CN117800979A

CN117800979A - 一类四氢苯并呋喃[2,3-c]吡啶类激酶抑制剂及其制备方法及用途

Info

Publication number: CN117800979A
Application number: CN202211167412.5A
Authority: CN
Inventors: 张翱; 丁健; 李阳; 谢华; 陆晴; 宋子兰; 耿美玉
Original assignee: Zhongke Zhongshan Pharmaceutical Innovation Research Institute; Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Shanghai Jiao Tong University
Current assignee: Zhongke Zhongshan Pharmaceutical Innovation Research Institute; Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Shanghai Jiao Tong University
Priority date: 2022-09-23
Filing date: 2022-09-23
Publication date: 2024-04-02

Abstract

本发明涉及一类四氢苯并呋喃[2,3‑c]吡啶类激酶抑制剂及其制备方法及用途。具体地，本发明化合物具有式I所示结构，其中各基团和取代基的定义如说明书中所述。本发明还公开了所述化合物的制备方法及其在抗肿瘤方面的用途。

Description

一类四氢苯并呋喃[2,3-c]吡啶类激酶抑制剂及其制备方法及用途

技术领域

本发明涉及药物领域，具体地涉及一类四氢苯并呋喃[2,3-c]吡啶类激酶抑制剂及其制备方法及用途。

背景技术

p21活化激酶(PAKs)是细胞内丝氨酸/苏氨酸特异性的蛋白激酶，在细胞骨架组织、细胞形态发生和细胞存活中起着重要作用。参与调控包括癌症、传染病和神经疾病在内的多种疾病。PAKs位于多种肿瘤发生所必需的信号通路的交界处。当PAKs表达过高、突变或被上游信号如细胞分裂控制蛋白Cdc42或RAC异常激活时，会影响ERK、AKT和WNT等通路，在细胞内产生致癌信号，包括促进细胞自主生长信号、逃避凋亡和促进侵袭、转移等。此外，PAKs蛋白在多种人类癌症中上调，且与肿瘤晚期程度以及患者的生存率降低呈正相关。因此，研发PAK抑制剂是治疗肿瘤的一个重要策略。

PAKs家族由六个成员组成，根据序列和结构同源性分为两个类型：I型(PAK1-3)和II型(PAK4-6)。然而，I型PAKs已经被证明是极具挑战性的小分子药物靶点。而且，最近一项研究指出PAK2的抑制与急性心血管毒性有关，并且会因PAK1的抑制而增强。这项研究导致泛I型PAKs抑制剂的研究令人担忧。而II型的PAK4促进BRAF或KRAS驱动的肿瘤侵袭、转移和增殖，这引起了人们极大的兴趣。同时，近期研究显示，PAK4参与肿瘤免疫。PAK4在低T细胞和树突状细胞浸润的肿瘤活检富集，并且与免疫标志物响应以及T细胞浸润呈负相关。此外，PAK4的基因敲除可诱导内皮细胞粘附蛋白的重新表达，减少血管异常，改善T细胞浸润。在B16黑色素瘤小鼠模型中，PAK4的敲除会使PD-1抗体的治疗更加敏感，并改善T细胞浸润。

目前，仅有一款Karyopharm公司开发的PAK4抑制剂ATG-019(KPT-9274)处于I期临床研究，用于治疗晚期实体瘤或非霍奇金淋巴瘤。KPT-9274是一类PAK4变构抑制剂，不直接抑制PAK4激酶活性，但可下调肿瘤细胞中PAK4蛋白和下游信号的磷酸化水平；并且，KPT-9274对I型PAKs无明显抑制作用。同时，它对多种肿瘤细胞有良好的抑制活性且在肾癌、胰腺癌模型中有良好的抗肿瘤活性。此外，在小鼠B16黑色素瘤、MC38结肠癌和多形性胶质母细胞瘤模型中，KPT-9274与PD-1单抗或CAR-T疗法联用相对于单一用药提高了抗肿瘤效果。

综上，PAK4在肿瘤发生发展以及肿瘤免疫逃逸中发挥着重要作用，因此，开发靶向PAK4的小分子药物具有良好的市场前景。目前，该领域尚无药物上市，仅有一款药物处于临床研发阶段，亟需开发更多新颖结构的PAK4抑制剂以满足临床需求。因此，发明人希望能开发一种高效低毒代谢性良好的高选择性PAK4抑制剂，为肿瘤治疗提供新的选项。

发明内容

本发明的目的在于提供一种式I所示化合物及其制备方法和其在抗肿瘤方面的用途。

本发明的第一方面，提供了一种化合物，所述化合物为式I所示化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药，

其中，

A选自下组：其中，R⁰选自下组：氢、C1-C6烷基；

V、W、X、Y各自独立地选自下组：N、CR⁴，其中，R⁴选自下组：氢、卤素、羟基、C1-C6烷氧基、氨基、氰基、C1-C6烷基；

Z选自下组：

R¹选自下组：氢、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的4-8元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的5-6元杂芳基；其中，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基；

R²选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯基、取代或未取代的C2-C6炔基、取代或未取代的含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的4-8元杂环烷基、取代或未取代C3-C8环烷基、取代或未取代的含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的5-6元杂芳基、其中，n选自下组：0、1、2、3，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、氨基、氰基、巯基、二氟甲基、氧代(＝O)、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基，所述杂环烷基选自下组：单环、并环、螺环、桥环；

R³选自下组：氢、氨基。

在另一优选例中，A选自下组：其中，R⁰选自下组：H、C1-C6烷基；

V、W、X、Y各自独立地选自下组：N、CR⁴，其中，R⁴选自下组：氢、卤素、C1-C6烷基；

Z选自下组：

R¹选自下组：氢、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C6-C10芳基；其中，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基；

R²选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的4-8元杂环烷基、取代或未取代C3-C8环烷基、其中，n选自下组：0、1、2，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、氰基、巯基、二氟甲基、氧代(＝O)、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基，所述杂环烷基选自下组：单环、并环、螺环、桥环；

R³选自下组：氢、氨基。

在另一优选例中，A选自下组：其中，R⁰为H。

在另一优选例中，选自下组：

R⁴选自下组：氢、卤素。

在另一优选例中，R²选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的4-8元杂环烷基、取代或未取代C3-C8环烷基、其中，n选自下组：0、1、2、3，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、氰基、巯基、二氟甲基、氧代(＝O)、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基，所述杂环烷基选自下组：单环、并环、螺环、桥环。

在另一优选例中，R²选自取代或未取代的下组基团：C1-C6烷基、

在另一优选例中，R¹选自下组：氢、卤素、取代或未取代的C6-C10芳基；其中，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基。

在另一优选例中，所述化合物选自下组：

本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，包含药学上可接受的载体和一种或多种安全有效量的本发明第一方面所述的化合物。

本发明的第三方面，提供了一种本发明第一方面所述的化合物的用途，用于制备药物，所述药物用于预防和/或治疗选自下组的疾病：癌症、传染病、神经疾病。

本发明的第四方面，提供了一种本发明第一方面所述的化合物的用途，用于制备药物，所述药物用于抑制PAK4激酶活性。

本发明的第五方面，提供了一种本发明第一方面所述的化合物的用途，用于制备药物，所述药物用于预防和/或治疗PAK4激酶活性相关疾病。

在另一优选例中，所述PAK4激酶活性相关疾病选自下组：癌症、传染病、神经疾病。

在另一优选例中，所述癌症选自下组：非霍奇金淋巴瘤、肾癌、胰腺癌、黑色素瘤、结肠癌、胶质母细胞瘤。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1是KPT-9274(盐酸盐)溶液浓度-峰面积线性关系图。

图2是化合物S21(盐酸盐)溶液浓度-峰面积线性关系图。

图3是化合物S23(盐酸盐)溶液浓度-峰面积线性关系图。

具体实施方式

本发明人经过长期而深入的研究，通过结构优化，意外地制备了一种结构新颖、具有高抑制活性、高水溶性的化合物。在此基础上，发明人完成了本发明。

术语

在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。

在本发明中，术语“卤素”指F、Cl、Br或I。

在本发明中，“C1-C6烷基”是指包括1-6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、新戊基、特戊基、或类似基团。

在本发明中，术语“C2-C6烯基”是指具有2-6个碳原子的含有一个双键的直链或支链烯基，非限制性地包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、异丁烯基、戊烯基和己烯基等。

在本发明中，术语“C2-C6炔基”是指具有2-6个碳原子的含有一个三键的直链或支链炔基，非限制性地包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、异丁炔基、戊炔基和己炔基等。

在本发明中，术语“C3-C8环烷基”是指在环上具有3-8个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。术语“C3-C6环烷基”具有类似含义。

在本发明中，术语“C1-C6烷氧基”是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。优选为C1-C4烷氧基。

在本发明中，术语“杂环基”为含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的4-8元杂环基，包括(但并不限于)如下基团：

在本发明中，术语“芳环”或“芳基”具有相同的含义，优选为“C6-C10芳基”。术语“C6-C10芳基”是指在环上不含杂原子的具有6-10个碳原子的芳香族环基，如苯基、萘基等。

在本发明中，术语“芳香杂环”或“杂芳基”具有相同的含义，指包含一个到多个杂原子的杂芳族基团。例如“C3-C10杂芳基”是指含有1～4个选自氧、硫和氮中的杂原子以及3-10个碳原子的芳香杂环。非限制性例子包括：呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡唑基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。杂芳基可以是任选取代的或未取代的。

在本发明中，术语“卤代”是指被卤素取代。

在本发明中，术语“氘代”是指被氘取代。

在本发明中，术语“取代”指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。所述取代基例如(但并不限于)：卤素、羟基、羧基(-COOH)、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、3-至12元杂环基、芳基、杂芳基、C1-C8醛基、C2-C10酰基、C2-C10酯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C10磺酰基等。

在本发明中，术语1-6指1、2、3、4、5或6。其他类似术语各自独立地具有类似含义。术语“多个”指2-6个，如2、3、4、5或6个。

应理解，当某一基团同时存在于化合物的多个不同位置时，其在各位置的定义是相互独立的，可以相同也可以不同。亦即，术语“选自下组：”与术语“各独立地选自下组：”具有相同含义。

化合物

本发明涉及一类具有p21活化激酶4(PAK4)抑制活性的化合物及其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物，其制备方法、包含该化合物的药物组合物，以及这些化合物在制备用于预防或治疗肿瘤、传染病和神经性疾病的药物中的用途。

本发明提供了一种化合物，所述化合物为式I所示化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药，

其中，各基团如上文所定义。

在另一优选例中，所述的化合物中，A、V、W、X、Y、Z、R¹、R²、R³中任一个分别独立地为本发明所述具体化合物中所对应的基团。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。

另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。

术语“溶剂化物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。

术语“前药”包括其本身可以是具有生物学活性的或非活性的，当用适当的方法服用后，其在人体内进行代谢或化学反应而转变成式I的一类化合物，或式I的一个化合物所组成的盐或溶液。所述的前药包括(但不局限于)所述化合物的羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、砜酯、亚砜酯、氨基化合物、氨基甲酸盐、偶氮化合物、磷酰胺、葡萄糖苷、醚、乙缩醛等形式。

制备方法

下面更具体地描述本发明式I结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。

典型地，本发明化合物的制备工艺流程如下，其中所用原料和试剂如无特殊说明，均可通过商业途径购买。

步骤一：

步骤二：

或步骤三：

药物组合物和施用方法

本发明还提供了一种药物组合物，包含药学上可接受的载体和一种或多种安全有效量的所述的化合物。

由于本发明化合物具有优异的抗肿瘤活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解与肿瘤相关的疾病。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-1000mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

所述的药物组合物为注射剂、囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的其他化合物(如抗肿瘤药物)联合给药。

本发明治疗方法可以单独施用，或者与其它治疗手段或者治疗药物联用。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选50～1000mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

与现有技术相比，本发明具有以下主要优点：

(1)所述化合物具有优异的PAK4抑制活性、优异的水溶性；

(2)所述化合物具有优异的安全性、药代动力学性能、PAK4选择抑制性；

(3)所述化合物具有优异的肿瘤细胞增殖抑制活性。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

¹H-NMR用Varian MercuryAMX300及Varian MR-400型仪测定；试剂购于J&KChemica百灵威化学试剂公司，韶远科技(上海)有限公司，上海毕得医药科技有限公司，上海皓鸿生物医药科技有限公司，其余试剂购于国药集团化学试剂有限公司。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并TLC跟踪，后处理时均经饱和氯化钠水溶液洗涤和无水硫酸钠干燥过程；产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)柱色谱法；其中硅胶(200-300目)由青岛海洋化工厂生产，GF-254薄层硅胶板由烟台江友硅胶开发有限公司生产。

制备实施例1：化合物S1的制备

化合物1-2的合成：

将化合物1-1(4.62g,19.6mmol)溶于四氢呋喃(40mL)中，冷却至0℃,小心加入1mol/L的硼氢化钠四氢呋喃络合物的四氢呋喃溶液(39.2mL,39.2mmol)，搅拌20分钟，加热至回流，搅拌3小时。TLC检测反应完毕，冷却至室温，加入适量甲醇淬灭反应，减压浓缩。加入乙酸乙酯溶解，用2M的盐酸溶液萃取三次，再加入过量氨水碱化，再用二氯甲烷萃取三次，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，得到化合物1-2(2.2g,47％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.68(d,J＝1.7Hz,1H),7.47(s,1H),7.36(dt,J＝17.6,5.2Hz,2H),3.03(t,J＝6.8Hz,2H),2.78(t,J＝6.8Hz,2H).

化合物1-3的合成：

将化合物1-2(2g,8.33mmol)溶于甲酸(20mL)中，加入多聚甲醛(750mg,8.33mmol)，加热至50℃，搅拌三小时(持续监视反应)。TLC检测反应完毕，冷却至室温，加入1mol/L氢氧化钠水溶液调节pH值至中性。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，得到粗产物1-3，直接用于下一步，不做进一步处理。

化合物1-4的合成：

将粗产物1-3溶于二氯甲烷(20mL)中，冷却至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(2.73g,12.5mmol)，N,N-二异丙基乙胺(2.15g,16.66mmol),搅拌过夜。TLC检测反应完毕。加入乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得到化合物1-4(1.46g,50％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.55(s,1H),7.36–7.27(m,2H),4.58(s,2H),3.74(s,2H),2.68(s,2H),1.50(s,9H).

化合物1-6的合成：

将化合物1-4(85mg,0.24mmol)、1-5(94mg,0.266mmol)，碳酸钾(83mg,0.6mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.5mL)的混合溶液，加入四(三苯基膦)钯(28mg，0.024mmol)，氮气保护。加热至回流，搅拌2小时。TLC检测反应完毕，冷却至室温，减压浓缩。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得到化合物1-6(105mg,88％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.82(q,J＝8.4Hz,4H),7.67(s,1H),7.61–7.47(m,2H),4.65(s,2H),3.88–3.75(m,6H),3.13–2.99(m,4H),2.79(s,2H),1.52(s,9H).

化合物1-7的合成：

将化合物1-6(105mg,0.21mmol)溶于二氯甲烷(2ml)中，加入三氟醋酸(1mL)，室温搅拌2小时。TLC检测反应完毕，减压浓缩，得到化合物粗品1-7，不做进一步处理，直接用于下一步。

化合物S1的合成：

将化合物1-7(84mg,0.215mmol)、1-8(39mg,0.237mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，122mg,0.32mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(139mg,1.08mmol)，室温搅拌过夜。TLC检测反应完毕，冷却至室温，减压浓缩。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得到化合物S1(43mg,37％)，白色固体。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.20(s,1H),8.01(d,J＝8.3Hz,2H),7.97(s,1H),7.92(d,J＝7.9Hz,1H),7.82(d,J＝8.3Hz,2H),7.70(q,J＝8.6Hz,2H),7.46(d,J＝15.2Hz,1H),7.16(d,J＝15.0Hz,1H),6.49(d,J＝8.7Hz,1H),6.44(s,2H),4.92(d,J＝96.5Hz,2H),4.00(d,J＝45.3Hz,2H),3.70–3.60(m,4H),2.98–2.75(d,J＝38.4Hz,6H).

制备实施例2：化合物S2的制备

化合物2-2的合成：

将化合物1-4(76mg,0.216mmol)、2-1(81mg,0.238mmol)，碳酸钾(75mg,0.54mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.5mL)的混合溶液，加入四(三苯基膦)钯(26mg，0.022mmol)，氮气保护。加热至回流，搅拌2小时。TLC检测反应完毕，冷却至室温，减压浓缩。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得到化合物2-2(75mg,71％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.74–7.61(m,3H),7.55–7.45(m,2H),4.64(s,2H),3.85–3.73(m,4H),2.77(s,2H),2.59–2.44(m,2H),1.53(s,9H).

化合物2-3的合成：

将化合物2-2(75mg,0.15mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟醋酸(1mL)，室温搅拌2小时。TLC检测反应完毕，减压浓缩，得到化合物粗品2-3，不做进一步处理，直接用于下一步。

化合物S2的合成：

将化合物2-3(60mg,0.15mmol)、1-8(27mg,0.165mmol)、HATU(94mg,0.25mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(97mg,0.75mmol)，室温搅拌过夜。TLC检测反应完毕，冷却至室温，减压浓缩。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得到化合物S2(28mg,35％)，白色固体。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.74(t,J＝5.6Hz,1H),8.19(s,1H),7.97–7.88(m,4H),7.83(d,J＝8.3Hz,2H),7.65(q,J＝8.6Hz,2H),7.45(d,J＝15.1Hz,1H),7.20–7.05(m,1H),6.58–6.36(m,3H),4.90(d,J＝120.1Hz,2H),3.99(d,J＝60.2Hz,2H),3.53(dd,J＝12.7,6.7Hz,2H),2.80(d,J＝42.1Hz,2H),2.66–2.52(m,2H).

制备实施例3：化合物S3的制备

化合物3-2的合成：

将化合物3-1(3g,16.1mmol)、N-溴代丁二酰亚胺(3.45g,19.4mmol)溶于乙腈(35mL)中，室温下搅拌4小时。TLC检测反应完毕，冷却至0℃，加入冰水，有固体析出，过滤，干燥得到化合物3-2(3.98g,93％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ11.28(s,1H),7.93–7.87(m,1H),7.68(d,J＝2.4Hz,1H),3.98(s,3H).

化合物3-3的合成：

将化合物3-2(1.1g,4.14mmol)、溴乙酸乙酯(830mg,4.97mmol)、碳酸钾(1.71g,12.42mmol)溶于丙酮(20mL)中，加热至回流，搅拌4小时。TLC检测反应完毕，冷却至室温，减压浓缩。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，得到化合物3-3(1.45g,99％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.83(d,J＝2.5Hz,1H),7.69(d,J＝2.5Hz,1H),4.66(s,2H),4.30(q,J＝7.1Hz,2H),3.90(s,3H),1.32(t,J＝7.1Hz,4H).

化合物3-4的合成：

将化合物3-3(1.45g,4.1mmol)溶于1M氢氧化钠水溶液(50mL)和乙醇(50mL)的混合溶液中，加热至回流，反应6小时。TLC检测反应完毕，冷却至0℃，加入盐酸溶液调节pH值至酸性，有固体析出，抽滤得化合物3-4(1.09g,86％)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ7.81(d,J＝2.3Hz,1H),7.77(d,J＝2.4Hz,1H),4.73(s,2H).

化合物3-5的合成：

将化合物3-4(1.09g,3.52mmol)，醋酸钠(958mg,7.04mmol)溶于醋酸(5mL)和醋酸酐(15mL)的混合溶液中，加热至130℃，反应过夜。TLC检测反应完毕，冷却至室温，加入适量水，用乙酸乙酯、石油醚(1：1)萃取3次，合并有机层，用碳酸氢钠水溶液洗5次，再用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，得粗产物3-5。

化合物3-6的合成：

将粗产物3-5溶于甲醇(5mL)和1M的盐酸水溶液(2mL)的混合溶液中，加热至回流，反应3小时。TLC检测反应完毕，冷却至室温，加入适量冰水，有固体析出，抽滤得化合物3-6(697mg,80％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.75(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(d,J＝1.8Hz,1H),4.76(s,2H).

化合物3-7的合成：

将化合物1-2(1.77g,10mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，冷却至0℃小心加入氢化钠(480mg,12mmol)，搅拌一小时。将溶有3-6(10mmol,2.47g)的四氢呋喃(20mL)小心加入，搅拌过夜。TLC检测反应完毕，冷却至室温，减压浓缩。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得化合物3-7(2.33g,86％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.75(s,1H),7.64(d,J＝1.7Hz,1H),7.52(d,J＝1.5Hz,1H),3.74(d,J＝1.2Hz,2H).

化合物3-8的合成：

化合物3-8的合成参考化合物1-4的合成。¹H NMR(600MHz,氘代氯仿)δ7.60(d,J＝1.6Hz,1H),7.55(s,1H),7.44(d,J＝1.6Hz,1H),3.03(t,J＝6.8Hz,2H),2.78(t,J＝6.7Hz,2H).

化合物3-10的合成：

化合物3-10的合成参考化合物1-6的合成。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.47(s,1H),7.39(s,1H),4.63(s,2H),3.75(s,2H),2.68(s,2H),1.50(s,9H).

化合物3-12的合成：

化合物3-12的合成参考化合物1-6的合成。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.64(d,J＝8.1Hz,2H),7.55–7.46(m,4H),4.66(s,2H),4.01-3.53(m,6H),2.76(s,2H),2.16–1.87(m,4H),1.50(s,9H).

化合物3-13的合成：化合物3-13的合成参考化合物1-7的合成。

化合物S3的合成：

化合物S3的合成参考化合物S1的合成。白色固体。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.18(s,1H),7.91(d,J＝8.3Hz,1H),7.88(s,1H),7.81(d,J＝8.1Hz,2H),7.72(s,1H),7.54(d,J＝8.1Hz,2H),7.44(d,J＝15.1Hz,1H),7.18–7.06(m,1H),6.48(s,3H),5.05(s,1H),4.83(s,1H),3.97(d,J＝63.0Hz,2H),3.59(d,J＝156.5Hz,4H),3.32(s,1H),2.79(d,J＝40.9Hz,2H),2.13–1.96(m,4H).

制备实施例4：化合物S4的制备

化合物S4的合成：同制备实施例3，区别在于：将3-11替换为

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ8.11(s,1H),7.90(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.76–7.70(m,4H),7.68(s,1H),7.55(d,J＝14.7Hz,2H),7.12–6.97(m,1H),6.63(d,J＝8.8Hz,1H),5.03–4.82(m,5H),4.16–4.00(m,4H),3.89(s,2H),2.85(d,J＝20.9Hz,2H),1.34(s,6H).

制备实施例5：化合物S5的制备

化合物S5的合成：同制备实施例3，区别在于：将3-11替换为

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ8.10(s,1H),7.90(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.71(t,J＝7.1Hz,2H),7.68–7.59(m,3H),7.55(dd,J＝8.3,7.0Hz,2H),7.13–6.98(m,1H),6.67–6.60(m,1H),4.99–4.86(m,2H),4.04(t,J＝5.3Hz,2H),3.94–3.58(m,5H),2.84(d,J＝19.5Hz,2H),2.34–1.98(m,3H),1.67–1.48(m,3H).

制备实施例6：化合物S6的制备：

化合物S6的合成：同制备实施例3，区别在于：将3-11替换为

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ8.10(d,J＝1.7Hz,1H),7.90(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.64–7.59(m,2H),7.58–7.53(m,1H),7.49(s,1H),7.38–7.34(m,2H),7.11–6.99(m,1H),6.63(d,J＝8.8Hz,1H),5.05–4.87(m,2H),4.06(s,2H),3.95–3.53(m,4H),2.92–2.77(m,2H),2.19–1.96(m,4H).

制备实施例7：化合物S7的制备

化合物7-3的合成

将化合物7-1(9.28g,40mmol)以及7-2(6.16g,44mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)和水(20mL)的混合溶液中，加入磷酸钾(25.44g,120mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(1.46g,2mmol)，氮气保护，加热至45℃，搅拌5小时。TLC检测反应完毕，冷却至室温，减压浓缩。加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得到化合物7-3(5.3g,54％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ11.30(s,1H),7.85(d,J＝7.9Hz,1H),7.54(dd,J＝8.3,5.7Hz,2H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),7.11(t,J＝8.6Hz,2H),6.94(t,J＝7.8Hz,1H),3.96(s,3H).

化合物7-4的合成

将化合物7-3(3.1g,12.6mmol)、N-溴代丁二酰亚胺(2.7g,15.1mmol)溶于乙腈(30mL)中，加热至60℃室温下搅拌4小时。TLC检测反应完毕，冷却，加入冰水，有固体析出，过滤，干燥得到化合物7-4(3.8g,93％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ11.24(s,1H),7.96(d,J＝2.5Hz,1H),7.58(d,J＝2.1Hz,1H),7.51(dd,J＝8.9,5.4Hz,2H),7.11(t,J＝8.8Hz,2H),3.97(s,3H).

化合物S7的合成

后续步骤参照制备实施例3。

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ8.10(s,1H),7.90(s,3H),7.79(d,J＝8.2Hz,2H),7.71(s,1H),7.65(s,1H),7.60–7.50(m,3H),7.24(t,J＝8.7Hz,2H),7.05(dd,J＝37.5,15.3Hz,1H),6.65(d,J＝8.0Hz,1H),5.00–4.86(m,2H),4.14–4.02(m,2H),3.76(d,J＝112.2Hz,4H),2.87(d,J＝21.4Hz,2H),2.08(s,4H).

制备实施例8：化合物S8的制备

化合物S8的合成：同制备实施例7，区别在于：将3-11替换为

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ8.02(d,J＝28.0Hz,1H),7.89–7.74(m,3H),7.68(d,J＝8.0Hz,2H),7.63–7.43(m,5H),7.17(q,J＝8.6Hz,2H),6.96(dd,J＝40.8,15.2Hz,1H),6.65–6.52(m,1H),4.84–4.71(m,2H),3.96(s,2H),3.90–3.53(m,4H),2.77(s,2H),2.29–1.95(m,2H),1.53(dd,J＝46.5,20.6Hz,3H).

制备实施例9：化合物S9的制备

化合物S9的合成：同制备实施例7，区别在于：将3-11替换为1-5。

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代氯仿)δ8.23(s,1H),7.89–7.79(m,6H),7.72–7.55(m,4H),7.22(t,J＝8.7Hz,2H),6.81(s,1H),6.53(d,J＝8.6Hz,1H),4.93(s,2H),4.04(d,J＝44.4Hz,2H),3.78–3.74(m,4H),3.10–3.02(m,4H),2.91(s,2H).

制备实施例10：化合物S10的制备

化合物S10的合成：同制备实施例7，区别在于：将3-11替换为

得到白色固体。¹H NMR(600MHz,氘代氯仿)δ8.23(s,1H),7.83(s,2H),7.73–7.62(m,2H),7.58(t,J＝7.7Hz,2H),7.53(s,1H),7.31–7.27(m,2H),7.21(t,J＝8.6Hz,2H),4.90(d,J＝38.0Hz,4H),4.19–3.53(m,5H),2.93(d,J＝33.0Hz,2H),2.08–1.83(m,3H).

制备实施例11：化合物S11的制备

化合物S11的合成

将化合物11-1(223mg,1mmol)、11-2(221mg,1.1mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入吡啶(158mg,2mmol)，室温下搅拌5小时。TLC检测反应完毕，加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化，得化合物11-3(330mg,85％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.28–8.21(m,3H),7.96(d,J＝8.9Hz,1H),7.67(d,J＝6.6Hz,1H),7.33(d,J＝9.0Hz,2H),5.44(s,1H),4.41(d,J＝6.0Hz,2H),1.53(s,9H).

将化合物11-3(52mg,0.133mmol)、3-13a(52mg,0.12mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)，室温下搅拌过夜。TLC检测反应完毕，加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化(甲醇：二氯甲烷＝2.5％)，得化合物11-4(50mg,61％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.23(s,1H),8.18(s,1H),7.90(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.1Hz,2H),7.49–7.42(m,4H),4.59(s,2H),4.40(d,J＝5.4Hz,2H),4–3.51(m,6H),2.73(s,2H),2.14–1.90(m,4H),1.52(s,9H).

将化合物11-4(50mg,0.073mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，三氟醋酸(1mL)，室温下搅拌过夜。TLC检测反应完毕，加乙酸乙酯萃取，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化(甲醇：二氯甲烷＝5％)，得化合物S11(38mg,90％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.88(d,J＝1.4Hz,1H),7.85–7.81(m,3H),7.73(d,J＝1.5Hz,1H),7.59–7.54(m,2H),7.31(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.20(t,J＝5.6Hz,1H),6.39(d,J＝8.4Hz,1H),5.74(s,2H),4.64(s,2H),4.09(d,J＝5.4Hz,2H),3.84–3.38(m,6H),2.74(s,2H),2.07(s,4H).

制备实施例12：化合物S12的制备

化合物S12的合成：同制备实施例11，区别在于：将3-13a替换为7-14。

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ7.87–7.81(m,3H),7.74(d,J＝8.3Hz,2H),7.64(d,J＝1.7Hz,1H),7.60–7.57(m,2H),7.53(d,J＝8.3Hz,2H),7.23–7.17(m,2H),6.65(d,J＝8.7Hz,1H),4.59(s,2H),4.28(d,J＝23.6Hz,2H),3.98–3.50(m,6H),2.76(s,2H),2.07(bs,4H).

制备实施例13：化合物S13的制备

化合物S13的合成：同制备实施例11，区别在于：将11-3替换为13-2。

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ8.51(d,J＝19.3Hz,1H),8.41(s,1H),7.89–7.80(m,3H),7.77–7.71(m,2H),7.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.57(d,J＝1.8Hz,1H),7.54–7.50(m,2H),4.61(s,2H),4.44(s,2H),4.00–3.51(m,7H),2.76(t,J＝5.3Hz,2H),2.07(s,4H).

制备实施例14：化合物S14的制备

将化合物7-12(5.9g,13.3mmol)溶于100mL 1,4-二氧六环中，加入乙酸钾(3.9g,39.8mmol)，Pd(dppf)Cl₂(485mg,0.66mmol)，联硼酸频那醇酯(4g,15.9mmol)，加热至回流，搅拌3小时，TLC检测反应完毕，冷却至室温，反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，得到化合物14-1(3.5g,47％)。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.90(s,1H),7.86–7.78(m,3H),7.21–7.13(m,2H),4.61(s,2H),3.77(s,2H),2.76(s,2H),1.50(s,9H),1.38(s,12H).

将化合物14-1(50mg,0.1mmol)溶于1,4-二氧六环(0.9mL)和水(0.3mL)的混合溶液，加入Pd(PPh₃)₄(12mg,0.01mmol)，K₂CO₃(35mg,0.25mmol)，100℃回流1小时。TLC检测反应完毕，反应液冷至室温，加水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，得到化合物14-3(50mg,83％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.88(s,1H),8.07(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),7.88–7.77(m,3H),7.61(s,1H),7.55(s,1H),7.22(t,J＝8.6Hz,2H),4.65(s,2H),3.94(t,J＝5.8Hz,2H),3.81(s,2H),2.81(s,2H),2.22–2.08(m,4H),1.51(s,9H).

将化合物14-3(50mg,0.08mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌30分钟，旋掉溶剂得化合物14-4。将14-4溶于DMF(1mL)，加入化合物1-8(16mg,0.1mmol)，HATU(47mg,0.12mmol)，DIPEA(112μL,0.64mmol)。室温反应过夜，反应液加水稀释，乙酸乙酯萃取三次，有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩，得到化合物S14(20mg,37％)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.88(d,J＝1.8Hz,1H),8.24(s,1H),8.08(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),7.88–7.78(m,3H),7.71–7.60(m,3H),7.57(d,J＝1.8Hz,1H),7.22(t,J＝8.6Hz,2H),6.88–6.70(m,1H),6.53(d,J＝8.6Hz,1H),4.99–4.73(m,4H),4.15–3.97(m,2H),3.94(t,J＝5.9Hz,2H),3.81(t,J＝5.9Hz,2H),2.91(s,2H),2.22–2.03(m,4H).

制备实施例15：化合物S15的制备

化合物S15的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(500MHz,氘代甲醇)δ8.74(d,J＝2.0Hz,1H),8.09(s,3H),8.03(d,J＝8.2Hz,1H),7.98–7.83(m,4H),7.55(d,J＝15.3Hz,1H),7.24(t,J＝8.4Hz,2H),7.04(dd,J＝33.8,14.7Hz,1H),6.63(d,J＝7.9Hz,1H),5.00–4.85(m,2H),4.09–4.00(m,2H),3.79(d,J＝115.9Hz,4H),2.92–2.78(m,2H),2.23–1.96(m,4H).

制备实施例S16：化合物S16的制备

化合物S16的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ9.07–9.01(m,2H),8.22(s,1H),8.15–8.03(m,2H),7.85(t,J＝6.5Hz,2H),7.72–7.55(m,2H),7.21(t,J＝8.6Hz,2H),6.87–6.68(m,1H),6.51(d,J＝8.7Hz,1H),5.02–4.62(m,4H),4.15–3.91(m,4H),3.82(s,2H),2.91(s,2H),2.21–2.04(m,4H).

制备实施例S17：化合物S17的制备

化合物S17的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ9.08(s,2H),8.23(s,1H),7.83(dd,J＝8.5,5.3Hz,2H),7.71–7.59(m,3H),7.54(d,J＝1.8Hz,1H),7.23(t,J＝9.1Hz,2H),6.89–6.69(m,1H),6.52(d,J＝8.6Hz,1H),5.00–4.86(m,2H),4.82(s,2H),4.15–3.93(m,4H),3.56(t,J＝5.9Hz,2H),2.92(s,2H),2.22–2.02(m,4H).

制备实施例S18：化合物S18的制备

化合物S18的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.89(s,2H),8.62–8.54(m,2H),8.24(s,1H),7.94–7.86(m,2H),7.74–7.58(m,2H),7.22(t,J＝8.5Hz,2H),6.88–6.69(m,1H),6.52(d,J＝8.6Hz,1H),5.06–4.53(m,4H),4.22–3.58(m,6H),2.93(s,2H),2.09(s,4H).

制备实施例S19：化合物S19的制备

化合物S19的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(700MHz,氘代氯仿)δ8.25(d,J＝19.7Hz,2H),8.18–8.06(m,2H),8.01(d,J＝9.0Hz,1H),7.92–7.83(m,2H),7.74–7.59(m,2H),7.22(t,J＝8.3Hz,2H),6.87–6.69(m,1H),6.52(d,J＝8.5Hz,1H),5.00–4.86(m,2H),4.81(s,2H),4.16–3.94(m,6H),2.92(s,2H),2.31–2.10(m,4H).

制备实施例S20：化合物S20的制备

化合物S20的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.25(s,2H),8.17–8.05(m,3H),7.92–7.84(m,2H),7.66(d,J＝14.8Hz,2H),7.23(t,J＝9.6Hz,2H),6.88–6.70(m,1H),6.52(d,J＝8.6Hz,1H),4.93(d,J＝11.3Hz,2H),4.70(s,2H),4.17(dt,J＝12.4,6.3Hz,4H),4.12–3.93(m,2H),2.93(s,2H),2.74(t,J＝6.2Hz,2H),2.69(t,J＝6.4Hz,2H).

制备实施例S21：化合物S21的制备

化合物S21的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.22(d,J＝6.7Hz,2H),8.10(d,J＝8.8Hz,2H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.90–7.83(m,2H),7.71–7.60(m,2H),7.21(t,J＝8.6Hz,2H),6.87–6.67(m,1H),6.51(d,J＝8.6Hz,1H),5.01–4.75(m,5H),4.45(d,J＝14.0Hz,1H),4.03(d,J＝33.8Hz,2H),3.52–3.43(m,1H),3.20(td,J＝13.2,2.7Hz,1H),2.91(s,2H),2.26–1.96(m,5H),1.90(td,J＝12.9,4.0Hz,1H),1.69(td,J＝13.3,4.3Hz,1H),1.48(s,3H).

制备实施例S22：化合物S22的制备：

化合物S22的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.31–8.03(m,5H),7.91–7.83(m,2H),7.73–7.60(m,2H),7.21(t,J＝8.5Hz,2H),6.90–6.66(m,1H),6.52(d,J＝8.7Hz,1H),5.04–4.62(m,4H),4.56(d,J＝12.3Hz,1H),4.40(dd,J＝33.7,12.8Hz,2H),4.19–3.95(m,3H),2.92(s,2H),2.53–2.29(m,2H).

制备实施例S23：化合物S23的制备

化合物S23的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(700MHz,氘代二甲基亚砜)δ8.98(d,J＝9.3Hz,1H),8.63(d,J＝8.8Hz,1H),8.43(s,1H),8.33(d,J＝1.8Hz,1H),8.28(d,J＝8.8Hz,1H),8.19(d,J＝7.3Hz,1H),8.04–7.99(m,2H),7.92(d,J＝8.6Hz,1H),7.49–7.44(m,1H),7.42(t,J＝8.7Hz,2H),7.14(dd,J＝41.1,15.3Hz,1H),6.52–6.41(m,3H),5.05(s,1H),4.85(s,1H),4.50–4.37(m,1H),4.02(d,J＝71.2Hz,2H),3.11(td,J＝10.9,5.0Hz,1H),2.89(s,1H),2.82(d,J＝10.9Hz,2H),2.43(dd,J＝28.8,12.0Hz,1H),2.27(s,3H),2.24–2.19(m,1H),2.07–1.98(m,1H),1.89–1.81(m,1H).

制备实施例S24：化合物S24的制备

化合物S24的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ8.31(d,J＝8.9Hz,1H),8.24(d,J＝14.8Hz,2H),8.11(d,J＝8.8Hz,2H),7.86(dd,J＝8.4,5.4Hz,2H),7.72–7.58(m,2H),7.22(t,J＝8.5Hz,2H),6.88–6.67(m,1H),6.52(d,J＝8.6Hz,1H),6.06(d,J＝4.2Hz,1H),5.03(t,J＝9.9Hz,1H),4.97–4.82(m,5H),4.44–4.36(m,1H),4.30(dd,J＝11.0,5.4Hz,1H),4.04(d,J＝34.8Hz,2H),3.28–3.11(m,1H),2.91(s,2H).

制备实施例S25：化合物S25的制备

化合物S25的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(700MHz,氘代二甲基亚砜)δ8.60(d,J＝8.9Hz,1H),8.46(s,1H),8.31(s,1H),8.22–8.15(m,2H),8.03(dd,J＝8.4,5.4Hz,2H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.49–7.39(m,3H),7.14(dd,J＝44.7,15.3Hz,1H),6.53–6.42(m,3H),5.18(t,J＝5.4Hz,1H),4.94(d,J＝139.8Hz,2H),4.52–4.43(m,2H),4.07(s,1H),3.97(s,2H),3.96(s,1H),3.90(d,J＝10.1Hz,1H),3.66(d,J＝5.4Hz,2H),2.86(d,J＝51.6Hz,2H).

制备实施例S26：化合物S26的制备

化合物S26的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代二甲基亚砜)δ8.60(d,J＝8.9Hz,1H),8.46(s,1H),8.30(s,1H),8.19(s,1H),8.07–7.99(m,3H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.50–7.37(m,3H),7.14(dd,J＝24.5,14.9Hz,1H),6.51–6.41(m,3H),4.96(d,J＝79.5Hz,2H),4.03(d,J＝41.3Hz,2H),3.66–3.60(m,2H),3.59–3.53(m,2H),2.87(d,J＝27.0Hz,2H).

制备实施例S27：化合物S27的制备

化合物S27的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(700MHz,氘代二甲基亚砜)δ8.86(d,J＝8.8Hz,1H),8.70(s,1H),8.55(s,1H),8.44(s,1H),8.27(dt,J＝11.4,7.1Hz,3H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H),7.75–7.63(m,3H),7.40(dd,J＝43.8,14.9Hz,1H),6.74(s,3H),5.20(d,J＝138.4Hz,2H),4.38–3.87(m,6H),3.31–3.01(m,6H),2.84(s,3H).

制备实施例S28：化合物S28的制备

化合物S28的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代二甲基亚砜)δ9.22–9.09(m,1H),8.63(d,J＝8.9Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(d,J＝1.8Hz,1H),8.26(d,J＝8.8Hz,1H),8.19(s,1H),8.02(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.50–7.36(m,3H),7.23–7.06(m,1H),6.48(s,3H),4.96(d,J＝80.7Hz,2H),4.02(d,J＝41.3Hz,2H),3.63–3.50(m,5H),3.34(s,2H),2.86(d,J＝27.7Hz,2H).

制备实施例S29：化合物S29的制备

化合物S29的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代二甲基亚砜)δ9.12(s,1H),8.60(d,J＝8.9Hz,1H),8.42(d,J＝1.8Hz,1H),8.29(d,J＝1.8Hz,1H),8.24(d,J＝8.9Hz,1H),8.15(s,1H),8.03–7.96(m,2H),7.89(d,J＝8.8Hz,1H),7.49–7.31(m,3H),7.20–7.01(m,1H),6.49–6.34(m,3H),5.02(s,1H),4.82(s,1H),3.99(d,J＝39.9Hz,2H),3.63–3.48(m,6H),3.45–3.39(m,2H),3.21(s,3H),2.84(d,J＝26.9Hz,2H).

制备实施例S30：化合物S30的制备

化合物S30的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代二甲基亚砜)δ11.41(s,1H),8.44(s,2H),8.32(d,J＝1.8Hz,1H),8.18(d,J＝2.1Hz,2H),8.01(td,J＝5.7,2.0Hz,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.50–7.32(m,3H),7.22–7.05(m,1H),6.54–6.38(m,3H),4.94(d,J＝80.4Hz,2H),4.02(d,J＝41.3Hz,2H),2.97–2.74(m,6H).

制备实施例S31：化合物S31的制备

化合物S31的合成：同制备实施例14，区别在于：将14-2替换为

得到白色固体。¹H NMR(400MHz,氘代二甲基亚砜)δ10.63(s,1H),8.42–8.31(m,2H),8.25(s,1H),8.18–8.09(m,2H),8.00–7.86(m,3H),7.47–7.32(m,3H),7.17–7.03(m,1H),6.49–6.38(m,3H),4.90(d,J＝79.9Hz,2H),4.55(dd,J＝8.2,5.5Hz,1H),3.97(td,J＝15.7,14.9,8.6Hz,3H),3.82(q,J＝7.1Hz,1H),2.81(d,J＝28.0Hz,2H),2.28–2.14(m,1H),2.06–1.77(m,3H).

实验实施例1：化合物对胰腺癌细胞增殖抑制活性评价

采用磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法用于评价化合物的细胞增殖抑制活性。

1.将处于对数生长期的胰腺癌细胞MIAPaCa-2以适当密度接种在96孔板中。

2.37℃培养过夜，待细胞贴壁，加入不同浓度的化合物10μL/孔，每浓度设置3个副孔，设置溶剂对照组和无细胞空白对照组。

3.细胞培养72h，弃去细胞培养液，每孔加入预冷的10％三氯乙酸(TCA)溶液100μL，4℃固定1h。弃去固定液，用蒸馏水洗涤，置于烘箱烘干。

4.每孔加入100μL SRB染料，室温染色20min后弃去染料。用1％冰醋酸溶液洗涤，置于烘箱烘干。

5.每孔加入150μL10 mM Tris溶液溶解SRB染料。

6.用酶标仪在560nm波长下测定每孔OD值，并根据以下公式计算化合物抑制率：

抑制率％＝(对照组OD值-给药组OD值)/对照组OD值×100％。

表1.化合物S19-S23，S25，S26对MIAPaCa-2细胞增殖抑制活性

细胞增殖抑制活性测试显示，化合物S19-S23、S25和S26对MIAPaCa-2细胞的体外增殖抑制活性均优于KPT-9274，其中，化合物S21和S23的IC₅₀值较KPT-9274分别提升了约4倍和3倍。这些结果表明，该类化合物具有良好的肿瘤细胞增殖抑制活性，并且，体外肿瘤细胞增殖抑制活性优于KPT-9274。

实验实施例2：通过免疫印迹实验测定化合物对PAK4及下游信号活性影响

1.将处于对数生长期的U2-OS细胞以适当密度接种于6孔板中，待细胞贴壁后，弃去原培养液，添加2mL新鲜培养液，并加入DMSO或各浓度化合物，细胞置于37℃培养72h。弃去细胞培养液，用PBS溶液洗涤3次，加入适量1×SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)细胞裂解液，细胞裂解完全后收集样品至600μL EP管，100℃加热20min。

2.配制10％SDS-PAGE胶(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶，Sodium DodecylSulfate Polyacrylamide Gel)，加入1×TGS(25mM Tris，250mM Glycine，0.1％SDS)电泳缓冲液，取适量样品用于凝胶电泳。初始电压为90V，样品进入下层分离胶时，调整电压为120V直至电泳结束。

3.使用转膜仪将凝胶上的蛋白转移至硝酸纤维素膜上，用TBST溶液(含1％吐温20的10mM Tris-HCl，150mM NaCl溶液)配制的5％脱脂奶粉溶液(w/v)在室温下封闭条带1h。用蒸馏水洗涤条带，裁取各目的蛋白处条带，分别置于p-PAK4(S474)、p-β-Catenin(S675)及β-Actin的一抗溶液中，4℃孵育过夜。

4.回收一抗，用TBST溶液在摇床上清洗条带3次，每次10min。同TBST溶液配制的鼠和兔二抗溶液孵育条带1h，TBST溶液清洗3次。使用发色仪发色、显影。化合物用96孔板体系初筛，化合物初筛浓度为1μmol/L，3倍梯度稀释，每个浓度双复孔。

5.通过Image J软件对下游磷酸化水平进行半定量分析。

表2.化合物S19-S21、S23及S25对p-PAK4和p-β-Catenin的抑制率

免疫印迹实验显示，化合物S19-S21、S23和S25可明显抑制PAK4下游p-PAK4和p-β-Catenin的水平，这些结果说明，本发明中的化合物是一种新型的PAK4抑制剂，能有效抑制PAK4下游信号磷酸化。并且，这类化合物对PAK4下游信号的抑制活性明显优于KPT-9274。

实验实施例3：通过高效液相色谱测试化合物S21和S23的盐酸盐在水中的溶解度

将化合物S21,S23及KPT-9274溶于少量甲醇，加入适量4mol/L的盐酸甲醇溶液，搅拌一小时，旋去甲醇，反复三次，制备得S21,S23及KPT-9274的盐酸盐。

称取适量化合物溶于1mL甲醇或水中，依次稀释5，10，50，100倍，五个浓度的溶液在进样量相同的条件下依次用高效液相色谱检测，建立浓度与峰面积的线性关系。

称取适量化合物配制成1mL的饱和水溶液，溶液经滤膜过滤，高效液相色谱检测滤液的峰面积，将峰面积代入线性方程，计算化合物在水中的溶解度。

图1是KPT-9274(盐酸盐)溶液浓度-峰面积线性关系图。

经计算，KPT-9274(盐酸盐)在水中的溶解度<0.002mg/mL。

图2是化合物S21(盐酸盐)溶液浓度-峰面积线性关系图。

经计算，化合物S21(盐酸盐)在水中的溶解度为0.252±0.014mg/mL。

图3是化合物S23(盐酸盐)溶液浓度-峰面积线性关系图。

经计算，化合物S23(盐酸盐)在水中的溶解度为33.98±1.36mg/mL。

化合物S21和S23均表现优良的水溶性，与KPT-9274相比，两个化合物在水中的溶解度分别提升了126倍和16990倍，这些数据说明，化合物S21和S23具有优良的理化性质，有望用于PAK4相关疾病研究及治疗。

总结：以PAK4为靶点的药物具有良好的市场前景，但目前还未有一款药物上市，亟需开发更多新颖结构的PAK4抑制剂以满足临床需求。本发明基于Karyopharm公司I期临床在研化合物ATG-019(KPT-9274)的结构，设计合成了一类结构新颖的三环类PAK4抑制剂。这类PAK4抑制剂对MIAPaCa-2细胞显示出良好的细胞增殖抑制活性，并且对PAK4磷酸化以及下游β-catenin的磷酸化有良好的抑制效果，是一类全新结构的PAK4抑制剂。其中，部分化合物的细胞增殖抑制活性、PAK4下游信号抑制活性以及水溶性明显优于I期临床化合物KPT-9274。因此，本专利所述的化合物有望成为体内有效的PAK4抑制剂，为肿瘤患者的治疗提供新的选择。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种化合物，其特征在于，所述化合物为式I所示化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药，

其中，

A选自下组：其中，R⁰选自下组：氢、C1-C6烷基；

Z选自下组：

R³选自下组：氢、氨基。

2.如权利要求1所述化合物，其特征在于，A选自下组：其中，R⁰为H。

3.如权利要求1所述化合物，其特征在于，选自下组：

R⁴选自下组：氢、卤素。

4.如权利要求1所述化合物，其特征在于，R²选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的4-8元杂环烷基、取代或未取代C3-C8环烷基、其中，n选自下组：0、1、2、3，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、氰基、巯基、二氟甲基、氧代(＝O)、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基，所述杂环烷基选自下组：单环、并环、螺环、桥环。

5.如权利要求1所述化合物，其特征在于，R¹选自下组：氢、卤素、取代或未取代的C6-C10芳基；其中，所述取代独立地指被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基。

6.如权利要求1所述化合物，其特征在于，所述化合物选自下组：

7.一种药物组合物，其特征在于，包含药学上可接受的载体和一种或多种安全有效量的权利要求1所述的化合物。

8.一种权利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于制备药物，所述药物用于预防和/或治疗选自下组的疾病：癌症、传染病、神经疾病。

9.一种权利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于制备药物，所述药物用于抑制PAK4激酶活性。

10.一种权利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于制备药物，所述药物用于预防和/或治疗PAK4激酶活性相关疾病。