CN116870150A - Pnu112455a抑制剂和pd-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫治疗药物中的应用 - Google Patents
Pnu112455a抑制剂和pd-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫治疗药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116870150A CN116870150A CN202310886953.1A CN202310886953A CN116870150A CN 116870150 A CN116870150 A CN 116870150A CN 202310886953 A CN202310886953 A CN 202310886953A CN 116870150 A CN116870150 A CN 116870150A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pnu112455a
- antibody
- inhibitor
- hepatocellular carcinoma
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明提供了PNU112455A抑制剂和PD‑1抗体联用在制备肝细胞癌免疫药物中的应用。PNU112455A抑制剂与PD‑1抗体联合使用，对于肝细胞癌免疫的治疗具有很好的协同作用，在小鼠体内，PNU112455A抑制剂与PD‑1抗体的联合使用显著提升了PD‑1抗体治疗的效果，延长了小鼠的生存期。PD‑1抗体治疗的小鼠在肿瘤接种后60天仅有37.5%的存活率，而PNU112455A抑制剂与PD‑1抗体联合治疗的小鼠在60天后有87.5%的存活率。
Description
技术领域
本发明属于肿瘤治疗技术领域，具体涉及PNU112455A抑制剂和PD-1抗体联用在制备治疗肝细胞癌免疫的药物中的应用。
背景技术
肝癌是全世界发病率最高的恶性肿瘤之一，占全部恶性肿瘤的第6位及恶性肿瘤相关死亡的第3位。肝细胞癌是肝癌的主要类型，约占全部肝癌的90％。然而，超过70％的肝细胞癌患者在确诊时就处于进展期，已然丧失了局部切除术或者肝移植的手术指征。
2017年以来，随着美国FDA陆续批准抗PD-1药物nivolumab、pembrolizumab用于晚期肝细胞癌治疗，对于进展期肝细胞癌的治疗效果有了明显的进步，针对免疫卡控点PD-1/PD-L1的治疗也成为少数有效的治疗手段之一，但仍然不尽如人意，PD-1/PD-L1免疫卡控点阻断疗法对肝细胞癌患者的客观缓解率不足20％。因此，肝细胞癌的治疗在临床上依然是一个待解决的难题，急需寻找有效的治疗药物。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了PNU112455A抑制剂和PD-1抗体联用在制备肝细胞癌的免疫药物中的应用。两者联合使用显著提升了治疗效果，在小鼠实验中非常有效地延长了小鼠的生存期。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了PNU112455A抑制剂和PD-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫药物中的应用。
进一步地，所述PNU112455A抑制剂与PD-1抗体的质量配比为(10～20):1。优选地，所述PNU112455A抑制剂与PD-1抗体的质量配比为15:1。
本发明还提供了一种治疗肝细胞癌的免疫药物组合物，该药物组合物由PNU112455A抑制剂与PD-1抗体组成。
进一步地，所述PNU112455A抑制剂与PD-1抗体的重量比为(10～20)：1。优选地，所述PNU112455A抑制剂与PD-1抗体的质量配比为15:1。
本发明还提供了上述免疫药物组合物的制备方法，该方法为：按照重量比取PNU112455A抑制剂与PD-1抗体，然后混合，即可。
本发明还提供了一种治疗肝细胞癌的免疫药物制剂，它是由上述的免疫药物组合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
本发明还提供了一种对肝细胞癌免疫治疗的联合用药，它含有相同或者不同规格的同时或者分别给药的PNU112455A抑制剂和PD-1抗体，以及药学上可接受的载体。
进一步地，所述PNU112455A抑制剂和PD-1抗体的重量配比为(10～20)：1。
本发明具有以下积极有益效果：
PNU112455A抑制剂与PD-1抗体联合使用，对于肝细胞癌免疫的治疗具有很好的协同作用，在小鼠体内，PNU112455A抑制剂与PD-1抗体的联合使用显著提升了PD-1抗体治疗的效果，延长了小鼠的生存期。PD-1抗体治疗的小鼠在肿瘤接种后60天仅有37.5％的存活率，而PNU112455A抑制剂与PD-1抗体联合治疗的小鼠在60天后有87.5％的存活率。
附图说明
图1为PNU112455A抑制剂对肿瘤细胞中PD-L1的蛋白表达水平的影响结果图；
图2为小鼠动物实验过程示意图；
图3为PNU112455A抑制剂与PD-1抗体单独使用及联合使用对小鼠体内各因素的影响；
图4为PNU112455A抑制剂与PD-1抗体联合使用对小鼠肝细胞癌的免疫治疗效果。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明进行详细的说明以便对本发明技术方案的理解，但并不用于对本发明保护范围的限制。
本发明实施例中所用原料、设备均为已知产品，通过购买即可获得。其中，所用的PD-1抗体具体为InVivoMAb anti-mouse PD-1(CD279)，所用PNU112455A为上海陶术生物(TopScience)PNU112455Ahydrochloride。
实施例1
该实施例表明PNU112455A能够显著上调PD-L1的蛋白表达水平：
(1)在人肝细胞肝癌BEL-7402细胞培养基中加入5μM的PNU112455A处理，24小时后通过Western blot检测细胞中PD-L1表达水平。结果如图1A所示，由图1A可以看出，PNU112455A显著促进了肝癌细胞中PD-L1蛋白表达。
(2)利用CRISPR技术构建CDK5敲除的BEL-7402细胞sgCDK5-1和sgCDK5-2，对照细胞为sgCon，在细胞培养基中加入5μM的PNU112455A处理，24小时后通过Western blot检测细胞中PD-L1表达水平。结果如图1B所示，由图1B可以看出，PNU112455A显著促进了对照组肝癌细胞中PD-L1蛋白表达，但敲除CDK5后，PNU112455A并不影响细胞中PD-L1蛋白表达。结果表明PNU112455A通过CDK5调控肝癌细胞的PD-L1蛋白表达。
(3)在293T细胞培养基中加入10μM的PNU112455A处理，分别在0、6、12、24小时后通过Western blot检测细胞中PD-L1表达水平。结果如图1C所示，由图1C可以看出，随着药物处理时间的增加，293T细胞中PD-L1的蛋白表达水平逐渐上升，说明PNU112455A对293T细胞中PD-L1蛋白表达的促进作用是呈时间依赖效应。。
(4)在293T细胞培养基中，分别加入0μM、5μM、10μM、20μM的PNU112455A处理，24小时后通过Western blot检测细胞中PD-L1表达水平。结果如图1D所示，由图1D可以看出，随着药物处理剂量的增加，293T细胞中PD-L1的蛋白表达水平逐渐上升，说明PNU112455A对293T细胞中PD-L1蛋白表达的促进作用是呈剂量依赖效应。
实施例2
小鼠体内PNU112455A能够显著上调肝细胞癌细胞中PD-L1的蛋白表达水平，PNU112455A与PD-1抗体联用能够显著增加肿瘤浸润淋巴细胞的数量，升高颗粒酶B的表达：
(1)模型构建及药物评价：
将1×106个Hepa1-6小鼠肝细胞癌细胞(购自中国科学院细胞库)分别注入C56BL/6雌性小鼠右侧皮下，约9天后长出实体肿瘤，此时按照统计学方法进行随机分组，分为四组，每组8只小鼠，具体分组及给药方法如下：
对照组：从接种肿瘤细胞后第9天至第18天，每隔2天对小鼠进行药物溶剂腹腔注射，溶剂为PBS/DMSO/Solutol按体积比8:1:1配制，每只注射体积为200μL；
PD-1单抗治疗组：从接种肿瘤细胞后第9天至第18天，每隔2天对小鼠进行PD-1抗体腹腔注射，用PBS稀释，注射剂量为10mg/kg，每只注射体积为200μL；
PNU112455A治疗组：从接种肿瘤细胞后第9天至第18天，每隔2天对小鼠进行PNU112455A药物腹腔注射，注射剂量为150mg/kg，溶剂为PBS/DMSO/Solutol按体积比8:1:1配制，每只注射体积为200μL；
PD-1单抗与PNU112455A抑制剂联合治疗组：从接种肿瘤细胞后第9天至第18天，每隔2天对小鼠进行PD-1抗体腹腔注射及PNU112455A药物腹腔注射，注射剂量分别为10mg/kg和150mg/kg，溶剂为PBS/DMSO/Solutol按体积比18:1:1配制，每只注射总体积为200μL，如图2所示；
(2)免疫组化染色和评分：
小鼠肝细胞癌肿瘤组织保存在4％多聚甲醛中，按照免疫组化标准方案进行固定、切片和染色。200倍显微镜下观察CD3阳性、CD8阳性T细胞数量、颗粒酶B和PD-L1蛋白表达。其中每平方毫米肿瘤面积中CD3阳性和CD8阳性T细胞数量计算公式为200倍显微镜下计算得到的阳性细胞数除以单位面积。颗粒酶B阳性面积百分比统计方式为利用ImageJ软件分析200倍显微镜下的拍摄图像。
PD-L1蛋白表达水平应用评分公式，对免疫组化切片中阳性率以及染色强度分别评分后相乘得到综合评分，具体评分标准如下：阳性率≤5％为0分，阳性率6％-19％为1分，阳性率20％-49％为2分，阳性率50％-74％为3分，≥75％为4分。染色强度阴性为0分，弱阳性为1分，中度阳性为2分，强阳性为3分。根据两项评分的乘积，总分≤3为PD-L1低表达，总分＞3为PD-L1高表达。
免疫组化染色和评分结果如图3所示，由图3可知，每平方毫米肿瘤面积中的CD8阳性T细胞数量在PD-1单抗与PNU112455A联合治疗组中呈现最高值，显著高于对照组(P<0.001)与PD-1单抗治疗组(P<0.001)；每平方毫米肿瘤面积中的CD3阳性T细胞数量在联合治疗组中呈现最高值，显著高于对照组(P<0.001)与PD-1单抗治疗组(P<0.001)；颗粒酶B的阳性面积百分比在联合治疗组中呈现最高值，显著高于对照组(P<0.001)与PD-1单抗治疗组(P<0.001)；PD-L1的免疫组化评分则在PNU112455A单治疗组中呈现最高值，显著高于对照组(P<0.001)。
(3)免疫治疗的效果
肿瘤体积的检测：每隔两天用游标卡尺测量上述对照组、PNU112455A治疗组、PD-1单抗治疗组、PD-1单抗与PNU112455A联合治疗组小鼠皮下肿瘤的长和宽，并计算体积，体积计算公式为π/6×长×宽2。
各组小鼠的生长曲线结果如图4A所示，对照组和PNU112455A治疗组所有小鼠的肿瘤体积在观察期内均达到1500立方毫米而被处死；由图4A可知，PD-1单抗治疗组有3/8数量的小鼠肿瘤体积缩小并存活；PD-1单抗与PNU112455A联合治疗组有7/8数量的小鼠肿瘤体积缩小并存活，联合治疗组小鼠存活的数量显著高于其他各组。分析小鼠各个治疗组的Kaplan-Meier生存曲线，结果如图4B所示，PD-1单抗与PNU112455A联合治疗组的小鼠生存期显著高于PD-1单抗治疗组(P<0.01)和对照组(P<0.001)。实验结果表明，小鼠体内PNU112455A和PD-1单抗联合能够显著促进肝细胞癌免疫治疗的效果。
(4)非实验终点动物安乐标准：
若实验结束前，肿瘤达到1500立方毫米，小鼠被处死。
Claims (8)
1.PNU112455A抑制剂和PD-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PNU112455A抑制剂与PD-1抗体的质量配比为（10~20）:1。
3.一种治疗肝细胞癌的免疫药物组合物，其特征在于，该药物组合物由PNU112455A抑制剂与PD-1抗体组成。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述PNU112455A抑制剂与PD-1抗体的重量比为（10~20）：1。
5.一种权利要求3或4所述的免疫药物组合物的制备方法，其特征在于，该方法为：按照重量比取PNU112455A抑制剂与PD-1抗体混合，即可。
6.一种治疗肝细胞癌的免疫药物制剂，其特征在于，它是由权利要求3或4所述的药物组合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
7.一种对肝细胞癌免疫治疗的联合用药，其特征在于，它含有相同或者不同规格的同时或者分别给药的PNU112455A抑制剂和PD-1抗体，以及药学上可接受的载体。
8.根据权利要求7所述的联合用药，其特征在于，所述PNU112455A抑制剂和PD-1抗体的重量配比为（10~20）：1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310886953.1A CN116870150A (zh) | 2023-07-19 | 2023-07-19 | Pnu112455a抑制剂和pd-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫治疗药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310886953.1A CN116870150A (zh) | 2023-07-19 | 2023-07-19 | Pnu112455a抑制剂和pd-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫治疗药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116870150A true CN116870150A (zh) | 2023-10-13 |
Family
ID=88271150
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310886953.1A Pending CN116870150A (zh) | 2023-07-19 | 2023-07-19 | Pnu112455a抑制剂和pd-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫治疗药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116870150A (zh) |
-
2023
- 2023-07-19 CN CN202310886953.1A patent/CN116870150A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2011068696A (ja) | 腎細胞腫を治療するためのＣＧ２５０およびＩＬ−２またはＩＦＮ−αを含有する抗腫瘍剤 | |
| Gao et al. | Environment-responsive dendrobium polysaccharide hydrogel embedding manganese microsphere as a post-operative adjuvant to boost cascaded immune cycle against melanoma | |
| CN108498802A (zh) | 用于治疗非小细胞肺癌的药物组合物及其制剂 | |
| WO2016119308A1 (zh) | 一种抗肿瘤制剂及其制备方法 | |
| CN110075269B (zh) | Murabutide在制备电离辐射致骨髓、小肠和脾脏损伤防治药物中应用 | |
| CN114159557B (zh) | 一种治疗肿瘤疾病的联合用药组合物及应用 | |
| CN116870150A (zh) | Pnu112455a抑制剂和pd-1抗体联用在制备肝细胞癌免疫治疗药物中的应用 | |
| Meza et al. | Filgrastim‐mediated neutrophil recovery in patients with breast cancer treated with docetaxel and doxorubicin | |
| WO2016127848A1 (zh) | 绿原酸在制备预防和治疗原发性皮肤t细胞淋巴癌的药物中的用途 | |
| CN115154612B (zh) | 药物组合物及其在制备抗肿瘤的联合治疗药物中的应用 | |
| CN113905764B (zh) | 用于治疗癌症的前体半胱天冬酶-3活化作用和免疫疗法 | |
| CN119894507A (zh) | 嵌合抗原受体（car）t细胞辅助疗法 | |
| JP2003520247A (ja) | 癌を処置するためのテモゾロミドとペグ化インターフェロンαとの組み合せ | |
| RU2524309C1 (ru) | Способ выбора тактики лечения местно-распространенного рака предстательной железы | |
| CN110947004B (zh) | 药物组合物及其应用、无菌容器和试剂盒 | |
| CN118076377A (zh) | 人类表皮生长因子第二型受体疫苗组成物 | |
| US20090117076A1 (en) | Methods For Treating Tumor Cells | |
| TWI882612B (zh) | 藥物組合及其應用 | |
| US20260048111A1 (en) | Pharmaceutical Composition, Preparation Method and Use Thereof | |
| CN107617101B (zh) | 含唑来膦酸和白细胞介素2的药物组合及其应用 | |
| CN116768982B (zh) | 一种多肽及其在制备防治肿瘤的药物中的应用 | |
| CN105833173B (zh) | 冬凌草甲素联合姜黄素在制备白血病治疗药物中的应用 | |
| NL2032833B1 (en) | Preparation method for bombyx batryticatus extraction and application thereof | |
| CN119174749A (zh) | 一种白花丹素在抗非小细胞肺癌药物中的实验方法 | |
| WO2024192715A1 (zh) | 一种灵芝孢子粉在制备治疗黑色素瘤的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |