CN118161435A - 一种含滨海剌芹组织培养物的祛纹抗皱组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于梳妆类配制品领域，具体涉及一种含滨海剌芹组织培养物的祛纹抗皱组合物。所述组合物包括组分有：滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、棕榈酰三肽‑1、棕榈酰四肽‑7、乙酰基六肽‑8、生育酚、甘草酸二钾；还包括有：蜀葵花提取物和水柏枝提取物。本发明公开的祛纹抗皱组合物具有一定的紧致皮肤、祛纹抗皱的效果，滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、棕榈酰三肽‑1、棕榈酰四肽‑7、乙酰基六肽‑8、生育酚(维生素E)和甘草酸二钾，与植物提取组合物蜀葵花提取物和水柏枝提取物的复配，具有良好地协同增效的作用。

Description

一种含滨海剌芹组织培养物的祛纹抗皱组合物

技术领域

本发明属于梳妆类配制品领域，具体涉及一种含滨海剌芹组织培养物的祛纹抗皱组合物。

背景技术

愈伤组织原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。泛指植物中由薄壁细胞组成且未形成特定结构的组织，通常出现于植物的伤口处。现代研究发现，植物愈伤组织中含有多种活性功能性成分，且由于其安全性和可靠性较好，因而已在医药和化妆品等领域都得到较好的接受和应用。例如，烟草愈伤组织提取物具有抗痤疮、治疗青光眼的功效，天山雪莲愈伤组织提取物具有抗肿瘤的功效，苍耳愈伤组织提取物具有抑菌的功效，高山红景天愈伤组织具有抗氧化的功效。

然而当前对于愈伤组织提取物的研究程度还较为有限，尚未有愈伤组织提取物与其他组分联用以起到增效作用的相关报道。因此，本发明希望提供一种含滨海剌芹愈伤组织培养物滤液，且性能优异的组合物。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明目的在于提供一种含滨海剌芹愈伤组织培养物滤液的组合物及其应用。所述组合物通过植物愈伤组织提取物与其他组分间的配合，产生一定协同增效作用，取得了显著的祛纹抗皱、抗氧化、抗衰老功效。

为实现上述目的，本发明公开了以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种组合物，按质量份数计，包括以下组分：

进一步地，按质量份数计，包括以下组分：

更进一步地，还包括组分：蜀葵花提取物和水柏枝提取物。

进一步优选地，按质量份数计，所述蜀葵花提取物为0.12-0.15份；所述水柏枝提取物为0.5-1份。

第二方面，本发明提供了一种祛纹抗皱的皮肤驻留剂，包含有第一方面所述的组合物。

进一步地，按质量百分比计，第一方面所述的组合物在所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂中的添加量为0.17％-1.7％。

进一步地，所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂还包含有乳化剂、防腐剂、保湿剂、pH调节剂、溶剂。

更进一步地，所述乳化剂为丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、C14-22醇、C12-20烷基葡糖苷中的至少一种。

更进一步地，所述保湿剂为甘油、透明质酸钠、角鲨烷、丁二醇、1，2-己二醇中的至少一种；

所述防腐剂为对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、乙基己基甘油中的至少一种；

所述pH调节剂为精氨酸、氢氧化钠、磷酸氢二钠中的至少一种。

第三方面，本发明提供了第二方面所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取一定量的防腐剂、保湿剂、乳化剂和溶剂加热至65-85℃溶解，搅拌、均质和混合，保温≥20min，得混合物；

(2)将步骤(1)的混合物降温至40-50℃，并将所述权利要求1-4任一所述的组合物加入到混合物中，溶解、搅拌、混合，加入pH调节剂，调节pH值，得所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂。

本发明中：

滨海剌芹愈伤组织培养物滤液能够有效地促进皮肤胶原蛋白、弹性纤维和其他活力蛋白质自然生成。

棕榈酰三肽-1能够推动细胞外质如Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白，弹性蛋白，构造糖蛋白如层粘连蛋白和纤维连接蛋白的合成，推动创口恢复，促进皮肤表层升级重建，使皮肤越来越紧实和富有弹性，同时有助于皮肤经过紫外线照射后的修复。

棕榈酰四肽-7与棕榈酰三肽-1、乙酰基六肽-8复合使用，具有协同增效作用，有效降低外界伤害和紫外引起的角质细胞、纤维母细胞中白细胞介素IL-6生成，降低炎症反应，保护肌肤弹性稳定，延缓皮肤衰老。

乙酰基六肽-8又称为阿基瑞林、类肉毒杆菌素、涂抹式肉毒杆菌等，是由六个氨基酸组合而成的小分子蛋白质，其功效主要是祛除皱纹、促进胶原蛋白生成、修复受损肌肤、改善细胞新陈代谢。

生育酚是一种重要的酚类抗氧化剂，可以防止脂质过氧化，保护细胞膜的完整性，减少紫外线对皮肤的伤害，具有抗衰老的作用，同时生育酚可以促进皮肤的新陈代谢，改善皮肤水分和弹性。

蜀葵花提取物中的主要化学成分有黄酮及黄酮苷类化合物，其中黄酮苷类化合物有槲皮素、金丝桃苷、杨梅素-3’-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3’-葡萄糖苷等，黄酮苷类化合物是一种非常优秀的抗氧化成分，比维生素C和维生素E有更高的抗氧化能力，可以帮助清除自由基，延缓衰老。

水柏枝提取物对平衡肌肤油脂分泌、减轻痘痘和粉刺等具有积极作用，同时还具有增强透皮吸收率的效果。水柏枝提取物与蜀葵花提取物复配使用后，在等同用量的情况下，能够提高皮肤对组合物滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、乙酰基六肽-8的祛纹抗皱效果。

本发明的有益效果：

1.本发明提供的含有滨海剌芹愈伤组织培养物滤液的祛纹抗皱组合物具有良好的紧致皮肤、祛纹抗皱的效果；

2.本发明中的滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、乙酰基六肽-8、生育酚(维生素E)和甘草酸二钾，与植物提取组合物蜀葵花提取物和水柏枝提取物的复配，具有良好地协同增效的作用，提高了皮肤驻留剂配方的祛纹抗皱效果。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

具体实施方式中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到；具体实施方式中所提及的百分比，如无特殊说明，均为质量百分比。

本发明中：

滨海剌芹愈伤组织培养物滤液为滨海剌芹(ERYNGIUM MARITIMUM)愈伤组织培养物滤液，INCI名称为ERYNGIUM MARITIMUM CALLUS CULTURE FILTRATE，购自法国SEPPIC。

海茴香愈伤组织培养物滤液为海茴香(CRITHMUM MARITIMUM)愈伤组织培养物滤液，INCI名称为CRITHMUM MARITIMUM CALLUS CULTURE FILTRATE，购自法国SEPPIC。

水柏枝提取物为水柏枝(MYRICARIA GERMANICA)提取物，INCI名称为MYRICARIAGERMANICA EXTRACT，购自陕西四海生物科技有限公司。

蜀葵花提取物为蜀葵(ALTHAEAROSEA)花提取物，INCI名称为ALTHAEAROSEAFLOWER EXTRACT，购自陕西四海生物科技有限公司。

其它原料均可通过市售得到。

祛纹抗皱组合物的制备

按表1中的质量份数称取原料，然后搅拌混合均匀，得祛纹抗皱组合物。

表1祛纹抗皱组合物制备原料

注：表中原料单位为质量份数，“-”表示未添加。

含有祛纹抗皱组合物的皮肤驻留剂的制备

步骤(1)，按表2质量份数取丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、甘油、透明质酸钠、甘草酸二钾和水，搅拌加热至85℃，保温20分钟，搅拌溶解完全，得混合物a；

步骤(2)，取C14-22醇、C12-20烷基葡糖苷、角鲨烷和生育酚(维生素E)，加热至80℃，搅拌溶解完全，保温10分钟，得混合物b；

步骤(3)，取混合物a和混合物b加入乳化锅，在80℃搅拌、均质至完全乳化均匀，得混合物c；

步骤(4)，将混合物c降温至65℃，加入丁二醇、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至完全分散均匀，得混合物d；

步骤(5)，将混合物d降温至45℃，依次加入棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、乙酰基六肽-8、滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、蜀葵花提取物和水柏枝提取物，搅拌至完全混合均匀，得混合物e；

步骤(6)，将混合物e降温至38℃，加入预先用水溶解好的精氨酸，调节pH值至≥6.5，得所述祛纹抗皱的皮肤驻留剂。

表2皮肤驻留剂的原料

性能测试：

抑制弹性蛋白酶试验

本试验以猪胰弹性蛋白酶为测试对象，用N-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-p-硝基苯胺(AAAPVN)作为底物。猪胰弹性蛋白酶可以水解AAAPVN，其水解产物可引起420nm波长处吸光度增加，用酶标仪测定其吸光度，可评价待测样品的紧致抗皱功效。

1.溶液配制

(1)待测样品：分别取上述制备的祛纹抗皱组合物1-7。

(2)配置Tris-HCl缓冲液(0.1M PH＝8.0)：称取2.42gTris于烧杯中，加入200mL的超纯水，溶解完全后用浓HCl调PH至8.0。

(3)阳性对照茶多酚溶液的配置(1mg/ml)：称取5mg的茶多酚，用5ml Tris-HCl缓冲液进行溶解。

(4)配置底物溶液AAAPVN(2mM)：称取4.51mg N-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-p-硝基苯胺，用5ml Tris-HCl缓冲液进行溶解。

(5)配置猪胰弹性蛋白酶液(0.171U/mL)：取280μl溶于10ml Tris-HCl缓冲液中。

2.分组及加样

试验分为4组，分别是待测样品组、阳性对照组、空白对照组、模型对照组，同一组别同一浓度下设4个复孔。各溶液添加量如表3所示。

表3试验分组

3.测定方法

室温放置反应15min，用酶标仪在420nm处测定其吸光度。

4.计算式

式中：A₀-空白对照孔吸光度的平均值；

A₁-样品孔吸光度的平均值；

A₂-模型对照孔吸光度的平均值。

5.统计方法

利用SPSS22.0统计软件包进行统计学分析，对测试区域的测量值进行描述性统计。计算分析数值的变化，对照组与样品组之间的差异。如测试数据为正态分布，则采用独立T检验方法进行统计分析；如测试数据为非正态分布，则采用秩和检验方法进行统计分析。统计方法均采用双尾检验，检验水准α＝0.05。

6.实验结果

表4猪胰弹性蛋白酶抑制率结果

促进I型胶原蛋白合成试验

本试验以成纤维细胞为检测对象，通过UVA辐照建立细胞光老化损伤模型，并检测待测样品作用后I型胶原蛋白(Collagen I)含量的变化，评价待测样品的紧致抗皱功效。

(1)接种：按1×10⁴个/孔的接种密度接种细胞至96孔板，放置培养箱孵育过夜(37℃、5％CO₂)。

(2)UVA照射：PBS清洗细胞后，根据表5实验分组，对有UVA照射的组别进行30J/cm²的UVA辐照。

(3)配液：分别选择组合物1-7为待测样品溶液，以TGF-β(浓度100ng/mL)为阳性对照进行实验。每孔加样100μL，每组设置3个复孔。给药完成后将96孔板放置在37℃培养箱中避光孵育24h。

表5实验分组

(4)细胞上清收集：给药24h后取出96孔板，分别收集各样品组对应的细胞上清液至离心管中，1000rpm离心10min，收集上清置于1.5mL离心管中，-20℃储存备用。

(5)ELISA试剂盒测定细胞上清中I型胶原蛋白浓度：测试前30min取出试剂盒及待测样品，放置于室温后使用，测试操作严格按照试剂盒说明书操作。

表6I型胶原蛋白含量检测结果

抗氧化测试(DPPH自由基清除)

(1)试验设计

DPPH用无水乙醇配制成2×10^-4mol/L的溶液，组合物1-7作为待检测液，制备待检测液、无水乙醇、DPPH溶液各2mL若干份，分别将混匀后室温下放置30分钟，于波长517nm处测定吸光度得Ai，每个样品平行测定3次，取平均值。

以Vc作为阳性对照，以无水乙醇代替DPPH测定吸光度值作为对照Aj空白，以DPPH溶液和无水乙醇混合测吸光度Ac。

按下式(1)计算各待测样品对DPPH自由基的清除率，并记录至下表7。

清除率(％)＝(1-(Ai-Aj)/Ac)×100％...........(1)

式中：Ai为2mL待检测液+2mLDPPH试剂混合液的吸光度；Aj为2mL待检测液+2mL无水乙醇混合液的吸光度；Ac为2mLDPPH溶液+2mL无水乙醇混合液的吸光度。

表7DPPH清除率

组别	DPPH清除率
		组合物1	73.14％
组合物2	76.41％
		组合物3	72.37％
组合物4	43.63％
		组合物5	66.34％
组合物6	63.71％
		组合物7	32.11％

结果分析

1.根据测试结果可知，祛纹抗皱组合物具有一定的紧致皮肤、祛纹抗皱的效果；

2.根据测试结果可知，祛纹抗皱组合物中的滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、乙酰基六肽-8、生育酚(维生素E)和甘草酸二钾，与植物提取组合物蜀葵花提取物和水柏枝提取物之间具有共同促进皮肤修复的作用，协同作用下能够有效提高抑制弹性蛋白酶的活性的能力，促进皮肤胶原蛋白的合成的作用，增强对自由基离子的清除作用；

3.根据测试结果可知，组合物1、2、3中，组合物2的功效成分(滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、乙酰基六肽-8、生育酚(维生素E)、甘草酸二钾、蜀葵花提取物和水柏枝提取物)的添加量相比于其它组合物具有最优性能表现。

皮肤驻留剂实施例1-4效果测试

稳定性测试：

1、耐热测试：恒温培养箱调节到40℃，将前述制取的实施例分别作为4组样品，每个组样品取三支装于透明玻璃瓶中，装样量为20ml/瓶，封口后置于恒温培养箱内，三个月后取出，恢复至室温，观察外观变化。

2、耐寒测试：恒温培养箱调节到-10℃，将前述4组样品，每组样品取三支装于透明玻璃瓶中，装样量为20ml/瓶，封口后置于恒温培养箱内，三个月后取出，恢复至室温，观察外观变化。

3、常温测试：将前述4组样品，每组样品取三支装于透明玻璃瓶中，装样量为20ml/瓶，封口后常温下放置6个月后，观察乳液的外观变化。

耐热测试、耐寒测试、常温测试均未观察到分层、析出、变色等现象，保持原来外观。

人体皮肤斑贴测试：

将前述制备的实施例1-4参照《2022化妆品安全技术规范》中的人体皮肤斑贴实验。

分别于30min(待压痕消失后)、24h和48h按标准观察皮肤反应，并记录观察结果，见表5。

表8人体安全性测试结果

编号	30min	24h	48h
				实施例1	0级，30人	0级，30人	0级，30人
实施例2	0级，30人	0级，30人	0级，30人
				实施例3	0级，30人	0级，30人	0级，30人
实施例4	0级，30人	0级，30人	0级，30人

化妆品效果主观评价测试：

受试对象：选择40名健康志愿者，性别为女性，年龄为45±2岁，分成4组(即实施例1-4制备的皮肤驻留剂)。

使用方法：每天早晚在面部使用所制备的液体化妆品，连续使用4周。测试期间，志愿者不可改变原有的面部清洁方式和习惯。除此之外，不可使用除测试产品外的其他化妆品。

评价方法：主观评价法，评价面部皱纹改变情况，无改变记为×，轻微改变记为①，皱纹减少较多②，皱纹减少明显记为③，结果如表9所示。

表9主观评价结果

结果分析：

根据实验结果可知，实施例1相比于实施例2-4，祛皱效果明显，说明本发明提供的组合物滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、乙酰基六肽-8、生育酚(维生素E)和甘草酸二钾，与植物提取组合物蜀葵花提取物和水柏枝提取物的复配，具有良好地协同增效的作用，提高了整体配方的祛纹抗皱效果。

最后所应当说明的是，以上实施例和对比例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，按质量份数计，包括以下组分：

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，按质量份数计，包括以下组分：

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，还包括组分：蜀葵花提取物和水柏枝提取物。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，按质量份数计，所述蜀葵花提取物为0.12-0.15份；所述水柏枝提取物为0.5-1份。

5.一种祛纹抗皱的皮肤驻留剂，其特征在于，包含有权利要求1-4任一所述的组合物。

6.根据权利要求5所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂，其特征在于，按质量百分比计，所述权利要求1-4任一所述的组合物在所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂中的添加量为0.17％-1.7％。

7.根据权利要求5所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂，其特征在于，还包含有乳化剂、防腐剂、保湿剂、pH调节剂、溶剂。

8.根据权利要求7所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂，其特征在于，所述乳化剂为丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、C14-22醇、C12-20烷基葡糖苷中的至少一种。

9.根据权利要求7所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂，其特征在于，所述保湿剂为甘油、透明质酸钠、角鲨烷、丁二醇、1，2-己二醇中的至少一种；

所述防腐剂为对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、乙基己基甘油中的至少一种；

所述pH调节剂为精氨酸、氢氧化钠、磷酸氢二钠中的至少一种。

10.根据权利要求5-9任一所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取一定量的防腐剂、保湿剂、乳化剂和溶剂加热至65-85℃溶解，搅拌、均质和混合，保温≥20min，得混合物；

(2)将步骤(1)的混合物降温至40-50℃，并将所述权利要求1-4任一所述的组合物加入到混合物中，溶解、搅拌、混合，加入pH调节剂，调节pH值，得所述的祛纹抗皱的皮肤驻留剂。