CN117164587A - 一种含酯基取代吴茱萸碱衍生物、制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含酯基取代吴茱萸碱衍生物、制备方法和应用，结构式如下：本发明对HT‑29、HTC‑116、LOVO、RKO、HGC‑27、MGC‑803、SGC‑7901、Huh7、SK‑EP1和MCF‑7肿瘤细胞系表现出优异的抑制活性，同时，能够在动物水平上表现出良好的抗肿瘤活性。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含酯基取代吴茱萸碱衍生物、制备方法和应用。
背景技术
拓扑异构酶(Topoisomerases，Topo 1和Topo2)是DNA合成和转录过程中一类调节DNA拓扑构型动态变化的关键酶，其在肿瘤细胞中高度表达，是抗肿瘤化疗药物研发的热门靶点。在当前的癌症临床治疗中，虽然以靶向治疗和免疫治疗为代表的精准药物迅猛发展，但是以选择性Topo 1抑制剂喜树碱衍生物(拓扑替康、伊立替康和贝洛替康)为代表的天然生物碱类和选择性Topo 2抑制剂阿霉素衍生物(多柔比星、柔红霉素、伊达比星、表柔比星和戊柔比星)为代表的抗生素类化疗药物仍是最主要的手段之一。然而，近30年来，该类药物的长期使用已经导致了非常严重的耐药性，再加上药物本身的毒性，大大限制了其临床疗效及应用范围。
吴茱萸是我国一种传统中草药，数千年来被广泛用于治疗胃肠道疾病、闭经、头痛和产后出血等症状。吴茱萸碱(Evodiamine)是从吴茱萸果实中分离出的一种具有全新喹唑啉并咔啉骨架的生物碱。大量文献报道其对拓扑异构酶1和2(Topoisomerases，Topo 1和Topo2)具有双重抑制效果，以及广谱的抗肿瘤活性，有望接棒喜树碱和阿霉素成为下一代天然生物碱类的重磅化疗药物，在学术界和制药界备受追捧。在当前中医药振兴发展的战略机遇期，基于传统中药吴茱萸碱的新药创制也是构建中医药科技创新技术体系的重大举措。然而，研究发现吴茱萸碱水溶性差、靶标抑制活性不强、抗肿瘤活性低、代谢稳定性差等缺点，大大限制了其进一步临床开发。
现有技术报道了对吴茱萸碱骨架的结构改造和构效关系研究，开发了一系列吴茱萸碱衍生物，但受限于水溶性、抗肿瘤活性和成药性的限制，仍未见吴茱萸碱类药物品种上市。另外，酯基取代吴茱萸碱衍生物通常具有较好的成药性，如专利CN105418610A和文献(Euro.J.Med.Chem.2022,239,114530)分别公开了酯基取代吴茱萸碱衍生物典型化合物A和典型化合物B及其在疾病治疗中的应用。为了解决吴茱萸碱类药物研发领域的现有技术难题，迫切需要发明新的吴茱萸碱类药物分子。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种含酯基取代吴茱萸碱衍生物、制备方法和应用，提高其抑制肿瘤的效果。
本发明提供一种含酯基取代吴茱萸碱衍生物，结构式如下：
R为
优选如下结构的化合物，即：
更优选的，R为
Boc的结构为
本发明提供一种所述的含酯基取代吴茱萸碱衍生物的制备方法，包括如下步骤，化合物Ⅰ和ROH混合，反应，得到含酯基取代吴茱萸碱衍生物，化合物I的结构式为反应的缩合剂为EDCI，反应的催化剂为4-二甲氨基吡啶。
优选的，所述反应的溶剂为二氯甲烷。
优选的，所述化合物Ⅰ溶解于溶剂DMF中。
优选的，所述化合物Ⅰ的摩尔量小于ROH的摩尔量。
本发明提供一种所述的含酯基取代吴茱萸碱衍生物的应用，所述含酯基取代吴茱萸碱衍生物用于制备治疗抑制肿瘤的药物。
优选的，所述含酯基取代吴茱萸碱衍生物用于制备能抑制拓扑异构酶1和/或2的药物，更优选为所述肿瘤为结肠癌。
本发明的有益效果是，本发明提供的具有式(I)和式(I)所示结构的吴茱萸碱衍生物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、或其代谢产物对HT-29、HTC-116、LOVO、RKO、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、Huh7、SK-EP1和MCF-7肿瘤细胞系表现出优异的抑制活性，同时，能够在动物水平上表现出良好的抗肿瘤活性。
附图说明
图1为化合物对拓扑异构酶I的抑制活性。
其中，图1A为化合物14-23对拓扑异构酶I的抑制活性，图1B为化合物3-11对拓扑异构酶I的抑制活性，图1C为不同浓度的化合物10对拓扑异构酶I的抑制活性。
图2为化合物10对LOVO和RKO细胞周期的影响。
图3为化合物10对LOVO和RKO细胞凋亡的影响。
图4为化合物10在人结肠癌细胞HT-29异种移植物模型中的抗肿瘤作用。
其中，图4A为化合物10对人结肠癌细胞HT-29肿瘤体积的影响，图4B为化合物10对接种人结肠癌细胞HT-29的实验动物的体重的影响，图4C为化合物10对人结肠癌细胞HT-29肿瘤重量的影响，图4D为化合物10对人结肠癌细胞HT-29肿瘤体积的影响的照片。
具体实施方式
实施例1：3-氟-14-(3-氟苯基)-10-甲氧基-8,13,13b,14-四氢吲哚[2',3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮的制备
步骤1：将2-溴-5-氟苯甲酸(20g，91.32mmol)，铜粉(9.132mmol)，碳酸钾(182.64mmol)置于干燥的500mL圆底烧瓶中，加入100mL的水磁力搅拌，加入3-氟苯胺(109.58mmol)，在105℃加热5h。将反应液温度降至60℃左右，加入活性炭搅拌2h，趁热抽滤得滤液，调pH至3，抽滤得固体，干燥后得白色固体，收率为82.8％。
步骤2：依次将5-氟-2-((3-氟苯基)氨基)苯甲酸(8.83g，74.02mmol)，5-甲氧基色胺(74.02mmol)，EDCI(88.82mmol)，HOBt(88.82mmol)加入于圆底烧瓶中，加入DMF(60mL)常温下磁力搅拌。12h反应完全，向反应液中缓慢加水，析出固体，搅拌2h，抽滤，固体用乙酸乙酯打浆，得产物淡黄色固体，收率80.2％。
步骤3：称取5-氟-2-((3-氟苯基)氨基)-N-(2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)苯甲酰胺(29.8g，70.757mmol)于500mL圆底烧瓶中，加入的DMF(100mL)，加入原甲酸三乙酯(212.27mmol)，加入三氟化硼乙醚(70.757mmol)，抽气，氩气保护，130℃下加热回流12h，冷却，缓慢滴加水，饱和碳酸氢钠水溶液直至无固体析出，搅拌4h，抽滤，滤饼干燥后用乙腈打浆，干燥后得淡黄色固体，收率为82.3％。
实施例2：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮和(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮的制备。
步骤1：将3-氟-14-(3-氟苯基)-10-甲氧基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2',3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮(2g，4.64mmol)溶于DMF，抽气，在冰浴下搅拌10min，使其冷却至0℃，加入双(三甲基硅烷基)氨基钾(11.6mmol)，撤去冰浴，半小时后加入用DMF溶解的(1S)-(+)-10-樟脑磺酰氯(11.6mmol)，于65℃下反应15h，待反应结束，乙酸乙酯萃取，用二氯甲烷和甲醇重结晶，得到(13bR)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-甲氧基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮淡黄色固体，收率45.5％；重结晶母液经柱层析分离得(13bS)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-甲氧基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2',3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮淡黄色固体，收率40.2％。
步骤2：将(13bS)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-甲氧基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮(0.698g，1.619mmol)，溶于无水DCM，氩气保护，于-40℃下搅拌30min，加入三溴化硼(9.713mmol)，缓慢升温至室温，继续反应2h，冰浴下加水淬灭，萃取并柱层析得到产物(13bS)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮黄色固体，产率为41.5％。
步骤3：将(13bS)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮(1g，1.556mmol)用无水四氢呋喃溶解，然后加入四丁基氟化铵(3.11mmol)，氩气保护，于70℃下加热回流，反应12h，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，水洗三次，真空减压蒸馏旋干得(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮淡黄色固体，产率为92.5％。
步骤4：该步骤的技术方法与实施例1的步骤2类似，不同之处在于：将步骤2中的(13bS)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-甲氧基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮替换为等摩尔量的(13bR)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-甲氧基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮，收率43.6％。
步骤5：该步骤的技术方法与实施例1的步骤2类似，不同之处在于：将步骤3中的(13bS)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮替换为等摩尔量的(13bR)-13-(((4S)-7,7-二甲基-2-氧代双环[2.2.1]庚烷-1-基)甲基)磺酰基)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮，收率91.8％。
实施例3：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)甘氨酸的制备
将N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(0.05g，0.287mmol)，EDCI(0.478mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.478mmol)混合溶于DCM中，于冰浴下搅拌30min，称取(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2',3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮(0.239mmol)溶于DMF，加入混合溶液中，继续冰浴下搅拌反应3h，反应完全加水淬灭，乙酸乙酯萃取，旋干，进行柱层析纯化得白色固体，产率为76.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),7.72(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.27-7.22(m,1H),7.22-7.16(m,1H),7.13(d,J＝2.1Hz,1H),7.08-6.99(m,2H),6.90-6.78(m,4H),6.33(s,1H),5.27-5.11(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.16(d,J＝5.8Hz,2H),3.27-3.15(m,1H),2.99-2.86(m,1H),2.67-2.57(m,1H),1.46(s,9H)。
实施例4：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(s,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.29-7.24(m,1H),7.24-7.16(m,1H),7.14-7.11(m,1H),7.09-7.04(m,1H),7.04-6.99(m,1H),6.90-6.79(m,4H),6.33(s,1H),5.28-5.05(m,1H),4.86-4.77(m,1H),4.66-4.43(m,1H),3.28-3.16(m,1H),2.98-2.87(m,1H),2.69-2.59(m,1H),1.56(d,J＝7.2Hz,3H),1.46(s,9H)。
实施例5：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.63(s,1H),7.72(dd,J＝8.5,2.9Hz,1H),7.26(s,1H),7.22-7.18(m,1H),7.10(d,J＝1.8Hz,1H),7.06(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),7.04-7.00(m,1H),6.86(d,J＝7.3Hz,2H),6.80(t,J＝7.9Hz,2H),6.32(s,1H),5.12(d,J＝8.9Hz,1H),4.85-4.79(m,1H),4.45(dd,J＝8.8,4.6Hz,1H),3.27-3.19(m,1H),2.92(dd,J＝16.0,9.4Hz,1H),2.64(dd,J＝15.5,4.0Hz,1H),2.33(dd,J＝12.1,6.5Hz,1H),1.45(s,9H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),1.02(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例6：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.71-8.60(m,1H),7.73(dd,J＝8.5,2.9Hz,1H),7.27(d,J＝7.9Hz,1H),7.22-7.18(m,1H),7.11(d,J＝1.8Hz,1H),7.09-7.05(m,1H),7.02(dd,J＝8.9,4.4Hz,1H),6.86(ddd,J＝9.4,5.8,2.1Hz,2H),6.84-6.79(m,2H),6.33(s,1H),5.13(d,J＝8.9Hz,1H),4.82(q,J＝5.6Hz,1H),4.47(dd,J＝8.8,4.6Hz,1H),3.27-3.19(m,1H),2.97-2.89(m,1H),2.66(q,J＝4.6Hz,1H),2.34(td,J＝13.2,6.6Hz,1H),1.46(s,9H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),1.03(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例7：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(2S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基戊酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),7.72(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),7.26(s,1H),7.19(dd,J＝15.1,7.8Hz,1H),7.11(s,1H),7.08-6.97(m,2H),6.91-6.74(m,4H),6.33(s,1H),5.12(dd,J＝32.3,8.9Hz,1H),4.81(dd,J＝13.0,5.3Hz,1H),4.67-4.45(m,1H),3.22(dd,J＝16.2,7.5Hz,1H),2.93(d,J＝10.8Hz,1H),2.64(d,J＝15.2Hz,1H),2.09(d,J＝46.9Hz,1H),1.46(s,9H),1.39-1.23(m,2H),1.12-0.94(m,6H)。
实施例8：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-甲硫氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.41(s,1H),7.75(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),7.29(d,J＝8.7Hz,1H),7.26(s,1H),7.22(dd,J＝14.9,7.6Hz,1H),7.15(s,1H),7.12-7.07(m,1H),7.04(dd,J＝8.8,4.5Hz,1H),6.93-6.87(m,2H),6.83(t,J＝9.9Hz,2H),6.34(s,1H),5.24(d,J＝7.2Hz,1H),4.84(dd,J＝13.2,5.6Hz,1H),4.66(d,J＝4.2Hz,1H),3.24(td,J＝12.6,4.5Hz,1H),2.98(d,J＝10.6Hz,1H),2.67(dd,J＝15.2,7.5Hz,3H),2.32(d,J＝6.5Hz,1H),2.14(s,3H),1.47(s,9H)。
实施例9：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(s,1H),7.74(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.36-7.31(m,1H),7.31-7.26(m,2H),7.26-7.16(m,4H),7.10-7.04(m,1H),7.02(dd,J＝9.0,4.7Hz,1H),7.00-6.97(m,1H),6.88(d,J＝8.5Hz,1H),6.85-6.80(m,2H),6.78(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.33(s,1H),5.13(d,J＝7.1Hz,1H),4.83(dd,J＝12.8,5.2Hz,2H),3.29-3.17(m,3H),3.00-2.89(m,1H),2.64(dd,J＝15.6,4.1Hz,1H),1.44(s,1H)。
实施例10：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.10(s,1H),7.70(d,J＝7.8Hz,1H),7.26-7.13(m,2H),7.12-6.97(m,3H),6.88(d,J＝8.0Hz,1H),6.80(dd,J＝16.8,10.3Hz,3H),6.31(d,J＝3.9Hz,1H),6.26(s,1H),5.73(s,1H),5.61(d,J＝7.4Hz,1H),4.78(d,J＝12.4Hz,1H),4.51(s,1H),3.18(d,J＝5.0Hz,1H),2.88(d,J＝11.1Hz,1H),2.59(d,J＝15.0Hz,1H),2.49-2.29(m,3H),2.16-2.06(m,1H),1.45(s,9H)。
实施例11：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基O-苄基-N-(叔丁氧羰基)-L-丝氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.32(m,5H),7.25-7.15(m,2H),7.10-6.99(m,3H),6.86(d,J＝7.8Hz,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,3H),6.30(s,1H),5.54(d,J＝8.6Hz,1H),4.81(d,J＝10.7Hz,1H),4.69(d,J＝8.3Hz,1H),4.59(dd,J＝30.7,12.0Hz,2H),4.09(d,J＝6.9Hz,1H),3.81(d,J＝7.3Hz,1H),3.20(t,J＝12.0Hz,1H),2.91(d,J＝11.3Hz,1H),2.60(d,J＝9.7Hz,1H),1.45(s,9H)。
实施例12：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.67(s,1H),8.40(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(d,J＝7.7Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.22-7.13(m,3H),7.10(t,J＝7.3Hz,1H),7.07-7.02(m,2H),7.02-6.96(m,1H),6.86(d,J＝7.9Hz,1H),6.83-6.73(m,3H),6.69(d,J＝7.4Hz,1H),6.26(s,1H),5.23(d,J＝7.8Hz,1H),4.87(d,J＝5.7Hz,1H),4.79(d,J＝8.2Hz,1H),3.50-3.33(m,2H),3.14(d,J＝12.1Hz,1H),2.84(d,1H),2.52(s,1H),1.44(s,9H)。
实施例13：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧基羰基)-L-组氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),7.72(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.27-7.22(m,1H),7.22-7.16(m,1H),7.13(d,J＝2.1Hz,1H),7.08-6.99(m,2H),6.90-6.78(m,4H),6.33(s,1H),5.27-5.11(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.16(d,J＝5.8Hz,2H),3.27-3.15(m,1H),2.99-2.86(m,1H),2.67-2.57(m,1H),1.46(s,9H)。
实施例14：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)甘氨酸的制备
将N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(0.05g，0.287mmol)，EDCI(0.478mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.478mmol)混合溶于DCM中，于冰浴下搅拌30min，称取(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-10-羟基-8,13,13b，14-四氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-5(7H)-酮(0.239mmol)溶于DMF，加入混合溶液中，继续冰浴下搅拌反应3h，反应完全加水淬灭，乙酸乙酯萃取，旋干，进行柱层析纯化得白色固体，产率为73.9％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.75(s,1H),7.73(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),7.25(d,J＝10.3Hz,1H),7.20(dd,J＝15.1,8.2Hz,1H),7.13(d,J＝1.9Hz,2H),7.08-7.03(m,1H),7.02(dd,J＝8.8,4.5Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.86-6.79(m,3H),6.33(s,1H),5.17(s,1H),4.81(q,J＝5.6Hz,1H),4.16(d,J＝5.4Hz,2H),3.22(dt,J＝12.8,4.8Hz,1H),2.93(dd,J＝17.8,7.7Hz,1H),2.63(dd,J＝15.4,4.0Hz,1H),1.45(d,J＝6.1Hz,9H)。
实施例15：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),7.71(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),7.25(s,1H),7.23-7.17(m,1H),7.11(s,1H),7.05(dd,J＝8.8,2.9Hz,1H),7.02(dd,J＝12.1,3.7Hz,1H),6.90-6.84(m,2H),6.84-6.79(m,2H),6.32(s,1H),5.16(s,1H),4.85-4.79(m,1H),4.62-4.48(m,1H),3.21(td,J＝12.5,4.7Hz,1H),2.92(d,J＝9.4Hz,1H),2.62(dd,J＝15.5,4.3Hz,1H),1.54(d,J＝7.0Hz,3H),1.44(s,9H)。
实施例16：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),7.73(dd,J＝8.5,2.9Hz,1H),7.30-7.23(m,1H),7.20(q,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),7.08-7.03(m,1H),7.02(dd,J＝8.9,4.5Hz,1H),6.92-6.83(m,2H),6.81(t,J＝7.5Hz,2H),6.34(s,1H),5.15(d,J＝9.0Hz,1H),4.82(dd,J＝13.2,5.7Hz,1H),4.46(dd,J＝9.2,4.8Hz,1H),3.23(td,J＝12.4,4.7Hz,1H),3.01-2.85(m,1H),2.65(d,J＝15.3Hz,1H),2.34(dd,J＝12.2,6.2Hz,1H),1.46(s,9H),1.08(d,J＝6.8Hz,2H),1.03(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例17：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.58(s,1H),7.74(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.26(d,J＝6.1Hz,1H),7.23-7.17(m,1H),7.13(d,J＝2.1Hz,1H),7.10-7.05(m,1H),7.05-7.01(m,1H),6.90-6.85(m,2H),6.85-6.79(m,2H),6.34(s,1H),5.02(d,J＝8.7Hz,1H),4.83(dd,J＝13.2,5.7Hz,1H),4.54(td,J＝9.0,4.3Hz,1H),3.30-3.16(m,1H),3.00-2.88(m,1H),2.70-2.61(m,1H),1.88-1.77(m,2H),1.66(t,J＝9.0Hz,1H),1.46(s,9H),1.01(dd,J＝5.8,2.0Hz,6H)。
实施例18：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(2S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基戊酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.56(s,1H),7.74(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),7.27(d,J＝8.7Hz,1H),7.20(dd,J＝14.8,7.6Hz,1H),7.12(s,1H),7.09-7.05(m,1H),7.03(dd,J＝8.8,4.4Hz,1H),6.87(d,J＝8.5Hz,2H),6.85-6.77(m,2H),6.34(s,1H),5.11(dd,J＝41.0,9.2Hz,1H),4.83(q,J＝5.6Hz,1H),4.66-4.47(m,1H),3.29-3.17(m,1H),2.94(s,1H),2.66(q,J＝4.1Hz,1H),2.09(d,J＝54.9Hz,1H),1.64-1.52(m,1H),1.45(s,9H),1.35-1.27(m,1H),1.10-0.95(m,6H)。
实施例19：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-甲硫氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(s,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),7.28(s,1H),7.25-7.19(m,1H),7.15(t,J＝8.5Hz,1H),7.06(ddd,J＝11.3,8.6,3.8Hz,2H),6.92-6.86(m,1H),6.86-6.80(m,2H),6.33(s,1H),5.24(t,J＝12.9Hz,1H),4.82(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.64(d,J＝4.7Hz,1H),3.22(td,J＝12.9,4.8Hz,1H),3.03-2.90(m,1H),2.72-2.60(m,3H),2.38-2.27(m,1H),2.13(d,J＝5.1Hz,1H),2.12-2.02(m,4H),1.44(s,9H)。
实施例20：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.58(s,1H),7.73(dd,J＝8.5,2.9Hz,1H),7.33(d,J＝7.1Hz,1H),7.27(t,J＝7.3Hz,1H),7.26-7.19(m,4H),7.06(dd,J＝8.7,2.8Hz,1H),7.04-7.01(m,1H),6.99(dd,J＝14.0,3.2Hz,1H),6.87(s,1H),6.82(d,J＝7.1Hz,2H),6.80-6.75(m,1H),6.31(s,1H),5.11(d,J＝4.1Hz,1H),4.82(dd,J＝13.0,5.7Hz,2H),3.21(dd,J＝19.9,5.3Hz,3H),2.93(s,1H),2.68-2.60(m,1H),1.43(s,9H)。
实施例21：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b,14-六氢吲哚[2',3':3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),7.78-7.65(m,1H),7.26-7.15(m,2H),7.13-6.99(m,3H),6.94-6.73(m,4H),6.43-6.17(m,2H),5.81-5.49(m,2H),4.79(d,J＝12.1Hz,1H),4.52(s,1H),3.32-3.08(m,1H),2.91(s,1H),2.61(d,J＝15.0Hz,1H),2.40(s,3H),2.10(s,1H),1.45(s,9H)。
实施例22：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基O-苄基-N-(叔丁氧羰基)-L-丝氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.58(s,1H),7.74(d,J＝8.1Hz,1H),7.36-7.27(m,5H),7.25-7.16(m,2H),7.08(s,1H),7.03(ddd,J＝13.4,8.3,3.4Hz,2H),6.87(d,J＝8.1Hz,1H),6.81(t,J＝7.8Hz,3H),6.31(s,1H),5.53(d,J＝8.8Hz,1H),4.86-4.76(m,1H),4.69(d,J＝8.6Hz,1H),4.59(dd,J＝29.8,12.1Hz,2H),4.09(d,J＝7.5Hz,1H),3.81(d,J＝7.4Hz,1H),3.21(t,J＝12.3Hz,1H),2.91(dd,J＝14.9,11.3Hz,1H),2.68-2.53(m,1H),1.46(s,9H)。
实施例23：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.55(s,1H),8.33(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(d,J＝7.7Hz,1H),7.34(d,J＝7.9Hz,1H),7.18(dd,J＝16.4,8.4Hz,3H),7.10(t,J＝7.3Hz,1H),7.04(d,J＝11.6Hz,2H),7.00(dd,J＝8.6,4.4Hz,1H),6.90-6.73(m,4H),6.68(t,J＝7.9Hz,1H),6.25(s,1H),5.24(d,J＝7.9Hz,1H),4.87(d,J＝5.7Hz,1H),4.82-4.72(m,1H),3.56-3.31(m,2H),3.14(t,J＝12.0Hz,1H),2.86(d,J＝6.3Hz,1H),2.51(s,1H),1.44(s,9H)。
实施例24：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基(叔丁氧基羰基)-L-组氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),7.72(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.27-7.22(m,1H),7.22-7.16(m,1H),7.13(d,J＝2.1Hz,1H),7.08-6.99(m,2H),6.90-6.78(m,4H),6.33(s,1H),5.27-5.11(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.16(d,J＝5.8Hz,2H),3.27-3.15(m,1H),2.99-2.86(m,1H),2.67-2.57(m,1H),1.46(s,9H)。
对比例1：(S)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基N-(叔丁氧基羰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸酯的制备
制备方法与实施例3相似。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.4(s,1H),7.8-7.7(m,1H),7.3(d,J＝8.8Hz,1H),7.2-7.2(m,1H),7.1(d,J＝2.2Hz,1H),7.1-7.1(m,1H),7.1-7.0(m,1H),6.9-6.9(m,2H),6.8-6.8(m,2H),6.3(s,1H),5.5(d,J＝9.0Hz,1H),4.8(dd,J＝13.3,5.7Hz,1H),4.6(d,J＝9.1Hz,1H),4.0(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H),3.7(dd,J＝8.9,3.0Hz,1H),3.3-3.2(m,1H),3.0(s,1H),2.7(d,J＝19.7Hz,1H),1.5(s,9H),1.2(s,9H).
对比例2：(R)-3-氟-14-(3-氟苯基)-5-氧代-5,7,8,13,13b，14-六氢吲哚[2'，3':3,4]吡啶并[2,1-b]喹唑啉-10-基N-(叔丁氧基羰基)-O-(叔丁基)-L-丝氨酸酯的制备
制备方法与实施例14相似。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.4(s,1H),7.76(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),7.28-7.23(m,1H),7.25-7.16(m,1H),7.14-7.11(m,1H),7.09-7.05(m,1H),7.04-6.99(m,1H),6.90-6.79(m,4H),6.33(s,1H),5.25-5.04(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.66-4.43(m,1H),3.97(d,J＝5.8Hz,2H),3.28-3.16(m,1H),2.99-2.85(m,1H),2.70-2.60(m,1H),1.45(s,9H),1.23(s,9H)。
测试例1：MTT法测定化合物对肿瘤细胞生长抑制率
测试方法：将结肠癌细胞系(HT-29、HCT-116、LOVO、RKO)、胃癌细胞系(HGC-27、MGC-803、SGC-7901)及肝癌细胞系(HUH7、SK-EP1)用含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基或MEM培养基在37℃、5％ CO2条件下放置在细胞培养箱中培养。待细胞处于对数期时，以每孔5000～8000个细胞接种于96孔板中，培养24h后移去旧培养基，加入含有待测样品的培养基(将100mmol·L1目标化合物DMSO母液配制成实验浓度18、6、2、0.67、0.22、0.07、0.024、0.008μmol·L1)，每个实验浓度设置3个复孔，同时设置空白对照组。待实验细胞培养72h后，加入10μL MTT溶液，孵育4h后将96孔板内的上清液吸出，每孔中加入150μL的DMSO，振荡20min。在570nm波长下利用酶标仪测定实验中96孔板各孔的吸光值(OD值)，计算细胞增殖抑制率(inhibitory rate，IR)，细胞增殖抑制率％＝(对照孔平均OD值实验孔平均OD值)/(对照孔平均OD值空白OD值)，并用GraphPad Prism7.00计算半数抑制浓度IC50值(means±SD,n＝3)，具体数据见表1和2。数据计算为3次独立实验的平均值±标准差。
测试结果：
表1化合物对结肠癌细胞系的抗增殖活性
表2化合物对不同癌细胞系的抗增殖活性
通过表1和2可以看出，本发明的化合物对结肠癌细胞系HT-29、HCT-116、LOVO、RKO、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、Huh7、SK-EP1和MCE7具有良好至优异的抑制效果，且部分化合物的活性优于典型化合物A和典型化合物B。
测试例2：化合物对拓扑异构酶I(Top1)的抑制实验
测试方法：分组：DNA、DNA+Top1、CPT、EVO、目标化合物10(200、100、50、25μM)和部分合成的化合物(100μM)，每组分别加入2μL 10×DNA Topoisomerase I Buffer(350mMTris-HCl，(pH 8.0)，720mM KCl，50mM DTT，50mM亚精胺50mM MgCl2)，2μL0.1％ BSA和10μL超纯水。分别加入0.2μL的不同浓度的阳性药物和待测化合物(DNA、DNA+Top1组加相应体积的DMSO)，0.5μL Top1(0.5单位，DNA组不加)，混合均匀，放于37℃下孵育20分钟。然后加入0.5μL pBR322质粒DNA，由超纯水补充，最终体积为20μL。在37摄氏度下继续孵育15min后，用4μL的上样缓冲液终止反应。然后，取10μL样品加入到含0.8％琼脂糖凝胶TAE(Tris-acetate-EDTA)中，于恒压110V下电泳1小时。结束后用绿色荧光染料(10μL/100mL超纯水)对此DNA凝胶染色30分钟，并用ChampGel6000(Beijing sage creation,China)对DNA条带进行拍照。
实验结果如图1所示，通过图1可以看出，本发明的化合物对拓扑异构酶I在特定浓度下表现出良好至优异的抑制效果。
测试例3：化合物对LOVO和RKO细胞周期阻滞实验
测试方法：将LOVO和RKO细胞分别接种在6孔板中(5×105细胞/孔)。培养24小时,待细胞贴壁后，在每个孔中加入TPT和不同浓度(LOVO、RKO浓度梯度分别为10、30、90nmol/L)的化合物10。培养24h后，收集孔板里所有液体，用0.5ml的胰酶消化3分钟，加1ml完全培养基终止消化，收集液体至15ml离心管中，在4℃预冷的离心机中在1500rpm条件下离心3min，去除上清，加入1mLPBS吹打混匀后转移至1.5mL的离心管中，放入提前预冷的4℃离心机，1000转离心3min。使用普通PBS清洗三遍，离心，重复三次。在细胞中加入500μL的70％预冷乙醇(PBS稀释)固定，在4℃保存两个小时至过夜。固定结束后，继续离心，除去固定液，用PBS洗去固定液；染色：细胞沉淀中加100μL RNase A溶液，将细胞混匀重悬，在37℃水浴，放置30min。每个样品再加入400μL PI染色液混匀，4℃避光孵育30min。上机检测，记录激发波长488nM处红色荧光。使用Modfit软件进行数据分析。
实验结果如图2所示，通过图2可以看出，本发明的化合物10在纳摩尔浓度下对结肠癌细胞系LOVO和RKO周期阻滞在G2/M期。
测试例4：化合物对LOVO和RKO细胞凋亡诱导实验
实验方法：将LOVO和RKO细胞分别接种在6孔板中(5×105个/孔)。第二天待细胞贴壁后，分别用配制好的目标化合物10(浓度梯度为10、30、90nmol/L)和无药物培养基处理细胞。在37℃下培养24h后，收集六孔板中所有液体，用1mLPBS洗一遍，然后用500μL不含EDTA的胰酶消化3min。用1mL培养基终止，于提前预冷4℃的离心机中离心3min，1500rpm。离心完放在4℃，吸除上清，留部分液体避免吸走细胞。加1mL左右的PBS(4度预冷)，吹打重悬细胞，转移至1.5mL的离心管中。再次离心，小心地除去上清。加入100μL Binding Buffer(用去离子水1:9稀释)吹打重悬细胞；转移至流式管里，阴性管中不加Annexin V/FITC和碘化丙锭溶液(PI)(调节电压用)；在设置的Annexin V/FITC单染管，只加5μL的Annexin V/FITC(调节补偿用)；在空白组和药物的流式管中，分别加Annexin V/FITC5μL，吹打均匀后室温下避光孵育5min；在设置的PI单染管和其它管中，加入5μL的碘化丙锭溶液(PI)。加PI后立刻在流式细胞仪上机检测。
实验结果如图3所示，通过图3可以看出，本发明的化合物10在纳摩尔浓度下可显著诱导结肠癌细胞系LOVO和RKO的凋亡。
测试例5：大鼠体内药物代谢研究
将50mg/kg的前述实施例提供的化合物溶于含有2.5％聚氧乙烯蓖麻油和2.5％DMSO的生理盐水中，然后进行腹腔注射。给药前采集空白血，给药后按预定时间点采大鼠心脏血样品：给药后10min，30min，1h,2h,3h,4h,6h,8h,12h,24h；取20μL的工作液，加入100μL空白血浆样品，涡旋混合，再加入300μL含40ng/mL普萘洛尔内标的甲醇溶液，涡旋混合，于4℃、14000转离心半小时，取上清液进行LC-MS/MS检测。色谱条件：流动相A为水相，5％甲醇(包含0.1％甲酸)；流动相B为有机相，95％甲醇(包含0.1％甲酸)。流速为0.4mL·min-1，柱温：室温。采用DAS2.0软件进行计算药物代谢动力学参数，每组3只大鼠。数据表示为每组的平均值，得到AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-∞、Cmax、Tmax、和t1/2等参数。
表3大鼠腹腔注射10(50mg/kg)后的药物代谢动力学参数
表3列出了腹腔注射给药后，本发明的化合物在大鼠体内的药代动力学参数。结果表明，本发明的化合物具有良好的药代动力学性质，包括理想的清除率(CL)、半衰期(T1/2)、峰浓度(Cmax)和暴露量(AUC0-t)。
测试例6：本发明的化合物在裸鼠异体移植瘤模型上的抗肿瘤活性
将接种后的裸鼠置于SPF级动物房，密切观察小鼠生长状况并每天测量裸鼠的肿瘤直径。当肿瘤大小达到100mm3左右时，从中挑选生长状况良好、肿瘤体积差不多的裸鼠24只，并随机分为三组，每组为8只。将这三组裸鼠做好标记，分别为生理盐水对照组、拓扑替康(0.5mg/kg)给药组、化合物10(40mg/kg)给药组。经腹腔注射每天给药一次，从给药后开始，每天对各组的体重和肿瘤大小进行测量，记录计算出肿瘤的体积。连续给药14次，同时监测肿瘤生长情况约14天，并于14日后处死所有组的裸鼠，获得肿瘤组织，称量肿瘤的重量，并对肿瘤进行拍照保存。实验指标为考察实施例化合物对肿瘤生长的影响，具体指标为抑瘤率TGI(％)。每周三次用游标卡尺测量肿瘤直径，肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×a×b2其中a、b分别表示长、宽。T/C(％)＝(T-T0)/(C-C0)×100％，其中T、C为实验结束时的肿瘤体积；T0、C0为实验开始时的肿瘤体积。当肿瘤出现消退时，抑瘤率(TGI)(％)＝100-(T-T0)/T0×100，如果肿瘤比起始体积缩小，即T<T0或C<C0时，即定义为肿瘤部分消退(PR)；如果肿瘤完全消失，即定义为肿瘤完全消退(CR)。二组肿瘤体积之间比较采用双尾Student’st检验，P<0.05定义为有统计学显著性差异。
本测试例的结果列于图4中，BLK表示空白对照，TPT表示拓扑替康，i.p.表示腹腔注射，qd表示一天一次给药。
由图4可见，本发明的化合物在人结肠癌细胞HT-29异种移植物模型中表现出优异的抗肿瘤活性。与模型组相比，化合物10和TPT组显著降低了肿瘤的重量(p<0.0001)和体积。表明目标化合物能显著抑制肿瘤的生长，与模型组均具有统计学差异。另外，给药组的小鼠体重未出现明显下降，而TPT组的小鼠体重与模型组相比下降明显(p<0.0001)，这表明化合物10在40mg/kg剂量下给药毒性较小，具有较TPT更优的安全性。
上述结果表明，本发明提供的具有式(I)和式(I)所示结构的吴茱萸碱衍生物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、或其代谢产物对HT-29、HTC-116、LOVO、RKO、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、Huh7、SK-EP1和MCF-7肿瘤细胞系表现出优异的抑制活性，同时，能够在动物水平上表现出良好的抗肿瘤活性。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本申请的保护范围限于这些例子；在本申请的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本申请中一个或多个实施例的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
本申请中一个或多个实施例旨在涵盖落入本申请的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本申请中一个或多个实施例的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种含酯基取代吴茱萸碱衍生物，其特征是，结构式如下：
2.如权利要求1所述的含酯基取代吴茱萸碱衍生物，其特征是，结构式为：
3.如权利要求1或2所述的含酯基取代吴茱萸碱衍生物，其特征是，R为
4.一种如权利要求1-3任一项所述的含酯基取代吴茱萸碱衍生物的制备方法，其特征是，包括如下步骤，化合物Ⅰ和ROH混合，反应，得到含酯基取代吴茱萸碱衍生物，化合物I的结构式为反应的缩合剂为EDCI，反应的催化剂为4-二甲氨基吡啶。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述反应的溶剂为二氯甲烷。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述化合物Ⅰ溶解于溶剂DMF中。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述化合物Ⅰ的摩尔量小于ROH的摩尔量。
8.一种如权利要求1-3任一项所述的含酯基取代吴茱萸碱衍生物的应用，其特征是，所述含酯基取代吴茱萸碱衍生物用于制备治疗抑制肿瘤的药物。
9.如权利要求8所述的含酯基取代吴茱萸碱衍生物的应用，其特征是，所述含酯基取代吴茱萸碱衍生物用于制备能抑制拓扑异构酶1和/或2的药物。
10.如权利要求8或9所述的应用，其特征是，所述肿瘤为结肠癌。
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