[go: up one dir, main page]

CN116850307A - 一种多肽tp-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用 - Google Patents

一种多肽tp-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116850307A
CN116850307A CN202310750876.7A CN202310750876A CN116850307A CN 116850307 A CN116850307 A CN 116850307A CN 202310750876 A CN202310750876 A CN 202310750876A CN 116850307 A CN116850307 A CN 116850307A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peg
tumor
mpa
cancer
prepared
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310750876.7A
Other languages
English (en)
Inventor
周坤城
涂远彪
陈淑莹
陶添明
韩平畴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine
Original Assignee
Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine filed Critical Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine
Priority to CN202310750876.7A priority Critical patent/CN116850307A/zh
Publication of CN116850307A publication Critical patent/CN116850307A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及荧光造影剂、放射性药物和核医学技术领域，具体公开了一种多肽TP‑6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用，所述多肽TP‑6为：D‑Arg‑L‑Lys‑L‑Asp‑L‑Nva‑D‑Tyr，其中，D表示非天然D型氨基酸，L表示L型天然氨基酸，Nva为正缬氨酸。本发明中的多肽TP‑6构建的分子探针可特异性靶向至肿瘤部位，并且在肿瘤部位有良好的摄取和滞留能力，具有高的靶/非靶比值，适合用于制备肿瘤术中影像导航试剂以及制备放射性药物，用于肿瘤核医学诊断及精准放疗。

Description

一种多肽TP-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用
技术领域
本发明是申请号为2021115423051申请案的分案申请，申请日为2021年12月16日。
本发明涉及荧光造影剂、放射性药物和核医学技术领域，具体涉及一种多肽TP-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用。
背景技术
恶性肿瘤己经成为威胁人类健康和生命的“第一号杀手”，毋庸置疑，恶性肿瘤的诊断及针对肿瘤有效的治疗迫在眉睫。周所周知，肿瘤靶向的分子影像探针是肿瘤诊断、分期及术中导航的有利的工具。其中，肿瘤特异性靶向的配体是肿瘤靶向分子探针的关键所在。目前设计筛选靶向配体的方法主要包括计算机辅助药物设计、先导化合物修饰改造、从代谢产物中发现、药物合成中间体中发现、组合化学和高通量筛选、天然化合物中分离提取、噬菌体展示库筛选以及“老药新用”。1988诺贝尔生理学或医学奖获得者詹姆斯·布莱克提出，新药发现的最佳之路起始于老药。“老药”是指有确定的药代动力学信息和毒理学信息的已上市或处于临床的药物，安全性高是其最明显的特点。詹姆斯·布莱克开发的非选择性β受体拮抗剂普萘洛尔和第一个组胺H2受体拮抗剂西咪替丁是“老药新用”的典型例子。普萘洛尔是治疗冠心病和高血压的经典药物，现被用于骨质疏松症和黑色素瘤的治疗；西咪替丁是治疗消化性胃溃疡的革命性药物，经证明适用于治疗慢性阻塞性肺疾病、HIV病毒感染等；《Nature》指出二甲双胍与另一种“老药新用”血红素联用，可用于治疗三阴乳腺癌；又如俗称“砒霜”的三氧化二砷是一种剧毒，最新研究发现其可用于治疗急性早幼粒细胞白血病；由此可见，“老药新用”策略在药物开发中具有重要指导意义，因此运用“老药新用”策略筛选肿瘤的靶向药物是一种快速有效的方法。
胸腺五肽是哺乳动物体内的一种重要的生物活性物质，它在维持免疫系统平衡及抗肿瘤、抗微生物感染等方面起着重要作用。胸腺五肽是胸腺生成素Ⅱ中第32～36位的氨基酸残基片段，保留了胸腺生成素生物学活性，具有和胸腺提取物胸腺素和胸腺肽相同的生理功能和药效。基于“老药新用”策略，关于胸腺五肽还具有何种作用，现有技术并未报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种多肽TP-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用，提供了多肽TP-6的新用途。
本发明提供了一种多肽TP-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用，所述多肽TP-6的氨基酸序列为D-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Nva-D-Tyr，其中，D表示非天然D型氨基酸，L表示L型天然氨基酸，Nva为正缬氨酸。
进一步地，所述肿瘤包括肺癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌、胃癌和乳腺癌中的一种或多种
进一步地，所述试剂包括荧光显像剂和/或放射性试剂，所述荧光显像剂包括肿瘤边界精准定位和/或术中影像导航光学显像试剂。
进一步地，所述试剂具备以下通式：M-L-G；
所述M表示光标记、金属螯合剂与金属放射性核素络合物、非金属放射性核素18F和11C中的任一种；
L为连接基团；
G为多肽TP-6；
所述光标记包括有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物和生物发光分子中的一种或多种；
所述金属螯合剂选自联肼尼克酰胺、1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸、7-[(4-羟基丙基)亚甲基]-1,4,7-三氮杂化壬烷-1,4-二乙酸、1,4,7,10-四氮杂环四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、巯基乙酰三甘氨酸、二乙基三胺五乙酸或它们的组合修饰。
进一步地，所述光标记包括近红外一区荧光染料和/或近红外二区荧光染料，所述近红外一区荧光染料包括MPA、IRDye800、Cy7.5、ICG和Cy5.5中的一种或多种。
进一步地，所述连接基团包括6-氨基己酸、NH2-PEG3-COOH、NH2-PEG4-COOH、NH2-PEG6-COOH和NH2-GGGGGG-COOH中一种或多种。
进一步地，所述试剂包括新型环肽。
进一步地，所述试剂包括MPA-PEG4-TP-6、MPA-PEG3-TP-6和99mTc-HYNIC-PEG4-TP-6。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1、本发明提供了一种新型环肽在制备肿瘤诊断和或治疗试剂中的应用，新型环肽构建的分子探针可特异性靶向至肿瘤部位，并且在肿瘤部位有良好的摄取和滞留能力，具有高的靶/非靶比值，适合用于制备肿瘤术中影像导航试剂以及制备放射性药物，用于肿瘤核医学诊断及精准放疗。
2、新型环肽构建体内分子探针在安全性方面具有独特的优势，可显著降低药物的研发成本及风险；
借助胸腺五肽能特异性靶向肿瘤的性质，通过新型环肽偶联荧光染料构建荧光探针，可在术中协助医生精确定位肿瘤边界，达到对肿瘤精准切除的目的。另外，胸腺五肽及其衍生物还可偶联具有诊断/治疗功能的放射性核素构建相应的放射性药物，可达到对肿瘤诊断和精准放射治疗的目的。
3、基于新型环肽构建的分子探针经体内光学和放射性核素显像结果证实对多种肿瘤具有优异的靶向效果，包括肝癌、肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等。所述探针可特异性靶向肿瘤部位的特性将有可能实现对恶性肿瘤的核医学诊断、治疗以及光学手术导航。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为MPA-PEG3-TP-1-NH2的质谱图。
图2为制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在荷瘤鼠体内的2h荧光成像；其中A为在肺癌A549荷瘤鼠体内的荧光成像；B为在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像；C为在胰腺癌CFPAC-1荷瘤鼠体内的荧光成像；D为在肺癌H1299荷瘤鼠体内的荧光成像；E为在结直肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像；F为在肝癌HepG2荷瘤鼠体内的荧光成像；G为在结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的荧光成像；H为在乳腺癌MAD-MB-231荷瘤鼠体内的荧光成像；I为在胃癌MGC-803荷瘤鼠体内的荧光成像；J为在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的荧光成像；K为在乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的荧光成像；L为在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的荧光成像；
图3为制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-2、MPA-PEG4-TP-3、MPA-PEG4-TP-4、MPA-PEG4-TP-5、MPA-PEG4-TP-6、MPA-PEG4-TP-8、MPA-PEG4-TP-9在荷瘤鼠体内的2h荧光成像；其中A为MPA-PEG4-TP-2在肺癌A549荷瘤鼠体内的荧光成像；B为MPA-PEG4-TP-3在胃癌SGC-803荷瘤鼠体内的荧光成像；C为MPA-PEG4-TP-4在乳腺癌MDA-MB-468荷瘤鼠体内的荧光成像；D为MPA-PEG4-TP-5在乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的荧光成像；E为MPA-PEG4-TP-6在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像；F为MPA-PEG4-TP-8在肺癌H1299荷瘤鼠体内的荧光成像；G为MPA-PEG4-TP-9在结肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像；
图4为制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-7在荷瘤鼠体内的2h荧光成像；其中A为在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像；B为在结直肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像；C为在乳腺癌MDA-MB-231荷瘤鼠体内的荧光成像；D为在胰腺癌MiaPaCa-2荷瘤鼠体内的荧光成像；E为在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的荧光成像；
图5为制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-10在荷瘤鼠体内的2h荧光成像；其中A为在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像；B为在结直肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像；C为在乳腺癌MDA-MB-231荷瘤鼠体内的荧光成像；D为在胰腺癌MiaPaCa-2荷瘤鼠体内的荧光成像；E为在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的荧光成像；
图6为制备的单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2在荷瘤鼠体内1h的SPECT-CT成像；其中A为在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；B为在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；C为在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；D为在乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；E为在结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；
图7为制备的单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7在荷瘤鼠体内1h的SPECT-CT成像；其中A为在乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；B为在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；C为在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；D为在结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；E为在胃癌MGC-803荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；E为在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像；
图8为制备的二聚体放射性化合物99mTc-HYNIC-2Aca-(TP-1-NH2)2分别在胰腺癌AsPC-1和结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明提供了胸腺五肽及其衍生物在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用，所述胸腺五肽选自以下多肽中的一种或多种：
TP-1：L-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Val-L-Tyr(Thymopentin)；
TP-2：L-homo-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Nva-L-Tyr；
TP-3：D-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Val-L-Tyr；
TP-4：D-Arg-D-Lys-L-Asp-L-Val-L-Tyr；
TP-5：D-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Val-D-Tyr；
多肽TP-6：D-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Nva-D-Tyr；
TP-7：L-Cys-L-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Val-L-Tyr-L-Cys，其中Cys-Cys二硫键成环；
TP-8：β-Ala-L-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Val-L-Tyr-L-Asp，其中N端氨基和C端Asp的侧链羧基成酰胺环(新型环肽)；
TP-9：D-Lys-L-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Val-L-Tyr-L-Glu，其中N端主链氨基和C端Glu的侧链羧基成酰胺环；
TP-10：D-Lys-L-Gly-L-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Val-L-Tyr-L-Asp，其中N端主链氨基和C端Asp的主链羧基成酰胺环；
其中：D表示非天然D型氨基酸，L表示L型天然氨基酸；homoArg为高精氨酸；Nva为正缬氨酸。
在本发明中，所述肿瘤优选包括肺癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌、胃癌和乳腺癌中的一种或多种。
本发明优选将胸腺五肽及其衍生物偶联显像基团，得到试剂。在本发明中，所述试剂优选包括荧光显像剂和/或放射性试剂，所述荧光显像剂优选包括肿瘤边界精准定位和/或术中影像导航光学显像试剂。
在本发明中，所述试剂具备以下通式：M-L-G；所述M表示光标记、金属螯合剂与金属放射性核素络合物、非金属放射性核素18F和11C中的任一种；L为连接基团；G为胸腺五肽及其衍生物(多肽)。在本发明中，所述光标记优选包括有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物和生物发光分子中的一种或多种。在本发明中，所述金属螯合剂优选选自联肼尼克酰胺、1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸、7-[(4-羟基丙基)亚甲基]-1,4,7-三氮杂化壬烷-1,4-二乙酸、1,4,7,10-四氮杂环四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、巯基乙酰三甘氨酸、二乙基三胺五乙酸或它们的组合修饰。在本发明中，所述光标记优选包括近红外一区荧光染料和/或近红外二区荧光染料，所述近红外一区荧光染料包括MPA、IRDye800、Cy7.5、ICG和Cy5.5中的一种或多种。在本发明中，所述连接基团优选包括6-氨基己酸、NH2-PEG3-COOH、NH2-PEG4-COOH、NH2-PEG6-COOH和NH2-GGGGGG-COOH中一种或多种。
在本发明中，所述胸腺五肽及其衍生物以及基于其的近红外荧光探针由杭州固拓生物科技有限公司通过固相方法合成，包括：
1)近红外荧光染料MPA的合成
将冰醋酸、对肼基苯磺酸、甲基异丙基酮和醋酸钠混合反应，纯化后得产物2,2,3-三甲基[3H]-吲哚-5-磺酸；再将邻二氯苯加入到2,2,3-三甲基[3H]-吲哚-5-磺酸与1,3-丙磺酸内脂的混合物中，制得2,2,3-三甲基-5-磺酸-1-(3-磺酸-丙基)-[3H]-吲哚。再将该产物与N-[(3-(anilinomethylene)-2-chloro-1-cyclohexen-1-yl)methylene]-anilinemonohydrochloride反应得到绿色碳菁染料，最后将碳菁染料与巯基丙酸及三乙胺反应，制备液相分离纯化得水溶性近红外染料MPA。
2)MPA-L-TP-X(X＝1-10)的合成
选择Loading为0.45mmol/g的Ramage Amide AM resin树脂，溶胀后脱除Fmoc保护基。按照多肽序列，依次从C端到N端进行偶联直至Fmoc-L-羧基，取小样切割后通过质谱检测多肽的分子量，其中Tyr、Asp、Lys、Arg的侧链分别用tBu、OtBu、Boc、Arg保护。所用氨基酸均为Fmoc保护α位氨基；确定多肽Fmoc-L-TP-X-NH2质谱正确后，脱除Fmoc保护基，加入摩尔倍数为1.2倍的近红外染料MPA进行固相反应，茚三酮检测呈阴性后结束反应。通过裂解液(TFA：三异丙基硅烷：水＝95：2.5：2.5)与直链肽树脂反应，得到脱除所有侧链保护基的MPA-L-TP-X-NH2；将MPA-L-TP-X-NH2溶解在水中，使用半制备色谱纯化，分离出纯度合格的液体，收集旋蒸冻干后即目的产品。
基于胸腺五肽及其衍生物构建的放射性核素探针单体形式较二聚体形式制备简单，其二聚体结构中含有用于靶向肿瘤的胸腺五肽及其衍生物和用于放射性标记的双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)，以及起到增加胸腺五肽或其类似物与放射性核素配体N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)和三苯基膦三间磺酸钠盐(TPPTS)之间距离并调节体内药代动力学特性的连接剂L，L选自6-氨基己酸、NH2-PEG3-COOH、NH2-PEG4-COOH、NH2-PEG6-COOH或NH2-GGGGGG-COOH中的任意一种或多种。
通过改变双功能螯合剂可达到偶联不同放射性核素的目的。比如将联肼尼克酰胺替换成双功能螯合剂1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸、7-[(4-羟基丙基)亚甲基]-1,4,7-三氮杂化壬烷-1,4-二乙酸、1,4,7,10-四氮杂环四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、巯基乙酰三甘氨酸或二乙基三胺五乙酸中的任一种，放射性核素99mTc可替换为68Ga、64Cu、67Ga、90Y、111In、89Zr或177Lu。或者将放射性核素124I、125I、131I直接标记在游离肽TP-X结构中的Tyr上，以实现疾病诊断/治疗的功能。
在本发明中，所述单体放射性核素探针制备的方法，包括：
1)双功能螯合剂HYNIC-L-NHS的合成
将6-氯烟酸和80％水合肼加入到乙醇中，加热回流反应，反应完成后减压旋蒸溶剂，得到的粘稠物加入到蒸馏水中，调PH＝5.5，析出固体，抽滤烘干得到黄色固体，产品经ESI-MS质谱和核磁氢谱确定为6-联肼烟酸。得到的6-联肼烟酸和对氨基苯甲醛加入到二甲基亚砜(DMSO)中，加热反应5-6小时，反应完成后加入到水中析出，抽滤得固体，此固体烘干后与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)以及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)一起加入到DMSO中室温反应，反应完成后加入水中析出固体，此固体通过硅胶柱纯化后经ESI-MS质谱和核磁氢谱确定为中间体HYNIC-NHS，然后此中间体和连接剂L在碱性条件下反应，最后用活化剂EDCI和NHS活化，纯化后得到HYNIC-L-NHS固体待用。
2)HYNIC-L-TP-X(X＝1-10)的合成
将纯化的中间体HYNIC-L-NHS溶于DMSO中，加入1-1.5摩尔量的TP-X，然后再加入2-3摩尔量的DIPEA，室温反应1-2小时，反应完成后通过制备液相进行分离纯化并通过质谱确证。
3)99mTc-HYNIC-L-TP-X(X＝1-10)的合成
分别配制浓度为100.0-120mg/mL的TPPTS(三苯基磷三间磺酸钠)溶液，浓度为130.0-150mg/mL的Tricine(三甲基甘氨酸)，浓度为102.4-110mg/mL丁二酸-丁二酸钠缓冲液(其中丁二酸77.0-88.8mg，丁二酸钠25.4-29.3mg)，分别取10.0uL TPPTS溶液，10.0uLTricine溶液，10.0uL丁二酸-丁二酸钠缓冲液分别和10.0uL(1.0mg/mL)所述HYNIC-L-TP-X混合于西林瓶中，然后加入10mCi Na 99mTcO4于100℃金属浴加热20-30分钟，待反应结束后冷却至室温，产品经HPLC分析鉴定后得到。
在本发明中，所述二聚体放射性核素探针制备的方法，优选包括：
1)双功能螯合剂HYNIC-L-NHS的合成
方法同单体放射性核素探针制备步骤1)。
2)支架(2L-谷氨酸)的合成
取适量的Boc-谷氨酸溶于DMSO中，加入2-3倍摩尔量的EDCI和NHS 60度加热反应0.5-1小时后HPLC分析谷氨酸双活化酯已生成，然后往溶液中加入2-3倍摩尔量的连接剂L和2-3倍摩尔量的DIPEA60℃加热反应0.5-1小时后HPLC分析2分子连接剂L已连接上谷氨酸，然后加入等体积的TFA室温反应过夜脱除Boc保护，最后粗品经制备液相分离后冷冻干燥待用。
3)中间体2L-E-HYNIC-NHS的合成
将制备得到的支架2L-谷氨酸溶于DMSO中，然后加入相同摩尔量的HYNIC-L-NHS，再加入2-3倍摩尔量的DIPEA，室温反应1-2小时，反应完成后通过制备液相分离纯化并通过质谱对目标化合物进行确证，纯化后的产物用EDCI和NHS活化，纯化后得到2L-E-HYNIC-NHS待用。
4)(TP-X)2-2L-E-HYNIC(X＝1-10)的合成
将纯化的中间体2L-E-HYNIC-NHS溶于DMSO中，加入1-1.5摩尔量的TP-X，然后再加入2-3摩尔量的DIPEA，室温反应1-2小时，反应完成后通过制备液相进行分离纯化并通过质谱确证。
5)放射性探针99mTc-HYNIC-2L-E-(TP-X)2(X＝1-10)的合成
分别配制浓度为100.0 -120mg/mL的TPPTS(三苯基磷三间磺酸钠)溶液，浓度为130.0-150mg/mL的Tricine(三甲基甘氨酸)，浓度为102.4-110mg/mL丁二酸-丁二酸钠缓冲液(其中丁二酸77.0-88.8mg，丁二酸钠25.4-29.3mg)，分别取10.0uL TPPTS溶液，10.0uLTricine溶液，10.0uL丁二酸-丁二酸钠缓冲液分别和10.0uL(1.0mg/mL)所述HYNIC-2L-E-(TP-X)2混合于西林瓶中，然后加入10mCi Na 99mTcO4于100℃金属浴加热20-30分钟，待反应结束后冷却至室温，产品经HPLC分析鉴定得到。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1：MPA-PEG3-TP-1-NH2的合成。
选择Loading为0.45mmol/g的Ramage Amide AM resin树脂，溶胀后脱除Fmoc保护基。按照胸腺五肽序列：Arg-Lys-Asp-Val-Tyr，依次从C端到N端进行偶联直至Fmoc-PEG3-丙酸，其中Tyr、Asp、Lys、Arg的侧链分别用tBu、OtBu、Boc、Arg进行保护，所用氨基酸均为Fmoc保护α位氨基。取小样切割后通过质谱检测多肽的分子量，确定多肽Fmoc-PEG3-TP-X-NH2质谱正确后，脱除Fmoc保护基，加入摩尔倍数为1.2倍的近红外染料MPA进行固相反应，茚三酮检测呈阴性后结束反应。通过裂解液(TFA:三异丙基硅烷:水＝95:2.5:2.5)与直链肽树脂反应，得到脱除所有侧链保护基的MPA-PEG3-TP-1-NH2，将MPA-PEG3-TP-1-NH2溶解在水中，使用半制备色谱纯化，分离出纯度合格的液体，收集旋蒸冻干后，经ESI-MS质谱分析确认为目标化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2，ESI-MS：[M-2H]2-＝895.96以及[M-3H]3-＝597.26(图1)。
实施例2：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在肺癌A549荷瘤鼠体内的荧光成像。
取制备好的荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2并配制成生理盐水溶液(100nmol/mL)，取0.1mL(约10nmol)分别注射于3只肺癌A549荷瘤裸鼠(体重约22克)尾静脉，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行光学信号采集。观察荧光药物在模型鼠体内的分布以及在肿瘤区域的富集情况。结果见图2中的A，结果表明荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向肺癌(A549)部位。
实施例3：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只胰腺癌AsPC-1荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的B，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向胰腺癌(AsPC-1)部位。
实施例4：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在胰腺癌CFPAC-1荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只胰腺癌CFPAC-1荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的C，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向胰腺癌(CFPAC-1)部位。
实施例5：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在肺癌H1299荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只肺癌H1299荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的D，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向肺癌(H1299)部位。
实施例6：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在结直肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只结直肠癌HCT116荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。观察荧光药物在模型鼠体内的分布以及在肿瘤区域的富集情况。结果见图2中的E，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向结直肠癌(HCT116)部位。
实施例7：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在肝癌HepG2荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只肝癌HepG2荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的F，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向肝癌(HepG2)部位。
实施例8：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只结直肠癌HT29荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的G，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向结直肠癌(HT29)部位。
实施例9：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在乳腺癌MAD-MB-231荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只乳腺癌MAD-MB-231荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的H，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向乳腺癌(MAD-MB-231)部位。
实施例10：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在胃癌MGC-803荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只胃癌MGC-803荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的I，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向胃癌(MGC-803)部位。
实施例11：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只胃癌SGC-7901荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的J，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向胃癌(SGC-7901)部位。
实施例12：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的K，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向乳腺癌(MCF-7)部位。
实施例13：实施例1制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-1-NH2在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-1-NH2分别注射于3只胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图2中的L，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-1-NH2能特异性靶向胰腺癌(MiaPaPc-2)部位。
实施例14：制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-2(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-2即可)在肺癌A549荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG4-TP-2分别注射于3只肺癌A549荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图3中的A，可见荧光探针MPA-PEG4-TP-2能特异性靶向肺癌(A549)部位。
实施例15：制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-3(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-3即可)在胃癌SGC-803荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG4-TP-3分别注射于3只胃癌SGC-803荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图3中的B，可见荧光探针MPA-PEG4-TP-3能特异性靶向胃癌(SGC-803)部位。
实施例16：制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-4(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-4即可)在乳腺癌MDA-MB-468荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG4-TP-4分别注射于3只乳腺癌MDA-MB-468荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图3中的C，可见荧光探针MPA-PEG4-TP-4能特异性靶向乳腺癌(MDA-MB-468)部位。
实施例17：制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-5(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-5即可)在乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG4-TP-5分别注射于3只乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图3中的D，可见荧光探针MPA-PEG4-TP-5能特异性靶向乳腺癌(MCF-7)部位。
实施例18：制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-6(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-6即可)在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG4-TP-6分别注射于3只胰腺癌AsPC-1荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图3中的E，可见荧光探针MPA-PEG4-TP-6能特异性靶向胰腺癌(AsPC-1)部位。
实施例19：制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-8(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-8即可)在肺癌H1299荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG4-TP-8分别注射于3只肺癌H1299荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图3中的F，可见荧光探针MPA-PEG4-TP-8能特异性靶向肺癌(H1299)部位。
实施例20：制备的单体荧光化合物MPA-PEG4-TP-9(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-9即可)在结肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG4-TP-8分别注射于3只结肠癌HCT116荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图3中的G，可见荧光探针MPA-PEG4-TP-9能特异性靶向结肠癌(HCT116)部位。
实施例21：制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-7(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-7即可)在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-7分别注射于3只胰腺癌AsPC-1荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图4中的A，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-7能特异性靶向胰腺癌(AsPC-1)部位。
实施例22：实施例21制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-7在结直肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-7分别注射于3只结直肠癌HCT116荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图4中的B，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-7能特异性靶向结直肠癌(HCT116)部位。
实施例23：实施例21制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-7在乳腺癌MAD-MB-231荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-7分别注射于3只乳腺癌MAD-MB-231荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图4中的C，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-7能特异性靶向乳腺癌(MAD-MB-231)部位。
实施例24：实施例21制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-7在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-7分别注射于3只胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图4中的D，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-7能特异性靶胰腺癌(MiaPaPc-2)部位。
实施例25：实施例21制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-7在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-7分别注射于3只胃癌SGC-7901荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图4中的E，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-7能特异性靶胃癌(SGC-7901)部位。
实施例26：制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-10(制备方法同实施例1，将TP-1-NH2替换为TP-10即可)在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-10分别注射于3只胰腺癌AsPC-1荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图5中的A，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-10能特异性靶胰腺癌(AsPC-1)部位。
实施例27：制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-10在结直肠癌HCT116荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-10分别注射于3只结直肠癌HCT116荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图5中的B，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-10能特异性靶结直肠癌(HCT116)部位。
实施例28：制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-10在乳腺癌MAD-MB-231荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-10分别注射于3只乳腺癌MAD-MB-231荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图5中的C，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-10能特异性靶乳腺癌(MAD-MB-231)部位。
实施例29：制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-10在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-10分别注射于3只胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图5中的D，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-10能特异性靶胰腺癌(MiaPaPc-2)部位。
实施例30：制备的单体荧光化合物MPA-PEG3-TP-10在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的荧光成像。
按实施例2相同方法将MPA-PEG3-TP-10分别注射于3只胃癌SGC-7901荷瘤裸鼠，并于给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h进行荧光信号采集。结果见图5中的E，可见荧光探针MPA-PEG3-TP-10能特异性靶胃癌(SGC-7901)部位。
实施例31：单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
1)双功能螯合剂HYNIC-PEG4-NHS的合成
将1g 6-氯烟酸和2.0mL 80％水合肼加入到10mL乙醇中，加热回流反应4小时，反应完成后减压旋蒸溶剂，得到的粘稠物加入到蒸馏水中，调pH＝5.5左右，析出固体，抽滤烘干得到黄色固体0.86g，产品经ESI-MS质谱和核磁氢谱确定为6-联肼烟酸。得到的0.86g 6-联肼烟酸和0.61g对氨基苯甲醛加入到3.0mL二甲基亚砜(DMSO)中，加热反应5-6小时，反应完成后加入到水中析出，抽滤，烘干得固体1.2g。此烘干的1.2g固体后与2.5g EDCI及1.5gNHS一起加入到DMSO中室温反应，反应完成后加入水中析出固体，此固体通过硅胶柱纯化后干燥，称重1.3g，经ESI-MS质谱和核磁氢谱确定为HYNIC-NHS，ESI-MS：[M+H]＝382.1508。此产物纯化后加入到含有DIPEA的PEG4中，室温反应2小时，反应完成后往溶液中加入2倍摩尔量的EDCI和NHS，反应完成后通过制备液相分离纯化，冷冻干燥后经质谱验证为目标产物HYNIC-PEG4-NHS，ESI-MS：[M+H]＝630.3及[M+Na]+＝652.3。
2)将纯化的5mg中间体HYNIC-PEG4-NHS溶于0.3mL DMSO中，往混合液中加入3mgTP-1以及5.6mg DIPEA，室温反应2小时。反应完成后通过制备液相进行分离纯化产物，最后得到黄色固体2.8mg，通过质谱确证为目标产物HYNIC-PEG4-TP-1-NH2，ESI-MS：[M+2H]2+＝596.81及[M+3H]3+＝398.18。
3)放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2的合成
分别配制浓度为100.0mg/mL的TPPTS(三苯基磷三间磺酸钠)溶液，浓度为130.0mg/mL的Tricine(三甲基甘氨酸)，浓度为102.4mg/mL丁二酸-丁二酸钠缓冲液(其中丁二酸77.0mg，丁二酸钠25.4mg)，分别取10.0uL TPPTS溶液，10.0uL Tricine溶液，10.0uL丁二酸-丁二酸钠缓冲液分别和10.0uL(1.0mg/mL)以及HYNIC-PEG4-TP-1-NH2混合于西林瓶中，然后加入10mCi Na 99mTcO4于100℃金属浴加热20分钟，待反应结束后冷却至室温，制得放射性药物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2，产品经HPLC分析鉴定。
放射性化合物999mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只胰腺癌AsPC-1荷瘤裸鼠尾静脉，并于给药后0.5h、1h、2h、3h、4h进行SPECT-CT信号采集。观察放射性核素探针在小鼠体内的分布以及在肿瘤区域的富集情况。结果见图6中的A，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2能特异性靶向胰腺癌(AsPC-1)部位。
实施例32：单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只胃癌SGC-7901荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图6中的B，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2能特异性靶向胃癌(SGC-7901)部位。
实施例33：单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图6中的C，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2能特异性靶向胰腺癌(MiaPaPc-2)部位。
实施例34：单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图6中的D，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2能特异性靶向乳腺癌(MCF-7)部位。
实施例35：单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只结直肠癌HT29荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图6中的E，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-1-NH2能特异性靶向结直肠癌(HT29)部位。
实施例36：单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7(制备方法同实施例31，将TP-1-NH2替换为TP-7即可)在乳腺癌MCF-7荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图7中的A，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7能特异性靶向乳腺癌(MCF-7)部位。
实施例37：制备的单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只胰腺癌AsPC-1荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图7中的B，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7能特异性靶向胰腺癌(AsPC-1)部位。
实施例38：制备的单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7在胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只胰腺癌MiaPaPc-2荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图7中的C，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7能特异性靶向胰腺癌(MiaPaPc-2)部位。
实施例39：单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7在结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只结直肠癌HT29荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图7中的D，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7能特异性靶向结直肠癌(HT29)部位。
实施例40：制备的单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7在胃癌MGC-803荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只胃癌MGC-803荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图7中的E，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7能特异性靶向胃癌(MGC-803)部位。
实施例41：制备的单体放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7在胃癌SGC-7901荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只胃癌MGC-803荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图7中的F，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-PEG4-TP-7能特异性靶向胃癌(SGC-7901)部位。
实施例42：二聚体99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2的放射合成。
1)双功能螯合剂HYNIC-NHS的合成
将1g 6-氯烟酸和2.0mL 80％水合肼加入到10mL乙醇中，加热回流反应4小时，反应完成后减压旋蒸溶剂，得到的粘稠物加入到蒸馏水中，调pH＝5.5左右，析出固体，抽滤烘干得到黄色固体0.86g，产品经ESI-MS质谱和核磁氢谱确定为6-联肼烟酸。得到的0.86g 6-联肼烟酸和0.61g对氨基苯甲醛加入到3.0mL二甲基亚砜(DMSO)中，加热反应5-6小时，反应完成后加入到水中析出，抽滤，烘干得固体1.2g。此烘干的1.2g固体后与2.5g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)以及1.5g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)一起加入到DMSO中室温反应，反应完成后加入水中析出固体，此固体通过硅胶柱纯化后干燥，称重1.3g，经ESI-MS质谱和核磁氢谱确定为目标产物HYNIC-NHS，ESI-MS：[M+H]＝382.15。
2)支架(Aca)2-E的合成
将5.0g叔丁氧羰基(t-Butyloxy carbony)保护的谷氨酸(E)，8.3g二环己基碳二亚胺(DCC)以及4.6g NHS加入到100mL有机溶剂四氢呋喃(THF)中，室温搅拌过夜进行双羧基活化，反应完成后抽滤，滤液用THF进行洗涤，洗涤完成后不进一步纯化，直接加入到50mL的二甲基亚砜(DMSO)中溶解，然后加入10g氨基己酸(Aca)，最后加入14.6g DIPEA室温反应2小时，检测反应完成后，往反应中加入3.0mL三氟乙酸(TEA)进行Boc保护基的脱除，反应完成后通过制备液相进行分离纯化，最后烘干得到稠状固体7.8g，通过质谱验证为预期目标物(Aca)2-E。
3)中间体HYNIC-E-(Aca)2-2NHS的合成
将制备得到的0.5g支架(Aca)2-E溶于DMSO中，然后加入0.28gHYNIC-NHS，再加入0.32g DIPEA，室温反应2小时，然后加入EDCI和NHS活化，反应完成后通过制备液相分离纯化并冷冻干燥，得到黄的固体0.34g，通过质谱验证为预期目标化合物HYNIC-E-(Aca)2-2NHS。
4)HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2的合成
将纯化的5mg中间体HYNIC-E-(Aca)2-2NHS溶于0.3mL DMSO中，反应完成后加入5mg TP-1，然后再加5.6mg DIPEA，室温反应2小时，反应完成后通过制备液相进行分离纯化，最后得到黄色固体3.5mg，通过质谱确证为目标产物。
5)99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2的制备
分别配制浓度为100.0mg/mL的TPPTS(三苯基磷三间磺酸钠)溶液，浓度为130.0mg/mL的Tricine(三甲基甘氨酸)，浓度为102.4mg/mL丁二酸-丁二酸钠缓冲液(其中丁二酸77.0mg，丁二酸钠25.4mg)，分别取10.0uL TPPTS溶液，10.0uL Tricine溶液，10.0uL丁二酸-丁二酸钠缓冲液分别和10.0uL(1.0mg/mL)以及HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2混合于西林瓶中，然后加入10mCi Na 99mTcO4于100℃金属浴加热20分钟，待反应结束后冷却至室温，制得放射性药物99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2，产品经HPLC分析鉴定。
实施例43：实施例42制备的二聚体放射性化合物99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2在胰腺癌AsPC-1荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只在胰腺癌AsPC-1荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图8中的A，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2能特异性靶向胰腺癌(AsPC-1)部位。
实施例44：制备的二聚体放射性化合物99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2在结直肠癌HT29荷瘤鼠体内的SPECT-CT成像。
按实施例31相同方法将放射性化合物99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2配制成生理盐水溶液(3mCi/mL)，取0.1mL(约300μCi)分别注射于3只在结直肠癌HT29荷瘤裸鼠，并于给药后0.5h、1h、2h及4h进行SPECT-CT信号采集。结果见图8中的B，由图可见核素探针99mTc-HYNIC-2Aca-E-(TP-1-NH2)2能特异性靶向结直肠癌(HT29)部位。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (8)

1.一种多肽TP-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用，其特征在于，所述多肽TP-6的氨基酸序列为D-Arg-L-Lys-L-Asp-L-Nva-D-Tyr，其中，D表示非天然D型氨基酸，L表示L型天然氨基酸，Nva为正缬氨酸。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌、胃癌和乳腺癌中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，将所述新型环肽偶联显像基团，得到所述试剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括荧光显像剂和/或放射性试剂，所述荧光显像剂包括肿瘤边界精准定位和/或术中影像导航光学显像试剂。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂具备以下通式：M-L-G；
所述M表示光标记、金属螯合剂与金属放射性核素络合物、非金属放射性核素18F和11C中的任一种；
L为连接基团；
G为多肽TP-6；
所述光标记包括有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物和生物发光分子中的一种或多种；
所述金属螯合剂选自联肼尼克酰胺、1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸、7-[(4-羟基丙基)亚甲基]-1,4,7-三氮杂化壬烷-1,4-二乙酸、1,4,7,10-四氮杂环四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、巯基乙酰三甘氨酸、二乙基三胺五乙酸或它们的组合修饰。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述光标记包括近红外一区荧光染料和/或近红外二区荧光染料，所述近红外一区荧光染料包括MPA、IRDye800、Cy7.5、ICG和Cy5.5中的一种或多种。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述连接基团包括6-氨基己酸、NH2-PEG3-COOH、NH2-PEG4-COOH、NH2-PEG6-COOH和NH2-GGGGGG-COOH中一种或多种。
8.根据权利要求5～7任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂包括MPA-PEG4-TP-6、MPA-PEG3-TP-6和99mTc-HYNIC-PEG4-TP-6。
CN202310750876.7A 2021-12-16 2021-12-16 一种多肽tp-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用 Pending CN116850307A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310750876.7A CN116850307A (zh) 2021-12-16 2021-12-16 一种多肽tp-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111542305.1A CN114177314B (zh) 2021-12-16 2021-12-16 胸腺五肽及其衍生物在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用
CN202310750876.7A CN116850307A (zh) 2021-12-16 2021-12-16 一种多肽tp-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111542305.1A Division CN114177314B (zh) 2021-12-16 2021-12-16 胸腺五肽及其衍生物在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116850307A true CN116850307A (zh) 2023-10-10

Family

ID=80605325

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111542305.1A Active CN114177314B (zh) 2021-12-16 2021-12-16 胸腺五肽及其衍生物在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用
CN202310726679.1A Active CN116712571B (zh) 2021-12-16 2021-12-16 一种新型环肽在制备肿瘤诊断和或治疗试剂中的应用
CN202310750876.7A Pending CN116850307A (zh) 2021-12-16 2021-12-16 一种多肽tp-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用
CN202310750911.5A Pending CN117860921A (zh) 2021-12-16 2021-12-16 一种胸腺五肽衍生物tp-7在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111542305.1A Active CN114177314B (zh) 2021-12-16 2021-12-16 胸腺五肽及其衍生物在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用
CN202310726679.1A Active CN116712571B (zh) 2021-12-16 2021-12-16 一种新型环肽在制备肿瘤诊断和或治疗试剂中的应用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310750911.5A Pending CN117860921A (zh) 2021-12-16 2021-12-16 一种胸腺五肽衍生物tp-7在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (4) CN114177314B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101563360A (zh) * 2006-10-20 2009-10-21 益普生制药两合公司 肽-细胞毒性缀合物
WO2016144654A1 (en) * 2015-03-09 2016-09-15 Washington University Inhibitors of growth factor activation enzymes
CN107805282A (zh) * 2017-11-01 2018-03-16 中国药科大学 一种靶向疗法和免疫疗法联合的多肽
CN111558050A (zh) * 2020-05-11 2020-08-21 中国药科大学 肿瘤靶向多肽及其应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4629723A (en) * 1984-06-27 1986-12-16 Ortho Pharmaceutical Corporation Potent thymopentin analogs
CN110845572B (zh) * 2019-11-28 2023-03-21 中国药科大学 肿瘤靶向的grp类似物及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101563360A (zh) * 2006-10-20 2009-10-21 益普生制药两合公司 肽-细胞毒性缀合物
WO2016144654A1 (en) * 2015-03-09 2016-09-15 Washington University Inhibitors of growth factor activation enzymes
CN107805282A (zh) * 2017-11-01 2018-03-16 中国药科大学 一种靶向疗法和免疫疗法联合的多肽
CN111558050A (zh) * 2020-05-11 2020-08-21 中国药科大学 肿瘤靶向多肽及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN117860921A (zh) 2024-04-12
CN116712571B (zh) 2024-01-30
CN114177314B (zh) 2023-07-21
CN114177314A (zh) 2022-03-15
CN116712571A (zh) 2023-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110845572B (zh) 肿瘤靶向的grp类似物及其应用
CN111558050B (zh) 肿瘤靶向多肽及其应用
CN111675750B (zh) 针对癌胚抗原相关黏附分子ceacam的肿瘤靶向肽及其应用
CN113880917B (zh) 几种肿瘤高亲和肽及其应用
CN116023438B (zh) 一种cxcr4靶向多肽及其应用
CN112480212A (zh) 靶向肝细胞生长因子的高亲和肽及其应用
CN115286693B (zh) 针对癌胚抗原相关细胞黏附分子ceacam6的肿瘤靶向肽及其应用
WO2005000218A2 (en) Macrocyclic cyanine and indocyanine bioconjugates provide improved biomedical applications
ES2385028T3 (es) Síntesis de conjugados de péptido-quelato tetradentado para el diagnóstico del cáncer colorrectal
CN110101880A (zh) 一种基于2PisoDGR2多肽的放射性药物及其制备方法
TW202327665A (zh) 基於肽的新型診斷劑和治療劑
EP1494694B1 (en) Photo-active backbone cyclized somatostatin analogs for photodynamic therapy and imaging
CN116850307A (zh) 一种多肽tp-6在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用
CN116063379B (zh) EphA2靶向多肽及其应用
CN113813405A (zh) 基于赖诺普利的分子影像探针及其应用
CN114288426B (zh) 艾替班特及其衍生物在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用
Chapeau et al. eTFC-01: a dual-labeled chelate-bridged tracer for SSTR2-positive tumors
CN115317627B (zh) Abt-510肽在制备肿瘤显像剂中的应用
CN115819525B (zh) 一种靶向肿瘤的伤寒毒素b亚基模拟肽及其应用
CN118307640B (zh) 一种pet显像剂前体、pet显像剂及其制备方法和应用
Handula et al. Towards complete tumor resection: novel dual-modality probes for improved image-guided surgery of GRPR-expressing prostate. Cancer Pharm. 2022b; 14 (1): 195–213
CN121378406A (zh) 靶向Nectin-4的寡肽及其应用
CN121159633A (zh) 癌症靶向肽及其偶连物和应用
Chen et al. Towards Complete Tumor Resec-tion: Novel Dual-Modality Probes for Improved Image-Guided Surgery of GRPR-Expressing Prostate Cancer

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination