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CN116159089A - 一种苯乙醇苷提取物及其制备方法和在抗糖化中的应用 - Google Patents

一种苯乙醇苷提取物及其制备方法和在抗糖化中的应用 Download PDF

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CN116159089A
CN116159089A CN202310035692.2A CN202310035692A CN116159089A CN 116159089 A CN116159089 A CN 116159089A CN 202310035692 A CN202310035692 A CN 202310035692A CN 116159089 A CN116159089 A CN 116159089A
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glycoside
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陆柏益
王章铁
彭渴婕
黄伟素
汪怿璇
赵茜
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Zhejiang University ZJU
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Abstract

本发明公开了一种苯乙醇苷提取物及其制备方法和在抗糖化中的应用，属于农副产品精深加工及综合利用领域。所述制备方法包括：将桂花与水混合，液料比不低于20mL：1g，再调节pH值至3～6，于20～90℃条件下浸提，合并滤液干燥得到所述苯乙醇苷提取物，以质量百分比计，其组分包括：苯乙醇苷23％～49％，多糖14％～40％，苯乙醇苷中毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷质量比为60～90：7～35：1～10。本发明通过优化桂花水提工艺，获得活性成分科学配比的苯乙醇苷提取物，具有优异抗糖化功效，表现出显著抑制蛋白质糖基化反应、晚期糖基化终末产物生成量、体内AGEs‑RAGE信号通路三个维度的抗糖化作用。

Description

一种苯乙醇苷提取物及其制备方法和在抗糖化中的应用
技术领域
本发明涉及农副产品精深加工及综合利用领域，具体涉及一种苯乙醇苷提取物及其制备方法和在抗糖化中应用。
背景技术
糖类与蛋白质结合会导致蛋白质糖基化，形成晚期糖基化终末产物(AGEs)，AGEs会引起体内的一系列不良反应，包括炎症、氧化应激等。在皮肤上的AGEs会导致皮肤松弛、暗沉、发黄等情况。皮肤糖基化还表现出皮肤胶原蛋白失活，加速皮肤的衰老。抗糖化是指抵抗糖化反应。目前主流的抗糖成分主要是肌肽、玻色因、硫辛酸、葡萄籽提取物、黄酮类、多酚类、阿魏酸、革糖素等。除了化妆品等皮肤涂抹类产品外，口服美容的观点越来越受到人们的关注。
现有研究中公开了一些关于皮肤抗糖化的产品，比如专利文献CN110664868A公开了一种具有抗糖基化功效的组合物，该组合物中的桂花提取物、石榴提取物和橄榄果提取物中均含有多酚，且多酚质量含量均在10％以上，多酚类物质具有抗氧化、清除自由基、抗炎等功效，桂花提取物中毛蕊花糖苷和石榴提取物中的安石榴苷可以抑制AGEs的生成，防止蛋白结构被糖化破坏、减少糖基化前物MGO对皮肤活性的损害以及氧化作用。
桂花，是中国传统十大名花之一，皆具药用和食用价值。桂花提取液具有良好的清除DPPH自由基活性、抑制非酶糖基化及抑制MMP-1活性，且呈现出良好的量效关系(桂花提取液在抗皮肤老化方面的功效研究,香料香精化妆品,2019,2)。相较于有机溶剂法提取，桂花水提物具有更天然、安全的食用价值，可以直接用于桂花相关食用产品中。
课题组前期研究发现，桂花多酚中的苯乙醇苷包含毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷，不同结构的苯乙醇苷具有不同的作用功效，几种苯乙醇苷的分子结构的差异被认为是桂花提取物发挥功效的物质基础。课题组前期的发明专利CN103768152A公开了一种桂花苯乙醇苷提取物及其制备方法和用途，该方法通过乙醇溶液提取、树脂吸附等方法，制备桂花苯乙醇苷，具备良好的防治糖尿病的用途，而该方法减弱了桂花多糖在提取物中的作用。发明专利CN103767975B公开了一种桂花苯乙醇苷提取物在制备美白化妆品中的应用，该方法制备的苯乙醇苷也只关注了苯乙醇苷制备、纯化方法，没有考虑到桂花多糖的作用。此外，目前的产品中，只注重于桂花提取物在抗糖化产品的使用，并没有关注到桂花水提物组成在抗糖化功效中的影响，尤其没有关注几种不同分子结构的苯乙醇苷的比例和含量对抗糖化功效的影响，以及苯乙醇苷与多糖的比例和含量对抗糖化功效的影响。因此，如何利用提取植物技术获得苯乙醇苷科学配比的桂花水提物，并使其发挥最佳的抗糖化作用，显得十分必要。
发明内容
本发明的目的在于通过优化桂花提取技术，获得活性成分科学配比的桂花水提物，提升桂花提取物在抗糖化作用中的应用价值和作用效果。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种苯乙醇苷提取物的制备方法，包括：将桂花干制品与水混合，液料比不低于20mL：1g，再调节pH值至3～6，于20～90℃条件下浸提，分离并合并滤液，干燥得到所述苯乙醇苷提取物。
上述方法制备的苯乙醇苷提取物中活性成分以苯乙醇苷、多糖为主，苯乙醇苷由毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷组成，活性组分的不同配比和含量影响其抗糖化功效，本发明以成分性质为指导对提取方法进行优化。
本发明采用的原料应为桂花(Osmanthus fragrans)干制品，指新鲜桂花或普通晒干桂花经热风干燥至水分含量不超过10％的一类原料。原料可进行粉碎预处理，也可不经过粉碎预处理。优选的，对桂花干制品进行粉碎，有利于活性物质的溶出。桂花可选用金桂、银桂、丹桂等桂花品种中的任何一种。
优选的，将含水量≤10％的桂花干制品粉碎后加入水中，液料比为20～50mL：1g。
研究表明，浸提过程中调节pH至3～6有利于活性成分苯乙醇苷和多糖在提取物中的富集，减少降解。优选的，利用柠檬酸溶液调节浸提液pH，pH值为4±0.5。
研究表明，浸提温度在20～90℃条件下，有利于活性成分多糖和苯乙醇苷尤其红景天苷的提取，也避免温度过高而引起降解。优选的，浸提温度为55～65℃。
优选的，浸提时间为30～60min。
本发明还提供了一种由上述方法制备得到的苯乙醇苷提取物，所述苯乙醇苷提取物的活性成分以苯乙醇苷、桂花多糖为主。
以质量百分比计，其组分包括：苯乙醇苷23％～49％，多糖14％～40％；所述苯乙醇苷包括毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷，质量比为60～90：7～35：1～10。
优选的，以质量百分比计，其组分包括：苯乙醇苷33％～46％，多糖20％～40％；所述苯乙醇苷包括毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷，质量比为65～85：13～25：2～6。
本发明利用苯乙醇苷的结构特征，获得毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷的比例科学的苯乙醇苷提取物，促进几种苯乙醇苷在抗糖化作用中发挥最佳的协同增效作用，提升植物提取物在抗糖化作用中的应用价值和作用效果。具体的，毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例为85:13:2或69:25:6或75:20:5。
本发明的苯乙醇苷提取物具有抗糖化的有益功效，可用于制备相关的药物、食品或化妆品。因此，本发明还提供了所述的苯乙醇苷提取物在制备抗糖化的药物、食品或化妆品中的应用。
本发明对上述苯乙醇苷提取物进行抗糖化功效研究，所述抗糖化为抑制蛋白质糖基化反应、减少晚期糖基化终末产物生成量、抑制AGEs-RAGE信号通路中的一种或几种。
本发明还提供了一种含有本发明的苯乙醇苷提取物作为有效成分的组合物(包括药物组合物、保健品组合物或化妆品)，在获得苯乙醇苷提取物后，可用常规方法将其与药学上、食品学上或保健品或化妆品上可接受的载体、赋形剂或稀释剂相混合，形成本发明的药物组合物、食品组合物或化妆品。
本发明具备的有益效果：
本发明通过优化桂花水提工艺，获得活性成分科学配比的苯乙醇苷提取物，该苯乙醇苷提取物具有优异抗糖化功效。本发明提供的苯乙醇苷提取物应用于抗糖化作用中，表现出显著抑制了蛋白质糖基化反应、晚期糖基化终末产物生成量、体内AGEs-RAGE信号通路三个维度的抗糖化作用。
附图说明
图1为毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷标准品的色谱图。
图2为毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷的化学结构图。
图3为利用蛋白质糖基化反应对不同组别的抗糖化能力评价，不同字母表示组别间差异显著性(p＜0.05)。
图4为AGEs抑制率评价不同组别的抗糖化能力，不同字母表示组别间差异显著性(p＜0.05)。
图5为RAGE相对表达量评价不同组别的抗糖化能力，不同字母表示组别间差异显著性(p＜0.05)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。以下实施例仅用于说明本发明，不用来限制本发明的适用范围。在不背离本发明精神和本质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
下述实施例中采用的原料桂花为桂花树的花朵，品种为金桂，统一经40℃烘制24h以上。
标准品毛蕊花糖苷(CAS编号：61276-17-3)、异毛蕊花糖苷(CAS编号：61303-13-7)、红景天苷(CAS编号：10338-51-9)、无水葡萄糖(CAS编号：50-99-7)。
以下为通用方法：
1)苯乙醇苷总量测定：
将50.0mg桂花提取物溶解于甲醇，定容至100mL，取3mL加入石英比色皿中，用紫外分光光度计在338nm测定其吸光度，重复三次，以毛蕊花糖苷为标准品，从标准曲线中计算得到苯乙醇苷总量。
2)桂花提取物中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、红景天苷含量测定——高效液相色谱法：
用1％(V/V)乙酸溶液溶解桂花提取物，制备0.5mg/mL溶液，0.45μm过膜，进样。高效液相色谱条件：岛津LC-2010A高效液相，SPD-20A紫外检测器，BDS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相A：1％乙酸(1:99，V/V)，流动性B：乙腈，采用梯度洗脱程序(94％-90％A，0-10min；90％-80％A，10-35min，80％-94％A，35-36min)，检测波长范围：200-400nm，流速：0.2mL/min，柱温：35℃，进样体积10μL。以毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、红景天苷为标准品，根据保留时间定性，从标准曲线中计算得到相应含量。保留时间如图1所示。
3)桂花提取物中多糖含量测定
采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。以无水葡萄糖为标样，绘制标准曲线。取2mL适量浓度的桂花提取物溶于玻璃试管中，加入1mL的5％苯酚溶液，再迅速加入5mL浓硫酸，微微摇动玻璃管，显色后在冰水中冷却，在490nm测定OD值，以蒸馏水代替标准溶液作空白对照，以无水葡萄糖为标准品。结果以DE表示，单位为g DE/100g。
4)抗糖化评价——蛋白质糖基化反应
A液：称取71.64g Na2HPO4·12H2O，配置成1000mL水溶液；
B液：称取31.21g NaH2PO4·2H2O，配置成1000mL水溶液；
将810mL A液与190mL B液混合，向此混合液中加入0.2％ PC-300(Proclin 300，液体生物防腐剂，主要活性成分是5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one,CMIT)和2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(2-methyl-4-isothiazloin-3-one,MIT)的混合物)，混匀得0.2mol/L PBS磷酸缓冲液(pH＝7.4)。
BSA(20mg/mL)：称取牛血清白蛋白4.0g，抗菌溶液定容至200mL。
Glu(0.5mol/L)：即90mg/mL，称取D-葡萄糖18.02g，磷酸缓冲抗菌液定容至200mL。
在无菌条件下，向无菌瓶中加入用0.22μm滤膜除菌后的上述牛血清白蛋白溶液和葡萄糖溶液各4.0mL，混合均匀后，加入4.0mL样品溶液(浓度梯度为0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、20mg/mL)，再加4.0mL PBS溶液，与37℃恒温避光孵育10天。以氨基胍为阳性对照，磷酸缓冲液为空白对照。在37℃恒温培养箱中培养10d，后取培养液进行荧光性晚期糖基化终末产物(AGEs)测定。
荧光性AGEs测定：取各组糖基化物质，测定糖基化终产物在激发波长(Ex)340nm/发射波长(Em)420nm处的荧光值Fs，即代表总荧光AGEs的含量，并计算抑制率：抑制率(％)＝(F0-FS)/F0×100。通过曲线拟合的方法测定各组样品的半抑制浓度IC50。
5)抗糖化评价——晚期糖基化终末产物(AGEs)生成量
人类永生化表皮细胞(HaCaT细胞)用含10％胎牛血清、100mg/L青霉素、100mg/L链霉素的高糖细胞培养基于37℃、5％CO2培养箱中培养。取对数生长期细胞用于后续实验。细胞按1×105个/mL接种于96孔细胞培养板中，每孔加100μL，37℃、5％CO2条件下孵育24h后，分别加入50μg/mL的桂花提取物(或氨基胍)和/或0.4mM丙酮醛溶液(MGO)。同时设空白对照组，每组设置6个平行孔。培养24h后，按照细胞计数试剂盒-8(CCK-8)试剂盒(上海碧云天公司)进行测定细胞活力。
细胞按1×105个/mL接种于6孔细胞培养板中，37℃、5％CO2条件下孵育24h后，分别加入50μg/mL的桂花提取物(或氨基胍)和/或0.4mM丙酮醛溶液(MGO)。培养24h后，测定AGEs的抑制率，AGEs的测定依据人晚期糖基化终末产物(AGEs)酶联免疫ELISA试剂盒(武汉基因美公司)方法进行。
Figure BDA0004048650720000061
6)抗糖化评价——AGEs-AGE的受体蛋白(RAGE)信号通路表达细胞造模及培养方法同5)抗糖化评价——晚期糖基化终末产物(AGEs)生成量。HaCaT细胞用含10％胎牛血清、100mg/L青霉素、100mg/L链霉素的高糖细胞培养基于37℃、5％CO2培养箱中培养。取对数生长期细胞用于后续实验。细胞按1×105个/mL接种于96孔细胞培养板中，每孔加100μL，37℃、5％CO2条件下孵育24h后，分别加入50μg/mL的桂花提取物(或氨基胍)和/或2mg/mLAGEs溶液。同时设空白对照组，每组设置6个平行孔。培养24h后，按照细胞计数试剂盒-8(CCK-8)试剂盒(上海碧云天公司)进行测定细胞活力。
细胞按1×105个/mL接种于6孔细胞培养板中，37℃、5％CO2条件下孵育24h后，分别加入50μg/mL的桂花提取物(或氨基胍)和/或2mg/mL AGEs溶液。培养24h后，利用流式细胞仪测定RAGE基因的表达量。
流式细胞：移除培养板中培养液，用1mL胰酶消化，1000rpm离心5min收集细胞。加入1mL预热的4％多聚甲醛，在20℃固定20min，1000rpm离心5min去除固定液，加入2mL PBS洗涤，1000rpm离心5min去除洗涤液，重复2次。加入1mL免疫荧光封闭液，室温封闭1h。随后将细胞与RAGE抗体(1:200)37℃孵育1h，用PBS代替一抗作为阴性对照。用含1％BSA的PBS重悬细胞，洗涤5min，1000rpm离心5min，洗涤3次。加入二抗，4℃避光孵育60min，洗涤二抗，重悬细胞，用流式细胞仪检测荧光值，每管计数10000个细胞。结果以RAGE相对表达量表示。
RAGE相对表达量＝RAGE表达量(不同组别)÷RAGE表达量(AGEs处理组)×100％
实施例1
1、制备方法：将1kg干燥的水分含量≤10％(按照GB 5009.3-2016直接干燥法进行测定，若不符合水分含量要求则继续40℃烘制干燥)的桂花花瓣按1g：50mL料液比，加入去离子水，使用1mol/L柠檬酸溶液调节萃取液pH为4。控制温度为65℃，进行浸提30min，重复萃取3次，抽滤、合并滤液。通过减压蒸发回收溶剂水，得到浓缩液，经冷冻干燥后即得到桂花提取物。
2、对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为45.51g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为38.00g/100g花提取物、5.81g/100g花提取物、0.89g/100g花提取物，毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷的化学结构式如图2所示。多糖含量为25.98g DE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为85:13:2。
3、利用蛋白质糖基化反应对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.0567±0.0031mg/mL，较阳性对照氨基胍有更好的抗糖化效果。
4、测定晚期糖基化终末产物生成量对提取物进行抗糖化评价(减少晚期糖基化终末产物生成量的作用)，结果如图4所示，桂花提取物处理组的抑制率为60.26％±8.96％，表明桂花提取物可以抑制晚期糖基化终末产生的生成，与氨基胍(50.63％±7.86％)有相似的抗糖化效果。
5、利用流式细胞仪测定RAGE基因的表达量对提取物进行抗糖化评价(抑制体内AGEs-RAGE信号通路作用)，结果如图5所示，桂花提取物处理组相对表达量为49.33％±7.56％，可以减小AGEs-RAGE信号通路的表达，与氨基胍(45.67％±8.23％)有相似的抗糖化效果。
实施例2
1、制备方法：将1kg干燥的水分含量≤10％(按照GB 5009.3-2016直接干燥法进行测定，若不符合水分含量要求则继续40℃烘制干燥)的桂花花瓣按1g：20mL料液比，加入去离子水，使用1mol/L柠檬酸溶液调节萃取液pH为4。控制温度为55℃，进行浸提1h，重复萃取4次，抽滤、合并滤液。通过减压蒸发回收溶剂水，得到浓缩液，经冷冻干燥后即得到桂花提取物。
2、对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为42.11g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为28.37g/100g花提取物、10.28g/100g花提取物、2.47g/100g花提取物。多糖含量为14.36gDE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为69:25:6。
3、对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.0625±0.0020mg/mL，较阳性对照氨基胍有更好的抗糖化效果。
实施例3
1、制备方法：将1kg干燥的水分含量≤10％(按照GB 5009.3-2016直接干燥法进行测定，若不符合水分含量要求则继续40℃烘制干燥)的桂花花瓣按1g：50mL料液比，加入去离子水，使用1mol/L柠檬酸溶液调节萃取液pH为6。控制温度为20℃，进行浸提1h，重复萃取3次，抽滤、合并滤液。通过减压蒸发回收溶剂水，得到浓缩液，经冷冻干燥后即得到桂花提取物。
2、对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为34.85g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为25.61g/100g花提取物、6.83g/100g花提取物、1.71g/100g花提取物。多糖含量为35.66gDE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为75:20:5。
3、对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.0633±0.0029mg/mL，较阳性对照氨基胍有更好的抗糖化效果。
对比例
1、料液比条件
对比例1-1，将实施例1中的料液比改成1g:10mL，其余条件同实施例1。对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为16.90g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为13.60g/100g花提取物、2.24g/100g花提取物、0.16g/100g花提取物。多糖含量为12.06g DE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为85:14:1。并对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.1888±0.0053mg/mL，较阳性对照氨基胍有更差的抗糖化效果。可见较高的苯乙醇苷和多糖含量具有更好的抗糖化作用。
2、pH条件
对比例2-1，将实施例1中的pH改成2，其余条件同实施例1。对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为38.38g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为32.49g/100g花提取物、3.78g/100g花提取物、1.51g/100g花提取物。多糖含量为10.56g DE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为86:10:4。并对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.1368±0.0171mg/mL，较阳性对照氨基胍有更差的抗糖化效果。对比例2-1中多糖含量较低，可见较低的pH值会引起多糖的水解。适合的多糖浓度具有更好的抗糖化作用。
对比例2-2，将实施例1中的pH改成10(利用1mol/L Na2CO3溶液调节pH)，其余条件同实施例1。对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为18.58g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为11.60g/100g花提取物、5.27g/100g花提取物、0.70g/100g花提取物。多糖含量为35.16gDE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为66:30:4。并对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.1477±0.0202mg/mL，较阳性对照氨基胍有更差的抗糖化效果。对比例2-2中苯乙醇苷含量较低，可见较高的pH值会引起苯乙醇苷的降解。适合的苯乙醇苷含量具有更好的抗糖化作用。
对比例2-3，将实施例1中的pH改成不调节pH，其余条件同实施例1。测定此时pH值为7。对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为22.44g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为17.47g/100g花提取物、3.93g/100g花提取物、0.44g/100g花提取物。多糖含量为30.66g DE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为66:30:4。并对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.1029±0.0142mg/mL，较实施例1有更差的抗糖化效果。对比例2-3中苯乙醇苷含量较低，可见调节pH值至酸性可引起苯乙醇苷在提取物中的富集。适合的苯乙醇苷含量具有更好的抗糖化作用。
3、温度条件
对比例3-1，将实施例1中的温度改成15℃，其余条件同实施例1。对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为37.49g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为33.20g/100g花提取物、2.58g/100g花提取物、1.11g/100g花提取物。多糖含量为20.86g DE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为90:7:3。并对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.1176±0.0068mg/mL，较阳性对照氨基胍有更差的抗糖化效果。对比例3-1中多糖含量较低，可见较低的提取温度会引起多糖的提取不足，适合的多糖含量具有更好的抗糖化作用。此外，较低温度使得红景天苷提取不足，较低比例的红景天苷使得三种苯乙醇苷(毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷)之间的协同增效效果较差，抗糖化作用不佳。
对比例3-2，将实施例1中的温度改成95℃，其余同实施例1。对所得提取物的质量以及成分进行分析，结果如表1所示，苯乙醇苷含量为18.68g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷分别为11.49g/100g花提取物、5.83g/100g花提取物、0.35g/100g花提取物。多糖含量为36.15g DE/100g花提取物。毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例如表2所示，为65:33:2。并对提取物进行抗糖化评价，结果如图3所示，IC50值为0.1612±0.0193mg/mL，较阳性对照氨基胍有更差的抗糖化效果。对比例3-2中苯乙醇苷含量较低，可见较高的提取温度会引起苯乙醇苷的降解。适合的苯乙醇苷含量具有更好的抗糖化作用。
表1不同制备方法参数下桂花提取物的各成分含量
Figure BDA0004048650720000111
注：苯乙醇苷含量单位：g毛蕊花糖苷当量/100g花提取物。多糖含量以DE表示，单位为g DE/100g花提取物。其他单位为g/100g花提取物。
表2不同组别毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷比例
Figure BDA0004048650720000112
Figure BDA0004048650720000121
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例和对比例。显然，本发明不限于以上实施例和对比例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联系到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种苯乙醇苷提取物的制备方法，其特征在于，包括：将桂花干制品与水混合，液料比不低于20mL：1g，再调节pH值至3～6，于20～90℃条件下浸提，分离并合并滤液，干燥得到所述苯乙醇苷提取物。
2.如权利要求1所述的苯乙醇苷提取物的制备方法，其特征在于，将含水量≤10％的桂花干制品粉碎后加入水中，液料比为20～50mL：1g。
3.如权利要求1所述的苯乙醇苷提取物的制备方法，其特征在于，利用柠檬酸溶液调节浸提液pH，pH值为4±0.5。
4.如权利要求1所述的苯乙醇苷提取物的制备方法，其特征在于，浸提温度为55～65℃。
5.如权利要求1所述的苯乙醇苷提取物的制备方法，其特征在于，浸提时间为30～60min。
6.如权利要求1-5任一项所述的制备方法制得的苯乙醇苷提取物。
7.如权利要求6所述的苯乙醇苷提取物，其特征在于，以质量百分比计，其组分包括：苯乙醇苷23％～49％，多糖14％～40％；所述苯乙醇苷包括毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷，质量比为60～90：7～35：1～10。
8.如权利要求7所述的苯乙醇苷提取物，其特征在于，以质量百分比计，其组分包括：苯乙醇苷33％～46％，多糖20％～40％；所述苯乙醇苷包括毛蕊花糖苷、红景天苷、异毛蕊花糖苷，质量比为65～85：13～25：2～6。
9.如权利要求6-8任一项所述的苯乙醇苷提取物在制备抗糖化的药物、食品或化妆品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗糖化为抑制蛋白质糖基化反应、减少晚期糖基化终末产物生成量、抑制AGEs-RAGE信号通路中的一种或几种。
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