CN117903227B

CN117903227B - 一种香蒲新苷接枝化合物及制备方法与应用

Info

Publication number: CN117903227B
Application number: CN202410053185.6A
Authority: CN
Inventors: 陈若川; 章晨润; 刘斌; 陈志亮
Original assignee: Wuyishan Chenglong Tianchuang Tea Technology Co ltd
Current assignee: Wuyishan Chenglong Tianchuang Tea Technology Co ltd
Priority date: 2024-01-15
Filing date: 2024-01-15
Publication date: 2026-01-06
Anticipated expiration: 2044-01-15
Also published as: CN117903227A

Abstract

本发明公开了一种香蒲新苷接枝化合物及制备方法与应用。所述香蒲新苷接枝化合物具有如下结构表达式，其制备方法包括：将表没食子儿茶素没食子酸酯和香蒲新苷溶解，在酸催化剂的作用下反应，制得香蒲新苷接枝化合物。该香蒲新苷接枝化合物具有提升的降尿酸效果；

Description

一种香蒲新苷接枝化合物及制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种接枝化合物，尤其涉及一种香蒲新苷接枝化合物及制备方法与应用，属于药物合成技术领域。

背景技术

尿酸(UA)是一种化学废物(由肾脏排泄)，是嘌呤代谢的副产物。尿液和血清中的正常UA浓度范围分别为1.40-4.40mmol/L和0.30-0.5mmol/L。UA浓度从正常水平升高会导致各种疾病，如痛风、高尿酸血症、Lesch-Nyhan综合征、肾脏疾病和心血管疾病，因此，治疗高尿酸血症具有重大的临床需求。

目前临床上较为常用的药物为抑制尿酸合成的黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇和非布司他、促进尿酸排泄的丙磺舒和苯溴马隆。尽管上述药物的疗效显著，但是存在着不同程度的不良反应，别嘌醇在部分患者可引起严重的甚至致死性的皮肤损害；非布司他存在不可预知的心血管风险，可增加患者的死亡风险；苯溴马隆会可导致严重的肝毒性。鉴于以上原因，目前对治疗高尿酸的药物的开发有着较高的需求。

香蒲新苷(Typhaneoside)是蒲黄中的主要黄酮成分之一，具有改善微循环、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、促凝血、抗炎、引产、降低血脂及抗动脉粥样硬化等作用。此外，专利CN116196323B首次报道了香蒲新苷在降尿酸方面具有一定应用。但本发明人经深度研究发现，直接以香蒲新苷作为活性成分在低浓度使用下仍无法达到满意的降尿酸效果。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提出一种香蒲新苷接枝化合物及制备方法与应用。

首先，本发明提供一种香蒲新苷接枝化合物，具有如下结构表达式：

其次，本发明还提供一种香蒲新苷接枝化合物的制备方法，包括：将表没食子儿茶素没食子酸酯和香蒲新苷溶解，在酸催化剂的作用下反应，制得香蒲新苷接枝化合物。

以上反应过程表达式参考如下：

本发明制备方法的原料中，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)可以来自武夷岩茶的提取物，武夷岩茶是具有岩韵(岩骨花香)品质特征的乌龙茶，长期饮用具有抗肥胖和降血脂的作用，生物亲和性良好；而香蒲新苷是蒲黄中的主要黄酮成分之一，来源也是植物成分，生物毒性几乎为零。本发明通过化学修饰使EGCG与香蒲新苷反应，所得产物意外地具有降尿酸的显著疗效，从而完成了本发明。本发明大大增加了EGCG修饰物的市场前景，有望为未来降尿酸药物的开发做出贡献。

作为本发明制备方法中的优选方案，所述酸催化剂为无机酸，优选盐酸、硫酸、硝酸中的一种或多种，优选盐酸。

作为本发明制备方法中的优选方案，所述表没食子儿茶素没食子酸酯溶于酸催化剂的水溶液后，再加入香蒲新苷反应；

优选地，所述酸催化剂的水溶液浓度为2-10mol/L，优选5-8mol/L，例如是3mol/L、4mol/L、5mol/L、6mol/L、7mol/L等。

作为本发明制备方法中的优选方案，表没食子儿茶素没食子酸酯和香蒲新苷的摩尔比为(1-1.4):1，优选(1.2-1.3):1，例如是1.1:1、1.15:1、1.2:1、1.25:1、1.3:1、1.35:1等。

作为本发明制备方法中的优选方案，所述反应在回流条件下搅拌进行3-5h，例如是3h、3.5h、4h、4.5h、5h等，优选地，回流温度为75-120℃，进一步优选80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、105℃、110℃、115℃等。

作为本发明制备方法中的优选方案，反应结束后，冷却反应液，用碱中和至pH为6.5-7，提纯得到香蒲新苷接枝化合物。

所述中和使用的碱可以是各种反应惰性的有机碱或无机碱，基于后处理更加简单的角度考虑，优选无机碱，更优选氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾中的一种或多种；

进一步优选地，无机碱的浓度可以是1-5mol/L。

本发明中，产物的具体提纯方法不做任何限制，可以是本领域常规采用的萃取提纯、结晶提纯、柱层析提纯或它们中至少两种的组合等。对于萃取提纯而言，合适的萃取剂是乙酸乙酯和水，为了提高萃取物的纯度和收率，可以通过多次萃取对产物进行回收；萃取后可采用常规减压蒸馏、结晶/柱层析的方法进一步提纯。

再次，本发明还提供一种如前文所述的香蒲新苷接枝化合物或前文所述的方法制得的香蒲新苷接枝化合物作为降尿酸用药的用途。

本发明首次报道了一种全新结构的香蒲新苷接枝化合物及其合成，生物基原料来源广泛且生物毒害性几乎为零，人体适应性好，有望在降低高尿酸含量的基础上，减轻人体不良副反应及其他不耐受性，并且与香蒲新苷相比，在更低剂量的使用下仍具有显著的降尿酸效果。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明做进一步说明，本发明所述实施例只是作为对本发明的说明，不限制本发明的范围。

本发明中原料和试剂如无特殊说明，均可通过市售途径购买获得；所有的溶剂均为分析纯。其中，表没食子儿茶素没食子酸酯(CAS 989-51-5)采购自上海麦克林，香蒲新苷(CAS104472-68-6)采购自上海阿拉丁。

【实施例1】

将表没食子儿茶素没食子酸酯(531mg，1.2mmol)溶于20mL的3mol/L盐酸中，100℃加热搅拌30min，完全溶解后加入香蒲新苷(770mg，1mmol)，继续加热回流搅拌4小时结束反应。将反应液冷却至室温，用2mol/L氢氧化钠水溶液中和至pH为7.0，冷却，加入200mL乙酸乙酯萃取3次，然后用100mL饱和氯化钠溶液洗涤萃取剂，并用无水硫酸钠去除溶液中多余的水，干燥后旋干溶剂，柱层析纯化(甲醇：二氯甲烷体积比为1：100)，得到产物，即香蒲新苷接枝化合物(收率39％)。

¹H NMR(500MHz,Chloroform-d):δ8.13(d,J＝2.2Hz,1H),7.73(dd,J＝9.2,2.1Hz,1H),7.66(s,2H),7.47(s,1H),7.27(s,1H),7.09(d,J＝9.0Hz,3H),6.88(d,J＝2.2Hz,1H),6.68(d,J＝2.4Hz,1H),5.57(d,J＝7.7Hz,1H),5.17(d,J＝6.4Hz,2H),5.04(dt,J＝6.8,3.8Hz,1H),4.98(d,J＝5.8Hz,2H),4.63–4.52(m,2H),4.42(d,J＝6.0Hz,1H),4.24(d,J＝6.4Hz,1H),3.92–3.78(m,9H),3.73–3.62(m,4H),3.53(tdd,J＝9.1,6.4,2.4Hz,1H),3.46(tdt,J＝9.3,6.4,3.9Hz,2H),3.30(d,J＝6.6Hz,1H),3.27(ddt,J＝8.9,4.5,2.3Hz,1H),2.20(s,1H),1.25(dd,J＝6.2,1.1Hz,6H).

【实施例2】

将表没食子儿茶素没食子酸酯(619mg，1.4mmol)溶于20mL的6mol/L盐酸中，90℃加热搅拌30min，完全溶解后加入香蒲新苷(770mg，1mmol)，继续加热回流搅拌5小时结束反应。将反应液冷却至室温，用2mol/L氢氧化钠水溶液中和至pH为7.0，冷却，加入200mL乙酸乙酯萃取3次，然后用100mL饱和氯化钠溶液洗涤萃取剂，并用无水硫酸钠去除溶液中多余的水，干燥后旋干溶剂，柱层析纯化(甲醇：二氯甲烷体积比为1：100)，得到产物，即香蒲新苷接枝化合物(收率43％)。

【实施例3】

将表没食子儿茶素没食子酸酯(486mg，1.1mmol)溶于20mL的8mol/L盐酸中，120℃加热搅拌30min，完全溶解后加入香蒲新苷(770mg，1mmol)，继续加热回流搅拌3小时结束反应。将反应液冷却至室温，用2mol/L氢氧化钠水溶液中和至pH为7.0，冷却，加入200mL乙酸乙酯萃取3次，然后用100mL饱和氯化钠溶液洗涤萃取剂，并用无水硫酸钠去除溶液中多余的水，干燥后旋干溶剂，柱层析纯化(甲醇：二氯甲烷体积比为1：100)，得到产物，即香蒲新苷接枝化合物(收率41％)。

【应用例】

(1)细胞毒性测试：

采用CCK-8法对PC12细胞进行细胞毒性测试，其中，实验组是具有实施例1制备的香蒲新苷接枝化合物的培养液；对照组是具有香蒲新苷的培养液，结果表明，在0.5-20μmol/L的药物浓度下，相同浓度的实验组和对照组在450nm下的OD值无明显变化。

(2)降尿酸效果测定

①动物准备：实验动物为由扬州大学提供的重量为150-170g/只的成年雄性SD大鼠。实验期间，在21±2℃下，大鼠保持自由食用的食物和水，并保持12小时光/暗周期。实验动物福利和实验程序是严格按照实验动物饲养管理和使用指南相关规定进行的，尽全力减少动物的痛苦。

②动物分组及喂养：将大鼠分为7组，分别记为空白组、模型组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、阳性对照组、原料对照组；每10只大鼠为一组。

③药物配制：首先配制0.8wt％的CMC-Na溶液，将实施例1制备的香蒲新苷接枝化合物溶于CMC-Na溶液中，分别配制成药物浓度为0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL的低剂量实验组药液、中剂量实验组药液、高剂量实验组药液；再将苯溴马隆溶于CMC-Na溶液中，配制成药物浓度为1mg/mL的阳性对照组药液；将香蒲新苷溶于CMC-Na溶液中，配制成药物浓度为1mg/mL的原料对照组药液。

④给药实验：根据体重按照每天10mL/kg的用量对大鼠分别进行胃内给药，连续给药7天；具体喂药方式为：空白组和模型组均给与0.8wt％的CMC-Na溶液；低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组分别给与浓度为0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL的实验组药液；阳性对照组给与浓度为1mg/mL的阳性对照组药液；原料对照组给与浓度为1mg/mL的原料对照组药液。

⑤样本处理及取样：第8天最后一次给药30min后，除空白组以外，其他各组均腹腔注射50mg/ml的次黄嘌呤溶液(溶剂为0.8wt％的CMC-Na溶液)以建立高尿酸模型，给药剂量为1000mg/kg。在给药后30min，立刻摘除眼球采血，待血清渗出后15000rpm离心4min，吸取上层血清置带盖的样品管中，用生理盐水配制到所需体积，在贝克曼LX20全自动生化分析仪上测定血尿酸含量，数据以均数±标准差表示，测试结果如表1所示。

表1、血尿酸含量测试结果

	血尿酸(μmol/L)
		空白组	127.68±21.63
模型组	695.25±64.37
		低剂量实验组	573.56±79.84
中剂量实验组	531.04±74.93
		高剂量实验组	449.25±53.28
阳性对照组	528.42±68.40
		原料对照组	649.10±58.42

从以上测试结果可以看出，本发明提供的香蒲新苷接枝化合物在5-20mg/kg的给药剂量下都可以在短时间内发挥降尿酸的作用，并且几乎零生物毒害；而且在较低用药剂量下的降尿酸水平显著优于单独使用香蒲新苷的对照组，相比于已知技术产生了意料之外的效果变化，技术优势明显。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域技术的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种香蒲新苷接枝化合物，其特征在于，具有如下结构表达式：

。

2.根据权利要求1所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，包括：将表没食子儿茶素没食子酸酯和香蒲新苷溶解，在酸催化剂的作用下反应，制得香蒲新苷接枝化合物。

3.根据权利要求2所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，所述酸催化剂为无机酸。

4.根据权利要求3所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，所述酸催化剂为盐酸、硫酸、硝酸中的一种或多种。

5.根据权利要求3所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，所述酸催化剂为盐酸。

6.根据权利要求2所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，所述表没食子儿茶素没食子酸酯溶于酸催化剂的水溶液后，再加入香蒲新苷反应。

7.根据权利要求6所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，所述酸催化剂的水溶液浓度为2-10mol/L。

8.根据权利要求7所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，所述酸催化剂的水溶液浓度为5-8 mol/L。

9.根据权利要求2-8任一项所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，表没食子儿茶素没食子酸酯和香蒲新苷的摩尔比为(1-1.4):1。

10.根据权利要求9所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，表没食子儿茶素没食子酸酯和香蒲新苷的摩尔比为(1.2-1.3):1。

11.根据权利要求2-8任一项所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，所述反应在回流条件下搅拌进行3-5h。

12.根据权利要求11所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，回流温度为75-120℃。

13.根据权利要求2-8任一项所述的香蒲新苷接枝化合物的制备方法，其特征在于，反应结束后，冷却反应液，用碱中和至pH为6.5-7，提纯得到香蒲新苷接枝化合物。