CN115927098A - 一种贝莱斯芽孢杆菌及其筛选方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种贝莱斯芽孢杆菌及其筛选方法与应用，具体涉及微生物技术领域。一种贝莱斯芽孢杆菌，名称为贝莱斯芽孢杆菌BGB‑121R，所述贝莱斯芽孢杆菌BGB‑121R保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CMCCNo.25765。本发明的贝莱斯芽孢杆菌BGB‑121R是利用具有腐烂病的生姜根际土壤分离筛选得到的微生物，可应用于连作障碍土壤或正常土壤，能够显著促进植物种子萌发，并促进作物生长，拮抗尖孢镰刀菌及黄曲霉菌，提高作物的抗逆抗菌性能，在农业生产中具有显著且实际的应用意义。

Description

一种贝莱斯芽孢杆菌及其筛选方法与应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌及其筛选方法与应用。

背景技术

随着科学技术的不断发展，利用微生物进行农作物生防、促生越来越受到关注，并且以微生物进行生防、促生作用具有价格低、无污染对人畜无害等优势，越来越受到追捧。

贝莱斯芽孢杆菌作为发现较晚，并具有抗菌谱广、生长迅速、容易被分离培养、抗逆性强和生物安全性高等特点，被作为农业、军事、工业等领域被广泛应用。

在一些报道中，贝莱斯芽孢杆菌主要应用于促生作用、抑制尖孢镰刀菌及黄曲霉菌等病原菌、防治枯萎病等生防作用。如申请号为CN202210781277.7中公布了一种贝莱斯芽孢杆菌，其具有可以促进植物生长、可以作为抑菌剂、可以防治苹果轮纹病菌等生防效果。

申请号为CN202210686812.0中公布了一种花生根际生防贝莱斯芽孢杆菌，其在花生根际具有良好的生防效果。

在李昱涵的“利用贝莱斯芽孢杆菌提高红曲米发酵生产中抗黄曲霉污染的能力”一文中指出，利用贝莱斯芽孢杆菌共同发酵可显著抑制黄曲霉对高红曲米的污染。

尖孢镰刀菌是一类既可侵染植物又可在土壤内生存的兼性寄生真菌。寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。和其它植物病原菌一样，存在着种下分化，可侵染许多植物寄主，具有多种专化型。而黄曲霉菌产生的黄曲霉毒素存在于土壤，动植物中。对动物和人的肝脏都有极大的影响，易造成癌变发生。

发明内容

为此，本发明提供一种贝莱斯芽孢杆菌及其筛选方法与应用，能显著促进植物种子萌发，促进作物生长，并拮抗尖孢镰刀菌及黄曲霉菌。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明的第一方面提供一种贝莱斯芽孢杆菌，名称为贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R，所述贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25765，保藏时间为2022年09月21日。

本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌的分离方法；该菌种是利用具有腐烂病的生姜根际的土壤分离筛选得到的微生物。

本发明所提供的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R经过筛选、分离、鉴定，例如经过16SrDNA的基因序列测定，细胞革兰氏染色和菌落形态学观察，被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。所提供的贝莱斯芽孢杆菌对于尖孢镰刀菌及黄曲霉菌表现出抑制作用，具有良好的疾病防治效果。

本发明提供了该贝莱斯芽孢杆菌的培养方法。

所述的培养方法中包括将前述的贝莱斯芽孢杆菌接种于培养基。

优选地，所述的培养基为营养琼脂培养基。

优选地，所述的培养方法为好氧培养。

优选地，所述的培养条件为：28～32℃，20-24h，pH 7.0，转速180r/min。

根据本发明的第二方面提供一种贝莱斯芽孢杆菌的制备物，所述的制备物中包括如上所述的贝莱斯芽孢杆菌；所述的制备物为培养物、培养物提取物、发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、冻干粉中的一种或多种。

根据本发明的第三方面提供如上所述的贝莱斯芽孢杆菌或如上所述的制备物在制备肥料和/或促生长剂中的应用。

根据本发明的第四方面提供如上所述的贝莱斯芽孢杆菌或如上所述的制备物在制备抑菌剂和/或农药中的应用。

根据本发明的第五方面提供一种肥料，包括如上所述的贝莱斯芽孢杆菌或如上所述的制备物。

根据本发明的第六方面提供一种抑菌剂，包括如上所述的贝莱斯芽孢杆菌或如上所述的制备物。

进一步的，所述抑菌剂针对尖孢镰刀菌及黄曲霉菌。

根据本发明的第七方面提供一种农药，包括如上所述的贝莱斯芽孢杆菌或如上所述的制备物。

根据本发明的第八方面提供一种植物促生长剂，包括如上所述的贝莱斯芽孢杆菌或如上所述的制备物。

根据本发明的第九方面提供如上所述的贝莱斯芽孢杆菌或如上所述的制备物在作物种植中的应用，其特征在于，对发酵液进行稀释后使用；所述的应用为土壤处理、冲施、灌根、蘸根、淋根、滴灌、拌种或浸种。

进一步的，所述肥料和/或促生长剂或抑菌剂和/或农药中，所述贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R的含量不少于：(1-9)×10⁸CFU/mL。

进一步的，所述发酵液包括对所述贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R进行发酵培养，获得发酵产物。

进一步的，所述发酵培养包括：对所述贝莱斯芽孢杆菌进行活化发酵培养，获得发酵菌液；对所述发酵菌液进行放大发酵培养，获得发酵产物。

进一步的，所述发酵培养的培养基包括H₂O、NaCl、酵母粉、胰蛋白胨等。

进一步的，所述肥料和/或促生长剂或抑菌剂和/或农药中还包括农药学上可接受的辅料，所述农药学上可接受的辅料选自分散剂、润湿剂、崩解剂、粘结剂、消泡剂、抗冻剂、增稠剂、填料和溶剂中的一种或多种。

本发明具有如下优点：

本发明的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R是利用具有腐烂病的生姜根际土壤分离筛选得到的微生物，可应用于连作障碍土壤或正常土壤，能够显著促进植物种子萌发，并促进作物生长，拮抗尖孢镰刀菌及黄曲霉菌，提高作物的抗逆抗菌性能，在农业生产中具有显著且实际的应用意义。

本发明的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R可在28～32℃的土壤中正常生长，在植物促生试验发现，与不接种相比，接种该菌株可显著促进种子的萌发，能够显著促进植株的生长，在实际农业中生防促生效果表现良好。而且本发明的菌体被释放到土壤中，对人、动物和植物无害，不会污染环境，还可在一定情况下丰富自然界菌群结构，提高自然界菌群多样性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。

本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。

图1为本发明实施例1提供的一种贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R显微镜下图其中，A-摇瓶摇菌菌株增殖体；B-摇瓶摇菌菌株孢子体；

图2为本发明实施例1提供的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R，28℃培养在营养琼脂培养基上的菌落形态；

图3为本发明实施例1提供的基于16S rDNA序列构建的系统发育树；

图4为本发明实施例2提供的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R抑制尖孢镰刀菌及黄曲霉菌生长的图片；其中，A-BGB-121R对峙尖孢镰刀菌，B-尖孢镰刀菌单独生长，C-BGB-121R对峙黄曲霉菌，D-黄曲霉菌单独生长；

图5为本发明实施例3提供的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R促进黄瓜种子的萌发；其中，A-无菌水；B-菌上清液；C-菌悬液；

图6为本发明实施例3提供的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R促进西红柿生长；其中，A-处理组；B-对照组；

图7为本发明实施例4提供的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R对芹菜生长的促生作用；其中，A-处理组；B对照组。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

菌种保藏说明：本发明的贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R菌株，于2022年09月21日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，其保藏编号为CGMCC No.25765。

试验材料

供试材料：黄瓜种子(中农16号)、菌株培养物、西红柿苗、芹菜苗等；

供试菌株：贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R菌株、尖孢镰刀菌、黄曲霉菌；

主要试验仪器和器材：超净工作台、高压灭菌锅、恒温振荡培养箱、紫外分光光度计、500mL锥形瓶、镊子、培养皿、玻璃棒、接种环、1.5mL离心管、打孔器、涂布棒等；

试验药品和试剂

(1)试验药品：胰蛋白胨、H₂O、NaCl、酵母粉、琼脂、次氯酸钠、可溶性淀粉、KNO₃、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、NaCl、FeSO₄·7H₂O、葡萄糖等；

(2)试验试剂：

1)营养液体培养基：称取胰蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g，溶于1L纯水中，pH：6.8-7.5，121℃，30min，灭菌；

2)营养琼脂培养基：加入15g琼脂，其他营养液体培养基，121℃，30min，灭菌；

3)PDA培养基：土豆200g、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L，水1000mL，自然pH值。称取去皮土豆200g，土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用6层纱布趁热在烧杯上过滤，取上清液补充水分到1000ml。加入20g葡萄糖、15g琼脂，充分溶解，121℃，30min灭菌，倒板，放置备用。

4)高氏Ⅰ号固体培养基：称取可溶性淀粉20g、KNO₃1g、K₂HPO₄0.5g、MgSO₄·7H₂O0.5g、NaCl 0.5g、FeSO₄·7H₂O 0.01g、琼脂15g，溶于1L纯水中，pH：7.2-7.4，121℃，30min，灭菌，倒板，放置备用。

5)营养土配制及营养指标：将嘉博文土壤调理剂(厨余资源化产品)与珍珠岩、蛭石、椰糠按照3:1:2:4体积比配制营养土，灭菌后检测常规营养指标(干基)分别为：有机质65％，氮1.45％，磷0.37％，钾0.16％。

实施例1

本实施例提供一种贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R的分离、纯化及鉴定：

(一)分离、纯化

1)土壤样品采集：采集自山东省潍坊市昌邑前河滩东村(东经119°25′11″，北纬36°54′51″)3年连续种植大姜的土壤，并进行日期及其他信息登记，在2-6℃利用保温箱转移至实验室，并对样品基本理化性质进行检测。

检测结果：有机质1.15％，全氮163mg/kg，有效磷34.7mg/kg，速效钾290mg/kg，pH6.35。

2)目标菌初分离：称取上述采集的样品10g，无菌条件下加入到预先灭菌的盛有100mL生理盐水的三角瓶中，充分振荡，28℃，160rpm充分振荡后，静置15min，按照比例稀释至10^-4，选择稀释浓度为10^-2、10^-3、10^-4的稀释度分别吸取0.1～0.2mL，于营养琼脂培养基、高氏Ⅰ号固体培养基和PDA培养基涂板进行涂布培养，待液体吸尽，28℃倒置培养18～28h。待平板上长出菌落，用灭菌的一次性枪头从平板上刮取少量菌落，用无菌水稀释后再次于培养基上划线培养。如无单克隆菌落出现，则需反复在平板上划线纯化，直到出现单克隆菌落为止，多次纯化，待菌落形态统一，无其他不同形态菌落出现为止。对单个菌落进行编号，并挑取具有代表性的菌落，进行分离并纯化。

于培养基上挑取单克隆，根据板上微生物形态，挑取不同菌落划线分离纯化(按照上述培养条件培养)2～3次，直至菌落单一，编号，记录，-80℃甘油保存所有单菌落菌种。

3)初步鉴定：将分离纯化得到的菌株于显微镜下镜检并观察。

由图1所示，菌株形态为营养细胞呈杆状、圆端，多数为单个、少数成对或链状排列，细胞壁为革兰阳性结构。

4)菌种的生长条件的筛选：

将上述筛选得到的菌株进行培养实验，培养24h：

1)分别设置温度为18、22、26、27、28、29、30、31、32、34、38℃，pH设定为7.0，转速设定为160r/min；

2)分别培养液pH为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5，温度设定为30℃，转速设定为160r/min；

3)分别设置转速为140、160、180、200、220r/min，pH设定为7.0，温度设定为30℃。

利用分光光度计OD600对培养菌株进行浓度及菌量的检测。

表1不同培养参数对菌浓度的影响

结论：贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R的最佳生长温度为28～32℃，最高生长温度为35℃，最低生长温度为18℃，需氧。在营养琼脂培养基28℃培养20h的菌落表面粗糙不透明，污白色或淡黄色，边缘粗糙，挑取为粘稠状或冻状如图2所示。

菌株最适生长条件为：pH＝7.0，温度28～32℃，转速180r/min，可利用广泛的碳源和氮源。

运用此分离纯化方法，经若干代反复纯化，在营养琼脂培养基中划线培养，得到单一菌株，菌株经PDA培养基对尖孢镰刀菌及黄曲霉菌具有较强的拮抗能力，本实施例分离纯化得到具有较强的拮抗病原菌(尖孢镰刀菌及黄曲霉菌)能力的菌株系。

(二)鉴定-菌株株系单菌株的16S rDNA序列测序

1)对菌株单克隆菌液进行PCR特异性扩增，引物分别为27F和1492R，酶选用2×star Mix。PCR扩增产物做电泳成像技术进行检测，观察其是否具有条带，将剩余PCR扩增产物用于序列测定。测序结果如SEQ ID NO:1所示。其PCR反应体系如表2。

表2

2)从NCBI(GenBank)数据库中获取参比菌株序列，运用软件BioEdit和MEGA11对分离菌株和参比菌株的16S rDNA序列进行分析，构建分离菌株与参比菌株的系统发育树，如图3所示，从而确定芽孢杆菌株系为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)的菌株系，并命名为BGB-121R(嘉博文121号)。

实施例2

本实施例提供贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R的抑菌实验：

1)菌株培养

将-80℃保存的供试菌株3次活化后转接于营养液体培养基培养，培养至对数期，其菌株的生长情况用紫外分光光度计检测，利用OD值估算含菌量，并利用稀释涂布平板计数，用无菌水稀释至(1～9)×10⁹CFU/mL，待用；并将供试菌株于营养固体培养基进行划线培养，待用。

尖孢镰刀菌菌板培养：将-80℃保存的供试菌株3次活化后转接于PDA培养基，28℃，培养5d，即待菌丝将要覆盖全部平板，培养结束，留存待用。

黄曲霉菌：菌板培养：将-80℃保存的供试菌株3次活化后转接于PDA培养基，28℃，培养7d，即待菌丝将要覆盖全部平板，培养结束，留存待用。

2)菌株拮抗尖孢镰刀菌实验

将上述培养基已培养完成的具有BGB-121R菌株的平板利用5mm打孔器打孔，同理利用打孔器将培养完成的尖孢镰刀菌及黄曲霉菌平板进行打孔，放置于已倒好且无菌的PDA平板(直径90mm)进行实验，放置点位于平板中心25mm处，对称放置，并做空白对照实验；培养4d对培养物进行观察，并进行检测，观察并测量BGB-121R对尖孢镰刀菌及黄曲霉菌的抑菌效果，计算抑菌率；BGB-121R对尖孢镰刀菌及黄曲霉菌的抑制作用结果见表3所示。

计算公式如下：

抑菌率(％)＝(Rp-Rt)/Rp×100％

其中，Rp表示对照组尖孢镰刀菌或黄曲霉菌菌生长半径；Rt表示处理组尖孢镰刀菌或黄曲霉菌菌生长半径。

表3

如图4所示，BGB-121R与尖孢镰刀菌及黄曲霉菌对峙培养4d，对峙界面处BGB-121生长旺盛，尖孢镰刀菌及黄曲霉菌生长受限，中间产生明显的抑菌圈。BGB-121R对尖孢镰刀菌及黄曲霉菌抑制率分别达到48.74％和35.27％，可确定BGB-121R对尖孢镰刀菌及黄曲霉菌病原菌具有较好的抑制作用。

实施例3

本实施例提供一种贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R的促进黄瓜种子萌发及生长实验：

1.菌株促进种子萌发实验

利用营养液体培养基培养BGB-121R，培养28h后，利用离心机将上述发酵液在8000rpm离心，取下层沉淀，并用无菌水稀释菌含量至1～9×10⁹CFU/mL。取新鲜饱满黄瓜种子，利用溶质质量分数为0.2％次氯酸钠灭菌冲洗15s，反复冲洗2-3次，确保黄瓜种子表面灭菌完全而不损伤黄瓜种子。

将已稀释至1～9×10⁹CFU/ml菌悬液利用无菌水稀释100倍，待用。在9cm无菌培养皿放置1张无菌滤纸，其上放置20粒大小基本一致、饱满的已灭菌的黄瓜种子，加入上述已稀释100倍的菌悬液10ml，盖上培养皿盖，在28℃培养箱避光培养48h，统计发芽种子的粒数，并用直尺逐一测量主根长。以无菌水作对照，做空白试验。

BGB-121R对黄瓜种子萌发的影响情况见表4所示。

表4

由图5所示，较清水相比，BGB-121R菌悬液及菌发酵上清液都可显著促进黄瓜种子萌发，较无菌水提高3.4％发芽率。平均根长统计结果显示，与无菌水相比，菌悬液处理平均根长为4.14cm，而菌发酵上清液仅有3.33cm，菌悬液与菌发酵上清液均可显著促进种子幼苗生长。

以上结果说明，BGB-121R可促进黄瓜种子萌发及生长，可能在发酵过程中产生了一些促生性物质，进一步促进种子的萌发和生长。

2.菌株促生黄瓜苗的实验

将营养土放置于育苗盘中，利用无菌水浇透，将处理好的育苗盘放置于28℃温室中12h，利用0.2％次氯酸钠处理黄瓜种子15s，并用无菌水洗3～5次，按照穴播的方式种植于育苗盘，10～20d后黄瓜种子萌发，进行黄瓜苗的移栽。将营养土放置于另一育苗盘中，利用已稀释为菌含量为1～9×10⁹CFU/mLBGB-121R的发酵菌液浇透作为处理组(按照比例加入盆栽土，保证盆栽土菌含量为1～9×10⁷CFU/g)，对照组则利用无菌水浇透，并保证浇水量一致。将黄瓜苗分别移栽至上述处理组与对照组育苗盘中，放置于人工生长室进行培养，生长室(光周期为：日/夜＝16h/8h，温度为：日/夜＝30℃/24℃)。做10个重复，培养30天后收获检测，以植株鲜重、根长、株高等生物指标作为BGB-121R促生效果的判断指标。

BGB-121R对黄瓜种子发芽指数及幼苗生长的影响情况见表5所示。

表5

如表5，与对照相比，处理组株高明显高于对照组，其增长率为7.2％，根长也较对照组有所增长，增长率为21.8％，整株鲜重处理组较对照组重了1.05g/株，增长率为38.2％。

利用BGB-121R发酵菌液稀释液处理黄瓜幼苗，可显著提高幼苗在苗期的增长，在株高、根长、整株鲜重均有一定程度的增加。

BGB-121R对黄瓜幼苗有一定的促生作用，可在黄瓜种植栽培中被应用。

实施例4

本实施例提供一种贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R的促进大棚西红柿生长的实验：

根据实施例2中，菌株的发酵方法，将利用营养液体培养基发酵得到的菌液利用离心机5000r/min离心30s，取下层菌浆，添加质量分数为20％的保护剂(保护剂为质量比为5：4.5：1的糊精、无水硫酸钠、偏重亚硫酸钠的混合物)，并加入菌浆重量70％的发酵上清液，均匀混合，于离心喷雾干燥机中制备成为菌剂(菌含量为1500亿/g)，保存，待用。

在山东兰陵县向城镇徐皇路村连续3年种植西红柿的蔬菜大棚进行实验，土壤理化性质为：有机质含量4.76％，全氮含量1385mg/kg，速效磷含量105mg/kg，速效钾含量511mg/kg，pH 6.18。实验在同一大棚进行，种植前分别在大棚中施入160kg/亩的北京嘉博文土壤调理剂(有机物总量≧85％(以干基记)，有机质≧75％(以干基记)，易氧化有机质≧20％(以干基记)，pH5.5-7.5,水分≦8％，钠≦0.6％，无菌)，并与表层土壤混合均匀，整个大棚分为2个处理，左半部分为实验处理(菌剂加入量为215g/亩，用水溶解后均匀喷洒到土壤表面)，右半部分为对照处理(菌剂所使用的保护剂加入量为62g/亩，用水溶解后均匀喷洒到土壤表面)，在采收期(2022年4月7日)对株高、茎粗及产量等性状进行调查。按照普通农事管理措施进行西红柿幼苗定植(2022年2月2日)及种植，生育期内除普通农药外不喷洒杀菌剂。

BGB-121R对西红柿生长的影响见表6所示。

表6

如图6所示，BGB-121R菌株做成的菌剂对西红柿生长均有较强的促进作用，不但可以提高西红柿产量，在促进株高和茎粗方面也有一定的效果。与对照相比，施加菌剂可提高产量5％以上，可提高株高6％以上，可促进茎粗达6％以上。对生防效果来说，可有效防治茎腐病，与对照相比，茎基腐病病株率降低了一半，由对照的17.22％降低到8.89％，对实际西红柿减少茎基腐病的危害具有良好的应用意义。

实施例5

本实施例提供一种贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R的促进芹菜生长的实验：

根据实施例2中，菌株的发酵方法，将利用营养液体培养基发酵得到的菌液利用离心机5000r/min离心30s，取下层菌浆，添加质量分数为20％的保护剂(保护剂为质量比为5：4.5：1的糊精、无水硫酸钠、偏重亚硫酸钠的混合物)，并回加入菌浆质量70％的发酵上清液，均匀混合，于喷雾干燥机中制备成为菌剂(菌含量为1500亿/g)，保存，待用。

在安徽省蚌埠市淮上区小蚌埠镇吴郢村芹菜种植专业户大棚，进行实验，土壤理化性质为：有机质含量1.54％，全氮含量1280mg/kg，速效磷含量133mg/kg，速效钾含量87mg/kg，pH 7.33。实验在同一大棚进行，种植前分别在大棚中施入160kg/亩的北京嘉博文土壤调理剂(有机物总量≧85％(以干基记)，有机质≧75％(以干基记)，易氧化有机质≧20％(以干基记)，pH:5.5-7.5,水分≦8％，钠≦0.6％，无菌)，并与表层土壤混合均匀，整个大棚分为2个处理，左半部分为实验处理(菌剂加入量为215g/亩，用水溶解后均匀喷洒到土壤表面)，右半部分为对照处理(保护剂加入量为62g/亩，用水溶解后均匀喷洒到土壤表面)，在采收期(2021年11月18日)对株高、SPAD值、叶片数、产量及VC含量等性状进行调查与检测。按照普通农事管理措施进行芹菜(芹菜品种为哈力特)幼苗定植(2021年8月27日)及种植，生育期内除普通农药外不喷洒杀菌剂。

采收期统计，如图7，BGB-121R对芹菜生长的影响见表7所示。

表7

统计结果显示，与空白相比，利用BGB-121R处理芹菜，处理组株高平均值在55.37cm，高于对照组2.86cm，增高率为5％。芹菜叶片数，处理组平均值较对照组高1.6个/株，叶片SPAD值反映叶片中叶绿素含量，在实验统计中，处理组较对照组SPAD值平均高4个单位。对于芹菜和品质方面，使用BGB-121R可提高亩产208kg/亩，增产率为3.6％，对于芹菜中品质物质VC，使用BGB-121R可显著提高植株中VC含量8.56mg/100g，增长率为16.3％。

利用BGB-121R菌剂处理芹菜可显著促进芹菜株高生长、叶片数增加、叶绿素含量提升，不仅可以提高芹菜产量，还可以显著提高芹菜中VC含量。因此BGB在对芹菜具有较好的促生作用，在实际生产中具有较强的应用前景。

综上，贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R，不仅可对作物，尤其是黄瓜、西红柿、芹菜具有一定的促生作用，还可以对芹菜等品质有较大的提升。在生防作用时，可显著抑制尖孢镰刀菌及黄曲霉菌的生长，抑菌率达到48％及35％以上，在实际应用中可显著减轻西红柿茎基腐病的产生，具有较好的生防意义。

贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R，在生防和促生中均具有较强的作用，对实际生产具有较好的应用意义。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种贝莱斯芽孢杆菌，名称为贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌BGB-121R保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CMCCNo.25765。

2.一种贝莱斯芽孢杆菌的制备物，其特征在于，所述的制备物中包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌；所述的制备物为培养物、培养物提取物、发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、冻干粉中的一种或多种。

3.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2所述的制备物在制备肥料和/或促生长剂中的应用。

4.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2所述的制备物在制备抑菌剂和/或农药中的应用。

5.一种肥料，其特征在于，包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2所述的制备物。

6.一种抑菌剂，其特征在干，包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2所述的制备物。

7.根据权利要求6所述的抑菌剂，其特征在于，针对尖孢镰刀菌及黄曲霉菌。

8.一种农药，其特征在于，包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2所述的制备物。

9.一种植物促生长剂，其特征在于，包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2所述的制备物。

10.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2所述的制备物在作物种植中的应用，其特征在于，对发酵液进行稀释后使用；所述的应用为土壤处理、冲施、灌根、蘸根、淋根、滴灌、拌种或浸种。

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