CN117467007A - 结合tslp的抗体及其用途 - Google Patents
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Abstract
本公开属于抗体领域，涉及结合TSLP的抗体及其用途。本公开还提供了编码该抗体的核酸分子、表达载体、宿主细胞和表达该抗体的方法。本公开进一步提供了包含该抗体的双特异性分子、免疫缀合物、CAR‑免疫细胞、溶瘤病毒和药物组合物，以及使用本公开的抗TSLP抗体的治疗方法。
Description
相关申请及以引用方式并入
本申请要求2019年9月4日提交的美国临时申请No.62/895,984的优先权。本申请为分案申请，原申请的申请日为2020年9月3日，申请号为202080014547.0，发明名称为“结合TSLP的抗体及其用途”。
上述申请以及其引用或其审查程序中的所有文献(“申请引用的文献”)、本申请引用或参考的所有文献(包括但不限于本申请引用的所有文献、专利、已公开的专利申请)(“本申请引用的文献”)以及本申请引用的文献中引用或参考的所有文献，连同本申请或通过引用并入本申请的任何文献提及的任何产品的任何制造商的说明、描述、产品规格和产品页，均通过引用的方式并入，并可以用于本发明的实践。更具体地，本申请引用的所有参考文献都以相同程度通过引用的方式并入，就如同各文献被具体地和单独地指出通过引用的方式并入本申请一样。本公开提及的任何Genbank序列均通过引用Genbank序列的方式并入，以此引用日期作为本公开最早生效的申请日。
技术领域
本公开涉及一种分离的单克隆抗体，特别涉及一种小鼠、嵌合或人源化单克隆抗体或其抗原结合部分，其以高亲和力和功能性特异性结合人TSLP。本公开还提供了编码本公开的抗体或其抗原结合部分的核酸分子，用于表达本公开的抗体或其抗原结合部分的表达载体、宿主细胞和方法。本公开进一步提供了包含本公开的抗体或抗原结合部分的免疫缀合物、双特异性分子、嵌合抗原受体、溶瘤病毒和药物组合物，以及使用本公开的抗TSLP抗体或其抗原结合部分进行诊断和治疗的方法。
背景技术
胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种由上皮细胞产生的细胞因子。它与IL-7密切相关，并与TSLPR(IL-7受体α链和TSLP受体链的异二聚体)结合。TSLP mRNA主要由胸腺、肺、皮肤、肠道和扁桃体中的上皮细胞，以及基质细胞和肥大细胞表达，同时TSLPR mRNA还在多种免疫细胞(包括树突状细胞(DC)、T细胞、B细胞、肥大细胞、NK细胞和单核细胞)，以及心脏、骨骼肌、肾脏和肝脏等组织中被发现(Rui He et al.,(2010)Annals of the NewYouk Academy of Sciences 1183:13-24；Quentmeier H et al.,(2001)Leukemia 15(8):1286-1292；Rimoldi M et al.,(2005)Nature immunology 6(5):507-514)。
由TSLP触发的信号通路已被广泛研究。TSLP在免疫反应的诱导阶段诱导DC细胞极化，促使辅助性T细胞(Th)2的分化和Th2细胞因子的产生，此外TSLP还能直接促进T细胞扩增并提高Th2细胞因子的分泌。因此，TSLP被认为是Th2驱动的炎症的主要调节剂，且TSLP的上调与Th2型细胞相关疾病如特应性皮炎和哮喘的发病机理有关(Rui He et al.,(2010)同上；Ito T et al.,(2005)The Journal of Experimental Medicine 202(9):1213-1223；He R et al.,(2008)Proc Natl Acad Sci USA 105(33):11875-11880)。另一方面，TSLP介导肠道和胸腺中的几种免疫稳态。例如，在细菌的刺激下，TSLP在肠道上皮细胞系中以应变依赖性方式上调，与转化生长因子β协同作用以促进Treg细胞分化。TSLP还可由人类原代肠上皮细胞产生，用于调节CD103+DC细胞成为致耐受性表型(Katerina Tsilingiriet al.,(2017)Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology 3(2):174-182；Zeuthen LH et al.,(2008)Immunology 123:197–208；Iliev ID et al.,(2009)Gut58:1481–1489)。
TSLP对免疫系统的双重作用导致其两个亚型的发现，即长型和短型，其中短型由长型TSLP末端63个氨基酸残基组成。这两种亚型由不同的启动子控制，并依赖于环境、组织和刺激而表达(Harada M et al.,(2011)Amrican Journal of Respiratory Cell andMolecular Biology 44:787–793)。高免疫原性微生物菌株感染后，人肠上皮细胞中长型TSLP的表达上调，短型TSLP的表达下调；而共生性大肠杆菌感染后，则观察到相反的表达模式。此外，健康的屏障表面上仅表达短型TSLP，而长型TSLP的表达仅在烟草暴露后的口腔粘膜病变中上调(Katerina Tsilingiri et al.,(2017)同上)。在一些与TSLP相关的疾病中对TSLP亚型的表达模式也进行了研究。例如，在哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和牛皮癣中观察到长型TSLP的过表达，而在麦胶性肠病中发现长型TSLP的表达降低。在克罗恩病、麦胶性肠病和特应性皮炎中短型TSLP的表达下调(Katerina Tsilingiri et al.,(2017)同上；Fornasa G et al.,(2015)J Allergy Clin Immunol 136:413–422)。
TSLP由于其与上述疾病具有相关性而成为临床靶标。有人建议恢复短型TSLP的表达以治疗难治性麦胶性肠病(Biancheri P et al.,(2015)Gut 65:1670–1680)。人单克隆抗体Tezepelumab被设计用于治疗哮喘和特应性皮炎，并已在II期临床试验中证明，其与安慰剂相比，可降低年哮喘急性发作率(Jonathan Corren et al.,(2017)The New EnglandJournal of Medicine 377(10):936-946)。
人们越来越期望并追求更多具有更好药物特性的抗体，包括对长型TSLP具有特异性并与短型TSLP相互作用最小化的抗体，从而可能使临床结果得到改善。
在本申请中对任何文献的引用或标识，并非承认这样的文献可用作本公开的现有技术。
发明概述
本公开提供了一种分离的单克隆抗体，例如小鼠、人、嵌合或人源化单克隆抗体或其抗原结合部分，其与TSLP(例如，人TSLP和猴TSLP)结合，并且与现有技术中的抗TSLP抗体例如Tezepelumab相比，具有相当的(如果不是更高的话)TSLP结合亲和力和对TSLP-TSLPR/IL7R相互作用的阻断活性。
本公开的抗体或其抗原结合部分具有多种用途，包括检测TSLP蛋白，以及治疗和预防TSLP相关疾病，例如哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和牛皮癣。
因此，一方面，本公开提供了一种分离的单克隆抗体(例如，小鼠、嵌合或人源化抗体)或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分与TSLP结合，其包含重链可变区，所述重链可变区可包含VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区，其中VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ ID NOs：1、2和3所示的氨基酸序列；(2)分别如SEQ ID Nos：37、38和39所示的氨基酸序列；或(3)分别如SEQ ID Nos：47、48和49所示的氨基酸序列。
本公开的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NOs：7、8、9(X1＝R，X2＝V，X3＝R；X1＝R，X2＝V，X3＝V；X1＝R，X2＝A，X3＝R；X1＝K，X2＝A，X3＝R；或X1＝K，X2＝A，X3＝V)、43或53所示的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合部分与TSLP结合。SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列可以由SEQ ID NOs：17或18所示的核苷酸序列编码，SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)、43和53所示的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NOs：19、45和55所示的核苷酸序列编码。
本公开的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分与TSLP结合，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区，其中VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ IDNOs：4、5和6所示的氨基酸序列；(2)分别如SEQ ID NOs：40、41和42所示的氨基酸序列；或(3)分别如SEQ ID NOs：50、51和52所示的氨基酸序列。
本公开的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs：10、11(X1＝S，X2＝V；X1＝A，X2＝I；或X1＝S，X2＝I)、44或54所示的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合部分与TSLP结合。SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列可以由SEQ ID NOs：20或21所示的核苷酸序列编码，SEQ ID NOs：11(X1＝A，X2＝I)、44和54所示的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NOs：22、46和56所示的核苷酸序列编码。
本公开的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中，VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ ID NOs：1、2、3、4、5和6所示的氨基酸序列；(2)分别如SEQ ID NOs：37、38、39、40、41和42所示的氨基酸序列；或(3)分别如SEQ ID NOs：47、48、49、50、51和52所示的氨基酸序列；其中所述抗体或其抗原结合部分与TSLP结合。
本公开的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ ID NOs：7和10所示的氨基酸序列；(2)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝V)所示的氨基酸序列；(3)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示的氨基酸序列；(4)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示的氨基酸序列；(5)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示的氨基酸序列；(6)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示的氨基酸序列；(7)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示的氨基酸序列；(8)分别如SEQID NOs：8和11(X1＝A，X2＝I)所示的氨基酸序列；(9)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示的氨基酸序列；(10)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示的氨基酸序列；(11)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示的氨基酸序列；(12)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示的氨基酸序列；(13)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示的氨基酸序列；(14)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝I)所示的氨基酸序列；(15)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示的氨基酸序列；(16)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示的氨基酸序列；(17)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示的氨基酸序列；(18)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示的氨基酸序列；(19)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示的氨基酸序列；(20)分别如SEQ ID NOs：43和44所示的氨基酸序列；或(21)分别如SEQ ID NOs：53和54所示的氨基酸序列；其中所述抗体或其抗原结合部分与TSLP结合。
本公开的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分可包含重链和轻链，所述重链包含重链可变区和重链恒定区，所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区。所述重链恒定区包含具有SEQ ID NOs：12或57所示氨基酸序列的人IgG1重链恒定区，或具有SEQ ID NO：13所示氨基酸序列的人IgG4重链恒定区，或这些重链恒定区的片段。所述轻链恒定区包含具有SEQID NO：14所示氨基酸序列的人κ轻链恒定区或其片段。所述重链恒定区也可以是具有SEQID NO：15所示氨基酸序列的小鼠IgG1重链恒定区，且所述轻链恒定区可以是具有SEQ IDNO：16所示氨基酸序列的小鼠κ轻链恒定区。SEQ ID NOs：12-16和57所示的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NOs：23-27和58所示的核苷酸序列编码。
本公开的抗体可包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条轻链组成，重链和轻链通过二硫键相互连接，其中每条重链包含上述的重链恒定区、重链可变区或CDR序列，并且每条轻链包含上述的轻链恒定区、轻链可变区或CDR序列，其中重链可变区的C-末端连接至重链恒定区的N-末端，且轻链可变区的C-末端连接至轻链恒定区的N-末端。本公开的抗体可以是全长抗体，例如IgG1、IgG2或IgG4同种型的全长抗体。在其他实施方案中，本公开的抗体可以是单链可变区(scFv)抗体，或抗体片段，例如Fab或F(ab′)2片段。
与现有技术中的抗TSLP抗体例如Tezepelumab相比，本公开的抗体或其抗原结合部分具有相当的或更高的TSLP结合亲和力以及对TSLP-TSLPR/IL7R相互作用的阻断活性。
本公开还提供了包含本公开的抗体或抗原结合部分的双特异性分子，其中所述抗体或其抗原结合部分和与其具有不同结合特异性的第二功能分子(例如，第二抗体)相连接。所述双特异性分子可以结合TSLP和另一种疾病特异性蛋白，例如IgE。本公开还提供了包含本公开的抗体或其抗原结合部分的免疫缀合物，其中所述抗体或其抗原结合部分与治疗剂(例如细胞毒素，细胞毒性药物等)相连接。在另一方面，本公开的抗体或其抗原结合部分可以是嵌合抗原受体(CAR)的一部分，并且本公开还涉及包含所述CAR的免疫细胞，例如T细胞或NK细胞。本公开的抗体或其抗原结合部分还可以由溶瘤病毒编码或与溶瘤病毒一起使用。
本公开还提供了组合物，其包含本公开的抗体或其抗原结合部分、免疫缀合物、双特异性分子、CAR-免疫细胞或溶瘤病毒，以及药学上可接受的载体。
本公开还提供了包含编码本公开的抗体或其抗原结合部分的核酸分子，以及包含所述核酸分子的表达载体，以及包含所述表达载体或使编码本公开的抗体或其抗原结合部分的多核苷酸与其基因组整合的宿主细胞。本公开还提供了一种使用包含表达载体的宿主细胞制备抗TSLP抗体或其抗原结合部分的方法，其包括以下步骤：(i)在宿主细胞中表达抗体或其抗原结合部分，和(ii)从宿主细胞或其细胞培养物中分离抗体或其抗原结合部分。
在另一方面，本公开提供了一种治疗受试者的哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎或牛皮癣的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，该方法包括向所述受试者施用本公开的组合物、双特异性分子、免疫缀合物、CAR-免疫细胞、或编码抗体或带有抗体的溶瘤病毒、或者能够在受试者中表达前述相同成分的核酸分子。在哮喘治疗中，双特异性分子可以结合TSLP和另一种疾病特异性蛋白，例如IgE、IL4、IL13或IL-5。在一些实施方案中，至少一种其他抗体可以与本公开的抗体或其抗原结合部分一起施用，例如抗IgE抗体、抗IL4抗体、抗IL4R抗体、抗-IL13抗体、抗IL13R抗体、抗IL-5抗体、抗IL5R抗体和/或抗TSLPR抗体。在一些实施方案中，至少一种其他药物可以与本公开的抗体或其抗原结合部分一起施用，例如抗哮喘药物、抗溃疡性结肠炎药物、抗特应性皮炎药物或抗牛皮癣药物。
基于以下的具体描述与实施例，本公开的其他特征与优点将变得清晰，具体描述与实施例不应解读为限制性的。本申请引用的所有文献、Genbank记录、专利、以及已公开的专利申请的内容通过引用的方式明确地并入本文中。
因此，本发明的目是在本发明的范围内不涵盖任何先前已知的产品、制造该产品的过程、或使用该产品的方法，使得申请人保留权利并在此披露放弃任何先前已知的产品、过程、或方法的主张。进一步指出的是，本发明的范围并不意图涵盖任何不符合USPTO(35U.S.C.§112，第一段)或EPO(EPC的条款83)的书面描述要求和能够实现要求的产品、过程、或产品的制造或使用产品的方法，使得申请人保留权利并在此披露放弃任何所述的产品、制造该产品的过程、或使用该产品的方法的主张。可能有利的是，在本发明的实践中遵循EPC条款53(c)和EPC条例28(b)和(c)。明确保留在本申请的家族中、任何其他家族中或任何第三方的任何在先申请中明确拒绝作为申请人的任何已授权专利的主题的任何实施方案的所有权利。本文中的任何内容均不得解释为承诺。
应注意，在本公开特别是在权利要求书和/或段落中，如“包括(comprises)”、“包括的(comprised)”、“包括了(comprising)”等术语具有适用美国专利法赋予其的意义；例如，它们可以表示“包含(includes)”、“包含的(included)”、“包含了(including)”等；并且如“基本上由……组成(consisting essentially of)”和“基本上由……组成(consistsessentially of)”等术语具有适用美国专利法赋予其的意义，例如，它们涵盖未被明确叙述的要素，但是排除在现有技术中存在或者影响本发明的基础或新颖特征的要素。
附图说明
通过结合以示例给出的以下详细描述和附图，可以得到最好的理解，但不应该将本发明仅限于所述的特定实施方案。
图1A-1B示出捕获ELISA中小鼠抗体1C5F12E9(A)、D1C2H1H1和D1D8H9F7(B)与人TSLP的结合能力。
图2A-2B示出间接ELISA中小鼠抗体1C5F12E9(A)、D1C2H1H1和D1D8H9F7(B)与食蟹猴TSLP的结合能力。
图3A-3B示出竞争ELISA中小鼠抗体1C5F12E9(A)、D1C2H1H1和D1D8H9F7(B)对人TSLP与TSLPR/IL7R结合的阻断能力。
图4A-4B示出竞争ELISA中小鼠抗体1C5F12E9(A)、D1C2H1H1和D1D8H9F7(B)阻断参照品Tezepelumab与人TSLP结合的能力。
图5A-5B示出在基于细胞的配体阻断FACS测定中，小鼠抗体1C5F12E9(A)、D1C2H1H1和D1D8H9F7(B)对人TSLP与表达人TSLPR和IL7R的工程化BAF3细胞结合的阻断能力。
图6A-6B示出在基于细胞的功能测定中，1C5F12E9(A)、D1C2H1H1和D1D8H9F7(B)对BAF3细胞存活和增殖的抑制作用。
图7示出捕获ELISA中嵌合抗体1C5F12E9与人TSLP的结合能力。
图8示出在基于细胞的阻断FACS测定中，嵌合抗体1C5F12E9对人TSLP与表达人TSLPR和IL7R的工程化BAF3细胞结合的阻断能力。
图9示出在基于细胞的功能测定中，嵌合抗体1C5F12E9对BAF3细胞存活和增殖的抑制作用。
图10示出捕获ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14与人TSLP的结合能力。
图11示出间接ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14与食蟹猴TSLP的结合能力。
图12示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14对人TSLP与TSLPR/IL7R结合的阻断能力。
图13示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14阻断参照品Tezepelumab与人TSLP结合的能力。
图14示出在基于细胞的配体阻断FACS测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14对人TSLP与表达人TSLPR和IL7R的工程化BAF3细胞结合的阻断能力。
图15A和15B示出在基于细胞的功能测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(A)和hu1C5F12E9-V14(B)对BAF3细胞存活和增殖的抑制作用。
图16示出捕获ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)与人TSLP的结合能力。
图17示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)对人TSLP与TSLPR/IL7R结合的阻断能力。
图18示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)阻断参照品与人TSLP结合的能力。
图19示出在基于细胞的配体阻断FACS测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)对人TSLP与表达人TSLPR和IL7R的工程化BAF3细胞结合的阻断能力。
图20A和20B示出在基于细胞的功能测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)(A)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)(B)对BAF3细胞存活和增殖的抑制作用。
图21A和21B示出在基于细胞的报告基因检测中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)(A)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)(B)对人TSLP与工程化HEK293T细胞相互作用的阻断能力。
图22示出hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)抗体的蛋白热位移测定结果。
发明详述
为了更好地理解本公开，首先定义一些术语。其他定义则贯穿详述部分而列出。
术语“TSLP”是指胸腺基质淋巴细胞生成素。术语“TSLP”包括变体、亚型、同系物、直系同源物和旁系同源物。例如，在某些情况下，对人TSLP蛋白具有特异性的抗体可与人以外的其他物种(如猴)的TSLP蛋白发生交叉反应。在其他实施方案中，对人TSLP蛋白具有特异性的抗体可以对人TSLP蛋白完全特异，并且不与其他物种或其他类型的蛋白交叉反应，或者可以与来源于某些其他物种但并非所有其他物种的TSLP发生交叉反应。
术语“人TSLP”是指具有人氨基酸序列的TSLP蛋白，例如Genbank登录号为NP_149024.1的人TSLP的氨基酸序列。术语“猴或恒河猴TSLP”和“小鼠TSLP”分别指猴和小鼠TSLP序列，例如，分别具有Genbank登录号为NP_001100503.1和NP_067342.1的氨基酸序列。
本文中的术语“抗体”意在包括全长抗体及其任何抗原结合片段(即，抗原结合部分)或单链。全长抗体是包含两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，其中重链和轻链由二硫键连接。每条重链由重链可变区(简称VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由三个结构域构成，即CH1、CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(简称VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。VH和VL区还可以进一步划分为称作互补决定区(CDR)的高变区，其由较为保守的骨架区(FR)区分隔开。每个VH和VL由三个CDRs以及四个FR构成，从氨基端到羧基端以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排布。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括多种免疫系统细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。
本文中的术语，抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)是指抗体中保留特异性结合抗原(例如，TSLP蛋白)能力的一个或多个片段。已证实，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实现。涵盖在抗体的“抗原结合部分”中的结合片段的例子包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1构成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1构成的Fd片段；(iv)由抗体单臂VL和VH构成的Fv片段；(v)由VH构成的dAb片段(Ward et al.,(1989)Nature 341:544-546)；(vi)分离的互补决定区(CDR)；以及(vii)纳米抗体，即一种包含单个可变结构域和两个恒定结构域的重链可变区。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同的基因编码，可以通过重组的方法，使两者经合成接头连接成为蛋白单链，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fc(scFv)；参见例如Bird et al.,(1988)Science 242:423-426；and Huston et al.,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。这样的单链抗体也涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”中。这些抗体片段可以通过本领域技术人员已知的常用技术获得，且可以通过与全长抗体相同的方式进行功能筛选。
本文所用的术语“分离的抗体”是指基本不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合TSLP蛋白的分离抗体基本不含特异性结合TSLP蛋白以外抗原的抗体)。但是，特异性结合人TSLP蛋白的分离抗体可能对其他抗原例如其他物种的TSLP蛋白具有交叉结合性。此外，分离的抗体基本不含其他细胞材料和/或化学物质。术语“单克隆抗体”是指单一分子组成的抗体分子制品。单克隆抗体呈现出对于特定表位的单一结合特异性和亲和力。
本文所用的术语“小鼠抗体”是指可变区中骨架区和CDR区均来自小鼠种系免疫球蛋白序列的抗体。此外，如果抗体包含恒定区，则恒定区也来自小鼠种系免疫球蛋白序列。本公开的小鼠抗体可以包含不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机突变或点突变、或通过体内体细胞突变而引入的突变)。但本文所用的术语“小鼠抗体”不包括在小鼠骨架区序列中插入来自其他哺乳动物物种的CDR序列的抗体。
术语“嵌合抗体”是指通过组合非人来源的遗传物质与人来源的遗传物质而得来的抗体。或者更笼统地说，嵌合抗体是指组合一个物种的遗传物质与另一物种遗传物质的抗体。
本文所用的术语“人源化抗体”是指来源于非人物种但其蛋白序列已经被修改以增加其与人天然抗体的相似度的抗体。
术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类(例如IgM或IgG1)。
短语“识别抗原的抗体”以及“对抗原特异的抗体/对抗原具有特异性的抗体”在本文中与术语“特异性结合抗原的抗体”可互换使用。
如本文所使用，“特异性结合人TSLP”的抗体是指与人TSLP蛋白(还可能是一个或多个非人物种的TSLP蛋白)结合但基本不与非TSLP蛋白结合的抗体。优选地，抗体以“高亲和力”结合人TSLP蛋白，即以5.0×10-8M或更小，优选为1.0×10-8M或更小，更优选为7.0×10-9M或更小的KD结合人TSLP蛋白。
如本文所使用，术语“基本不结合”蛋白或细胞是指不与蛋白或细胞结合，或者不以高亲和力与其结合，即以1.0×10-6M或更大，优选为1.0×10-5M或更大，更优选为1.0×10-4M或更大，更优选为1.0×10-3M或更大，更优选为1.0×10-2M或更大的KD结合蛋白或细胞。
术语“高亲和力”对于IgG抗体而言，是指对于目标抗原，抗体具有1.0×10-6M或更小，优选为5.0×10-8M或更小，更优选为1.0×10-8M或更小，更优选为7.0×10-9M或更小，更优选为1.0×10-9M或更小的KD。但是对于其他抗体同种型，“高亲和力”结合可能有所不同。例如，对于IgM同种型，“高亲和力”是指抗体具有10-6M或更小，优选为10-7M或更小，更优选为10-8M或更小的KD。
本文所用的术语“Kassoc”或“Ka”是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而本文所用的术语“Kdis”或“Kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。本文所用的术语“KD”是指解离常数，其为Kd与Ka之比(即Kd/Ka)并用摩尔浓度(M)表示。抗体的KD值可以使用本领域熟知的方法测定。测定抗体KD值的优选方法是使用表面等离子体共振技术，优选使用生物传感器系统，例如BiacoreTM系统进行测定。
术语“EC50”，又叫半数最大效应浓度，是指在特定暴露时间后，诱导反应达到基线和最大值之间的一半的抗体浓度。
术语“IC50”，又叫半数最大抑制浓度，是指相对于不存在抗体时，将特异性生物学或生化功能抑制50％的抗体浓度。
术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类、羊、狗、猫、牛、马、鸡、两栖类和爬行类；优选为哺乳动物，例如非人灵长类、羊、狗、猫、牛和马。
术语“治疗有效量”是指足以防止或改善与疾病或病症(例如癌症)相关的症状，和/或减轻疾病或病症的严重性的本公开的抗体的量。应当理解，治疗有效量与被治疗的疾病相关，其中本领域技术人员可以方便地判别出实际的有效量。
本公开的多个方面在以下更加具体地被描述。
抗TSLP抗体具有更强的人TSLP结合亲和力以及对TSLP-TSLPR/IL7R相互作用的阻
断能力
本公开的示例性抗体或其抗原结合部分特异性结合人或食蟹猴TSLP，与已报道的抗TSLP抗体(如Tezepelumab)相比，具有相当的(如果不是更好的话)结合亲和力。本公开的示例性抗体或其抗原结合部分也可以阻断人TSLP与TSLPR/IL7R的相互作用，并且其阻断活性优于现有技术中的抗TSLP抗体。
优选地，本公开的抗体是人源化单克隆抗体。此外，或者，本公开的抗体可以是例如，嵌合单克隆抗体。
抗TSLP单克隆抗体
本公开的抗体或其抗原结合部分可以是结构和化学特性如下文和实施例中所述的抗体。抗体的重/轻链可变区的氨基酸序列ID总结在下表1中，一些抗体具有相同的VH或VL。抗体的重链恒定区可以是具有SEQ ID NOs：12或57所示氨基酸序列的人IgG1重链恒定区、或具有SEQ ID NO：13所示氨基酸序列的人IgG4重链恒定区，且抗体的轻链恒定区可以是具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的人κ轻链恒定区。抗体也可以包含小鼠IgG1或IgG2重链恒定区，和/或小鼠κ轻链恒定区。这些抗体由通过二硫键连接的两条重链和两条轻链组成，其中重链可变区的C-末端连接至重链恒定区的N-末端，轻链可变区的C-末端连接至轻链恒定区的N-末端。
表1中的重链可变区CDRs和轻链可变区CDRs已由Kabat编号系统定义。然而，如本领域所熟知的，CDR区也可以基于重/轻链可变区序列由其他编号系统例如Chothia、IMGT、AbM或Contact编号系统/方法确定。
与人TSLP结合的其他抗TSLP抗体的VH和VL序列(或CDR序列)可以与本公开的抗TSLP抗体的VH和VL序列(或CDR序列)“混合并配对”。优选地，当VH和VL链(或这些链中的CDRs)混合并配对时，来自特定VH/VL对中的VH序列被结构相似的VH序列取代。同样地，优选将来自特定VH/VL对中的VL序列替换为结构相似的VL序列。
因此，在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合部分包括：
(a)重链可变区，其包含列于表1中氨基酸序列；和
(b)轻链可变区，其包含列于表1中氨基酸序列，或另一种抗TSLP抗体的VL，其中所述抗体特异性结合人TSLP。
表1.重/轻链可变区的氨基酸序列ID
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合部分包含：
(a)列于表1中的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和
(b)列于表1中的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3，或另一种抗TSLP抗体的CDRs，其中所述抗体特异性结合人TSLP。
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合部分包括抗TSLP抗体的重链可变区的CDR2以及其他结合人TSLP的抗体的CDRs，例如来自另一抗TSLP抗体的重链可变区的CDR1和/或CDR3，和/或轻链可变区的CDR1、CDR2和/或CDR3。
此外，本领域所熟知的是，不依赖于CDR1和/或CDR2结构域，单独的CDR3结构域能够确定抗体对同源抗原的结合特异性，并且基于共同的CDR3序列可以预测性地产生具有相同结合特异性的多种抗体。参见例如，Klimka et al.,British J.of Cancer 83(2):252-260(2000)；Beiboer et al.,J.Mol.Biol.296:833-849(2000)；Rader et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:8910-8915(1998)；Barbas et al.,J.Am.Chem.Soc.116:2161-2162(1994)；Barbas et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92:2529-2533(1995)；Ditzel et al.,J.Immunol.157:739-749(1996)；Berezov et al.,BIAjournal 8:Scientific Review 8(2001)；Igarashi et al.,J.Biochem(Tokyo)117:452-7(1995)；Bourgeois et al.,J.Virol 72:807-10(1998)；Levi et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:4374-8(1993)；Polymenis and Stoller,J.Immunol.152:5218-5329(1994)and Xu and Davis,Immunity 13:37-45(2000).。另参见美国专利Nos.6,951,646；6,914,128；6,090,382；6,818,216；6,156,313；6,827,925；5,833,943；5,762,905和5,760,185。这些参考文献均通过引用的方式全部并入本文。
在另一个实施方案中，本公开的抗体包含抗TSLP抗体的重链可变区的CDR2以及至少抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区的CDR3，或另一抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区的CDR3，其中该抗体特异性结合人TSLP。这些抗体优选与本公开的抗TSLP抗体(a)竞争结合TSLP；(b)保留功能特性；(c)结合相同表位；和/或(d)具有相似的结合亲和力。在另一个实施方案中，本公开的抗体还可以包含抗TSLP抗体的轻链可变区的CDR2，或者另一抗TSLP抗体的轻链可变区的CDR2，其中该抗体特异性结合人TSLP。在另一个实施方案中，本公开的抗体还可以包括抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区的CDR1，或另一抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区的CDR1，其中该抗体特异性结合人TSLP。
保守修饰
在另一个实施方案中，本公开的抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1、CDR2和CDR3序列不同于本公开的抗TSLP抗体的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述不同是源于一个或多个保守修饰。本领域中应理解，一些保守的序列修饰不会使抗原结合性消失。参见，例如Brummell et al.,(1993)Biochem 32:1180-8；de Wildt et al.,(1997)Prot.Eng.10:835-41；Komissarov et al.,(1997)J.Biol.Chem.272:26864-26870；Hall et al.,(1992)J.Immunol.149:1605-12；Kelley and O'Connell(1993)Biochem.32:6862-35；Adib-Conquy et al.,(1998)Int.Immunol.10:341-6and Beers et al.,(2000)Clin.Can.Res.6:2835-43.
因此，在一个实施方案中，本公开的抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含CDR1、CDR2和CDR3，其中：
(a)重链可变区的CDR1包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(b)重链可变区的CDR2包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(c)重链可变区的CDR3包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(d)轻链可变区的CDR1、和/或CDR2、和/或CDR3包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和
(e)该抗体特异性结合人TSLP。
本公开的抗体具有一种或多种上述的功能特性，例如对人TSLP的高亲和力。
在多个实施方案中，抗体可以是例如，小鼠、人、嵌合或人源化抗体。
本文所用的术语“保守序列修饰”是指不会显著影响或改变抗体结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸替换、添加和删除。可以通过本领域已知的标准技术将修饰引入本公开的抗体中，例如点突变和PCR介导的突变。保守氨基酸替换是指将氨基酸残基替换为具有相似侧链的氨基酸残基。具有相似侧链的氨基酸残基组在本领域中已知。这些氨基酸残基组包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，本公开的抗体的CDR区中的一个或多个氨基酸残基可以用来自相同侧链组的其他氨基酸残基进行替换，且得到的抗体可以使用本文所述的功能检测对其进行保留功能(即，上述的功能)测试。
工程化和修饰的抗体
本公开的抗体可以用包含本公开抗TSLP抗体的一个或多个VH/VL序列的抗体作为起始材料来工程化产生修饰抗体。抗体可以通过修饰一个或两个可变区(即，VH和/或VL)内(例如，在一个或多个CDR区和/或一个或多个骨架区)的一个或多个残基来进行工程化。此外，或者，可以通过修饰恒定区中的残基来进行工程化，例如改变抗体的效应功能。
在某些实施方案中，CDR移植可以用来修饰抗体的可变区。抗体主要通过位于重链和轻链的六个互补决定区(CDRs)中的氨基酸残基与靶抗原相互作用。因此，CDRs内的氨基酸序列比CDRs外的氨基酸序列在各种抗体之间更加的多样。因为CDR序列负责主要的抗体-抗原相互作用，可以通过构建这样的表达载体，其中特定天然抗体的CDR序列移植到具有不同特性的另一抗体的骨架区序列，来表达模拟特定天然抗体特性的重组抗体(参见，例如，Riechmann et al.,(1998)Nature 332:323-327；Jones et al.,(1986)Nature 321:522-525；Queen et al.,(1989)Proc.Natl.Acad.另外参见U.S.A.86:10029-10033；美国专利Nos.5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)
因此，本公开的另一实施方案涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含本公开上述的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变区包含本公开上述的CDR1、CDR2和CDR3。尽管这些抗体包含本公开的单克隆抗体VH和VL的CDR序列，它们可以含有不同的骨架序列。
这样的骨架序列可以从包括种系抗体基因序列的公开DNA数据库或发表的参考文献中获得。例如，用于人重链可变区基因和人轻链可变区基因的种系DNA序列可以在Vbase人种系序列数据库(www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase)以及Kabat et al.,(1991)，同上；Tomlinson et al.,(1992)J.Mol.Biol.227:776-798；and Cox et al.,(1994)Eur.J.Immunol.24:827-836中获得，其内容各以引用的方式明确地并入本文。另一个实施方案中，用于人重链可变区基因和人轻链可变区基因的种系DNA序列可以在Genbank数据库中获得。例如，下列来自HCo7 HuMAb小鼠的重链种系序列的Genbank登录号为：1-69(NG--0010109,NT--024637&BC070333)、3-33(NG--0010109&NT--024637)和3-7(NG--0010109&NT--024637)。另一个实施方案中，以下来自HCo12 HuMAb小鼠的重链种系序列的Genbank登录号为：1-69(NG--0010109,NT--024637&BC070333)、5-51(NG--0010109&NT--024637)、4-34(NG--0010109&NT--024637)、3-30.3(CAJ556644)和3-23(AJ406678)。
使用本领域技术人员所熟知的Gapped BLAST的序列相似性搜索方法之一(Altschul et al.,(1997)，同上)，将抗体蛋白序列与编译蛋白序列数据库进行比较。
本公开所用的抗体骨架序列，优选在结构上与本公开的抗体骨架序列相似的那些。VH的CDR1、CDR2和CDR3序列可以移植到与得到该骨架序列的种系免疫球蛋白基因具有相同序列的骨架区中，或者CDR序列可以移植到包含与种系序列相比具有一个或多个突变的骨架区中。例如，在一些情况下，将骨架区中的残基进行突变是有益的，可以保持或增强抗体的抗原结合能力(参见例如美国专利Nos.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
另一类的可变区修饰是将VH和/或VL的CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基进行突变，从而改进目标抗体的一种或多种结合特性(例如，亲和力)。可以通过点突变或PCR介导的突变引入突变，并且可以通过本领域已知的体外或体内检测来评价突变对抗体结合或其他功能特性的影响。优选地，引入本领域已知的保守修饰。突变可以是氨基酸替换、添加或缺失，但优选为替换。此外，通常改变一个CDR区内不多于一个、两个、三个、四个或五个的残基。
此外，在另一个实施方案中，本公开提供分离的抗TSLP单克隆抗体或其抗原结合部分，包含重链可变区，其包含：(a)VH CDR1区，其包含本公开的VH CDR1序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(b)VH CDR2区，其包含本公开的VH CDR2序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(c)VH CDR3区，其包含本公开的VH CDR3序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(d)VL CDR1区，其包含本公开的VL CDR1序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(e)VL CDR2区，其包含本公开的VL CDR2序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；和(f)VL CDR3区，其包含本公开的VL CDR3序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列。
本公开的工程化抗体包括在VH和/或VL的骨架区残基中进行修饰以例如改善抗体特性的那些抗体。通常而言，此类骨架区修饰可用来降低抗体的免疫原性。例如，将一个或多个骨架区残基“回复突变”成相应的种系序列。更具体地，经历体细胞突变的抗体可能包含不同于得到该抗体的种系序列的骨架残基。这些残基可以通过将抗体骨架序列与得到该抗体的种系序列相比较而鉴别出来。
另一类的骨架区修饰包括对骨架区的、或者甚至一个或多个CDR区的一个或多个残基进行突变，以去除T细胞表位，从而减少抗体可能导致的免疫原性。该方法也称为“去免疫化”，在美国专利公开No.20030153043中有更加详细的描述。
此外，或作为骨架区或CDR区修饰之外的另一种选择，可以对本公开的抗体的Fc进行修饰，通常用来改变抗体的一个或多个功能特性，例如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗体依赖的细胞毒性。此外，可以对本公开的抗体进行化学修饰(例如，可以将一个或多个化学功能基团连接至抗体)，或者修饰改变其糖基化，来改变抗体的一个或多个功能特性。
在一个实施方案中，对CH1-铰链区进行修饰，从而改变(例如增加或减少)铰链区的半胱氨酸残基的数量。该方法在美国专利No.5,677,425中有具体描述。改变CH1-铰链区的半胱氨酸残基的数量，例如可以促进重链和轻链的组装、或增加/降低抗体的稳定性。
在另一个实施方案中，对抗体的Fc-铰链区进行突变，以降低抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区，使得抗体相对于天然Fc-铰链结构域，具有减弱的葡萄球菌A蛋白(SpA)结合力。该方法在美国专利No.6,165,745中有更详细的描述。
在另一个实施方案中，改变抗体的糖基化。例如，可以制备去糖基化的抗体(即，抗体缺少糖基化)。改变糖基化，可以例如增加抗体对抗原的亲和力。这样的糖化修饰可以通过例如改变抗体序列中的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸替换，以消除一个或多个可变区骨架区的糖基化位点，从而消除该位点的糖基化。这样的去糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力。参见，例如美国专利Nos.5,714,350和6,350,861。
此外，或者，可以制备糖基化类型改变的抗体，例如岩藻糖残基量减少的低岩藻糖基化抗体，或者具有平分型GlcNac结构增加的抗体。已经证明这种糖基化形式的改变能增加抗体的ADCC活性。这样的糖化修饰可以通过例如在糖基化机制改变的宿主细胞中表达抗体来实现。糖基化机制改变的细胞在本领域中已知，且可以用作表达本公开的重组抗体的宿主细胞，以制备糖基化改变的抗体。例如，细胞系Ms704、Ms705和Ms709缺少岩藻糖基转移酶基因FUT8(α(1,6)-岩藻糖基转移酶基因)，因此在Ms704、Ms705和Ms709细胞系中表达的抗体在其糖中缺失岩藻糖。使用两种替换载体定向破坏CHO/DG44细胞中的FUT8基因，来制备Ms704、Ms705和Ms709 FUT8-/-细胞系(参见美国专利公开No.20040110704和Yamane-Ohnuki et al.,(2004)Biotechnol Bioeng 87:614-22)。作为另一个例子，EP1,176,195记载了FUT8基因功能破坏的细胞系，该基因编码岩藻糖基转移酶，从而使在该细胞系中表达的抗体因减少或消除了α-1,6键相关的酶而表现出低岩藻糖基化。EP1,176,195也描述了一种细胞系，其具有较低的或缺乏向结合抗体Fc区的N-乙酰葡萄糖胺添加岩藻糖的酶活性，例如大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCC CRL 1662)。PCT公开WO03/035835描述了一种CHO变体细胞系Lec13细胞，其具有降低的向Asn(297)-连接的糖上添加岩藻糖的能力，从而导致该宿主细胞中表达的抗体为低岩藻糖基化(另外参见Shields etal.,(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740)。如WO06/089231中所述，也可以在鸡蛋中制备糖基化图谱改变的抗体。或者，可以在植物细胞如Lemna中制备糖基化图谱改变的抗体。在植物系统中生产抗体的方法披露于2006年8月11日提交的对应于Alston&Bird LLP代理案卷号040989/314911的美国专利申请中。PCT公开WO99/54342记载了一种工程化细胞系，其表达糖蛋白修饰糖基转移酶(例如，β(1,4)-N-乙酰葡糖胺转移酶III(GnTIII))，使得在该工程化细胞系中表达的抗体表现出增加的平分型GlcNac结构，从而导致抗体ADCC活性的提高(另参见Umana et al.,(1999)Nat.Biotech.17:176-180)。或者，可以使用岩藻糖苷酶切割抗体的岩藻糖残基，例如，利用α-L-岩藻糖苷酶移除抗体的岩藻糖残基(Tarentino et al.,(1975)Biochem.14:5516-23)。
本公开的抗体的另一种修饰是聚乙二醇化(PEG化)。将抗体PEG化，可以例如增加抗体的生物(例如，血清)半衰期。为使抗体PEG化，抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)如PEG的反应性酯或醛类衍生物，在使一个或多个PEG基团附于抗体或抗体片段的条件下进行反应。优选地，通过与反应性PEG分子(或类似的有反应性的水溶性聚合物)的酰化反应或烷化反应进行PEG化。本文中所用的术语“聚乙二醇”包括用于衍生其他蛋白的任何形式的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基聚乙二醇或芳氧基聚乙二醇或聚乙二醇马来酰亚胺。在某些实施方案中，PEG化的抗体是去糖基化的抗体。PEG化蛋白的方法在本领域是已知的，且可以用于本公开的抗体。参见，例如EP0154316和EP0401384。
抗体的物理特性
本公开的抗体可以用它们的多种物理特性进行表征，以检测和/或区分其类别。
例如，抗体可以在轻链可变区或重链可变区包含一个或多个糖基化位点。这些糖基化位点可能导致抗体免疫原性的增加，或由于抗原结合的改变而引起的抗体pK值的改变(Marshall et al(1972)Annu Rev Biochem 41:673-702；Gala and Morrison(2004)JImmunol 172:5489-94；Wallick et al(1988)J Exp Med 168:1099-109；Spiro(2002)Glycobiology 12:43R-56R；Parekh et al(1985)Nature 316:452-7；Mimura et al.,(2000)Mol Immunol 37:697-706)。已知糖基化发生在含有N-X-S/T序列的基序中。在一些情况下，优选可变区不包含糖基化的抗TSLP抗体。可以选择可变区不包含糖基化基序的抗体或通过突变糖基化区域的残基来实现。
在优选的实施方案中，抗体不包含天冬酰胺异构位点。天冬酰胺的脱酰胺作用可能发生在N-G或D-G序列，并导致异天冬氨酸残基的产生，其向多肽骨架中引入一个连接结构并降低其稳定性(异天冬氨酸作用)。
各抗体具有独特的等电点(pI)，通常落在6-9.5的pH范围内。IgG1抗体的pI通常落在7-9.5的pH范围内，而IgG4抗体的pI基本落在6-8的pH范围内。推测pI在正常范围外的抗体在体内可能会发生一些解折叠且不稳定。因此，优选pI值落在正常范围内的抗TSLP抗体。这可以选择pI在正常范围内的抗体或通过突变带电的表面残基来实现。
编码本公开的抗体的核酸分子
在另一方面，本公开提供编码本公开的抗体的重链可变区和/或轻链可变区或CDRs的核酸分子。核酸可以存在于完整细胞中、细胞裂解液中、或以部分纯化或基本上纯的形式存在。通过标准技术将核酸从其他细胞组分或其他污染物例如其他细胞核酸或蛋白中纯化出来后，核酸是“分离的”或“基本上纯的”。本公开的核酸可以是DNA或RNA，且可包含或不包含内含子序列。在优选的实施方案中，核酸是cDNA分子。
本公开的核酸可以通过标准的分子生物学技术获得。对于由杂交瘤(例如，由下文所述的携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)表达的抗体，可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得编码杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA。对于从免疫球蛋白基因文库(例如使用噬菌体展示技术)中获得的抗体，可以从基因文库中回收编码这类抗体的核酸。
优选地，本公开的核酸分子包括编码TSLP单克隆抗体的VH和VL序列或CDRs的那些。一旦获得了编码VH和VL的DNA片段，这些DNA片段可以进一步通过标准重组DNA技术进行操作，例如将可变区基因转变为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，将编码VH或VL的DNA片段与编码另一蛋白(例如抗体恒定区或柔性接头)的DNA片段例可操作地连接。这种情况下所使用的术语“可操作地连接”是指两个DNA片段连接在一起，从而使两个DNA片段编码的氨基酸序列都在阅读框内。
将编码VH的DNA与编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VH区的分离的DNA转变成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的，且可以通过标准PCR扩增获得包括人重链恒定区基因的DNA片段。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但是优选为IgG1或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，可将编码VH区的DNA可操作地连接至仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子。
将编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VL区的分离的DNA转变成全长轻链基因。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的，且可以通过标准PCR扩增获得包括人轻链恒定区基因的DNA片段。在优选的实施方案中，轻链恒定区是κ或λ恒定区。
为了制备scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接至编码柔性接头例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，使得VH和VL序列可以表达为连续的单链蛋白，其中VH和VL区域通过该柔性接头连接(参见，例如Bird et al.,(1988)Science 242:423-426；Huston et al.,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；McCafferty etal.,(1990)Nature 348:552-554)。
本公开单克隆抗体的制备
本公开的单克隆抗体(mAbs)可以使用本领域熟知的Kohler and Milstein(1975)Nature 256:495的体细胞杂交(杂交瘤)技术进行制备。制备单克隆抗体的其他实施方案包括B淋巴细胞的病毒或致癌性转化以及噬菌体展示技术。嵌合或人源化抗体也是本领域熟知的。参见，例如美国专利Nos.4,816,567；5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370，其全部内容通过引用的方式明确地并入本文。制备本公开的单克隆抗体的转染 瘤的生成
本公开的抗体还可以使用例如本领域熟知的重组DNA技术结合基因转染的方法，在宿主细胞转染瘤中制备(例如Morrison,S.(1985)Science 229:1202)。在一个实施方案中，将通过标准分子生物技术得到的编码部分或全长轻链和重链的DNA插入一个或多个表达载体中，使得基因可操作地连接至转录和翻译调控序列。在这种情况下术语“可操作地连接”是指抗体基因连接到载体中，使得载体内的转录和翻译调控序列行使它们既定的调控抗体基因转录和翻译的功能。
术语“调控序列”包括控制抗体基因转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。这样的调控序列在例如Goeddel(Gene ExpressionTechnology.Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,Calif.(1990))中有过描述。优选的用于哺乳动物宿主细胞表达的调控序列包括在哺乳动物细胞中的引导高水平蛋白表达的病毒元件，例如源自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒和多瘤病毒的启动子和/或增强子，如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP)。或者，可以使用非病毒调控序列，例如泛素启动子或β-珠蛋白启动子。另外，调控元件由不同来源的序列构成，例如SRα启动子系统，其包含来自SV40早期启动子的序列和人T细胞白血病病毒1型的长末端重复序列(Takebe et al.,(1988)Mol.Cell.Biol.8:466-472)。选择与所使用的表达宿主细胞相容的表达载体和表达调控序列。
可以将抗体轻链基因和抗体重链基因插入到同一或不同的表达载体中。在优选的实施方案中，将可变区插入到已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中构建全长抗体基因，使VH与载体中的CH可操作地连接，VL与载体中的CL可操作地连接。此外，或者，重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。可以将抗体链基因克隆到载体中，使得信号肽在阅读框内连接到抗体链基因的氨基端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
除抗体链基因和调控序列外，本公开的重组表达载体还可以携带其他序列，例如调控载体在宿主细胞中复制的序列(例如，复制起始点)和选择标记物基因。选择标记物基因可用于选择已导入载体的宿主细胞(参见，例如，美国专利Nos.4,399,216；4,634,665和5,179,017)。例如，通常选择标记物基因赋予已导入载体的宿主细胞以药物抗性，例如G418、潮霉素、或氨甲喋呤抗性。优选的选择标记物基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于dhfr宿主细胞的氨甲喋呤选择/扩增)和neo基因(用于G418选择)。
为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。各种形式的“转染”包括多种常用于将外源DNA导入原核或真核宿主细胞的技术，例如，电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管理论上在原核或真核宿主细胞中表达本公开的抗体是可行的，但优选在真核细胞中表达抗体，最优选在哺乳动物宿主细胞中表达抗体，因为真核细胞，特别是哺乳动物细胞，比原核细胞更可能组装抗体并分泌适当折叠且有免疫活性的抗体。
优选的用于表达本公开的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括与DHFR选择标记物一起使用的dhfr-CHO细胞，在Urlaub and Chasin,(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220中有过描述，DHFR选择标记物在例如R.J.Kaufmanand P.A.Sharp(1982)J.Mol.Biol.159:601-621中描述)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。特别是在使用NSO骨髓瘤细胞时，另一优选的表达系统是GS基因表达系统，记载于WO87/04462、WO89/01036和EP338,841。当编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞后，通过将宿主细胞培养足以使得抗体在宿主细胞中表达、或优选足以使得使抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中的一段时间来制备抗体。可以使用标准蛋白纯化方法从培养基中回收抗体。
免疫缀合物
本公开的抗体可以与治疗剂偶联形成免疫缀合物，例如抗体-药物偶联物(ADC)。合适的治疗剂包括细胞毒素、烷化剂、DNA小沟结合分子、DNA嵌入剂、DNA交联剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、核输出抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶I或II的抑制剂、热休克蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生素和抗有丝分裂剂。在ADC中，抗体和治疗剂优选地通过可裂解的接头偶联，例如肽类接头、二硫类接头或腙类接头。更优选的接头是肽类接头，例如Val-Cit、Ala-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Pro-Val-Gly-Val-Val、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Ala-Ala-Asn、Cit-Cit、Val-Lys、Lys、Cit、Ser或Glu。ADC可以根据美国专利Nos.7,087,600；6,989,452；和7,129,261；PCT公开WO02/096910；WO07/038,658；WO07/051,081；WO07/059,404；WO08/083,312；和WO08/103,693；美国专利公开No.20060024317；20060004081；和20060247295中的描述进行制备，其公开的内容通过引用的方式并入本文。
双特异性分子
另一方面，本公开提供一种双特异性分子，其包含一种或多种本公开的抗体，其中所述抗体与至少一个其他功能分子如另一种肽或蛋白(例如，另一抗体或受体的配体)相连接，以产生与至少两个不同结合位点或靶分子结合的双特异性分子。因此，本文所用的“双特异性分子”包括具有三种或更多种特异性的分子。
在一个实施方案中，除Fc结合特异性和TSLP结合特异性外，双特异性分子还具有第三特异性。第三特异性可以是针对哮喘治疗的IgE、IL4、IL4R、IL13、IL13R、IL-5、IL5R或TSLPR/IL7R。
双特异性分子可以具有多种形式和尺寸。在尺寸谱的一端，双特异性分子保留了传统的抗体形式，不同的是两个结合臂具有不同的特异性而不是具有相同的特异性。在尺寸谱的另一端，双特异性分子由两个经肽链连接的单链抗体片段(scFv)构成，即所谓的Bs(scFv)2构建体。中间尺寸的双特异性分子包括由肽类接头连接的两个不同的F(ab)片段。这些和其他形式的双特异性分子可以通过基因改造、体细胞杂交或化学法进行制备。参见，例如See,e.g.,Kufer et al,cited supra；Cao and Suresh,Bioconjugate Chemistry,9(6),635-644(1998)；和van Spriel et al.,Immunology Today,21(8),391-397(2000)，以及其中所引用的参考文献。
编码抗体或带有抗体的溶瘤病毒
溶瘤病毒偏好地感染并杀灭癌细胞。本公开的抗体可与溶瘤病毒一起使用。此外，可以将编码本公开的抗体的溶瘤病毒引入人体中。
嵌合抗原受体
本公开还提供了包含抗TSLP scFv的嵌合抗原受体(CAR)，该抗TSLP scFv包含本公开所述的CDRs和重/轻链可变区。
抗TSLP CAR可以包含(a)包含抗TSLP scFv的胞外抗原结合结构域；(b)跨膜结构域；(c)胞内信号传导结构域。
CAR可以在胞外抗原结合结构域的N端包含指导新生受体进入内质网的信号肽，和在胞外抗原结合结构域的N端包含使受体更易于结合的铰链肽。优选地，CAR的胞内信号传导结构域包括初级胞内信号传导结构域和一个或多个共刺激性信号传导结构域。常用且最有效的初级胞内信号传导结构域是CD3-zeta胞质结构域，其包含ITAM，ITAM的磷酸化导致T细胞活化。共刺激信号传导结构域可源自共刺激蛋白，例如CD28、CD137和OX40。
CARs可以进一步添加增强T细胞扩增、持久性和抗肿瘤活性的要素，例如细胞因子和共刺激配体。
本公开还提供了工程化免疫效应细胞，其包含本公开提供的CAR。在一些实施方案中，免疫效应细胞是T细胞、NK细胞、外周血单核细胞(PBMC)、造血干细胞、多能干细胞或胚胎干细胞。在一些实施方案中，免疫效应细胞是T细胞。
药物组合物
在另一方面，本公开提供一种药物组合物，其包含与药学上可接受的载体配制在一起的本公开的一种或多种抗体(或抗体的抗原结合部分、双特异性分子、免疫缀合物、CAR-免疫细胞、编码抗体或带有抗体的溶瘤病毒、或编码抗体的核酸分子)。当组合物包含一种以上抗体(或抗体的抗原结合部分、或双特异性分子)时，可以分开施用抗体(或其抗原结合部分、或双特异性分子)。药物组合物可以任选地包含一种或多种其他药物活性成分，例如另一种抗体或药物，例如抗哮喘药物、抗溃疡性结肠炎药物、抗特应性皮炎药物或抗牛皮癣药物。
药物组合物可以包含任何数量的赋形剂。可以使用的赋形剂包括载体、表面活性剂、增稠或乳化剂、固体粘合剂、分散或混悬剂、增溶剂、着色剂、矫味剂、包衣、崩解剂、润滑剂、甜味剂、防腐剂、等渗剂及其组合。合适赋形剂的选择和使用在Gennaro,ed.,Remington:The Science and Practice of Pharmacy,20th Ed.(Lippincott Williams&Wilkins 2003)中有教导，其公开的内容通过引用的方式并入本文。
优选地，药物组合物适合于静脉内、肌内、皮下、肠道外、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。基于给药途径，可以将活性成分包被在材料中，以保护其不受酸和可能使其失活的其他自然条件的影响。本文所用的短语“肠道外施用”是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常采用注射，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。或者，本公开的抗体可以通过非肠道外途径施用，例如局部、表皮或粘膜途径施用，如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部施用。
药物组合物可以是无菌水溶液或分散液的形式。它们也可以配制在微乳剂、脂质体或其他适于高浓度药物的有序结构中。
与载体材料一起制备成单一剂量的活性成分的量将根据所治疗的受试者和特定给药方式而变化，通常是产生疗效的组合物的量。通常，以百分比计算，该量为约0.01％至约99％的，优选为约0.1％至约70％的，最优选为约1％至约30％的与药学上可接受的载体组合的活性成分。
调整给药方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单次大剂量，可以随时间推移施用多个分剂量，或者可以随治疗情况的危急程度按比例降低或提高剂量。特别有利的是，以易于施用和剂量均匀的剂量单位形式配制肠道外施用的组合物。此处所用的剂量单位形式是指适于待治疗受试者的单一剂量的物理上离散的单位；每个单位包含经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果的预定量的活性成分。或者，抗体可以作为缓释制剂施用，这种情况下所需的施用频率降低。
对于组合物的施用，剂量可以为约0.0001至100mg/kg宿主体重。该治疗方案可以包括例如每周一次给药。
“治疗有效量”的本公开的抗TSLP抗体或其抗原结合部分、双特异性分子、CAR-免疫细胞、溶瘤病毒或免疫缀合物，优选能引起疾病症状严重程度降低、疾病无症状期频率和持续时间增加，或预防疾病病痛引起的损伤或残疾。例如，对于肿瘤受试者的治疗，与未治疗的受试者相比，“治疗有效量”优选为抑制至少约20％、优选为抑制至少约40％，更优选为抑制至少约60％，更优选为抑制至少约80％的肿瘤生长。治疗有效量的治疗性抗体可以减小肿瘤尺寸，或者减轻受试者的症状，受试者通常是人或其他哺乳动物。
药物组合物可以是控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微胶囊递送系统。可以使用生物可降解的、生物相容性的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。参见，例如，Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。
可以通过下述医疗装置施用药物组合物，例如(1)无针皮下注射装置(例如，美国专利Nos.5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；和4,596,556)；(2)微量输液泵(美国专利No.4,487,603)；(3)经皮给药装置(美国专利No.4,486,194)；(4)输注装置(美国专利Nos.4,447,233和4,447,224)；和(5)渗透装置(美国专利Nos.4,439,196和4,475,196)，其公开内容通过引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，本公开的单克隆抗体可以经配制，以确保合适的体内分布。例如，为确保本公开的治疗性抗体穿过血脑屏障，可以将抗体配制在脂质体中，该脂质体还可以额外地包含具有靶向功能的部分，以增强对特定细胞或器官的选择性输送。参见，例如美国专利Nos.4,522,811；5,374,548；5,416,016；和5,399,331；V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29:685；Umezawa et al.,(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038；Bloeman et al.,(1995)FEBS Lett.357:140；M.Owais et al.,(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39:180；Briscoe et al.,(1995)Am.J.Physiol.1233:134；Schreier et al.,(1994)J.Biol.Chem.269:9090；Keinanen and Laukkanen(1994)FEBS Lett.346:123；和Killion and Fidler(1994)Immunomethods 4:273。
本公开的用途和方法
包含本公开的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子、免疫缀合物、CAR-免疫细胞、或编码抗体或带有抗体的溶瘤病毒、或编码抗体的核酸分子的组合物具有多种体外和体内的用途，涉及例如，哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎或牛皮癣的治疗。可以向人受试者例如体内施用抗体，以减轻这些疾病。
另一方面，本公开提供了联合治疗的方法，所述方法是本公开的抗TSLP抗体或其抗原结合部分、双特异性分子、免疫缀合物、CAR-免疫细胞、或编码抗体或带有抗体的溶瘤病毒与一种或多种有效缓解受试者哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎或牛皮癣的其他抗体共同施用。在一个实施方案中，本公开提供了一种用于治疗受试者哮喘的方法，所述方法包括向所述受试者施用抗TSLP抗体(或抗体的抗原结合部分、特异性抗体、免疫缀合物、CAR-免疫细胞、或编码抗体或带有抗体的溶瘤病毒、或编码抗体的核酸分子)和一种或多种其他抗体，例如抗TSLPR抗体、抗IL4抗体、抗IL4R抗体、抗IL13抗体、抗IL13R抗体、抗IL-5抗体、抗IL5R抗体和/或抗IgE抗体。在某些实施方案中，受试者是人类。
TSLP信号转导阻断剂还可以进一步与标准疾病治疗例如哮喘治疗组合。例如，TSLP信号转导阻断剂可与上述用于治疗哮喘的抗体、减少或避免过敏原暴露等方法组合。
本文讨论的治疗剂的组合(或联合)可以作为在药学可接受载体中的单一组合物同时施用，或者作为分开的组合物同时施用，其中各药剂处于药学可接受载体中。在另一个实施方按中，治疗剂的组合可以按序施用。
此外，如果按序进行多次联合疗法施用，则在各时间点的按序施用的次序可以反转或保持相同，按序施用可以与同时施用或其任何组合相结合。
本公开通过以下实施例进行进一步描述，实施例不应当解读为限制性的。本申请的所有附图以及本申请中引用的所有参考文献、Genebank序列、专利和已公开的专利申请都通过引用的方式明确并入本文。
实施例1使用杂交瘤技术产生小鼠抗TSLP单克隆抗体
免疫接种
根据E Harlow,D.Lane,Antibody:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1998中所述的方法免疫小鼠。C-末端具有人IgG1 Fc标签的重组人TSLP蛋白(Biosion Inc.,Uniprot No.Q969D9的第21-159位氨基酸残基)作为免疫原。人TSLP-his蛋白(Biosion Inc.,产品目录P100273)用于确定抗血清的滴度和筛选分泌抗原特异性抗体的杂交瘤。初次免疫和加强免疫的免疫剂量均为每只小鼠每次注射25μg人TSLP-Fc蛋白。为了增加免疫反应，初次免疫和加强免疫分别使用了完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂(Sigma,St.Louis,Mo.,USA)。简而言之，佐剂-免疫原混合物的制备如下：首先通过涡旋仪将佐剂温和混合于小瓶中；将所需量的佐剂转移至高压灭菌过的1.5mL微量离心管中；用PBS或盐水稀释免疫原至浓度范围为0.25-0.34mg/mL；然后将计算量的免疫原添加到含有佐剂的微量离心管中，并温和涡旋混合2分钟，使佐剂-免疫原混合物形成油包水型乳液。用合适的注射器吸取佐剂-免疫原乳液进行动物注射。总共以150-200μL的体积注射了25μg免疫原。每只动物免疫后，根据抗血清滴度加强免疫3至4次。在细胞融合前，通过腹腔注射对具有高滴度较的动物进行最后一次加强免疫。
杂交瘤融合与筛选
在细胞融合之前，培养鼠骨髓瘤细胞系(SP2/0-Ag14,ATCC#CRL-1581)的细胞至对数生长期。根据Kohler G,and Milstein C,"Continuous cultures of fused cellssecreting antibody of predefined specificity,"Nature,256:495-497(1975)中描述的方法，无菌分离免疫小鼠的脾细胞，并将其与骨髓瘤细胞融合。随后将存在于DMEM/20％FCS/HAT培养基中的融合“杂交细胞”分配到96孔板中。融合后7至10天，在显微镜下观察到存活的杂交瘤细胞集落。两周后，使用重组人TSLP-his蛋白对每个孔的上清液进行捕获ELISA检测。通过有限稀释法，对能产生高特异性结合TSLP抗体的阳性杂交瘤克隆进行亚克隆，以确保细胞系的克隆性，然后纯化单克隆抗体。简而言之，以5至10倍柱体积的PBS缓冲液洗涤蛋白A琼脂糖柱(bestchrom(Shanghai)Biosciences，产品目录AA0273)。使细胞上清液流过蛋白A琼脂糖柱，然后用PBS缓冲液洗涤柱直到蛋白质的吸光度达到基线。用洗脱缓冲液(0.1M甘氨酸-HCl，pH 2.7)洗脱柱，并立即将洗脱液收集到1.5ml管中，用中和缓冲液(1M Tris-HCl，pH 9.0)中和。合并含免疫球蛋白的部分，并在PBS中于4℃透析过夜。随后，根据如下所述的方法对纯化的单克隆抗体的体外功能活性进行表征。
实施例2使用BIACORE表面等离子共振对示例性小鼠抗TSLP单克隆抗体进行亲和
性测定
通过Biacore T200系统(GE Healthcare，Pittsburgh，PA，USA)对实施例1中纯化的抗TSLP小鼠单克隆抗体(mAb)的结合亲和力和结合动力学进行表征。
简而言之，将Biosion内部合成的重组人TSLP-his(SEQ ID NO：28)或者食蟹猴TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：29)溶于CH3COONa缓冲液(由Biocore提供)，终浓度为10μg/mL。然后使用Biacore(GE Healthcare，Pittsburgh,PA,USA)提供的标准胺偶联试剂盒，通过伯胺基团将上述重组人TSLP-his或者食蟹猴TSLP-his蛋白共价连接至CM5芯片(羧甲基化葡聚糖涂层芯片，GE Healthcare#BR100530)上。用乙醇胺封闭生物传感器表面上未反应的部分。然后，分别将梯度稀释的纯化的抗TSLP抗体(以100nM为起始浓度在HBS-EP+缓冲液中2倍梯度稀释)和参照品Tezepelumab(也称为TSLP-BM，使用SEQ ID NO：35和36所示的重链和轻链内部制备，以100nM为起始浓度在HBS-EP+缓冲液中2倍梯度稀释)以50μL/分钟的流速流过芯片。追踪抗原-抗体结合动力学4分钟，并追踪解离动力学13分钟。使用BIAcoreevaluation软件将结合和解离曲线拟合至1:1Langmuir结合模型，并测定KD、Ka和Kd值，如下表2中所示。
表2.小鼠抗TSLP抗体的结合亲和力
所有被检测的抗TSLP抗体均与人TSLP特异性结合，其中大多数抗体具有高于参照品的结合亲和力。抗体D1C2H1H1还具有猴TSLP结合亲和力。
实施例3示例性小鼠抗TSLP单克隆抗体的结合能力
通过捕获ELISA和间接ELISA测定小鼠抗TSLP抗体的结合活性。
对于捕获ELISA，将溶于PBS的2μg/mL亲和纯化的山羊抗鼠IgG(Fcγ片段特异性)(Jackson Immuno Research，产品目录115-005-008)以100μL/孔包被于96孔板中，于4℃孵育过夜。用洗涤缓冲液(PBS+0.05％ Tween-20，PBST)洗涤板4次，然后加入200μL/孔的封闭缓冲液(含5％w/v脱脂牛奶的PBST)，于37℃封闭2小时。再次洗涤板，每孔加入100μL梯度稀释(以66.7nM为起始浓度，在含2.5％脱脂牛奶的PBST中5倍梯度稀释)的本公开的抗TSLP抗体、Tezepelumab或hIgG(Hualan Biological Engineering Inc.)，于37℃共孵育40分钟，然后洗涤板4次。在捕获有抗体的96孔板中加入100μL/孔的生物素标记的人TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：28，内部制备，溶于含2.5％脱脂牛奶的PBST中，终浓度为0.23nM)，于37℃共孵育40分钟，洗涤板4次，然后加入100μL/孔的HRP标记链霉亲和素(在PBST中以1:10000稀释，Jackson Immuno Research，产品目录016-030-084)，于37℃孵育40分钟。最后一次洗涤板后，加入100μL/孔的TMB(Innoreagents)进行孵育。15分钟后，室温下加入50μL/孔的1MH2SO4以终止反应，并在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光度。以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到EC50值。一些抗体的结果如图1A-1B所示。
对于间接ELISA，将溶于碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液(pH 9.6)的2μg/mL食蟹猴TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：29，内部制备)以100μL/孔包被于96孔板中，于4℃孵育过夜。用洗涤缓冲液(PBS+0.05％ Tween-20，PBST)洗涤板4次，然后加入200μL/孔的封闭缓冲液(含5％w/v脱脂牛奶的PBST)，于37℃封闭2小时。再次洗涤板，每孔加入100μL/孔梯度稀释(以66.7nM为起始浓度，在含2.5％脱脂牛奶的PBST中5倍梯度稀释)的本公开的抗TSLP抗体、Tezepelumab或hIgG，于37℃孵育40分钟。再次洗涤板4次，并加入100μL/孔的过氧化物酶标记的亲和纯化F(ab')2片段化山羊抗鼠IgG(Fcγ片段特异性)(在PBST缓冲液中以1:5000稀释，Jackson Immunoresearch，产品目录115-036-071)，于37℃孵育40分钟。最后一次洗涤后，加入100μL/孔的TMB(Innoreagents)进行孵育。15分钟后，室温下加入50μL/孔的1MH2SO4以终止反应，并在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光度。以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到EC50值。一些抗体的结果如图2A-2B所示。
数据显示，本公开的大多数抗体能特异性结合人和猴TSLP。如图1A和1B所示，1C5F12E9、D1D8H9F7和D1C2H1H1的Emax(最大结合)和EC50与参照品相近，其中D1D8H9F7具有较低的EC50，表明其能够更有效地与人TSLP结合。由图2A-2B可知，在猴TSLP结合试验中，1C5F12E9显示出比参照品更高的Emax。
实施例4抗TSLP抗体的功能测定
4.1配体阻断ELISA
使用竞争ELISA法测定抗TSLP抗体阻断TSLP与TSLPR/IL7R结合的能力。简而言之，将TSLPR-Fc蛋白(SEQ ID NO：30，内部制备)溶于PBS，终浓度为1μg/mL；将IL7Ra-Fc蛋白(SEQ ID NO：31，内部制备)溶于PBS，终浓度为1μg/mL。将上述两种溶液(各取100μL)包被于96孔板中，于4℃孵育过夜。第二天，用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween-20，PBST)洗涤板，并加入含5％w/v脱脂牛奶的PBST，在37℃中封闭2小时。然后，用洗涤缓冲液再次洗涤板。
用生物素标记的人TSLP-Fc(SEQ ID NO：32，内部制备，溶于含有2.5％脱脂牛奶的PBST，终浓度为0.29nM)梯度稀释(以66.7nM为起始浓度，3倍梯度稀释)抗TSLP抗体或对照品，于室温孵育40分钟。然后将100μL/孔的抗体/TSLP-Fc混合物添加到包被有TSLPR/IL7R的板中。于37℃孵育40分钟后，用洗涤缓冲液洗涤板4次。然后加入HRP标记链霉亲和素，于37℃孵育40分钟，以检测与TSLPR/IL7R结合的生物素标记的人TSLP-Fc。再次用洗涤缓冲液洗涤板。最后，加入TMB，并用1MH2SO4终止反应。在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光度，然后以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到IC50值。一些抗体的结果如图3A-3B所示。
4.2参照品阻断ELISA
使用竞争ELISA法测定抗TSLP抗体阻断参照品(Tezepelumab)与人TSLP结合的能力。简而言之，溶于PBS的Tezepelumab(2μg/mL)以100μL/孔包被于96孔板中，于4℃孵育过夜。第二天，用洗涤缓冲液(PBS+0.05％ Tween-20，PBST)洗涤板，并加入含5％w/v脱脂牛奶的PBST，于37℃封闭2小时。
同时，用生物素标记的人TSLP-Fc(SEQ ID NO：32，溶于含有2.5％脱脂牛奶的PBST，终浓度为0.047nM)梯度稀释(以40nM为起始浓度，4倍梯度稀释)抗TSLP抗体或对照品，于室温孵育40分钟。然后，将100μL/孔的抗体/TSLP-Fc-生物素混合物加到包被有参照品的板中。于37℃孵育40分钟后，用洗涤缓冲液洗涤板4次。然后加入HRP标记链霉亲和素，于37℃孵育40分钟，以检测与参照品结合的生物素标记的人TSLP-Fc。最后用洗涤缓冲液洗涤板，加入TMB，并用1M H2SO4终止反应。在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光度，然后以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到IC50值。一些抗体的结果如图4A-4B所示。
4.3基于细胞的配体阻断FACS
使用细胞表面表达人TSLPR(uniprot No.Q9HC73.1的第1-371位氨基酸残基，SEQID NO：33)和人IL7R(uniprot No.P16871.1的第1-459位氨基酸残基，SEQ ID NO：34)的细胞系BAF3-3E6，利用流式细胞术(FACS)评估抗TSLP抗体阻断TSLP-Fc蛋白与细胞表面TSLPR/IL7R结合的活性。按照lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher)的说明，用重组质粒pCMV-T-P(在EcoRI和Xbal位点间插入TSLPR编码序列)和重组质粒pCMV3-SP(在HindIII和Xbal之间插入IL7R编码序列)转染BAF3细胞(iCell Bioscience Inc.，产品目录MIMCL-021)，制备BAF3-3E6细胞系。
简而言之，用人TSLP-Fc溶液(SEQ ID NO：32，内部制备，溶于FACS缓冲液中，终浓度为0.38nM)梯度稀释(以30nM为起始浓度，2倍梯度稀释)本公开的抗TSLP抗体、参照品或阴性对照hIgG(用于静脉注射的人免疫球蛋白(pH 4)(Hualan Biological EngineeringInc.)，于室温孵育40分钟。从细胞培养瓶中收获BAF3-3E6细胞，洗涤两次，然后重悬于含有2％v/v胎牛血清的磷酸盐缓冲液(PBS)中(FACS缓冲液)。在含有1×105个细胞/孔的96孔板中加入100μL/孔的抗体/TSLP-Fc-生物素混合物，于4℃孵育40分钟。用FACS缓冲液洗涤细胞两次，然后加入100μL/孔的R-藻红蛋白标记的链霉亲和素(在FACS缓冲液中以1:1000稀释，Jackson Immunoresearch，产品目录016-110-084)，于4℃避光孵育40分钟。洗涤细胞两次，并重悬于FACS缓冲液中。使用Becton Dickinson FACS Canto II-HTS测定荧光值。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到IC50值。一些抗体的结果如图5A-5B所示。
4.4基于细胞的功能测定
BAF3细胞的增殖和存活通常依赖于IL-3。但是，当这些细胞经过工程化改造表达人TSLPR和人IL7R，并且在细胞培养基中添加了TSLP时，它们可以在没有IL-3的情况下存活。
基于细胞功能测定的方法，进一步检测抗TSLP抗体对表达TSLPR(SEQ ID NO：33)/IL7R(SEQ ID NO：34)的BAF3-3E6细胞增殖的抑制活性。简而言之，将100μL含有8×l03个对数生长期的BAF3-3E6细胞的RPMI1640培养基(Gibco，产品目录A10491-01)接种到96孔板上，其中RPMI1640培养基含10％ FBS(Gibco，产品目录A10099-141)。然后，将50μL人TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：28，内部制备，溶于RPMI-1640中，终浓度为6.4ng/mL pM)与50μL抗TSLP抗体或对照品(以40μg/mL为起始浓度于培养基中5倍梯度稀释)混合，并将混合物在室温中孵育30分钟。然后，将100μL的抗体/TSLP-his混合物添加到含BAF3-3E6细胞的96孔板中，于37℃、含CO2的培养箱中培养72小时。此后，将含细胞的96孔板与Cell Titer-发光细胞活力测定试剂盒(Promega，产品目录G7572，50μl/孔)于37℃孵育10分钟。使用Tecan200Pro测定化学发光值。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到IC50值。一些抗体的结果如图6A-6B所示。
数据显示，所有抗TSLP抗体均能够阻断人TSLP与人TSLPR/IL7R的结合，且阻断活性与参照品相当或略优于参照品。如图3A-3B所示，在竞争ELISA中，D1C2H1H1和1C5F12E9的IC50值低于参照品，表明它们能够更有效地抑制了TSLP与TSLPR/IL7R的结合。如图5A-5B所示，在基于细胞的配体阻断测定中，抗体D1D8H9F7对TSLP与TSLPR/IL7R的结合显示出部分阻断活性，而抗体D1C2H1H1和1C5F12E9与参照品相比，以相近的IC50值完全抑制了TSLP与TSLPR/IL7R的结合。
图4A-4B显示抗TSLP抗体D1D8H9F7不能阻断参照品与人TSLP的结合，表明D1D8H9F7可能与参照品结合的表位不同。其他能够阻断参照品与TSLP结合的抗TSLP抗体，可能与参照品(Tezepelumab)结合的表位相同或相似。
此外，如如图6A-6B中三种代表性抗体的阻断曲线所示，所有抗TSLP抗体均能够在低抗体浓度下阻断TSLP与TSLPR/IL7R相互作用，从而导致TSLP通路的阻断和BAF3-3E6细胞的死亡，而参照品在高浓度下才能阻断TSLP与TSLPR/IL7R相互作用。
实施例5示例性嵌合抗体的产生和表征
对上述所有被检测的抗体的重链可变区和轻链可变区进行测序。令人惊讶地发现在同一细胞融合文库中筛选到的除D1D8H9F7和D1C2H1H1以外的抗体具有相同的重链可变区和轻链可变区序列。接着，发明人重新对相同的细胞融合文库进行筛选，发现筛出的具有良好特性的抗体具有相同的重/轻链可变区。不希望受限于理论，发明人相信具有这种重/轻链可变区的mAbs是主要的。选择抗体1C5F12E9为例进行进一步表征。
将抗TSLP小鼠单克隆抗体1C5F12E9的重链可变区和轻链可变区分别克隆至含人IgG1重链恒定区(SEQ ID NO：12)的片段和含人κ轻链恒定区(SEQ ID NO：14)的片段中，其中可变区的C-末端与相应恒定区的N-末端相连。包含编码连接至人IgG1重链恒定区的重链可变区的核苷酸的载体，和包含编码连接至人κ轻链恒定区的轻链可变区的核苷酸的载体，按1.1：1轻链构建体：重链构建体的比例，用1mg/mL PEI瞬时转染至50mL 293F悬浮细胞中。在摇瓶中培养六天后收获细胞上清液，通过离心沉淀上清液中的细胞，然后从细胞上清液中纯化嵌合抗体。按照上述实施例中所述的方法和下述方法，利用捕获ELISA、Octet亲和力测定、基于细胞的配体阻断FACS测定和基于细胞的功能测定验证纯化得到的嵌合抗体。
通过Octet评估纯化的嵌合抗体1C5F12E9对人TSLP的结合亲和力。简而言之，将APS生物传感器(ForteBio)用PBS预浸泡1小时，然后将其浸入到PBS中180秒。接着，将传感器浸入到含5μg/mL人TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：28，内部制备)的运行缓冲液中760秒，再浸入到PBS中600秒。之后，将传感器浸入到HBS-EP+缓冲液(由Biacore提供)中600秒。最后，将传感器浸入到梯度稀释(以16.67nM为起始浓度，在HBS-EP+缓冲液中2倍梯度稀释)的小鼠抗TSLP抗体或嵌合抗TSLP抗体1C5F12E9中。追踪抗原-抗体结合动力学2分钟，并追踪解离动力学3分钟。使用ForteBio Data Analysis 8.1 evaluation软件，将结合曲线和解离曲线拟合至1:1Langmuir结合模型。测定Ka、Kd和KD值，并总结在下表3中。嵌合抗体1C5F12E9的结合亲和力与小鼠抗体和参照品抗体的结合亲和力相似。
其他三种测定的结果如图7-9所示。与小鼠抗体1C5F12E9比，嵌合抗体1C5F12E9显示出相似的TSLP结合能力、对TSLP与TSLPR/IL7R相互作用的阻断活性和对BAF3-3E6细胞存活的抑制作用，且优于参照品。
表3.嵌合抗体的结合亲和力
实施例6抗TSLP小鼠单克隆抗体的人源化
对小鼠抗TSLP抗体1C5F12E9进行人源化。小鼠抗体的人源化是使用已建立的CDR移植方法进行的，如下所述。
为了选择用于小鼠抗体1C5F12E9人源化的接收体骨架，将抗体轻链可变区和重链可变区的序列与人免疫球蛋白基因数据库进行BLAST比对。选择与小鼠抗体具有最高同源性的人种系抗体作为用于人源化的接收体骨架。将小鼠抗体重/轻链可变区CDRs插入到选出的骨架中，并进一步突变骨架中的残基以获得更多候选的重/轻链可变区。总共获得18个示例性人源化1C5F12E9抗体，即hu1C5F12E9-V1至hu1C5F12E9-V18，其重/轻链可变区序列如表1中所示。
将包含编码人源化1C5F12E9重链可变区和人IgG4重链(SEQ ID NO：13)的载体和包含编码人源化1C5F12E9轻链可变区和人κ轻链恒定区(SEQ ID NO：14)的载体，按60％:40％的轻链构建体：重链构建体的比例，用1mg/ml的PEI瞬时转染到50ml 293F悬浮细胞中。在摇瓶中培养六天后收集含有人源化抗体的细胞上清液，通过离心沉淀上清液中的细胞，然后从细胞上清液中纯化出上述18种抗体。
实施例7示例性人源化抗TSLP单克隆抗体的表征
按照实施例2中所述的方法，通过Biacore T200系统(GE Healthcare，Pittsburgh，PA，USA)评估了纯化的示例性人源化1C5F12E9抗体与人TSLP的结合亲和力和结合动力学。
表4.人源化1C5F12E9单克隆抗体的结合亲和力
测定Ka、Kd和KD值并总结在上表4中。
Biacore测量的Kd值的下限是1.00E-05，并且可以从相应的传感图中粗略计算出低于1.00E-05的Kd值。结果表明，所有人源化1C5F12E9抗体与人TSLP的结合亲和力均高于Tezepelumab。
实施例8人源化抗TSLP抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14的表征
选择人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14进行进一步表征。具体而言，按照实施例2-4中的方法，通过Biacore、捕获ELISA、间接ELISA、竞争ELISA、基于细胞的配体阻断FACS和功能测定，测定它们对人和食蟹猴TSLP的结合亲和力/能力以及其他功能，结果如下表5、以及图10-14和15A-15B所示。
数据表明，hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14显示出与亲本小鼠和嵌合抗体相当的体外活性。
如表5、图10和图11所示，与参照品相比，人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14与人TSLP的结合亲和力/活性更高，与食蟹猴TSLP的结合亲和力/能力相当。
图12和14显示人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14能够阻断人TSLP与人TSLPR/IL7R的结合。
图15A-15B显示人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14能够阻断TSLP与TSLPR/IL7R的相互作用，从而在低抗体浓度下导致TSLP通路的阻断和BAF3-3E6细胞的死亡，而参照品则需要在高抗体水平下才能发挥这样的效力。
表5.单克隆抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14的结合亲和力
之后，按照实施例2-4中所述的方法和下述方法，通过Biacore、捕获ELISA、竞争ELISA、基于细胞的配体阻断FACS、基于细胞的功能测定、基于细胞的报告基因测定和蛋白热位移测定法，将具有人IgG1重链恒定区(SEQ ID NO：12)和人κ恒定区(SEQ ID NO：14)的人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14，与具有人IgG4重链恒定区(SEQ ID NO：13)和人κ恒定区(SEQ ID NO：14)的hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14，对人和食蟹猴TSLP的结合亲和力/能力以及其他功能进行比较。结果如图16-19、20A-20B、21A-21B和22所示。
为了测定四种抗TSLP人源化抗体的热稳定性，使用GloMeltTM热位移蛋白稳定性试剂盒(Biotium，产品目录33022-T)，通过蛋白热位移测定法测定Tm(熔解温度)。简而言之，GloMeltTM染料解冻至室温。将含有染料的小瓶涡旋并离心。然后，将5μL 200×染料添加到95μL PBS中制备10×染料。反应体系中加入2μL 10×染料和10μg人源化抗体，并加入PBS至总反应体积为20μL。将含有染料和抗体的离心管短暂离心，并置于实时PCR热循环仪(Roche，LightCycler 480II)中，该热循环仪中Melt Curve程序的参数如表6所示。
表6.Melt Curve程序的参数
| 步骤 | 温度 | 升温速率 | 持续时间 |
| Initial hold | 25℃ | NA | 30s |
| Melt curve | 25-99℃ | 0.1℃/s | NA |
在基于细胞的报告基因测定中，使用细胞表面表达人TSLPR(SEQ ID NO：33)和人IL7R(SEQ ID NO：34)的报告基因细胞系HEK293T-TSLPR/IL7R/STAT5-Luc。按照lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher)的说明，用重组质粒pCMV-T-P(在EcoRI和Xbal位点间插入TSLPR编码序列)、重组质粒pCMV3-SP(在HindIII和Xbal之间插入IL7R编码序列)和pGL4.52[luc2P/STAT5RE/Hygro](Promega)，转染HEK293T细胞(CRL-11268)，在内部制备HEK293T-TSLPR/IL7R/STAT5-Luc细胞。
简而言之，从细胞培养瓶中收获HEK293T-TSLPR/IL7R/STAT5-Luc细胞。然后，将100μL含5×l04个细胞的DMEM培养基(Gibco，产品目录10566-016)接种到96孔细胞培养板上(Corning，产品目录30218026)，其中DMEM培养基含10％ FBS(Gibco，产品目录10099-141)。同时，将50μL人TSLP-his(SEQ ID NO：28，溶于含10％ FBS的DMEM培养基中，终浓度为160ng/mL)分别与50μL梯度稀释(以200μg/mL为起始浓度，于含10％ FBS的DMEM培养基中5倍梯度稀释)的抗TSLP抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)、hu1C5F12E9-V14(IgG4)和Tezepelumab混合，于室温孵育30分钟。然后，将100μl/孔的抗TSLP抗体/TSLP-his的混合物加入到96孔细胞培养板中，于37℃、含CO2的培养箱中培养16-18小时。每孔弃去100μL上清液，然后加入50μL/孔的荧光素酶检测试剂(Promega，产品目录E6120)。10分钟后，采用Tecan Infinite 200Pro读板仪对板进行分析。使用Graphpad prism软件分析发光信号的数据并得到IC50值。
如图16、17、19、20A-20B和21A-21B所示，与Tezepelumab相比，hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)在体外具有相当的或更好的体外活性。特别地，如图20A-20B和21A-21B所示，人源化抗体能够以比参照品浓度低得多的抗体浓度阻断TSLP与TSLPR/IL7R相互作用，从而导致TSLP通路的阻断和BAF3-3E6细胞的死亡。
如图22所示，hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)的熔解温度(T1，T2)分别为(69.5℃，80℃)、(66.5℃，76℃)、(69.5℃，80℃)和(66.5℃，76℃)。
尽管本公开已结合一个或多个实施方案进行了描述，应当理解的是，本公开不仅涵盖这些实施方案，还意在涵盖包括在所附权利要求的精神和范围内的所有可替代、修饰和等同物。本文引用的所有文献均通过引用的方式全部并入本文。
本申请的序列信息总结于下表。
已经详细描述了本公开的多个优选的实施方案，应当理解的是，以上段落定义的本公开并不局限于以上描述中阐述的特定细节，因为本公开的许多明显变化是可能的，且不脱离本公开的精神或范围。
Claims (10)
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体或其抗原结合部分结合胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区可包含VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区，所述轻链可变区包含VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区，其中，VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ ID NOs：1、2、3、4、5和6所示的氨基酸序列；(2)分别如SEQ IDNOs：37、38、39、40、41和42所示的氨基酸序列；或(3)分别如SEQ ID NOs：47、48、49、50、51和52所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NOs：7、8、9、43或53所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；其中
SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝V、X3＝R，X1＝R、X2＝V、X3＝V，X1＝R、X2＝A、X3＝R，X1＝K、X2＝A、X3＝R，或X1＝K、X2＝A、X3＝V；任选地，
所述轻链可变区包含与SEQ ID NOs：10、11、44或54所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；其中SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝V，X1＝A、X2＝I，或X1＝S、X2＝I。
3.根据权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区和所述轻链可变区包含：
(1)分别与SEQ ID NOs：7和10所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
(2)分别与SEQ ID NOs：8和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝V；
(3)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝V、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝V；
(4)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝V、X3＝V，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝V；
(5)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝A、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝V；
(6)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝K、X2＝A、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝V；
(7)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝K、X2＝A、X3＝V，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝V；
(8)分别与SEQ ID NOs：8和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：11的X1＝A、X2＝I；
(9)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝V、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝A、X2＝I；
(10)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝V、X3＝V，SEQ ID NO：11的X1＝A、X2＝I；
(11)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝A、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝A、X2＝I；
(12)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝K、X2＝A、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝A、X2＝I；
(13)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝K、X2＝A、X3＝V，SEQ ID NO：11的X1＝A、X2＝I；
(14)分别与SEQ ID NOs：8和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝I；
(15)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝V、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝I；
(16)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝V、X3＝V，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝I；
(17)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝R、X2＝A、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝I；
(18)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝K、X2＝A、X3＝R，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝I；
(19)分别与SEQ ID NOs：9和11所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：9的X1＝K、X2＝A、X3＝V，SEQ ID NO：11的X1＝S、X2＝I；
(20)分别与SEQ ID NOs：43和44所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；或
(21)分别与SEQ ID NOs：53和54所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分是小鼠、嵌合或人源化抗体；
任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合部分是IgG1、IgG2或IgG4同种型；
任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合部分选自单克隆抗体、scFv、Fab片段或F(ab’)2片段。
5.根据权利要求1-4任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含连接至所述重链可变区的重链恒定区，和连接至所述轻链可变区的轻链恒定区，所述重链恒定区具有SEQ ID NOs：12、13或57所示氨基酸序列，所述轻链恒定区具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列。
6.根据权利要求1-5任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分(i)与人TSLP结合；(ii)与猴TSLP结合；和/或(iii)阻断人TSLP与人TSLPR/IL7R的相互作用。
7.一种多核苷酸，其编码权利要求1-6任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分。
8.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-6任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，以及药学上可接受的载体；
任选地，所述药物组合物进一步包含其他抗哮喘药物、抗溃疡性结肠炎药物、抗特应性皮炎药物或抗牛皮癣药物，或者，
所述药物组合物进一步包含抗TSLPR抗体、抗IL-4抗体、抗IL4R抗体、抗IL-5抗体、抗IL5R抗体、抗IL13抗体、抗IL13R抗体和/或抗IgE抗体。
9.权利要求1-6任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分在制备用于治疗与TSLP相关的疾病的药物中的用途；优选地，所述疾病是哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎或牛皮癣；更优选地，所述疾病是哮喘。
10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合部分与一种或多种其他抗体或其他药物一起施用；
任选地，所述其他药物选自抗哮喘药物、抗溃疡性结肠炎药物、抗特应性皮炎药物或抗牛皮癣药物；
任选地，所述其他抗体选自抗TSLPR抗体、抗IL-4抗体、抗IL4R抗体、抗IL-5抗体、抗IL5R抗体、抗IL13抗体、抗IL13R抗体或抗IgE抗体。
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Family Cites Families (21)
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| ES2601882T5 (es) | 1999-04-09 | 2021-06-07 | Kyowa Kirin Co Ltd | Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional |
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| JOP20190243A1 (ar) * | 2017-04-12 | 2019-10-13 | Medimmune Llc | علاج الربو بجسم مضاد لـ tslp |
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