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CN117165455B - 一种耐高糖渗透酿酒酵母菌株及应用 - Google Patents

一种耐高糖渗透酿酒酵母菌株及应用 Download PDF

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CN117165455B CN202210592898.0A CN202210592898A CN117165455B CN 117165455 B CN117165455 B CN 117165455B CN 202210592898 A CN202210592898 A CN 202210592898A CN 117165455 B CN117165455 B CN 117165455B
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Abstract

本发明提供一种耐高糖渗透酿酒酵母菌株及应用。本发明提供的酿酒酵母菌株为：酿酒酵母AMCC 31195菌株(Saccharomyces cerevisiae AMCC 31195)，其保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 20211685。本发明提供的酿酒酵母AMCC 31195菌株具有耐高糖渗透压、耐冷渗透休克、耐有机酸的特点。

Description

一种耐高糖渗透酿酒酵母菌株及应用
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种耐高糖渗透酿酒耐高糖、耐冷渗透休克、耐有机酸的酵母菌株及应用。
背景技术
发酵面制品在人们的饮食结构中作为主食占很大比重，如馒头、包子、面包等。酵母菌在发酵面制品制作过程中是一种必不可少的原料，而且不同的酵母会影响发酵面制品的品质和口感。随着人们生活水平的提高，对发酵面制品的品质和口感有着越来越多的需求，如延长货架期、高糖含量等。
发明内容
在制作面包的过程中，常会加入较多的糖，在高糖环境下，酵母的发酵性能急剧下降。
在面包的制作过程中常会遇到环境温度过高，造成和面过程中酵母起发过快，引起产品品质下降。为了降低面团的温度，通常加入低温的水来降温，但酵母细胞遇到低温的环境会进入休克状态，从而影响酵母细胞的正常生长。所以对酵母的耐冷渗透休克性能有着迫切需求。
为了延长面包的货架期，通常在面包中添加防腐剂以延长保质期。面包加工过程中常用的防腐剂通常是有机酸及其盐，如丙酸、乙酸、丙酸钙、丙酸钠和乙酸钠等。这些有机酸及其盐对面包发酵工艺有一定的副作用，会影响面包面团的发酵。
由此可见，为了满足烘焙产品的实际应用场景及防腐需求，亟需一种具有耐高糖渗透压、耐冷渗透休克、耐有机酸的酵母菌株。
本发明提供一种酿酒酵母菌株，所述酿酒酵母菌株为酿酒酵母AMCC31195菌株(Saccharomyces cerevisiae AMCC 31195)，其保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 20211685。
本发明还提供一种酿酒酵母菌剂的发酵制备方法，所述方法包含如下步骤：培养所述的酿酒酵母菌株。
优选地，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将所述的酿酒酵母菌株放大培养；
(2)将步骤(1)得到的产物加入到液体培养基中，在26-32℃条件下发酵培养。
本发明还提供一种菌剂，所述菌剂中含有所述的酿酒酵母AMCC 31195菌株(Saccharomyces cerevisiae AMCC 31195)。
优选地，所述菌剂通过所述的发酵制备方法得到。
本发明还提供所述的酿酒酵母菌株或所述的菌剂在发酵中的应用。
本发明还提供所述的酿酒酵母菌株或所述的菌剂在面团中的应用。
本发明还提供一种面团，所述面团中含有所述的酿酒酵母菌株或所述的菌剂。
优选地，所述面团中含有质量比为100:0.5-5的面粉和所述酿酒酵母菌株。
优选地，所述面团中含有质量比为100:0-40的面粉和糖；优选地，所述面团中含有质量比为100:15-40的面粉和糖；
优选地，所述糖为蔗糖。
优选地，所述面团中还含有防腐剂；
优选地，所述防腐剂为有机酸及其盐类防腐剂；
优选地，所述有机酸为丙酸和乙酸中的一种或两种，所述有机酸盐为丙酸钙，丙酸钠和乙酸钠中的一种或两种以上的组合；
优选地，所述面团中面粉与防腐剂的质量比为100:0-1，优选为100:0-0.6。
本发明还提供所述的面团的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：以-0-35℃的水和面。
本发明中0℃的水可以为0℃的冰或0℃的冰水混合物或0℃的液体水。
本发明所述的面团的制备过程中，水、面和酿酒酵母可以为任意的加入顺序，如先将面和酵母混匀，然后加入0-35℃的水进行和面，也可以先将面粉加入0-35℃的水中，再加入酿酒酵母，或者先将酿酒酵母加入到0-35℃的水中，然后再加入面粉。
本发明还提供一种面制品，其通过所述的面团制备得到。
优选地，所述面制品为面包。
本发明提供的酿酒酵母AMCC 31195菌株具有耐高糖渗透压、耐冷渗透休克、耐有机酸的特点。
菌种保藏信息
本发明提供的酿酒酵母AMCC 31195菌株(Saccharomyces cerevisiae AMCC31195)于2021年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 20211685，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
本发明提供的酿酒酵母AMCC 30002菌株(Saccharomyces cerevisiae AMCC30002)于2022年03月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2022338，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
本发明中的酿酒酵母AMCC 30004菌株(Saccharomyces cerevisiae AMCC 30004)于2022年03月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2022339，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
具体实施方式
本发明以酿酒酵母AMCC 30002菌株和酿酒酵母AMCC 30004菌株为亲本菌株，杂交得到一株具有耐高糖渗透压、耐冷渗透休克、耐有机酸的酿酒酵母AMCC 31195菌株。
首先利用酵母显微操作仪对亲本菌株进行单孢制备，获得一代杂合子后，再对其进行单孢制备，将得到的单孢再与亲本酿酒酵母AMCC 30004菌株的单孢进行杂交，经过两轮杂交后，然后对获得的杂合子进行验证及性状筛选。然后进行摇瓶发酵培养，进行生物量干重及发酵活力指标的筛选，生物量干重筛选标准为杂合菌株的酵母乳生物量干重达到任一亲本菌株的90-100％，优选为95-100％；发酵活力筛选标准为杂合菌株酵母乳16％糖1h发酵活力达到任一亲本菌株90-100％，优选为95-100％；16％+1％丙酸钙3h发酵活力达到任一亲本菌株的85-100％，优选为90-100％。
对摇瓶发酵筛选得到的杂合菌株进行发酵罐小试培养，将发酵罐培养获得的酵母制备活性干酵母，筛选在活性干酵母制备过程中无明显异常情况的杂合菌株、将得到的活性干酵母用于制备含16％糖+0.6％丙酸钙的面团，以筛选获得的杂合菌株制备得到的活性干酵母在高糖及有机酸环境中具有较优的发酵性能的杂合菌株。筛选标准为杂合菌株活性干酵母在16％+0.6％丙酸钙2h发酵活力达到任一亲本菌株的100-120％，优选为110-120％。
最后对上述步骤筛选得到的杂合菌株进行耐冷渗透休克性能筛选。用0℃的碎冰和面，制备含有杂合菌株活性干酵母的20％糖生面团，测定面团的醒发时间，以对应面团醒发时间最短的杂合菌株为目的菌株，从而筛选出具有耐冷渗透休克性能的杂合菌株。
经过筛选得到酿酒酵母AMCC 31195菌株，得到的该酿酒酵母AMCC31195菌株具有耐高糖渗透压、耐有机酸、耐冷渗透休克性能。
本发明提供的一株具有多种工业性状的高糖面用酵母菌株不经过驯化工艺就可获得具有多重耐受性的面包酵母，能够解决市场对耐高糖渗透压、耐冷渗透休克、耐有机酸性状的迫切需求，提升主导产品竞争力。
本发明实施例中的面团涉及的x％糖或x％丙酸钙是指，面团中面粉与糖或者面粉与丙酸钙的质量比为100：x。
一些无糖面包、苏打饼干、馒头等的制作主要是不加糖面团发酵，面粉中大部分是淀粉，它在面粉中淀粉酶作用下转化为麦芽糖，因此酵母利用麦芽糖能力的高低也就决定了不加糖面团起发速度的快慢，酵母的麦芽糖利用酶包括麦芽糖水解酶和麦芽糖透性酶，具有这样性能的酵母称之为快速发酵酵母。
耐糖酵母是指对含糖面团中的蔗糖具有较高的耐受性，即在含糖面包中的生长和发酵性能较普通酵母都高。
耐低糖酵母是在7％左右蔗糖面团体系中使用，耐高糖酵母是在更高蔗糖浓度面团体系中使用，含量可高达25％，蔗糖一般不能直接被微生物利用，而酿酒酵母中含有可以降解蔗糖的蔗糖水解酶，它作用于β-1,2糖苷键，将蔗糖水解为D-葡糖糖和D-果糖，随后葡萄糖和果糖进入糖酵解途径以供酵母利用，同时由于蔗糖的快速分解生成的葡萄糖和果糖会使酵母细胞周围的渗透压增加。酵母细胞膜是一层选择半透性生物膜，外界的浓度高低会影响酵母细胞的活性，当细胞处于渗透压较高的环境中，细胞内的水分和原生质会渗出细胞膜使细胞脱水甚至死亡。因此，酿酒酵母在高糖面团中面临的高渗的环境，对其生长及发酵性能都有影响。因此，无糖酵母的产气能力是由麦芽糖利用酶活力决定，耐糖酵母的产气能力是由蔗糖酶活力决定。
本发明实施例中所用试剂和仪器信息如下表1所示。
表1
试剂/仪器 型号 生产厂家
酵母浸粉 安琪酵母
葡萄糖 国药
蛋白胨 安琪酵母
琼脂 惠兴
乙酸钾 国药沪试
2×PCR Mix 天根
分析天平 ME4002E METTLER TOLEDO
pH计 PB-10 Sartorius
快速水分仪 MJ33 METTLER TOLEDO
超净工作台 SKJH-1109 上海苏坤
恒温摇床 ZWYR-2102C 上海志诚
生化培养箱 SPX-158L 宁波新芝
恒温水浴锅 HH-2 江苏国华
PCR仪 C1000 BIO-RAD
凝胶成像系统 GelDocTMXR+ BIO-RAD
离心机 DL-5200B-II 上海飞鸽
电泳仪 EPS-300 上海天能
紫外可见光光度计 UV2310II 杭州奥盛
光学显微镜 CX43 OLYMPUS
全自动生长曲线分析仪 BioscreenC OY Growth Curves
活力测定仪 SJA 瑞典SJA
电热鼓风干燥箱 DHG-9070A 上海精宏
本发明实施例中所用的产孢培养基的配方为：1％乙酸钾，0.1％酵母浸粉，0.05％葡萄糖，2％琼脂。
本发明实施例中用YPD固体培养基对各酿酒酵母菌株进行活化，YPD固体培养基配方为：1％酵母浸粉，2％蛋白胨，2％葡萄糖，2％琼脂。
本发明实施例中用YPD液体培养基培养各酿酒酵母菌株，YPD液体培养基配方为：1％酵母浸粉，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
实施例一
以酿酒酵母AMCC 30002菌株和酿酒酵母AMCC 30004菌株为亲本菌株进行杂交。
酿酒酵母AMCC30002(Saccharomyces cerevisiae AMCC30002)菌株是安琪酵母股份有限公司选育的一株酿酒酵母菌种，该原始菌株从山东省烟台市采集得到。通过光学显微镜观察，该酿酒酵母菌株菌落质地为奶酪状，颜色为乳白色，表面光滑，边缘整齐，显微形态呈椭圆形，出芽生殖。经26S rDNA基因鉴定，确定该菌株为酿酒酵母种(Saccharomycescerevisiae)菌株，是食品属性。于2022年03月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2022338。
酿酒酵母AMCC30004(Saccharomyces cerevisiae AMCC30004)菌株是安琪酵母股份有限公司选育的一株酿酒酵母菌种，该原始菌株从新疆维吾尔自治区伊犁哈萨克自治州采集得到。通过光学显微镜观察，该酿酒酵母菌株菌落质地为奶酪状，颜色为乳白色，表面光滑，边缘整齐，显微形态呈椭圆形，出芽生殖。经26S rDNA基因鉴定，确定该菌株为酿酒酵母种(Saccharomyces cerevisiae)菌株，是食品属性。于2022年03月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2022339。
两个亲本菌株在相同条件下生孢，将单孢接种至YPD液体培养基的试管中，30℃，振荡，培养过夜，再根据配型的不同设计杂交组合，将不同配型的单孢依次接种至YPD液体培养试管中，30℃，振荡，培养过夜，再稀释涂布于YPD平板上，30℃，振荡，培养过夜，观察菌落生长情况。挑选平板上较大的菌落接种至YPD液体培养基的试管中，30℃，振荡，培养过夜，对其进行配型鉴定及生孢检验，选取杂合子。将得到的杂合子接种至装有高糖培养基的100孔培养板中，准备Bioscreen C仪器上机测定，设置参数：温度30℃、时间48h，波长600nm，每隔30min测量一次数据，然后进行生长曲线测定。根据生长曲线结果进行最大比生长速率分析，具体公式如下：
最大比生长速率(μ)＝(lnOD2-lnOD1)/(t2-t1)
OD1：t1时对应的OD600值；
OD2：t2时对应的OD600值；
t2：对数生长期结束时间；
t1：对数生长期起始时间；
根据Bioscreen C高通量数据结果分析，挑选最大比生长速率前三的杂合菌株做为一代强杂合子。
按照以上步骤再次进行单孢制备，将得到的单孢与酿酒酵母AMCC30004菌株杂交、杂合子筛选、杂合子验证，重复上述步骤，获得两轮杂交的杂合子，挑选最后一轮杂合子中最大比生长速率前100的杂合菌株进行摇瓶发酵试验。
以生物量为筛选指标，筛选上述得到的100株杂合菌株中满足生物量指标的杂合菌株。对上述杂合菌株进行摇瓶实验，将菌株接种至YPD液体培养基摇瓶，30℃，振荡，培养过夜，经离心洗涤后获得酵母乳，并进行水分检测，计算其生物量干重，筛选标准为杂合菌株的酵母乳生物量干重达到任一亲本的95-100％，
对具有生物量干重优势的杂合菌株依次进行如下试验，以筛选具有耐高糖和耐有机酸性能的杂合菌株：
试验A：16％糖面团体系280g面团的1h发酵活力检测，筛选标准为达到任一亲本菌株的95-100％；，
试验B：16％糖+1％丙酸钙面团体系70g面团的3h发酵活力检测，筛选标准为达到任一亲本菌株的95-100％。
表2所示为试验A、试验B面团体系配方。
表2试验A、试验B面团体系的配方
将筛选得到的具有耐高糖和耐有机酸性能杂合菌株进行后续筛选。
对具有耐高糖和耐有机酸的杂合菌株进行发酵罐小试培养，将发酵罐培养获得的酵母制备活性干酵母，选取在干酵母制备过程中无明显异常情况的杂合菌株。将得到的活性干酵母用于制备含16％糖+0.6％丙酸钙的面团，以筛选获得的杂合菌株制备得到的活性干酵母在高糖及有机酸环境中具有较优的发酵性能的杂合菌株。筛选标准为杂合菌株活性干酵母在16％+0.6％丙酸钙2h发酵活力达到任一亲本菌株的100-120％，优选为110-120％。
最后对上述步骤筛选得到的制成活性干酵母在高糖及有机酸环境中具有较优的发酵性能的杂合菌株进行耐冷渗透休克性能筛选。用0℃的碎冰和面，制备含有杂合菌株活性干酵母的20％糖生面团，测定面团的醒发时间，以对应面团醒发时间最短的杂合菌株为目的菌株，从而筛选出具有耐冷渗透休克性能的杂合菌株。
经筛选得到一株耐高糖渗透压、耐冷渗透休克、耐有机酸的杂合菌株，对该杂合菌株进行鉴定，得到的酵母菌株菌落质地为奶酪状，颜色为乳白色，表面光滑，边缘整齐，显微形态呈椭圆形，出芽生殖。
将该菌株命名为酿酒酵母AMCC 31195菌株(Saccharomyces cerevisiae AMCC31195)。该酿酒酵母AMCC 31195菌株于2021年12月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO.M 20211685。
实施例二
将酿酒酵母AMCC 31195菌株和亲本菌株酿酒酵母AMCC 30002菌株、酿酒酵母AMCC30004菌株分别接种至YPD含有液体培养基的摇瓶中，30℃，振荡，培养过夜，经离心洗涤后获得酵母乳，称取酵母乳质量，即为生物量，并进行水分检测，计算其干重和相对百分比，结果如表3所示。相对百分比的计算方法如下：
干重(g/L)＝酵母乳质量*(1-水分)
相对百分比＝(杂合菌株干重/亲本菌株AMCC30002干重)*100％
表3杂合菌株生物量干重(g/L)及相对百分比(％)
如表3所示，本发明提供的酿酒酵母AMCC 31195在摇瓶中，经过夜培养，生物量干重能够达到13.32g/L。
实施例三
将酿酒酵母AMCC 31195菌株和亲本菌株酿酒酵母AMCC 30002菌株、酿酒酵母AMCC30004菌株进行试验A和试验B的发酵活力检测，试验A：16％糖面团体系；试验B：16％糖+1％丙酸钙面团体系。试验A和试验B面团体系烘焙原料百分比详见下表4，计算所需酵母乳的重量，试验A进行280g面团的1h发酵活力检测，试验B进行70g面团的3h发酵活力检测。结果如表5所示。其中，表5中相对活力百分比的计算方法如下：
相对活力百分比＝(杂合菌株发酵活力/亲本菌株AMCC30002)*100％
表4试验A、试验B面团体系的配方
表5杂合菌株试验A及试验B发酵活力(mL)及相对活力百分比(％)
如表5所示，本发明提供的酿酒酵母AMCC 31195菌株在16％糖面团体系280g面团的发酵1h产生667ml气体，在16％糖+1％丙酸钙面团体系70g面团的发酵3h产生621ml气体。
实施例四
将酿酒酵母AMCC 31195菌株和亲本菌株酿酒酵母AMCC 30002菌株、酿酒酵母AMCC30004菌株分别接种至YPD液体培养基进行30L发酵罐培养，经分离、洗涤、抽滤、压滤、造粒、干燥、包装得到活性干酵母，再对其进行280g面团的试验C发酵活力检测，检测时间为2h。试验C：16％糖+0.6％丙酸钙面团体系，其烘焙原料百分比详见下表6，检测结果如表7所示。其中，表7中的相对活力的计算方法如下所示：
相对活力＝(杂合菌株发酵活力/亲本菌株AMCC 30002发酵活力)*100％
表6试验C面团体系的烘焙原料配方
表7杂合菌株试验C发酵活力(mL)及相对活力百分比(％)
如表7所示，本发明提供的酿酒酵母AMCC 31195菌株制备成的活性干酵母在16％糖+0.6％丙酸钙面团体系280g面团的发酵2h产生955ml气体。
实施例五
将酿酒酵母AMCC 31195菌株的活性干酵母和亲本菌株酿酒酵母AMCC30002菌株活性干酵母、酿酒酵母AMCC 30004菌株活性干酵母用于制备表8中所示6个应用配方的400g面团，选择各性状更有优势的亲本菌株AMCC30002为对照菌株，以发酵时间为指标，发酵时间越短表明在相同体积下面团起发速度越快，酵母菌株性状更具有优势。各应用配方的烘焙原料百分比如下表8所示(配方4的水为实验用0℃碎冰)；配方1：15％糖+0.3％丙酸钙面团体系；配方2：20％糖面团体系；配方3：20％糖+0.5％丙酸钙面团体系；配方4：20％糖冷渗透休克面团体系；配方5：25％糖+0.6％丙酸钙面团体系；配方6：40％糖+20％黄油面团体系。结果如表9所示。其中，表9中相对对照菌株的发酵时间百分比计算方法如下所示：
相对对照菌株的发酵时间百分比＝(杂合菌株发酵时间/亲本菌株AMCC30002发酵时间)*100％
表8应用配方烘焙原料配方
表9应用测试发酵时间及相对百分比(％)
如表9中结果表明，酿酒酵母AMCC 31195菌株在这6种应用配方中都具有性状优势，表明该菌株可在15-40％糖面团体系中正常生长，具有耐高糖渗透压性能；在配方1、配方3、配方5表现出的优势则表明其耐有机酸性能较AMCC 30002菌株更强；在配方4中优势最明显，较AMCC 30002菌株发酵时间快5.7％，表明具有耐冷渗透休克性能；在配方6中较AMCC30002菌株发酵时间快4.7％，表明其在重油重糖体系中具有耐受性，可满足在重油重糖产品的应用需求。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (23)

1.一种酿酒酵母菌株，其特征在于，所述酿酒酵母菌株为：
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）AMCC 31195菌株，其保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M 20211685。
2.一种酿酒酵母菌剂的发酵制备方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：培养权利要求1所述的酿酒酵母菌株。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
（1）将权利要求1所述的酿酒酵母菌株放大培养；
（2）将步骤（1）得到的产物加入到液体培养基中，在26-32℃条件下发酵培养。
4. 一种菌剂，其特征在于，所述菌剂中含有权利要求1所述的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）AMCC 31195菌株。
5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂通过权利要求2或3所述的发酵制备方法得到。
6.权利要求1所述的酿酒酵母菌株或权利要求4或5所述的菌剂在发酵中的应用。
7.权利要求1所述的酿酒酵母菌株或权利要求4或5所述的菌剂在面团中的应用。
8.一种面团，其特征在于，所述面团中含有权利要求1所述的酿酒酵母菌株或权利要求4或5所述的菌剂。
9.根据权利要求8所述的面团，其特征在于，所述面团中含有质量比为100:0.5-5的面粉和所述酿酒酵母菌株。
10.根据权利要求8所述的面团，其特征在于，所述面团中含有蔗糖，所述面团中含有质量比为100:15-40的面粉和蔗糖。
11.根据权利要求9所述的面团，其特征在于，所述面团中含有蔗糖，所述面团中含有质量比为100:15-40的面粉和蔗糖。
12.根据权利要求8所述的面团，其特征在于，所述面团中含有质量比为100:16-40的面粉和蔗糖。
13.根据权利要求9所述的面团，其特征在于，所述面团中含有质量比为100:16-40的面粉和蔗糖。
14.根据权利要求8-13任意一项所述的面团，其特征在于，所述面团中还含有防腐剂。
15.根据权利要求14所述的面团，其特征在于，所述防腐剂为有机酸及其盐类防腐剂。
16.根据权利要求15所述的面团，其特征在于，所述有机酸为丙酸，所述有机酸盐为丙酸钙和丙酸钠中的一种或两种。
17.根据权利要求8-13任一项所述的面团，其特征在于，所述面团中含有防腐剂，所述面团中面粉与防腐剂的质量比为100:0-1。
18.根据权利要求17所述的面团，其特征在于，所述防腐剂为有机酸及其盐类防腐剂。
19.根据权利要求18所述的面团，其特征在于，所述有机酸为丙酸，所述有机酸盐为丙酸钙和丙酸钠中的一种或两种。
20.根据权利要求17所述的面团，其特征在于，所述面团中面粉与防腐剂的质量比为100:0-0.6。
21.根据权利要求18所述的面团，其特征在于，所述面团中面粉与防腐剂的质量比为100:0-0.6。
22.根据权利要求19所述的面团，其特征在于，所述面团中面粉与防腐剂的质量比为100:0-0.6。
23.权利要求8-22任意一项所述的面团的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：以0-35℃的水和面。
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