CN117919200B - 含有可电离脂质的肺部递送系统、其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供含有可电离脂质的肺部递送系统、其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明的含有可电离脂质的肺部递送系统包括可电离脂质、辅助脂质和生物活性物质，不含聚合物缀合脂质，所述含有可电离脂质的肺部递送系统可以将生物活性物质递送至肺部。所述肺部递送系统具有粒径均一、安全性高的特点，能够将治疗剂高效地递送至肺部，且在雾化前后，颗粒性质如粒径、粒径分布系数、电位、包封率等颗粒特性均保持不变，为肺部疾病的治疗提供了安全有效的解决方案，具有广阔的应用前景。

Description

含有可电离脂质的肺部递送系统、其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及含有可电离脂质的肺部递送系统、其制备方法和应用。

背景技术

肺部给药，也被称为吸入给药，主要通过空腔吸入，经过咽喉进入呼吸道，最终到达呼吸道深处或肺部，起到局部作用或全身治疗作用。相比其他给药途径，肺部给药具有吸收面积大、肺泡上皮细胞膜薄、渗透性高的优点；吸收部位的血流丰富，酶的活性相对较低，能够避免肝脏首过效应，因此肺部给药的生物利用度高。对于在胃肠道易被破坏或具有较强肝首过效应的药物，如蛋白或多肽类药物，肺部给药可显著提高生物利用率。

呼吸上皮细胞内衬于呼吸道，其主要功能是湿润呼吸道，保护气道免受潜在的病原体、感染和组织损伤，以及促进气体交换。气道上皮细胞的功能障碍可导致许多病症，包括例如哮喘、慢性阻塞性肺病和囊性纤维化等。将有效载荷递送至呼吸上皮细胞可用于诱导针对感兴趣的抗原的免疫并调节气道上皮细胞的功能，例如替代缺失或突变的蛋白质或增加或降低此类细胞的功能性。以囊性纤维化为例，据统计，囊性纤维化在高加索人出生时的发病率为2500至3500人中有1例，而目前大多数囊性纤维化的治疗仅通过开具抗生素、抗炎药、支气管扩张剂、解充血药、高蛋白和高脂肪饮食及维生素补充剂的处方以控制症状，但不能完全或可靠地控制疾病。

因此，迫切需要提出一种新的疗法来治疗气道上皮细胞功能障碍相关的病症或其他与肺部相关的疑难疾病。吸入式雾化制剂可以将药物直接递送至肺部，大大提高药物在肺部的富集浓度并减少系统毒性，这是呼吸系统给药的先天优势。然而，吸入制剂研发，特别是吸入式核酸LNP制剂，面临着可雾化性差的挑战，即因无法耐受雾化过程中的剪切破坏作用而导致雾化时核酸药物泄露、雾化后粒度和分散度明显增加、雾化后转染效率明显下降等。因此，研发雾化吸入型LNP核酸药物的首要关键是克服雾化过程对LNP的破坏作用。目前关于雾化吸入型LNP核酸药物的专利和文献寥寥无几，而且大部分的报道是通过改变LNP的四个组分配比，以筛选出雾化前后粒度、PDI和包封率变化较小的处方，但雾化后的粒径通常都会大幅度增加，包封率也大大降低。

专利CN116348147A公布了用于将有效载荷分子递送至气道上皮的组合物，所述组合物组成包括由可电离脂质、磷脂、结构脂质、PEG-脂质、多核酸或多肽形成的纳米颗粒核以及位于核外表面的阳离子剂。其说明书中批露采用给药程序B(仅鼻部气溶胶暴露)即使用震动网筛雾化器和限定的入口空气流速生成气溶胶暴露于动物口鼻，说明书中提到在每次给药之前和之后在给药口处监测气溶胶的空气动力学粒径分布，并评价可呼吸的气溶胶粒径目标，对于大鼠为1-4μm，推测该专利所提供的组合物经雾化后粒径增大至微米级别。

专利CN115708818B公开了一种用于雾化吸入脂质纳米粒的通用型处方，所述处方组成包括脂质纳米分散体系及表面张力下降调节剂组成。虽然该专利提供的脂质纳米颗粒通用型处方可以控制雾化前后粒径及包封率保持不变，但需要额外引入有机溶剂或表面活性剂作为表面张力调节剂，以降低雾化过程中对LNP的破坏，但这些有机溶剂或表面活性剂会增强对细胞的毒性，降低细胞的耐受性。

尽管脂质纳米颗粒在递送mRNA疫苗方面取得了成功，但含有吸入的mRNA疗法治疗肺部疾病仍具有挑战性。因为LNP在雾化过程中容易由于剪切应力而分解，导致无法有效递送mRNA。因此，迫切需要提高LNP结构的稳定性，以满足雾化给药的需求。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供含有可电离脂质的肺部递送系统、其制备方法和应用。本发明的含有可电离脂质的肺部递送系统包括可电离脂质、辅助脂质和生物活性物质，不含聚合物缀合脂质，所述含有可电离脂质的肺部递送系统通过雾化给药的方式递送至肺部。所述肺部递送系统具有粒径均一、安全性高的特点，能够将治疗剂高效地递送至肺部，且在雾化前后，颗粒性质如粒径、粒径分布系数、电位、包封率等颗粒特性均保持不变，为肺部疾病的治疗提供了安全有效的解决方案。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了含有可电离脂质的肺部递送系统，包括可电离脂质、辅助脂质和生物活性物质，所述含有可电离脂质的肺部递送系统不含聚合物缀合脂质；所述可电离脂质选自第一可电离脂质、第二可电离脂质和第三可电离脂质中的至少一种；

所述第一可电离脂质选自含有通式(1)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体；

其中，R₁、R₂、R₃彼此独立地是H、C_5-40直链或支链的烷基、C_5-40直链或支链的烯基、C_5-40直链或支链的炔基、含有1-3个侧链的3-6元饱和或部分不饱和环烃基、或者含有1-3个侧链的6-10元芳族基团；所述侧链独立地选自C_10-30直链或支链烷基、C₁₀-30直链或支链烯基、C_10-30直链或支链炔基；条件是R₁、R₂、R₃至多1个是H；

M选自-NR₄R₅、含有至少一个氮原子的饱和或部分不饱和3-6元杂环基、含有至少一个氮原子的6-10元杂芳基，所述的杂环基、杂芳基未被取代或被一个或多个-OH、羧基、氨基、氧代基或卤素取代；

R₄、R₅彼此独立地是H、C_1-6直链或支链烷基、C_2-6直链或支链烯基或者C_2-6直链或支链炔基，所述的C_1-6直链或支链烷基、C_2-6直链或支链烯基或C_2-6直链或支链炔基未被取代或被一个或多个-OH、羧基、氨基酰胺基、脒基、胍基或卤素取代；

G₁、G₂、G₃彼此独立地是-O-、-S-、-NR₆-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝O)O-、-CH(OH)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR₆-、-NR₆C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR₆C(＝O)O-、-OC(＝O)NR₆-、-NR₆C(＝O)NR₁₃-、-C(＝O)S-、-C(＝S)S-、-SC(＝S)-、-SC(＝O)-、-OC(＝O)S-、-SC(＝O)O-、-SC(＝O)S-、-OS(＝O)₂O-、-S(＝O)₂O-、-OS(＝O)₂-、-S(＝O)₂-、-S(＝O)₂-NR₆-、-NR₆-S(＝O)₂-、-P(＝O)(OR₆)O-、-OP(＝O)(OR₆)-或-OP(＝O)(OR₆)O-；其中各R₆、R₁₃彼此独立地选自H、羟基、C_1-30直链或支链的烷基或环烷基、C_2-30直链或支链的烯基；

L₁选自-X₁-或-(CR₇R₈)_m-X₁-，其中各X₁独立地选自-O-、-S-、-NR₁₄-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR₁₄-、-NR₁₄C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR₁₄C(＝O)O-、-OC(＝O)NR₁₄-、-NR₁₄C(＝O)NR₁₅-、-C(＝O)S-、-C(＝S)S-、-SC(＝S)-、-SC(＝O)-、-OC(＝O)S-、-SC(＝O)O-、-SC(＝O)S-、-OS(＝O)₂O-、-S(＝O)₂O-、-OS(＝O)₂-、-S(＝O)₂-、-S(＝O)₂-NR₁₄-、-NR₁₄-S(＝O)₂-、-P(＝O)(OR₁₄)O-、-OP(＝O)(OR₁₄)-或-OP(＝O)(OR₁₄)O-；其中，m是2-6的整数，R₇、R₈彼此独立地是H、羟基、卤素、C_1-6的直链或支链烷基或环烷基、C_2-6的直链或支链的烯基，各R₁₄、R₁₅彼此独立地选自H、C_1-30直链或支链的烷基或环烷基、C_2-30直链或支链的烯基；

L₂是-(CR₉R₁₀)_n-或者-(CR₉R₁₀)_n-X₂-(CR₁₁R₁₂)_k-，其中X₂选自-O-、-S-、-NR₁₆-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR₁₆-、-NR₁₆C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR₁₆C(＝O)O-、-OC(＝O)NR₁₆-、-NR₁₆C(＝O)NR₁₇-、-C(＝O)S-、-C(＝S)S-、-SC(＝S)-、-SC(＝O)-、-OC(＝O)S-、-SC(＝O)O-、-SC(＝O)S-、-OS(＝O)₂O-、-S(＝O)₂O-、-OS(＝O)₂-、-S(＝O)₂-、-S(＝O)₂-NR₁₆-、NR₁₆-S(＝O)₂-、-P(＝O)(OR₁₆)O-、-OP(＝O)(OR₁₆)-或-OP(＝O)(OR₁₆)O-；n是1-6的整数；k是1-6的整数；R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂彼此独立地是H、羟基、卤素、C_1-6的直链或支链烷基或环烷基、C_2-6的直链或支链的烯基，各R₁₆、R₁₇彼此独立地选自H、C_1-30直链或支链的烷基或环烷基、C_2-30直链或支链的烯基；

其中R₄至R₁₇中所述的烷基、环烷基、烯基未被取代或被一个或多个选自羟基、巯基、氨基、取代氨基、卤素的基团取代；

所述盐不包括季铵盐。

在一项优选的实施方案中，所述生物活性物质包括DNA、RNA、蛋白质、肽和小分子化合物中的至少一种。

在一项优选的实施方案中，所述生物活性物质的用量为脂质原料和生物活性物质总量的0.1-50％(w/w)，更优选1-50％(w/w)。

在一项优选的实施方案中，所述R₁、R₂、R₃彼此独立地是如下基团：

其中，Y不存在，或者是C_1-30直链或支链烷基或环烷基、C_2-20直链或支链烯基、C_2-20直链或支链炔基；R₁’、R₂’彼此独立地是H、C_1-30直链或支链烷基、C_2-30直链或支链烯基、C_2-30直链或支链炔基，且Y、R₁’和R₂’的碳链总长度为8-40。

在一项优选的实施方案中，所述R₁、R₂、R₃彼此独立地选自以下基团：

其中，R₁’、R₂’彼此独立地是H、C_1-30直链或支链烷基、C_2-30直链或支链烯基、C_2-30直链或支链炔基，且R₁’和R₂’的碳链总长度为8-30。

在一项优选的实施方案中，所述R₁、R₂、R₃彼此独立地选自以下基团中的任意一种：

在一项优选的实施方案中，G₁、G₂、G₃彼此独立地是-O-、-S-、-NR₆-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-CH(OH)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR₆-、-NR₆C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR₆C(＝O)O-、-OC(＝O)NR₆-、-NR₆C(＝O)NR₁₃-、-P(＝O)(OR₆)O-、-OP(＝O)(OR₆)-或-OP(＝O)(OR₆)O-。

在一项优选的实施方案中，L₁选自-(CR₇R₈)_m-X₁-，其中X₁选自-O-、-S-、-NR₁₄-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR₁₄-、-NR₁₄C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR₁₄C(＝O)O-、-OC(＝O)NR₁₄-、-NR₁₄C(＝O)NR₁₅-、-P(＝O)(OR₁₄)O-、-OP(＝O)(OR₁₄)-或-OP(＝O)(OR₁₄)O-。

在一项优选的实施方案中，L₂是-(CR₉R₁₀)_n-X₂-(CR₁₁R₁₂)_k-，其中X₂选自-O-、-S-、-NR₁₆-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR₁₆-、-NR₁₆C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR₁₆C(＝O)O-、-OC(＝O)NR₁₆-、-NR₁₆C(＝O)NR₁₇-、-P(＝O)(OR₁₆)O-、-OP(＝O)(OR₁₆)-或-OP(＝O)(OR₁₆)O-。

在一项优选的实施方案中，M选自以下结构：

其中，m’与n’彼此独立地是0-6的整数，R₁”与R₂”彼此独立地是H、C_1-6的烷基、C_2-6的烯基、胍基、脒基、酰胺基、脂肪胺基、3-10元含氮杂环；所述含氮杂环选自吡咯、咪唑、吡啶、吡唑、三氮唑、恶唑、异恶唑、噻吩、异噻唑、哒嗪、吡嗪、哌嗪、吲哚、苯并咪唑、咔唑、喹啉、异喹啉、嘌呤和嘧啶及其互变异构形式，其未被取代或任选地被一个或多个选自羟基、巯基、氨基、取代氨基、卤素、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-14芳基的有机基团取代。

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1A)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1B)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1C)的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1D)所示的化合物的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1E)所示的化合物

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1F)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1G)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1H)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，M选自以下基团中的任意一个：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1I)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1J)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1K)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，Y不存在，所述式(1)的化合物选自式(1L)所示的化合物：

其中R₁’、R₂’独立的选自H、C_1-30直链或支链烷基、C_2-30直链或支链烯基、C_2-30直链或支链炔基，且R₁’和R₂’的碳链总长度为8-40。

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1M)所示的化合物：

在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自：

在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(II)与式(III)化合物反应的步骤：

其中，Xa和Xb为含有离去基团或亲核基团的基团，且Xa和Xb通过亲核反应或缩合反应形成L₁。

在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(IV)与式(V)化合物反应的步骤：

其中Xc、Xd为含有离去基团或亲核基团的基团，且Xc和Xd通过亲核反应或缩合反应形成L₂。

在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(VI)化合物反应的步骤：

其中Xe为含有离去基团或亲核基团的基团，Xf为含有离去基团或亲核基团的化合物，且Xe和Xf通过亲核反应或缩合反应形成M。

在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(VII)化合物依次与式(VIII)化合物、式(IX)化合物、式(X)化合物反应的步骤：

其中Xg、Xh、Xi、Xj、Xk、Xl为含有离去基团或亲核基团的基团，且Xg和Xj通过亲核反应或缩合反应形成G₁，Xh和Xk通过亲核反应或缩合反应形成G₂，Xi和Xl通过亲核反应或缩合反应形成G₃。

在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(XI)与式(XII)化合物反应的步骤：

式(XIII)与式(XII)化合物反应的步骤：

其中Xm为含有亲核基团的基团，且Xm与式(XII)化合物的C＝C-L_2a通过加成反应形成X₁-L₂。

在一项优选的实施方案中，R₁、R₂、R₃彼此独立地是如下基团：

其中Y、R₁’、R₂’的含义同前；

其中还包括形成尾链R₁、R₂、R₃的步骤：

其中X为离去基团。

在一项优选的实施方案中，所述第二可电离脂质为式(2)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：

其中N₁为NH或O；

R_a选自C₆-C₂₄烷基、C₆-C₂₄烯基、C₆-C₂₄的环烷基、C₆-C₂₄醇、C₆-C₂₄短链聚氧乙烯；所述C₆-C₂₄烷基、C₆-C₂₄烯基、C₆-C₂₄的环烷基、C₆-C₂₄醇、C₆-C₂₄短链聚氧乙烯为直链或支链结构；R_b和R_c各自独立地选自C₁-C₁₂烷基、C₂-C₁₂烯基、C₁-C₁₂炔基、C₃-C₁₂环烷烃基、C₆-C₁₂的芳烃基、C₁-C₁₂烷基醇、C₁-C₁₂的杂环基、烷基胺；

所述烷基胺为其中，R_a’为C₁-C₁₂烷基，所述R_b’和R_b”各自独立的选自H、C₁-C₆烷基胺、R_c”选自被未取代或被氨基取代的C₁-C₆烷基，R_c”’为H、或-R_c’-A₁’-R_c”-NH₂；

条件是，当A₁’为-CO-NH-、-NH-CO-或-CO-O-时，R_c’为C₁-C₆烷基；当A₁’为-CO-时，R_c’不存在。

在一项优选的实施方案中，R_b和R_c各自独立地选自C₁-C₁₂烷基醇、烷基胺。

在一项优选的实施方案中，条件是，当R_a为直链的C₆-C₂₄烷基时，N₁不为NH，或R_b和R_c不为C₁-C₁₂醇；当R_a为C₆-C₂₄醇时，N₁不为O，或R_b和R_c不为C₆-C₂₄烷基。

在一项优选的实施方案中，条件是：当R_a为C₆-C₂₄烯基时，A₁为NH，R_b和R_c各自独立地选自C₁-C₁₂烷基醇；

当R_a为支链的C₆-C₂₄烷基时，A₁为NH，R_b和R_c各自独立地选自C₁-C₁₂烷基醇、烷基胺；

R_a为直链的C₆-C₂₄烷基时，A₁为NH或O，R_b和R_c各自独立地选自烷基胺；当R_a为直链的C₆-C₂₄烷基时，A₁为O，R_b和R_c各自独立地选自C₁-C₁₂烷基醇；当R_a为C₆-C₂₄短链聚氧乙烯时，A₁为NH或O，R_b和R_c各自独立地选自烷基胺；或当R_a为C₆-C₂₄烷基醇时，A₁为NH或O，R_b和R_c各自独立地选自烷基胺。

在一项优选的实施方案中，R_a选自下面的化合物结构：

在一项优选的实施方案中，R_b和R_c选自下面的化合物结构：

R_d选自C1-C6的烷烃或环烷烃。

在一项优选的实施方案中，所述式(2)的化合物选自下列化合物中的至少一种：

在一项优选的实施方案中，第二可电离脂质的制备方法包括如下反应步骤：

R_a”-NH₂①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成可电离脂质化合物③：

其中，R_a”-NH₂为R_a-NH₂或

R_b’和R_b”同时为H，或者R_b’和R_b”同时为C₁-C₆胺，或者R_b’和R_b”同时为-R_c’-A₁’-R_c”-NH₂。

在一项优选的实施方案中，第二可电离脂质的制备方法包括：

1)R_a”-NH₂①与α,β-不饱和羰基化合物④反应生成化合物⑤；

2)化合物⑤与亲核试剂⑥反应生成可电离脂质化合物③；

其中，亲核试剂⑥为R_b-NH₂或R_b-OH；R_a”-NH₂选自R_a-NH₂或

R_b’和R_b”同时为H，或者R_b’和R_b”同时为C₁-C₆胺，或者R_b’和R_b”同时为-R_c’-A₁’-R_c”-NH₂；Z₂为离去基团，Z₂与NH₂反应得到A₁。

在一项优选的实施方案中，第二可电离脂质的制备方法包括：

1)R_a”-NH₂①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成化合物⑦；

2)化合物⑦与α,β-不饱和羰基化合物⑧反应生成化合物⑨；

3)化合物⑨与亲核试剂⑩反应生成可电离脂质化合物

其中，R_a”-NH₂为R_a-NH₂，Z₃为离去基团，A₃与Z₃反应得到A₁。

在一项优选的实施方案中，式2a-式2c中，至少一种亲核试剂与至少一种α,β-不饱和羰基化合物的β位碳原子发生麦克加成反应，生成含碳碳键、碳氧键、碳氮键、碳硫键或碳硒键的带有两分叉的所述可电离脂质化合物。

在一项优选的实施方案中，式2a-式2b还包括以通过式2a-式2b反应得到的带有端氨基的式(2)的化合物作为原料，按照式2a中步骤1或式2b中步骤1-2进行迭代反应的步骤；

所述带有端氨基的式(2)的化合物为

其中，R_b’和R_b”同时为H，或者R_b’和R_b”同时为C₁-C₆胺，或者R_b’和R_b”同时为-R_c’-A₁’-R_c”-NH₂。

在一项优选的实施方案中，式2a-式2c反应式还包括以通过式2a-式2c反应式得到带有端氨基的式(2)的化合物作为原料，与反应的步骤；

所述带有端氨基的式(2)的化合物为

其中，R_b’和R_b”同时为H，或者R_b’和R_b”同时为C₁-C₆胺，或者R_b’和R_b”同时为-R_c’-A₁’-R_c”-NH₂。

上文所述的离去基团是指在亲核反应或缩合反应中离去部分，包括但不限于：H、

OH、H₂O、卤素(例如F,Cl，Br和I)、氰酸负离子、无机酸(例如硝酸、硫酸、磷酸)、羧酸(例如乙酸、三氟乙酸和苯甲酸等)、磺酸(例如甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸和对硝基苯磺酸等)、二氧化碳(CO₂)、氮气(N₂)、咪唑、烷氧基(R-O-)、氨基(-NHR，其中R为H去掉的烷基或芳基)、苯氧基、叔碳正离子(例如叔丁基正离子)、被不饱和系统或杂原子稳定的碳正离子或上文所述的各种保护基。

上文所述的亲核基团是指在化学反应中能够提供电子对以形成新的化学键的分子或离子，常见亲核基团包括：氢氧根(HO^-)、氨(NH₃)、羟胺(NH₂OH)、肼(NH₂-NH₂)、取代肼、具有亲核性的卤素(如Cl^-、Br^-或I^-)、氢负离子(H^-)、叠氮负离子(N₃ ^-)、氰酸根负离子(CN^-)、醇或烷氧基负离子(例如脱除羟基氢的醇)、胺基(包括伯胺、仲胺和叔胺)或胺负离子、碳负离子(例如格氏试剂、有机锂试剂、吉尔曼试剂等有机金属试剂中的碳负离子)、巯基或巯基负离子、硫醚、烯醇或烯醇负离子、烯基醚、烯胺、羧酸或羧酸负离子、烷基或芳基膦(例如三苯基膦)、有孤对电子的芳杂环(例如吡啶)等。

在一项优选的实施方案中，反应过程中所用原料还含有保护基团，反应步骤中包括保护和/或脱保护的步骤。

在一项优选的实施方案中，所述第三可电离脂质选自下列化合物中的至少一种：

在一项优选的实施方案中，所述辅助脂质为磷脂与类固醇或其衍生物的混合物。

在一项优选的实施方案中，所述磷脂包括1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DLPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、1,2-双十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DUPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)、1,2-二-0-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:0Diether PC)、1-油酰基-2-胆固醇基半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(OChemsPC)、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(C16 Lyso PC)、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(ME 16.0PE)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐(DOPG)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)、棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)、二硬脂酰基-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺(DMPE)、1-硬脂酰基-2-油酰基-硬脂酰乙醇胺(SOPE)、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱(SOPC)、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)中的至少一种。

在一项优选的实施方案中，所述类固醇或其衍生物包括胆固醇、胆固醇硬脂酸、粪固醇、谷固醇、麦角固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、盐藻甾醇、番茄碱、熊果酸、α-生育酚中的至少一种。

在一项优选的实施方案中，所述含有可电离脂质的肺部递送系统还包含醇类化合物。

在一项优选的实施方案中，所述醇类化合物包括C6-C18醇、聚乙二醇中的至少一种；所述醇类化合物与可电离脂质的摩尔比为0-2:1，更优选0.01-0.5:1。

在一项优选的实施方案中，所述可电离脂质用量为处方总脂质的5-80mol％；所述辅助脂质用量为处方总脂质的20-95mol％。

在一项优选的实施方案中，所述辅助脂质中，磷脂与类固醇或其衍生物的摩尔比为(5-60):(10-80)。

在一项优选的实施方案中，所述可电离脂质为第一可电离脂质或第二可电离脂质或第三可电离脂质，或第一可电离脂质与第二可电离脂质的混合物，或第二可电离脂质与第三可电离脂质的混合物；在第一可电离脂质与第二可电离脂质的混合物中，第一可电离脂质与第二可电离脂质的摩尔比为(5-90):(1-30)；在第二可电离脂质与第三可电离脂质的混合物中，第三可电离脂质与第二可电离脂质的摩尔比为(5-90):(1-30)。

在一项优选的实施方案中，所述含有可电离脂质的肺部递送系统的粒径为20-400nm，多分散指数(PDI)小于0.5。

在一项优选的实施方案中，所述含有可电离脂质的肺部递送系统表面电位为-20mV-60mV。

在一项优选的实施方案中，所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，还包含其他赋形剂。

在一项优选的实施方案中，所述的赋形剂为药学上可接受的辅料，包括但不限于缓冲盐、载体、稀释剂、吸收剂、着色剂、佐剂、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、香味剂、抗菌剂、润滑剂、分散剂、温度调节剂、黏附剂、稳定剂、助悬剂等。

在一项优选的实施方案中，含有可电离脂质的肺部递送系统为液体形式或固体形式。

第二方面，本发明提供了前述含有可电离脂质的肺部递送系统的制备方法，包括：将生物活性物质、可电离脂质和辅助脂质在溶剂中混合的步骤。

在一项优选的实施方案中，所述制备方法包括将可电离脂质和辅助脂质溶于溶剂中，得脂质溶液；将生物活性物质溶于溶剂中，得生物活性物质溶液，将脂质溶液与生物活性物质溶液混合、超滤的步骤。

在一项优选的实施方案中，所述溶剂包括醇、水、缓冲溶液中的至少一种。

第三方面，本发明提供了前述含有可电离脂质的肺部递送系统在制备通过鼻内、支气管内或肺部给药递送生物活性物质的药物中的应用。

在一项优选的实施方案中，所述药物施用于哺乳动物体内。

在一项优选的实施方案中，所述药物施用于细胞。

在一项优选的实施方案中，所述细胞为呼吸上皮细胞群、鼻细胞群、肺泡上皮细胞群、肺细胞群、支气管上皮细胞群、人支气管上皮(HBE)细胞群中的至少一种。

在一项优选的实施方案中，所述药物为液体形式。

在一项优选的实施方案中，所述药物为固体形式

在一项优选的实施方案中，所述药物适于吸入。

在一项优选的实施方案中，所述药物通过喷雾器或吸入器施用。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1、本发明的含有可电离脂质的肺部递送系统包括可电离脂质、辅助脂质和生物活性物质，不含聚合物缀合脂质，所述含有可电离脂质的肺部递送系统可用于肺部给药，给药方式可采用气管内给药或雾化吸入给药，两种给药方式均将生物活性物质高效递送至肺部，且在肺部具有良好的表达，在其他脏器无表达。

2、本发明的含有可电离脂质的肺部递送系统粒径为20-400nm，PDI<0.5；电位为-20～60mV，具有粒径均一、安全性高的特点。

3、本发明提供的含有可电离脂质的肺部递送系统制备工艺简单，工艺重现性好。

4、本发明的含有可电离脂质的肺部递送系能够将治疗剂高效地递送至肺部，且在雾化前后，颗粒性质如粒径、粒径分布系数、电位、包封率等颗粒特性均保持不变，为肺部疾病的治疗提供了安全有效的解决方案。

5、本发明公开了含有可电离脂质的肺部递送系统及其以雾化给药的方式，具有良好的安全性和有效性。例如，通过纳米脂质的细胞聚集、期望蛋白质的表达和/或mRNA在细胞中的表达，达到疾病治疗的目的。为肺部疾病的治疗提供了一种新的可能性，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为气管内给药小鼠活体成像图；

图2为雾化吸入给药小鼠活体成像图；

图3为IVIS成像示意图；

图4为实施例6经喷雾给药后肺内分布IVIS成像图。

具体实施方式

本发明的合成工艺可以容许多个官能团，因此可以使用各种被取代的起始物质。这些工艺大体上提供了在整个工艺结束或快结束时所希望的最终化合物，不过在某些情况下可能需要将该化合物进一步转化成其药学上可接受的盐。本发明的化合物可以使用可商购的起始物质、文献中已知的化合物，或由易于制备的中间物，通过采用标准合成方法和本领域技术人员已知或技术人员根据本文的传授内容显而易见的程序，以多种方式制备。用于制备有机分子的标准合成方法和程序以及官能团转化和操作可以从相关科学文献或从本领域的标准教科书获得。以下有关合成方法的描述被设计用于说明而非限制用于制备本发明化合物的通用程序。

具有本文所描述各式的本发明化合物可以根据相应的通用合成路线中所说明的工艺，由可市售的起始物质或可以使用文献工艺制备的起始物质制备。各通用合成路线中的变量(例如R₁、R₂和R₃等)如本文所定义。本领域的普通技术人员应注意到，在本文所描述的反应工序和合成方案中，某些步骤的次序可以变化，如保护基的引入和移除。

在本文所描述的反应方案中，可以产出多种立体异构体。当未指示特定立体异构体时，这应理解为包括由该反应产出的所有可能的立体异构体。本领域普通技术人员应认识到，所述反应可以被优化以优先得到一种异构体，或可以设计出新的方案以产出单一异构体。如果产出混合物，则可以使用如制备型薄层色谱法、制备型HPLC、制备型手性HPLC或制备型SFC等技术分离异构体。

(1)制备实施例1第一可电离脂质的合成

第一可电离脂质通用合成路线如通用合成路线1-5。

通用合成路线1

其中，M’为M或者含有保护基的M。

如以上通用合成路线1中所说明的，Boc-氨基三(羟甲基)甲烷与酸(化合物2)反应缩合反应生成化合物3。步骤1可以在有机溶剂(例如二氯甲烷(DCM))中，在例如1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCl)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)存在下进行。步骤1可以在室温下进行24小时。

接着，化合物3脱除Boc保护基，生成化合物4。步骤2可以在有机溶剂(例如DCM)中，在酸(如三氟乙酸)的催化下进行。

接着，化合物4与化合物5发生缩合反应得到化合物6。步骤3可以在有机溶剂(例如DCM或DMF)中，通过EDCl和DMAP或者二环己基碳二亚胺(DCC)的催化进行。

如果化合物6的M’基团中含有上述的保护基，则脱除保护基，并得到目标脂质化合物。步骤4在所选用的保护基的脱除反应条件下进行。

通用合成路线2

其中M’为M或者含有保护基的M；A为O、NH或S。

如以上通用合成路线2中所说明的，化合物1与化合物2发生缩合反应得到化合物3。步骤1可以在有机溶剂(例如DCM)中，在EDCl和DMAP的存在下进行。

接着，化合物3脱去叔丁氧保护基，得到化合物4。步骤2可以在有机溶剂(例如DCM)中，在酸(例如三氟乙酸)和正离子清除剂(例如三异丙基硅烷(TiPS))存在下进行。

接着，化合物4与一种化合物5发生缩合反应得到化合物6。步骤3可以在有机溶剂(例如DCM或DMF)中，在EDCl和DMAP或者DCC存在下进行。

如果化合物6的M’基团中含有上述的保护基，则脱除保护基，并得到目标脂质化合物。步骤4在所选用的保护基的脱保护反应条件下进行。

通用合成路线3

其中，X为卤素，如Cl、Br或I；R₄’为R₄或含有保护基的R₄；R₅’为R₅或含有保护基的R₅。

如以上通用合成路线3中所说明的，Boc-氨基三(羟甲基)甲烷与化合物2发生缩合反应生成化合物3。步骤1可以在有机溶剂(例如DCM)中，在例如EDCl和DMAP存在下进行。步骤1可以在室温下进行24小时。

接着，化合物3脱除Boc保护基，生成化合物4。步骤2可以在有机溶剂(例如DCM)中，在酸(如三氟乙酸)的催化下进行。

接着，化合物4与一种含卤素取代的醛(化合物5)通过缩合与还原反应得到化合物6。步骤3可以在有机溶剂(如二氯乙烷(DCE))中，在还原剂(例如三乙酰基硼氢化钠(NaBH(OAc)₃))的存在下进行。

接着，化合物6与胺(化合物7)发生亲核反应，生成化合物8。步骤4可以在有机溶剂(如DMF中)，在碱(如非亲核性有机碱(例如三乙胺，iPr2EtN)或无机碱(例如K₂CO₃))和催化剂(KI或NaI)的存在下进行。

如果化合物8的R₄’和/或R₅’基团中有上述的保护基，则脱除保护基，并得到目标脂质化合物。步骤5在所选用的保护基的脱保护反应条件下进行。

通用合成路线4

其中，X为卤素，如Cl、Br或I；R₄’为R₄或含有保护基的R₄；R₅’为R₅或含有保护基的R₅。

如以上通用合成路线4中所说明，Boc-氨基三(羟甲基)甲烷与化合物2发生缩合反应生成化合物3。步骤1可以在有机溶剂(例如DCM)中，在例如EDCl和DMAP存在下进行。步骤1可以在室温下进行24小时。

接着，化合物3脱除Boc保护基，生成化合物4。步骤2可以在有机溶剂(例如DCM)中，在酸(如三氟乙酸)的催化下进行。

接着，化合物4与一种含卤素取代的化合物5发生缩合反应得到化合物6。步骤3可以在有机溶剂如DCM或DMF中，通过EDCl和DMAP或者DCC的催化进行。

接着，化合物6与一种胺(化合物7)发生亲核反应，生成化合物8。步骤4可以在有机溶剂(例如DMF)中，在碱(如非亲核性有机碱(例如三乙胺，iPr2EtN)或无机碱(例如K₂CO₃))和催化剂(KI或NaI)的存在下进行。

如果化合物8的R₄’和/或R₅’基团中有上述的保护基，则脱除保护基，得到目标脂质化合物。步骤5在所选用的保护基的脱保护反应条件下进行。

通用合成路线5

其中M_pro是M或含有保护基的M。

如以上通用合成路线5中所说明的，Boc-氨基三(羟甲基)甲烷与化合物2发生缩合反应生成化合物3。步骤1可以在有机溶剂(例如DCM)中，在例如EDCl和DMAP存在下进行。步骤1可以在室温下进行24小时。

接着，化合物3脱除Boc保护基，生成化合物4。步骤2可以在有机溶剂(例如DCM)中，在酸(如三氟乙酸)的催化下进行。

接着，化合物4与化合物5通过缩合与还原反应得到化合物6。步骤3可以在有机溶剂(如二氯乙烷(DCE))中，在还原剂(例如三乙酰基硼氢化钠(NaBH(OAc)₃))的存在下进行。

如果化合物6的M_pro基团中含有上述的保护基，则脱除保护基，并得到目标脂质化合物。步骤4在所选用的保护基的脱保护反应条件下进行。

此外，还应了解，在现有技术范围内的本发明的任何特定实施方案可明确地排除在任何一个或多个权利要求外。由于这些实施方案被认为是本领域普通技术人已知的，故可将其排除在外，即使在本文中未明确陈述该排除。

所有引用的来源，例如本文所引用的参考文献、公布、数据库、数据库条目和技术都以引用的方式并入本申请中，即使在引述中未明确陈述。在引用源与本申请的陈述出现矛盾的情况下，应以本申请的陈述为准。

(1)合成根据式(1)、(1A)、(1B)、(1C)、(1D)、(1E)、(1F)、(1G)、(1H)、(1I)、(1J)、(1K)、(1L)或(1M)的化合物

A.一般考虑

值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，对其来源不做具体限定。

以下描述的工艺路线可用于合成本发明的化合物1001-3422。

本文采用了以下缩写：

THF：四氢呋喃

MeCN：乙腈

MeOH:甲醇

PE：石油醚

EA：乙酸乙酯

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

EDCl：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

LAH：氢化铝锂

DCM：二氯甲烷

DMAP：4-二甲基氨基吡啶

LDA：二异丙基氨基锂

rt：室温

DCE：1,2-二氯乙烷

n-BuLi：正丁基锂

i-Pr2EtN：N,N-二异丙基乙胺

B.中间物合成

中间物A:

中间物A采用如下合成工艺路线得到：

将三(羟甲基)氨基甲烷(50.0g)和碳酸酐二叔丁酯(Boc₂O)(99.1g)溶于甲醇(300mL)/H₂O(30mL)混合溶剂中，室温条件下反应72h，硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1-10:1)得到白色固体化合物中间物A(N-Boc-氨基三羟甲基甲烷)(75.0g)。LCMS(ESI)calcdfor C₉H₁₉NO₅，[M+H]⁺m/z 222.13，found 222.25。

中间物B:

中间物B采用如下合成工艺路线得到：

向单口瓶中加2-乙基-1,3-丙二酸二乙酯(29.0g)，THF(90mL)，DMF(30mL)，冰浴下加入NaH(3.7g)，在氮气保护下，室温下搅拌30min；加入溴代十五烷(15.0g)，在氮气保护下，80℃反应2h；减压浓缩除去THF，将反应液滴加至冰水中，加入乙酸乙酯进行搅拌，并通过硅藻土过滤，收集有机相然后分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相，硅胶柱层析纯化(PE:EA＝100:1-50:1)得到化合物2-乙基-2-十五烷基马来酸二乙酯(16.5g)。在2-乙基-2-十五烷基马来酸二乙酯(8.0g)中加入EtOH(50mL)，H₂O(50mL)，KOH(11.3g)，90℃反应12h；减压浓缩除去EtOH，加入稀盐酸将反应体系调至pH＝4-5，加入水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相，通过柱层析纯化(PE:EA＝5:1-1:1)得到2-乙基-2-十五烷基马来酸(5.2g)。2-乙基-2-十五烷基马来酸(10.0g)在敞口条件下，170℃反应6h后，降至室温，加入水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相，浓缩，通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1-10:1)得到中间物B(2-乙基十七酸)(8.2g)。1HNMR(400MHz,CDCl₃)δ2.31(tt,J＝8.6,5.3Hz,1H),1.71-1.46(m,4H),1.28(s,26H),0.96(t,J＝7.4Hz,3H),0.90(t,J＝6.7Hz,3H)。

中间物C:

中间物C采用如下合成工艺路线得到：

向三颈瓶中加入癸酸(50g)和溶剂THF(500mL)，将体系降至0℃后缓慢添加反应物NaH(23.22g)，并在0℃，氮气保护下搅拌1h后，缓慢滴入LDA(62.19g)，在0℃，氮气保护下继续搅拌1h。最终滴加反应物碘壬烷(88.52g)后升至室温搅拌过夜后，用1LDCM稀释,分别用饱和NH₄Cl溶液和水分别洗涤。有机层用无水Na₂SO₄干燥、过滤和浓缩后，硅胶朱层析纯化(PE:EA＝50:1)，最终得到中间物C(2-辛基十一酸)(11g)。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ2.37(tt,J＝8.7,5.1Hz,1H),1.71-1.58(m,2H),1.48(dt,J＝

13.3,6.7Hz,2H),1.29(d,J＝9.4Hz,25H),0.90(t,J＝6.8Hz,6H)。

中间物D:

中间物D采用如下合成工艺路线得到:

向三颈瓶中加入十三酸(79.5g)和溶剂THF(800mL)，将体系降至0℃后缓慢添加NaH(22.25)，反应液在0℃，氮气保护下搅拌1h后，向反应体系缓慢滴入LDA(317.87g)；反应液在0℃，氮气保护下继续搅拌1h。滴加反应物碘代正己烷(94.39)后升至室温搅拌过夜后，反应液用1L DCM稀释,分别用饱和NH₄Cl溶液和水分别洗涤。有机层用无水Na₂SO₄干燥、过滤和浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝50:1)，得到中间物D(2-己基十三酸)(26g)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ2.36(tt,J＝8.7,5.4Hz,1H),1.63(ddd,J＝

14.3,8.7,5.5Hz,2H),1.49(dq,J＝13.5,6.6Hz,2H),1.29(d,J＝10.1Hz,26H),0.90(t,J＝6.6Hz,6H)。

中间物E:

中间物E采用如下合成工艺路线得到：

将化合物三(羟甲基)氨基甲烷(10.0g)和丙烯酸叔丁酯(21.1)溶于EtOH(150mL)，氮气保护下，在45℃反应30h后，减压浓缩除去EtOH，加入(PE:EA＝20:1)溶剂100mL×3进行打浆，过滤，得到白色固体化合物中间物E(11.5g)。1HNMR(400MHz,CDCl₃)δ3.60(s,6H),2.84(t,J＝5.9Hz,2H),2.47(t,J＝5.8Hz,2H),1.48(s,9H)。

中间物F:

中间物F采用如下合成工艺路线得到:

向单口瓶中，加入(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.7g)，MeCN(90mL)，苄基2-溴乙基醚(7.99g)，K₂CO₃(11.65g)，80℃下反应过夜后，加入水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1-5:1)得到化合物2(5.5g)。向化合物2中加入二氧六环(30mL)，盐酸二氧六环溶液(30mL)，室温搅拌3h后，减压浓缩，得到化合物3，即中间物F(6g)。LCMS(ESI)calcd for C₂₀H₂₈N₂O₂,[M+H]⁺m/z329.22,found 329.24。

中间物G:

中间物G采用如下合成工艺路线得到：

向单口瓶中，加入化合物1(3.0g)，MeCN(90mL)，3-苄氧基溴丙烷(9.45g)，K₂CO₃(12.94g)，80℃下反应过夜后，加入水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，通过柱层析纯化(PE:EA＝10:1-5:1)得到化合物2(6.9g)。向化合物2(6.9g)中加入Dioxane(30mL)，盐酸二氧六环溶液(30mL)，室温搅拌3h后，减压浓缩，得到中间物G(7.5g)。LCMS(ESI)calcd for C₂₂H₃₂N₂O₂,[M+H]⁺m/z 357.25,found357.51。

中间物H:

中间物H采用如下合成工艺路线得到：

向单口瓶中，加入化合物1(1.5g)，MeCN(90mL)，4-溴丁醚苄酯(5.02g)，K₂CO₃(6.47g)，80℃下反应过夜后，加入水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，通过柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)得到化合物2(4.1g)。向化合物2(4.1g.)中加入Dioxane(30mL)，盐酸二氧六环溶液(30mL)，室温搅拌3h后，减压浓缩，得到中间物H(4.9g)。LCMS(ESI)calcd for C₂₄H₃₆N₂O₂，[M+H]⁺m/z 385.28，found385.56。

中间物I:

中间物I采用如下合成工艺路线得到：

向单口瓶中，加入化合物1(3.9g)，MeCN(90mL)，苄基2-溴乙基醚(5.78g)，K₂CO₃(15.46g)，80℃下反应过夜后，加入水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，通过柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)得到化合物2(6.8g)。向化合物2(6.8g)中加入Dioxane(30mL)，盐酸二氧六环溶液(30mL)，室温搅拌3h后，减压浓缩，得到中间物I(6.5g)。LCMS(ESI)calcd for C₁₂H₂₀N₂O，[M+H]⁺m/z 209.16，found209.31。

中间物J:

中间物J采用如下合成工艺路线得到：

向单口瓶中，加入丁酸(5.0g)，THF(100mL)，0℃条件下加入NaH(2.73g)，缓慢滴加LDA(56.8mL)，室温下反应30min，加入1-溴十三烷，室温下继续反应过夜后，加入冰水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，通过柱层析纯化(PE:EA＝10:1-5:1)得到中间物J(5.0g)。LCMS(ESI)calcd for C₁₇H₃₄O₂，[M+H]⁺m/z271.26，found 271.46。

中间物K:

中间物K采用如下合成工艺路线得到：

向三颈瓶中加入反应物1(24g),Imidazole(19.00g)和溶剂DCM(200mL)，降至0℃后，缓慢加入反应物TBDMSCI(38.57g)，25℃中搅拌4h后，用300mLDCM稀释,有机相用1L水洗涤两次后用无水Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩后加入硅胶用1:20DCM:MeOH过柱，收集样品浓缩得到中间物K(28.00g)。1HNMR(400MHz,CDCl₃)δ4.89(s,1H),3.58(t,J＝6.1Hz,2H),2.66(t,J＝7.3Hz,2H),2.45(s,3H),1.67-1.40(m,4H),0.84(s,9H)。

中间物L:

中间物L采用如下合成工艺路线得到：

向三颈瓶中加入化合物DMSO(3.58g)和无水溶剂DCM(30mL)，将体系降至-78℃后缓慢添加草酰氯(2.91g)，反应液在-78℃，N₂保护下搅拌10分钟后，缓慢滴入化合物1(3g)，在-78℃，N₂保护下继续搅拌1h，最终滴加TEA(9.28g)，在-78℃，N₂保护下继续搅拌0.5h后，用100mLDCM稀释,分别用饱和NH₄Cl溶液和水分别洗涤。有机层用无水Na₂SO₄干燥、过滤和浓缩后得到中间物L(3.0g)。LCMS(ESI)calcd for C₁₁H₁₄O₃，[M+H]⁺m/z 195.09，found195.23。

中间物M:

中间物M采用如下合成工艺路线得到：

向封管中加入中间物K(2.0g)，化合物1(1.79g)和溶剂ACN(20mL)，添加反应物K₂CO₃(3.81g)和KI(1.52g)在N₂保护下、70℃中搅拌过夜后用100mLEA稀释,用饱和NH4Cl溶液和水分别洗涤。有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩后加入硅胶用15:1DCM:MeOH过柱，收集样品浓缩得到化合物2(2.0g)。向三颈瓶中加入反应物2(1.80g)和溶剂DCM(20mL)，将体系置换氮气后降至-78℃，然后将DIBAL-H(1.00g)逐滴加入后，在-78℃下搅拌4h后，用甲醇和碳酸钠溶液滴入到反应液中淬灭,之后用DCM(100mL)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩得到中间物M(1.36g)。LCMS(ESI)calcd for C₁₅H₃₃NO₂Si,[M+H]⁺m/z 288.52,found 288.23。

C、化合物1003，按通用合成路线1合成

结构式：

化学式：C₆₃H₁₂₂N₂O₇

分子量：1019.68

步骤1：合成通用合成路线1中的化合物3

向化合物2(中间物B)(4.3g)中加入化合物1(中间物A)(1.0g)，DCM(20mL)，DMAP(2.2g)，EDCI(3.4g)，于氮气保护下室温搅拌12h后，加入水和二氯甲烷进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相，有机相再用无水硫酸钠干燥、浓缩，通过硅胶柱层析纯化(PE:EA＝40:1-30:1)得到化合物3(2.6g)。

步骤2：合成通用合成路线1中的化合物4

向化合物3(2.6g)中加入DCM(15mL)，TFA(5mL)，室温搅拌3h后，浓缩，通过硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1-5:1)得到化合物4(3.2g)。

步骤3：合成通用合成路线1中的化合物6

向化合物4(3.2g)中加入DCM(20mL)，Boc-甘氨酸(化合物5，578mg)，DCC(6.8g)，于氮气保护室温下搅拌12h后，加入水和乙酸乙酯进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相，无水硫酸钠干燥、浓缩，通过柱层析纯化(PE:EA＝5:1-2:1)得到化合物6(2.2g)。

步骤4：化合物1003

向化合物6(2.2g)中加入DCM(15mL)，TFA(5mL)，于室温下搅拌12h后浓缩，通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝30:1-20:1)得到化合物1003(1.3g)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.49(d,J＝2.6Hz,6H),3.28(s,2H),2.32(tt,J＝8.6,5.5Hz,3H),1.62(q,J＝7.1Hz,12H),1.27(d,J＝3.4Hz,78H),0.94-0.86(m,18H)。

D、化合物1002，按通用合成路线1合成

结构式：

化学式：C₆₀H₁₁₆N₂O₇

分子量：977.60

按通用合成路线1合成，与化合物1003合成工艺相似，区别在于采用中间物C作为通用合成路线1中的化合物2。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.48(s,6H),3.27(s,2H),2.37(tt,J＝8.5,5.5Hz,3H),1.64(d,J＝6.9Hz,6H),1.50-1.42(m,6H),1.27(s,72H),0.90(t,J＝6.7Hz,18H)。

E.化合物1004，按通用合成路线1合成

结构式：

化学式：C₅₄H₁₀₄N₂O₇

分子量：893.43

按通用合成路线1合成，与化合物1003合成工艺相似，区别在于采用棕榈酸作为通用合成路线1中的化合物2。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55(s,1H),4.45(s,6H),3.74(s,2H),2.35(t,J＝7.6Hz,6H),1.60(p,J＝6.9Hz,6H),1.27(s,72H),0.90(t,J＝6.7Hz,9H).

F.化合物1001，按通用合成路线1合成

结构式：

化学式：C₅₉H₁₀₈N₂O₇

分子量：957.52

按通用合成路线1合成，与化合物1003合成工艺相似，区别在于采用(9Z)-9-十六烯酸作为通用合成路线1中的化合物2，以及5-(N,N-二甲基氨基)戊酸作为通用合成路线1中的化合物5。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.42-5.30(m,6H),4.51-4.38(m,6H),3.19(dt,J＝11.3,5.6Hz,2H),2.97(t,J＝5.9Hz,6H),2.46(t,J＝6.6Hz,1H),2.35(td,J＝7.6,3.1Hz,5H),2.20(t,J＝7.6Hz,2H),2.03(d,J＝6.2Hz,12H),1.89-1.81(m,3H),1.74(q,J＝7.8Hz,2H),1.67-1.51(m,6H),1.31(d,J＝7.8Hz,48H),0.90(t,J＝6.7Hz,9H)。

G.化合物1014，按通用合成路线2合成

结构式:

化学式：C₇₀H₁₃₇N₃O₉

分子量：1164.88

步骤1：合成通用合成路线2中间体3

按照通用合成路线1的步骤1所示方法合成中间体3，区别在于采用中间物E作为通用合成路线1中的化合物1。

步骤2：合成通用合成路线2的化合物4

向化合物3(4.8g)中加入DCM(15mL)，TFA(12mL)，TiPS(3mL)，室温条件下反应12h后，加入水和二氯甲烷进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，通过硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1-10:1)得到化合物4(3.3g)。

步骤3：合成通用合成路线2的化合物6

向化合物5(1.9g)中加入化合物4(4.0g)，DCM(80mL)，EDCI(1.1g)，1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.78g)，DIEA(2.5g)，室温搅拌12h后，加入水和二氯甲烷进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，通过硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝30:1-20:1)得到化合物6(4.0g)。

步骤4：化合物1014

向化合物6(4.0g)中加入MeOH(30mL)，DCM(10mL)，Pd/C(4.73g(10％))，氢气条件下，室温搅拌过夜后，通过硅藻土过滤、浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH 30:1-

15:1)得到化合物1014(2g)。¹H(400MHz,CDCl₃)δ7.38(t,J＝5.8Hz,1H),4.14-4.05(m,6H),3.58(t,J＝4.9Hz,4H),3.31(q,J＝5.7Hz,2H),2.89(t,J＝6.3Hz,2H),2.64(q,J＝5.2Hz,6H),2.29(dq,J＝10.8,4.4Hz,6H),1.66-1.37(m,12H),1.24(d,J＝4.3Hz,78H),0.87(t,J＝7.1Hz,18H)。

H.化合物1015，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₇₂H₁₄₁N₃O₉

分子量：1192.93

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物G作为通用合成路线2中的化合物5。¹H(400MHz,CDCl₃)δ7.58(t,J＝5.7Hz,1H),4.15-4.01(m,6H),3.70(t,J＝5.4Hz,4H),3.39(q,J＝5.7Hz,2H),2.86(t,J＝6.2Hz,2H),2.57(dt,J＝20.5,5.8Hz,6H),2.36-2.22(m,5H),1.76-1.67(m,4H),1.62-1.35(m,13H),1.23(d,J＝4.6Hz,78H),0.92-0.80(m,18H)。

I.化合物1020，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₇₄H₁₄₅N₃O₉

分子量：1220.99

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物H作为通用合成路线2中的化合物5。

J.化合物1025，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₆₉H₁₃₅N₃O₈

分子量：1134.85

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物I作为通用合成路线2中的化合物5。¹H(400MHz,CDCl₃)δ6.98(t,J＝5.7Hz,1H),4.10(m,J＝3.8Hz,6H),3.63(t,J＝5.2Hz,2H),3.35(q,J＝5.8Hz,2H),2.89(t,J＝6.1Hz,2H),2.57(q,J＝5.3Hz,4H),2.32(s,3H),2.28(q,J＝4.1Hz,5H),1.65-1.41(m,13H),1.24(d,J＝4.4Hz,78H),0.87(t,J＝7.1Hz,18H)。

K.化合物1005，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₆₈H₁₃₃N₃O₇

分子量：1104.83

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用N，N-二甲基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.19-4.07(m,6H),3.40(d,J＝5.7Hz,2H),2.95-2.87(m,2H),2.82(s,4H),2.64-2.55(m,2H),2.38(s,6H),2.33-2.29(m,3H),1.63-1.55(m,6H),1.49-1.44(m,2H),1.26(d,J＝5.4Hz,78H),0.89(td,J＝7.0,2.8Hz,18H)。

L.化合物1006，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₅₃H₁₀₃N₃O₇

分子量：894.42

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用十四酸作为通用合成路线2中的化合物2和采用N，N-二甲基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.99(t,J＝5.8Hz,1H),4.13(s,6H),3.60(q,J＝5.3Hz,2H),3.38-3.34(m,2H),3.00(s,6H),2.94(t,J＝5.8Hz,2H),2.45(t,J＝5.8Hz,2H),2.35(t,J＝7.6Hz,6H),1.66-1.56(m,6H),1.33-1.23(m,60H),0.90(t,J＝6.8Hz,9H)。

M.化合物1007，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₆₈H₁₃₃N₃O₇

分子量：1104.83

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物D作为通用合成路线2中的化合物2和采用N，N-二甲基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.13(t,J＝5.0Hz,1H),4.13(s,6H),3.33(q,J＝5.6Hz,2H),2.92(t,J＝6.0Hz,2H),2.47-2.28(m,7H),2.24(s,6H),1.60(dq,J＝14.7,7.2Hz,6H),1.47(dd,J＝14.2,6.7Hz,6H),1.27(d,J＝3.4Hz,78H),0.89(td,J＝6.7,2.5Hz,18H)。

N.化合物1008，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₆₈H₁₃₃N₃O₇

分子量：1104.01

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物C作为通用合成路线2中的化合物2和采用N，N-二甲基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.13(s,6H),3.33(q,J＝5.6Hz,2H),2.92(t,J＝5.9Hz,2H),2.51-2.26(m,7H),2.24(s,6H),1.59(ddt,J＝14.8,10.9,6.4Hz,6H),1.47(tq,J＝11.0,5.4Hz,6H),1.26(s,77H),0.89(t,J＝6.7Hz,18H)。

O.化合物1009，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₆₂H₁₂₁N₃O₇

分子量：1020.66

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物J作为通用合成路线2中的化合物2和采用N，N-二甲基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹H(400MHz,CDCl₃)δ7.04(t,J＝5.0Hz,1H),4.12(m,J＝3.3Hz,6H),3.30(q,J＝5.6Hz,2H),2.91(t,J＝6.0Hz,2H),2.39(t,J＝6.0Hz,2H),2.33-2.25(m,5H),2.22(s,6H),1.76-1.54(m,12H),1.24(m,J＝3.7Hz,66H),0.90-0.84(m,18H)。

P.化合物1011，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₇₀H₁₃₇N₃O₇

分子量：1132.88

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用N，N-二乙基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.19-4.08(m,6H),3.31(q,J＝5.8Hz,2H),2.92(t,2H),2.57(t,J＝6.9Hz,6H),2.37-2.26(m,5H),1.62(ddd,J＝18.3,9.0,4.3Hz,12H),1.27(d,J＝4.7Hz,78H),1.04(t,J＝7.1Hz,6H),0.94-0.86(m,18H)。

Q.化合物1012，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₇₂H₁₄₁N₃O₇

分子量：1160.93

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用N，N-二乙基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.59(s,1H),4.18-4.07(m,6H),3.29(q,J＝5.7Hz,2H),2.91(t,J＝6.2Hz,2H),2.54(t,J＝6.1Hz,2H),2.40(t,J＝7.5Hz,4H),2.35-2.27(m,5H),1.63-1.42(m,16H),1.27(m,J＝4.5Hz,78H),0.93-0.85(m,24H)。

R.化合物1013，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₇₄H₁₄₅N₃O₇

分子量：1188.99

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用N，N-二乙基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.10(d,J＝4.1Hz,6H),3.26(q,J＝5.8Hz,2H),2.89(t,J＝6.2Hz,2H),2.52(d,J＝6.6Hz,2H),2.41(t,J＝7.4Hz,4H),2.33-2.25(m,5H),1.60(d,J＝11.8Hz,16H),1.24(d,J＝4.5Hz,82H),0.96-0.79(m,24H)。

S.化合物1029，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₆₈H₁₃₂N₂O₈

分子量：1105.81

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用N，N-二乙基-2-羟基乙胺作为通用合成路线2中的化合物5。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.16(t,J＝5.8Hz,2H),4.13-4.05(m,6H),2.86(t,J＝6.3Hz,2H),2.55(t,J＝5.8Hz,2H),2.44(t,J＝6.3Hz,2H),2.35-2.20(m,9H),1.60-1.39(m,11H),1.24(d,J＝4.5Hz,80H),1.02-0.79(m,18H)。

T.化合物1111，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₇₀H₁₃₆N₄O₇

分子量：1145.88

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物C作为通用合成路线2中的化合物2和采用4-(2-氨基乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯作为通用合成路线2中的化合物5。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.28(s,6H),3.41(s,2H),3.31(s,4H),3.22(s,3H),2.97-2.80(m,5H),2.70(s,5H),2.46-2.32(m,4H),1.60(t,J＝7.1Hz,6H),1.54-1.40(m,6H),1.27(s,78H),0.89(t,J＝6.7Hz,18H)。

U.化合物1118，按通用合成路线2合成

结构式：

化学式：C₇₁H₁₃₉N₃O₈

分子量：1162.91

按通用合成路线2合成，与化合物1014合成工艺相似，区别在于采用中间物C作为通用合成路线2中的化合物2和采用中间物K作为通用合成路线2中的化合物5。¹HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.11(s,6H),3.61(s,2H),3.42(d,J＝33.5Hz,2H),2.91(t,J＝6.2Hz,3H),2.36(dd,J＝9.2,3.6Hz,6H),1.47(dd,J＝13.9,6.2Hz,14H),1.27(s,71H),0.90(t,J＝6.7Hz,18H)。

V.化合物1010，按通用合成路线3合成

结构式：

化学式：C₆₇H₁₃₃N₃O₆

分子量：1076.82

步骤1和步骤2：合成通用合成路线3的化合物3和化合物4

按通用合成路线1的步骤1和步骤2，与化合物1003合成工艺相同。

步骤3：合成通用合成路线3的化合物6

将化合物4(600mg)，氯乙醛(化合物5，242mg(40％))，NaBH(OAc)₃(394mg)加入DCE(60mL)中，室温下反应过夜后，加入水和二氯甲烷进行搅拌分液，有机相采用饱和食盐水进行洗涤，分离出有机相、浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH＝30:1-15:1)得到化合物6(270mg)。

步骤4：合成化合物1010

向化合物6(270mg)中加入MeCN(20mL)，N,N-二甲基乙二胺(化合物7，229mg)，KI(43mg)，K₂CO₃(179mg)，氮气保护70℃反应过夜后，硅胶柱层析得到化合物1010(16mg)。¹H(400MHz,CDCl₃)δ4.10(m,J＝2.9Hz,6H),2.76-2.64(m,6H),2.40(t,J＝6.2Hz,2H),2.29(ddd,J＝8.5,5.6,2.9Hz,3H),2.22(s,6H),1.97(s,6H),1.50-1.41(m,6H),1.24(d,J＝4.2Hz,78H),0.87(t,J＝7.1Hz,18H)。

W.化合物1059，按通用合成路线3合成

结构式：

化学式：C₆₇H₁₃₂N₂O₇

分子量：1077.80

按通用合成路线3合成，与化合物1010合成工艺相似，区别在于采用中间物C和中间物L分别作为通用合成路线3中的化合物2和化合物5，此外通用合成路线3的化合物6需经如下工艺步骤进行官能团转化：

向中间物6a(1.5g)中加入溶剂MeOH(5mL)，THF(5mL)，添加反应物Pd(OH)₂/C(10％)(0.46g)和Pd/C(10％)(0.35g)在H₂条件下，25℃中反应过夜后，用硅藻土过滤，浓缩滤液，硅胶柱层析(PE:EA 30:1-10:1)，得到中间物6b(520mg)。向中间物6b(470mg)中加入DCM(5mL)，0℃滴加SOCl₂(1064.26mg,8.946mmol)，转至室温反应3小时后，用水与DCM对反应液进行萃取，浓缩有机相，硅胶柱层析(PE:EA 20:1)，得到中间物6c(181mg)。向中间物6c(170mg)中加入二甲胺(143.39mg)和DMF(2mL)，碳酸钾(43.96mg)和碘化钾(26.39mg)，反应液在70℃中搅拌后过滤，浓缩，硅胶柱层析(DCM:MeOH 20:1)，得到化合物1059(91mg,产率53.22％)。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.11(s,6H),3.51(dt,J＝18.3,5.6Hz,4H),2.81(dd,J＝10.3,5.1Hz,2H),2.50(t,J＝6.0Hz,2H),2.42-2.32(m,3H),2.28(s,6H),2.08-1.98(m,1H),1.53-1.38(m,7H),1.27(s,77H),0.90(t,J＝6.7Hz,18H)。

X.化合物1112，按通用合成路线3合成

结构式：

化学式：C₆₉H₁₃₆N₂O₆

分子量：1089.85

按通用合成路线3合成，与化合物1010合成工艺相似，区别在于采用中间物C和6-溴己醛分别通用合成路线3中的化合物2和化合物5。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.11(s,6H),3.11(s,1H),2.57(t,J＝6.8Hz,2H),2.44-2.19(m,12H),2.04(q,J＝6.5Hz,2H),1.53-1.38(m,13H),1.27(s,92H),0.90(t,J＝6.7Hz,20H)。

Y.化合物1113，按通用合成路线4合成

结构式：

化学式：C₇₁H₁₃₈N₂O₈

分子量：1147.89

步骤1和步骤2：合成通用合成路线4的化合物3和化合物4

按通用合成路线1的步骤1和步骤2，与化合物1003合成工艺相同。

步骤3：合成通用合成路线4的化合物6

向化合物4中加入DIEA(0.30g)和溶剂DCM(20mL)，在氮气保护下，降温至0℃后，添加5-溴戊酰氯(化合物5，0.27g)，25℃中搅拌2h，用100mLDCM稀释后，再用100mL水洗涤有机相两次。有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩后，硅胶柱层析(PE:EA 20:1)，得到化合物6(800mg)。

步骤4：合成通用合成路线4的化合物8

向三颈瓶中加入化合物6(750.00mg),中间物K(化合物7，217.31mg)和溶剂DMF(20mL)，添加反应物K₂CO₃(184.16mg)和KI(110.60mg)在25℃中搅拌16h后，再升至100℃搅拌3h。反应液用200mLEA稀释后，再用300mL饱和食盐水洗涤有机相两次；有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩后加入硅胶后用20:1DCM:MeOH过柱，收集样品浓缩后得到化合物8(700.00mg)。

步骤5：合成化合物1113

向三颈瓶中加入化合物8(700.00mg)和溶剂THF(5mL)，添加盐酸二氧六环溶液(1M)(5.55mL)。反应液在25℃中搅拌2h后，用50mLEA稀释后，再用饱和NaHCO₃溶液和水洗涤有机相后，有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩后，硅胶柱层析(MeOH:DCM 1:20)，得到化合物1113(201.1mg,产率31.59％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.50-4.39(m,6H),3.59(t,J＝4.6Hz,2H),2.49(s,3H),2.35-2.26(m,6H),2.14(t,J＝7.5Hz,2H),1.75-1.69(m,4H),1.66-1.43(m,17H),1.27(d,J＝3.7Hz,78H),0.94-0.87(m,18H)。

Z.化合物1115，按通用合成路线4合成

结构式：

化学式：C₆₇H₁₃₁N₃O₇

分子量：1090.80

按通用合成路线4合成，与化合物1010合成工艺相似，区别在于采用2-溴乙酰氯和N,N-二甲基乙二胺分别通用合成路线4中的化合物5和化合物7。¹HNMR(400

MHz,CDCl₃)δ7.42(s,1H),4.48(tt,J＝11.9,5.7Hz,6H),3.27(s,2H),3.13(s,2H),3.01(s,2H),2.83(s,6H),2.38-2.25(m,3H),1.55(dtt,J＝36.3,14.1,7.3Hz,12H),1.27(d,J＝3.3Hz,78H),0.90(td,J＝7.2,3.4Hz,18H)。

AA.化合物1114，按通用合成路线5合成

结构式：

化学式：C₇₀H₁₃₈N₂O₇

分子量：1119.88

步骤1和步骤2：合成通用合成路线5的化合物3和化合物4

按通用合成路线1的步骤1和步骤2，与化合物1003合成工艺相同。

步骤3：合成通用合成路线5的化合物6

向三颈瓶中加入化合物4(500mg)，中间物M(化合物5，298.68mg)，反应物STAB(328.68mg)和DCE(10mL)，反应液在N₂,25℃中搅拌16h后，向反应液加入100mL水，用EA(100mL)c萃取两次，合并有机相、浓缩，加入硅胶后用1:20DCM:MeOH过柱，收集样品浓缩得到化合物6(500mg)。

步骤4：合成化合物1114

向三颈瓶中加入化合物6(450mg)和溶剂THF(5mL)，添加盐酸二氧六环溶液(1M)(3.65mL)。在25℃中搅拌2h后，用50mLEA稀释，再用50mL饱和NaHCO₃溶液和水洗涤有机相后，有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩后，硅胶柱层析(MeOH:DCM 1:20)，得到化合物1114(107mg,产率24.84％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.16-4.07(m,6H),3.60(t,J＝4.8Hz,2H),2.62(t,J＝7.0Hz,2H),2.49(s,3H),2.31(tt,J＝8.4,5.5Hz,6H),1.70(d,J＝4.6Hz,3H),1.64-1.39(m,18H),1.27(d,J＝4.0Hz,78H),0.90(t,J＝7.1Hz,18H)。

Z.化合物1120，按通用合成路线5合成

结构式：

化学式：C₇₂H₁₄₂N₂O₇

分子量：1147.90

按通用合成路线5合成，与化合物1114合成工艺相似，区别在于采用中间物C和6-溴己醛分别通用合成路线5中的化合物2和化合物5。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.11(s,6H),3.63(s,2H),2.57(t,J＝6.8Hz,4H),2.37(ddd,J＝8.5,7.1,4.3Hz,5H),1.67-1.41(m,24H),1.27(s,79H),0.90(t,J＝6.7Hz,18H)。

(2)制备实施例2第二可电离脂质的合成

1.化合物6001的制备

结构式：

分子量：499.43

将0.8g油胺和0.8g羟乙基丙烯酰胺加入6.4mL乙醇中，搅拌加热至70℃，3.5h后补加0.8g羟乙基丙烯酰胺，继续反应16h后过反向柱得化合物6002。

将0.7g化合物6002、0.4g钯碳和28mL四氢呋喃加入反应瓶搅拌，用氢气置换并用氢气球保压，16h后过滤，正向过柱(甲醇-DCM体系)，得200mg化合物6001。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.54(t,J＝5.5Hz,2H),3.79-3.68(m,4H),3.42(dd,J＝10.0,5.4Hz,4H),2.89(t,J＝6.0Hz,4H),2.55(dt,J＝11.8,6.8Hz,6H),1.54(s,2H),1.27(d,J＝11.2Hz,32H),0.91(t,J＝6.8Hz,3H)。

2.化合物6002的制备

结构式：

分子量：497.42

将0.8g油胺和0.8g羟乙基丙烯酰胺加入6.4mL乙醇中，搅拌加热至70℃，3.5h后补加0.8g羟乙基丙烯酰胺，继续反应16h后，浓缩有机溶剂，过反向柱，冻干，得化合物6002共400mg。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.31(s,2H),5.38(dd,J＝13.0,7.4Hz,2H),3.79-3.66(m,4H),3.41(dd,J＝10.1,5.4Hz,4H),2.82-2.72(m,4H),2.44(dd,J＝15.1,9.2Hz,6H),2.10-1.99(m,4H),1.46(s,2H),1.29(s,24H),0.90(t,J＝6.8Hz,3H)。

3.化合物6003的制备

结构式：

分子量：445.34

将4.00g十四胺，6.53g丙烯酸羟乙酯和80mL叔丁醇加入反应瓶搅拌升温至70℃，29h后浓缩有机溶剂，过反向柱，冻干，得1.5g化合物6003。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.29(t,J＝7.5Hz,4H),3.89-3.75(m,4H),2.81(t,J＝6.2Hz,4H),2.50(ddd,J＝23.2,14.1,7.1Hz,6H),1.46(s,2H),1.28(s,24H),0.91(t,J＝6.3Hz,3H)。

4.化合物6004的制备

结构式：

分子量：553.48

将0.8g油胺，1.5g丙烯酸正丁酯和5.6mL正丁醇加入反应瓶搅拌升温至100℃，4h后补加1mL丙烯酸正丁酯，继续反应1h后过正相柱(石油醚-乙酸乙酯体系)，加入0.4g氢氧化钠，1mL水，10mL甲醇搅拌水解30min，加1mL浓盐酸和10mL甲醇得混合溶液调pH至中性，旋干，DCM溶解，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干溶剂，加入10mLDCM，1.06g 4-氨基-1-丁醇，0.81gHOBT和2.3g EDCI，室温反应18h，浓缩有机溶剂后，过反向柱，冻干，得240mg化合物6004。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.58(d,J＝16.6Hz,2H),5.44-5.31(m,2H),3.72(d,J＝16.5Hz,4H),3.31(d,J＝5.6Hz,4H),3.17(s,4H),2.84(s,2H),2.69(s,4H),2.09-2.01(m,4H),1.67(d,J＝2.7Hz,10H),1.37-1.26(m,24H),0.91(t,J＝6.8Hz,3H)。

5.化合物6005的制备

结构式：

分子量：597.54

将25.00g 11-二十一酮，62.05g醋酸铵和500mL甲醇加入反应瓶搅拌，加入6.55g氰基硼氢化钠，反应16h后，加250mL水和250mL DCM，分液，水相用50mLDCM萃取合并有机相，过正相柱(甲醇-DCM体系)，得化合物6005-A共21.00g。

将21.00g化合物6005-A，58mL丙烯酸正丁酯和100mL正丁醇胶乳反应瓶搅拌升温至100℃，补加10mL丙烯酸正丁酯，16h后过柱(石油醚-乙酸乙酯体系)，得化合物6005-B31.00g。

将31.00g化合物6005-B和6.55g氢氧化钠，310mL甲醇，31mL水配成得溶液加入反应瓶搅拌，20min后加入150mLTHF，搅拌升温至50℃，30min后加入16.13g浓盐酸和160mL甲醇配成得溶液搅拌，30min后旋干溶剂，加300mLDCM溶解，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干得27.00g油状物化合物6005-C。

将27.00g化合物6005-C、25.00g 4-氨基-1-丁醇，41.85g EDCI，14.74g HOBT和310mLDCM加入反应瓶搅拌，18h后浓缩有机溶剂，过柱(甲醇-DCM体系)，除去过量的4-氨基-1-丁醇化合物，得6.80g化合物6005。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ3.70(t,J＝5.6Hz,4H),3.28(t,J＝5.6Hz,4H),2.74(t,J＝6.0Hz,4H),2.40-2.45(m，1H),2.34(t,J＝6.4Hz,4H),1.63-1.65(m,8H),1.25-1.35(m,36H),0.91(t,J＝6.4Hz,6H)。

6.化合物6006的制备

结构式：

分子量：553.48

将1.00g油胺，0.47g羟乙基丙烯酰胺和8mL乙醇加入反应瓶搅拌升温至70℃，13h后旋干溶剂过柱(甲醇-DCM体系)，得中间体1共800mg。加入1.5mL丙烯酸正丁酯和5mL正丁醇搅拌升温至100℃，3h后旋干溶剂过柱(甲醇-DCM体系)。加入0.4g氢氧化钠和10mL甲醇，1mL水配成的溶液，搅拌1h，加入1mL浓盐酸和8mL甲醇配成的溶液，搅拌30min，旋干溶剂加100mL DCM溶解，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干，加入0.45g 6-氨基-1-己醇，0.27g HOBT,0.78g EDCI和10mLDCM搅拌，14h后浓缩有机溶剂，过柱(甲醇-DCM体系)，得化合物6006共300mg。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.83(s,1H),6.95(s,1H),5.43-5.28(m,2H),3.74-3.67(m,2H),3.64(t,J＝6.3Hz,2H),3.39(dd,J＝10.0,5.3Hz,2H),3.24(dd,J＝12.9,6.7Hz,2H),2.74(t,J＝5.8Hz,4H),2.48-2.42(m,2H),2.41-2.33(m,4H),2.01(dd,J＝13.6,6.8Hz,4H),1.66-1.17(m,34H),0.89(t,J＝6.7Hz,3H)。

7.化合物6007

结构式：

分子量：953.78

在室温下，向三口瓶中，加入化合物十八烷基胺(50g)，加入MeOH(200mL)搅拌混合后，冰水浴降温至5摄氏度，再缓慢滴加入丙烯酸甲酯(31.5g)，搅拌混合，恢复室温，反应液在室温下反应4h；减压浓缩，进行柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)，得到产物2(68g)。在室温下，向单口瓶中加入产物2(15.0g,)、MeOH(100mL)和乙二胺(1.0g)，升温至60℃，保持该温度反应过夜；减压浓缩，加入30mL甲苯，加热至60℃溶解，缓慢降至室温，减压蒸干得化合物3(15g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物3(2g)，加入MeOH(20mL)搅拌溶解后，然后再缓慢加入丙烯酸甲酯(2.5g)搅拌混合，升温至60℃，过夜；停止反应，反应液减压浓缩,通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝50:1-20:1)得到化合物4(2.5g)。在室温下，向单口瓶中加入化合物4(2.3g)，乙二胺(20mL)，室温条件下反应过夜；停止反应，直接减压浓缩，得化合物6007(24mg)。1HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.87(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.36(m,8H),3.33(s,8H),3.27-3.16(m,2H),3.06-2.90(m,4H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),1.90(dtdd,J＝21.2,14.0,9.5,6.9Hz,4H),1.73(p,J＝7.7Hz,4H),1.49(tdd,J＝9.2,7.9,7.1,4.0Hz,4H),1.31(s,28H),0.92(t,J＝6.8Hz,3H)。

8.化合物6008-6018

化合物6009的合成

结构式：

在室温下，将新鲜重结晶的十六胺(0.03mol)的甲醇(20mL)溶液，在氮气环境下，滴加到搅拌的甲基丙烯酸甲酯(6mL)的甲醇(20mL)中的溶液中，反应过夜。将反应物在室温下旋干，残余物溶解在氯仿中，并用0.1MNaOH溶液洗涤两次。收集氯仿溶液并用无水氯化钙干燥。然后通过柱色谱分离得到无色油状物。1H-NMR(300MHz,CDCl₃):0.78(t,3H)，1.16(s,30H)，2.38(m,6H)，2.71(t,4H)，3.57(m,6H)。

然后将上述无色油状物(11.05g)在甲醇(20ml)中的溶液加入到室温下剧烈搅拌的1，2-二氨基乙烷(75g)在甲醇(100ml)中的溶液中。完全加入后，混合物在室温下再搅拌24小时。减压除去溶剂，保持温度不高于40℃。用甲苯和甲醇(9:1)的共沸混合物除去过量的1，2-二氨基乙烷。剩余的甲苯用甲醇共沸蒸馏去除。最后得到白色粉末(10.5g)，用氯仿和环己烷反复重结晶，最终得到白色固体。1H-NMR(300MHz,CDCl₃):0.88(t,3H)，1.25(s,30H)，1.84(s,4H)，2.38(m,6H)，2.73(m,4H)，2.82(m,4H)，3.29(m,4H)，7.47(s,2H)。

6008与6009制备方法不同仅在于：采用等摩尔量的十四胺替代十六胺。6010-6017参照6009的制备方法，采用等摩尔量的相应的R_a-NH₂替代十六胺制备得到。

6018参照6007的制备方法，采用等摩尔量的相应的R_a-NH₂替代十八烷基胺制备得到。

9.化合物6019

结构式：

分子量：753.66

在室温下，向单口瓶中加入化合物2483-46-7(3g)，加入DCM(50mL)搅拌混合后，再加入18807-71-1(2.5g)、DCC(2.7g)、DMAP(1.6g)，搅拌混合,在室温下反应过夜；减压浓缩、柱层析纯化(DCM：MeOH＝5:1)，得到产物3(4g)。在室温下，向三口瓶中，加入产物3(5.0g)、MeOH(50mL)和Pd/C(1.0g)，置换氢气，升温至50℃，搅拌1h；停止反应，反应液降至室温，过滤，滤液旋干，得产物4(3.5g)。在室温下，向单口瓶中，加入原料5(1.2g)，加入DMF(50mL)搅拌溶解后，然后再加入产物4(3.3g)、HATU(3.2g)、TEA(0.9g)搅拌混合，室温条件下反应过夜；加入水(500mL)和EA(500mL),分液萃取，有机相Na₂SO₄干燥，减压浓缩，粗产物通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1-10:1)得固体6(380mg)。在室温下，向单口瓶中，加入固体6(380mg)，HCl/Dioxane(4M)(1.6mL)，室温条件下反应2h；减压浓缩，纯化，得化合物6019(220mg)。1HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.87(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.36(m,8H),3.33(s,8H),3.27-3.16(m,2H),3.06-2.90(m,4H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),1.90(dtdd,J＝21.2,14.0,9.5,6.9Hz,4H),1.73(p,J＝7.7Hz,4H),1.49(tdd,J＝9.2,7.9,7.1,4.0Hz,4H),1.31(s,28H),0.92(t,J＝6.8Hz,3H)。

10.化合物6020

结构式：

分子量：810.19

在室温下，向三口瓶中，加入化合物十八烷基胺(50g)，加入MeOH(200mL)搅拌混合后，冰水浴降温至5摄氏度，再滴加入丙烯酸甲酯(31.5g)，搅拌混合，恢复室温，反应4h；停止反应，直接减压浓缩，柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)，得到产物2(68g)。在室温下，向单口瓶中加入产物2(15.0g,)、MeOH(100mL)和乙二胺(1.0g)，升温至60℃，保持该温度反应过夜；停止反应，反应液减压浓缩，加入30mL甲苯，加热至60℃溶解，缓慢降至室温，过滤，减压蒸干得化合物3(15g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物3(1.3g)，加入DMF(20mL)搅拌混合后，再加入35897-34-8(3.6g)、EDCI(3.0g)、HOBt(2.1g)，DIEA(2.0g)，搅拌混合,在室温下反应过夜；加入水(200mL)直接减压冻干，得化合物4(4g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物4(100mg)和HCl/Dioxane(4M)(2mL)，室温条件下反应1h；停止反应，反应液减压浓缩纯化得化合物6020。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.90(t,J＝6.4Hz,2H),3.57-3.34(m,10H),3.24(dt,J＝16.1,8.0Hz,8H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),2.03-1.58(m,10H),1.31(s,30H),1.01-0.82(m,3H)。

11.化合物6021

结构式：

分子量：1182.79

室温下，向单口瓶中，加入化合物2(3.5g，合成工艺同化合物6020中产物2)，加入MeOH(20mL)搅拌混合后，加入TREN(23.0g)，搅拌混合，升温至60℃，搅拌过夜，减压浓缩，所得粗品进行冻干，得到产物3(25g)；在室温下，向单口瓶中，加入产物3(22.0g)、DCM(200mL)，降温至0℃，缓慢滴加(Boc)₂O(71.7g)，滴完恢复至室温，反应3h，加水(200mL)萃灭，再加入DCM(100mL)分液萃取，有机相硫酸钠干燥，减压浓缩，过柱纯化，得黄色油状物4(5.8g)。在室温下，向单口瓶中，加入黄色油状物4(1.4g)，冰水浴下缓慢加入HCl/Dioxane(4M)(15mL)搅拌混合，加完恢复至室温，反应0.5h，减压浓缩,得到化合物5(800mg)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物5(1.0g)，(S)-2,6-二叔丁氧羰基氨基己酸(2.6g)，EDCI(1.4g)，HOBt(1.0g)，DIEA(1.0g)和溶剂DMF(10mL)，室温条件下反应过夜，加入100mL水和100mL EA，分液萃取，EA相用饱和食盐水100mL洗一次，减压浓缩，柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得到化合物6(1.1g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物6(1.2g)，HCl/Dioxane(4M)(10mL)和溶剂DCM(10mL)，室温条件下反应过夜，减压浓缩，纯化，得到化合物6021(220mg)。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.96(t,J＝6.6Hz,4H),3.75(dt,J＝14.0,6.6Hz,4H),3.62-3.45(m,12H),3.36-3.33(m,14H),3.25-3.17(m,2H),3.04-2.90(m,8H),2.83(t,J＝6.9Hz,4H),2.05-1.82(m,8H),1.73(p,J＝7.7Hz,10H),1.53(qd,J＝8.3,7.7,4.3Hz,8H),1.30(s,28H),0.97-0.87(m,3H)。

12.化合物6023

结构式：

分子量：670

在室温下，向三口瓶中，加入化合物十二烷基胺(10g)，加入MeOH(100mL)搅拌混合后，冰水浴降温至5℃，缓慢滴加入丙烯酸甲酯(10.2g)，搅拌混合，恢复至室温，反应液在室温下反应4h后停止反应，减压浓缩，柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)，得到产物2(19g)。在室温下，向单口瓶中，加入产物2(19.0g)、MeOH(200mL)和乙二胺(127.7g)，升温至60℃，保持该温度反应过夜，减压浓缩，得化合物3(20g)，取500mg纯化，冻干得化合物6023-1(218mg)。在室温下，向单口瓶中，加入原料6023-1(1.4g)，加入DCM(20mL)搅拌溶解后，再加入(S)-2,6-二叔丁氧羰基氨基己酸(3.4g)，EDCI(1.9g)，DMAP(1.2g)搅拌混合，保持室温，反应过夜，分液萃取，干燥，减压浓缩。得到化合物4(3.0g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物4(2.8g),HCl/1,4-Dioxane(4M)(20mL)，室温条件下反应2h；减压浓缩，纯化，冻干得化合物6023(123mg)。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.88(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.36(m,8H),3.36-3.33(m,2H),3.31-3.14(m,4H),3.04-2.93(m,4H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),2.00-1.82(m,4H),1.82-1.66(m,6H),1.50(qd,J＝8.2,7.8,4.2Hz,4H),1.45-1.25(m,18H),0.96-0.87(m,3H)。

13.化合物6024

结构式：

分子量：870.24

在室温下，向单口瓶中，加入产物6023-1(1.4g，合成方法同化合物6023中的6023-1)，加入MeOH(20mL)搅拌溶解后，再缓慢加入丙烯酸甲酯(2.8g)搅拌混合，升温至60℃，该温度下反应过夜，减压浓缩,得到化合物4(2.0g)；在室温条件下，向单口瓶中，加入化合物4(2.4g)，乙二胺(20mL)，室温条件下反应过夜；减压浓缩，纯化，得化合物6024(191mg)。1HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.69(t,J＝6.0Hz,4H),3.60-3.48(m,20H),3.42(t,J＝6.1Hz,4H),3.25-3.19(m,2H),3.12(t,J＝5.8Hz,8H),2.83(t,J＝6.5Hz,12H),1.78(tt,J＝11.0,6.4Hz,2H),1.51-1.18(m,20H),0.91(t,J＝6.7Hz,3H)。

14.化合物6026

结构式：

分子量：443.67

参考化合物6019的合成路线合成化合物6026，区别仅在于：采用等摩尔量的化合物1替代6019的原料5、采用等摩尔量的N-(叔丁氧羰基)乙醇胺替代化合物6019的中间体4。1H NMR(300MHz,DMSO)δ：4.51(t,J＝7.3Hz,4H),3.76(t,J＝6.1Hz,4H),3.18(t,J＝6.7Hz,4H),3.01(t,J＝5.8Hz,2H),2.49(t,J＝7.1Hz,4H),1.36-1.26(m,24H),0.89(t,J＝6.2Hz,3H).

化合物6025-6034参照前述化合物的合成途径获得，不同在于采用羟乙基胺替代相应的乙二胺，并先对羟乙基胺的氨基用Fmoc或Boc等保护基进行保护，反应完成后按照常规方法脱去保护基即可。

(3)第一可电离脂质示例性化合物及其性质

本发明示例性化合物及其性质列在表1中，其分别根据制备实施例1中的工艺路线合成得到。

本发明示例性化合物的计算c-pKa(molnetwork)、LogP(cLogP driver)，c-pKa和cLogP值由Chemoffice的ChemDraw模块生成。

表1第一可电离脂质示例性化合物性质

本发明第一可电离脂质示例性化合物的以上性质表明，它们可作为优良的表面活性剂，特别适合制备脂质纳米颗粒，用作药物递送载体。

(4)含有可电离脂质的肺部递送系统的制备

分别按照以上摩尔比制备含有可电离脂质的肺部递送系统，具体方法如下：

将所述脂质组分溶解于乙醇中，所有脂质原料在乙醇中的总浓度为3mg/mL，将萤火虫荧光素酶mRNA(Luciferase mRNA)溶解于50mM枸橼酸缓冲盐(pH4.0)溶液，制备Luciferase mRNA溶液(其中，实施例4的Luciferase mRNA溶液的浓度是0.19mg/ml，其他实施例按配比调整浓度)，将脂质乙醇溶液与Luciferase mRNA溶液以1：3体积比例在纳米制备设备混合后，超滤过滤，收集样品，即得含有可电离脂质的肺部递送系统(纳米粒)。

对比例2

在实施例12的基础上额外添加1.5％(以实施例12脂质用量总摩尔量为100％计)的缀合脂质(ALC-0159)作为脂质原料，将所有脂质组分溶解于乙醇中，所有脂质原料在乙醇中的总浓度为3.045mg/mL，将Luciferase mRNA溶解于50mM枸橼酸缓冲盐(pH4.0)溶液，制备浓度为0.19mg/ml的Luciferase mRNA溶液，将脂质乙醇溶液与Luciferase mRNA溶液以1：3体积比例在纳米制备设备混合后，超滤过滤，收集样品，即得含有可电离脂质的肺部递送系统(纳米粒)。

(5)含有可电离脂质的肺部递送系统的粒径、Zeta电位测定

1.粒径和多分散系数(PDI)测定：采用Malvern ZetaSizer Nano ZS90通过动态光散射测定实施例中纳米粒样品溶液的平均粒径及PDI。测量角为90°，分散剂折射率为1.330，测试温度为25℃。

2.Zeta电位：采用Malvern ZetaSizer Nano ZS90，含有电泳光散射技术(ELS)测定实施例中纳米粒样品溶液的Zeta电位，分散剂折射率：1.330，测试温度：25℃。

实施例制备的含有可电离脂质的肺部递送系统的平均粒径、PDI、Zeta电位数据见表2。

表2含有可电离脂质的肺部递送系统的粒径、PDI、Zeta电位总表

从表2可以看出，本发明所提供的含有可电离脂质的肺部递送系统粒径小且均一，呈中性或弱电性。

(6)雾化后纳米颗粒特性考察

采用欧姆龙压缩式雾化器，将含有可电离脂质的肺部递送系统进行雾化，并收集雾化后的样品进行粒径、电位、包封率等特性测定，测试方法同(5)，结果见表3。

表3含有可电离脂质的肺部递送系统雾化前后特性数据

从表3可以看出，本发明所述含有可电离脂质的肺部递送系统雾化前后，颗粒性质如粒径、粒径分布系数、电位、包封率等颗粒特性均保持不变，具有良好的稳定性。

(7)小鼠体内评价

7.1气管内给药

采用6-8周龄雌性Balb/c小鼠进行各实施例制备的含有可电离脂质的肺部递送系统肺内转染效率和安全性评价。通过气管内给药方式给予实施例5和1 5的含有可电离脂质的肺部递送系统，单次剂量0.375mpk，在给药后的特定时间点(6h)使用PerkinElmer小动物成像系统进行动物的活体成像，测定各器官组织中生物发光信号，结果见表4和附图1。

表4气管内给药后6h小鼠活体成像结果

^*ND为未检出。

结果表明，6h解剖的小鼠基本仅在肺部有荧光表达，其他脏器基本无表达。

7.2雾化吸入给药

采用6-8周龄雌性Balb/c小鼠进行各实施例制备的含有可电离脂质的肺部递送系统肺内转染效率和安全性评价。通过雾化吸入给药方式给予实施例4、7、12以及对比例1、2的含有可电离脂质的肺部递送系统，单次剂量1.125mpk，在给药后的特定时间点(6h)使用PerkinElmer小动物成像系统进行动物的活体成像，测定各器官组织中生物发光信号，结果见表5和附图2。

表5雾化给药后6h小鼠活体成像结果

*ND为未检出。

结果表明，6h解剖的小鼠基本仅在肺部有荧光表达，其他脏器基本无表达。

7.3气管内喷雾给药肺内分布

采用6-8周龄雌性Balb/c小鼠进行实施例制备的含有可电离脂质的肺部递送系统肺内转染效率。通过气管内喷雾给药方式给予实施例6的含有可电离脂质的肺部递送系统和生理盐水(空白对照)，单次剂量0.375mpk，在给药后的特定时间点(如6h、24h，48h，72h)摘取肺，使用PerkinElmer小动物成像系统对肺的5个肺叶(按照附图3中的1-5依次排列)进行IVIS成像，并测定各肺叶中生物发光信号强度，结果见附图4。

可以看出，通过气管内喷雾给药的方式给与小鼠含有可电离脂质的肺部递送系统后，小鼠肺内各个肺叶均具有较强的荧光素酶表达。

本发明方案不仅限于上述技术手段所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本发明领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (28)

1.含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，包括可电离脂质、辅助脂质和生物活性物质，所述含有可电离脂质的肺部递送系统不含聚合物缀合脂质；所述可电离脂质选自第一可电离脂质、第二可电离脂质和第三可电离脂质中的至少一种；

所述第一可电离脂质选自含有通式（1E）的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体；

（1E）

其中，所述R₁、R₂、R₃彼此独立地选自以下基团中的任意一种：

；

M选自-NR₄R₅；

R₄、R₅彼此独立地是H、C_1-6直链或支链烷基、C_2-6直链或支链烯基或者C_2-6直链或支链炔基，所述的C_1-6直链或支链烷基、C_2-6直链或支链烯基或C_2-6直链或支链炔基未被取代或被一个或多个-OH、羧基、胺基、酰胺基、脒基、胍基或卤素取代；

G₁、G₂、G₃彼此独立地是-O-、-S-、-NR₆-、-S-S-、-C(=O)-、-C(=O)O-、-CH(OH)-、-OC(=O)-、-C(=O)NR₆-、-NR₆C(=O)-、-OC(=O)O-、-NR₆C(=O)O-、-OC(=O)NR₆-、-NR₆C(=O)NR₁₃-；其中各R₆、R₁₃彼此独立地选自H、羟基；

R₉、R₁₀彼此独立地是H；

X₂选自-O-、-S-、NR₁₆-、-S-S- 、-C(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-C(=O)NR₁₆-、 -NR₁₆C(=O)-、-OC(=O)O-、-NR₁₆C(=O)O -、-OC(=O)NR₁₆-、-NR₁₆C(=O)NR₁₇-；

R11、R12彼此独立地是H、C1-6的直链或支链烷基；

各R₁₆、R₁₇彼此独立地选自H；

其中R4、R5、R6、R11、R12、R13、R16中所述的烷基、烯基未被取代或被一个或多个选自羟基、巯基、胺基、取代胺基、卤素的基团取代；

n是2-6的整数；k是1-6的整数；

所述盐不包括季铵盐；

所述第二可电离脂质为式（2）的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：

（2）；

其中A₁为NH或O；

当R_a选自C₆-C₂₄烷基、C₆-C₂₄烯基时，R_b和R_c各自独立地选自C₁-C₁₂烷基醇、烷基胺；

或当R_a选自C₆-C₂₄醇时，R_b和R_c各自独立地选自C₁-C₁₂烷基、烷基胺；

所述C₆-C₂₄烷基、C₆-C₂₄烯基为直链或支链结构；所述烷基胺为，其中，R_a’为C₁-C₁₂烷基，所述R_b’和R_b’’各自独立的选自H、C₁-C₆烷基胺、或；R_c’’选自被未取代或被氨基取代的C₁-C₆烷基，R_c’’’为H、或；

条件是，当A₁’为-CO-NH-、-NH-CO-或-CO-O-时，R_c’为C₁-C₆烷基；当A₁’为-CO-时，R_c’不存在；

所述第三可电离脂质选自下列化合物中的至少一种：

。

2.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述生物活性物质包括DNA、RNA、蛋白质、肽和小分子化合物中的至少一种。

3.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述生物活性物质的用量为脂质原料和生物活性物质总量的0.1-50%w/w。

4.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，M选自以下结构：

；

其中，m’与n’彼此独立地是0-6的整数，R₁’’与R₂’’彼此独立地是H、C_1-6的烷基、C_2-6的烯基、胍基、脒基、酰胺基、脂肪胺基。

5.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述式（1E）的化合物选自式（1F）所示的化合物：

（1F）。

6.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述式（1E）的化合物选自式（1G）所示的化合物：

（1G）。

7.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述式（1E）的化合物选自式（1H）所示的化合物：

（1H）。

8.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述式（1E）的化合物选自：

。

9.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述式（2）的化合物选自下列化合物中的至少一种：

。

10.如权利要求1-7任一项所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述辅助脂质为磷脂与类固醇的混合物。

11.如权利要求10所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述磷脂包括鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸中的至少一种。

12.如权利要求10所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述磷脂包括棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺、棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱中的至少一种。

13.如权利要求10所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述磷脂包括溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺中的至少一种。

14.如权利要求10所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述磷脂包括1，2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱、1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-双十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二-0-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1-油酰基-2-胆固醇基半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1， 2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐、二棕榈酰基磷脂酰甘油、二硬脂酰基-磷脂酰-乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺、1-硬脂酰基-2-油酰基-硬脂酰乙醇胺、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱中的至少一种。

15.如权利要求10所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述类固醇包括胆固醇、胆固醇硬脂酸、粪固醇、谷固醇、麦角固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、盐藻甾醇、番茄碱、熊果酸、α-生育酚中的至少一种。

16.如权利要求1-9任一项所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述含有可电离脂质的肺部递送系统还包含醇类化合物。

17.如权利要求16所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述醇类化合物包括C6-C18醇、聚乙二醇中的至少一种；所述醇类化合物与可电离脂质的摩尔比为0-2:1。

18.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述可电离脂质用量为处方总脂质的5-80mol%；所述辅助脂质用量为处方总脂质的20-95mol%。

19.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述辅助脂质中，磷脂与类固醇的摩尔比为（5-60）:（10-80）。

20.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述可电离脂质为第一可电离脂质或第二可电离脂质或第三可电离脂质，或第一可电离脂质与第二可电离脂质的混合物，或第二可电离脂质与第三可电离脂质的混合物；在第一可电离脂质与第二可电离脂质的混合物中，第一可电离脂质与第二可电离脂质的摩尔比为（5-90）:（1-30）；在第二可电离脂质与第三可电离脂质的混合物中，第三可电离脂质与第二可电离脂质的摩尔比为（5-90）:（1-30）。

21.如权利要求1所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述含有可电离脂质的肺部递送系统的粒径为20-400nm，多分散指数小于0.5，表面电位为-20mV~ 60mV。

22.如权利要求1-7任一项所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，还包含赋形剂。

23.如权利要求21所述的含有可电离脂质的肺部递送系统，其特征在于，所述的含有可电离脂质的肺部递送系统为液体形式或固体形式。

24.如权利要求1-23任一项所述的含有可电离脂质的肺部递送系统的制备方法，其特征在于，包括：将生物活性物质、可电离脂质和辅助脂质在溶剂中混合的步骤。

25.如权利要求1-23任一项所述的含有可电离脂质的肺部递送系统在制备通过鼻内、支气管内或肺部给药递送生物活性物质的药物中的应用。

26.如权利要求25所述的应用，其特征在于，所述药物施用于哺乳动物体内。

27.如权利要求25所述的应用，其特征在于，所述药物施用于细胞。

28.如权利要求25所述的应用，其特征在于，所述药物通过喷雾器或吸入器施用。