CN1173988C

CN1173988C - 杀虫剂大环内酯

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Publication number: CN1173988C
Application number: CNB008136092A
Authority: CN
Inventors: P��˹¬˹; P·卢尔; D·R·哈恩; L·L·卡尔; P·R·格劳普纳; J·R·吉尔伯特; ��ֶ�; T·V·沃尔登; �� Ҧ; R·C·姚; ��˹��ŵ��; D·W·诺顿
Original assignee: Dow AgroSciences LLC; Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co; Corteva Agriscience LLC
Priority date: 1999-09-13
Filing date: 2000-09-13
Publication date: 2004-11-03
Anticipated expiration: 2020-09-13
Also published as: EP1212337B1; AU7376400A; MXPA02002571A; NZ517760A; JP2003509436A; JP4666861B2; US20030186899A1; WO2001019840A1; CN1377364A; DE60015161D1; UA71997C2; DE60015161T2; IL148601A; EP1212337A1; CA2384572C; KR100731248B1; US6455504B1; BRPI0013963B1; ZA200201820B; AU783734B2

Abstract

通过培养糖多孢菌属菌种LW107129(NRRL 30141)生产的大环内酯化合物具有杀虫和杀螨活性并且是制备spinosyn类似物的适用的中间体。

Description

杀虫剂大环内酯

本发明涉及一类新的天然杀虫产品，还涉及生产这类化合物的一个新的糖多孢菌属(Saccharopolyspora)菌种。

发酵产品A83543是一类被称为spinosyns的化合物，它们是由刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)的某些菌株生产的。以前公开的天然产生的spinosyns具有一个与12元大环内酯稠合的5，6，5-三环的环体系，一个中性糖(鼠李糖)和一个氨基糖(forosamine)(参见Kirst等(1991))。已知的spinosyns已被称为“因子”或“成分”，并且每一种都被给定一个鉴别的字母名称，即，spinosyn A、B等。这些化合物适用于控制蜘蛛类动物、线虫和昆虫，特别是鳞翅目(Lepidoptera)和双翅目(Diptera)的种，而且它们都绝不污染环境，具有吸引人的毒理分布(toxicological profile)。

美国专利No.5,362,634和相应的欧洲专利申请No.375316 A1公开了spinosyns A、B、C、D、E、F、G、H和J。WO 93/09126公开了spinosyns L、M、N、Q、R、S和T。WO 94/20518和US 5,6704,486公开了spinosyns K、O、P、U、V、W和Y，及其衍生物。

已对spinosyn化合物进行了大量的合成改性，如WO 97/00265中所公开的，但是，还不能对spinosyns的C-21位进行改性。已知化合物的C-21被甲基或乙基取代。如果能发现这种方法，即，引入活性官能团置换所述甲基或乙基而不在分子的其它部分引起不需要的改变，那么，就能开辟合成很多另外的spinosyn化合物的途径。这是工作于spinosyn合成领域中的人们长期探索而以前没有实现的目标。

本发明概述

本发明提供了被称为LW107129(NRRL 30141)的新型糖多孢菌属菌种的分离株。

本发明还提供了可通过在合适的培养基中培养LW107129而得以生产并且具有下列通式1或2的化合物：

其中：

R1是式2a、2b或2c的基

R2是H或OH；

R3是H或CH₃；

式1中的R4是1-丁烯基，1，3-丁二烯基，正丁基，3-羟基-1-丁烯基

或1-丙烯基；而且，式2中的R4是乙基；

而R5是H或具有下式4a～4i之一的基

优选地，在深层需氧发酵条件下培养该LW107129菌株。

在表I中标记了通过培养糖多孢菌属菌株LW107129而制备和分离的式1或2的具体化合物。

表I

化合物号式 R1 R2 R3 R4 R5

1 1 2a H H 1-丁烯基 4a

2 1 2a H H 1-丁烯基 4b

3 1 2a H H 1-丁烯基 4c

4 1 2a H H 1-丁烯基 4d

5 1 2b H H 1-丁烯基 4a

6 1 2c H H 1-丁烯基 4a

7 1 2a H Me 1-丁烯基 4a

8 1 2a OH H 1-丁烯基 4a

9 1 2a H H 3-羟基-1-丁烯基 4a

10 1 2a H H 3-羟基-1-丁烯基 4c

11 1 2a H H 1，3-丁二烯基 4a

12 1 2a H H 1-丁烯基 4e

13 1 2a H H 1-丁烯基 4f

14 1 2a OH H 1-丁烯基 4e

15 1 2a OH H 1-丁烯基 4g

16 1 2a H H 1-丙烯基 4a

17 1 2a H H 1-丁烯基 H

18 1 2a H Me 1-丁烯基 H

19 1 2a OH H 1-丁烯基 H

20 1 2a H H 3-羟基-1-丁烯基 H

21 1 2a OH H 3-羟基-1-丁烯基 H

22 1 2a H H 1，3-丁二烯基 H

23 1 2a H H 正丁基 H

24 1 2a H H 1-丁烯基 4h

25 1 2a H H 1-丁烯基 4i

26 1 2a OH H 1，3-丁二烯基 4a

27 1 2a OH Me 1-丁烯基 4a

28 1 2a OH H 1-丙烯基 4a

29 1 2b H H 1-丁烯基 H

30 1 2c H H 1-丁烯基 H

31 2 2a H H 乙基 4a

表I中列出的所有化合物在结构上都与以前已知的spinosyns不同，这是因为，就基R4来说，以前已知的spinosyn化合物在大环内酯的C-21上没有1-丁烯基、3-羟基-1-丁烯基、1，3-丁二烯基、1-丙烯基或正丁基。此外，表I中列出的几种化合物与以前已知的所有spinosyns不同，这是因为，就基R5来说，这些化合物在大环内酯的C-17上具有与氧连接的新基团。在已知的spinosyns中，R2总是H，所以，在该位置的改变是新的。另外，化合物31具有以前报导的得自刺糖多孢菌的化合物中未知的新14-碳大环内酯环体系。

本发明的化合物能反应而形成盐。生理上可接受的盐也适用于本发明的制剂和方法中。所述盐是应用关于盐的制备的标准方法制备的。例如，可用合适的酸中和本发明的化合物而生成酸加合盐。酸加合盐是特别适用的。代表性的合适的酸加合盐包括通过与下列有机酸或无机酸反应而生成的盐，例如，硫酸、盐酸、磷酸、乙酸、琥珀酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、富马酸、胆酸、双羟萘酸、粘酸、谷氨酸、樟脑酸、戊二酸、乙醇酸、苯二甲酸、酒石酸、甲酸、月桂酸、硬脂酸、水杨酸、甲磺酸、苯磺酸、山梨酸、苦味酸、苯甲酸、肉桂酸等。

本发明的另一方面是生产式1和2的化合物的方法，它包括，在合适的培养基中培养糖多孢菌属菌株LW107129(NRRL 30141)。用极性有机溶剂从发酵液和从菌丝体中提取式1和2的化合物。可通过本领域熟知的方法(例如，柱色谱法)进一步纯化所述化合物。

式1和2的化合物(其中，R5是具有4a～4i之一的基)适用于控制螨、蜱和昆虫。所以，应用这些化合物的杀虫剂和杀螨剂组合物以及减少昆虫、螨和蜱的种群的方法也是本发明的一部分。式1和2的化合物(其中，R5是氢)(C-17假苷元)适用作制备杀虫化合物和杀螨化合物的中间体。例如，可在这些化合物的C-17羟基上糖基化。可通过化学合成法或者通过微生物生物转化(应用例如在US 5,539,089中描述的方法)进行糖基化。

对本发明的详细描述

培养描述

生产本发明的化合物的新菌株已被给予名称LW107129。从由数个地方收集的土壤组成的土壤样品中分离了培养物LW107129。已按布达佩斯条约的条款将所述培养物保藏在the Midwest Area RegionalResearch Center，Agricultural Research Service，United StatesDepartment of Agricultrue，815 North University Street，Peoria，IL 61604。所述菌株是在1999年6月9日保藏的，被给予保藏号NRRL 30141。

培养物特征

糖多孢菌属菌株LW107129在下列培养基上产生气生菌丝体和亮白色孢子：Bennett′s、ISP2和ISP5。菌落颜色呈奶油色至浅棕褐色，而底物菌丝体则可呈浅棕色(尤其在ISP4 & ISP5上)。菌株LW107129在ISP3和ISP4上不形成孢子。在试验的任何培养基上都不产生色素。菌株LW107129的菌丝体在液体培养基中经历菌丝断裂。

形态特征

菌株LW107129在至多50个孢子的链中产生卵形孢子。孢子处于孢子鞘内，孢子表面长有象毛一样的不常见的刺。

生理特征

糖多孢菌属菌株LW107129能从下列底物产生酸：D-阿拉伯糖、m-赤藓醇、D-果糖、D-葡萄糖、甘油、D-甘露糖醇、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-核糖和海藻糖。菌株LW107129不能从下列物质产生酸，即，核糖醇、L-阿拉伯糖、糊精、半乳糖醇、乙醇、D-半乳糖、糖原、肌醇、乳糖、麦芽糖、松三糖、蜜二糖、蜜三糖、水杨苷、D-山梨糖醇、L-山梨糖、蔗糖、木糖醇和D-木糖。菌株LW107129能同化几种有机酸，包括柠檬酸和琥珀酸，但不能同化乙酸盐、苯甲酸盐、丁酸、甲酸、草酸或酒石酸。菌株LW107129能水解酪氨酸和脲，但不能水解腺嘌呤、酪蛋白、七叶苷、马尿酸、次黄嘌呤、淀粉或黄嘌呤。LW107129抗下列抗生素：羧苄青霉素、头孢金素、环己酰亚胺、遗传霉素、林可霉素、萘啶酮酸(naladixic acid)、新生霉素、土霉素、多粘菌素(polymixin)B、利福平和壮观霉素，并且对下列物质敏感：杆菌肽、氯霉素、红霉素、潮霉素、链霉素、硫链丝菌肽、三甲氧苄二氨嘧啶和万古霉素。

代谢物生产方法

式1和2的代谢物是如下述那样通过在发酵培养基中培养菌株LW107129而生产的。将LW107129的培养物接种入营养培养基，在30℃和250rpm的振荡下生长48小时。取六十毫升该成熟的第一阶段营养培养物用于在2升培养瓶中接种1升营养培养基的二次营养培养物。在30℃和195rpm的振荡下将所述培养物保温。将成熟的第二阶段种菌用于在搅拌釜式发酵容器中接种70升培养基(如实施例1中所述)。

可通过测试发酵液的提取物而在发酵期间跟踪式1和2的化合物的生产。一种跟踪所述生产的优选方法是通过高效液相色谱法(HPLC)分析发酵液提取物。在实施例2中描述了一个合适的分析体系。

实施例1

通过发酵制备代谢物

如下述那样通过在发酵培养基中培养菌株LW107129而生产式1和2的代谢物。将1mL冷冻的LW107129营养培养基融化，接种入500mL锥形瓶内的100mL营养培养基，在30℃和250rpm的振荡下生长48小时。

营养培养基

组分量(g)

葡萄糖 9.0

胰胨豆胨培养液 30.0

酵母抽提物 3.0

MgSO₄·7H₂O 2.0

去离子水 1000.0

取六十毫升该成熟的第一阶段营养培养物用于在2升培养瓶中接种1升营养培养基的二次营养培养物。在30℃和195rpm的振荡下将所述培养物保温48小时。将成熟的第二阶段种菌用于在搅拌釜式发酵容器中接种70升发酵培养基。

发酵培养基(每升水)

组分量(g)

大豆粉 5.0

葡萄糖 10.0

甘油 10.0

可溶淀粉 5.0

马铃薯糊精 20.0

废糖蜜 10.0

玉米浆干粉(Corn Steep Powder) 5.0

碳酸钙 3.0

肌醇六磷酸 1.0

硫酸镁 0.5

FeCl₃·4H₂O 0.1

氯化锌 0.1

MnCl₂·4H₂O 0.1

在30℃、400rpm下保持发酵7～12天。

可用合适的溶剂提取成熟的发酵液并通过盐的生成和/或色谱分离而回收代谢物。

实施例2

HPLC分析方法

下列HPLC法适用于监测生产式1和2的化合物的发酵：

添加与发酵液等分样相等的一定体积的变性乙醇。振荡混合物，使它静置最少一小时。离心样品而除去块状细胞碎片，然后，微量离心1mL等分样。接着，通过下列HPLC系统分析澄清的提取物。HPLC系统：

柱固定相：250-×4.6-mm柱，碱去活化的硅胶5-μmC8

(Hypersil-C8-BDS)。

流动相：10mM-乙酸铵-甲醇-乙腈线性梯度，归纳如下：

时间(分钟) 溶剂A百分数溶剂B百分数

0 100 0

20 0 100

25 0 100

30 100 0

35 100 0

其中，溶剂A是10mM乙酸铵，而溶剂B则是甲醇-乙腈(1∶1)

流速：1mL/min

检测：UV，在250nm处

主要因素的保留时间归纳如下：

化合物保留时间

(min)

7 24.6

1 24.2

3 23.7

12 22.9

15 22.8

18 22.6

8 22.5

17 22.2

13 21.6

14 21.4

19 20.2

20 19.3

21(两种C24-差向异构体) 16.2

实施例3

从培养液分离杀虫活性的代谢物

如下实施例示出了如何从培养的LW107129的典型批次分离最高丰度式1化合物。该实施例给出了用于分离化合物1、3、7、8、12、13、14、15、17、18、19、20和21的具体方法。应用与用于更大批次发酵液提取物很相似的方法来分离通过生物以比上文列出的化合物更低丰度生产的化合物2、4、5、6、9、10、11、16、22和23～31。由于所述方法如此相似并且是本领域技术人员熟悉的，所以，本文就不详细描述它们。

发酵完毕，来自5升接种培养基的发酵的总培养物(即，细胞加培养液)的总体积约为3.5升。用等体积变性乙醇通过急剧振荡、接着在室温下静置2小时而提取该样品。通过离心除去细胞碎片，用二氯甲烷(DCM：2×7升)分配7升50％水性乙醇提取物。将DCM提取物浓缩而给出淡黄色油(3.3g)。将该油溶于甲醇，分成两等份，将每一份在硅胶柱(4×15cm；32～63μm，Biotage，Inc.，U.S.A.)上进行色谱处理。用下列线性溶剂梯度以20mL/min洗脱每个柱，然后，用溶剂G的最后等分部分(100mL)清洗：

溶剂类别和百分数

时间 A B C D E F G

(mins)

0 100 0 0 0 0 0 0

10 0 100 0 0 0 0 0

15 0 50 50 0 0 0 0

20 0 50 50 0 0 0 0

20.01 0 0 0 100 0 0 0

30 0 0 0 0 100 0 0

40 0 0 0 0 0 100 0

50 0 0 0 0 0 0 100

其中，溶剂组成(vol％)如下：

A B C D E F G

己烷 100％ 99.5％

甲苯 100％ 50％ 99.5％

乙酸乙酯 50％ 99.5％ 70％

甲醇 20％

水 9.5％

二乙胺 0.5％ 0.5％ 0.5％ 0.5％

通过洗脱收集级分(30sec；每个10mL)。通过HPLC按实施例2中描述的方法分析这些级分，然后，从每个硅胶柱分布(columnprofile)汇集含相似极性的组分的级分如下：

级分编号标识符

92～97 SI-1

104～112 SI-2

114～120 SI-3

121～140 SI-4

清洗 SI-5

在如下述那样进一步分级以前，将这些汇集的级分真空干燥，再溶于甲醇。

将级分SI-1的等分样加到C-8反相硅胶(Hypersil-BDS-C8)柱(250×10mm，8μm粒径)上。用乙酸铵(10mM)-甲醇-乙腈(30∶35∶35)将施加的样品进行色谱处理，以3mL/min洗脱，收集0.75mL级分。汇集含化合物17的级分，浓缩至干而给出14.9mg纯化合物17。汇集含化合物18的级分，浓缩至干而给出1.4mg纯化合物18。汇集含化合物12的级分，浓缩至干而给出4.2mg纯化合物12。

将级分SI-2的等分样加到C-8反相硅胶(Hypersil-BDS-C8)柱(250×10mm，8μm粒径)上。用下文给定的乙酸铵(10mM)-甲醇-乙腈线性梯度将施加的样品进行色谱处理，以3mL/min洗脱，收集0.75mL级分。

时间(分钟) 溶剂A百分数溶剂B百分数

0 60 40

5 60 40

25 0 100

30 0 100

32 60 40

40 60 40

A＝10mM乙酸铵

B＝甲醇-乙腈(1∶1)

汇集含化合物20的级分，浓缩至干而给出11.5mg纯化合物20。汇集含化合物19的级分，浓缩至干而给出3.9mg纯化合物19。汇集含化合物14的级分，浓缩至干而给出2.0mg纯化合物14。汇集含化合物13的级分，浓缩至干而给出4.9mg纯化合物13。汇集含化合物15的级分，浓缩至干而给出2.3mg纯化合物15。汇集含化合物21的24-差向异构体的级分，浓缩至干而给出15mg两种化合物的混合物。将该混合物溶于甲醇，加到C-8反相硅胶(Hypersil-BDS-C8)柱(250×10mm，8μm粒径)上。用乙酸铵(10mM)-甲醇-乙腈(85∶7.5∶7.5)将施加的样品进行色谱处理，以3mL/min洗脱，收集3mL级分。汇集含化合物21#1的级分，浓缩至干而给出9.8mg纯化合物21#1。汇集含化合物21#2的级分，浓缩至干而给出4.7mg纯化合物21#2。

将汇集的级分SI-3溶于甲醇，在硅胶柱(4×7mm，32～63μm；Biotage，Inc.，U.S.A.)上进行色谱处理。用下列梯度条件以20mL/min洗脱：

时间(min) 溶剂A百分数溶剂B百分数

0 100 0

5 100 0

15 60 40

25 0 100

40 0 100

A＝己烷-二乙胺(99.5∶0.5)

B＝己烷-异丙醇-二乙胺(75∶25∶2)

收集级分(80×0.5min；10mL)，汇集46～50，浓缩至干。将干燥的样品溶于甲醇，加到C-8反相硅胶(Hypersil-BDS-C8)柱(250×10mm，8μm粒径)上。用乙酸铵(10mM)-甲醇-乙腈(20∶40∶40)将施加的样品进行色谱处理，以3mL/min洗脱，收集0.75mL级分。汇集含化合物1的级分，浓缩至干而给出24.3mg纯化合物1。汇集含化合物7的级分，浓缩至干而给出1.5mg纯化合物7。

将汇集的级分SI-4溶于甲醇，加到C-8反相硅胶(Hypersil-BDS-C8)柱(250×10mm，8μm粒径)上。用下列线性梯度洗脱体系以5mL/min的流速对施加的样品进行色谱处理，收集88×1.25mL级分：

时间(min) 溶剂A百分数溶剂B百分数

0 100 0

20 0 100

25 0 100

30 100 0

35 100 0

A＝10mM乙酸铵

B＝甲醇-乙腈(1∶1)

汇集含粗化合物1的级分，浓缩至干，对含粗化合物8的级分进行同样的处理。将上述汇集的干级分分别溶于甲醇，在C-8反相硅胶(Hypersil-BDS-C8)柱(250×10mm，8μm粒径)上重复进行色谱处理。用乙酸铵(10mM)-甲醇-乙腈(20∶40∶40)洗脱样品，以3mL/min洗脱，收集0.75mL级分。汇集含化合物8的级分，浓缩至干而给出5.8mg纯化合物8。汇集含化合物1的级分，浓缩至干又给出7.3mg纯化合物1。

将干燥的柱清洗级分SI-5溶于甲醇，加到C-8反相硅胶(Hypersil-BDS-C8)柱(250×10mm，8μm粒径)上。用乙酸铵(10mM)-甲醇-乙腈(20∶40∶40)将施加的样品进行色谱处理，以3mL/min洗脱，收集0.75mL级分。汇集含化合物7的级分，浓缩至干而给出3.5mg纯化合物7。

光谱特征

通过光谱方法[包括核磁共振波谱(NMR)、质谱(MS)、紫外光谱(UV)]并且通过与spinosyn A和D及相关类似物比较而测定了所述新型组分的化学结构。下文描述了上述组分的光谱特性。在此讨论中，给出了化合物1的光谱特性的详细分析。接着，讨论了其它相关组分的光谱特征，能使本领域技术人员通过与化合物1的信息比较而总结出化学结构。为了方便读者，如下化合物1的图提供了关于下列给出的天然因子的全部NMR光谱数据的位置编号：

化合物1具有如下特征：

分子量：757

分子式：C₄₃H₆₇NO₁₀

UV(通过LC分析期间的二极管阵列检测，溶剂＝甲醇-乙腈(1∶1))：244nm

电雾化MS：[M+H]⁺的m/z＝758.5；forosamine糖碎片离子在m/z142.1处。

准确的ESI-MS：[M+H]⁺的m/z＝758.4845+/-0.0007(理论值：758.4843)。

表II归纳了化合物1在CDCl₃中的¹H和¹³C NMR光谱数据。

表II

化合物1的化学位移数据(CDCl₃)

位置	1H	13C	位置	1H	13C
位置	1H	13C	位置	1H	13C	1	-	172.1	22	5.30	128.0
2	3.14	34.5	23	5.66	134.9	1	-	172.1	22	5.30	128.0
2	3.14	34.5	23	5.66	134.9		2.39		24	1.99	25.0
3	3.02	47.6	25	0.95	13.1		2.39		24	1.99	25.0
3	3.02	47.6	25	0.95	13.1	4	3.42	41.3	26	1.20	16.3
5	5.79	128.7				4	3.42	41.3	26	1.20	16.3
5	5.79	128.7				6	5.87	129.3	1′	4.86	95.4
7	2.16	41.1	2′	3.50	77.7	6	5.87	129.3	1′	4.86	95.4
7	2.16	41.1	2′	3.50	77.7	8	1.92	36.2	2′-OMe	3.48	59.0
	1.35		3′	3.46	81.0	8	1.92	36.2	2′-OMe	3.48	59.0
	1.35		3′	3.46	81.0	9	4.30	76.0	3′-OMe	3.48	57.6
10	2.26	37.3	4′	3.11	82.2	9	4.30	76.0	3′-OMe	3.48	57.6
10	2.26	37.3	4′	3.11	82.2		1.34		4′-OMe	3.56	60.9
11	0.90	46.0	5′	3.55	67.9		1.34		4′-OMe	3.56	60.9
11	0.90	46.0	5′	3.55	67.9	12	2.86	49.4	6′	1.28	7.8
13	6.77	147.5				12	2.86	49.4	6′	1.28	7.8
13	6.77	147.5				14	-	144.1	1″	4.42	103.6
15	-	202.8	2″	1.98	30.9	14	-	144.1	1″	4.42	103.6
15	-	202.8	2″	1.98	30.9	16	3.31	47.4		1.46
17	3.66	80.8	3″	1.86	18.3	16	3.31	47.4		1.46
17	3.66	80.8	3″	1.86	18.3	18	1.60	34.2		1.50
19	1.80	21.4	4″	2.22	64.8	18	1.60	34.2		1.50
19	1.80	21.4	4″	2.22	64.8		1.23		4″-NMe₂	2.23	40.7
20	1.60	31.6	5″	3.50	73.7		1.23		4″-NMe₂	2.23	40.7
20	1.60	31.6	5″	3.50	73.7	21	5.04	76.3	6″	1.26	18.9

化学位移参考0ppm处的TMS

其它代谢物的分辨NMR波谱特征如下：

例如，具有化合物7的基本大环内酯结构这样的结构的NMR谱在5.8和5.7ppm处没有质子信号，而在5.5ppm处存在新的烯共振。此外，在1.7ppm处的甲基共振指示了烯甲基的存在。例如，具有化合物8的基本大环内酯结构这样的结构的NMR谱的一些特征在于，在4.15ppm处以双峰形式出现H-8，在4.1ppm处(dd)出现H-9。在H-8和H-9之间没有可检测的偶合常数。H-11的信号向低场移动至1.5ppm。这些21-丁烯基结构中任一个的C-24处的羟基化都是由H-24和H-25处的低场位移指示的，它们分别以多重峰和三重峰出现。同时，H-23改变到双双峰。例如，具有化合物11的基本大环内酯结构这样的结构的NMR谱另外在5.1、5.25和5.6ppm处存在烯共振，偶合形式与端烯基一致。此外，在0.9～1.0ppm处不存在末端脂族甲基的信号。例如，具有化合物16的基本大环内酯结构的化合物的NMR谱存在H-24的低场位移，并且三重峰结构消失而变成1.4ppm附近的双峰。在这些情况下，H-23变成两个四重峰，2D COSY谱的分析指示该双峰偶合成其它烯的质子，表明丙烯基的存在。例如，具有化合物23的基本大环内酯结构的化合物的NMR谱不存在丁烯基烯属质子，并且通过2D COSY和TOCSY试验的检测将它们与以前已知的spinosyns区别开。由H-25引起的偶合途径的分析指示了，4-碳丁基与C-21连接。应用各种2维NMR实验鉴定了连接到C-17处氧上的苷亚结构。

延伸的环大环内酯31的甲基三重峰H-25和H-24与spinosyn A中的乙基相似。此外，H-21相对于它在化合物1中的位置向高场移动至4.8ppm。然而，仍然存在烯属质子。2D COSY谱表明，乙基和烯键二者都与H-21偶合，说明该化合物中的双键在环内。这与该化合物是化合物1的异构体相符(基于从质谱得知它的分子量为758)。

用ESI-MS(分子量是由此推导的)观测的全部代谢物的分子加合离子如下表III所示：

表III

化合物编号关键质谱

数据¹(m/z)

1 758.5[M+H]⁺

2 774.5[M+H]⁺

3 744.5[M+H]⁺

4 774.4[M+H]⁺

5 744.8[M+H]⁺

6 744.8[M+H]⁺

7 772.5[M+H]⁺

8 774.5[M+H]⁺

9 774.7[M+H]⁺

10 760.5[M+H]⁺

11 756.5[M+H]⁺

12 748.5[M+NH₄]⁺

13 810.5[M+NH₄]⁺

14 764.5[M+NH₄]⁺

15 808.5[M+NH₄]⁺

16 744.5[M+H]⁺

17 617.4[M+H]⁺

18 631.4[M+H]⁺

19 633.4[M+H]⁺

20 650.4[M+NH₄]⁺

21² 666.4[M+NH₄]⁺

22 615.4[M+H]⁺

23 636.5[M+NH₄]⁺

24 744.4[M+H]⁺

25 758.4[M+H]⁺

26 772.4[M+H]⁺

27 788.7[M+H]⁺

28 760.4[M+H]⁺

29 620.3[M+NH₄]⁺

30 620.3[M+NH₄]⁺

31 758.4[M+H]⁺

¹利用具有电雾化电离作用的LC/MS观察到的分子加合离子。

²两种异构体，二者具有相同的MS特征

杀虫活性和杀螨活性

本发明的化合物(其中R5是H的那些化合物除外)适用于控制昆虫、螨和蜱。所以，本发明进一步的方面涉及抑制昆虫、螨或蜱的方法，它包括，在昆虫、螨或蜱的场所施用昆虫-、螨-或蜱-抑制量的式1或2的化合物(其中，R5是具有式4a～4i之一的基)。

昆虫、螨或蜱的“场所”表示这样的环境：其中，昆虫、螨或蜱生存或者存在它们的卵，包括它周围的空气，它吃的食物，或者它接触的物体。例如，摄食植物的昆虫或螨可通过将所述活性化合物施用到昆虫或螨摄食的或寄居的植物部分(特别是簇叶)来控制。

术语“抑制昆虫、螨或蜱”表示活昆虫、螨或蜱数量的减少，或者卵数量的减少。通过化合物实现的减少的程度当然依赖于化合物的施用率，使用的特定化合物，以及靶昆虫、螨或蜱的物种。应当使用至少灭活昆虫、灭活螨或灭活蜱的量。“灭活量”表示用于引起处理的昆虫、螨或蜱种群可检测的减少的化合物量。通常，使用约1～约1,000ppm(或0.01～1千克/英亩)化合物。

所述化合物显示抗一些昆虫、螨和蜱的活性。更具体地说，所述化合物显示抗下列鳞翅目昆虫成员的活性，例如，甜菜夜蛾(beetarmyworm)、烟夜蛾/烟夜蛾(tobacco budworm)、苹果皮小卷蛾(codling moth)和粉纹夜蛾(cabbage looper)。该目其它典型的成员包括：亚热带粘虫(southern armyworm)、地老虎(cutworms)、谷蛾科(clothes moths)、印度谷斑螟(Indian meal moth)、卷叶蛾(leafrollers)、玉米穗蛾(corn earworm)、棉铃夜蛾(cotton bollworm)、欧洲玉米螟(European corn borer)、菜粉蝶(imported cabbageworm)、红铃麦蛾(pink bollworm)、袋蛾(bagworms)、苹天幕毛虫(Eastern tent caterpillar)、sod webworm和美国白蛾(fallarmyworm)。

所述化合物还显示抗鞘翅目(Coleoptera)成员[甲虫(beetles)和象鼻虫(weevils)，例如，马铃虫甲虫(Colorado potato beetle)，黄瓜十一星叶甲(spotted cucumber beetles)和黄瓜三条叶甲(striped cucumber beetles)，日本弧丽金龟(Japanese beetle)，以及棉象虫(boll weevil)]以及双翅目[蚊蝇(true flies)，例如，家蝇(house fly)，蚊科(mosquitoes)，果蝇(fruit flies)，厩螯蝇(stable flies)和角蝇(horn flies)，以及潜蝇科(leaf miners)]的活性。

所述化合物还显示抗下列成员的活性：Hempitera[蝽(truebugs)，例如，盲蝽科(plant bugs)、兜蝽科(stink bugs)和长蝽科(chinch bugs)]，同翅目(Homoptera)[例如，蚜科(aphids)、叶蝉(leafhoppers)、飞虱(planthoppers)、粉虱(whiteflies)、介壳虫(scales)和蚧科(mealybugs)]，食毛目(Mallophaga)[食毛目(chewing lice)]，虱目(Anoplura)[血虱科(sucking lice)]，缨翅目(Thysanoptera)[蓟马属(thrips)]，直翅目(Orthoptera)[例如，蟑螂(cockroaches)、蝗虫(grasshoppers)和蟋蟀(crickets)]，蚤目(Siphonaptera)[跳蚤(fleas)]，等翅目(Isoptera)[白蚁(termites)]，以及膜翅目(Hymenoptera)蚁科(Formicidae)[蚂蚁(ants)]的成员。

所述化合物还显示抗螨和壁虱目(Acari)蜱的活性，例如，椴两点叶螨(two-spotted spider mite)。该目其它的典型成员包括：植物寄生虫，例如，柑橘全爪螨(eitrus red mite)、苹果全爪螨(Europeanred mite)和桔短须螨(citrus flat mite)，以及动物寄生虫，例如，猫痂螨(mange mite)、马瘙螨(scab mite)、绵羊瘙螨(sheep scabmite)、鸡皮刺螨(chicken mite)、禽疙螨(sca1yleg mite)、鸡疙螨(dep1uming mite)和犬蠕形螨(dog follic1e mite)。

可通过本发明的化合物控制的具体代表性antrhopod害虫包括如下：美洲花蜱(Amblyomma americanum)[美洲花蜱(Lone-star tick)]，有斑花蜱(Amblyomma maculatum)[海湾花蜱(Gulf Coast tick)]，波斯锐缘蜱(Argas persicus)[波斯锐缘蜱(fowl tick)]，微小牛蜱(Boophilus microplus)[具环方头蜱(cattle tick)]，皮螨属的种(Chorioptes spp.)(猫痂螨)，牛蠕形螨(Demodex bovis)[牛蠕形螨(catt1e follic1e mite)]，犬蠕形螨(Demodex canis)[犬蠕形螨(dogfollicle mite)]，安氏革蜱(Dermacentor andersoni)(RockyMountain spotted fever tick)，变异革蜱(Dermacentorvariabilis)[美洲犬蜱(American dog tick)]，鸡皮刺螨(Dermanyssus gallinae)(鸡皮刺螨)，蓖子硬蜱(Ixodesricinus)(common sheep tick)，Knemidokoptes gallinae(鸡疙螨)，禽疙螨(Knemidokoptes mutans)(禽疙螨)，Otobius megnini[耳蜱(ear tick)]，马瘙螨(Psoroptes equi)[痒螨(scab mite)]，绵羊瘙螨(Psoroptes ovis)(痒螨)，血红扇头蜱(Rhipicephalussanguineus)[褐色犬蜱(brown dog tick)]，人疥螨(Sarcoptesscabici)(猫痂螨)，伊蚊属(Aedes)[蚊科(mosquitoes)]，按蚊属(Anopheles)(蚊科)，库蚊属(Culex)(蚊科)，脉毛蚊属(Culiseta)，牛羽虱(Bovicola bovis)[牛羽虱(cattle biting louse)]，螺旋蝇(Callitroga homnivorax)[丽蝇科(blowfly)]，斑虻属的种(Chrysops spp.)[鹿蝇(deer fly)]，温带臭虫(Cimexlectularius)[床虱(bed bug)]，锥蝇属的种(Cochliomyia spp.)[次生锥蝇(screwworm)]，犬栉首蚤(Ctenocephalides canis)[犬蚤(dogflea)]，猫栉首蚤指名亚种(Ctenocephalides felis)[猫蚤(catflea)]，库蠓属的种(Culicoides spp.)[摇蚊科(midges)、毛蠓科(sandflies)、蠓类(punkies)或蠓属蠓科(no-see-ums)]，绵羊畜虱(Damalinia ovis)[绵羊嚼虱(sheep biting louse)]，肤蝇属的种(Dermatobia spp.)[皮蝇科(warble f1y)]，赤尾胃蝇(Gasterophilushaemorrhoidalis)[赤尾胃蝇(nose bot fly)]，肠胃蝇(Gasterophilus intestinalis)[大马胃蝇(common horse bot fly)]，鼻胃蝇(Gasterophilus nasalis)[鼻胃蝇(chin f1y)]，舌蝇属的种(Glossina spp.)[采采蝇(tsetse f1y)]，西方角蝇(Haematobiairritans)[角蝇(horn fly)、水牛蝇(buffalo fly)]，驴血虱(Haematopinus asini)[驴血虱(horse sucking louse)]，牛血虱(Haematopinus eurysternus)[牛盲虱(short nosed cattle louse)]，绵羊血虱(Haematopinus ovillus)[体虱(body louse)]，猪血虱(Haematopinus suis)[猪血虱(hog louse)]，Hydrotaeairritans(head fly)，牛皮蝇(Hypoderma bovis)[皮蝇科(bomb fly)]，纹皮蝇(Hypoderma lineatum)[皮蝇属(heel fly)]，绵羊颚虱(Linognathus ovillus)(体虱)，足颚虱(Linognathus pedalis)[足颚虱(foot louse)]，牛颚虱(Linognathus vituli)[犊长颚虱(longnosed cattle louse)]，绿蝇属的种(Lucilia spp.)[嗜肉蝇(maggotfly)]，羊蜱蝇(Melophagus ovinus)[羊蜱蝇(sheep ked)]，家蝇属的种(Musca spp.)[家蝇(house fly)、秋家蝇(face fly)]，羊狂蝇(Oestrus ovis)[赤尾胃蝇(nose bot fly)]，虱属的种(Pediculusspp.)[虱目(lice)]，白蛉属的种(Phlebotomus spp.)[白蛉亚科(sandfly)]，伏蝇(Phormia regina)(丽蝇科)，鳞蚊属的种(Psorophora spp.)(蚊科)，Pthirus spp.(虱目)，猎蝽属的种(Reduvius spp.)[猎蝽科(assassin bug)]，蚋属的种(Simuliumspp.)[蚋科(black fly)]，牛管虱(Solenopotes capillatus)[牛管虱(little blue cattle louse)]，厩螯蝇(Stomoxys ca1citrans)[厩螯蝇(stable fly)]，虻属的种(Tabanus spp.)[虻(horse fly)]，粉甲属的种(Tenebrio spp.)[黄粉甲(mealworms)]，椎猎蝽属的种(Triatoma spp.)[猎蝽(kissing bugs)]。

所述化合物适用于减少昆虫、螨和蜱的种群，所以被用于抑制昆虫、螨或蜱种群的方法中，该方法包括，对昆虫、螨或蜱的场所施用昆虫-、螨-或蜱-灭活有效量的本发明活性化合物。在一个优选的实施方案中，本发明涉及抑制鳞翅目的易感性昆虫的方法，该方法包括，对植物施用有效的昆虫-灭活量的本发明活性化合物。本发明另一个优选的实施方案涉及一种抑制动物中的双翅目刺螯蝇(biting flies)的方法，该方法包括，对动物经口、肠胃外或局部施用有效的害虫-抑制量的化合物。本发明另一个优选的实施方案涉及一种抑制螨目(Acarina)的螨或蜱的方法，它包括，对螨或蜱的场所施用螨-或蜱-灭活量的本发明活性化合物。

不但本文公开的化合物适用于生产农业产品，这些化合物的酸加合盐(如果可能的话)也是适用的产品。这些盐适用于例如分离和纯化式1和2化合物。此外，这些盐的某些可具有增大的水溶性。酸加合盐可从式1中公开的化合物(其中，R5是碱性含氮的糖分子，例如forosamine)制备。所述化合物的盐是应用本领域技术人员熟知的制备盐的标准方法制备的。特别适用的酸加合盐包括但不限于通过与下列有机酸或无机酸的标准反应生成的盐，例如，硫酸、盐酸、磷酸、乙酸、琥珀酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、富马酸、胆酸、双羟萘酸、粘酸、谷氨酸、樟脑酸、戊二酸、乙醇酸、苯二甲酸、酒石酸、甲酸、月桂酸、硬脂酸、水杨酸、甲磺酸、苯磺酸、山梨酸、苦味酸、苯甲酸、肉桂酸等酸。

实施例4

昆虫筛选

A.烟夜蛾[烟芽夜蛾(Heliothis virescens)]新生幼虫浸液(Neonate Drench)分析

为了比较式1化合物对新生幼虫(＜羽化后6hr)烟芽夜蛾的杀虫活性，首先制备了每种代谢物的1μg/μL丙酮溶液。再用含0.025％Triton X-100表面活性剂的Millipore H₂O稀释所述丙酮溶液而得25或50ppm的处理液。然后，直接吸取一毫升任一浓度的每种代谢物溶液至100mm直径#1 Whatman定性滤纸环上(其上已静静地放置了20条烟夜蛾新生幼虫)。接着，将每一片处理的滤纸及其相关的幼虫放入20mm×100mm一次性塑料培养板中。一小时后，将1cm³琼脂基鳞翅目食物(改良的Shorey食物，Southland Products，Lake Village，AR)放入每块板中作为幼虫食物源。将培养板在27℃下保温24hr，然后测定每次处理的幼虫死亡百分数，在下文的表IV中给出了结果。

B.甜菜夜蛾(Spodoptera littora1is)局部分析

另外测定了式1化合物的相对杀虫活性，即，每个实验室培养的甜菜夜蛾幼虫(平均wt为43mg)应用1μg/μL每种化合物的甲醇溶液1μL产生的杀虫活性。沿着六个幼虫中每一个的后缘施用每种化合物。然后，在六孔塑料培养板中在21℃和60％RH下将处理的幼虫保持5天。在接触后5天期间，对每个幼虫提供1cm³琼脂基鳞翅目食物。在5天期末测定死亡百分数。在表IV中给出了结果。

表IV

烟夜蛾甜菜夜蛾

新生幼虫浸液局部的

(24hr) (120hr)

比率死亡率比率死亡率

化合物 (ppm) (％) (ug/幼虫) (％)

1 50 100 1 100

2 50 100 1 100

3 - NT 1 100

4 50 100 1 100

5 - NT - NT

6 - NT - NT

7 50 100 1 100

8 - NT 1 100

9 50 100 1 33

10 50 100 1 0

11 50 100 1 100

12 50 100 1 50

13 25 45 1 0

14 25 100 - NT

15 25 100 1 67

16 50 100 1 100

17 25 10 1 0

18 25 0 1 0

19 25 93 1 0

20 25 20 1 0

21#1 25 4 1 0

21#2 25 7 1 0

23 - NT - NT

24 50 100 1 50

25 50 100 1 17

26 50 100 1 100

27 50 100 1 100

28 50 100 1 17

29 - NT - NT

30 - NT - NT

31 50 100 1 100

杀虫组合物

所述化合物是以组合物形式施用的，它们也是本发明的一部分。这些组合物包含昆虫-、螨-或蜱-灭活量的本发明化合物与植物学上可接受的载体。活性组分可作为单一的化合物、两种或多种化合物的混合物或者一种或多种本发明的化合物与生产它的发酵培养基的干燥部分的混合物提供。

组合物是按农业或害虫控制领域中的常规方法和配方制备的，但它们是新型而重要的，因为存在一种或多种本发明的化合物。所述组合物可以是浓缩的制剂(将它们分散于水中)或者可呈无需进一步处理即可使用的粉剂、铒或粒状制剂的形式。

施用的所述分散液(其中，使用了所述化合物或粗的干原料)通过是从所述化合物或粗原料的浓缩制剂制备的水性悬浮液或乳液。水溶性或水悬浮的或可乳化的制剂是固体物、可润湿的粉末，或者是液体(称为可乳化的浓缩物或水性悬浮液)。可将可润湿的粉末团聚或压制而形成水分散性颗粒。这些颗粒包含化合物或粗的干原料、惰性载体和表面活性剂的混合物。化合物或粗的干原料的浓度一般是约0.1wt％～约90wt％。所述惰性载体通常是硅镁土、蒙脱土和硅藻土或纯化的硅酸盐。

表面活性剂通常占可润湿的粉末的约0.5％～约10％，其中，所述表面活性剂一般是磺化木素、稠合的萘磺酸盐、萘磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸盐，或者是非离子表面活性剂(例如，烷基酚的环氧乙烷加成物)或其混合物。

所要求保护的化合物的可乳化浓缩物通常在约50～约500克化合物/升液体的范围内，等于约10％～约50％，溶于惰性载体(它是水混溶性溶剂和乳化剂的混合物)中。有机溶剂包括：有机物(例如，二甲苯)，以及石油馏分，例如石油的高沸点萘部分和烯烃部分(它包括重石脑油和芳族石脑油)。还可应用其它有机物，例如，萜烯类溶剂-松脂衍生物，脂族酮(例如，环己酮)以及复合醇。用于可乳化的浓缩物的乳化剂通常是混合的离子型和/或非离子型表面活性剂(例如，本文提及的那些)或它们的等效物。

可制备含本发明的水不溶性化合物的水性悬浮液，其中，化合物通常以约5wt％～约50wt％范围内的浓度分散于水性载体中。所述悬浮液是这样制备的：将所述化合物细细地研磨，剧烈混入水载体、表面活性剂和本文所述分散剂中。还可应用惰性组分(例如无机盐和合成的或天然的树胶)来按所需增大水性载体的密度和/或粘度。

沉淀的流动性物质可通过将活性分子溶于水混溶性溶剂和表面活性剂或表面活性聚合物制备。当将这些制剂与水混合时，活性化合物沉淀，表面活性剂控制生成的微晶沉淀的尺寸。晶体的尺寸可通过具体聚合物和表面活性剂混合物的选择来控制。

所述化合物还可作为粒状组合物施用(将它用到土壤中)。粒状组合物通常含约0.5wt％～约10wt％的化合物。将化合物分散于惰性载体(它通常是粘土或等效物质)中。一般说来，粒状组合物是这样制备的：将化合物溶于合适的溶剂中，再将它施用到粒状载体(它已预先形成所需的粒径)上。所述粒径一般在约0.5mm～3mm之间。所述粒状组合物还可这样制备：形成载体和化合物的捏合体或糊，将合并的混合物干燥，再将所述捏合体或糊磨碎成所需的粒径。

还可将所述化合物与合适的有机溶剂结合。该有机溶剂通常是广泛用于农业中的温和石油润滑油。这些混合物一般用作喷雾剂。更具体地说，将所述化合物作为液体载体(其中，该液体载体是水)中的分散液应用。所述化合物还可呈气溶胶组合物的形式应用。将化合物溶于惰性载体(它是加压产生的推进剂混合物)。将气溶胶组合物包装于容器中，其中，混合物通过雾化阀分散。推进剂混合物含低沸点卤代烃，可将它与有机溶剂或(用惰性气体或气态烃加压的)水性悬浮液混合。

用在昆虫、螨和蜱的场所的化合物的量不是关键的，可容易由本领域技术人员确定。通常，浓度为约10ppm～约5,000ppm的化合物提供所需的控制作用。就作物(例如，大豆和棉)来说，施用率是约0.01～约1kg/ha(此时，以5～50gal/A喷雾剂施用化合物)。所述化合物可用于昆虫、螨或蜱寄居的任何场所。这样的场所一般是棉、大豆和蔬菜作物，水果和坚果果树，葡萄藤，室内植物和观赏植物。

本发明的化合物还适用于处理动物以控制节肢动物(即，昆虫和蜘蛛类动物，它们是动物身体上的害虫)。这些节肢动物通常攻击它们的宿主外(“外边”)表面；控制这些害虫的作用剂被称为“杀体外寄生物剂”。所有动物都受这样的害虫的攻击，不过，脊椎动物宿主中的问题最严重。人类是很多寄生物的潜在宿主，而在热带地区和卫生状况最差的地区，寄生虫感染是医疗中的普遍问题。还有，很多家畜动物很易受寄生物攻击，例如，牛，绵羊，猪，山羊，水牛(buffalo)，水牛(water buffalo)，鹿，兔，鸡，火鸡，鸭，鹅，鸵鸟等。马和其它宠物(pleasure animals)受寄生物攻击，水貂和其它动物的毛皮，以及大鼠、小鼠和实验与研究环境中所用的其它动物也受寄生物攻击。宠物(例如，猫和狗)很易受寄生物攻击，而且由于它们与人类的密切关系，这样的寄生物感染成为与它们相关的人的问题。鱼、甲壳纲和其它水生物种也受寄生物攻击。简言之，寄生物感染涉及作为宿主的基本上所有动物。

外寄生物感染引起的经济代价很大。就家畜来说，受感染的动物进食效率降低，生长速度减慢。影响牛奶和羊毛生产，还损坏羊毛、皮革和毛皮。动物变得易受继发性微生物感染和进一步受寄生物攻击。即使外寄生物不严重有害健康和生产，但它们也引起很大的不适。

虽然正在使用一些杀寄生物剂，但它们存在各种问题，包括有限的作用范围、环境毒性、需要重复处理，以及在很多情况下存在外寄生物抗性。所以，仍需要新的杀体外寄生物剂。

本发明的化合物为控制外寄生物的设备提供了新的工具。在该实施方案中，本发明涉及一种抑制或杀伤宿主动物上的节肢动物害虫的方法，它包括，用有效量本发明的化合物接触害虫。

本发明的化合物在与害虫接触时就实现了杀外寄生物活性。可以接触卵、幼虫、成虫或其它生命阶段。“接触”包括害虫对所述化合物的摄食。

实施例5

体内小鼠/成熟的厩螯蝇(ASF)检测

在研究第0天，用试验物质或溶剂(90％油酸乙酯/10％DMSO)经口或局部投药每次处理六个三十克的白色实验小鼠(Mus musculus)(8～10周龄，ICR雌性，Harlan-Sprague-Dawley，Inc.，Indianapolis，IN.)。在研究的第1天，通过0.25mL肌内注射1.0mL氯胺酮(FortDodge，Ketaset^，盐酸氯胺酮注射液，100mg/mL)和1.0mL赛拉嗪(Bayer，Rompun^，20mg/mL注射液)于4.5mL无菌水中的混合物而麻醉每次处理的两只小鼠.将麻醉的小鼠置于装有30只成熟的厩螯蝇的蝇盒中。将麻醉的小鼠放在盒内达60分钟，使蝇不受干扰地获取血液食物。从蝇盒中取出后，立即用CO₂使未清醒的小鼠无痛苦死亡。在整个研究过程中，使蝇盒暴露于12-小时白天/12-小时黑夜循环。检测室中的温度是68～72°F，湿度是50～60％。在研究的第2和3天，对余下的处理小鼠准确地重复这些操作。每天记录死亡的蝇数，弃去蝇盒。在每次处理时都测定总的蝇死亡率百分数并与继续进食的ASF死亡率和靠摄食溶剂处理的对比小鼠的ASF死亡率比较。试验化合物1和8的结果如下：

处理	％死亡率
处理	％死亡率					第1天	第2天	第3天	总的
溶剂100mg/kg	6	10	10	10		第1天	第2天	第3天	总的
溶剂100mg/kg	6	10	10	10	化合物1	16	53	86	86
化合物8	13	46	76	76	化合物1	16	53	86	86

实施例6

体外蜱幼虫包试验(Larval Packet Test，LPT)检测

将滴定量的试验化合物溶于橄榄油和三氯乙烯的混合物中，吸移到方形实验滤纸上。过了约一小时使三氯乙烯蒸发后，对半折叠滤纸，用夹子夹紧两边，形成包。将大约100个幼蜱(美洲花蜱)置于每个包内，用夹子夹紧其余开口侧。在约72°F和95％湿度下将这些包保温24小时。分别打开每个包，测定存活的和死亡的幼虫数。对每种化合物测定死亡率百分数。试验化合物1和8的结果如下：

化合物	0.5％/5000ppm	0.1％/1000ppm	0.05％/500ppm
化合物	0.5％/5000ppm	0.1％/1000ppm	0.05％/500ppm	1	100％	100％	93.58％
8	100％	69.87％	12.47％	1	100％	100％	93.58％

实施例7

体外厩螯蝇成虫检测

用含滴定量的试验化合物(开始时以100ppm)的血清浸饱牙用纱布条。将牙用纱布条与10只厩螯蝇(stomoxys calcitrans)成虫(为便于操作而预先冷却了)一起置于培养皿中。在约25℃和75～85％湿度下保温24和48小时后，测定死亡率百分数，与盛有只用对比血清浸饱的纱布条的培养皿比较。试验化合物1和8的结果如下：

化合物	天	％死亡率
		％死亡率				5.0ppm	1.0ppm	0.5ppm	0.1ppm
		1	24hr	60	10	5.0ppm	1.0ppm	0.5ppm	0.1ppm	20	10
48hr	70		24hr	60	10	30	20	10		20	10
48hr	70		8	24hr	90	30	20	10	30	10	0
48hr	100	80		24hr	90	10	0		30	10	0

实施例8

体外丽蝇科幼虫检测

将滤纸插入物(filter inserts)个别地放入96孔微滴板中。用结合了滴定量的试验化合物(开始时以100ppm)的牛血清浸饱每条滤纸插入物。每孔放置约30个丽蝇科幼虫(伏蝇)，密封整块板。在约25℃和75～85％湿度下将板保温达48小时，此后，通过目视检查每孔幼虫的移动而测定效率。试验化合物1和8的结果如下(两种化合物都在5ppm以上显示活性)：

化合物	5ppm	2.5ppm	1.25ppm	0.62ppm	0.31ppm	0.15ppm
化合物	5ppm	2.5ppm	1.25ppm	0.62ppm	0.31ppm	0.15ppm	1	A	A	A	N	N	N
8	A	N	N	N	N	N	1	A	A	A	N	N	N

A表示不存在幼虫移动时指示的死亡率。N表示观察到幼虫移动。

送递杀外寄生物剂的方法是本领域技术人员熟知的。通常，将本发明的化合物施用到动物的外表面，于是，它在化合物的有效期内接触已存在于宿主上的害虫和到达宿主身体的那些害虫。通常，将化合物配成液体制剂，再将该液体制剂喷到动物体表面或倾到动物体表面。另一种常规处理是“浸渍”，于是，通过基本上浸入杀外寄生物剂的稀溶液来处理牛。对某些宿主和害虫来说，制剂可以是粉剂，将它撒到宿主上，或者是洗发剂或乳膏(在动物洗浴时使用)。猫和狗的颈圈也被用作直接送递杀外寄生物剂至动物体表的途径。

在另一个实施方案中，可应用耳饰物将本发明的化合物送递到动物(这是US 4,265,876中公开的一种送递方法)。

在另一种方法中，将杀外寄生物剂施用到动物常去的场所，于是，化合物与害虫的接触甚至犹如对宿主直接施用。对宠物垫物的施用是人们熟知的，对地毯的施用也一样。对牛来说，粉尘袋是熟知的。将这些袋子置于门口，牛必然摩擦袋子，就使害虫与本发明化合物接触。

在又一个实施方案中，可用本发明化合物来控制牛和其它动物粪便中的节肢动物。在该实施方案中，经口施用化合物，这样，化合物就经过消化道而出现在粪便中。对粪便中害虫的控制间接地保护动物以防害虫。

按本领域技术人员已知的方式配制化合物供用作杀外寄生物剂。通常，制剂将包含本发明化合物与一种或多种生理上可接受的佐剂。制剂包括浓缩形式，其中，本发明活性剂存在的浓度是0.001～98.0％，其余含量是生理上可接受的载体。这样的制剂(特别是本发明化合物少于50％的那些)有时可被直接施用，但还可用其它生理上可接受的载体稀释这些制剂而形成更稀的处理制剂。后者的制剂中可能包含0.001～0.1％的更小浓度的活性剂。

本发明化合物还适用作人药物以控制寄生物(例如，虱)。所述化合物可被用于，例如，WO 00/01347中公开的控制虱的制剂中。

虱目或血虱科是见于几乎所有哺乳动物的寄生物。在15个认识的虱目科中，有两个科[虱科(Pediculidae)和Pthiridae]具有见于人体的种。体虱(Pediculus humanus)是感染人体的虱科中唯一的种。它包括：头虱(head louse)[头虱(Pediculus humanus capitis)]；以及体虱(body louse)或衣虱(clothing louse)(Pedicu1us humanushumanus)，有时称为体虱(Pediculus corporis)。阴虱(crablouse)[阴虱(Pthirus pubis)]是一个不同的种，它是感染人体的Pthiridae科中唯一的种。本文应用的术语“人虱”包括体虱(Pediculus humanus)或阴虱。

所以，在其一方面，本发明提供了用于控制人体中的虱感染的灭虱的/杀卵的(抗虱)制剂，它包含活性组分spinosyn，或其生理上可接受的衍生物或盐，以及生理上可接受的载体。特别适用的本发明的制剂是头发护理制剂。特别适用的头发护理制剂是洗发剂。本发明还提供了应用这些制剂来控制人虱种的方法。这些制剂和方法以比以前已知的抗虱制剂和方法更安全、更有效的方式控制虱。

可按一些方法配制本发明的抗虱制剂。特别适用的制剂是洗发剂、调理剂和WO 00/01347中公开的那些类别的洗剂。

当用于洗发剂制剂、头发调理剂制剂或洗剂中时，spinosyn组分存在的含量是约0.1％～约30％，优选约1％～约10％。

至于抗虱活性，本发明的具体实施方案包括下列那些：

A.控制人体中的虱感染的制剂，它包含：作为活性组分的式1或2的化合物(其中，R5是具有式4a～4i之一的基)、或其生理上可接受的衍生物或盐，以及生理上可接受的载体。

B.实施方案A的制剂，它是头发护理制剂。

C.一种灭虱洗发剂，它包含：

(a)约0.1％～约30％式1或2的化合物(其中，R5是具有式4a～4i之一的基)，或其生理上可接受的衍生物或盐；

(b)约5％～约30％合成表面活性剂；

(c)约1％～约7％酰胺；以及

(d)水。

D.实施方案C的洗发剂，其中，所述合成表面活性剂是阴离子型、两性的、阳离子型、两性离子型的或非离子型表面活性剂，或其混合物。

E.实施方案D的洗发剂，其中，所述酰胺是椰油单乙醇酰胺、椰油二乙醇酰胺或其混合物。

F.实施方案D的洗发剂，它另外还包含约1％～约10％非挥发性聚硅氧烷物质。

G.实施方案F的洗发剂，其中，所述非挥发性聚硅氧烷是聚烷基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷、聚醚硅氧烷共聚物或其混合物，它的粘度是25℃下约100厘泊～约150,000,000厘泊。

H.实施方案G的洗发剂，它另外还包含约0.5％～约5％选自下组的悬浮剂：具有针状或片晶结构的晶态两亲物质、聚合物材料、粘土、煅制金属氧化物，及其混合物。

I.实施方案H的洗发剂，其中，所述悬浮剂是选自下组的晶态两亲物质：长链C₁₆～C₂₂酰基衍生物、脂肪酸的长链C₁₆～C₂₂链烷醇酰胺及其混合物。

J.实施方案I的洗发剂，其中，所述悬浮剂是乙二醇二酯。

K.实施方案D的洗发剂，其中，spinosyn或其衍生物或盐的量是约0.25％～约1.5％的含量。

L.一种控制人体中的虱感染的方法，它包括，对人局部施用实施方案A的制剂。

M.实施方案L的方法，其中，所述虱感染是头虱。

N.实施方案L的方法，其中，所述虱感染是Pediculus humanushumanus。

O.实施方案L的方法，其中，所述虱感染是阴虱。

P.一种处理人头发而杀伤和促进除去虱和它们的卵的方法，它包括如下步骤：

(a)施用约10g～约30g的制剂，该制剂包含：式1或2的化合物(其中，R5是具有式4a～4i之一的基)、或其生理上可接受的衍生物或盐，以及生理上可接受的润湿头发的载体；

(b)用制剂处理头发和头皮一遍；

(c)使制剂在头发和头皮上停留约6～10分钟；

(d)通过用水漂洗从头发除去制剂。

Q.式1或2的化合物(其中，R5是具有式4a～4i之一的基)、或其生理上可接受的衍生物或盐、或者含所述任一物质的制剂在生产用于控制人体的虱的药物中的应用。

Claims

1.式(1)的化合物：

或其盐，其中：

R1是式2a、2b或2c的基

R2是H或OH；

R3是H或CH₃；

R4是1-丁烯基，1，3-丁二烯基，正丁基，3-羟基-1-丁烯基，或者1-丙烯基；

而R5是H或具有下式4a～4i之一的基

2.权利要求1的化合物或其盐，其中，R5是具有下式4a～4i之一的基

3.一种杀虫剂或杀螨剂组合物，它包含：昆虫、螨或蜱灭活量的权利要求2的化合物和植物学上或生理上可接受的载体。

4.一种杀虫或杀螨的方法，它包括，对非人体内的场所施用昆虫、螨或蜱灭活量的权利要求2的化合物。

5.一种保护非人体内的场所以防昆虫、螨或蜱感染的方法，它包括，对所述场所施用昆虫、螨或蜱灭活量的权利要求2的化合物。

6.一种控制感染宿主动物的寄生物种群的方法，它包括，对所述宿主动物体外施用杀寄生物量的权利要求2的化合物。

7.一种控制人体中的虱感染的制剂，它包含作为活性组分的权利要求2的化合物、或其生理上可接受的盐，以及生理上可接受的载体。

8.权利要求2的化合物、或其生理上可接受的盐、或者含上述任一物质的制剂在生产用于控制人体中的虱的药物中的应用。

9.一种制备权利要求1的化合物的方法，它包括，在合适的培养基中，在深层需氧发酵条件下培养糖多孢菌属菌种NRRL 30141直至生产了可回收量的权利要求1的化合物，然后，从培养基回收权利要求1的化合物。

10.糖多孢菌属菌种NRRL 30141的生物纯培养物。