化合物的IC₅₀值，结果见表2。

表2部分化合物的HDAC6 IC₅₀

实验结论分析：

从实验结果看到，N19、N20和N30的HDAC6亚型IC₅₀值均在纳摩尔范围内，IC₅₀分别为111.2、144.6和66.76nM。

实施例4：N19、N20和N30的体外JNK3抑酶活性实验

实验原理：

放射性生化酶测定方法可以与各种类型的底物相兼容，包括多肽、蛋白质、脂质和小分子。通过测量γ磷酸盐从³³P标记的ATP转移到底物上的情况，得到体外酶活性数据。

实验方法：

化合物对JNK3激酶抑制测试方法测定按照Lance Ultra法进行，ATP浓度为Km，以Staurosporine(抗生素AM-2282或STS)为参比化合物。实验采用三个复孔。首先，用100％DMSO将化合物稀释至反应中最终所需最高抑制剂浓度的100倍作为母液。然后，将100μL100％ DMSO添加到同一96孔板中的6个空孔中，用于空白对照和标准对照，该板被标记为源板。将40μL化合物从源板转移到新的384孔Echo板作为中间板。将JNK3添加到1×激酶缓冲液中，制备2倍1.2nM激酶混合溶液。将10μL激酶混合溶液转移至标准对照孔中，然后添加10μL 1×激酶缓冲液至空白对照孔。将ULight-4E-BP1肽和4.2μM ATP添加到1×激酶反应缓冲液中，制备2倍底物混合溶液。然后，将10μL底物溶液添加到测定板的每个孔中，在室温下孵育30分钟。制备2倍Eu-anti-phospho-4E-BP1抗体检测溶液，并将20μL检测液添加到测定板中并在室温下孵育60分钟。最后在Envision上处理数据，结果见表3。

表3部分化合物的JNK3 IC₅₀

实验结论分析：

本实施例选取了HDACs和HDAC6抑酶活性较好的3个化合物进行JNK3抑酶活性测试。如表3所示，所选化合物N19和N20对JNK3的抑酶活性与阳性药25c的活性相当。而在HDAC6抑酶活性中最好的N30 JNK3抑酶活性急剧下降，这可能由于氟原子的极化率和原子半径较氯原子更小，无法和JNK3疏水口袋I中的氨基酸残基形成有效卤键导致。

实施例5：通式(I)所示部分化合物抑制Cu²⁺诱导的Aβ_1-42聚集实验

实验原理：

实验利用硫黄素T(ThT)做荧光显色剂，硫黄素T可与Aβ_1-42聚集状态结构中的β折叠结构结合，该结合物在激发波长/发射波长＝450/490nm时可被检测，且荧光强度与结合物的浓度成正比。因此，通过荧光数值可以评估化合物对Aβ_1-42自聚集的抑制能力。

实验方法：

在96孔荧光板不同组中分别加入待测化合物，阳性药和Aβ_1-42溶液，保持每孔总体积为80μL，具体加入体积和反应时间如下：阳性药组：阳性药氯碘羟喹(40μL 40μM)，Cu²⁺(20μL 40μM)和Aβ_1-42溶液(20μL 40μM)；实验组：待测化合物(40μL 40μM)，Cu²⁺(20μL 40μM)和Aβ_1-42溶液(20μL 40μM)；阴性组：Cu²⁺(20μL 40μM)，Aβ_1-42溶液(20μL 40μM)和40μL 1×PBS缓冲液；空白组：80μL的1×PBS。每个测试浓度下至少设置3个重复孔。加毕，用封口膜将96孔板四周密封，置于37℃恒温摇床振摇24h。振摇结束，每孔加入120μL硫磺素T的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，振摇10min，在激发波长/发射波长＝450/490nm处测荧光值。

荧光强度与抑制率计算公式：

抑制率＝(阴性组荧光值—实验组荧光值)/(阴性组荧光值—空白组荧光值)×100％。

表4部分化合物对Cu²⁺诱导的Aβ_1-42聚集抑制率

实验结论分析：

所选取的化合物中，N11、N19、N20、N29和N30有优于阳性药氯碘羟喹的抑制作用，抑制率分别为63.62％、76.90％、77.23％、74.93％和64.23％。

实施例6：通式(I)所示部分化合物H₂O₂损伤的PC12细胞神经保护实验

实验原理：

细胞培养过程中加入一定浓度H₂O₂损伤PC12细胞使其死亡。在1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐存在下，WST-8可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成水溶性的甲瓒，在培养基中显橙色，而死细胞不能被染色。

实验方法：

使用完全培养基将PC12细胞稀释1×10⁵/mL，接种于96孔板，每孔100μL，实验组、H₂O₂损伤组和阴性组加入含细胞的100μL完全培养基，空白组加入不含细胞的100μL完全培养基，置于细胞培养箱中孵育24h。结束后，吸除培养基。实验组中加入100μL的50μM化合物，设置6个复孔；H₂O₂损伤组、阴性组和空白组分别加入100μL完全培养基。加毕，置于细胞培养箱中孵育1h。向实验组和H₂O₂损伤组中加入100μL 1600μM H₂O₂培养基溶液，阴性组和空白组分别加入100μL完全培养基。加毕，置于细胞培养箱中，在37℃、5％ CO₂条件下孵育12h。使用100μL排枪吸除培养基，每孔再避光加入含10％ CCK-8的100μL基础培养基，置于细胞培养箱中孵育2h，于450nm处测试吸光度值。

保护率(％)＝(实验组吸光值-H₂O₂损伤组吸光值)/(阴性组吸光值-H₂O₂损伤组吸光值)×100％。

表5部分化合物对H₂O₂损伤的PC12细胞神经保护率

实验结论分析：

化合物N30表现出与阳性药Trolox相当的神经细胞保护活性，保护率为38.96％。此外，N20也具有一定保护活性，保护率为32.72％。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种抗阿尔茨海默症抑制剂，其特征是，其化学结构如式I所示：

其中，R为H或卤素；X为连接片段，所述连接片段选自、、，从而分别形成如下所示的结构：

、、。

2.如权利要求1所述的抗阿尔茨海默症抑制剂，其特征是，R为H、F或Cl。

3.如权利要求1所述的抗阿尔茨海默症抑制剂，其特征是，选自下表所示化合物：

。

4.一种权利要求1所述的抗阿尔茨海默症抑制剂的制备方法，其特征是，包括以原料1和原料2作为起始原料按照如下反应路线获得式I所示化合物的步骤；

，

其中，R和X如权利要求1所示。

5.如权利要求4所述的抗阿尔茨海默症抑制剂的制备方法，其特征是，原料1与原料2进行亲核取代反应生成中间体3，中间体3脱除保护基团获得中间体4，中间体4与哌嗪-1-甲酸叔丁酯进行酰胺缩合反应生成中间体5，中间体5脱除保护基团获得中间体6，中间体6与羧酸衍生物进行酰胺缩合反应生成中间体7，中间体7在羟胺醇钾的甲醇溶液中生成异羟肟酸，即得式I所示化合物；

其中，羧酸衍生物的化学结构式为，其中，X如权利要求1所述。

6.一种组合物，其特征是，包含权利要求1所述的抗阿尔茨海默症抑制剂或其药学上可接受的盐。

7.一种药物制剂，其特征是，包含权利要求1所述的抗阿尔茨海默症抑制剂或权利要求6所述的组合物，与至少一种药学上可接受的载体或辅料。

8.一种权利要求1~3任一所述的抗阿尔茨海默症抑制剂或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的药物制剂在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。