CN116035946B - 一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法及应用，属于化妆品技术领域，它解决了现有化妆品制备效率低、生产能耗高、保存效果差、补水保湿以及美白抗皱效果差等技术问题。本通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物配方合理，神经酰胺含量高，产品品质良好，可长时间保存，具有促进活性物吸收，降低皮肤刺激的作用，能够显著提高皮肤含水量，具有稳定持久的补水效果，具有舒缓、修护功效，提升美白和抗衰老效果；本通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法通过联合装置生产，采用热循环、流水线式生产制备保证混合反应效果，制备效率高，生产时间短，能耗低。

Description

一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法及 应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，涉及一种神经酰胺细胞磷脂组合物，特别是一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法及应用。

背景技术

神经酰胺作为皮肤角质层细胞间脂质的主要成分，由长链鞘氨醇通过酰胺键与脂肪酸共价结合，对表皮角质层形成过程发挥重要作用，具有维持皮肤屏障、保湿、抗衰老和疾病治疗等作用。具体的其可维持肌肤水油平衡，增强肌肤的自我保护；能快速渗入皮肤，和角质层中的水结合，形成网状结构锁住水分；神经酰胺能调理肌肤，修复肌肤屏障。

因此，神经酰胺作为一类有效的护肤活性成分广泛应用于不同化妆品中。但在实际应用中，神经酰胺为高结晶性物质，油溶性一般、配方中应用性差、皮肤滞留量低。为了提高神经酰胺溶解性、改善水分散性和透皮性，现有技术已采用神经酰胺脂质体、神经酰胺囊泡分散物和神经酰胺纳米乳液等方法，制备出神经酰胺纳米组合物，其溶解性和水分散性得到较大提高。含量一般为0.5％，甚至0.05％，活性成分的含量仍非常低，护肤效果有限，其次，所制备的复合神经酰胺脂质体粒径大，阻碍神经酰胺透皮吸收；另外也有使用高压均质的方法制备神经酰胺纳米乳液，通过高压均质机处理，得到外观呈半透明或透明的神经酰胺纳米乳液，该制剂具有稳定性高、水分散性好、生物相容性好的特点，但在制备过程中所需原料较多、制备工程相对复杂且需特定机器。

复合凝聚法是相分离法的一种，是由组成壁材的两种高分子聚合物在适当的条件下，通过改变外部环境，如稀释或调节pH，使聚合物间由于静电相互作用形成复合凝聚相，沉积于芯材乳状液滴表面形成微胶囊的方法。

但是现有采用复合凝聚法的设备生产制备效率低，生产成本大、能耗高。经检索，如中国专利文献公开了一种皮肤保湿用神经酰胺及其制备方法【申请号：CN201810568899.5；公开号：CN108478466B】。这种皮肤保湿用神经酰胺及其制备方法，所述皮肤保湿用神经酰胺，由包括魔芋神经酰胺、大米神经酰胺、米糠神经酰胺的原料制备而成。本发明的皮肤保湿用神经酰胺，富含魔芋神经酰胺、大米神经酰胺、米糠神经酰胺，虽然该专利中公开的皮肤保湿用神经酰胺虽然具有一定的美白、保湿、等效果，但是，该专利的成分类型过于单一，神经酰胺为高结晶性物质，油溶性一般、配方中应用性差、皮肤滞留量低，因此就需要进行多种原理相互配合才能达到更好的效果。

同时现有技术制备的神经酰胺纳米乳液，神经酰胺含量低，皮肤较难吸收，例如中国发明专利CN104546516A虽然采用了纳米脂质体技术，但所制备的复合神经酰胺脂质体中神经酰胺Ⅵ的含量为0.1％～0.5％，神经酰胺ⅢB含量为0.1％～0.6％。

基于此，我们提出一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法及应用，采用热循环、流水线式生产制备保证混合反应效果，制备效率高，能耗低；制备的组合物使用带相反电荷的细胞磷脂和海藻酸钠通过复合凝聚形成复合壁材，然后包裹神经酰胺，通过细胞磷脂的亲肤作用，提高神经酰胺的透皮吸收，降低刺激；制得的组合物神经酰胺含量高，外观稳定，具有补水保湿以及美白抗皱的功效。

发明内容

本发明的目的是针对现有的技术存在上述问题，提出了一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法及应用，该发明要解决的技术问题是：如何实现制备的化妆组合物的神经酰胺含量高，具备补水保湿及美白抗皱效果，同时制备效率高，能耗低。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：

一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法，包括以下制备步骤：

步骤一，分别称取一定量的细胞磷脂和海藻酸钠，在35-60℃的水中搅拌使其充分溶解，得到壁材溶液；所述的壁材溶液中细胞磷脂和海藻酸钠的重量占总重量分数为5％，即细胞磷脂和海藻酸钠的重量与细胞磷脂和海藻酸钠及水的重量比为1:20，细胞磷脂与海藻酸钠的重量比为1-5:1；

步骤二，称取一定量的神经酰胺，在一定量的油脂中进行搅拌溶解，搅拌的同时加入一定量的乳化剂，得到油相；

步骤三，将步骤二制得的油相加入到步骤一制得的壁材溶液中，高速分散得到均一的O/W型乳状液；

步骤四，将步骤三制得的O/W型乳状液于45℃，进行恒温搅拌，恒温搅拌的速度为20-550r/min,用10％的酸溶液调节pH至3.8-6.8,反应10-30分钟，得到乳化液；

步骤五，将乳化液冷却至10-15℃，冷却时间为0.5～1h，调节pH至6.0；

步骤六，向乳化液中加入谷氨酰胺转氨酶，在室温下，固化3.5-6.5h，得到固化组合物。

所述细胞磷脂带正电荷，海藻酸钠带负电荷，细胞磷脂与海藻酸钠发生电荷中和作用而发生复凝聚反应。

所述细胞磷脂亲水性基团含有支链结构，其化学式如下：

化学式中，R1，R2和R3各自独立地选自：H、C1-C4烷烃基和C3-C4的环烷基，其疏水性基团包含：C5-30脂肪链结构。

所述O/W型乳状液为油相包裹在壁材内部形成的包裹体溶液。

所述步骤二中的油脂为大豆油、辛基十二烷醇、异壬酸异壬酯、山茶花油、橄榄油、甜杏仁油、鳄梨油或小麦胚芽油中的一种或几种，神经酰胺与油脂重量比为1:2，油脂的重量占O/W型乳状液的总重量的重量比为0.5-5％。

所述步骤二中的乳化剂为吐温80，聚甘油酯类、蔗糖脂肪酸酯、烷基糖苷类、氢化卵磷脂、脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯或聚醚类中的一种或几种，所述乳化剂占O/W型乳状液的总重量的5-20％。

所述步骤五中的谷氨酰胺转氮酶的酶活为100U/g，谷氨酰胺转氮酶的添加重量为壁材溶液总量的1/3-1/12，所述步骤四酸溶液为盐酸溶液、醋酸溶液或硫酸溶液。

所述步骤一中的35-60℃水中搅拌、步骤四中的恒温搅拌和步骤五中的冷却，均为水浴条件。

所述组合物单独或与其他化妆品按照一定比例混合后涂抹于人体皮肤。

还包括温控箱和换热压缩泵，所述温控箱的外壁设有隔热层，温控箱内部设有若干隔热板，若干隔热板将温控箱的内部分隔为若干保温室，保温室的上下两端均设有密封橡胶圈，第三个保温室外侧设有高速分散组件，第三个保温室内部设有高速分散罐，其余保温室内部设有搅拌机构，换热压缩泵位于第五个保温室的外侧，第一个和第二个搅拌机构分别与高速分散罐之间、高速分散罐和第三个搅拌机构之间、第三个搅拌机构和第四个搅拌机构之间以及第四个搅拌机构和第五个搅拌机构之间均连接有注液泵，换热压缩泵与保温室通过保温管道连接。

采用以上结构，启动换热压缩泵，分别控制第一个和第六个保温室内部的水浴温度依次为35-60℃、35-60℃、40-50℃、45℃、10-15℃和25℃；

分别称取一定量的细胞磷脂、海藻酸钠和水，注入第一个保温室内部的搅拌机构内部，在35-60℃的水浴中搅拌使其充分溶解，得到壁材溶液；

分别称取一定量的神经酰胺、油脂和乳化剂，注入第二个保温室内部的搅拌机构内部，在35-60℃的水浴中，充分搅拌，得到油相；

通过注液泵将油相和壁材溶液，注入第三个保温室内部的高速分散罐内，在40-50℃的水浴中，高速分散组件与高速分散罐配合进行高速分散，得到均一的O/W型乳状液；

通过注液泵将O/W型乳状液，注入第四个保温室内部的搅拌机构内部，在45℃的水浴中，进行恒温搅拌，恒温搅拌的速度为20-550r/min,再注入10％的酸溶液，调节pH至3.8-6.8,反应10-30分钟，得到乳化液；

通过注液泵将乳化液注入第五个保温室内部的搅拌机构内部，在10-15℃的水浴中，进行冷却，冷却时间为0.5～1h，调节pH至6.0；

通过注液泵将冷却后的乳化液注入第六个保温室内部的搅拌机构内部，并向乳化液中加入谷氨酰胺转氨酶，在25℃的水浴中(室温下)，固化3.5-6.5h，得到固化组合物。

所述保温室的内部四壁内侧均设有环形换热管，换热压缩泵的压缩气态冷媒端连接有多通控制阀，多通控制阀分别与前四个保温室以及最后一个保温室的环形换热管的进端之间通过保温管道连接，前四个保温室以及最后一个保温室的环形换热管的出端与第五个保温室的环形换热管的进端之间通过保温管道连接，第五个保温室的环形换热管的出端与换热压缩泵的气态冷媒端通过保温管道连接。

采用以上结构，换热压缩泵将压缩的气态冷媒通过压缩气态冷媒端注入多通控制阀，再通过多通控制阀注入前四个保温室以及最后一个保温室的环形换热管的进端，气态冷媒凝结形成液态冷媒，释放出热量，控制前四个保温室以及最后一个保温室的内部水温，液态冷媒进入到第五个保温室的环形换热管的进端，液态冷媒蒸发吸热，控制第五个保温室的内部水温为10-15℃。

所述保温室上均设有注液管和排液管，注液管位于排液管的上方，保温室上均设有第一温度传感器和第二温度传感器，第一温度传感器伸入保温室内部，第二温度传感器伸入对应的搅拌机构和高速分散罐的内部。

采用以上结构，注液管用于注水，排液管用于排水，两者配合，便于换水，第一温度传感器监测各保温室内部的水浴温度，第二温度传感器监测对应的搅拌机构和高速分散罐的内部的温度，保证温度准确。

所述搅拌机构包括搅拌罐体，搅拌罐体的下端设有若干均布的支撑腿，搅拌罐体的外壁上部和下部均设有第一密封圈，第一密封圈与保温室对应位置的密封橡胶圈配合密封，搅拌罐体的上端设有罐盖，罐盖上设有排气管和若干注液接管，罐盖上固定有安装架，安装架上转动设有搅拌架，搅拌架位于搅拌罐体内部，安装架上固定有搅拌电机，搅拌电机的输出轴与搅拌架的转轴传动连接，搅拌罐体的下端设有出料管。

采用以上结构，第一密封圈与保温室对应位置的密封橡胶圈配合密封，保证密封，注液接管用于注入原料以及个过程混合料，搅拌电机的输出轴带动搅拌架的转轴转动，搅拌架搅动原料和过程料，进行有效混合和搅动，避免沉淀，然后从出料管排出，排气管用于排出蒸汽，保证气压稳定，排气管可连接导管伸入保温室的内部的水浴内部，保证温度稳定，且更加节能。

所述高速分散罐包括分散罐体，分散罐体的的外壁上部和下部均设有第二密封圈，第二密封圈与保温室对应位置的密封橡胶圈配合密封，分散罐体的下端设有排液阀。

采用以上结构，第二密封圈与保温室对应位置的密封橡胶圈配合密封，保证密封，排液阀用于排出内部的混合料。

所述高速分散组件包括底座，底座上端固定有电控箱和支架，支架上转动设有转动轴，转动轴中部固定有主动齿轮，支架上固定有升降电机，升降电机的输出轴与转动轴传动连接，支架上滑动设有升降滑架，升降滑架上固定有升降齿条，升降齿条与主动齿轮啮合，升降滑架上端固定有固定板，固定板的下端固定有搅拌电机，搅拌电机的输出轴上固定有搅拌轴，搅拌轴的端部固定有搅拌轮。

采用以上结构，升降电机的输出轴带动转动轴转动，从而带动主动齿轮转动，升降齿条与主动齿轮啮合，升降齿条带动升降滑架在支架上升降滑动，从而带动固定板升降，搅拌电机的输出轴带动搅拌轴转动，从而带动搅拌轮高速转动，搅拌轮高速转动的同时，可进行升降，保证搅拌混合充分。

一种神经酰胺细胞磷脂组合物，主要由以下各组分的重量份数的原料制成：神经酰胺1-5份、细胞磷脂1-5份、海藻酸钠1-5份、油脂1-5份、乳化剂5-15份、酸溶液1-2份、谷氨酰胺转氨酶0.3-1份、水80-85份。

所述海藻酸钠与海藻糖或掌状海带提取物为等同物质。

一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的应用，所述神经酰胺细胞磷脂组合物单独或与其他化妆品按照一定比例混合后涂抹于人体皮肤。

与现有技术相比，本通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法及应用具有以下优点：

本发明制备的神经酰胺细胞磷脂组合物，配方合理，神经酰胺含量高，产品品质良好，可长时间保存，具有促进活性物吸收，降低皮肤刺激的作用，能够显著提高皮肤含水量，具有稳定持久的补水效果，具有舒缓、修护功效，提升美白和抗衰老效果。

本发明中通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法，采用联合装置，采用热循环、流水线式生产制备保证混合反应效果，制备效率高，生产时间短，能耗低。

本发明中通过温控箱与若干搅拌机构及高速分散罐配合，可有效进行水浴温控，换热压缩泵与保温室的内部的环形换热管配合，形成换热循环，可有效进行恒温控制，效率高，效果好；采用独立的若干搅拌机构及高速分散罐配合，可快速达到该混合料的温度控制，反应效率高，搅拌速度快，无需等待时间，提高时效性，形成流水线作业。

附图说明

图1是本发明的制备流程框图。

图2是本发明中部分设备的左侧立体结构示意图。

图3是本发明中部分设备的右侧立体结构示意图。

图4是本发明中换热循环流程框图。

图5是本发明中搅拌机构的立体结构示意图。

图6是本发明中高速分散机构的立体结构示意图。

图7是本发明中高速分散机构的部分部件的立体结构示意图。

图8是本发明中实施例4的组合物外观状态图。

图9是本发明中实施例5的组合物外观状态图。

图10是本发明中对比例1的组合物外观状态图。

图11是本发明中对比例2的组合物外观状态图。

图12是本发明中保湿性能测试的统计图。

图13是本发明中乳酸刺激评分结果统计图。

图14是本发明中红色素含量测试结果统计图。

图15是本发明中TEWL值测试结果统计图。

图16是本发明中浓度-峰面积曲线图。

图17是本发明中累计渗透量结果图。

图18是本发明中扩散百分率结果图。

图19是本发明中组别1#的光甘草定的渗透速率图。

图20是本发明中组别2#的光甘草定的渗透速率图。

图21是本发明中SEw-皮肤皱纹图。

图22是本发明中皮肤亮度L*值图。

图23是本发明中皮肤弹性R2值、R5值图。

图中，1、温控箱；2、搅拌机构；3、高速分散罐；4、高速分散组件；5、换热压缩泵；6、第一温度传感器；7、第二温度传感器；8、密封橡胶圈；9、注液管；10、排液管；11、注液泵；12、搅拌罐体；13、安装架；14、注液接管；15、搅拌电机；16、排气管；17、罐盖；18、支撑腿；19、分散罐体；20、排液阀；21、底座；22、电控箱；23、支架；24、升降电机；25、转动轴；26、升降滑架；27、固定板；28、升降齿条；29、搅拌电机；30、搅拌轴；31、搅拌轮；32、第一密封圈；33、第二密封圈；34、换热管。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

如图1-图6所示，本通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的方法，包括以下制备步骤：

步骤一，分别称取一定量的细胞磷脂和海藻酸钠，在35-60℃的水中搅拌使其充分溶解，得到壁材溶液；所述的壁材溶液中细胞磷脂和海藻酸钠的重量占总重量分数为5％，即细胞磷脂和海藻酸钠的重量与细胞磷脂和海藻酸钠及水的重量比为1:20，细胞磷脂与海藻酸钠的重量比为1-5:1；

步骤二，称取一定量的神经酰胺，在一定量的油脂中进行搅拌溶解，搅拌的同时加入一定量的乳化剂，得到油相；

步骤三，将步骤二制得的油相加入到步骤一制得的壁材溶液中，高速分散得到均一的O/W型乳状液；

步骤四，将步骤三制得的O/W型乳状液于45℃，进行恒温搅拌，恒温搅拌的速度为20-550r/min,用10％的酸溶液调节pH至3.8-6.8,反应10-30分钟，得到乳化液(优选20分钟)；

步骤五，将乳化液冷却至10-15℃，冷却时间为0.5～1h，调节pH至6.0；

步骤六，向乳化液中加入谷氨酰胺转氨酶，在室温下，固化3.5-6.5h，得到固化组合物。

所述细胞磷脂带正电荷，海藻酸钠带负电荷，细胞磷脂与海藻酸钠发生电荷中和作用而发生复凝聚反应。

所述细胞磷脂亲水性基团含有支链结构，其化学式如下：

化学式中，R1，R2和R3各自独立地选自：H、C1-C4烷烃基和C3-C4的环烷基，其疏水性基团包含：C5-30脂肪链结构。

所述O/W型乳状液为油相包裹在壁材内部形成的包裹体溶液。

所述步骤二中的油脂为为大豆油、辛基十二烷醇、异壬酸异壬酯、山茶花油、橄榄油、甜杏仁油、鳄梨油或小麦胚芽油中的一种或几种，神经酰胺与油脂重量比为1:2，油脂的重量占O/W型乳状液的总重量的重量比为0.5-5％。

所述步骤二中的乳化剂为吐温80，聚甘油酯类、蔗糖脂肪酸酯、烷基糖苷类、氢化卵磷脂、脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯或聚醚类中的一种或几种，所述乳化剂占O/W型乳状液的总重量的5-20％。

所述步骤五中的谷氨酰胺转氮酶的酶活为100U/g，谷氨酰胺转氮酶的添加重量为壁材溶液总量的1/3-1/12，所述步骤四酸溶液为盐酸溶液、醋酸溶液或硫酸溶液。

所述步骤一中的35-60℃水中搅拌、步骤四中的恒温搅拌和步骤五中的冷却，均为水浴条件。

所述组合物单独或与其他化妆品按照一定比例混合后涂抹于人体皮肤。

还包括温控箱1和换热压缩泵5，温控箱1的外壁设有隔热层，温控箱1内部设有若干隔热板，若干隔热板将温控箱1的内部分隔为若干保温室，保温室的上下两端均设有密封橡胶圈8，第三个保温室外侧设有高速分散组件4，第三个保温室内部设有高速分散罐3，其余保温室内部设有搅拌机构2，换热压缩泵5位于第五个保温室的外侧，第一个和第二个搅拌机构2分别与高速分散罐3之间、高速分散罐3和第三个搅拌机构2之间、第三个搅拌机构2和第四个搅拌机构2之间以及第四个搅拌机构2和第五个搅拌机构2之间均连接有注液泵11，换热压缩泵5与保温室通过保温管道连接；

启动换热压缩泵5，分别控制第一个和第六个保温室内部的水浴温度依次为35-60℃、35-60℃、40-50℃、45℃、10-15℃和25℃；

分别称取一定量的细胞磷脂、海藻酸钠和水，注入第一个保温室内部的搅拌机构2内部，在35-60℃的水浴中搅拌使其充分溶解，得到壁材溶液；

分别称取一定量的神经酰胺、油脂和乳化剂，注入第二个保温室内部的搅拌机构2内部，在35-60℃的水浴中，充分搅拌，得到油相；

通过注液泵11将油相和壁材溶液，注入第三个保温室内部的高速分散罐3内，在40-50℃的水浴中，高速分散组件4与高速分散罐3配合进行高速分散，得到均一的O/W型乳状液；

通过注液泵11将O/W型乳状液，注入第四个保温室内部的搅拌机构2内部，在45℃的水浴中，进行恒温搅拌，恒温搅拌的速度为20-550r/min,再注入10％的酸溶液，调节pH至3.8-6.8,反应10-30分钟，得到乳化液(优选20分钟)；

通过注液泵11将乳化液注入第五个保温室内部的搅拌机构2内部，在10-15℃的水浴中，进行冷却，冷却时间为0.5～1h，调节pH至6.0；

通过注液泵11将冷却后的乳化液注入第六个保温室内部的搅拌机构2内部，并向乳化液中加入谷氨酰胺转氨酶，在25℃的水浴中(室温下)，固化3.5-6.5h，得到固化组合物。

保温室的内部四壁内侧均设有环形换热管34，换热压缩泵5的压缩气态冷媒端连接有多通控制阀，多通控制阀分别与前四个保温室以及最后一个保温室的环形换热管34的进端之间通过保温管道连接，前四个保温室以及最后一个保温室的环形换热管34的出端与第五个保温室的环形换热管34的进端之间通过保温管道连接，第五个保温室的环形换热管34的出端与换热压缩泵5的气态冷媒端通过保温管道连接；

换热压缩泵5将压缩的气态冷媒通过压缩气态冷媒端注入多通控制阀，再通过多通控制阀注入前四个保温室以及最后一个保温室的环形换热管34的进端，气态冷媒凝结形成液态冷媒，释放出热量，控制前四个保温室以及最后一个保温室的内部水温，液态冷媒进入到第五个保温室的环形换热管34的进端，液态冷媒蒸发吸热，控制第五个保温室的内部水温为10-15℃。

保温室上均设有注液管9和排液管10，注液管9位于排液管10的上方，保温室上均设有第一温度传感器6和第二温度传感器7，第一温度传感器6伸入保温室内部，第二温度传感器7伸入对应的搅拌机构2和高速分散罐3的内部；

注液管9用于注水，排液管10用于排水，两者配合，便于换水，第一温度传感器6监测各保温室内部的水浴温度，第二温度传感器7监测对应的搅拌机构2和高速分散罐3的内部的温度，保证温度准确。

搅拌机构2包括搅拌罐体12，搅拌罐体12的下端设有若干均布的支撑腿18，搅拌罐体12的外壁上部和下部均设有第一密封圈32，第一密封圈32与保温室对应位置的密封橡胶圈8配合密封，搅拌罐体12的上端设有罐盖17，罐盖17上设有排气管16和若干注液接管14，罐盖17上固定有安装架13，安装架13上转动设有搅拌架，搅拌架位于搅拌罐体12内部，安装架13上固定有搅拌电机15，搅拌电机15的输出轴与搅拌架的转轴传动连接，搅拌罐体12的下端设有出料管；

第一密封圈32与保温室对应位置的密封橡胶圈8配合密封，保证密封，注液接管14用于注入原料以及个过程混合料，搅拌电机15的输出轴带动搅拌架的转轴转动，搅拌架搅动原料和过程料，进行有效混合和搅动，避免沉淀，然后从出料管排出，排气管16用于排出蒸汽，保证气压稳定，排气管16可连接导管伸入保温室的内部的水浴内部，保证温度稳定，且更加节能。

高速分散罐3包括分散罐体19，分散罐体19的的外壁上部和下部均设有第二密封圈33，第二密封圈33与保温室对应位置的密封橡胶圈8配合密封，分散罐体19的下端设有排液阀20；

第二密封圈33与保温室对应位置的密封橡胶圈8配合密封，保证密封，排液阀20用于排出内部的混合料。

高速分散组件4包括底座21，底座21上端固定有电控箱22和支架23，支架23上转动设有转动轴25，转动轴25中部固定有主动齿轮，支架23上固定有升降电机24，升降电机24的输出轴与转动轴25传动连接，支架23上滑动设有升降滑架26，升降滑架26上固定有升降齿条28，升降齿条28与主动齿轮啮合，升降滑架26上端固定有固定板27，固定板27的下端固定有搅拌电机29，搅拌电机29的输出轴上固定有搅拌轴30，搅拌轴30的端部固定有搅拌轮31；

升降电机24的输出轴带动转动轴25转动，从而带动主动齿轮转动，升降齿条28与主动齿轮啮合，升降齿条28带动升降滑架26在支架23上升降滑动，从而带动固定板27升降，搅拌电机29的输出轴带动搅拌轴30转动，从而带动搅拌轮31高速转动，搅拌轮31高速转动的同时，可进行升降，保证搅拌混合充分。

通过温控箱1与若干搅拌机构2及高速分散罐3配合，可有效进行水浴温控，换热压缩泵5与保温室的内部的环形换热管34配合，形成换热循环，可有效进行恒温控制，效率高，效果好；

采用独立的若干搅拌机构2及高速分散罐3配合，可快速达到该混合料的温度控制，反应效率高，搅拌速度快，无需等待时间，提高时效性，形成流水线作业。

一种神经酰胺细胞磷脂组合物，主要由以下各组分的重量份数的原料制成：神经酰胺1-5份、细胞磷脂1-5份、海藻酸钠1-5份、油脂1-5份、乳化剂5-15份、酸溶液1-2份、谷氨酰胺转氨酶0.3-1份、水80-85份。

所述海藻酸钠与海藻糖或掌状海带提取物为等同物质。

实施例1

本神经酰胺细胞磷脂组合物，主要由以下各组分的重量份数的原料制成：神经酰胺1份、细胞磷脂1份、海藻酸钠1份、油脂1份、乳化剂5份、酸溶液1份、谷氨酰胺转氨酶0.3份、水80份。

实施例1的制备步骤如下：

步骤一，分别称取一定量的细胞磷脂、海藻酸钠和水，注入第一个保温室内部的搅拌机构2内部，在35-60℃的水浴中搅拌使其充分溶解，得到壁材溶液；

步骤二，分别称取一定量的神经酰胺、油脂和乳化剂，注入第二个保温室内部的搅拌机构2内部，在35-60℃的水浴中，充分搅拌，得到油相；

步骤三，通过注液泵11将步骤二制得的油相和步骤一制得的壁材溶液，注入第三个保温室内部的高速分散罐3内，在40-50℃的水浴中，高速分散组件4与高速分散罐3配合进行高速分散，得到均一的O/W型乳状液；

步骤四，通过注液泵11将O/W型乳状液，注入第四个保温室内部的搅拌机构2内部，在45℃的水浴中，进行恒温搅拌，恒温搅拌的速度为20-550r/min,再注入10％的酸溶液，调节pH至3.8-6.8,反应10-30分钟，得到乳化液；

步骤五，通过注液泵11将乳化液注入第五个保温室内部的搅拌机构2内部，在10-15℃的水浴中，进行冷却，冷却时间为0.5～1h，调节pH至6.0；

步骤六，通过注液泵11将冷却后的乳化液注入第六个保温室内部的搅拌机构2内部，并向乳化液中加入谷氨酰胺转氨酶，在25℃的水浴中(室温下)，固化3.5-6.5h，得到固化组合物。

实施例2

本神经酰胺细胞磷脂组合物，主要由以下各组分的重量份数的原料制成：神经酰胺2份、细胞磷脂2份、海藻酸钠2份、油脂2份、乳化剂10份、酸溶液1.5份、谷氨酰胺转氨酶0.6份、水83份。

实施例2的制备方法步骤与实施例1相同。

实施例3

本神经酰胺细胞磷脂组合物，主要由以下各组分的重量份数的原料制成：神经酰胺5份、细胞磷脂5份、海藻酸钠5份、油脂5份、乳化剂15份、酸溶液2份、谷氨酰胺转氨酶1份、水85份。

实施例3的制备方法步骤与实施例1相同。

实施例4

本神经酰胺细胞磷脂组合物，主要由以下各组分的重量份数的原料制成：神经酰胺1份、细胞磷脂2份、海藻酸钠1份、油脂2份、乳化剂10份、酸溶液2份、谷氨酰胺转氨酶0.6份、水83份。

实施例4的制备方法步骤与实施例1相同。

实施例5

实施例5与实施例4的各组分的重量份数的原料相同；

实施例5的制备方法步骤如下：只采用两个单独的搅拌釜；

步骤一，分别称取一定量的细胞磷脂、海藻酸钠和水，注入第一个搅拌釜内部，在35-60℃下，搅拌使其充分溶解，得到壁材溶液；

步骤二，分别称取一定量的神经酰胺、油脂和乳化剂，注入第二个搅拌釜内部，在35-60℃下，充分搅拌，得到油相；

步骤三，将步骤二制得的油相加入到第一个搅拌釜内部，充分搅拌，得到均一的O/W型乳状液；

步骤四，将第一个搅拌釜的温度调节到45℃，进行恒温搅拌，恒温搅拌的速度为20-550r/min,用10％的酸溶液调节pH至3.8-6.8,反应10-30分钟，得到乳化液；

步骤五，将第一个搅拌釜的温度调节到10-15℃，将乳化液冷却，冷却时间为0.5～1h，调节pH至6.0；

步骤六，向第一个搅拌釜中加入谷氨酰胺转氨酶，在室温下，固化3.5-6.5h，得到固化组合物。

将实施例1-5制备的组合物，进行对比实验：其中对比标准：生产效率和单位耗电量(能耗)，原料每份重量相同，实验表格(如表1所示)：

表1

通过表1可知，实施例1-4，通过联合装置，采用热循环、流水线式生产制备保证混合反应效果，制备效率高，生产时间短，能耗低。

取实施例1-5制备的等量的固化物，以及两个对比例，原料配比及观察制备后的固化物的外观状态(如表2所示)，每份重量相同：

表2

通过表2可知，实施例1-5制备的固化物外观较为透明，对比例1-2制备的固化物，是单独使用一种壁材则不能发生复凝聚反应形成较为稳定的包裹体，外观较为浑浊，实施例4见附图8、实施例5见附图9、对比例1见附图10、对比例2见附图11。

取实施例1-5制备的等量的固化物，对比例1-2制备的固化物，放置一段时间，外观状态(如表3所示)：

表3

通过表3可知，实施例1、2、4和5制备的固化物在室温下一个月后外观较为透明，实施例1在45℃下，1个月后，出现浑浊，实施例2在45℃和5℃下，1个月后，出现浑浊，实施例3相对浓度较大，出现浑浊(沉淀)，对比例1、2制备的固化物，一段时间后，会出现沉淀。因此实施例4和5的配方合理，各项效果最好。

一种通过复合凝聚法制备神经酰胺细胞磷脂组合物的应用，所述神经酰胺细胞磷脂组合物单独或与其他化妆品按照一定比例混合后涂抹于人体皮肤。

为了证明本发明制备的组合物自身的功效以及促渗效果，将实施例4制备的包裹体加入到含HPR的眼霜中，并进行功效测试，眼霜配方，如表4所示：

表4

实施例4制备的一种神经酰胺、细胞磷脂和海藻酸钠的组合物，以下简称为组合物，取一定量与含HPR的眼霜混合，进行测试。

(1)进行组合物基础修护保湿测试

受试者：共35人，男5人，女30人，年龄22至49岁，平均年龄28.7±7.1岁；符合受试者志愿入选标准。失访5人(因自身原因失访)，最终完成测试人数为30人。

主要设备及检测指标如表5所示：

名称	检测指标
		皮肤黑色素和血红素测试探头MX18	红色素
皮肤水分流失测试探头TM300	TEWL值

表5

试验方法：

1)保湿性能测试

测试样品：基质、组合物、空白(不适用任何样品)；部位：手臂内侧；人数：30人；参数：角质层含水量、经皮水分流失TEWL；试验条件：温度20±1℃，湿度50±10；时间点：0h，1h，2h，4h，6h；

2)修复性能测试

受试者连续使用组合物28天，组合物使用方法：早晚洁面后，取适量(0.3g左右)涂于脸部，每天至少使用两次。采用自身前后对照，测试时间点分别是：D0、D14、D28。受试者在室温21±1℃、相对湿度50±10％环境中适应20分钟后，检测乳酸刺激评分、红色、TEWL值，每个区域平行测定至少3次。检测指标如表6所示：

序号	检验检测项目	检验检测部位	检验检测指标
				1	乳酸刺激试验	面部	乳酸刺激评分
2	红斑指数	面部	红色素
				3	皮肤水分散失	面部	TEWL值

表6

数据处理和统计分析方法：

应用统计分析软件进行数据的统计分析。所有数据以均数±标准差 表示，若符合正态分布要求，自身前后的比较则采用配对t检验，否则采用两个相关样本和检验。

试验结果：

1)保湿

保湿性能测试的统计图(如图12所示)，在短效测试中，相比较使用含组合物的样品前0h的皮肤含水量34.89，使用后，皮肤含水量1h，2h，4h，6h值分别上升18.7％，16.5％，14.4％和12.5％。由皮肤角质层含水量的测试结果可知，使用样品1h时，皮肤含水量最高，随后逐渐下降，这与试验期间皮肤未涂抹任何化妆品、皮肤水分散失相关；使用面膜6h后，皮肤含水量仍高于使用组合物前，说明组合物能够显著提高皮肤含水量，具有稳定持久的补水效果。

2)修复(化妆品修护、舒缓功效检验检测结果表7如下):

备注：P<0.05，有显著性差异；P>0.05，无显著性差异。

表7

具体检测结果：

1)乳酸刺激评分结果统计图(如图13所示)，乳酸刺激评分结果差异性分析(n＝30)；由受试者进行半主观评价，皮肤科医生辅助评价，得乳酸刺激评分。与初始值相比，使用组合物28天后乳酸刺激评分呈降低趋势且存在显著性差异(P<0.05)，皮肤修复屏障得到修复。

2)红色素含量测试结果统计图(如图14所示)，红色素含量测试结果差异性分析(n＝30)；由检测人员使用仪器设备于受试者面部采集红色素含量。与初始值相比，使用组合物28天后红色素含量呈降低趋势且存在显著性差异(P<0.05)，说明使用组合物后皮肤得到舒缓效果。

3)TEWL值测试结果统计图(如图15所示)，TEWL值测试结果差异性分析(n＝30)；由检测人员使用仪器设备于受试者面部采集TEWL值。与初始值相比，使用组合物28天后经过皮水分散失呈降低趋势且存在显著性差异(P<0.05)，皮肤屏障得到修复，保湿能力得到提升。

总结上述：

1、连续使用试验组合物28天后，受试者乳酸刺激评分相比使用前显著降低，红色素含量相比使用前显著降低，因此可认为在该研究条件下，该组合物具有舒缓功效。

2、连续使用试验组合物28天后，角质层水分含量相比使用前无显著增加，经皮水分散失相比使用前显著降低。因此可认为在该研究条件下，该组合物具有修护功效。

(2)进行组合物促渗效果测试

利用细胞磷脂和海藻酸钠形成复合壁材的同时，包裹神经酰胺，使三种成分发挥协同作用，具有皮肤屏障修复、智慧保湿、促进活性物吸收等作用。以下为促进美白成分光甘草定和抗衰老成分HPR渗透的数据。

1、美白功效成分光甘草定透皮促渗测定

材料：月龄在1个月的小猪背部皮肤；

设备：TK-12D型药物透皮吸收Franz扩散池，上海锴力医学科技有限公司；恒温磁力搅拌器；

测试样品表，表8如下：

表8

1.1活性物体外渗透能力测定

(1)首先将皮肤固定于Franz扩散池的供给室和接收室之间，皮肤角质层面向供给室，真皮层一侧朝向接受室；

(2)向接收室中加入接受液7.0mL，将乳猪皮绷紧固定好后，通过取样器向接收室中添加1.5mL接收液(含30％甲醇的PBS)，排净空气，使皮肤真皮层面与接收液紧密接触；

(3)向供给室中皮肤表面分别加入不同的样品，有效渗透面积S约为3.14cm2。将300μL样品添加至猪皮表面将样品自皮肤中心部位辐射状向边缘均匀涂开。每种样品3个重复与平行(三个重复采用独立供体特定部位的皮肤)；

(4)渗透：开启电磁搅拌器以300rpm的速度搅拌，保持(32±1)℃恒温水浴，并确保水浴夹层无气泡；

(5)分别取1h、2h、4h、6h、24h时间点的样液，采用取样器通过取样管抽取接收液2.0mL，然后将其置于2mLEP管中，另外每次取样后均补加等量的接受液。

1.2透皮含量检测

24h渗透结束后，分别对不同实验组进行皮上、皮中、以及各时间点皮下所含待测样品含量进行检测，具体处理方法如下：

皮上未渗透部分检测：24h后，采用1mL移液枪吸取甲醇多次反复吹打清洗皮肤表面，洗5次共5mL，置于5mLEP管中，待测。

皮内部分检测：用灭菌手术刀沿供给室内边缘将皮肤划开，将皮剪碎后加入5mL甲醇超声提取60min，超声完毕后，吸出上清，待测；

皮下部分检测：各个时间点，在接收室中抽取的2.0mL接收液置2mLEP管中,待测。

色谱条件(光甘草定)

HPLC参数表，表9如下：

表9

以浓度为X轴，峰面积为Y轴，绘制标准曲线，得到标准曲线方程：y＝45668.5x+36023.2，r2＝0.99996。

浓度-峰面积表，表10如下：

浓度点编号	浓度(μg/mL)	峰面积
			S1	0	0
S2	0.16	7644
			S3	0.8	38038
S4	4	192971
			S5	20	955975
S6	100	4714544
			S7	500	22847923

表10

浓度-峰面积曲线图(如图16所示)，累计渗透量结果：

累积渗透量Q计算公式如下：Q＝Cn×V+∑Ci×V0(i＝1···n-1)

注：Q：累积渗透量；V：接收室中接收液体积；V0：每次取样的体积；Ci：第1次至上次取样时接收液中药物浓度；Cn：第n个取样点测得的样品浓度，表11如下：

表11

注：图中Q为24h时间点皮肤累积渗透量(μg)，SD为标准偏差。

累计渗透量结果图(如图17所示)，由图17可知，经过24h表面暴露，组别1#(0.5％光甘草定未加组合物)中光甘草定的累积渗透量为8.392μg，组别2#(0.5％光甘草定加入组合物)中光甘草定的累积渗透量为41.480μg；加入组合物后对光甘草定具有促进渗透效果。

扩散百分率P＝Q/Po*100％；注：Q为接收室中每个时间点样品的累积渗透量/Po为释放池中样品的理论含量。

时间-渗透率表，表12如下：

表12

扩散百分率结果图(如图18所示)，经过24h表面暴露，组别1#(0.5％光甘草定未加组合物)中光甘草定的扩散百分率为0.583％，组别2#(0.5％光甘草定加入组合物)中光甘草定的扩散百分率为52.113％；扩散百分率大大提升。

渗透系数结果：

渗透系数：以累积渗透量对渗透时间做回归方程，方程斜率为渗透系数Kp(即渗透速率)，表13如下：

表13

组别1#中光甘草定的渗透速率为0.388μg/h，如图19所示：

组别2#中光甘草定的渗透速率为30.491μg/h，如图20所示；

结合累积渗透量及渗透速率结果可知，0.5％光甘草定加入组合物渗透性优于未加入组合物。

2、HPR透皮

羟基频哪酮视黄酸酯，简称HPR，它属于类视黄醇家族。羟基频哪酮视黄酸酯(HPR)是利用羟基频哪酮修饰的视黄醇衍生物，可直接与细胞维甲酸受体(RARs)结合，可表皮及角质层新陈代谢的功能，抗衰老，能减少皮脂溢出，淡化表皮色素，起到预防皮肤衰老、治疗痤疮、美白淡斑等作用。对两组均加入HPR的眼霜进行测试，其中一组加入组合物，另一组则不加，对两组样品的透皮效果进行测试，志愿者进行8周时间的涂抹。

测试人数：30人，试验主要设备如表14所示：

表14

试验条件：温度21±1℃，湿度50±10％

试验方法：眼周涂抹

测试时间：受试者每日早晚各使用一次抗皱眼霜，采用自身前后对照，第八周进行测试。

数据处理和统计分析方法：

应用统计分析软件进行数据的统计分析。若符合正态分布要求，自身前后的比较则采用配对t检验，否则采用两个相关样本秩和检验。

SEw-皮肤皱纹图(如图21所示)，由图21可知，使用含有组合物HPR的抗皱眼霜，SEw-皮肤皱纹持续下降，因此使用含有HPR的抗皱眼霜同时加入组合物，能够促进HPR的吸收，进一步降低SEw-皮肤皱纹值，具有抗皱效果。

皮肤亮度L*值(如图22所示)，由图22可知，使用含有组合物HPR的抗皱眼霜，对比没有加入组合物的眼霜进行对比，使用8周后，皮肤亮度提升4.3％，说明组合物具有促进吸收的效果。

皮肤弹性R2值、R5值(如图23所示)，由图23可知，皮肤弹性的测试结果：如图所示，使用含组合物的HPR抗皱眼霜和不含组合物的HPR眼霜进行对比，0周～8周，皮肤弹性R2和R5值呈现逐渐上升的趋势。同0周皮肤弹性R2值(58.37±0.02316)相比，8周的皮肤弹性R2值为62.71+0.03526，上升7.4％。R5值则由56.25±0.03146提升至64.22±0.04206，上升14.1％，皮肤弹性和皮肤衰紧密相关，当皮肤弹力纤维与胶原纤维发生变化而渐失皮肤弹性和张力，可导致皮肤松弛与皱纹产生。使用含组合物的HPR抗皱眼霜，能够明显促进HPR的吸收，提升抗衰老效果。因此认为使用含有组合物的抗皱眼霜具有提升HPR吸收，增加眼部弹性的功效。

总结上述，本组合物神经酰胺含量高，通过对比加入组合物的抗皱眼霜和不加组合物的抗皱眼霜，Sew皱纹值下降，皮肤亮度提升，皮肤弹性值R2、R5值均得到提升，因此组合物具有保湿修复性能外，还可促进活性物吸收，提升美白抗衰老效果。

本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

Claims (8)

1.一种通过复合凝聚法制备的神经酰胺细胞磷脂组合物，其特征在于，主要由以下各组分的重量份数的原料制成：神经酰胺1-5份、细胞磷脂1-5份、海藻酸钠1-5份、油脂1-5份、乳化剂5-15份、酸溶液1-2份、谷氨酰胺转氨酶0.3-1份、水80-90份；

所述细胞磷脂带正电荷，海藻酸钠带负电荷，细胞磷脂与海藻酸钠发生电荷中和作用而发生复凝聚反应；

所述细胞磷脂亲水性基团含有支链结构，其化学式如下：

化学式中，R1，R2和R3各自独立地选自：H、C1-C4烷烃基和C3-C4的环烷基，细胞磷脂疏水性基团包含：C5-30脂肪链结构。

2.一种如权利要求1所述的神经酰胺细胞磷脂组合物通过复合凝聚法的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

步骤一，分别称取一定量的细胞磷脂和海藻酸钠，在35-60℃水中搅拌使其充分溶解，得到壁材溶液；所述的壁材溶液中细胞磷脂和海藻酸钠的重量占总重量分数为5％，即细胞磷脂和海藻酸钠的重量与细胞磷脂和海藻酸钠及水的重量比为1:20，细胞磷脂与海藻酸钠的重量比为1-5:1；

步骤二，称取一定量的神经酰胺，在一定量的油脂中进行搅拌溶解，搅拌的同时加入一定量的乳化剂，得到油相；

步骤三，将步骤二制得的油相加入到步骤一制得的壁材溶液中，高速分散得到均一的O/W型乳状液；

步骤四，将步骤三制得的O/W型乳状液于45℃下，进行恒温搅拌，恒温搅拌的速度为20-550r/min，用10％的酸溶液调节pH至3.8-6.8，反应10-30分钟，得到乳化液；

步骤五，将乳化液冷却至10-15℃，冷却时间为0.5～1h，调节pH至6.0，加入谷氨酰胺转氨酶，在室温下，固化3.5-6.5h，得到固化组合物。

3.根据权利要求2所述的一种神经酰胺细胞磷脂组合物通过复合凝聚法的制备方法，其特征在于，所述O/W型乳状液为油相包裹在壁材内部形成的包裹体溶液。

4.根据权利要求3所述的一种神经酰胺细胞磷脂组合物通过复合凝聚法的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的油脂为大豆油、辛基十二烷醇、异壬酸异壬酯、山茶花油、橄榄油、甜杏仁油、鳄梨油或小麦胚芽油中的一种或几种，神经酰胺与油脂重量比为1:2。

5.根据权利要求4所述的一种神经酰胺细胞磷脂组合物通过复合凝聚法的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的乳化剂为吐温80，聚甘油酯类、蔗糖脂肪酸酯、烷基糖苷类、氢化卵磷脂、脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯或聚醚类中的一种或几种。

6.根据权利要求5所述的一种神经酰胺细胞磷脂组合物通过复合凝聚法的制备方法，其特征在于，所述步骤五中的谷氨酰胺转氨酶的酶活为100U/g，谷氨酰胺转氨酶的添加重量为壁材溶液总量的1/3-1/12，所述步骤四酸溶液为盐酸溶液、醋酸溶液或硫酸溶液。

7.根据权利要求6所述的一种神经酰胺细胞磷脂组合物通过复合凝聚法的制备方法，其特征在于，所述步骤一中的35-60℃水中搅拌、步骤四中的恒温搅拌和步骤五中的冷却，均为水浴条件。

8.一种如权利要求1所述的通过复合凝聚法制备的神经酰胺细胞磷脂组合物的非治疗目的的应用，其特征在于，所述神经酰胺细胞磷脂组合物单独或与其他化妆品按照一定比例混合后涂抹于人体皮肤。