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CN117866870A - 一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法 - Google Patents

一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法 Download PDF

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CN117866870A
CN117866870A CN202410054173.5A CN202410054173A CN117866870A CN 117866870 A CN117866870 A CN 117866870A CN 202410054173 A CN202410054173 A CN 202410054173A CN 117866870 A CN117866870 A CN 117866870A
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CN
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enzyme
producing bacteria
hydrolase
efficiency
aspergillus oryzae
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CN202410054173.5A
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辛晓东
李林娟
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Dongguan University of Technology
Original Assignee
Dongguan University of Technology
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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体为一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法。本发明通过首先使用以蔗糖为主要碳源的培养基进行产酶菌的接种培养，然后将菌株转移到以废糖蜜为主要碳源的培养基中进行驯化培养，成功产出水解酶，并且通过添加钙离子，提高水解酶活性，制备高效水解酶。本发明所制的生物酶可用于催化水解剩余污泥，进而提高污泥厌氧发酵效率。本发明可降低污泥预处理成本的同时，又实现制糖企业所产废糖蜜的同步处理。

Description

一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体为一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法。
背景技术
如何高效处理污泥成为了大众关注的话题。污泥厌氧发酵产酸则是一种高效处理污泥的方法。
然而，水解阶段为污泥厌氧发酵的限速环节。所以采用水解酶预处理将有助于厌氧发酵整个过程的优化及提升。目前，大多数人采用购置成品水解酶以加速提升厌氧发酵的水解阶段，但大量购置成品水解酶所需成本较高。现提出利用制糖厂区废糖蜜为培养基主要原材料，通过以废糖蜜为主要基质驯化培养产酶菌米曲霉(Aspergillus oryzae)，从而实现高效水解酶的产生，其包含有蛋白酶和淀粉酶，主要以蛋白酶为主，用于促进污泥溶胞水解，以加速提高厌氧发酵的水解阶段。该提出有利于制糖厂区废糖蜜的资源化处理，实现通过自培养产出大量的水解酶。
因此，我们提出一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活培养可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基，灭菌；
将米曲霉敲打活化后，接种于蔗糖平板培养基中，好氧培养5-7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中；
步骤S3：加入钙离子，培养，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
进一步的，所述步骤S1中，蔗糖平板培养基的配方为：蔗糖30-35g/L，琼脂15-20g/L，硝酸钠3.0-3.5g/L，磷酸氢二钾1.0-1.5g/L，硫酸镁0.6-0.7g/L，氯化钾0.5-0.6g/L，硫酸亚铁0.02-0.03g/L。
进一步的，所述步骤S2中，废糖蜜液体培养基的配方为：废糖蜜38-50g/L，硝酸钠3.0-3.5g/L，磷酸氢二钾1.0-1.5g/L，硫酸镁0.6-0.7g/L，氯化钾0.5-0.6g/L，硫酸亚铁0.02-0.03g/L。
进一步的，所述步骤S3中，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量1.96-2.24g/L。
进一步的，所述步骤S3中，培养时间为40-44h。
进一步的，所述步骤S2中，培养工艺条件为：温度28-30℃，摇床转速50-120r/min，培养瓶简单遮挡，无需密封。
进一步的，所述步骤S1中，灭菌工艺条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间15min。
进一步的，所述步骤S1中，米曲霉的体积为蔗糖平板培养基体积的0.5％-2.0％。
进一步的，所述步骤S1中，培养工艺条件为：温度27-29℃、摇床转度90-110r/min。
进一步的，所述步骤S2中，米曲霉孢子的体积为废糖蜜液体培养基体积的10％-50％。
在上述技术方案中，先使用蔗糖为主要原材料碳源的固体培养基培养米曲霉，在特定的环境和条件下，菌株成功激活后，将其接种到以废糖蜜为主要原材料碳源的液体培养基中，并且通过添加钙离子的方法，制得了高效水解酶，这表明了我们所提出的低成本驯化培养产酶菌高效产水解酶的方法是可行的。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1.本发明的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，可提高污泥厌氧发酵的水解效率。即以废糖蜜为主要原材料的培养基中可产出大量水解酶，实现提高污泥厌氧发酵的水解，在降低成本的同时又可以使厂区废糖蜜的资源化利用。
2.本发明的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，通过首先使用以蔗糖为主要原材料碳源的培养基进行接种培养，然后转移到以废糖蜜为主要碳源的培养基中进行接种培养，并加入钙离子，从而实现高效产出水解酶。经过研究发现，最佳的产酶活性效果周期为40-44h。因此，本发明的方法可以有效地实现低成本、高效产酶菌产出水解酶的目的。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。
在附图中：
图1是本发明中实施例1以蔗糖为主要原材料的培养基激活培养米曲霉3天后显示图；
图2是本发明中实施例1以蔗糖为主要原材料的培养基激活培养米曲霉5天后显示图；
图3是本发明中实施例1以废糖蜜为主要原材料的培养基接种培养产酶菌4天后显示图；
图4是本发明中实施例1以废糖蜜为主要原材料，转变到液体培养基环境中培养后显示图；
图5是本发明中实施例1、实施例2检测自培养产酶菌所产酶活的液体培养基中α-淀粉酶酶活数据；
图6是本发明中实施例1检测自培养产酶菌所产酶活的液体培养基中蛋白酶酶活吸光度和成品蛋白酶活吸光度数据。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本实施例中废糖蜜：含固率为75.52％、含水率为24.48％、VS/TS为84.7％，其中废糖蜜中蛋白占总有机部分的16.47％、碳水化合物类占总有机部分的70.74％，来源于东莞市东糖集团有限公司；米曲霉：型号2020-09，水分≤8％，分离于东莞市松山湖区的土壤环境。
实施例1：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖30g/L，琼脂15g/L，硝酸钠3.0g/L，磷酸氢二钾1.0g/L，硫酸镁0.6g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.02g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养6d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜43g/L，硝酸钠3.0g/L，磷酸氢二钾1.0g/L，硫酸镁0.6g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.02g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量1.96g/L，在28℃、100r/min的摇床转度下，培养42h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实施例2：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖32g/L，琼脂18g/L，硝酸钠3.2g/L，磷酸氢二钾1.2g/L，硫酸镁0.65g/L，氯化钾0.55g/L，硫酸亚铁0.02g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养5d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜43g/L，硝酸钠3.2g/L，磷酸氢二钾1.2g/L，硫酸镁0.65g/L，氯化钾0.55g/L，硫酸亚铁0.02g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量1.96g/L，在27℃、90r/min的摇床转度下，培养40h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实施例3：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜43g/L，硝酸钠3.2g/L，磷酸氢二钾1.2g/L，硫酸镁0.65g/L，氯化钾0.55g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量1.96g/L，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实施例4：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，废糖蜜38g/L，硝酸钠3.0g/L，磷酸氢二钾1.0g/L，硫酸镁0.6g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.02g/L；
步骤S3：加入钙离子，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实施例5：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜50g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实施例7：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜浓度45g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量1.96g/L，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实施例8：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜浓度45g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量2.0g/L，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实施例9：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜浓度45g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量2.24g/L，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
对比例1：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜10g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量2.24g/L，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
对比例2：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜30g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
对比例3：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜43g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量0.05g/L，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养44h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
对比例4：一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，包括以下步骤：
步骤S1：激活可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基(蔗糖35g/L，琼脂20g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L)，于121℃灭菌15min；将米曲霉敲打活化后，接种于平板培养基中，好氧培养7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中培养，其中废糖蜜30g/L，硝酸钠3.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁0.7g/L，氯化钾0.6g/L，硫酸亚铁0.03g/L；
步骤S3：加入钙离子，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量2.24g/L，在29℃、110r/min的摇床转度下，培养20h后，得到高活性水解酶，实现产酶菌高效产水解酶。
实验：取实施例1-8、对比例1-4中得到的产酶活的液体培养基，制得试样，分别对其性能进行检测并记录检测结果：
采用碘-淀粉比色法测定自培养产酶菌所产酶活的液体培养基中α-淀粉酶酶活，实验步骤：设置测定组与对照组，分别加0.5mL的淀粉缓冲液，37℃预热5min，测定管中加入待测样本0.1mL，对照组不加；混匀后37℃水浴，准确反应7.5min；测定组与对照组同时加入碘液0.5mL，然后测定组加入双蒸水3.0mL，对照组加入双蒸水3.1mL；混匀后，660nm下测定吸光度。α-淀粉酶酶活(U/mL)＝(空白OD值-测定OD值)/空白OD值×80×样品稀释倍数
检测自培养产酶菌所产酶活的液体培养基中蛋白酶酶活吸光度和成品蛋白酶(中性蛋白酶，活性≥3000U/mg，来源于正宏生物科技有限公司)活吸光度，实验步骤：1、将酪蛋白溶液放入40℃±0.2℃恒温水浴2.0min；2、设置空白组和实验组，均加入待测酶液1.0mL，置于40℃±0.2℃恒温水浴2.0min；3、空白组加入三氯乙酸2.0mL摇匀，实验组加入酪蛋白溶液1.0mL摇匀；4、将空白组和实验组置于40℃±0.2℃恒温水浴10.0min；5、空白组加入酪蛋白溶液1.0mL摇匀，实验组加入三氯乙酸2.0mL摇匀；6、取出静止10.0min，过滤；7、取1.0mL滤液，加入碳酸钠溶液5.0mL，福林溶液1.0mL，置于40℃±0.2℃恒温水浴显色20.0min；8、以空白组为对照，680nm波长测定实验组吸光度。
测试结果
α-淀粉酶酶活(μ/mL) 蛋白酶酶活吸光度
实施例1 75.0 0.228
实施例2 73.4 0.217
实施例3 74.8 0.221
实施例4 70.2 0.208
实施例5 73.1 0.231
实施例6 69.5 0.225
实施例7 73.2 0.232
实施例8 74.6 0.236
对比例1 64.3 0.203
对比例2 68.3 0.205
对比例3 61.2 0.196
对比例4 62.3 0.199
根据上表中的数据，可以清楚得到以下结论：
1、与对比例1-4相比，实施例1-8产酶活的液体培养基中α-淀粉酶酶活、蛋白酶酶活吸光度均增大，可知废糖蜜在38-50g/L范围(取中间值取43.0g/L)，氧化钙投量在1.96-2.24g/L范围，可以实现米曲霉的高效产酶。
2、通过检测实施例1产酶活的液体培养基中α-淀粉酶酶活和蛋白酶酶活吸光度，可知所得产物的α-淀粉酶活为75μ/mL，相对来说较少，但产出的蛋白酶酶活可达成品蛋白酶酶活吸光度(0.911)的1/4，所以通过本发明的方法，产出的蛋白酶酶活可达成品蛋白酶酶活的1/4，酶活效果明显且可观，见附图6。
3、通过检测实施例1-8产酶活的液体培养基中α-淀粉酶酶活、蛋白酶酶活吸光度，结果表明：以废糖蜜为主要原材料碳源的培养基，可产出大量水解酶，且由于废糖蜜主要来源于制糖废弃物，这种方法可以实现对废糖蜜的高效资源化利用。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程方法物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程方法物品或者设备所固有的要素。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改等同替换改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1：激活培养可产水解酶的米曲霉：配置蔗糖平板培养基，灭菌；
将米曲霉敲打活化后，接种于蔗糖平板培养基中，好氧培养5-7d，制得米曲霉孢子；
步骤S2：将米曲霉孢子接种于废糖蜜液体培养基中；
步骤S3：加入钙离子，培养，得到高活性水解酶。
2.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S1中，蔗糖平板培养基的配方为：蔗糖30-35g/L，琼脂15-20g/L，硝酸钠3.0-3.5g/L，磷酸氢二钾1.0-1.5g/L，硫酸镁0.6-0.7g/L，氯化钾0.5-0.6g/L，硫酸亚铁0.02-0.03g/L。
3.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S2中，废糖蜜液体培养基的配方为：废糖蜜38-50g/L，硝酸钠3.0-3.5g/L，磷酸氢二钾1.0-1.5g/L，硫酸镁0.6-0.7g/L，氯化钾0.5-0.6g/L，硫酸亚铁0.02-0.03g/L。
4.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S3中，钙离子来源于氧化钙试剂，投加量1.96-2.24g/L。
5.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S3中，培养时间为40-44h。
6.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S1中，灭菌工艺条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间15min。
7.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S1中，米曲霉的体积为蔗糖平板培养基体积的0.5％-2.0％。
8.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S1中，培养工艺条件为：温度27-29℃，摇床转度50-120r/min。
9.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S2中，米曲霉孢子的体积为废糖蜜液体培养基体积的10％-50％。
10.根据权利要求1所述的一种低成本实现产酶菌高效产水解酶的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤S2中，培养工艺条件为：温度28-30℃，摇床转速50-120r/min，培养瓶简单遮挡，无需密封。
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