CN116712478A - 一种抗真菌精油复方制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种抗真菌精油复方制剂及其制备方法和应用。本发明提供的抗真菌精油复方制剂包括抗真菌精油复方组合物，由包括如下组分制得：牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸。本发明将牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸复配，相互之间协同作用，大大提高了对表真菌感染的治疗效果，有效率最高可以达100％。

Description

一种抗真菌精油复方制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及抗真菌制剂技术领域，更具体地，涉及一种抗真菌精油复方制剂及其制备方法和应用。

背景技术

浅表真菌感染(SFIs)作为一种威胁生命的人类真菌感染，被认为影响了全球约25％的人口。浅表真菌感染主要由皮肤癣菌(红色毛癣菌、趾间毛癣菌、断头毛癣菌和犬小孢子菌)和酵母菌(念珠菌属和马拉色菌属)引起，同时可引起一些并发症，例如丹毒、蜂窝织炎和其他细菌感染。SFIs可按感染部位分类，如体癣、足癣、手癣、甲癣、头癣、面癣等，极易复发，不易治愈，不仅痛苦，而且严重影响人们的生活。然而，目前临床可用的药物有限，主要涉及激素类(如氢化可的松等)、棘球白素类(比如卡泊芬净、米卡芬净)以及多烯类(例如两性霉素B)。此外，目前针对浅表真菌感染的抗真菌治疗存在几个主要缺点，例如低效率、窄谱、显着毒性、药物相互作用、耐药性、不利的药效学(PD)和药代动力学(PK)等。

因此，亟待挖掘具广谱性、低毒性、高效性的新型抗真菌药物，用以抵御浅表真菌感染。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种抗真菌精油复方组合物，由包括如下组分制得：牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸。

牛至作为中草药使用的历史较为悠久，古时可以用来治疗呕吐、腹痛、发热、腹泻及因暑湿所引起的头痛等；味辛、性凉，故解表散寒方面的功效要强于薄荷。牛至的药理活性主要体现在其挥发油中，牛至精油的有效成分香芹酚和百里香酚与其他酚类物质一样，具有较强的抑菌杀菌作用，其抑菌机理是可以作用于细菌细胞膜蛋白，使细菌细胞膜蛋白变性，丧失其生理功能，进而导致细菌细胞膜的通透性改变，膜内外离子失衡，内容物丢失，最终导致细胞破裂而发挥抑菌杀菌作用。基于牛至精油的有效成分和抑菌机理，牛至精油具有广谱的抗菌性能，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有效。与传统抗生素相比，牛至精油作为抗菌药的另一个优势是对抗真菌有一定的作用，不宜产生耐药性。

艾草精油是从艾草的叶子、茎秆中提取的一种挥发性芳香物质，一般为浅黄或绿黄色，具有温经通络、益气活血、祛寒止痛、改善局部循环、增加免疫力的作用，常用于涂抹穴位或患处，反复揉搓至吸收。艾草精油的成分以小分子挥发性萜类化合物为主，此外还有脂肪族化合物、小分子芳香族化合物。

迷迭香精油可以强效地收敛，紧实减肥，防皱，调节皮质的作用，主要用于有杀菌消毒作用，可用于治疗肌肉扭伤、关节炎、风湿、沮丧、疲劳、记忆力减退、偏头痛、头痛、咳嗽、流行性感冒、糖尿病，以及其他病症。

甘草次酸具有保泰松或氢化可的松样的抗炎作用。甘草次酸对大白鼠的棉球肉芽肿及甲醛性脚肿、皮下肉芽肿性炎症等均有抑制作用，其抗炎效价约为可的松或氢化可松的1/10。甘草次酸对角叉菜胶引起的大鼠实验性关节炎有抑制作用，对马血清或鸡蛋白所致豚鼠过敏反应均有不同程度的抑制作用。其抗炎症、抗过敏反应可能与抑制毛细血管通透性、抗组胺或降低细胞对刺激的反应性有关。

本申请人研究中意外发现将牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸复配时，其抗真菌活性明显优于单一的牛至精油、艾草精油、迷迭香精油及甘草次酸或是其他复配，能够较好的治疗表真菌感染，可以有效的抵御浅表真菌感染现有技术中存在的问题，可以得到具有广谱性、低毒性、高效性的新型抗真菌药物，可以为其广泛应用奠定基础。

在本发明一个优选实施方式中，所述牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸的质量比为(1-10)∶(1-8)∶(1-5)∶1，进一步优选为(2-8)∶(1.5-5)∶(1-3)∶1，更进一步优选的是，牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸的质量比为3∶2∶1∶1。

在本发明的具体实施方式中，可以根据功能需要加入其他活性成分，只要保证活性成分中含有牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸(优选的是含有上述优选比例)即可，只要其他活性成分不与本发明的活性成分相斥即可。在本发明一个具体实施方式中，抗真菌精油复方组合物的有效活性成分由牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸组成。

在本发明一个优选实施方式中，本发明的抗真菌精油复方组合物还可以包括甘油和卡波姆。其中，甘油、卡波姆和甘草次酸的质量比优选为(10-15)∶(2-3)∶1，进一步优选的是15∶2.5∶1。即以重量份计，本发明提供的抗真菌精油复方组合物包括如下组分：牛至精油1-10份、艾草精油1-8份、迷迭香精油1-5份、甘草次酸1份、甘油10-15份和卡波姆2-3份。更优选的是，以重量份计，本发明提供的抗真菌精油复方组合物包括如下组分：牛至精油2-8份、艾草精油1.5-5份、迷迭香精油1-3份、甘草次酸1份、甘油10-15份和卡波姆2-3份。进一步优选的是，以重量份计，本发明提供的抗真菌精油复方组合物包括如下组分：牛至精油3份、艾草精油2份、迷迭香精油1份、甘草次酸1份、甘油15份和卡波姆2.5份。

在本发明一个具体实施方式中，本发明的抗真菌精油复方组合物还可以包括对羟基苯甲酸乙酯。其中对羟基苯甲酸乙酯与甘草次酸的质量比优选为(30-35)∶1。即，以重量份计，本发明提供的抗真菌精油复方组合物包括如下组分：牛至精油1-10份、艾草精油1-8份、迷迭香精油1-5份、甘草次酸1份、甘油10-15份、卡波姆2-3份和对羟基苯甲酸乙酯30-35份。更优选的是，以重量份计，本发明提供的抗真菌精油复方组合物包括如下组分：牛至精油2-8份、艾草精油1.5-5份、迷迭香精油1-3份、甘草次酸1份、甘油10-15份、卡波姆2-3份和对羟基苯甲酸乙酯30-35份。进一步优选的是，以重量份计，本发明提供的抗真菌精油复方组合物包括如下组分：牛至精油3份、艾草精油2份、迷迭香精油1份、甘草次酸1份、甘油15份、卡波姆2.5份和对羟基苯甲酸乙酯30份。

在本发明的具体实施方式中，可以在保证上述组分复配的情况下将复方组合物制备成本领域中常用的各种剂型，比如说片剂、粉剂、喷雾剂、凝胶剂等等。在本发明一个优选实施方式中，优选为凝胶剂。若是将本发明的组合物制成凝胶剂，本领域技术人员可以知晓的是凝胶剂中必然含有水。可以使用本领域中常用的制备方法来制备凝胶制剂。

在本发明一个优选实施方式中，本发明提供的抗真菌精油复方组合物的制备方法包括如下步骤：

按配比将卡波姆溶于适量水中溶胀，加入牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸，分散均匀，在室温下加入甘油，将体系调至中性，再加入对羟基苯甲酸乙酯，用水稀释(若是用质量份来表征各物质用量，那么可以用水稀释至100份)，即得。

在上述制备方法中，可以使用本领域中常用的pH调节剂将体系调至中性，在本发明一个具体实施方式中，可以使用三乙醇胺将体系调至中性。在上述制备方法中，将卡波姆溶于适量水溶胀，水的用量只需要确保卡波姆完全溶胀，不存在结块现象即可。

本发明的另一目的在于提供上述抗真菌精油复方组合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

按配比将卡波姆溶于适量水中溶胀，加入牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸，分散均匀，在室温下加入甘油后，将体系调至中性，再加入对羟基苯甲酸乙酯，用水稀释(若是用质量份来表征各物质用量，那么可以用水稀释至100份)，即得。

其中，制备方法中的步骤的优化方案参见上述内容，不再一一赘述。

本发明的再一目的在于提供上述抗真菌精油复方组合物在制备治疗癣的药物中的应用。其中，癣可以包括红色毛癣菌和/或须癣毛癣菌。

本发明将牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸复配，相互之间协同作用，大大提高了对表真菌感染的治疗效果，有效率最高可以达100％。特别是对因红色毛癣菌或须癣毛癣菌引起的表真菌感染。本发明提供的抗真菌精油复方组合物不但具有良好的治疗浅表真菌感染外，其还能止痒、抗炎、促进软组织愈合等作用，且无毒、无残留、无刺激，透皮性好，能渗透到病灶部位发挥作用。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

在本发明具体实施方式中，重量份可以是μg、mg、g、kg等本领域公知的重量单位，也可以是其倍数，如1/10、1/100、10倍、100倍等。在本发明中，每种物质的量根据上述比例来定，物质总的质量份并不一定为100重量份，可以小于100质量份，可以大于100质量份，只要在上述比例值内即可。若无特别说明，本发明中的“％”指质量百分比。

若无特别说明，本发明的具体实施方式中涉及到的原料可以使用市售的原料。例如说，迷迭香精油可以购自河南禹州市合同泰药业有限公司，甘草次酸可以购自甘肃泛植制药有限公司。

本发明具体实施例中牛至精油的提取方法包括如下步骤：

水蒸气提取：在1000ml圆底烧瓶中加入40g牛至样品粉末，然后加入400ml蒸馏水、沸石若干，将圆底烧瓶连接到挥发油提取器上，进行加热，保持微沸6h，取上层油相置于具塞试管中，经无水硫酸钠干燥，过滤得挥发油液，在此条件下的牛至精油的萃取得率为0.61％。

本发明具体实施例中艾草精油的提取方法包括如下步骤：

取自然干燥的艾叶100g，研细，置于1000ml圆底烧瓶中，加入700ml蒸馏水，冷浸2h后按水蒸汽蒸馏法加热提取。经过4小时的回流后，分离出来艾叶精油，加入干燥剂无水硫酸钠少许，从而得到精油产品。

实施例

本发明的实施例中给出的抗真菌精油复方制剂的制备方法包括如下步骤：

将1份卡波姆940均匀撒于适量蒸馏水中，放置一整夜，确保其完全溶胀，不可存在结块现象，向溶液内添加牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸，经由超声处理使均匀分散，再加入15份甘油至体系中，搅拌，加入三乙醇胺(TEA)调节体系pH至7.0，加入对30份羟基苯甲酸乙酯，用蒸馏水稀释至100份，分装即得成品。其中，实施例1-6和对比例1-4中牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸的用量份如表1所示。对比例5的原料和制备方法与实施例2均相同，不同之处仅在于对比例5使用的精油为3份桉叶精油、2份茶树精油和1份迷迭香精油。

表1各实施例中使用的部分原料用量份

实验例

1、抑菌试验

将实施例和对比例得到的复方制剂进行抗菌实验。抗真菌试脸将产品稀释成不同的浓度梯度，置沙氏培养基中，120℃，20分钟高压灭菌，制成斜面培养基，接种后于28-30℃培养观察2周，再接种于正常培养基，继续培养观察2周，每个菌种均设空白对照管。试验结果见表2。

表2抗真菌活性数据(MIC100，μg·mL^-1，48h)

	红色毛癣菌	须癣毛癣菌
			实施例1	25	25
实施例2	12	12
			实施例3	55	25
实施例4	55	55
			实施例5	25	25
实施例6	25	55
			对比例1	106	106
对比例2	255	255
			对比例3	550	550
对比例4	1350	1350
			对比例5	85	86

2、稳定性试验

取实施例1-6制备好的抗真菌精油复方制剂，于室温(35℃)条件下贮存30d，结果无分层现象。

3、家兔皮肤刺激试验

动物分组及实验前处理：取健康白色家兔10只，普通级，体重2.0-2.5kg，公母各半，实验前饲养5d并观察饮食和行为，若正常则按性别、体重随机分为4组，每组4只。一组给药前24h将家兔背部脊柱两侧被毛剪去，随后用8％硫化钡脱毛，脱毛区皮肤以消毒针头划成小“#”形，至渗血为度，作为破损皮肤组，另一组为完整皮肤组，两组都设赋形剂对照组。

给药方法：两组动物都在右侧脱毛区涂以实施例2提供的抗真菌精油复方制剂(若无特别说明，接下来说明书给出的试验均是使用的是实施例2提供的抗真菌精油复方制剂)2g，左侧涂医用凡士林约2g作对照。给药后局部覆盖纱布和保鲜薄膜，并以胶布固定，保持药物与皮肤接触4h后去除纱布和保鲜薄膜，然后以温水洗去残留药物。每天给药1次，连续5d。完整皮肤组以同样方法给药。每次去除药物后1h及再次给药前观察皮肤状态。末次给药及去除药物后1、24、48和72h再次观察并记录涂抹部位有无红斑和水肿及恢复情况，其评价标准见表3、表4。

表3皮肤刺激反应程度评分标准表

表4皮肤刺激强度评价表

分值	评价	分值	评价
				0.0～0.5	无刺激性	2.0～6.0	中度刺激性
0.5～2.0	轻度刺激性	6.0～8.0	强度刺激

试验结果：

通过实验给药和观察得知，完整皮肤组在每次去除药物后1h和再次给药前以及末次给药后1、24、48和72h，肉眼观察均无明显红斑、水肿等皮肤刺激反应症状；破损皮肤组给药后第1天给药侧和对照侧均可见划伤部位有轻微红肿，至第4天完全恢复正常，其后每次去除药物后1h及再次给药前以及末次给药后1、24、48和72h，肉眼观察均无明显红斑、水肿等皮肤刺激性反应症状，各项分值均为零。

4、豚鼠表皮抑菌实验

普通级豚鼠25只，每组5只，按体重和性别随机分为5组：空白对照组、模型对照组、阳性对照甘草次酸乳膏组、给药组。实验豚鼠预处理：除空白对照组外，其余4组自接种前3天起大腿内侧肌肉注射曲安奈德，每日1次，剂量为15mg/kg。

实验前1d，将豚鼠背部毛发剪掉，大小为2.5cm×2.5cm，同时为了脱毛，应于此部位涂抹脱毛膏，再通过无菌生理盐水清洗，最后借助电吹风吹干。经过1d后，使用75％乙醇对脱毛区域进行擦拭，挥发干燥，用无菌粗砂纸对豚鼠背部皮肤行轻磨处理，待见点状渗血结束，涂红色毛癣菌菌悬液。而空白对照组，涂无菌生理盐水。不合空白对照组在内的另4组豚鼠即刻经腹腔注入地塞米松(DXMS)注射液，用量为8.0mg/kg，每2d进行1次注射，合计3次或4次。每日查看实验动物接种区域皮肤红肿、毛发生长、渗出、结痂、鳞片样改变与脱屑状况。自植入后第4d起，刮取少量豚鼠背部皮屑，于10％氢氧化钾(KOH)常规镜检，每2d开展一次，到植入后第8d，并向综合SDA培养基内植入，当镜检与培养显示阳性，表示造模成功。

之后在2d内启动实验治疗，1次/d，模型对照组与空白对照组不用药。根据体表面积计算，确定低、中、高剂量化合物，1次/d；阳性对照甘草次酸乳膏组，剂量为每次0.3g/cm²，模型组与空白组进行基质干预，实施例2提供的抗真菌精油复方制剂剂量为每天0.3g/cm²。进行各类药物的局部涂搽时，面积应达皮损边缘0.5cm及以外，合计用10d天后，查看、对比实验动物与对照组的结果。

结果：在第1、5和10天，实验组的皮肤观察。模型组感染5天后，可观察到大量皮屑，结痂处鳞屑增多并结块，出现红斑。感染10天后，皮屑不断增多，堆积成团。直到动物被杀死，动物的皮屑都没有掉落。我们通过每一天的观察发现，给药0.30％抗真菌精油复方制剂低剂量组给药5天后，与给药第一天相比，可以明显的观察到皮屑在逐渐减少，伤口结痂也逐渐脱落变好，长出了新的皮肤组织。给药8天后，可见皮屑大部分消失，红斑面积缩小。同样，给药0.5％和1％的抗真菌精油复方制剂后，上述症状以剂量依赖性方式得到改善，豚鼠皮肤慢慢好转。值得注意的是，1％抗真菌精油复方制剂给药组给药10天后，大部分皮屑和红斑消失。然而，1％甘草次酸给药10天后，虽然红斑面积基本消退，但皮屑仍大面积存在。通过动物实验我们可以看出抗真菌精油复方制剂在治疗豚鼠皮肤癣菌的表现上要优于甘草次酸，进一步说明其具有潜力成为抗浅表真菌感染的复方制剂。

5、临床初步结果

病人来源：20个志愿者，均患有皮屑、皮肤苔藓化症状，经显微镜检查确定为真菌感染。

病人用乙醇棉涂擦患处去除油脂等污物，患处皮肤涂抹实施例2提供的抗真菌精油复方制剂，每日2次，直至病人恢复健康为止，用药1周后无论疗效如何，停止用药。

疗效判断标准：皮肤症状完全消退，无痒感，显微镜检查真菌阴性，为治愈；皮肤症状消失60％以上，痒感减轻，显微镜检查真菌阴性，为显效；皮肤症状消失20％-60％，痒感减轻，显微镜检查真菌阳性，为好转；皮疹未消退、加剧或消退不足20％，痒感未变化或加剧，显微镜检查真菌阳性，为无效。

治疗结果：有16个病人治愈，2只病人显效，1个病人好转。经计算，有效率为100％，治愈率为80％。

最后，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种抗真菌精油复方组合物，其特征在于，由包括如下组分制得：牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸。

2.根据权利要求1所述的抗真菌精油复方组合物，其特征在于，所述牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸的质量比为(1-10):(1-8):(1-5):1，优选为(2-8):(1.5-5):(1-3):1。

3.根据权利要求1或2所述的抗真菌精油复方组合物，其特征在于，所述抗真菌精油复方组合物的有效活性成分由牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸组成。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗真菌精油复方组合物，其特征在于，所述组分中还包括甘油和卡波姆。

5.根据权利要求4所述的抗真菌精油复方组合物，其特征在于，以重量份计，包括如下组分：牛至精油1-10份、艾草精油1-8份、迷迭香精油1-5份、甘草次酸1份、甘油10-15份和卡波姆2-3份。

6.根据权利要求5所述的抗真菌精油复方组合物，其特征在于，以重量份计，包括如下组分：牛至精油2-8份、艾草精油1.5-5份、迷迭香精油1-3份、甘草次酸1份、甘油10-15份和卡波姆2-3份。

7.根据权利要求5或6所述的抗真菌精油复方组合物，其特征在于，所述组分中还包括对羟基苯甲酸乙酯30-35份。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的抗真菌精油复方组合物，其特征在于，所述抗真菌精油复方组合物的制备方法包括如下步骤：

按配比将卡波姆溶于适量水中溶胀，加入牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸，分散均匀，在室温下加入甘油，将体系调至中性，再加入对羟基苯甲酸乙酯，用水稀释，即得。

9.权利要求7至8中任一项所述的抗真菌精油复方组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

按配比将卡波姆溶于适量水中溶胀，加入牛至精油、艾草精油、迷迭香精油和甘草次酸，分散均匀，在室温下加入甘油，将体系调至中性，再加入对羟基苯甲酸乙酯，用水稀释，即得。

10.权利要求1至8中任一项所述的抗真菌精油复方组合物在制备治疗癣的药物中的应用。