[go: up one dir, main page]

CN116064816A - 血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒 - Google Patents

血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN116064816A
CN116064816A CN202211493719.4A CN202211493719A CN116064816A CN 116064816 A CN116064816 A CN 116064816A CN 202211493719 A CN202211493719 A CN 202211493719A CN 116064816 A CN116064816 A CN 116064816A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mir
hsa
seq
nucleotide sequence
coding nucleotide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211493719.4A
Other languages
English (en)
Inventor
来永庆
李伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Kerida Health Technology Co ltd
Original Assignee
Shenzhen Kerida Health Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Kerida Health Technology Co ltd filed Critical Shenzhen Kerida Health Technology Co ltd
Priority to CN202211493719.4A priority Critical patent/CN116064816A/zh
Publication of CN116064816A publication Critical patent/CN116064816A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及分子生物医学技术领域，具体公开了一种血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒。作为肾癌筛查或诊断标志物的用途的血液microRNA包括hsa‑miR‑10394‑5p、hsa‑miR‑3657、hsa‑miR‑6077、hsa‑miR‑4798‑3p及hsa‑miR‑3127‑3p中的至少一种，每种microRNA对应的编码核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.5所示。本发明实施例提供的血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物用途在检测中具有非侵入性无创和高效的效果，在制备肾癌筛查、诊断试剂盒中具有广泛的应用前景。

Description

血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒
技术领域
本发明涉及分子生物医学技术领域，尤其涉及一种血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒。
背景技术
肾癌是目前十大最常见的恶性肿瘤之一，几乎占成年人肾脏恶性肿瘤的90％。据统计，全球每年的新发肾癌病例大约209000例，并且还在逐年增加，死亡病例达102000例，死亡率高达40％。因此，肾癌严重危害全球人民健康。
肾癌早期通常没有症状，因此早期筛查和准确诊断是改善患者预后的一个重要因素。现有肾癌筛查手段主要包括肾脏B超检查、肾脏CT检查、肾脏核磁共振成像(MRI)检查等，但现有的肾癌筛查手段都存在很多限制，如肾脏B超检查存在B超对检查医师的技术要求高、观性很强导致水平参差不齐；肾脏CT和MRI检查存在检查费用昂贵、过程繁琐，并且多种先进的检查设备只有大型三甲医院才有，普及性差，是临床诊断肾癌的有效手段，不适合肾癌筛查。因此，临床上急需简便无创、高效能的肾癌筛查和诊断方法。
发明内容
本发明实施例的目的之一在于提供一种血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途，旨在解决现有肾癌筛查和诊断存在创伤性、效能较低的问题。
具体地，其采用的技术方案如下：
一种血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途，所述microRNA包括hsa-miR-10394-5p、hsa-miR-3657、hsa-miR-6077、hsa-miR-4798-3p以及hsa-miR-3127-3p中的至少一种；
其中，所述hsa-miR-10394-5p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述hsa-miR-3657的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述hsa-miR-6077的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述hsa-miR-4798-3p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述hsa-miR-3127-3p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
相对于现有技术而言，本发明实施例提供的血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途，可实现非侵入性获得和分离分析受试者或者患者的肾脏病变情况；且对肾癌细胞具有高度特异性、筛查和诊断敏感度高的特点，同时具有对肾癌疾病相关机制的生物学合理性好以及表达稳定性好等特点，可以实现高效进行筛查和诊断。
本发明实施例的目的之二在于提供一种检测上所述血液microRNA的引物，包括hsa-miR-10394-5p反转录引物、hsa-miR-3657反转录引物、hsa-miR-6077反转录引物、hsa-miR-4798-3p反转录引物、hsa-miR-3127-3p反转录引物中的至少一种以及每种血液microRNA对应的上游引物；
其中，所述hsa-miR-10394-5p反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
所述hsa-miR-3657反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；
所述hsa-miR-6077反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示：
所述hsa-miR-4798-3p反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；
所述hsa-miR-3127-3p反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；
所述hsa-miR-10394-5p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
所述hsa-miR-3657对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；
所述hsa-miR-6077对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
所述hsa-miR-4798-3p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；
所述hsa-miR-3127-3p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示。
相对于现有技术而言，本发明实施例提供的用于检测血液microRNA的引物，具有特异性高、扩增灵敏等特点，适合用于microRNA表达水平的检测。
本发明实施例的目的之三是上述引物在制备肾癌筛查或诊断试剂盒中的应用。
本发明实施例的目的之四是提供一种肾癌筛查或诊断的试剂盒。
具体地，所述试剂盒所采用的技术方案如下：
一种试剂盒，试剂盒中包括上述至少一种引物。
相对于现有技术而言，本发明实施例提供的试剂盒可实现非侵入性获得和分离分析受试者或者患者的肾脏的是否发生癌症以及癌症的病变情况，能够辅助快速筛查和诊断受试者肾脏是否癌变以及癌变情况。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例提供的hsa-miR-10394-5p在肾癌患者及健康对照组血清中的表达图；
图2为本发明实施例提供的hsa-miR-10394-5p在肾癌患者及健康对照组血清中的ROC曲线；
图3为本发明实施例提供的hsa-miR-3657在肾癌患者及健康对照组血清中的表达图；
图4为本发明实施例提供的hsa-miR-3657在肾癌患者及健康对照组血清中的ROC曲线；
图5为本发明实施例提供的hsa-miR-6077在肾癌患者及健康对照组血清中的表达图；
图6为本发明实施例提供的hsa-miR-6077在肾癌患者及健康对照组血清中的ROC曲线；
图7为本发明实施例提供的hsa-miR-4798-3p在肾癌患者及健康对照组血清中的表达图；
图8为本发明实施例提供的hsa-miR-4798-3p在肾癌患者及健康对照组血清中的ROC曲线；
图9为本发明实施例提供的hsa-miR-3127-3p在肾癌患者及健康对照组血清中的表达图；
图10为本发明实施例提供的hsa-miR-3127-3p在肾癌患者及健康对照组血清中的ROC曲线；
其中，图1、图3、图5、图7及图9的纵坐标表示血清中对应的mircroRNA的表达水平；横坐标中，control表示控制组或者正常人组或体验的健康人组，Cancer表示肾癌患者组；
图2、图4、图6、图8及图10的纵坐标Sensitivity表示灵敏度；横坐标Specificity表示特异性。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
还应当进一步理解，在本发明说明书和所附权利要求书中使用的术语“和/或”是指相关联列出的项中的一个或多个的任何组合以及所有可能组合，并且包括这些组合。
本发明实施例第一方面提供了一种血液microRNA作为肾癌筛查或者肾癌诊断标志物的用途。具体地，所述血液microRNA包括hsa-miR-10394-5p、hsa-miR-3657、hsa-miR-6077、hsa-miR-4798-3p以及hsa-miR-3127-3p中的至少一种；其中，所述hsa-miR-10394-5p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1：UCUGCAGGUCCUGGUGAACGCCAU；
所述hsa-miR-3657的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，SEQ ID NO.2：UGUGUCCCAUUAUUGGUGAUU；
所述hsa-miR-6077的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，SEQ ID NO.3：GGGAAGAGCUGUACGGCCUUC；
所述hsa-miR-4798-3p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，SEQ ID NO.4：AACUCACGAAGUAUACCGAAGU；
所述hsa-miR-3127-3p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，SEQ ID NO.5：UCCCCUUCUGCAGGCCUGCUGG。
microRNA是一组内源性、非编码的单链RNA。它们通过与相关信使RNA的3'非翻译区结合负性调节基因表达，导致mRNA降解或翻译抑制，从而参与包括细胞增殖、分化、凋亡、发育及逆境应答等多种生物学过程。一方面，血液中的microRNA经常与蛋白质等形成复合物，因此具有良好的抗RNase降解作用，冷冻、解冻或在室温下长期保存均不影响血液中microRNA的表达水平；另一方面，不同性别、不同年龄的人群里，其血液中microRNA的表达水平十分相似；再一方面，在不同类型的癌症中microRNA的表达有显著的特异性。综上所述，血液中的microRNA可以作为肾癌筛查或者诊断标志物。
在一些实施方式中，所述的任一种血液microRNA来自外周血液，外周血液具有采样简单、方便等特点，当然并不局限于外周血液。上述任一种microRNA均可来自血液，因而可实现非侵入性获得和分离分析受试者或者患者的肾脏病变情况，同时上述任一种microRNA对肾癌细胞具有高度特异性、筛查和诊断敏感度高、肾癌疾病相关机制的生物学合理性好以及表达稳定性好等特点，允许在临床常规筛查和诊断中使用。因此通过分析受试者血液中的上述任一种microRNA的水平，即可作为受试者肾癌筛查的参考物或者分析患者上述任一种microRNA标志物的来分析患者肾癌细胞的数量并可以依据患者肾癌细胞的数量来反映肾癌细胞的大小，使得肾脏筛查或诊断标志物得到有效简化，并且实现无创筛查或诊断，更重要的是，提高了筛查和诊断的效率。
基于上述一种试剂盒，用于检测血液样本中microRNA的水平，以实现筛查或者辅助诊断肾癌病变情况。
具体地，所述试剂盒包括RNA提取试剂、cDNA合成试剂、RT-qPCR反应试剂、microRNA特异性引物和cel-miR-54特异性引物。
在一些实施方式中，所述RNA提取试剂选自TRIzolTM LS。
在一些实施方式中，所述cDNA合成试剂包括纯化的RNA样品(Purified RNA)、Sensiscript逆转录酶(Sensiscript Reverse Transcriptase)、Sensiscript逆转录酶缓冲液(Sensiscript Reverse Transcription Buffer)、dNTP混合物(dNTP Mix)、RNase-free水、反转录混合物(Reverse transcription Primer Mix)。
在一些实施方式中，所述反转录混合物包括任一所述血液microRNA对应的反转录引物序列和所述cel-miR-54的反转录引物序列。具体所述血液microRNA对应的反转录引物序列包括：
(1)所述hsa-miR-10394-5p的反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
SEQ ID NO.6：
GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTATGG CG；
(2)所述hsa-miR-3657的反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.7所；
SEQ ID NO.7：
GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAATC AC；
(3)所述hsa-miR-6077的反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；
SEQ ID NO.8：
GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTGAAG GC；
(4)所述hsa-miR-4798-3p的反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；
SEQ ID NO.9：
GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACTT CG；
(5)所述hsa-miR-3127-3p的反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示：
SEQ ID NO.10：
GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCCAG CA。
而所述cel-miR-54的反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；
SEQ ID NO.11：
GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTGTTC TC。
在一些实施方式中，所述RT-qPCR反应试剂包括Golden HS TaqMan荧光定量PCR缓冲液(Golden HS TaqMan qPCR Buffer)、Taqman探针(Taqman probe)、通用下游引物(Universal Reverse Primer)、任一所述microRNA对应的上游引物(microRNAForwardPrimer)、cel-miR-54上游引物(cel-miR-54Forward Primer)、RNase-free水。
在一些实施方式中，所述microRNA对应的上游引物包括：
(6)所述hsa-miR-10394-5p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
SEQ ID NO.12：TTCTGCAGGTCCTGGTGAA；
(7)所述hsa-miR-3657对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；
SEQ ID NO.13：TCGGTGTGTCCCATTATTG；
(8)所述hsa-miR-6077对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
SEQ ID NO.14：TGGGGAAGAGCTGTACG；
(9)所述hsa-miR-4798-3p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；
SEQ ID NO.15：TGGAACTCACGAAGTATAC；
(10)所述hsa-miR-3127-3p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；
SEQ ID NO.16：TTCCCCTTCTGCAGGCC。
而所述cel-miR-54对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；
SEQ ID NO.17：TCGGAGGATATGAGACGACG。
在一些实施方式中，所述通用下游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；
SEQ ID NO.18：CAGTGCAGGGTCCGAGGT。
在一些实施方式中，所述Taqman探针的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示；
SEQ ID NO.19：CAGAGCCACCTGGGCAATTT。
在一些实施方式中，Taqman probe、Universal Reverse Primer、cel-miR-54Forward Primer和microRNA Forward Primer均由Sangon Biotech公司合成。
为更好的说明本发明的技术方案，下面通过多个实施例做进一步的解释说明。
实施例
对受试者血液样本进行筛查，包括以下步骤：
S11、样本收集。收集已确诊的肾癌患者血清120例，体检的健康人血清120例。在取得所有受试者知情同意下，各取外周血2mL，并在2小时内于4℃下离心，转速为3600g，离心10分钟，取上层血清，于冰箱中-80℃保存备用。
S12、RNA提取。取200μL已提取的血清，加入0.1pM线虫cel-miR-54作为外参，再按1:5的比例加入1mL的TRIzol中充分混匀，依照TRIzol提供的方案提取总RNA。
S13、cDNA的合成。按照逆转录试剂盒的方法，在普通PCR仪上以步骤S11所提取的总RNA为模版，加入试剂盒提供的逆转录酶、dNTP以及反应缓冲液，microRNA和cel-miR-54的特异反转录引物混合物，将RNA逆转录成cDNA，-20℃保存待用，其中，cDNA合成反应体系的组成如表1所示。
表1 cDNA合成反应体系的组成
组分 体积/μL
10×Sensiscript Reverse Transcription Buffer 2
5μM dNTP Mix 2
Reverse transcription Mix 1
Sensiscript Reverse Transcriptase 1
Purified RNA 2
RNase-free water up to 20
注：表1中up to表示加RNase-free水至cDNA合成反应体系的体积为20μL；Reversetranscription Mix包括microRNA对应的反转录引物序列和cel-miR-54的反转录引物序列；其中，所述microRNA对应的反转录引物序列包括：编码核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的hsa-miR-10394-5p的反转录引物序列；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的hsa-miR-3657的反转录引物序列；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的hsa-miR-6077的反转录引物序列：编码核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的hsa-miR-4798-3p的反转录引物序列；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的hsa-miR-3127-3p的反转录引物序列：所述cel-miR-54的反转录引物序列的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。
S14、RT-qPCR检测。血清样本逆转录的cDNA，按照Golden HS TaqMan荧光实时定量PCR试剂盒的方法，进行荧光实时定量PCR，在LightCycler480(Roche)荧光定量PCR仪读出各个样本的Ct值。根据2-ΔCq计算方法，以线虫cel-miR-54作外参计算出该血清样本的ΔCT值，根据公式ΔCT(检测)＝CT(microRNA，检测)–CT(外参，检测)，根据得到的CT值，按2^–ΔCT值进行目的基因的相对定量检测，其中，实时荧光定量PCR反应体系的组成如表2所示。
表2实时荧光定量PCR反应体系的组成
Figure BDA0003964664390000091
步骤S14中，所述microRNA对应的上游引物包括：编码核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的hsa-miR-10394-5p上游引物；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的hsa-miR-3657上游引物；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的hsa-miR-6077上游引物；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的hsa-miR-4798-3p上游引物；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的hsa-miR-3127-3p上游引物；编码核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的cel-miR-54上游引物；所述通用下游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；所述Taqman探针的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示。
RT-qRCR运用的仪器为LightCycler480(Roche)，反应条件为：①预变性，95℃，5分钟；②变性，95℃，10秒；退火，60℃，30秒，共40个循环。
数据处理：采用2^–ΔCT法整理数据，数据分析和图形处理采用GraphPad Prism8.3.0软件分析，运用Two-tailed Student’s test统计学方法对所有数据进行检测，数据以平均值±标准差表示，P<0.05表示有统计学意义，即该microRNA可用于鉴别肾癌患者与正常人。
从上述的定量分析结果发现：
(1)参阅图1(图中中间横线表示各组血清hsa-miR-10394-5p的平均值，上下两条横线表示各组血清hsa-miR-10394-5p的平均值加减标准差)和图2，肾癌患者血清中hsa-miR-10394-5p表达水平较正常对照组显著下调(P<0.0001)，差异具有统计学意义；通过ROC曲线得到所对应的曲线下面积(即对肾癌和正常人的鉴别效能AUC)为0.7053(95％CI：0.64-0.7706，P<0.0001)，灵敏度为68.33％，特异度为60.83％。
(2)参阅图3(图中中间横线表示各组血清hsa-miR-3657的平均值，上下两条横线表示各组血清hsa-miR-3657的平均值加减标准差)和图4，肾癌患者血清中hsa-miR-3657表达水平较正常对照组显著上调(P<0.0001)，差异具有统计学意义；通过ROC曲线得到所对应的曲线下面积(即对肾癌和正常人的鉴别效能AUC)为0.7634(95％CI：0.7034-0.8234，P<0.0001)，灵敏度为75.83％，特异度为65.83％。
(3)参阅图5(图中中间横线表示各组血清hsa-miR-6077的平均值，上下两条横线表示各组血清hsa-miR-6077的平均值加减标准差)和图6，肾癌患者血清中hsa-miR-6077表达水平较正常对照组显著下调(P<0.0001)，差异具有统计学意义；通过ROC曲线得到所对应的曲线下面积(即对肾癌和正常人的鉴别效能AUC)为0.8171(95％CI：0.763-0.8711，P<0.0001)，灵敏度为83.33％，特异度为64.17％。
(4)参阅图7(图中中间横线表示各组血清hsa-miR-4798-3p的平均值，上下两条横线表示各组血清hsa-miR-4798-3p的平均值加减标准差)和图8，肾癌患者血清中hsa-miR-4798-3p表达水平较正常对照组显著下调(P<0.0001)，差异具有统计学意义；通过ROC曲线得到所对应的曲线下面积(即对肾癌和正常人的鉴别效能AUC)为0.8595(95％CI：0.8102-0.9088，P<0.0001)，灵敏度为82.5％，特异度为72.5％。
(5)参阅图9(图中中间横线表示各组血清hsa-miR-3127-3p的平均值，上下两条横线表示各组血清hsa-miR-3127-3p的平均值加减标准差)和图10，肾癌患者血清中hsa-miR-3127-3p表达水平较正常对照组显著下调(P<0.0001)，差异具有统计学意义；通过ROC曲线得到所对应的曲线下面积(即对肾癌和正常人的鉴别效能AUC)为0.8367(95％CI：0.7858-0.8875，P<0.0001)，灵敏度为82.5％，特异度为72.5％。
综合上述的实验结果可以看出，本发明实施例确认了血清中hsa-miR-10394-5p、hsa-miR-3657、hsa-miR-6077、hsa-miR-4798-3p、hsa-miR-3127-3p这五种microRNA在诊断肾癌方面具有较高的诊断效能，有望成为肾癌筛查和诊断标志物。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims (4)

1.一种血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途，其特征在于，所述血液microRNA包括hsa-miR-10394-5p、hsa-miR-3657、hsa-miR-6077、hsa-miR-4798-3p以及hsa-miR-3127-3p中的至少一种；
其中，所述hsa-miR-10394-5p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述hsa-miR-3657的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述hsa-miR-6077的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述hsa-miR-4798-3p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述hsa-miR-3127-3p的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
2.一种检测权利要求1所述血液microRNA的引物，其特征在于，包括hsa-miR-10394-5p反转录引物、hsa-miR-3657反转录引物、hsa-miR-6077反转录引物、hsa-miR-4798-3p反转录引物、hsa-miR-3127-3p反转录引物中的至少一种以及每种microRNA对应的上游引物；
其中，所述hsa-miR-10394-5p反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示；
所述hsa-miR-3657反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；
所述hsa-miR-6077反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示：
所述hsa-miR-4798-3p反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；
所述hsa-miR-3127-3p反转录引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；
所述hsa-miR-10394-5p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
所述hsa-miR-3657对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；
所述hsa-miR-6077对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
所述hsa-miR-4798-3p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；
所述hsa-miR-3127-3p对应的上游引物的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示。
3.一种如权利要求2的引物在制备肾癌筛查或诊断试剂盒中的应用。
4.一种肾癌筛查或诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的至少一种引物。
CN202211493719.4A 2022-11-25 2022-11-25 血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒 Pending CN116064816A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211493719.4A CN116064816A (zh) 2022-11-25 2022-11-25 血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211493719.4A CN116064816A (zh) 2022-11-25 2022-11-25 血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116064816A true CN116064816A (zh) 2023-05-05

Family

ID=86172344

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211493719.4A Pending CN116064816A (zh) 2022-11-25 2022-11-25 血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116064816A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2765870A1 (en) * 2009-06-19 2010-12-23 Leroi V. Desouza Renal cell carcinoma biomarkers
WO2013026684A1 (en) * 2011-08-19 2013-02-28 Febit Holding Gmbh Complex sets of mirnas as non-invasive biomarkers for kidney cancer
CN104903468A (zh) * 2012-11-16 2015-09-09 西门子公司 用于帕金森氏病的新诊断MiRNA标志物
WO2016106268A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 University Of Georgia Research Foundation RECOMBINANT CELLS COMPRISING miRNA MIMICS
WO2019068139A1 (en) * 2017-10-03 2019-04-11 GeneSeq Pty Ltd METHOD FOR DIAGNOSING, STADIFYING AND MONITORING A MELANOMA USING MICROARN GENE EXPRESSION
CN115161402A (zh) * 2022-07-26 2022-10-11 深圳市科芮达健康科技有限公司 血液microRNA作为前列腺癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2765870A1 (en) * 2009-06-19 2010-12-23 Leroi V. Desouza Renal cell carcinoma biomarkers
WO2013026684A1 (en) * 2011-08-19 2013-02-28 Febit Holding Gmbh Complex sets of mirnas as non-invasive biomarkers for kidney cancer
CN104903468A (zh) * 2012-11-16 2015-09-09 西门子公司 用于帕金森氏病的新诊断MiRNA标志物
WO2016106268A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 University Of Georgia Research Foundation RECOMBINANT CELLS COMPRISING miRNA MIMICS
WO2019068139A1 (en) * 2017-10-03 2019-04-11 GeneSeq Pty Ltd METHOD FOR DIAGNOSING, STADIFYING AND MONITORING A MELANOMA USING MICROARN GENE EXPRESSION
CN115161402A (zh) * 2022-07-26 2022-10-11 深圳市科芮达健康科技有限公司 血液microRNA作为前列腺癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FEI MO等: "Curcumin-Induced Global Profiling of Transcriptomes in Small Cell Lung Cancer Cells", 《FRONTIERS IN CELL AND DEVELOPMENTAL BIOLOGY》, 12 January 2021 (2021-01-12), pages 1 - 9 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111004850B (zh) circRNAs分子在制备肝癌诊断试剂盒中的应用及应用该分子的试剂盒
CN111826444B (zh) 一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物、探针及其应用
CN109457032B (zh) 甲状腺癌分子诊断试剂盒
CN113337613B (zh) 一种与肝癌相关的血清外泌体tsRNA标志物、探针及其应用
CN105671181B (zh) 用于检测肺癌的基因标志物、引物、探针及试剂盒
CN111172287B (zh) 外泌体lncRNA RN7SL5P作为内参基因在胃癌lncRNA检测中的应用
CN115161402A (zh) 血液microRNA作为前列腺癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒
CN114921546B (zh) circHIPK2作为乳腺癌生物标志物的应用
CN113584169B (zh) 一种与肝癌相关的血清tsRNA标志物、探针及其应用
CN108588226A (zh) 检测乳腺癌脑转移的miRNA组合及含有该组合的试剂盒
CN113528660A (zh) 前列腺癌的风险评估装置
CN111733242B (zh) lncRNA AK024561作为卵巢癌诊断标志物的应用
CN120290726A (zh) 一种用于宫颈癌诊断的血液标志物及其应用
TWI758670B (zh) 健康風險評估方法
CN117568481A (zh) 一组与肝癌相关的血浆外泌体tsRNAs标志物及其应用
CN116769911B (zh) 一种血清外泌体中长链非编码rna作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用
CN116064816A (zh) 血液microRNA作为肾癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒
CN116162710A (zh) 一种检测肝癌相关pbmc中trem2基因的引物、探针及应用
CN106701973B (zh) 一组用于头颈鳞状细胞癌淋巴结转移速检的lamp引物组ck7-18
CN101519686B (zh) 用于胃癌和胃癌组织转移的分子检测方法和试剂盒
CN116377074A (zh) miR-15a-5p在口腔鳞癌早期诊断和预后评估中的应用
CN116287237A (zh) 血液microRNA作为膀胱癌筛查或诊断标志物的用途、检测引物和试剂盒
CN117448319A (zh) 血清小胞外囊泡miRNA的PCR内参及制备方法
CN109182514B (zh) 肺癌诊断或转移诊断标志物LncRNA Loc729658和试剂盒及其应用
CN109182520B (zh) 一种宫颈癌及其癌前病变检测试剂盒及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20230505

RJ01 Rejection of invention patent application after publication