CN115976052A - 小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18．6、其表达产物、重组载体及应用 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6、其表达产物、重组载体及应用，旨在解决小麦茎基腐病抗性基因缺乏的技术问题。本申请首次公开并确认了一个新的小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6，如SEQ ID NO.2所示，其长度为537bp；其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示，其长度为178；提供了鉴定该基因的特异性引物对；还基于上述基因构建了沉默载体，植物表达载体和制备了重组菌，应用于基因的抗茎基腐病功能验证。本申请小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6的鉴定、分离和应用不但有助于揭示抗病基因参与的分子调控途径，同时可以加速小麦茎基腐病抗病育种的进展。

Description

小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18．6、其表达产物、重组载体及应用

技术领域

本申请涉及基因工程技术领域，具体涉及一种小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6、其表达产物、重组载体及应用。

背景技术

小麦是我国重要的粮食作物，在国民经济中占有举足轻重的地位。近年来，小麦茎基腐病（Fusarium crown rot，FCR）发生严重，该病发生过程中不但给小麦造成严重的产量损失和经济损失，还会产生多种毒素和次级代谢物，严重影响人畜健康，已被称为新时期的“小麦癌症”。当前，国内外尚未鉴定出高抗或者免疫小麦茎基腐病的品种，其报道的抗性基因更是寥寥无几。因此，筛选小麦茎基腐病的抗病资源、挖掘抗病基因对控制病害的发生和蔓延意义重大。

小麦茎基腐病是由微效多基因控制的一种潜在土传病害，当前对小麦茎基腐病的研究多集中在材料的抗性鉴定和基因的初步定位上。Ma等（2010）利用CSCR6/Lang的RIL群体在茎基腐病温室实验中检测到3B上一个显著QTL，该位点来源于CSCR6，LOD值为10.8，表型变异率可达49%，随后在RIL群体中验证显示该QTL能降低FCR严重程度33%。目前，在六倍体小麦的21条染色体上已有14条报道了含有小麦茎基腐病抗性QTL（Liu等，2015；Yang等，2019）。在这些QTLs位点中，能重复检测到的位点分别位于2DL、3BL、4B和5DS染色体上，其中3BL上效应最大。Yang等发现TaDIR-B1能显著负调控小麦茎基腐病抗性，其功能缺失增强了小麦FCR抗性。敲除受体激酶TaCRK-7A增加小麦对FCR的敏感性，进而降低小麦中防御基因的表达水平（Wu等，2021）。鉴定和分离抗病基因，进行抗病育种是小麦病害防治各种措施中最经济、有效和环保的途径。

目前，关于小麦茎基腐病抗性基因的克隆仅有少量报道。在小麦茎基腐病研究中，通过发掘和利用优良抗病基因，探究抗病基因参与的调控途径，对小麦抗病育种增产具有重要指导意义。

公开于该背景技术部分的信息仅用于加深对本公开的背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本申请提供一种小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6、其表达产物、重组载体及应用，旨在解决小麦茎基腐病抗性基因缺乏的技术问题，以为小麦抗病育种及茎基腐病防治提供更多的选择。

根据本公开的一个方面，筛选得到一种小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6，其基因组核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；其全长CDS核苷酸序列为：

（1）如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

（2）由SEQ ID NO.2限定的核苷酸序列衍生的具有同等功能的核苷酸序列，包括与SEQ ID NO.2序列具有80%以上同源性及编码控制小麦籽粒大小相关蛋白的。

根据本公开的另一个方面，提供了一种小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6所编码的蛋白，其氨基酸序列为：

（1）如序列SEQ ID NO.3所示的基酸序列；

（2）将SEQ ID NO.3限定的氨基酸序列基础上进行一个或者多个氨基酸缺失、添加、替换而获得的可翻译有活性的片段或者保守性变异体。

根据本公开的再一个方面，提供了一种扩增上述基因的引物对，其全核苷酸序列如下所示：

TaHSP18.6-1F：5’- ATGGCCGAGCTGCTGTTCG-3’；

TaHSP18.6-1R：5’- CAGGCGATGGCGACCTGG-3’。

根据本公开的另一个方面，提供了小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6沉默重组载体、线性化的质粒、体外转录单链RNA或病毒诱导的基因沉默（Virus Induced GeneSilencing，VIGS）阳性沉默植株等。

在本公开的一些实施例中，将序列表SEQ ID NO.2所示序列中自5'末端第1~180位的特异性DNA片段插入BSMV-γ-PDS载体的Pacl和Notl双酶切位点之间得到VIGS沉默重组载体。

在本公开的一些实施例中，将小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6通过限制性内切酶 BamHI和 SacI插入LGY-OE3 植物过表达载体中而成重组过表达载体。

携带有上述 TaHSP18.6 的表达载体可通过使用 Ti 质粒、Ri 质粒、植物病毒载体、直接 DNA 转化、微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株；被转化的宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物。

根据本公开的又一个方面，将所述麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6或所述重组载体应用在小麦抗茎基腐病品种/品系选育当中。

根据本公开的再一个方面，将所述小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6应用于调节植株抗氧化能力当中。

根据本公开的再一个方面，将所述小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6或所述蛋白应用在防治小麦茎基腐病当中。

根据本公开的再一个方面，提供一种提高小麦抗茎基腐病的方法，使所述小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6在小麦植株中上调表达。

本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

1. 首次公开、并确认了一个新的小麦茎基腐病抗性基因，命名为 TaHSP18.6，其可调控小麦茎基腐病。

2. 明确了小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6的基因组核苷酸序列, CDS序列和编码的蛋白序列，为小麦抗病育种的应用实践打下基础。

3. 首次利用VIGS技术对小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6进行沉默，证实了其参与调控小麦茎基腐病。

4. 首次利用农杆菌介导的转化系统将携带有本申请 TaHSP18.6的植物表达载体转化小麦幼胚，证实 TaHSP18.6在小麦茎基腐病抗病育种中的作用。

5. 有助于揭示小麦茎基腐病的分子遗传基础，同时对利用基因工程技术提高小麦品质和培育小麦抗病品种起到重要作用。

附图说明

图1为本申请一实施例中VIGS试验中 TaHSP18.6基因在不同处理植株中的相对表达量的对比图。

图2为本申请一实施例中VIGS试验中不同处理小麦对茎基病的抗性对比图。

图3为本申请一实施例中VIGS试验中不同处理小麦对茎基病病情指数统计和DAB染色对比图。

图4为本申请一实施例中 TaHSP18.6在其过表达株系（OE#2、OE#3和OE#4）与对照Fielder中的相对表达量图。

图5为本申请一实施例中过表达株系（OE#2、OE#3和OE#4）与对照Fielder对小麦茎基腐病的抗性对比图。

图6为本申请一实施例中过表达株系（OE#2、OE#3和OE#4）与对照Fielder对小麦茎基腐病的病情指数统计和DAB染色对比图。

具体实施方式

为了更好的理解本申请技术方案，下面将结合说明书附图以及具体的实施方式对上述技术方案进行详细的说明。

在以下实施例中所涉及的仪器设备如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的试剂、载体等试验材料如无特别说明，均为市售常规产品；所涉及的试验方法、检测方法等，如无特别说明，均为常规方法。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。引物合成及测序工作均由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

实施例一：小麦茎基腐病抗性基因 TaHSP18.6的获取

通过转录组测序进行小麦茎基腐病抗性基因的挖掘，具体如下：

1. 供试菌株和试验土壤：试验所用菌株为假禾谷镰刀菌 WZ-8A，是黄淮麦区当前流行的优势病原菌，具有侵染范围广和致病力强等显著特点。试验所用土壤为中等肥力的壤土。土壤使用前先用目的筛子除去杂草和大土块，于 121℃，0.1Mpa 灭菌锅中灭菌 1h备用。

2. 试验培养基：PDA培养基和小米培养基。PDA 培养基：选取大小适中的新鲜土豆去皮切成中等薄块，称取 200g 薄块放入锅中，加蒸馏水煮沸约 20 min，四层纱布过滤。滤液回锅继续加热，并依次加入 15g 琼脂粉，20g 葡萄糖，搅拌均匀后定容至 1000 mL，冷却后分装，包扎，于 121℃，0.1 Mpa 条件下湿热灭菌 20 min 备用。小米培养基：选取大小均匀一致的小米，放入沸水中煮沸 3min，然后倒出用冷水冲洗干净并平铺在干净纱布上于通风处晾至表面无水，晾好后分装到 150 mL 三角瓶中并扎好瓶口，于 121℃，0.1 Mpa 条件下湿热灭菌 30 min 备用。

3. 病原菌扩繁：将保存的假禾谷镰刀菌取出，活化到 PDA 培养基上。扩繁时从新活化的假禾谷镰刀菌 PDA 培养板边缘挑取健康旺盛带菌丝的菌块接入灭菌的小米培养基中培养，培养条件为 25℃，7 天。

4. 材料接种、培养及取样：参照Yang（2019）的方法。在 7cm * 7cm 小方盒中称入150g 无菌土，表面均匀摆放 12 粒小麦品种农优9号，覆土 20g，每个处理三次重复，放入托盘，底部浇水浸透，置于 16h/8h，25℃/15℃，湿度 60-80%的培养箱中培养。苗后 3 天，剔除弱势苗，在盒中接入 0.4g 带菌小米，均匀铺满小盒并确保每株麦苗基部有一粒小米菌，培养条件同前，每 2d 浇水一次。分别对接菌后0h、24h、48h、72h、96h的茎基部进行快速取样，液氮速冻，放入-80℃备用。-80℃保存的茎基部材料用于RNA的提取。

5. 小麦茎基腐病抗性基因挖掘

利用Illumina DNBSEQ-T7平台对不同接菌时间点的小麦茎基部进行转录组研究。转录水平共鉴定到132,570转录本，涉及到11，2964个基因。依据|log₂FC|>1 和FDR<0.05标准，以0h为对照，对24h、48h、72h、96h四个接菌时间点均响应的差异基因进行分析，共鉴定到53个基因。

选取10个候选基因进行荧光定量表达验证，结果显示其中6个基因在24h、48h、72h、96h四个接菌时间点的RNA水平上均响应小麦茎基腐。包括热激蛋白（heat shockproteins 18.6， TaHSP18.6，中国春登录号：TraesCS6B02G374100)，该基因属于HSPs家族。植物HSPs作为一种伴侣蛋白，在生物和非生物的抗逆性中起着至关重要的作用。HSPs还通过在各种生物胁迫下积累和稳定病原相关蛋白来增强植物的免疫力。而该基因未见相关功能报道。因此，将其作为目的基因，进行克隆。

在已公布的中国春参考序列基础上，对小麦农优9号中的 TaHSP18.6进行克隆，最终得到一个完整的开放阅读框。

① DNA的提取：利用SLS法分别提取农优9号苗期DNA。

② 总RNA提取及cDNA第一条链的合成：利用TRIZOL试剂分别提取农优9号苗期总RNA。取质量符合要求的总RNA，参照PrimeScript^TM RT Reagent Kit (perfect Real time)说明书进行cDNA第一条链的合成。

③  TaHSP18.6基因的克隆及序列分析：设计PCR引物， TaHSP18.6-1F和 TaHSP18.6-1R分别设计在起始密码子ATG和终止密码子TAA两端，分别如下：

TaHSP18.6-1F：5’- ATGTCTGTCCCGCGTCCCATTG-3’；

TaHSP18.6-1R：5’- CTAGGTGCATGCTGAGTGTG-3’。

以农优9号的DNA为模板，用 TaHSP18.6-1F和 TaHSP18.6-1R组成的引物对进行PCR扩增。PCR 反应液（50 μl 体系）：10×PCR Buffer （25 μl），ddH₂O (9 μl），dNTP（10μl）， TaHSP18.6-1F（1.5μl）， TaHSP18.6-1R（1.5μl），DNA（2μl）， TaKaRa LA Taq酶（1μl）；PCR参数：先94℃ 4 min；随后94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30s，共35个循环；再72℃ 10 min。PCR产物进行1%琼脂糖胶电泳，回收后连接到PMD18-T载体（TAKARA），送生工进行测序。

用上述类似的方法再以农优9号的cDNA为模板，用 TaHSP18.6-1F和 TaHSP18.6-1R组成的引物对进行PCR扩增；PCR 反应体系和参数同上述方法。跑胶、回收后连接到PMD18-T载体（TAKARA），送生工进行测序。

测序结果表明，以小麦农优9号的DNA为模板进行PCR扩增得到的DNA片段为 TaHSP18.6基因的基因组水平序列，如序列表SEQ ID NO.1所示，其长度为652bp，含有2个外显子和1个内含子；其CDS核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，其长度为537bp，并编码如序列表SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，氨基酸的个数为178。

实施例二： TaHSP18.6的VIGS沉默及其鉴定

1.  TaHSP18.6重组沉默载体的构建

选取SEQ ID NO.2序列中自5’端第1至180位、长度为180bp的特异性DNA片段，根据 TaHSP18.6的cDNA序列设计合适引物，在引物的5’端前加上Pacl和Notl的酶切位点和保护性碱基，引物序列如下：

TaHSP18.6-2F：5’-CCTTAATTAAATGGCCGAGCTGCTGTTC-3’，

TaHSP18.6-2R：5’-ATGCGGCCGCCACGGGCGCGCCGCCGC-3’。

以小麦大麦条纹花叶病毒 (barley stripe mosaic virus，BSMV) 高感品种郑麦9023的cDNA为模板，进行PCR扩增产物，产物回收备用。进一步将 TaHSP18.6沉默片段用双酶切的方法插入到BSMV的八氢番茄红素脱氢酶（phytoene desaturase，PDS）载体 (BSMV-γ-PDS) 的Pacl和Notl双酶切位点之间，构建重组沉默载体，命名为γ- TaHSP18.6。

2. 载体的线性化和体外转录

将病毒载体（α、β、γ、γ-PDS）及γ- TaHSP18.6进行酶切线性化。使用RiboMAX^TMLarge Scale RNA Production Systems-T7试剂盒将上述五种线性化的质粒进行体外转录，获取不同组份的体外转录单链RNA。取α、β、γ/γ- PDS/γ- TaHSP18.6的体外转录产物各2.5μL，按照1：1：1进行混合，用DEPC处理水等体积稀释，将混合液加入270μL配好的FES缓冲液，制得285μL的接种病毒混合液，然后对郑麦9023幼苗进行BSMV病毒接种。每次实验设置4种不同处理：野生型对照（Wild-type, WT），VIGS空载体对照（BSMV₀：α+β+γ），PDS阳性对照（BSMV _PDS ：α+β+γ- PDS）和基因沉默组（BSMV _TaHSP18.6 ：α+β+γ- TaHSP18.6）。

3. 病毒接种

小麦苗2叶1心时期进行病毒接种。接种之前，先将叶片喷少许DEPC处理水, 然后取8-10μL接种病毒混合液点加在戴有乳胶手套的食指上，与拇指轻轻接触，后磨擦幼苗第二叶叶片3次，摩擦时从叶片基部直至叶尖，能够听到轻微的吱吱声。接种后喷少许DEPC处理水，室温保持23±2˚C，保湿、避光24h，再进行正常16/8h光暗周期培养。定期观察表型并记录。

4. VIGS沉默效率鉴定

接菌2周后，用荧光定量技术对基因沉默效率进行鉴定。总RNA 的提取及 cDNA 的反转同实施例一。

针对  TaHSP18.6 基因序列设计荧光定量特异性引物如下：

TaHSP18.6-3F：5’- ACGTGCTGGTGATGAAGAGC -3’；

TaHSP18.6-3R：5’-CCCAACAGCGTGCTACATTC-3’。

内参基因选用 β-actin（GenBank accession no. AB181991），引物序列如下：

β-actin-F：GTTCCAATCTATGAGGGATACACGC；

β-actin-R：GAACCTCCACTGAGAACAACATTACC。

荧光定量用美国伯乐Bio-Rad IQ5 Real-Time PCR Detection System进行。20μL的反应体系，上下游引物各0.4μL，Go Taq® qPCR Master Mix (Perfect Real Time;Promega)10μL，nuclease-free water 7.2μL。PCR程序：95℃ for 3 min，95℃ for 5s，60℃ for 30 s，72℃ for 30 s，40个循环数。利用 TaHSP18.6-3F和 TaHSP18.6-3R引物，以WT植株为对照，采用2^-△△CT法检测基因 TaHSP18.6在BSMV₀植株、BSMV _TaHSP18.6 植株中的相对表达量，结果如图1所示，从该图中可知，与WT 和BSMV₀相比， TaHSP18.6在沉默植株中显著下调，基因被有效沉默。

实施例三： TaHSP18.6的VIGS表型鉴定

接续实施例二，于接菌2周后调查植株表型。将VIGS沉默植株和对照组从培养盒中取出，用水清洗植株基部，参考 Smiley等（2005b）的病级划分方法统计植株病害发生程度，计算其病情指数。结果如图2和图3A所示。由图2可知，与野生型相比， TaHSP18.6沉默植株茎基部褐化增强，抗性降低；由图3A可知， TaHSP18.6沉默植株（DI=59）比野生型（DI=48）的病情指数显著上升，植株抗病能力显著降低。

研究表明HSPs通过正向调节抗氧化酶系统，提高膜的稳定性和解毒活性氧(reactive oxygen species，ROS) 。推测HSPs的抗病功能可能与ROS途径相关，因此利用DAB法对VIGS沉默植株和对照组进行过氧化物酶的活性检测。当过氧化物酶存在时，DAB会被H₂O₂化成不溶于水的暗棕色颗粒。DAB染色方法如下：50 ml离心管中加入20 mg的DAB和38ml ddH₂O，0.2M HCl调PH至DAB溶解配成终浓度为0.5 mg/ml的DAB染液。将离体的各组分叶片侵入到DAB中。抽真空30分钟，使叶片完全浸入到DAB染液中，室温孵育过夜。用95%乙醇在80度水浴中脱色，都叶片进行拍照。每个组分6个重复。结果图3B所示。由3B可知， TaHSP18.6沉默植株褐化增强，表明植株抗氧化能力显著降低。

实施例四： TaHSP18.6转基因小麦的获得及其鉴定

1.  TaHSP18.6植物过表达载体的构建

根据实施例 1 中克隆的 TaHSP18.6的全长cDNA序列设计引物，并在引物两端分别引入限制性内切酶BamHI 和 SacI识别位点及保护碱基，引物序列如下：

TaHSP18.6-4F：5’- CGGGATCCATGTTGGAGAAAGACAGGAT -3’；

TaHSP18.6-4F：5’- CGGAGCTCTCAATGTCCGCCGTCATCAT -3’。

表达载体选择LGY-OE3，将上述537bp的DNA片段克隆入植物表达载体LGY-OE3的酶切位点BamHI 和SacI之间，得到含有小麦 TaHSP18.6基因的重组表达载体，命名为LGY-OE3- TaHSP18.6。

2.  TaHSP18.6转基因小麦的获得

将LGY-OE3- TaHSP18.6用农杆菌浸染法转化小麦Fielder的幼胚愈伤组织，经过筛选、预分化、分化得到转基因小麦植株。

3. 转基因小麦的PCR鉴定

利用潮酶素标签（Hyg）引物Hyg-F和Hyg-R引物对T₁代转基因植株进行阳性鉴定，引物序列如下：

Hyg-F：5’-TCTGCACCATCGTCAACCAC-3’；

Hyg-R：5’-AAACCCACGTCATGCCAGTT-3’。

共获得12个阳性转基因植株，经过加代，获得T₂代纯合转基因株系OE#1、OE#2和OE#3。

4. 转基因小麦的表达鉴定

对转基因株系OE#1、OE#2和OE#3和Fielder进行荧光定量分析；总 RNA 的提取、cDNA 的反转同实施例一。荧光定量PCR反应体系和方法同实施例二。利用 TaHSP18.6-3F和 TaHSP18.6-3R引物，以Fielder为对照，采用2^-△△CT法检测基因 TaHSP18.6在T₂代阳性转基因株系叶片中的表达量，结果如图4所示。由图4可知， TaHSP18.6在T₂代阳性转基因株系（OE#2、OE#3和OE#4）叶片中的表达量显著高于对照，分别为对照的7、5、10倍。

实施例五： TaHSP18.6转基因小麦的表型鉴定

对上述T₂代过表达转基因株系 (OE#2、OE#3和OE#4) 与对照Fielder进行茎基腐病抗性和DAB抗氧化能力鉴定，同实施例二；结果如图5和图6所示。

由图5可知，与野生型相比， TaHSP18.6沉默植株茎基部褐化减弱，抗性增强。

由图6A可知，T₂代过表达转基因株系 (OE#2、OE#3和OE#4)（DI=36，39，38）比野生型（DI=55）的病情指数显著降低，植株抗病能力显著增强。

由图6B可知，与野生型相比，T₂代过表达转基因株系 (OE#2、OE#3和OE#4) 植株褐化减弱，植株抗氧化能力显著增强。

综合来看， TaHSP18.6基因沉默后植株抗病能力显著降低，而过表达植株抗病能力显著增强。说明此基因是小麦茎基腐病响应中的一个正调控基因，其通过增强植株的抗氧化能力增强小麦的茎基腐病抗性。

尽管已描述了本申请的一些优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本申请范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本申请进行各种改动和变型而不脱离本申请之发明精神和范围。这样，倘若这些修改和变型属于本申请权利要求及其等同技术的范围之内，则本申请也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (10)

1.一种小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6，其基因组核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，或其CDS核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6所编码的蛋白，具有如SEQ IDNO.3所示的氨基酸序列或其等效修饰序列。

3.扩增权利要求1所述小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6的引物，包括以下引物对：

TaHSP18.6-1F：5’- ATGGCCGAGCTGCTGTTCG-3’；

TaHSP18.6-1R：5’- CAGGCGATGGCGACCTGG-3’。

4.一种由权利要求1所述小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6构建的重组载体。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，其为含有如SEQ ID NO.2所示的DNA片段的过表达载体。

6.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，其为含有如SEQ ID NO.2所示序列中自5'末端第1～180位的特异性DNA片段的重组沉默载体。

7.权利要求1所述小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6或权利要求4所述重组载体在小麦抗茎基腐病品种/品系选育中的应用。

8.权利要求1所述小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6在调节植株抗氧化能力中的应用。

9.权利要求1所述小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6或权利要求2所述蛋白在防治小麦茎基腐病中的应用。

10.一种提高小麦抗茎基腐病的方法，其特征在于，上调表达权利要求1所述小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18.6。

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