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CN116034159A - 新型肾上腺髓质素类似物及其制备方法和医药用途 - Google Patents

新型肾上腺髓质素类似物及其制备方法和医药用途 Download PDF

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CN116034159A
CN116034159A CN202180040000.2A CN202180040000A CN116034159A CN 116034159 A CN116034159 A CN 116034159A CN 202180040000 A CN202180040000 A CN 202180040000A CN 116034159 A CN116034159 A CN 116034159A
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ham
amino acid
compound
peptides
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北村和雄
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University of Miyazaki NUC
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Abstract

本发明提供了一种新型肾上腺髓质素类似物，其保持了作为母体化合物的肾上腺髓质素的药理作用，并且在给药于对象时表现出较高的生物学稳定性。本发明的一方面，涉及一种化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，所述化合物为选自于下述组中的肽：(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失的肽；(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；(c)在(b)的肽中，所述二硫键被亚乙基取代的肽；(d)在(a)～(c)的任一个肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；(e)在(a)～(d)的任一个肽中，C末端酰胺化的肽；以及(f)在(a)～(d)的任一个肽中，在C末端添加甘氨酸残基的肽。本发明的另一方面，涉及所述化合物等的制备方法、以及含有所述化合物等作为有效成分的药物、和用于预防或治疗的药剂。

Description

新型肾上腺髓质素类似物及其制备方法和医药用途
技术领域
本发明涉及一种新型肾上腺髓质素类似物及其制备方法和医药用途。
背景技术
肾上腺髓质素(adrenomedullin，以下也称为“AM”)是1993年从嗜铬细胞瘤组织中分离鉴定出的一种生物活性肽(非专利文献1)。发现之初，已证实AM能够发挥强力的扩张血管的降压作用。例如，专利文献1记载了含有人AM的氨基酸序列的、具有降血压作用的肽。
之后的研究表明，AM能够发挥心血管保护作用、抗炎症作用、血管生成作用及促进组织修复作用等多种药理作用。此外，为了将AM的药理作用应用于疾病治疗，对各种疾病患者进行了AM的给药研究。其中，AM作为炎症性肠病、肺动脉高压、周围血管疾病或急性心肌梗塞的治疗药的有用性受到期待。
例如，专利文献2记载了一种预防或治疗非细菌性的炎症性肠病的药剂，其含有如下物质作为有效成分：具有抑制非细菌性炎症的活性的肾上腺髓质素或其衍生物、或者它们的盐。
专利文献3记载了一种预防或治疗方法，是对需要预防或治疗的难以使用类固醇制剂、免疫抑制剂或生物制剂或使用效果不明显的炎症性肠病的患者进行所述炎症性肠病的预防或治疗的方法，所述方法包括对所述患者给予有效剂量的具有抑制炎症的活性的肾上腺髓质素、其衍生物、或者具有抑制炎症的活性的所述肾上腺髓质素或所述衍生物的盐。
由于AM是一种肽，其在机体内(例如血液中)的代谢反应导致它在机体内的半衰期较短。为此，将AM给药于对象时，需要选择持续静脉输注这样的持续给药法。另外，AM除了具有心血管保护作用、抗炎症作用、血管生成作用及促进组织修复作用等药理作用之外，还具有强力的血管扩张作用。因此，将AM给药于对象时，因强力的血管扩张作用，有可能引起如血压下降过度这样的不良反应。鉴于这些问题，开发了一种肾上腺髓质素衍生物，其既能保持肾上腺髓质素的药理作用，同时又能实质性抑制不良反应、且可长时间持续作用(专利文献4～6)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本专利第2774769号公报
专利文献2:日本专利第4830093号公报
专利文献3:日本专利第5954736号公报
专利文献4:国际公开WO2015/141819
专利文献5:国际公开WO2017/047788
专利文献6:国际公开WO2018/181638
非专利文献
非专利文献1:Kitamura K，Kangawa K，Kawamoto M，Ichiki Y，Nakamura S，Matsuo H，Eto T.Adrenomedullin：a novel hypotensive peptide isolated from humanpheochromocytoma.Biochem Biophys Res Commun，1993年4月30日，第192(2)卷，553-560页
发明内容
发明所要解决的问题
如上所述，为了从提高机体内可持续性的观点来改善肾上腺髓质素的药代动力学性质，开发了各种肾上腺髓质素衍生物。但是，已知的肾上腺髓质素衍生物与作为母体化合物的肾上腺髓质素相比，存在对肾上腺髓质素受体的结合亲和力下降的问题。由于肾上腺髓质素或其衍生物的药理作用，是通过这些化合物与肾上腺髓质素受体相结合来表达的，因此，肾上腺髓质素衍生物的结合亲和力比肾上腺髓质素低，其药理作用可能也比肾上腺髓质素降低。
因此，本发明的目的旨在提供一种能够保持母体化合物肾上腺髓质素的药理作用并且给药于对象时显示出较高生物学稳定性的新型肾上腺髓质素类似物。
解决问题的技术方案
本发明人等研究了各种解决上述问题的技术方案。本发明人等开发了一种新型肾上腺髓质素类似物，是根据血液中肾上腺髓质素的分解产物的结构，将具有与天然型人肾上腺髓质素的13～52位的氨基酸序列相同的氨基酸序列的肽经过取代或缺失一部分氨基酸残基而得到的。本发明人发现，该新型肾上腺髓质素类似物，能够在保持与母体化合物肾上腺髓质素实质等同的药理作用的同时，相较于肾上腺髓质素、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学性质。本发明人基于上述见解完成了本发明。
本发明包括以下方面和实施方式：
(1)一种化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，所述化合物为选自于下述组中的肽：
(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失的肽；
(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二
硫键的肽；
(c)在(b)的肽中，所述二硫键被亚乙基取代的肽；
(d)在(a)～(c)的任一个肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；
(e)在(a)～(d)的任一个肽中，C末端酰胺化的肽；以及
(f)在(a)～(d)的任一个肽中，在C末端添加甘氨酸残基的肽。
(2)实施方式(1)所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物中，所述肽选自于下述组中的肽：
(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取
代或缺失的肽；
(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二
硫键的肽；
(d)在(a)或(b)的肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；
(e)在(a)、(b)或(d)的肽中，C末端酰胺化的肽；以及
(f)在(a)、(b)或(d)的肽中，在C末端添加甘氨酸残基的肽。
(3)实施方式(1)或(2)所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物中，所述(a)的肽的1个氨基酸被取代或缺失。
(4)实施方式(3)所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物中，所述(a)的肽的32或33位的氨基酸残基被取代或缺失。
(5)实施方式(1)至(4)任一项所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物中，所述(a)的肽是由SEQ ID NO:4至11的任一氨基酸序列所组成的肽。
(6)实施方式(1)至(5)任一项所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物中，所述化合物是由SEQ ID NO:4至11的任一氨基酸序列组成的、C末端酰胺化、且4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽。
(7)一种制备实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物的方法，所述制备方法包括肽链合成步骤，该合成步骤通过固相体系或液相体系的肽合成，来合成具有实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物的氨基酸序列的肽链。
(8)一种药物，其含有实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物作为有效成分。
(9)实施方式(8)所述的药物，用于预防或治疗心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。
(10)一种预防或治疗心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染的药剂，其含有实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物作为有效成分。
(11)一种药物组合物，其含有实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物、和一种以上药学上可接受的载体。
(12)实施方式(11)所述的药物组合物，用于预防或治疗心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。
(13)一种预防或治疗症状、疾病和/或障碍的方法，该方法包括向需要预防或治疗所诉一种以上的症状、疾病和/或障碍的对象、给予有效剂量的上述实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物，所述一种以上的症状、疾病和/或障碍选自下组：循环系统疾病、脑与神经疾病、消化系统疾病、
内分泌代谢疾病、呼吸系统疾病和其他疾病。
(14)根据实施方式(13)所述的方法，其中，所述一种以上的症状、疾病和/或障碍是心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。
(15)实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物，用于预防或治疗一种以上的症状、疾病和/或障碍。
(16)根据实施方式(15)所述用途的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物，其中，所述一种以上的症状、疾病和/或障碍是心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。
(17)实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物的用途，用以制备用于预防或治疗一种以上的症状、疾病和/或障碍的药物。
(18)实施方式(1)至(6)任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物的用途，用以预防或治疗一种以上的症状、疾病和/或障碍。
(19)实施方式(17)或(18)所述的用途中，所述一种以上的症状、疾病和/或障碍是心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。
发明的效果：
根据本发明，能够提供一种保持母体化合物肾上腺髓质素的药理作用并且在给药于对象时显示出较高生物学稳定性的新型肾上腺髓质素类似物。
本说明书包括作为本申请的优先权基础的日本国专利申请第2020-066608号的说明书和/或附图中记载的内容。
附图说明
图1表示在实验Ⅰ中，血清或血浆的反应混合物的试样中所含AM的浓度的经时变化。图中，横坐标表示反应时间(min)，纵坐标表示AM的浓度(μM)。
图2表示在实验Ⅱ中，hAM(1-52)的分解产物采用反相高效液相色谱法(反相HPLC)在210nm波长下的UV色谱图。图中，横坐标表示反相HPLC的保留时间(min)，纵坐标表示210nm波长的UV吸收强度。
图3表示在实验Ⅱ中纯化肽的MALDI-TOFMS谱图。图中，横坐标表示质量电荷比(m/z)，纵坐标表示离子强度(a.u.)。
图4表示在实验Ⅳ中血清反应混合物试样中所含AM或AM类似物浓度的经时变化。图中，横坐标表示反应时间(min)，纵坐标表示AM或AM类似物的浓度(μM)。
图5表示实验Ⅳ中AM或AM类似物在反应开始240分钟后反应混合物中的残留率。图中，横坐标表示AM或AM类似物的种类，纵坐标表示AM或AM类似物的残留率(％)。
图6表示实验Ⅴ中，HEK293细胞的细胞内cAMP产生量相对于AM或AM类似物的添加浓度的剂量反应曲线。图中，A表示添加了hAM(1-52)(×)或者hAM(13-52)(○)的实验结果，B表示添加了hAM(13-52)(○)或[D-Arg-44]hAM(13-52)(●)的实验结果，C表示添加了hAM(13-52)(○)或[Ala-44]hAM(13-52)(●)的实验结果，D表示添加了hAM(13-52)(○)或[Lys-44]hAM(13-52)(●)的实验结果。图中，横坐标表示AM或AM类似物的添加浓度的对数(M)，纵坐标表示稳定表达AM1受体的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量(fmol/well)。
图7表示在实验Ⅵ中皮下给药后大鼠血浆中AM或AM类似物的量的经时变化。图中，横坐标表示皮下给药后的经过时间(hr)，纵坐标表示AM或AM类似物的血浆中浓度(pM)。
图8表示在实验Ⅷ中血清的反应混合物试样中所含AM或AM类似物浓度的经时变化。图中，横坐标表示反应时间(hr)，纵坐标表示AM或AM类似物的血清中浓度(％)，以相对于反应开始时刻(即反应开始0小时)的AM或AM类似物的浓度的相对值来表示。
图9表示在实验Ⅸ中，添加10-9M或10-8M的AM或AM类似物时的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量。图中，纵坐标表示稳定表达AM1受体的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量(fmol/ml)。
图10表示在实验Ⅸ中，HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量相对于AM或AM类似物的添加浓度的剂量反应曲线。图中，A表示添加了hAM(1-52)的实验结果，B表示添加[Gly-44]hAM(13-52)的实验结果，C表示添加了[des-Arg-44]hAM(13-52)的实验结果，D表示添加了[Phe-44]hAM(13-52)的实验结果。图中，横坐标表示AM或AM类似物的添加浓度的对数(M)，纵坐标表示稳定表达AM1受体的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量(fmol/ml)。
图11表示实验Ⅹ中皮下给药后大鼠血浆中AM或AM类似物的量的经时变化。图中，横坐标表示皮下给药后的经过时间(hr)，纵坐标表示AM或AM类似物的血浆中浓度(pM)。
具体实施方式
＜1.肾上腺髓质素类似物＞
肾上腺髓质素(AM)是1993年从人嗜铬细胞瘤组织中分离鉴定出的一种生物活性肽(SEQ ID NO:1，非专利文献1)。由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的、C末端酰胺化、且该氨基酸序列中的16位和21位的两个半胱氨酸残基形成二硫键的肽，对应于成熟的天然型人肾上腺髓质素(以下也记作“hAM(1-52)”)。由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽，对应于在C末端酰胺化和半胱氨酸残基的二硫键化的翻译后修饰尚未进行之前的(即，未成熟)形式的天然型人肾上腺髓质素。
hAM(1-52)Y-R-Q-S-M-N-N-F-Q-G-L-R-S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-R-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:1)
发现之初，已证实AM能够发挥强力的扩张血管的降压作用。之后的研究表明，AM能够发挥心血管保护作用、抗炎症作用、血管生成作用及促进组织修复作用等多种药理作用。此外，为了将AM的药理作用应用于疾病治疗，对各种疾病患者进行了AM的给药研究。
由于AM是一种肽，其在机体内(例如血液中)的代谢反应导致它在机体内的半衰期较短。此外，AM除了具有心血管保护作用、抗炎症作用、血管生成作用及促进组织修复作用等药理作用之外，还具有强力的血管扩张作用。因此，将AM给药于对象时，有可能因强力的血管扩张作用而引起如血压下降过度这样的不良反应。鉴于这些问题，开发了各种可长时间持续作用的AM衍生物(专利文献4～6)。但是，已知的AM衍生物与作为母体化合物的AM相比，存在对肾上腺髓质素受体的结合亲和力下降的问题。由于AM或其衍生物的药理作用是通过这些化合物与肾上腺髓质素受体相结合来表达的，因此，与AM相比结合亲和力低的AM衍生物，其药理作用可能也比AM降低。
本发明人等分析了血液中AM的分解产物，结果发现作为分解产物生成了由天然型人AM(hAM(13-52))的13～44位氨基酸残基组成的肽(hAM(13-44)、SEQ ID NO:2)。根据该结果，本发明人等开发了一种新型AM类似物，是通过对天然型人AM的13～52位氨基酸残基组成的、C末端酰胺化、且该氨基酸序列中的16位和21位两个半胱氨酸残基形成二硫键的肽(hAM(13-52)、SEQ ID NO:3)的部分氨基酸残基进行取代或缺失而得到的。本发明人发现，该新型AM类似物，能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
hAM(13-44)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-R-COOH(SEQ ID NO:2)
hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-R-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:3)
因此，本发明的一方面，涉及一种化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，所述化合物为选自于下述组中的肽：
(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失的肽；
(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(c)在(b)的肽中，所述二硫键被亚乙基取代的肽；
(d)在(a)～(c)任一个肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；
(e)在(a)～(d)任一个肽中，C末端酰胺化的肽；以及
(f)在(a)～(d)任一个肽中，在C末端添加甘氨酸残基的肽。
本说明书中，将所述化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，有时也记述为“肾上腺髓质素类似物”或“AM类似物”。
在成熟的人AM(hAM(1-52))中，16位的半胱氨酸残基和21位的半胱氨酸残基形成二硫键的环状结构及C末端酰胺结构，对肾上腺髓质素活性都是必需的，而由hAM(1-52)的第1～12位的氨基酸残基组成的肽结构对肾上腺髓质素活性并不是必需的(Eguchi S等，Endocrinology.1994年12月，第135(6)卷，p.2454-8)。在本方面的化合物中，(a)所包含的肽，具有形成环状结构的16位和21位的半胱氨酸残基、以及形成C末端酰胺结构的52位的酪氨酸残基，并且具有与天然型人AM不同的氨基酸序列。(e)所包含的肽，具有肾上腺髓质素活性所必需的环状结构和C末端酰胺结构。因此，通过具有上述特征，本方面的化合物能够保持与母体化合物AM实质等同的药理作用。
本方面的化合物中，所述肽优选为选自于下述组中的肽：
(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失的肽；
(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(d)在(a)或(b)的肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；
(e)在(a)、(b)或(d)的肽中，C末端酰胺化的肽；以及
(f)在(a)、(b)或(d)的肽中，在C末端添加甘氨酸残基的肽。
本方面的化合物中，所述肽更优选为选自于下述组中的肽：
(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失的肽；
(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(d)在(a)或(b)的肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；
(e)在(a)、(b)或(d)的肽中，C末端酰胺化的肽。
本方面的化合物中，所述肽进一步地更优选为：在由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失；4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键；1至3个氨基酸残基被缺失或添加；C末端酰胺化的肽。
在(a)的肽中，通常1至3个氨基酸残基被取代或缺失，优选1或2个氨基酸残基被取代或缺失，更优选1个氨基酸残基被取代或缺失。但是，所述被取代或缺失的氨基酸残基不是第4和9位的半胱氨酸残基。在本实施方式中，优选第1～3及第10～40位的氨基酸残基中所述个数的氨基酸残基被取代或缺失，更优选第29～35位的氨基酸残基中所述个数的氨基酸残基被取代或缺失，进一步更优选第32或33位的氨基酸残基被取代。凝血酶是一种蛋白酶，已知能特异性地识别含有精氨酸的数个氨基酸残基的序列并且选择性地裂解该序列(Gallwitz M，Enoksson M，Thorpe M，Hellman L，The Extended Cleavage Specificityof Human Thrombin.PLoS ONE，2012年，第7(2)卷，e31756.doi:10.1371/journal.pone.0031756)。本实施方式的化合物，即使在所述个数和位点的氨基酸残基被取代或缺失的情况下，也可以具有对肾上腺髓质素活性所必需的环状结构和C末端酰胺结构。因此，通过具有上述特征，本实施方式的化合物能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
优选地，(a)的肽是由SEQ ID NO:4至11中的任一氨基酸序列组成的肽。在本实施方式中，由SEQ ID NO:4的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的32位(对应于hAM(1-52)的44位)的精氨酸残基由D-精氨酸(D-Arg)取代的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化、并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[D-Arg-44]hAM(13-52)。由SEQ ID NO:5的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的32位(对应于hAM(1-52)的44位)的精氨酸残基由L-赖氨酸(Lys)取代的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[Lys-44]hAM(13-52)。由SEQ ID NO:6的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的32位(对应于hAM(1-52)的44位)的精氨酸残基由L-丙氨酸(Ala)取代的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[Ala-44]hAM(13-52)。由SEQ ID NO:7的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的32位(对应于hAM(1-52)的44位)的精氨酸残基由甘氨酸(Gly)取代的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[Gly-44]hAM(13-52)。由SEQ ID NO:8的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的32位(对应于hAM(1-52)的44位)的精氨酸残基缺失的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[des-Arg-44]hAM(13-52)。由SEQ ID NO:9的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的32位(对应于hAM(1-52)的44位)的精氨酸残基由L-天冬氨酸(Asp)取代的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[Asp-44]hAM(13-52)。由SEQ ID NO:10的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的32位(对应于hAM(1-52)的44位)的精氨酸残基由L-苯基丙氨酸(Phe)取代的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[Phe-44]hAM(13-52)。由SEQ ID NO:11的氨基酸序列〔即，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的33位(对应于hAM(1-52)的45位)的丝氨酸残基由L-脯氨酸(Pro)取代的氨基酸序列〕组成的、C末端酰胺化并且4位(对应于hAM(1-52)的16位)的半胱氨酸残基和9位(对应于hAM(1-52)的21位)的半胱氨酸残基形成二硫键的肽，被记为[Pro-45]hAM(13-52)。本实施方式的化合物，具有肾上腺髓质素活性所必需的环状结构和C末端酰胺结构，并且具有与天然型人AM不同的氨基酸序列。因此，通过具有上述特征，本实施方式的化合物能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
[D-Arg-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-*R-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:4,「*R」表示D-精氨酸)
[Lys-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-K-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:5)
[Ala-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-A-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:6)
[Gly-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-G-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:7)
[des-Arg-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:8)
[Asp-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-D-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:9)
[Phe-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-F-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:10)
[Pro-45]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-R-P-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:11)
本方面的化合物中，所述肽尤其优选为：由SEQ ID NO:4至11的任一氨基酸序列组成的、C末端酰胺化并且4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽。通过具有上述特征，本方面的化合物能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
本说明书中，“C末端酰胺化”是指机体内的肽的翻译后修饰的一个方式，具体而言是指肽的C末端氨基酸残基的主链羧基转化为酰胺基的反应。本说明书中，“半胱氨酸残基形成二硫键”或“半胱氨酸残基的二硫键化”是指机体内的肽的翻译后修饰的一个方式，具体而言是指肽的氨基酸序列中的两个半胱氨酸残基形成二硫键(-S-S-)的反应。在机体内产生的许多生物活性肽，最初被生物合成为分子量较大的前体蛋白，其在细胞内转运的过程中，经过C末端酰胺化和/或半胱氨酸残基的二硫键化这样的翻译后修饰反应，成为成熟的生物活性肽。C末端酰胺化通常是通过C末端酰胺化酶对前体蛋白发生作用而进行。对于具有C末端酰胺基的生物活性肽，在其前体蛋白中Gly残基与酰胺化的C末端羧基相结合，该Gly残基被C末端酰胺化酶转化为C末端酰胺基。此外，前体蛋白的C末端侧前肽中，存在例如Lys-Arg或Arg-Arg等碱性氨基酸残基组合的重复序列(水野，生化学第61卷，第12号，1435～1461页(1989))。半胱氨酸残基形成二硫键可在氧化条件下进行。机体内的半胱氨酸残基形成二硫键通常是通过蛋白二硫键异构酶对前体蛋白发生作用而进行。
(b)的肽可以通过将(a)的肽中的两个半胱氨酸残基的巯基用空气或适当的氧化剂氧化成二硫键的方式来形成。通过使用(b)的肽，可以让本方面的化合物的立体结构类似于天然型AM的立体结构。由此，本方面的化合物的肾上腺髓质素活性可以与天然型AM达到实质上基本等同。
(c)的肽可以通过将(b)的肽的二硫键转化为亚乙基的方式而形成。亚乙基取代二硫键可以通过本技术领域公知的方法进行(O.Keller等人，Helv.Chim.Acta，1974年，第57卷，p.1253)。通过使用(c)的肽，可以让本方面的化合物的立体结构稳定化。由此，本方面的化合物能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
在(d)的肽中，缺失或添加的氨基酸残基优选为1至3个范围，更优选为1或2个，进一步优选为1个。但是，所述缺失的氨基酸残基不是第4位和第9位的半胱氨酸残基。此外，所述缺失的氨基酸残基，优选为不是在(a)的肽中被取代的氨基酸残基。在本实施方式中，优选(d)的肽是在(a)～(c)的任一个肽中，在1～3及10～40位的氨基酸残基中所述个数的氨基酸残基被缺失或添加(优选添加)的肽，更优选(d)的肽是(a)～(c)中任一个肽中，1～3和29～35位的氨基酸残基中的所述个数的氨基酸残基被缺失或添加(优选添加)的肽。在上述优选的肽中，还可以缺失或添加一个或复数个(例如1至3个、或1个或2个)氨基酸残基。通过使用(d)的肽，可以让本实施方式的化合物的肾上腺髓质素活性与天然型AM实质上基本等同。另外，通过使用(d)的肽，本实施方式的化合物能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
(f)的肽可通过C末端酰胺化酶的作用将C末端的甘氨酸残基转化为C末端酰胺基，从而转化为(e)的肽。因此，通过将(f)的肽给药于受试对象，在该对象的机体内经过一定时间后，可形成C末端酰胺化的(e)的肽。据此，本方面的化合物在机体内可以持续地表达肾上腺髓质素活性。
上述例举的(a)至(f)的肽通常具有肾上腺髓质素活性。在(a)至(f)的任一个肽中，具有上述特征且具有肾上腺髓质素活性的肽的本实施方式的化合物，能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
在本发明的各实施方式中，“肾上腺髓质素活性”是指例如下述所例举的各种生理作用。
(1)心血管系统：扩张血管作用、降血压作用、抑制血压升高作用、增加心输出量与改善心力衰竭的作用、改善肺动脉高压症作用、血管生成作用、淋巴管生成作用、改善血管内皮功能作用、控制血管通透性、调控内皮细胞间黏附连接、血管内皮屏障保护作用、抗动脉硬化作用、心肌保护作用(例如，缺血再灌注损伤或炎症时的心肌保护作用)、心肌梗塞后的抗心肌重构作用、抑制心脏肥大的作用和抑制血管紧张素转换酶的作用。
(2)肾脏与水电解质系统：利尿作用、利尿钠作用、抑制抗利尿激素的作用、降低醛固酮作用、肾脏保护作用(例如，高血压或缺血再灌注损伤时的肾脏保护作用)、抑制饮用水行为的作用和抑制食盐要求的作用。
(3)脑与神经系统：神经保护与抑制脑损伤的作用、抗炎症作用、抑制凋亡的作用(例如，缺血再灌注损伤或炎症时抑制凋亡的作用)、维持自动调节能力的作用、抑制氧化应激的作用、改善痴呆症作用和抑制交感神经作用。
(4)泌尿生殖系统：勃起改善作用、血流改善作用和着床促进作用。
(5)消化系统：抗溃疡作用、组织修复作用、粘膜生成作用、肠道屏障保护作用、血流改善作用、抗炎症作用和肝功能改善作用。
(6)骨科：成骨细胞刺激作用和关节炎改善作用。
(7)内分泌代谢系统：脂肪细胞分化作用、脂肪分解控制作用、胰岛素敏感性改善作用、胰岛素分泌控制作用、抗利尿激素分泌抑制作用及醛固酮分泌抑制作用。
(8)呼吸系统：支气管扩张作用、肺保护作用、肺气肿改善作用、肺纤维化抑制、肺炎抑制、支气管炎抑制作用及呼吸改善作用。
(9)免疫系统：C3b的分解促进作用。
(10)其他：抗病毒作用、循环改善作用、抗炎症作用、控制细胞因子的作用、脏器保护作用、氧化应激抑制作用、组织修复作用(例如、抗褥疮作用)、败血症改善作用、败血性休克改善作用、抑制多器官功能衰竭的作用、抑制自身免疫性疾病的作用、糖尿病性视网膜症抑制作用、抗菌作用、生发作用和护发作用。
上述降血压作用优选为血管扩张性降压作用。上述消化系统的抗炎症作用优选为如类固醇难治性或类固醇依赖性的炎症性肠病(例如，溃疡性结肠炎、克罗恩病或肠贝赫切特病)这样的炎症性肠病的预防或治疗作用。
通过AM表现出来的上述例举的肾上腺髓质素活性，通常是通过细胞内cAMP的浓度升高来表现的。因此，细胞内cAMP的浓度升高可以作为本方面的化合物的肾上腺髓质素活性的指标。型1受体(AM1受体)的培养细胞株(HEK293细胞株)中添加对象化合物，通过测定细胞内cAMP的产生量来进行。本方面的化合物具有与天然型AM实质上基本等同的细胞内cAMP的浓度升高作用。因此，本方面的化合物可通过细胞内cAMP的浓度升高表现出与天然型AM实质上基本等同的生物活性(即、肾上腺髓质素活性)。
本发明各个方面的实施方式中，本方面的化合物不仅包含该化合物自身，还包含其盐。本方面的化合物为盐的形式时，优选为药学上可接受的盐。作为本方面的化合物的盐的反离子，并没有限制，例如优选为如钠离子、钾离子、钙离子、镁离子，或者取代或者非取代的铵离子这样的阳离子；或者如氯离子、溴离子、碘离子、磷酸根离子、硝酸根离子、硫酸根离子、碳酸根离子、碳酸氢根离子、高氯酸离子、甲酸根离子、乙酸根离子、三氟乙酸根离子、丙酸根离子、乳酸根离子、马来酸根离子、羟基马来酸根离子、甲基马来酸根离子、富马酸根离子、己二酸根离子、苯甲酸根离子、2-乙酰氧基苯甲酸根离子、对氨基苯甲酸根离子、烟酸根离子、肉桂酸根离子、抗坏血酸根离子、帕莫酸根离子、琥珀酸根离子、水杨酸根离子、亚甲基二水杨酸根离子、草酸根离子、酒石酸根离子、苹果酸根离子、柠檬酸根离子、葡萄糖酸根离子、天冬氨酸根离子、硬脂酸根离子、棕榈酸根离子、衣康酸根离子、乙醇酸根离子、谷氨酸根离子、苯磺酸根离子、环己基氨基磺酸根离子、甲磺酸根离子、乙磺酸根离子、羟乙基磺酸根离子、苯磺酸根离子、对甲苯磺酸根离子或者萘磺酸根离子这样的阴离子。当本方面的化合物为与上述反离子的盐的形式时，该化合物的肾上腺髓质素活性可以与天然型AM实质上基本等同。
本发明各个方面的实施方式中，本方面的化合物不仅包含所述化合物本身，还包含该化合物或其盐的溶剂化物。当本方面的化合物或其盐为溶剂化物的形式时，优选为药学上可接受的溶剂化物。作为可以与上述化合物或其盐形成溶剂化物的溶剂，并没有限制，例如优选为：水；或者如甲醇、乙醇、2-丙醇(异丙醇)、二甲基亚砜(DMSO)、乙酸、乙醇胺、乙腈或乙酸乙酯这样的有机溶剂。当本方面的化合物或其盐是与上述溶剂制成的溶剂化物的形式时，该化合物的肾上腺髓质素活性可以与天然型AM实质上基本等同。
本发明各个方面的实施方式中，本方面的化合物不仅包含所述化合物本身，还包含其衍生物。当本方面的化合物为衍生物的形式时，作为本方面的化合物的衍生物，并没有限制，例如可例举为国际公开WO2015/14189、国际公开WO2017/047788、国际公开WO2018/181638等公开的具有修饰基和/或连接基的化合物。本领域技术人员根据上述文献，通过将本方面的化合物进行衍生物化，可以准备该化合物。上述文献中公开的AM衍生物可表现出肾上腺髓质素的药理效应而基本上不产生不良反应。因此，当本方面的化合物为上述衍生物的形式时，能够在实质上回避不良反应发生的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
本发明各个方面的实施方式中，本方面的化合物不仅包含所述化合物本身，还包含其受保护的形式。本说明书中，“受保护形式”是指在一个或复数个的官能团(例如赖氨酸残基的侧链氨基)中引入保护基的形式。此外，本说明书中，“保护基”是指为了防止乱接副反应的发生而引入至特定的官能团的基团，在特定的反应条件下可被定量地除去，且在除此之外的反应条件下基本上稳定，即为反应惰性的基团。作为可以形成所述化合物的受保护形式的保护基，并没有限制，例如可列举：叔丁氧羰基(Boc)、2-溴苄氧基羰基(BrZ)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、对甲苯磺酰基(Tos)、苄基(Bzl)、4-甲基苄基(4-MeBzl)、2-氯苄氧基羰基(ClZ)、环己基(cHex)和苯甲酰甲基(Pac)；作为氨基的其他保护基：苄氧基羰基、对氯苄氧基羰基、对溴苄氧基羰基、对硝基苄氧基羰基、对甲氧基苄氧基羰基、二苯甲氧基羰基、2-(对联苯基)异丙氧基羰基、2-(3,5-二甲氧基苯基)异丙氧基羰基、对苯基偶氮苄氧基羰基、三苯基磷酰基乙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、叔戊氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、烯丙氧基羰基、2-甲基磺酰基乙氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、环戊氧基羰基、环己氧基羰基、金刚烷氧基羰基、异莰氧基羰基、苯磺酰基、均三甲苯磺酰基、甲氧基三甲基苯磺酰基、2-硝基苯磺酰基、2-硝基苯磺酰基、4-硝基苯磺酰基和4-硝基苯磺酰基；作为羧基的其他保护基：甲酯、乙酯、叔丁酯、对甲氧基苄酯和对硝基苄酯；作为Arg的其他侧链保护基：2,2,4,6,7-五甲基-2,3-苯并二氢呋喃-5-磺酰基、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰基和2-甲氧基苯磺酰基；作为Tyr的其他保护基：2,6-二氯苄基、叔丁基和环己基；作为Cys的其他保护基：4-甲氧基苄基、叔丁基、三苯甲基、乙酰胺甲基和3-硝基-2-吡啶次磺酰基；作为His的其他保护基：苄氧基甲基、对甲氧基苄氧基甲基、叔丁氧基甲基、三苯甲基和2,4-二硝基苯基；以及作为Ser和Thr的其他保护基：叔丁基等。当本方面的化合物为上述保护基的受保护形式时，可以让该化合物的肾上腺髓质素活性与天然型AM实质上基本等同。
本发明各个方面的实施方式中，本方面的化合物还包含该化合物的立体异构体的混合物，例如该化合物的各个对映异构体和非对映异构体、以及外消旋体。
通过具有上述特征，本方面的化合物能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
＜2.肾上腺髓质素类似物的医药用途＞
本发明一方面的化合物，能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。因此，本发明的另一方面，涉及一种含有本发明一方面的化合物作为有效成分的药物。
将本发明一方面的化合物应用于药物用途时，可以单独使用该化合物，也可以与一种或多种药学上可接受的成分组合使用。本方面的药物可以根据所希望的给药方法配制成在本技术领域中常用的各种剂型。因此，本方面的药物还可以以药物组合物的形式提供，所述药物组合物含有本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物，和一种或多种药学上可接受的载体。本实施方式中，药物组合物除了上述成分之外，还可以包含药学上可接受的一种或多种介质(例如、灭菌水之类的溶剂或生理盐水之类的溶液)、赋形剂、粘合剂、媒介物、助溶剂、防腐剂、稳定剂、崩解剂、崩解抑制剂、膨化剂、润滑剂、表面活性剂、乳化剂、油性液体(例如、植物油)、混悬剂、缓冲剂、无痛化剂、抗氧化剂、甜味剂和调味剂等添加剂。
本方面的药物剂型并没有特别限制，可以是用于非口服给药的制剂，也可以是用于经粘膜(例如经鼻、舌下或经口腔粘膜等)、经皮、经肛门(注肠)或经阴道等给药的制剂，或者用于口服给药的制剂。此外，本方面的药物剂型可以是单位剂量形式的制剂，也可以是多次给药形式的制剂。作为用于非口服给药的制剂，例如可列举：与水或除水之外的药学上可接受的液体配成的无菌溶液或混悬液等注射剂。作为可以与注射剂混合的添加剂，并没有限制，例如可列举：如生理盐水、含有葡萄糖或其他辅助剂(例如，D-山梨醇、D-甘露醇或氯化钠)的等渗溶液这样的溶媒；如醇(例如乙醇或者苄醇)、酯(例如苯甲酸苄酯)、多元醇(例如丙二醇或者聚乙二醇)这样的助溶剂；如聚山梨酯80或聚氧乙烯氢化蓖麻油这样的非离子表面活性剂；如芝麻油或大豆油这样的油性液体；如磷酸盐缓冲液或乙酸钠缓冲液这样的缓冲剂；如苯扎氯铵或盐酸普鲁卡因这样的无痛化剂；如人血清白蛋白或聚乙二醇这样的稳定剂；以及防腐剂及抗氧化剂等。所制备的注射剂通常填充到适当的容器(例如、小瓶或安瓿瓶)中，保存在适合的环境下直至使用。
用于经粘膜给药的制剂中所含的添加剂，例如可列举：介质、乳化剂、混悬剂、抗菌剂(例如氯丁醇)、等渗剂(例如氯化钠)、pH调节剂和渗透剂。用于经皮给药的制剂中含有的添加剂，例如可列举：介质、抗瘙痒剂、消泡剂、缓和剂、表面活性剂、乳化剂、增粘剂、混悬剂、缓冲剂、粘度上升剂、保湿剂、抗氧化剂、化学稳定剂、着色剂和脱色剂。用于经肛门给药的制剂中含有的添加剂，例如可列举：介质、乳化剂和固体脂肪基剂。用于阴道给药的制剂中所含的添加剂，例如可列举：介质、缓冲剂、油液、混悬剂、润湿剂、表面活性剂、抗氧化剂、抗菌剂和等渗剂。
作为用于口服给药的制剂，例如可列举：片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、软胶囊剂、微胶囊剂、酏剂、液剂、糖浆剂、浆液剂和混悬液等。根据需要，片剂可以制成糖衣或实施了溶解性被膜的糖衣片、明胶包被片、肠溶包被片、口腔崩解片(OD片)或薄膜包衣片的剂型，或者也可以配制成双重片或多层片的剂型。
作为可以与片剂或胶囊剂等混合的添加剂，并没有限制，例如可列举：粘合剂，例如水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、羧甲基纤维素、陶瓷、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、玉米淀粉、黄蓍胶和阿拉伯胶；赋形剂，例如结晶纤维素、乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土或硅酸；崩解剂，例如干淀粉、海藻酸钠、琼脂粉末、拉米纳兰粉末、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、月桂基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、淀粉、乳糖或聚乙烯吡咯烷酮；崩解抑制剂，例如白糖、可可脂硬脂酸酯或氢化油；膨化剂，例如玉米淀粉、明胶或海藻酸；润滑剂，例如硬脂酸镁；吸收促进剂，例如季铵盐或月桂基硫酸钠；保湿剂，如甘油或淀粉；吸附剂，如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土或胶态硅酸；润滑剂，例如纯化滑石、硬脂酸盐(例如硬脂酸镁)、硼酸粉末或聚乙二醇；甜味剂，如蔗糖、乳糖或糖精；以及香料等，例如薄荷、红辣椒油或樱桃。当制剂为胶囊剂时，还可以含有油脂之类的液体载体。
本方面的药物也可以配制为长效制剂。这种情况下，可以将长效制剂剂型的本方面的药物，例如通过植入皮下或肌肉内、或者通过肌肉注射来给药。通过将本方面的药物应用于长效制剂，可以将本发明一方面的化合物的肾上腺髓质素活性长时间持续地表现出来。
如上所述，本发明一方面的化合物能够在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM、具有例如在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。因此，本方面的药物优选作为单次给药方式的制剂进行制剂化，更优选作为单次皮下给药方式的制剂进行制剂化。
本方面的药物，可以与作为药物的有用的一种或更多种其他药剂同时使用。这种情况下，本方面的药物可以以单一药物的形式提供，所述单一药物的形式包含本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或它们的药学上可接受的溶剂化物、和一种或更多种其他药剂；也可以以药物组合或试剂盒的形式提供，所述药物组合或试剂盒的形式包含本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物、和一种或更多种其他药剂进行分别制剂化的多个制剂。在药物组合或试剂盒的形式的情况下，可以将各自的制剂同时或分别(例如连续地)给药。
将本发明一方面的化合物应用于医药用途时，本发明一方面的化合物不仅包含该化合物本身，还包含该化合物的药学上可接受的盐和它们的药学上可接受的溶剂化物。作为本发明一方面的化合物的药学上可接受的盐和它们的药学上可接受的溶剂化物，并没有限制，例如优选为如上述例示的盐或溶剂化物。当本发明一方面的化合物为上述盐或溶剂化物的形式时，可以将该化合物应用于所希望的医药用途。
含有本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物作为有效成分的本方面的药物，对于使用AM进行预防或治疗的各种症状、疾病和/或障碍，可以进行同样的预防或治疗。所述症状、疾病和/或障碍，并没有限制，例如可列举如下内容：
(1)循环系统疾病：心力衰竭、肺动脉高压症、闭塞性动脉硬化、血栓闭塞性脉管炎、心肌梗塞、淋巴肿大、川崎病、心肌炎、心律失常(例如导管消融手术后的心律失常)、心房颤动、大动脉炎、肺动脉高压症、高血压引起的脏器损害、周围血管疾病及动脉硬化。
(2)肾脏与水电解质系统疾病：肾功能衰竭及肾炎。
(3)脑与神经系统疾病：脑梗塞、痴呆、脑血管性痴呆、阿尔茨海默病及脑炎。
(4)泌尿生殖系统疾病：勃起功能障碍(ED)。
(5)消化系统疾病：炎症性疾病(例如、炎症性肠病或克罗恩病)、溃疡性疾病(例如溃疡性结肠炎)、肠贝赫切特病、肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝功能衰竭。
(6)骨科疾病：关节炎。
(7)内分泌代谢疾病：由糖尿病和糖尿病引起的器官损害(例如糖尿病性肾病或糖尿病性视网膜病)以及原发性醛固酮增多症。
(8)呼吸系统疾病：支气管哮喘、肺气肿、肺纤维化、肺炎、急性支气管炎、慢性支气管炎及急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
(9)免疫疾病：与补体相关的疾病(例如C3肾小球病)。
(10)其他疾病：病毒性感染、败血症、败血性休克、自身免疫疾病、多器官功能衰竭、褥疮、创伤愈合及脱发。
使用本方面的药物来预防或治疗的循环系统疾病，尤其是心力衰竭、心肌梗塞(例如急性心肌梗塞)、心律失常(例如导管消融手术后的心律失常)、心房颤动、肺动脉高压或周围血管疾病。使用本实施方式的药物来预防或治疗的脑与神经系统疾病，尤其是脑梗塞、痴呆。用本实施方式的药物预防或治疗的消化系统疾病，尤其是炎症性疾病(例如、炎症性肠病或克罗恩病)、溃疡性疾病(例如溃疡性结肠炎)、肠贝赫切特病。使用本方面的药物来预防或治疗的内分泌代谢疾病，尤其是由糖尿病和糖尿病引起的器官损害(例如糖尿病性肾病或糖尿病性视网膜病)。使用本方面的药物预防或治疗的呼吸系统疾病，尤其是肺纤维化。使用本方面的药物来预防或治疗的其他疾病，尤其是败血症、败血性休克或病毒性感染。
本方面的药物中，引起病毒性感染症的病毒包括，例如选自于下述组中的一种或更多种病毒：流感病毒、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、重症急性呼吸综合征(以下也记载为“SARS”)冠状病毒、中东呼吸综合征(以下也记载为“MERS”)冠状病毒、普通型人冠状病毒(229E、NL63、OC43及HKU1)、RS病毒、腺病毒、水痘·带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒、副流感病毒、肠道病毒、鼻病毒和人类偏肺病毒，尤其可列举选自于流感病毒和SARS-CoV-2中的一种或更多种病毒。作为由上述例示病毒引起的病毒性感染症，没有限定，例如可列举病毒性肺炎、病毒性心肌炎、病毒性脑炎、病毒性出血热、病毒性肾病、病毒性胃肠炎、病毒性血管炎、病毒性口腔炎、病毒性角膜炎和病毒性神经炎，尤其是病毒性肺炎。
本方面的药物优选为用于预防或治疗上述说明的症状、疾病和/或障碍(例如，循环系统疾病、脑与神经系统疾病或消化系统疾病)的药物，更优选为用于预防或治疗心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗塞、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性大肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染的药物。通过将本方面的药物用于上述说明的症状、疾病和/或障碍的预防或治疗，以明显优于AM的药代动力学发挥出与AM实质等同的预防或治疗效果。
本说明书中，“预防”是指实质上防止症状、疾病和/或障碍的发生(发生症状或表现)。此外，本说明书中，“治疗”是指抑制(例如抑制发展)、明显缓解、修复和/或治愈发生(发生症状或表现)的症状、疾病和/或障碍。
本发明一方面的化合物是天然生物活性肽AM的类似物肽。因此，本发明一方面的化合物是安全且低毒性的。因此，含有本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物作为有效成分的药物，可适用于需要预防或治疗所述症状、疾病和/或障碍的各种对象。所述对象优选为人或非人类哺乳动物(例如猪、犬、牛、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、鸡、羊、猫、猴、狒狒或黑猩猩等温血动物)的受试体或患者，更优选人类患者。通过将本方面的药物给药于所述对象，可预防或治疗该对象的所述症状、疾病和/或障碍。
将本方面的药物给药于对象尤其是人类患者时，正确的用法和用量要考虑到给药对象的年龄、性别、所需预防或治疗的症状、疾病和/或障碍的正确状态(例如重症度)、以及给药途径等多种因素，最终应由主治医生来确定治疗上有效的用法和用量。因此，含有本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物作为有效成分的本方面的药物，以治疗上有效的用法和用量(例如给药量、给药次数和给药途径)给药于对象。例如，当本方面的药物用于人类患者时，作为有效成分的本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物的给药量，通常为在0.01～1000μg/kg体重/日的范围，例如为0.5～200μg/kg体重/日的范围。
本方面的药物可以按任意的给药次数和给药途径给药。如上所述，本发明一方面的化合物在保持与母体化合物AM实质等同的药理作用的同时，相较于AM有着例如在生物学稳定性上显著优异的药动力学。故本方面的药物优选单次给药。此外，本方面的药物优选为经静脉给药、灌肠给药、皮下给药、肌肉内给药或腹腔内给药这样的肠胃外途径给药，更优选为皮下给药。按照上述用法和用量(例如、给药量、给药次数和给药途径)、使用含有AM或肾上腺髓质素衍生物为有效成分的本方面的药物，可预防或治疗给药对象的上述症状、疾病和/或障碍。
本发明一方面的化合物，对于使用AM进行预防或治疗的各种症状、疾病和/或障碍，可以进行同样的预防或治疗。因此，本发明的另一方面，涉及如上所述的症状、疾病和/或障碍的一种预防或治疗药剂，其含有本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐、或它们的药学上可接受的溶剂合物作为有效成分。本发明的一方面的预防或治疗药剂，具有与如上所述的本方面的药物相同的特征。此外，本发明的预防或治疗药剂，对于与如上所述的本方面的药物同样的症状、疾病和/或障碍，可使用同样的用法和用量。
本发明一方面的化合物，对于患有上述症状、疾病和/或病症的对象，可用于预防或治疗该症状、疾病和/或障碍。因此，本发明的另一方面提供一种预防或治疗上述症状、疾病和/或障碍的方法，该方法包括向需要预防或治疗该症状、疾病和/或障碍的对象、给予含有有效剂量的本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐或者它们的药学上可接受的溶剂化物。本方面的方法中，可以采用与如上所述的本方面的药物同样的用法和用量来向给药对象给予本发明一方面的化合物等。上述症状、疾病和/或障碍，优选循环系统疾病、脑与神经疾病、消化系统疾病、内分泌代谢疾病、呼吸系统疾病或其他疾病，更优选心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗塞、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性大肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。通过将本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐或者它们的药学上可接受的溶剂化物，向需要预防或治疗上述症状、疾病和/或障碍的对象进行给药，可以预防或治疗该症状、疾病和/或病症。
本发明的另一方面，涉及用于预防或治疗如上所述症状、疾病和/或障碍的本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐或者它们的药学上可接受的溶剂化物。本发明的再一方面，涉及本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐或者它们的药学上可接受的溶剂化物的用途，用于制备预防或治疗如上所述症状、疾病和/或障碍的药物。本发明的再一方面，涉及本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐或者它们的药学上可接受的溶剂化物的用途，用于预防或治疗如上所述症状、疾病和/或障碍。在本方面的化合物或其用途中，可以采用与如上所述的本方面的药物同样的用法和用量来向给药对象给予本发明一方面的化合物等。所述症状、疾病和/或障碍，优选循环系统疾病、脑与神经疾病、消化系统疾病、内分泌代谢疾病、呼吸系统疾病或其他疾病，更优选心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。通过将本发明一方面的化合物或其药学上可接受的盐或它们的药学上可接受的溶剂化物用于上述症状、疾病和/或障碍的预防或治疗，可以预防或治疗该症状、疾病和/或障碍。
＜3.肾上腺髓质素类似物的制备方法＞
本发明的再一方面，涉及一种本发明一方面的化合物的制备方法。
本发明一方面的化合物整体上具有多肽的结构。因此，本发明一方面的化合物可以基于本技术领域中用于合成多肽的合成方法或培养方法等各种方法来制备。
例如，当基于合成方法制备本发明一方面的化合物时，可以通过固相体系或液相体系的肽合成，来合成具有本发明一方面的化合物的氨基酸序列的肽链。因此，当基于合成方法来制备时，本方面的方法包括肽链合成步骤，该步骤系通过固相体系或液相体系的肽合成，来合成具有本发明一方面的化合物的氨基酸序列的肽链。
基于合成方法的本方面的方法中，通过由肽链合成步骤所得肽链的氨基酸序列中的两个半胱氨酸残基中的巯基形成二硫键，可得到该氨基酸序列中的两个半胱氨酸残基形成二硫键的(b)的肽，得到本发明一方面的化合物。另外，由肽链合成步骤所得肽链的氨基酸序列中的两个半胱氨酸残基间形成的二硫键，用亚乙基进行取代，可得到该二硫键被亚乙基取代的(c)的肽，得到本发明一方面的化合物。上述二硫键形成反应和亚乙基取代反应，可以根据该技术领域通常使用的条件实施。
基于合成方法的本方面的方法中，当由肽链合成步骤所得的肽链或其前体中的至少任一个处于其受保护形态时，本方面的方法可以包括以下步骤：根据需要，向肽链或其前体引入一种以上的保护基的保护步骤，和/或，对肽链或其前体的保护形态中至少任一个的一种以上保护基进行脱保护的脱保护步骤。上述保护步骤和脱保护步骤可以通过本技术领域中常用的保护反应和脱保护反应来实施。
例如，当基于培养方法来制备本发明一方面的化合物时，先制作能产生本发明一方面的化合物的宿主细胞，然后在该宿主细胞中使目标化合物大量表达。因此，基于培养方法制备时，本方面的方法包含表达步骤，该步骤在能产生本发明一方面的化合物的宿主细胞中使该化合物大量表达。
能产生本发明一方面的化合物的宿主细胞，可以通过以下方式获得：得到具有编码本发明一方面的化合物的碱基序列的分离核酸，然后将该核酸与载体连接并导入到大肠杆菌或芽殖酵母等细胞中，进行转化。
基于培养方法的本方面的方法，可以通过本技术领域中常用的基因重组和基因表达方法来实施。
实施例
以下，通过实施例进一步具体描述本发明。然而，本发明的技术范围不受这些实施例的限制。
＜实验I：血浆和血清中AM的分解＞
[AM的分解反应]
AM选用成熟的天然型人肾上腺髓质素(hAM(1-52))，这是一种肽，由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成，其C末端酰胺化，并具有由16位的半胱氨酸残基与21位的半胱氨酸残基形成的二硫键。制备最终体积为0.2ml的反应混合物，其中含有10mM NaH2PO4缓冲液(pH7.1)、10mM NaCl以及100μl血清或血浆。向反应混合物中加入hAM(1-52)并在37℃下开始反应。经过预定时间后，取出30μl反应溶液，转移到170μl的0.1％三氟乙酸(TFA)水溶液中，在-80℃下保存直至分析。
[AM的荧光免疫定量分析]
通过使用特异性荧光免疫测定法(Tosoh Corporation)、采用两种识别位点不同的抗体，对上述所得血清或血浆的反应混合物试样中所含的AM进行定量分析。第一抗体结合具有由hAM(1-52)的第16位半胱氨酸残基与第21位半胱氨酸残基形成的二硫键的环状结构，第二抗体结合AM的C末端部分。对于可表达活性的成熟型AM(hAM(1-52))，使用这两种抗体可定量分析AM(Ohta H等人，单克隆抗体一步直接测定成熟型肾上腺髓质素。临床化学，1999年2月，第45(2)卷，第244-51页；Kubo K等人，与聚乙二醇偶联的肾上腺髓质素的生物学特性。肽，2014年7月，第57卷，第118-21页。doi:10.1016/j.Peptides.2014.05.005。Epub2014年5月27日)。血清或血浆的反应混合物试样中所含AM的浓度的经时变化见图1。图中，横坐标表示反应时间(min)，纵坐标表示AM的浓度(μM)。
如图1所示，成熟型AM的hAM(1-52)在血清的反应混合物中随反应时间的推移而迅速减少，在反应开始240分钟后达到低于检测限的浓度。相比之下，hAM(1-52)在血浆的反应混合物中是稳定的。例如，即使在反应开始240分钟后，hAM(1-52)在血浆的反应混合物中的浓度仍保持在反应开始时的量的85％。
＜实验II：血清中AM分解产物的鉴定＞
使用Bio-Sil ODS-SIL色谱柱(4.0×150mm，日本TOSOH公司)通过反相高效液相色谱法(反相HPLC)从hAM(1-52)中分离片段肽。使用含有0.1％TFA的6％～60％乙腈水溶液的线性浓度梯度，在反相HPLC中进行洗脱。通过记录210nm波长的紫外(UV)吸收来检测洗脱液。
将40μg的合成hAM(1-52)在血清中孵育4小时。通过反相HPLC分离所得反应混合物中所含hAM(1-52)的分解产物。hAM(1-52)的分解产物的反相HPLC在210nm波长下的UV色谱图见图2。在图中，横坐标表示反相HPLC的保留时间(min)，纵坐标表示210nm波长的UV吸收强度。
如图2所示，检出数个信号峰。这些峰中，除了37.55分钟保留时间的峰(图中箭头所示)以外的峰，在不含hAM(1-52)的空白反应混合物试样的UV色谱图中也有被检出(空白的UV色谱图未显示)。根据这些结果，判断在37.55分钟保留时间处的峰对应于hAM(1-52)的分解产物。含有这个峰的部分对所有AM具有免疫反应性，但对成熟型AM没有免疫反应性(数据未显示)。
进一步纯化含有图2中箭头所示峰的部分，并用质谱仪(MALDI-TOF，正离子模式，BRUKER autoflex III)分析所得肽。纯化肽的MALDI-TOFMS谱图见图3。图中，横坐标表示质荷比(m/z)，纵坐标表示离子强度(a.u.)。
如图3所示，在纯化肽的MALDI-TOFMS谱图中，检出m/z 3671.830和m/z 1836.380处的离子峰，这些离子峰分别对应于具有单价和二价电荷的分子离子([M+H]+和[M+2H]2+)。根据该MALDI-TOFMS谱图，确定纯化肽的分子量为3670.8。该分子量可对应于由hAM(1-52)的第12～43位氨基酸残基组成的肽(hAM(12-43))或由hAM(1-52)的第13～44位氨基酸残基组成的肽(hAM(13-44))。hAM(12-43)和hAM(13-44)具有相同的氨基酸组成和相同的精确理论分子量。
通过使用气相肽测序仪(装置：Applied Biosystems Procise 492HT，方法：脉冲液体法)对纯化肽进行N末端氨基酸序列分析。纯化肽的N末端氨基酸序列分析结果见表1。在表中，循环数为氨基酸序列分析的循环数，对应于N末端氨基酸残基的位置。
[表1]
循环数 检出的PTH氨基酸 定量值(pmol)
1 S 4.02
2 F 4.96
3 G 6.03
4 - -
5 R 2.28
根据表1所示的氨基酸序列分析结果，将氨基酸末端的氨基酸序列确定为S-F-G-X-R，X推测为半胱氨酸。
根据上述结果，纯化肽被确定为hAM(13-44)(SEQ ID NO:2)。推测hAM(13-44)是在hAM(1-52)中12位的精氨酸残基和13位的丝氨酸残基之间、以及44位的精胺酸残基与45位的丝氨酸残基之间被消化而产生的。这些结果显示hAM(1-52)被胰蛋白酶样的蛋白酶所消化。
＜实验III：肽酶抗性AM类似物的合成(1)＞
血清中稳定的AM类似物肽设计如下。由hAM(1-52)的第16位半胱氨酸残基和第21位半胱氨酸残基形成二硫键的环状结构、和hAM(1-52)的C末端酰胺化结构，均是AM活性所必需的，而由hAM(1-52)的1～12位的氨基酸残基组成的肽结构不是AM活性所必需的(Eguchi S等人，Endocrinology.1994年12月，第135(6)卷，第2454-8页)。因此，对于由hAM(1-52)的13～52位的氨基酸残基组成、其C末端酰胺化、并且具有由第4位(对应于hAM(1-52)的第16位)半胱氨酸残基和第9位(对应于hAM(1-52)的第21位)半胱氨酸残基形成二硫键的肽(hAM(13-52))(SEQ ID NO:3)，选择这种肽作为关键的分子。将hAM(13-52)的第32位(对应于hAM(1-52)的第44位)精氨酸残基分别用D-精氨酸(D-Arg)、L-赖氨酸(Lys)或L-丙氨酸(Ala)进行取代，设计出[D-Arg-44]hAM(13-52)(SEQ ID NO:4)、[Lys-44]hAM(13-52)(SEQ ID NO:5)和[Ala-44]hAM(13-52)(SEQ ID NO:6)这三种AM类似物肽。
AM类似物肽的氨基酸序列
hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-R-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:3)
[D-Arg-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-*R-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:4，“*R”表示D-精氨酸)
[Lys-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-K-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:5)
[Ala-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-A-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:6)
使用ABI 433A型多肽合成仪(Applied Biosystems)，根据该合成仪的实验方案，采用9-芴甲氧羰基(Fmoc)方法，以Fmoc-Rink-Amide树脂(0.125mmol)作为起始原料，拉长上述三种AM类似物肽的肽链，得到具有AM类似物肽的保护肽树脂。用三氟乙酸处理保护肽树脂，进行脱树脂和脱保护，得到上述三种AM类似物肽的还原型粗产物。还原型粗产物被氧化形成二硫键。通过制备型HPLC纯化反应产物，得到作为冻干粉的具有二硫键和C末端酰胺化结构的上述三种AM类似物肽([D-Arg-44]hAM(13-52)：201mg，[Lys-44]hAM(13-52)：176mg，[Ala-44]hAM(13-52)：148mg)。通过分析HPLC、氨基酸分析和质谱法确认了每种AM类似物肽的结构和氨基酸序列。AM类似物肽的ESI-QMS质谱分析结果见表2。
[表2]
Figure BDA0003976412700000281
*)在“分子量”这一行中，计算值是基于各化合物分子式的平均分子量值，测定值是基于多电荷离子测定值的去卷积(Deconvolution)值。
＜实验IV：血清中AM类似物的稳定性(1)＞
采用与实验I相同的步骤，评估血清中hAM(13-52)、[D-Arg-44]hAM(13-52)、[Lys-44]hAM(13-52)和[Ala-44]hAM(13-52)的稳定性。采用成熟型AM(hAM(1-52))作为对照。由于上述AM类似物在实验I中的特异性荧光免疫测定中均表现出与hAM(1-52)同样的免疫活性，因此可使用该特异性荧光免疫测定进行与hAM(1-52)同样的定量分析。图4显示了血清的反应混合物试样中所含AM或AM类似物浓度的经时变化。图中，横坐标表示反应时间(min)，纵坐标表示AM或AM类似物的浓度(μM)。
如图4所示，对于hAM(1-52)和hAM(13-52)的反应混合物，AM或AM类似物的量在血清的反应混合物中随反应时间的推移而迅速减少，在反应开始60分钟后达到1μM以下的浓度，在反应开始240分钟后达到低于检测限的浓度。相比之下，对于[D-Arg-44]hAM(13-52)、[Lys-44]hAM(13-52)和[Ala-44]hAM(13-52)的反应混合物，这些AM类似物在血清的反应混合物中随反应时间的推移几乎不减少或者仅有轻微减少，并且在反应开始240分钟后仍残留一定量。
上述结果中，按反应开始240分钟后AM或AM类似物的浓度占反应开始时(即反应开始后0分钟)AM或AM类似物的浓度的百分比计算出残留率(％)。AM或AM类似物于反应开始240分钟后在反应混合物中的残留率见图5。图中，横坐标表示AM或AM类似物的种类，纵坐标表示AM或AM类似物的残留率(％)。
如图5所示，hAM(1-52)和hAM(13-52)的反应混合物中，AM或AM类似物的残留率均为0.2％。相比之下，[D-Arg-44]hAM(13-52)、[Ala-44]hAM(13-52)和[Lys-44]hAM(13-52)的反应混合物中，AM类似物的残留率分别为81.9％、96.4％和51.8％。本实验的结果表明，新型AM类似物的[D-Arg-44]hAM(13-52)、[Ala-44]hAM(13-52)和[Lys-44]hAM(13-52)在血清中的稳定性显著高于天然型AM的hAM(1-52)和其N末端缺失的肽hAM(13-52)。
＜实验V：AM类似物的细胞内cAMP浓度升高作用(1)＞
已知AM的生理作用是通过细胞内cAMP浓度的升高来表现的(参见Kitamura K等人，Biochem Biophys Res Commun，1993年4月30日，第192卷，第2期，第553-560页)。因此，将AM类似物添加到稳定表达AM 1型受体(AM1受体)的培养细胞株(HEK293细胞株)中，测定细胞内cAMP的产生量。HEK293细胞在涂有纤维连接蛋白的24孔板(Thermo FisherScientific)中的Dulbecco改良Eagle培养基(含10％胎牛血清、100U/ml青霉素G、100mg/ml链霉素、0.25mg/ml两性霉素B、100mg/ml潮霉素B和250mg/ml遗传霉素)中培养(37℃，加湿，5％CO2条件下)。培养3天后，受细胞内cAMP累积的刺激达90％融合的细胞，供实验用。用含有20mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸和0.1％牛血清白蛋白的Hanks平衡盐溶液交换培养基，在0.5mM异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)存在下，添加AM或AM类似物到细胞中，于37℃孵育15分钟。通过加入细胞裂解缓冲液终止反应。然后，使用cAMP检测用ELISA试剂盒(GEHealthcare Japan Corp.，#RPN2251)测定各孔的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量。HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量相对于AM或AM类似物的添加浓度的剂量反应曲线见图6。图中，A表示添加了hAM(1-52)(×)或hAM(13-52)(○)的实验结果，B表示添加了hAM(13-52)(○)或[D-Arg-44]hAM(13-52)(●)的实验结果，C表示添加了hAM(13-52)(○)或[Ala-44]hAM(13-52)(●)的实验结果，D表示添加了hAM(13-52)(○)或[Lys-44]hAM(13-52)(●)的实验结果。图中，横坐标表示AM或AM类似物的添加浓度的对数(M)，纵坐标表示稳定表达AM1受体的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量(fmol/孔)。
如图6所示，每一种AM类似物肽均显示出具有与hAM(1-52)或hAM(13-52)基本等同的细胞内cAMP浓度升高活性。
＜实验Ⅵ：AM和AM类似物之间的药代动力学比较(1)＞
8周龄雄性Wistar大鼠，购自日本Charles River Laboratories株式会社。这些大鼠在12小时明和12小时暗的光照周期下、且无特定病原体存在的情况下，以正常饲料饲养。根据动物保护法，实验在得到宫崎大学动物实验委员会的批准(2014-507-4)下进行。为了确定血浆AM浓度，向皮下注射50nmol/kg的AM或AM类似物。在预定时间(给药后0、15、30、60和120分钟)，从尾静脉采集外周血样到试管中(含有21μg抑肽酶和0.3mg EDTA-2Na)。将试管以1,700×g离心分离得到血浆。采用与实验I相同的步骤，通过特异性荧光免疫测定法测定大鼠血浆中AM或AM类似物的量。皮下给药后大鼠血浆中AM或AM类似物的量的经时变化见图7。图中，横坐标表示皮下给药后的经过时间(hr)，纵坐标表示AM或AM类似物的血浆中浓度(pM)。皮下给药后大鼠血浆中AM或AM类似物的最大血药浓度(Cmax)、血药浓度-时间曲线下面积(AUC)和血浆半衰期见表3。
[表3]
Figure BDA0003976412700000311
如图7所示，hAM(1-52)和hAM(13-52)在大鼠血浆中几乎未检出。相比之下，AM类似物的[D-Arg-44]hAM(13-52)、[Ala-44]hAM(13-52)和[Lys-44]hAM(13-52)，于给药后15分钟在大鼠血浆中检出并表现出较高的Cmax和AUC。尤其是，[Ala-44]hAM(13-52)的Cmax与hAM(1-52)相比高100倍以上(表3)。本实验的结果表明，新型AM类似物的[D-Arg-44]hAM(13-52)、[Ala-44]hAM(13-52)和[Lys-44]hAM(13-52)在单次给药中，与天然型AM的hAM(1-52)及其N末端缺失的肽hAM(13-52)相比，具有在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
＜实验Ⅶ：AM类似物的合成(2)＞
血清中稳定的AM类似物肽设计如下。将hAM(13-52)(SEQ ID NO:3)的第32位(对应于hAM(1-52)的第44位)精氨酸残基分别用甘氨酸(Gly)、L-天冬氨酸(Asp)或L-苯丙氨酸(Phe)进行取代，设计出AM类似物肽[Gly-44]hAM(13-52)(SEQ ID NO:7)、[Asp-44]hAM(13-52)(SEQ ID NO:9)和[Phe-44]hAM(13-52)(SEQ ID NO:10)；将hAM(13-52)(SEQ ID NO:3)的第33位(对应于hAM(1-52)的第45位)丝氨酸残基用L-脯氨酸(Pro)进行取代，设计出AM类似物肽[Pro-45]hAM(13-52)(SEQ ID NO:11)；和通过删除hAM(13-52)(SEQ ID NO:3)的第32位(对应于hAM(1-52)的第44位)精氨酸残基，设计出AM类似物肽[des-Arg-44]hAM(13-52)(SEQ ID NO:8)。hAM(1-52)购自肽研究所(日本大阪)。hAM(13-52)、[Ala-44]hAM(13-52)、[D-Arg-44]hAM(13-52)、[Lys-44]hAM(13-52)、[Gly-44]hAM hAM(13-52)、[des-Arg-44]hAM(13-52)、[Asp-44]hAM(13-52)、[Phe-44]hAM(13-52)和[Pro-45]hAM(13-52)的合成委托了肽研究所。
AM类似物肽的氨基酸序列
hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-R-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:3)
[Gly-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-G-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:7)
[des-Arg-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:8)
[Asp-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-D-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:9)
[Phe-44]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-F-S-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:10)
[Pro-45]hAM(13-52)S-F-G-C-R-F-G-T-C-T-V-Q-K-L-A-H-Q-I-Y-Q-F-T-D-K-D-K-D-N-V-A-P-R-P-K-I-S-P-Q-G-Y-CONH2(SEQ ID NO:11)
＜实验Ⅷ：血清中AM类似物的稳定性(2)＞
除了采用以下步骤外，采用与实验I相同的步骤评价血清中AM类似物肽的稳定性。采用成熟型AM(hAM(1-52))作为对照。制备含有4μL磷酸缓冲液、20μL人血清(Sigma-Aldrich，USA)和14μL水的反应混合物。向反应混合物中加入2μL AM或AM类似物肽(2×10- 6M，最终浓度10-7M)，在37℃下开始反应。反应开始0、1或4小时后，通过向反应混合物中加入160μLELISA缓冲液终止反应。采用与实验I相同的步骤，通过使用特异性荧光免疫测定法测定血清反应混合物试样中所含AM或AM类似物肽的浓度。血清的反应混合物试样中所含AM或AM类似物浓度的经时变化见图8。图中，横坐标为反应时间(hr)，纵坐标为AM或AM类似物的血清中浓度(％)，以相对于反应开始时刻(即反应开始0小时)的AM或AM类似物的浓度的相对值来表示。
如图8所示，对于hAM(1-52)和hAM(13-52)的反应混合物，AM或AM类似物在反应开始1小时后从血清的反应混合物中基本上消失。相比之下，[Gly-44]hAM(13-52)、[des-Arg-44]hAM(13-52)、[Asp-44]hAM(13-52)和[Phe-44]hAM(13-52)在反应开始4小时后仍然稳定。[Pro-45]hAM(13-52)在反应开始4小时后减少至约60％的浓度。
＜实验IX：AM类似物的细胞内cAMP浓度升高作用(2)＞
采用与实验V相同的步骤评价AM类似物的细胞内cAMP浓度升高作用。添加10-9M或10-8M的AM或AM类似物时的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量见图9。图中，纵坐标表示稳定表达AM1受体的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量(fmol/ml)。
如图9所示，[Gly-44]hAM(13-52)、[des-Arg-44]hAM(13-52)和[Phe-44]hAM(13-52)的AM类似物肽显示出具有与hAM(1-52)或hAM(13-52)基本等同的细胞内cAMP浓度升高活性。
图9中，对于显示出具有与hAM(1-52)或hAM(13-52)基本等同的细胞内cAMP浓度升高活性的AM类似物肽[Gly-44]hAM(13-52)、[des-Arg-44]hAM(13-52)和[Phe-44]hAM(13-52)，评估了细胞内cAMP产生量的剂量反应。HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量相对于AM或AM类似物的添加浓度的剂量反应曲线见图10。图中，A表示添加了hAM(1-52)的实验结果，B表示添加[Gly-44]hAM(13-52)的实验结果，C表示添加了[des-Arg-44]hAM(13-52)的实验结果，D表示添加了[Phe-44]hAM(13-52)的实验结果。图中，横坐标表示AM或AM类似物的添加浓度的对数(M)，纵坐标表示稳定表达AM1受体的HEK293细胞中的细胞内cAMP产生量(fmol/ml)。
如图10所示，每一种AM类似物肽均随着添加浓度的增加而引起细胞内cAMP浓度升高。此外，每一种AM类似物肽均显示出具有与hAM(1-52)或hAM(13-52)基本等同的细胞内cAMP浓度升高的最大活性。关于细胞内cAMP浓度升高活性，计算出50％有效浓度(pEC50)的对数值，hAM(1-52)为8.37，[Gly-44]hAM(13-52)为7.96，[des-Arg-44]hAM(13-52)为8.71，[Phe-44]hAM(13-52)为8.29。
＜实验X：AM和AM类似物的药代动力学比较(2)＞
除了采用以下步骤外，采用与实验VI中相同的步骤来评价AM和AM类似物(hAM(1-52)、[Ala-44]hAM(13-52)、[Gly-44]hAM(13-52)、[des-Arg-44]hAM(13-52)和[Phe-44]hAM(13-52))的药代动力学。准备7周龄雄性Wistar大鼠，以正常饲料饲养。为了确定血浆AM浓度，向皮下注射50nmol/kg的AM或AM类似物。在预定时间(给药后0、15、30、60和120分钟)从尾静脉采集外周血样到Kantan试管(注册商标)(含肝素钠，日本Tochigi Eiken ChemicalCo.，Ltd.)。将试管以2,000×g离心分离。从该试管采集血浆，移至试管(含21μg抑肽酶和0.3mg EDTA-2Na)储存。采用与实验I相同的步骤，通过特异性荧光免疫测定法测定大鼠血浆中AM或AM类似物的量。皮下给药后大鼠血浆中AM或AM类似物的量的经时变化见图11。图中，横坐标表示皮下给药后的经过时间(hr)，纵坐标表示AM或AM类似物的血浆中浓度(pM)。此外，计算出皮下给药后大鼠血浆中AM或AM类似物的最大血药浓度(Cmax)。
如图11所示，hAM(1-52)在大鼠血浆中几乎未检出。相比之下，AM类似物的[Ala-44]hAM(13-52)、[Gly-44]hAM(13-52)、[des-Arg-44]hAM(13-52)和[Phe-44]hAM(13-52)，于给药后15分钟在大鼠血浆中检出并表现出较高的Cmax。计算Cmax得出hAM(1-52)为23.1pM，[Ala-44]hAM(13-52)为777.0pM，[Gly-44]hAM(13-52)为760.4pM，[des-Arg-44]hAM(13-52)为679.0Pm，[Phe-44]hAM(13-52)为323.3pM。本实验的结果表明，新型AM类似物的[Ala-44]hAM(13-52)、[Gly-44]hAM(13-52)、[des-Arg-44]hAM(13-52)和[Phe-44]hAM(13-52)在单次给药中，与天然型AM的hAM(1-52)相比，具有在生物学稳定性方面显著优异的药代动力学。
＜实验XI：AM类似物对流感病毒感染小鼠的效果＞
使用AM类似物肽的[Ala-44]hAM(13-52)进行流感病毒感染小鼠的药效试验，以评估AM类似物对流感病毒感染小鼠器官功能障碍的效果。
[XI-1：试验药物]
使用[Ala-44]hAM(13-52)的冻干粉作为活性成分。使用3.75w/v％甘露醇-0.5w/v％甘氨酸的水溶液作为培养基。向含有活性成分的小瓶中加入0.95mL培养基以溶解活性成分，从而制备样品溶液。将样品溶液等分为40μl份，在-20至-30℃下冷冻保存。使用时解冻该样品溶液，并用培养基稀释以制备20nmol/ml或2nmol/ml样品溶液。样品溶液在使用时进行制备。
[XI-2：试验病毒株]
(a)病毒株及其宿主细胞
试验中使用的病毒株，采用爱知医科大学医学院感染与免疫学系保存的流感病毒PR8(A/PR/8/34(H1N1))。
[XI-3：流感病毒感染小鼠的药效试验]
购入45只5周龄雌性SPF小鼠(BALB/c型(BALB/c Cr Slc))(日本Slc公司)。在5天的预备饲养期后，将小鼠分为AM类似物未给药的对照组、低剂量(10nmol/kg)AM类似物给药组和高剂量(100nmol/千克)AM类似物给药组(每组8只小鼠)。对于各组的小鼠，通过使用27G静脉用翼针(泰尔茂株式会社)和1.0ml聚丙烯一次性注射器(泰尔茂株式会社)将样品溶液接种到尾静脉中。根据给药当天的体重值，按5ml/kg算出样品溶液的给药量。样本溶液的给药时间设定在9：25至11：27之间。但在病毒接种当天，是在接种前给药样本溶液。样品溶液的给药时间设定自病毒接种前一天到接种4天后。在病毒接种当天，对于AM类似物未给药的对照组小鼠和AM类似物给药组的小鼠，在给药样品溶液后立即使用微量移液管向每只小鼠鼻腔各滴入0.05ml病毒溶液(1×105PFU/小鼠)。每次接种都要搅拌接种病毒溶液。将接种次日定义为接种后第1天，饲养至接种后第5日。饲养期间对以下项目进行了评估。
(a)一般状态
根据下表4所示的一般状态评分，分组后每天观察一次一般状态。
[表4]
Figure BDA0003976412700000351
Figure BDA0003976412700000361
(b)肺部病变的肉眼检查
在病毒接种后第5天，用异氟烷进行麻醉，然后使用EDTA-2Na处理过的注射器(泰尔茂株式会社)从尾腔静脉采血约0.3mL。将采到的血液离心分离(约4℃、3000rpm、2150×g、10分钟)来收集血浆，将其冷冻保存(-80℃)。接受采血的动物通过腹主动脉放血进行安乐死。根据下表5所示的评估方法，分别对左肺和右肺进行肉眼检查。之后，取出左肺、右肺、肾脏和心脏，并用电子称称重。将取出的心脏横切成三部分。将心脏中央部分浸泡在10％中性缓冲福尔马林中保存。将剩余的心脏上部和下部分别放入单独的试管中冷冻保存(-80℃)。将取出的肾脏横切成三部分。右肾部分冷冻保存(-80℃)。将左肾部分浸泡在10％中性缓冲福尔马林中保存。将取出的肝脏竖切成两部分，每一部分再横切成三部分。肝脏的一部分被冷冻保存(-80℃)。将肝脏的其余部分浸泡在10％中性缓冲福尔马林中保存。对于取出的肺，将左肺的一部分(约10至20mg)冷冻保存(-80℃)。将左肺的剩余部分浸泡在10％中性缓冲福尔马林中保存。右肺用于病毒学检查。
[表5]
分数 肺部病变肉眼观察所见
4 全部硬化(Consolidation)
3 1/2至2/3硬化(Consolidation)
2 1/3至1/2硬化(Consolidation)
1 极少数至1/3硬化(Consolidation)
0 未发现硬化(Consolidation)
(c)病毒数测定
将取出的右肺细碎，然后向其中加入2ml Hanks平衡盐溶液(HBSS)，并使用搅拌器(Homogenizer T10 Basic，IKA Japan，K.K.)进行均匀化。将所得匀浆液作为肺组织液冷冻保存。将肺组织液解冻，并用MEM适当制备其稀释液。向接种了MDCK细胞的12孔板中，每孔加入0.1ml原液和经稀释的肺组织液，让细胞吸附病毒1小时。蚀斑数测定用的培养基按每层1.5ml在细胞上分层覆盖，待琼脂糖凝固后，在二氧化碳培养箱中培养2天。加入中性红的培养基按1.5ml分层覆盖，培养过夜，然后测定所形成的病毒蚀斑数。蚀斑数采用可测定最大稀释倍率算出的蚀斑数，由此算出病毒数。
(d)组织病理学检查
固定取出的肺(左肺)，然后按照常规方法为各组的每个病例制作石蜡切片。石蜡切片HE染色。进行光学显微镜检查。病理组织所见分为五个等级，0：无变化(-)，1：非常轻微(±)，2：轻微(+)，3：中度(++)，4：严重(++)。
(e)统计学处理
对于一般状态评分、肺部肉眼检查所见、病毒蚀斑数以及组织病理学检查，计算出各组的平均值和标准误差。在对照组和低剂量或高剂量AM类似物给药组之间，使用Wilcoxon秩和检验对一般状态评分、肺部肉眼检查所见、病毒蚀斑数和组织病理学检查进行显著性检验。将显著性水平设置为5％，按小于5％和小于1％分别显示。
[XI-4：结果]
各组小鼠的一般状态评分见表6。表中的值是各组小鼠得分的平均值和标准误差。表中的“*”表示与对照组有显著性差异(*：p＜0.01)。
[表6]
一般状态评分
Figure BDA0003976412700000371
各组的肺部病变肉眼检查评分见表7。表中的值是各组小鼠肺部病变肉眼检查得分的平均值和标准误差。表中的“*”表示与对照组有显著性差异(*：p＜0.01)。
[表7]
肺部病变肉眼检查评分
Figure BDA0003976412700000381
各组的肺部病毒浓度见表8。表中的值是各组小鼠右肺的病毒浓度(×104PFU)的平均值和标准误差。表中的“*”表示与对照组有显著性差异(*：p＜0.01)。
[表8]
肺部病毒浓度
Figure BDA0003976412700000382
对于一般状态评分，高剂量AM类似物给药组在摄入2天后表现出显著低于对照组的值(表6)。对于肺部病变肉眼检查的评分，无论低剂量还是高剂量的AM类似物给药组，显示左肺和右肺的数值均显著低于对照组(表7)。对于右肺的病毒数，无论低剂量还是高剂量的AM类似物给药组，与对照组相比，均显示显著的减少(表8)。对于组织病理学检查的评分，无论低剂量还是高剂量的AM类似物给药组，与对照组相比，均未确认到显著差异。
本实验的结果表明，[Ala-44]hAM(13-52)这样的AM类似物肽，对流感病毒引起的病毒性感染具有抑制传染性、抑制症状进展等效果。
本发明并不限定于上述实施例，还包括各种变形例。例如，上述实施例是为了容易理解本发明的解释而进行的详细描述，不一定限于包括所描述的所有构成的配置。此外，各实施例的一些构成可以用其他构成补充、删除和/或替换。
本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请通过引用整体并入本文。
                         序列表
<110>  国立大学法人宫崎大学（University of Miyazaki）
<120>  新型肾上腺髓质素类似物及其制备方法和医药用途
<130>  PH-8812-PCT
<150>  JP 2020-066608
<151>  2020-04-02
<160>  11
<170>  PatentIn version 3.5
<210>  1
<211>  52
<212>  PRT
<213>  智人（Homo sapiens）
<400>  1
Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys
1               5                   10                  15
Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln
            20                  25                  30
Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Gly Tyr
    50
<210>  2
<211>  32
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  2
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg
            20                  25                  30
<210>  3
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  3
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg
            20                  25                  30
Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40
<210>  4
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (32)..(32)
<223>  Xaa is D-Arg
<400>  4
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Xaa
            20                  25                  30
Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40
<210>  5
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  5
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Lys
            20                  25                  30
Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40
<210>  6
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  6
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Ala
            20                  25                  30
Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40
<210>  7
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  7
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Gly
            20                  25                  30
Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40
<210>  8
<211>  39
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  8
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Ser
            20                  25                  30
Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35
<210>  9
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  9
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Asp
            20                  25                  30
Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40
<210>  10
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  10
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Phe
            20                  25                  30
Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40
<210>  11
<211>  40
<212>  PRT
<213>  人工序列（Artificial）
<220>
<223>  Synthetic
<400>  11
Ser Phe Gly Cys Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His
1               5                   10                  15
Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg
            20                  25                  30
Pro Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
        35                  40

Claims (10)

1.一种化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，其特征在于，所述化合物为选自于下述组中的肽：
(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失的肽；
(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(c)在(b)的肽中，所述二硫键被亚乙基取代的肽；
(d)在(a)～(c)的任一个肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；
(e)在(a)～(d)的任一个肽中，C末端酰胺化的肽；以及
(f)在(a)～(d)的任一个肽中，在C末端添加甘氨酸残基的肽。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，其特征在于，所述肽选自于下述组中的肽：
(a)由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的肽中，1至3个氨基酸残基被取代或缺失的肽；
(b)在(a)的肽中，4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(d)在(a)或(b)的肽中，1至3个氨基酸残基被缺失或添加的肽；
(e)在(a)、(b)或(d)的肽中，C末端酰胺化的肽；以及
(f)在(a)、(b)或(d)的肽中，在C末端添加甘氨酸残基的肽。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，其特征在于，所述(a)的肽的1个氨基酸被取代或缺失。
4.根据权利要求3所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，其特征在于，所述(a)的肽的32或33位的氨基酸残基被取代或缺失。
5.根据权利要求1至4任一项所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，其特征在于，所述(a)的肽是由SEQ ID NO:4至11的任一氨基酸序列组成的肽。
6.根据权利要求1至5任一项所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物，其特征在于，由SEQ ID NO:4至11的任一氨基酸序列组成的、C末端酰胺化、且4位的半胱氨酸残基和9位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽。
7.一种制备权利要求1至6任一项所述的化合物或其盐、或者它们的溶剂化物的方法，其特征在于，所述制备方法包括肽链合成步骤，该合成步骤通过固相体系或液相体系的肽合成，来合成具有权利要求1至6任一项所述的化合物的氨基酸序列的肽链。
8.一种药物，其特征在于，含有权利要求1至6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物作为有效成分。
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物用于预防或治疗心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染。
10.一种预防或治疗心力衰竭、急性心肌梗塞、心律失常、心房颤动、肺动脉高压、周围血管疾病、脑梗、痴呆、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠贝赫切特病、糖尿病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、肺纤维化、败血症、败血性休克或病毒性感染剂的药剂，其特征在于，含有权利要求1至6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者它们的药学上可接受的溶剂化物作为有效成分。
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