CN116926096A - 一种在大肠杆菌中表达并降解2,4-二氯苯氧基乙酸的基因簇及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种在大肠杆菌中表达并降解2,4‑二氯苯氧基乙酸的基因簇及其应用，该基因簇包含六个基因，基因的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1‑6所示。利用生物学技术，将有关2,4‑二氯苯氧基乙酸降解的基因元件，优化改造成可在大肠杆菌中使用的基因表达盒，其中每个基因由独立的T7启动子和T7终止子控制。将优化的基因表达盒连入大肠杆菌表达载体，并导入大肠杆菌，发现基因在大肠杆菌中成功表达，赋予大肠杆菌对2,4‑二氯苯氧基乙酸良好的降解和耐受功能，6小时内可完全降解浓度0.6 m/L的2,4‑二氯苯氧基乙酸。

Description

一种在大肠杆菌中表达并降解2,4-二氯苯氧基乙酸的基因簇 及其应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种在大肠杆菌中表达并降解2,4-二氯苯氧基乙酸的基因簇及其应用。

背景技术

2,4-二氯苯氧基乙酸（2,4-D）作为一种芳香族有机化合物，是常用的选择性除草剂，多用于双子叶植物。除了作为除草剂的使用外，2,4-二氯苯氧基乙酸在农业生产中还被用作激素生长调节剂、落叶剂、发芽促进剂等。目前，从芳香族化合物2,4-二氯苯氧基乙酸衍生出的除草剂约600种，因具有使用效果好、成本低等优点，已成为农业生产生活中不可或缺的化合物。

随着2,4-二氯苯氧基乙酸的大量生产和广泛使用，使其常常通过各种途径，如生产泄露、废水排放、废物掩埋、使用挥发等方式进入到环境中。由于除草剂的使用方式和使用地点，以及残留时间，最终导致该化合物在环境水体或土壤中积累。而2,4-二氯苯氧基乙酸作为芳香族有机化合物，化学性质稳定，自然降解性能低，导致该化合物在环境中累积加剧，最后可能通过生物富集进入到食物链中，对人类和动物健康产生负面影响（如疲劳、全身虚弱和呼吸道中断等），可能产生“致癌、致畸、致突变”作用。因此该类化合物被列入美国环境保护局(EPA)公布的优先污染物和我国环保局公布的有毒有机物的黑名单中。

具有降解2,4-二氯苯氧基乙酸能力的微生物被认为是修复污染环境的有力工具。2,4-二氯苯氧基乙酸微溶于水，溶于乙醇等有机溶剂，若使用传统方法进行污染物处理，不仅工艺条件苛刻且价格昂贵，甚至造成二次污染。而有关微生物降解污染物的研究，为降解芳香族污染物提供了有效的线索。而且用于生物修复的微生物繁殖快、生长迅速、操作简单，并且可以在细胞内和细胞外产生一些酶，这些酶将2,4-二氯苯氧基乙酸转化为毒性较小或无毒的代谢物，避免二次污染的发生。八十年代初，瑞士科学家在增氧产碱菌JMP 134中首次发现芳香族化合物邻位降解途径，该途径通过6个基因产生的酶将2,4-二氯苯氧基乙酸转化为β-酮己二酸，随后β-酮己二酸被转化为琥珀酸盐和乙酰辅酶进入三羧酸循环被微生物利用。

虽然，已知增氧产碱菌JMP 134、恶臭假单胞菌（Pseudomonas Putida）、棒状杆菌属SOGU169（Corynebaciumsp.）和无色芽孢杆菌SOGU11（Achromobacter sp.）等微生物具有2,4-二氯苯氧基乙酸降解能力。但单一菌种修复效果没有混合菌种好，且修复环境复杂多样，可供选择的降解菌种有限，因此通过生物技术有目的的改造模式微生物，使它们获得降解2,4-二氯苯氧基乙酸的能力；为高效降解芳香族化合物、避免环境污染、保障人群健康提供技术支持。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能在大肠杆菌中表达的2,4-二氯苯氧基乙酸降解酶基因簇及其应用，该基因簇包含6个基因：其中tfdA编码 2,4-二氯苯氧乙酸α-酮戊二酸盐双加氧酶，tfdB编码氯酚羟化酶，tfdC编码氯代邻苯二酚1,2-双加氧酶，tfdD编码氯己二烯二酸环异构酶，tfdE编码双烯内酯水解酶，tfdF编码马来酰基乙酸还原酶，2,4-二氯苯氧基乙酸经过连续六步酶促反应生成无毒的β-酮己二酸进入三羧酸循环。

基于真氧产碱杆菌（Ralstonia eutropha）的原始操纵子，该操纵子包含2,4-二氯苯氧基乙酸邻位降解途径中的6个结构基因，该6个基因可以将2,4-二氯苯氧基乙酸降解成β-酮己二酸。在本发明中，首先根据大肠杆菌密码子的偏好性对原始操纵子的tfdA、tfdB、tfdC、tfdD、tfdE和tfdF基因进行优化与重组，每个基因都由独立的T7启动子和T7终止子调控表达，且优化原则如下进行：(一)根据大肠杆菌密码子偏爱，优化密码子，提高基因翻译效率；(二)去除基因自身带有的EcoRI和HindIII限制性内切酶识别位点，便于表达盒构建；(三)消除基因中逆向重复序列、茎环结构、转录终止信号，使基因内部的GC/AT均衡，提高RNA的稳定性；(五)使基因编码蛋白符合N端原则，以提高翻译蛋白的稳定性；(六)优化mRNA二级结构自由能，以提高基因表达效率。

将合成优化的6个基因片段，利用“重叠延伸PCR”进行拼接，将分别带有单独启动子和终止子的基因片段中整合在一起。基因整合后，利用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切，连接到载体pET-28a，得到重组质粒pET-B3164，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21，利用蓝白斑筛选得到阳性菌株BL-3164。

将阳性菌株BL-3164和对照菌株Control（仅含空载pET-28a）分别接种于100毫升M9（1%甘油）液体培养基，其中卡那抗生素添加浓度为50μg/ml，37℃（160rpm）摇菌24小时，4℃离心去上清，剩余菌体使用灭菌蒸馏水润洗三遍，4℃离心去除蒸馏水；之后使用10毫升M9（含1%甘油、0.2%阿拉伯糖、50μg/ml卡那霉素和1mM IPTG）液体培养基重悬菌体，并向对照组和实验组中分别添加0.5 m/L、1 m/L的2,4-二氯苯氧基乙酸，37℃（160rpm）摇菌；分不同时间取样，通过HPLC检测对照组和实验组中2,4-二氯苯氧基乙酸的含量；通过气相质谱检测最终产物β-酮己二酸的含量；结果证明阳性菌株BL-3164在6小时内能够有效降解0.6m/L的2,4-二氯苯氧基乙酸。

有益效果：

在本发明中，优化合成了tfdA基因、tfdB基因、tfdC基因、tfdD基因、tfdE基因和tfdF基因，并将6个基因组合的基因簇导入到大肠杆菌，并成功表达，获得阳性菌株BL-3164，可在6小时内完全降解0.6 mM 2,4-二氯苯氧基乙酸。本发明可用于制备降解2,4-二氯苯氧基乙酸的微生物，在水体和土壤等环境修复上具有良好的应用潜力。

附图说明：图1为用于在大肠杆菌BL21中表达2,4-二氯苯氧基乙酸降解基因簇的示意图。

图2为阳性菌株BL-3164对不同浓度2,4-二氯苯氧基乙酸的降解效果。

图3为实验组培养基中终产物β-酮己二酸的GC-MS检测结果。

具体实施方式：

下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

实例中所使用的试验方法和技术为本领域常规分子生物学技术，如连接、转化、酶切、重叠PCR等参照分子克隆实验指南第三版（黄培堂等译，中国，科学出版社，2002）中方法进行；所使用的材料、试剂等，若无特殊说明，均可从商业途径购买得到。所用大肠肝菌由上海市农业科学院生物技术研究所植物基因工程研究室保存。

实施例1 2,4-二氯苯氧基乙酸降解相关六个基因tfdA、tfdB、tfdC、tfdD、tfdE、tfdF的优化设计与合成

基于真氧产碱杆菌（Ralstonia eutropha）的tfdA、tfdB、tfdC、tfdD、tfdE和tfdF基因的编码序列，按照以下原则对上述六个基因进行整体的结构优化：(一)根据大肠杆菌密码子偏爱，优化密码子，提高基因翻译效率；(二)去除基因自身带有的EcoR I和Hind III限制性内切酶识别位点，便于表达盒构建；(三)消除基因中逆向重复序列、茎环结构、转录终止信号，使基因内部的GC/AT均衡，提高RNA的稳定性；(五)使基因编码蛋白符合N端原则，以提高翻译蛋白的稳定性；(六)优化mRNA二级结构自由能，以提高基因表达效率。在优化后的每个基因首尾分别加上T7启动子和T7终止子，完整序列两端分别加上EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点，整体序列由上海生工生物工程有限公司合成。上述优化后的tfdA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述优化后的tfdB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述优化后的tfdC 基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述优化后的tfdD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所；所述优化后的tfdE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述优化后的tfdF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

实施例 2大肠杆菌表达载体的构建与转化

将合成优化的6个基因片段利用重叠延伸PCR技术，将6个基因按照顺序串联。将上述串联的多基因片段使用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切并连接到经同样酶切的载体pET-28a上，获得含六基因的重组质粒pET-B3164（参见图1）。采用42℃热击法将重组质粒pET-B3164转化至大肠杆菌BL21中，在含有50μg/ml卡那霉素抗性的固体LB平板上筛选阳性菌株。对阳性菌株中的质粒进行提取酶切，并进行DNA测序确定基因序列的完整性和准确性。

实施例3重组大肠杆菌BL-3164对不同浓度2,4-二氯苯氧基乙酸的降解作用

挑取实施例2中阳性单菌落，接种在100ml M9液体培养基(含1％甘油、50μg/ml卡那霉素)中，37℃(160rpm)培养，当菌液OD ₆₀₀达到0.6时加入0.2％阿拉伯糖和1mM IPTG进行诱导，继续37℃(160rpm)培养3小时后，分别向不同实验组添加不同浓度的2,4-二氯苯氧基乙酸（0.5 m/L和1 m/L），37℃摇菌(160rpm)，在不同时间段取菌液，通过HPLC检测其残余的2,4-二氯苯氧基乙酸含量（参见图2）。

具体HPLC检测条件：安捷伦1100高效液相色谱系统；C18柱( 4.6×150mm，5μm)；流动相为乙腈：水（0.5%磷酸）＝60：40，流速为0.6 ml/min；柱温为30℃；检测波长为230nm；进样量为20μL。

实施例4 GC-MS检测培养基中β-酮己二酸的含量

取实施例3中待检测的菌液，液氮冻融将细胞破壁，然后超声波提取后，离心取上清液，冻干后，60℃下衍生半小时，通过GC-MS检测β-酮己二酸的含量（参见图3）。

气相色谱-质谱联用仪（GC-MS/MS，7890B-7000C，美国Agilent公司）；HP-5 MS毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm，美国Agilent公司）；真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；超声机（上海一恒科学仪器有限公司）、氮吹仪（上海安谱科技有限公司）、超纯水系统（美国Merck Millipore 公司）。

色谱条件：色谱柱：Agilent HP-5 MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 µm）；载气He（99.999%），流速1.0mL/min；进样口温度290 ℃；升温程序：100 ℃以40 ℃/min升至160℃，再以10 ℃/min升至250 ℃，最后以20 ℃/min升至300 ℃；进样量1.0 μL，分流比50:1。

GC-MS质谱分析条件：电子轰击离子源（EI），电离能量70 eV；全扫描（scan）模式，扫描范围m/z：50~400；离子源温度230 ℃，四级杆温度150 ℃，接口温度300℃。

序列表

<110> 上海市农业科学院

<120> 一种在大肠杆菌中表达并降解2,4-二氯苯氧基乙酸的基因簇及其应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 864

<212> DNA

<213> 人工合成(artifical synthesize)

<400> 1

atgtcagttg ttgcaaaccc acttcatcca ctgttcgctg ctggtgttga agacatcgac 60

cttcgtgagg cactgggttc aactgaggtt cgtgagatcg aacgtctgat ggatgagaag 120

tctgtgctgg tgtttcgtgg tcagccactg tcacaggatc agcagatcgc attcgcacgt 180

aacttcggtc cacttgaagg tggtttcatc aaggtgaacc aacgtccatc acgtttcaag 240

tatgctgagt tggctgacat ctctaacgtg tcactggatg gtaaggtggc acaacgtgat 300

gcacgtgagg tggttggtaa cttcgcaaac cagctgtggc attctgattc atcattccag 360

caacctgctg cacgttactc aatgctgtct gctgtggtgg ttccaccatc tggtggtgac 420

actgagttct gtgacatgcg tgctgcatac gatgcactgc cacgtgatct tcagtctgag 480

ctggaaggtc tgcgtgctga acattacgca ctgaactcac gtttcctgct tggtgacact 540

gactactctg aagcacaacg taacgcaatg cctcctgtga actggccact ggttcgtact 600

catgctggtt ctggtcgtaa gttcctgttc atcggtgcac atgcatcaca tgttgaaggt 660

cttcctgttg ctgaaggtcg tatgctgctt gctgagcttc tggaacatgc aactcaacgt 720

gagttcgtgt accgtcatcg ttggaacgtt ggtgatctgg tgatgtggga caaccgttgt 780

gtgcttcatc gtggtcgtcg ttacgacatc tctgcacgtc gtgaacttcg tcgtgctact 840

actctggatg atgctgttgt gtaa 864

<210> 2

<211> 1797

<212> DNA

<213> 人工合成(artifical synthesize)

<400> 2

atggcattga ctatcgaaac tgatgttctt gttgttggta ctggtcctgc tggtgcatct 60

gctggtgcac tgcttgcacg ttacggtgtt cgtactatgc tgatcaacaa gtacaactgg 120

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cttggtctgg aagctgaagc acgtctgtat gctgcaccaa acgacctgat gggtgagaac 240

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atggttcgtc cttggaacaa gtggcttgca atctggggtt acgatgttga gcagggtcca 780

cctgaaatct ctgagtcatt cgcacgtcgt atcgtgcata acctgattgg tgatgactct 840

gttcctctga agatcgaggg tatctcaact tggactgtga acgatatgta tgcaactcgt 900

cttcagcaag gtcgtgtgtt ctgtgctggt gatgctgttc atcgtcatcc accaactaac 960

ggtcttggtt caaacacttc tatccaggat tcattcaacc tggcatggaa gatcgcaatg 1020

gtgctgaacg gtactgctga cgagtcactg ctggacactt acactatcga acgtgcacca 1080

atcgctaagc aggttgtgtg tcgtgctaac aagtcacttg aggacttccc accaatcgca 1140

atggcactgg gtctgccaca ggcaaagtct gctgacgaga tgaagtctaa catggcacgt 1200

cgtaaggaac ctggtcctga ggcacaagca caacgtactc gtctgcgtga ggcaatcgct 1260

ggtactaact acgtgtacaa tgcacatggt gtggagatga atcaacgtta cgactcacct 1320

gcaatcgttg ctgacaactc acctgatgaa gtgttccgtg atgtggaact gtaccatcag 1380

gcatcaactc gtcctggtgc accaatgcca catgtgtggg tgtacgcatc tggtgatggt 1440

catcgtatct caactaagga cctgtgtggt aagggtaact tcactctgtt cactggtatc 1500

ggtggtgctg catggcagga cgctgctgct gctgtgtcac gtcaactggg tgtggctgtg 1560

actgtgcgta tcatcggtcc tggtcaggca tacgaggatc attacggtga cttcgcacgt 1620

atctctgaga tcatcgatac tggtgcaatc ctggtgcgtc ctgacttcca tgttgcatac 1680

cgtgcaactt cactgcctgc tgatgctgct ggtgatctgg tgtctgcaat gcgtcgtatc 1740

cttggtcgtc agtctgagcg ttcatctgca ctgcgtgtga cttcacgtgc aatctaa 1797

<210> 3

<211> 768

<212> DNA

<213> 人工合成(artifical synthesize)

<400> 3

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gatcagaagg aggttactga ggctgagtac cgtactgctg ttcattacct gatgcaagtg 120

gctgaacagc gtgagactgc actgctgtgt gatgtgttct tcaactcaac tgtggctgca 180

actaaggcac gtatctctga aggttcaact cctgcaatcg agggtccata ctaccgtgat 240

gatgcaccac tggtggatga tcgtctgaag acttatgaca ctgatgatca taagccactg 300

ctgatccagg gtactgtgaa ggctgtggat ggttctgttg tggaggatgt gactatcgac 360

gtgtggcatt caactcctga tggtaagtac tctggtttcc atgatgacat tccaactgac 420

ttctaccgtg gtaagctgcg tgtgggtact gatggttcat tccgtgtgcg tactactatg 480

cctgtgccat accagatccc tgatcagggt ccaactggtg cactgcttga gactatgggt 540

ggtcattcat ggcgtcctgc acatgtgcat ttcaaggtga aggcacctgg ttacgagact 600

ctgactactc agtactactt cgaaggtggt gactggatca ctgatgattg ttgcaacggt 660

gtgcagtcat cactgatcac tcctgacatc gtggaggagg gtgttcgtct gatgaacatc 720

aacttcgtga tcgaacctgc acgtgcacag gctggtgcaa acccataa 768

<210> 4

<211> 1113

<212> DNA

<213> 人工合成(artifical synthesize)

<400> 4

atgaagattg atgcaatcga agctgtgatc gttgatgttc caactaagcg tccaatccag 60

atgtcaatca ctactgttca tcagcagtca tacgtgattg ttcgtgtgta ctctgagggt 120

cttgttggtg ttggtgaggg tggttctgtt ggtggtcctg tgtggtctgc tgagtgtgct 180

gagactatca agatcatcgt ggaacgttac cttgcaccac atcttcttgg tactgatgca 240

ttcaacgtgt ctggtgcact gcaaactatg gcacgtgctg tgactggtaa cgcatctgca 300

aaggctgctg tggagatggc actgctggac ctgaaggcac gtgcacttgg tgtgtcaatc 360

gctgagttgc ttggtggtcc actgcgttct gcaatcccaa tcgcatggac tctggcatct 420

ggtgacacta agcgtgatct ggactctgct gtggagatga ttgaacgtcg tcgtcataac 480

cgtttcaagg tgaagctggg tttccgttca ccacaagacg atctgatcca catggaggca 540

ctgtcaaact cactgggttc taaggcatac cttcgtgttg atgtgaacca ggcatgggat 600

gagcaagtgg catctgtgta cattcctgaa ctggaggcac ttggtgtgga actgatcgaa 660

cagcctgtgg gtcgtgagaa cactcaagca ctgcgtcgtc tgtctgacaa caatcgtgtg 720

gcaatcatgg ctgatgagtc actgtctact ttggcatctg cattcgatct tgcacgtgat 780

cgttctgtgg atgtgttctc actgaagctg tgcaacatgg gtggtgtgtc tgcaactcag 840

aagatcgctg ctgttgctga agcatctggt atcgcatcat acggtggtac tatgcttgat 900

tcaactatcg gtacttctgt tgcacttcag ctgtactcaa ctgttccatc acttccattc 960

ggttgtgaac tgatcggtcc attcgtgttg gctgatactc tgtcacatga accactggag 1020

atccgtgact acgaacttca ggtgccaact ggtgttggtc atggtatgac tcttgatgag 1080

gacaaggtgc gtcagtacgc acgtgtgtca taa 1113

<210> 5

<211> 705

<212> DNA

<213> 人工合成(artifical synthesize)

<400> 5

atgttgtctg atggtgttga gatcacttca cgttctggtg gtcgtttcgg tgcatacctt 60

ggtaagccaa ctactgattc tgcaccaatc gtggtgattg cacaggaaat cttcggtatc 120

actccattca tccgtgaaac tgtggaatgg ctggttggtg ctggtttcgg ttgtgtgtgt 180

cctgatctgt actggcgtca ggcacctaac atcgagcttg atgcaaacgt gccatctgaa 240

cgtgaacagg cacttgcact gttccgtgac ttcgacatgg aggctggtgt gaacgatctg 300

tcatgtgcaa tcgagtacgc acgtgcactg ccattctcaa acggtcgtgt tgctgtggtg 360

ggttactgtc tgggtggtgc actggcattc gacgtggctg cacgttcact ggctgactgc 420

tcaatcggtt actatggtgt gggtcttgag aagaaggtgt cactggtgcc tgcaatcact 480

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cattcattcg cacgttcatc atcaccaaac ttcgaccagg ctgcaactac tgtggctaac 660

gcacgtactc ttgaactgct tgcaatgttg aaggacccat cataa 705

<210> 6

<211> 1065

<212> DNA

<213> 人工合成(artifical synthesize)

<400> 6

atgaagaagt tcactcttga ttatctgtca ccacgtgttg tgttcggtgc tggtactgca 60

tctgcactgc cagatgagat cggtcgtctt ggtgcacgtc gtccactggt gttgtcatca 120

cctgaacaac gtgagttggc taaggacatc gtgcgtccaa tcggtgatcg tgtggctggt 180

tacttcgatg gtgcaactat gcatgttcct gttgatgtga tccagaaggc tgaacgtgca 240

ttcaacgaca ctgatgctga ctcaatcatt gcaatcggtg gtggttcaac tactggtctt 300

gcaaagatcc tgtcaatgaa ccttgacgtg ccatctctgg tgatcccaac tacttacgct 360

ggttctgaga tgactactat ctggggtgtg actgaaggtg gtatgaagcg tactggtcgt 420

gatcctaagg tgcttcctaa gactgtgatc tacgacccac tgctgactgt ggatctgcca 480

cttgcaatct ctgtgacttc tgcactgaac gcaatcgcac atgctgctga aggtctgtac 540

tctgctgacc tgaaccctgt tctggagact atgtgcaagc agggtatctg tgcactgttc 600

gatgcaatcc cacgtctggt ggcaaagcca actgatgctg aagcacgtac tgatgcactg 660

ttcggtgcat ggatgtgtgg tactgcactg tgtcatctgg gtatgggtct gcatcataag 720

ctgtgtcata ctcttggtgg tactctgaac cttccacatg ctgagactca tgcaatcgtg 780

cttccacatg cactggcata caacctgcca tacgctgcac ctgctgagcg tctgcttcag 840

gaagttgctg gttcttctga cgtgccatct gcactgtatg acctggcacg taacgctggt 900

gcaccactgt cacttgctga gatcggtatg cgtcctgaag acatcccacg tgttcgtgat 960

cttgcacttc gtgatcagta tcctaaccca cgtccactgg agtctgacgc actggagact 1020

ctgttggtga acgcattccg tggtcgtcgt cctgacttca agtaa 1065

Claims (5)

1.一种在大肠杆菌中表达并降解对2,4-二氯苯氧基乙酸的基因簇，人工优化后的基因簇包含2,4-二氯苯氧基乙酸降解相关的六个基因：tfdA基因、tfdB基因、tfdC基因、tfdD基因、tfdE基因和tfdF基因。

2.根据权利要求1所述的2,4-二氯苯氧基乙酸降解酶基因簇，其特征在于，按照大肠杆菌密码子偏好性人工优化后，所述tfdA基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述tfdB基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述tfdC基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述tfdD基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述tfdE基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述tfdF基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

3.根据权利要求2所述的六个基因的核苷酸序列构建多基因大肠杆菌转化载体，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体为pET-28a。

4.根据权利要求4所述的大肠杆菌表达载体pET-B3164，其特征在于，该载体转化大肠杆菌后，阳性菌株能够有效去除培养基中0.6 m/L 2,4-二氯苯氧基乙酸。

5.根据权利要求5所述的大肠杆菌，其特征在于，所述大肠杆菌为BL21。