CN117264806A - 一株凝结魏茨曼氏菌及其在抑制口腔致病菌中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株凝结魏茨曼氏菌及其在抑制口腔致病菌中的应用，属于微生物技术领域。本发明得到了一株能够抑制多种潜在口腔病原菌、低产酸、不产挥发性硫化物的凝结魏茨曼氏菌，可以在口腔中释放、定植与发挥益生功效。本发明的凝结魏茨曼氏菌，可以用于开发微生物菌剂，或用于抑制口腔病原菌的制品，比如保健品、药品或口腔护理用品，达到预防口腔疾病或改善口腔健康的目的。
Description
技术领域
本发明涉及一株凝结魏茨曼氏菌及其在抑制口腔致病菌中的应用，属于微生物技术领域。
背景技术
口腔健康是人体健康的重要组成部分，世界卫生组织(WHO)将牙齿健康确定为人体健康十大标准之一。口腔健康直接或间接影响全身健康。口腔内存在多种微生物，这些微生物相互之间制衡，维持健康，一旦致病的微生物大量繁殖，就会导致各种口腔疾病，甚至有些微生物长期存在于口腔中，可导致或加剧某些全身疾病如冠心病、糖尿病等，危害全身健康，影响生命质量。
常见的口腔问题包括龋病、牙周病、炎症、口臭等；龋病的发生主要受细菌影响，它不只由某一种细菌所导致，牙面上存在的很多细菌都和龋病的发生有关。目前研究者们认为的口腔中主要的病原菌包括：具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌等。其中，具核梭杆菌和伴放线放线杆菌存在引起牙周病的风险；特别地，具核梭杆菌可促进癌细胞增殖、肿瘤免疫逃逸、复发和化疗耐药性等。牙龈卟啉单胞菌是牙周致病菌之一，还有可能引起感染性心内膜炎，甚至是冠心病、动脉粥样硬化等常见疾病。变形链球菌在口腔的天然菌群中所占比例最大，为牙菌斑的主要成分之一；变形链球菌一层一层地吸附在牙齿上，形成所谓的“生物膜”，即牙菌斑；它们消耗糖类，产生酸，腐蚀牙齿的釉层，造成牙洞，最终致龋；龋病是发生于牙硬组织的细菌感染性疾病，在口腔疾病中发病率最高。幽门螺杆菌是慢性活动性胃炎的一个主要致病菌，但同时它也广泛存在于口腔黏膜、唾液及牙菌斑中，与牙周病的严重程度和复发性口腔溃疡也有关系。许多微生物会通过侵袭口腔黏膜从而导致口腔黏膜炎症，引起口腔黏膜感染的细菌主要为革兰阳性球菌，包含金黄色葡萄球菌等。
因此，开发能够控制口腔菌群的潜在病原菌的抑制方法，对人体健康具有重要意义。获得能抑制口腔菌群的潜在病原菌的益生菌是解决这一问题的重要方法，这类物质可抑制有害微生物的生长繁殖，对口腔菌群失调引起的龋齿和牙周炎等有预防和保护作用。
已有报道显示，目前已经开发了一些能够抑制口腔菌群的潜在病原菌的益生菌，比如乳酸乳球菌、嗜热链球菌、植物乳植杆菌、副干酪乳酪杆菌、鼠李糖乳杆菌、凝结魏茨曼氏菌等。其中对于凝结魏茨曼氏菌的一些报道如下：
CN 110195029 A公开了一种高效拮抗变形链球菌的凝结魏茨曼氏菌、该菌菌粉制作方法、含有该菌粉的口香糖及应用，报道的为CCTCC NO：M 2018889的凝结魏茨曼氏菌能够对菌，其培养液对致龋变形链球菌具有明显的抑菌效果，抑菌效价高达8000U/ml以上，可在板式口香糖高温加工过程中存活；但是，其仅对变形链球菌具有抑制作用，不能用于对其他口腔病原菌的抑制，作用有限。
CN 115607577 A公开了一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用，通过采用特定的CGMCC No.19487的凝结魏茨曼氏菌、CGMCC No.16922的唾液乳杆菌、CGMCC No.1.12735的嗜酸乳杆菌构成的益生菌组合菌剂，配合助剂发现可以抑制病原微生物生长、促进口腔黏膜修复、缓解口腔炎症；但是，该组合菌剂需要用到多种菌株和助剂、配方复杂，同时具体能抑制哪些病原微生物也没有提及。
CN 114432227 A公开了一种含益生菌的口腔护理液，通过开发含有凝结魏茨曼氏菌BC99的口腔护理液，发现可抑制幽门螺旋杆菌、变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和金黄色葡萄球菌的生长；但是该方明中，一方面可抑制的菌株有限，对存在引起牙周病的风险的具核梭杆菌和伴放线放线杆菌没有作用，另一方面，进行变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌抑制实验时，变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌的浓度很低，达到抑制效果的时间也比较长，抑菌效率有待改善。
综上，有必要进一步开发能够高效抑制口腔菌群的多种潜在病原菌的益生菌，提高益生菌在口腔健康维护、口腔疾病的预防和治疗等方面的功能潜力。
发明内容
为了解决上述至少一个问题，本发明筛选获得了一株能高效抑制口腔菌群的多种潜在病原菌的凝结魏茨曼氏菌。本发明对菌株进行了充分筛选和功能评价，充分考虑了益生菌可能的不利效应(比如产酸、产臭味化合物等)。
本发明的凝结魏茨曼氏菌，已于2023年6月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20231138。
本发明的凝结魏茨曼氏菌具有如下特性：
(1)可以抑制多种潜在口腔病原菌，包括但不限于具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌；
(2)对病原菌的抑制很高，包括：能抑制高浓度的病原菌、能在较短时间内达到优良的(3)抑菌作用；
(4)低产酸；
(5)不产生硫化氢、甲硫醇、二甲基二硫醚、二甲基三硫醚等挥发性硫化物。
本发明的第二个目的是提供一种微生物菌剂，含有本发明的凝结魏茨曼氏菌。
所述菌剂以本发明的凝结魏茨曼氏菌为主要微生物。
在一种实施方式中，所述菌剂中，凝结魏茨曼氏菌的活菌数为105～108CFU/mL。
在一种实施方式中，所述菌剂中，凝结魏茨曼氏菌的菌浓范围为105～108CFU/mL。
在一种实施方式中，所述菌剂，是制备凝结魏茨曼氏菌的种子液，然后扩培得到的。
在一种实施方式中，所述微生物菌剂为液体菌剂或固体菌剂。
在一种实施方式中，所述菌剂中还含有任何可以应用于食品或保健品或药品的任意种属的菌株，比如地衣芽孢杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌等等。
本发明的第三个目的是提供一种用于抑制口腔病原菌的制品，所述的制品中包含有本发明的凝结魏茨曼氏菌的活菌。
本发明的一种实施方式中，所述口腔病原菌包括但不限于：具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌。
在一种实施方式中，所述的口腔护理用品，为牙用凝胶、牙粉、牙膏、漱口剂、口喷剂、口香糖、牙线、牙齿清洁液、牙齿清洁泡沫中的任意一种。
在一种实施方式中，所述的制品为保健品、药品或口腔护理用品。
在一种实施方式中，所述的制品可以是益生菌固体饮料、益生菌压片糖果、益生菌配方奶粉、功能性健康食品、膳食补充剂、保健食品等，其中还包括食品学上允许的载体或添加剂。该病原菌抑制产品为保健食品时，所述保健食品的剂型为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂或浸膏。
在一种实施方式中，所述制品中还含有生理上可接受的载剂和/或赋形剂和/或稀释剂。可选地，可接受的载剂可包含下列一种或多种载剂：乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、粘结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelaying agent)、脂质体(liposome)以及类似的物。有关这些载剂的选用与数量是熟习此项技术人员可视情况进行选择的。
在一些实施方式中，可接受的载剂可进一步包含下列任一种溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline，PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及其他任何合适的溶剂。
在一些实施例中，口腔护理用品可进一步包含有一被广泛地使用于口腔护理用品制造技术的可接受的佐剂(acceptable adjuvant)。例如，可接受的佐剂可包含下列一种或多种佐剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂(screening agent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。可根据实际需求对这些试剂的选用与数量进行合适的调整。口腔护理用品可利用熟习此领域的技术人员所详知的技术而被制造成一适合于口腔使用的型态，例如漱口水、牙膏、喷雾或贴片等。
本发明的第四个目的是提供所述凝结魏茨曼氏菌在制备预防口腔疾病或改善口腔健康的药品、口腔护理制品中的应用。
本发明的有益效果：
本发明得到了一株能够抑制多种潜在口腔病原菌、低产酸、不产挥发性硫化物的凝结魏茨曼氏菌。可以在口腔中释放、定植与发挥益生功效。
本发明的凝结魏茨曼氏菌，可以用于开发微生物菌剂，或用于抑制口腔病原菌的制品，比如保健品、药品或口腔护理用品，达到预防口腔疾病或改善口腔健康的目的。
生物材料保藏
凝结魏茨曼氏菌VC77，分类学命名为Weizmannia coagulans VC77，已于2023年6月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20231138，保藏地址为中国武汉武汉大学。
附图说明
图1：凝结魏茨曼氏菌VC77对致病菌抑制率大于99％时的共培养时间(h)。
具体实施方式
为详细说明本申请可能的应用场景，技术原理，可实施的具体方案，能实现目的与效果等，以下结合所列举的具体实施例并配合附图详予说明。本文所记载的实施例仅用于更加清楚地说明本申请的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本申请的保护范围。
在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中各个位置出现的“实施例”一词并不一定指代相同的实施例，亦不特别限定其与其它实施例之间的独立性或关联性。原则上，在本申请中，只要不存在技术矛盾或冲突，各实施例中所提到的各项技术特征均可以以任意方式进行组合，以形成相应的可实施的技术方案。
除非另有定义，本文所使用的技术术语的含义与本申请所属技术领域的技术人员通常理解的含义相同；本文中对相关术语的使用只是为了描述具体的实施例，而不是旨在限制本申请。
在本申请的描述中，用语“和/或”是一种用于描述对象之间逻辑关系的表述，表示可以存在三种关系，例如A和/或B，表示：存在A，存在B，以及同时存在A和B这三种情况。另外，本文中字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的逻辑关系。
在没有更多限制的情况下，在本申请中，语句中所使用的“包括”、“包含”、“具有”或者其他类似的表述，意在涵盖非排他性的包含，这些表述并不排除在包括所述要素的过程、方法或者产品中还可以存在另外的要素，从而使得包括一系列要素的过程、方法或者产品中不仅可以包括那些限定的要素，而且还可以包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为这种过程、方法或者产品所固有的要素。
本发明涉及：
分离培养基：酵母膏10.0g/L；牛肉膏10.0g/L；蛋白胨10.0g/L；碳酸氢钠1.5g/L；磷酸二氢钾1.5g/L；七水硫酸镁1.0g/L；硫酸锰0.1g/L；氯化钙1.0g/L；去离子水1L。
MRS培养基(发酵培养基)：蛋白胨10.0g/L、牛肉粉10.0g/L、酵母粉5.0g/L、葡萄糖20.0g/L、硫酸镁0.1g/L、醋酸钠5.0g/L、柠檬酸铵2.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、硫酸锰0.05g/L、吐温801.0g/L(固体培养基再添加琼脂粉20.0g/L)。
GAM液体培养基(蛋白胨5g、大豆蛋白胨3g、示蛋白胨5g、消化血清粉10g、酵母提取物2.5g、半胱氨酸盐酸盐0.3g、巯基乙酸钠0.3g、L-精氨酸1g、维生素k 15mg、血红素10mg，磷酸二氢钾2.5g、氯化钠3.0g、水1L，pH7.3)。
胰酪大豆胨液体培养基(TSB)：按照g/L计，胰酪胨17.0、氯化钠5.0、大豆木瓜蛋白酶水解物3.0、磷酸氢二钾2.5、葡萄糖2.5，pH值(25℃)7.3±0.2。
脑心浸液(BHI)液体培养基：按照g/L计，蛋白胨10.0、脱水小牛脑浸粉12.5、脱水牛心浸粉5.0、氯化钠5.0、葡萄糖2.0、磷酸氢二钠2.5，pH值(25℃)7.4±0.2。
商业化菌株：具核梭杆菌ATCC 25586；牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277；伴放线放线杆菌ATCC 43717；变异链球菌ATCC 25175；幽门螺旋杆菌ATCC 43504；金黄色葡萄球菌ATCC25923。均为商业化标准菌株，可以购买得到。
自行筛选的用于菌株初筛和性能检测的病原菌：以分离的牙垢、唾液、粪便等为样品，筛选得到具核梭杆菌M1、牙龈卟啉单胞菌M2、伴放线放线杆菌M3、变异链球菌M4、幽门螺旋杆菌M5、金黄色葡萄球菌M6。
实施例1：菌株的分离、筛选与鉴定
(1)菌株分离纯化：首先在样品中(碾碎的腌制泡菜)，加入15mL无菌水，剧烈震荡20min，然后80℃水浴作用20min；然后采用浓度梯度稀释法，取稀释液100uL涂布于琼脂分离培养基平板上(培养基配方为：酵母膏10.0g/L；牛肉膏10.0g/L；蛋白胨10.0g/L；碳酸氢钠1.5g/L；磷酸二氢钾1.5g/L；七水硫酸镁1.0g/L；硫酸锰0.1g/L；氯化钙1.0g/L；去离子水1L)，45℃培养48h，挑选菌落大、生长快的30株菌株，进一步划线分离纯化并进行甘油管保藏。
(2)菌株初筛：用滤纸片法定性检测菌液对口腔病原菌的抑制作用；具体是：
制备菌液：取甘油管保藏的菌液接种于MRS培养基中，置37℃120rpm恒温振荡培养24h，获得30株单菌的菌液，备用；
制备指示菌平板：将具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌分别活化后进行培养；培养好的菌液用无菌生理盐水稀释至OD600＝1，得到菌悬液；在冷却至45-50摄氏度的固体培养基中添加100ul菌悬液并迅速摇匀、加入培养皿中均匀摊开、凝固，得到指示菌平板，备用。
菌株初筛：将超静工作台上吸取上述菌液20mL于无菌培养皿中，将灭菌滤纸片用无菌镊子放入到该培养皿中浸泡10分钟，用无菌镊子夹取含菌液纸片，将多余菌液在内培养皿边上擦掉，贴在指示菌平板的培养基表面，轻轻按压，使纸片与培养皿密切接触，滤纸片距培养皿边缘15mm，每个培养皿均匀放置3张滤纸片，置37℃恒温箱，培养24h后观察含菌液滤纸片周围有无抑菌圈，并测量抑菌圈大小，取平均值进行比较筛选。初筛得到综合性能较好的6株菌，为VC1、VC12、VC13、VC24、VC61、VC77。
(3)菌株ITS鉴定：
将初筛获得的综合性能较好的6株菌，发酵液离心后得到细胞沉淀，提取基因组，测定保守区域ITS序列鉴定种属，PCR用的引物序列为ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′，序列如SEQ ID NO：1所示)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′，序列如SEQ ID NO：2所示)。
测定ITS基因序列后与Genbank数据库比对，确定种属；其中，VC12、VC77这2株是凝结魏茨曼氏菌。其中将凝结魏茨曼氏菌VC77，于2023年6月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20231138，保藏地址为中国武汉武汉大学。
实施例2：凝结魏茨曼氏菌VC77的生理生化特征
(1)产酸特性
对凝结魏茨曼氏菌VC12、VC77菌株以1％的接种量接种到200mL MRS培养基中，过夜培养后，测定菌液酸度。同时通过平板稀释计数法，测定菌液的菌数。酸度计算公式如下：X＝c×V×100/(m×0.1)。
X＝发酵液酸度，以100g样品所消耗的0.1mol/L氢氧化钠毫升数计，单位为毫升每100g(mL/100g)。V＝滴定时所消耗的氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升。C＝氢氧化钠标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升。M＝试样的质量，单位为克。最后以以下公式评价产酸能力：产酸能力＝酸度/108菌数，值越高代表产酸能力越强。结果如下表所示。
表1产酸能力实验结果
(2)产生挥发性硫化物的能力
取菌以1％的接种量接种到10mL含1％D-(+)-葡萄糖，0.5mM DL-蛋氨酸的改良GAM液体培养基(蛋白胨5g、大豆蛋白胨3g、示蛋白胨5g、消化血清粉10g、酵母提取物2.5g、半胱氨酸盐酸盐0.3g、巯基乙酸钠0.3g、L-精氨酸1g、维生素k 15mg、血红素10mg，磷酸二氢钾2.5g、氯化钠3.0g、水1L，pH7.3)中，厌氧培养24h后，在培养液中添加0.16mL的6M HCl使pH降至1以下，使菌体物质代谢停止，取适量菌液于顶空气相瓶中，对具有挥发性的(硫化氢、甲硫醇、二甲基二硫醚)进行气相分析。结果如表2所示，菌不产生硫化氢、甲硫醇、二甲基二硫醚、二甲基三硫醚等挥发性硫化物。
表2挥发性硫化物实验结果
| 菌株 | 硫化氢 | 甲硫醇 | 二甲基二硫醚 | 二甲基三硫醚 |
| VC77 | N.D. | N.D. | N.D. | N.D. |
| VC12 | N.D. | 20.35 | 36.82 | 7.49 |
其中，N.D.：not detected(未检测到)
实施例3：凝结魏茨曼氏菌对病原菌的抑制作用
将致病菌(包括具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌)在对应的培养基中培养并预先采用平板计数法测定菌体浓度。将致病菌以一定的初始浓度(1*103～1.2*103CFU/mL或1*106CFU/mL)，接种到下表1所对应的适合对应的致病菌生长的培养基中，同时分别加入凝结魏茨曼氏菌VC77至对应初始浓度(1*103～1.2*103CFU/mL或1*106CFU/mL)，并设置空白组(不添加凝结魏茨曼氏菌)，进行共培养。分别在不同时间点采用平板倾注法统计活菌数，计算菌的活菌浓度。其中，口腔潜在致病菌分别共培养0.5h、1h、2h、4h、6h、12h、18h、24h、30h、36h、48h，并进行活菌计数。根据统计的活菌数，采用下述计算方法获取抑制率(％)，获得抑制率在99％以上时的时间点。其中，抑制率(％)＝(空白组活菌数-实验组活菌数)/空白组活菌数*100％。结果如图1所示。
表3
实施例4：含有凝结魏茨曼氏菌VC77的微生物菌剂
1、含有凝结魏茨曼氏菌VC77的液体菌剂的制备
将凝结魏茨曼氏菌单菌落分别接种于MRS种子培养基中，37℃下培养36h后转接至发酵培养基，37℃下200r/min培养40～56h，制得菌数为1.0×108-5.0×109CFU/mL发酵液。
2、含有凝结魏茨曼氏菌VC77的固体菌剂的制备
凝结魏茨曼氏菌的菌液进行离心，将芽孢与干淀粉以重量比1∶2混合，在40-50℃干燥20-24h，粉碎机粉碎，过筛，加入配料玉米芯粉或麦芽糊精，混合后制成固体菌剂，芽孢含量达1×109cdu/g以上。
实施例5：凝结魏茨曼氏菌VC77在制备口腔护理用品中的应用
一种口腔护理用品，含有本发明的凝结魏茨曼氏菌VC77。所述口腔护理用品可以为牙用凝胶、牙粉、牙膏、漱口剂、口喷剂、口香糖、牙线、牙齿清洁液、牙齿清洁泡沫中的任意一种。
可选地，口腔护理用品可进一步包含有一被广泛地使用于口腔护理用品制造技术的可接受的佐剂。例如，可接受的佐剂可包含下列一种或多种佐剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂、螯合剂、界面活性剂、染色试剂、增稠剂、填料、香料以及气味吸收剂。可根据实际需求对这些试剂的选用与数量进行合适的调整。
可选地，所述口腔护理用品为口腔护理液。配比如下：山梨醇1.5g、木糖醇1.0g、甘草酸二钾0.05g、、薄荷提取物0.28g、、丙二醇1.2g、山梨酸钾0.1g、氟化钠0.01g、凝结魏茨曼氏菌0.02g，其余为纯净水；其中凝结魏茨曼氏菌活菌数为5*107CFU/mL以上，护理液的pH用柠檬酸调节至pH 6。可选地，该口腔护理液用于配合口腔雾化器使用；口腔护理液能够通过孔径≥5μm的雾化片，使用过程中不堵孔。
可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。
Claims (10)
1.一株凝结魏茨曼氏菌，其特征在于，所述凝结魏茨曼氏菌已于2023年6月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20231138。
2.一种微生物菌剂，其特征在于，含有权利要求1的凝结魏茨曼氏菌。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂以权利要求1的凝结魏茨曼氏菌为主要微生物。
4.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂中，凝结魏茨曼氏菌的活菌数为105～108CFU/mL。
5.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为液体菌剂或固体菌剂。
6.一种用于抑制口腔病原菌的制品，其特征在于，所述的制品中包含有权利要求1的凝结魏茨曼氏菌的活菌。
7.根据权利要求6所述的制品，其特征在于，所述口腔病原菌包括但不限于：具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌。
8.根据权利要求6所述的制品，其特征在于，所述制品为保健品、药品或口腔护理用品。
9.根据权利要求8所述的制品，其特征在于，所述的口腔护理用品，为牙用凝胶、牙粉、牙膏、漱口剂、口喷剂、口香糖、牙线、牙齿清洁液、牙齿清洁泡沫中的任意一种。
10.权利要求1所述凝结魏茨曼氏菌在制备预防口腔疾病或改善口腔健康的药品、口腔护理制品中的应用。
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