CN115836995A - 一种麦卢卡树提取物的制备方法及在化妆品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种麦卢卡树提取物的制备方法，包括以下步骤：麦卢卡枝叶的粉碎，过筛；超临界二氧化碳萃取；分离，溶解。本申请所述麦卢卡树提取物的制备方法，通过采用二氧化碳超临界萃取，可以提高麦卢卡提取物中有效成分倍半萜酮的提取量，得到安全无刺激、高效且强效的麦卢卡树提取物，应用于化妆品中具有抑菌祛痘的功效。并且达到萃取和分离的双重作用，具有工艺流程简单、提取效率高，且无有机溶剂残留、无环境污染的优势。得到的麦卢卡提取物可以选择性地抑制不良细菌(痤疮丙酸杆菌)生物膜的形成，同时帮助皮肤有益菌(表皮葡萄球菌)的生物膜形成，从而达到平衡皮肤微生态的作用。
Description
技术领域
本申请涉及一种麦卢卡树提取物的制备方法及其在化妆品中的应用，涉及A61K，具体涉及梳妆用的配制品领域。
背景技术
佩戴口罩是阻断空气传播类传染病的有效手段，长期佩戴口罩，口鼻部位形成湿热的环境，肌肤容易出现菌群失调，油脂分泌失调，导致面部肌肤出现红肿，痘痘等皮肤问题。传统的祛痘方法可以通过抗菌剂杀灭部分个别细菌，但是细菌却可以通过形成生物膜进行自我保护，在生物膜中细菌和真菌可以躲避抗菌剂的伤害。一些祛痘产品中还含有酸性成分，如水杨酸、维A酸、壬二酸等，通过溶解表面油脂，实现祛痘的效果。但是酸的起效浓度高，刺激性大，长期使用易破坏皮肤屏障，极大程度上限制了其在祛痘产品中应用。通过采用麦卢卡(leptospermum scoparium)树进行提取得到的提取物具有杀菌，祛痘的效果，但是目前的麦卢卡树的提取采用水蒸气蒸馏的方式，存在提取时间较长、温度较高的缺点，容易造成热不稳定及易氧化活性成分的破坏，最终产品收率低，品质差。
中国发明专利CN111700853A公开了一种具有抗敏修复功效的化妆品组合物及其应用，采用麦卢卡树的花作为提取原料，采用水提取法，得到的提取物具有抗敏修复的功效，但是杀菌祛痘的功效没有涉及。中国发明专利CN112641711A公开了一种麦卢卡蜂蜜漱口水及其制备方法，通过对麦卢卡蜂蜜进行水蒸气蒸馏得到提取物，具有调整口腔菌群的效果，但是在70-95℃的提取高温下，活性成分容易变质，导致抑菌效果下降。
发明内容
为了最大程度保留麦卢卡提取物中的活性成分，并将其应用于化妆品中具有抑菌祛痘的的功效，本申请的第一个方面提供了一种麦卢卡树提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取麦卢卡树新鲜枝叶，干燥，粉碎，装入萃取釜中；
(2)将超临界二氧化碳流体注入萃取釜中，在一定温度和压力下，萃取30-120min，得萃取物；
(3)将步骤2的萃取物随二氧化碳流入分离器中，在一定压力和温度下，分离，得收集液，备用；
(4)将步骤3的收集液溶解于溶剂中，搅拌均匀，过滤，得麦卢卡树提取物溶液。
作为一种优选的实施方式，所述步骤1中粉碎后需要过筛，筛孔为40-60目，取筛下物。
作为一种优选的实施方式，所述步骤2超临界萃取的温度为30-50℃，萃取压力为10-30MPa。
作为一种优选的实施方式，所述步骤2超临界萃取中二氧化碳的流量为10-30L/h。
申请人在实验过程中发现采用超临界二氧化碳对麦卢卡(leptospermumscoparium)树进行萃取，可以提高麦卢卡提取物中有效成分倍半萜酮的提取量，应用于化妆品中具有抑菌祛痘的功效。猜测可能的原因是，传统的提取麦卢卡的方法为采用水蒸气蒸馏法，存在提取时间长，温度高，有效成分失活的问题。本申请采用二氧化碳超临界萃取技术，可以使麦卢卡枝叶在较低的温度下实现有效成分的分离，避免了高温对有效成分的破坏。并且在二氧化碳超临界萃取后，将收集液溶解于C8-C12的脂肪醇溶剂中，可以促进有效成分与其他物质的分离，使提取液中最大程度的保留了倍半萜酮，提高了倍半萜酮在提取物中的纯度和含量，应用于化妆品中具有显著的效果。
作为一种优选的实施方式，所述步骤3中分离的压力为5-15MPa，分离温度为25-35℃。
申请人进一步发现，采用二氧化碳萃取后，流入分离器中进行加压分离，可以进一步提高分离效率，增加有效成分的溶出，并且无溶剂残留，减少了下一步的分离压力，应用于化妆品中更加安全。
作为一种优选的实施方式，所述步骤4中溶剂为脂肪醇，优选的，所述脂肪醇为碳原子数为8-30的脂肪醇溶剂。
作为一种优选的实施方式，所述脂肪醇为辛基十二醇。
作为一种优选的实施方式，所述麦卢卡树提取物溶液中麦卢卡树提取物的质量分数为1-10％。
作为一种优选的实施方式，所述麦卢卡树提取物中倍半萜酮的质量分数为20-40％。
本申请的第二个方面提供了一种麦卢卡树提取物的制备方法制得的麦卢卡树提取物。
本申请的第三个方面提供了一种麦卢卡树提取物的应用，应用于具有抑菌祛痘功效的化妆品中，优选的，所述麦卢卡树提取物在化妆品配方中的添加质量分数为0.1-10％。
与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：
(1)本申请所述麦卢卡树提取物的制备方法，通过采用二氧化碳超临界萃取，采用30-50℃的萃取温度，10-30MPa的萃取压力，可以提高麦卢卡提取物中有效成分倍半萜酮的提取量，得到安全无刺激、高效且强效的麦卢卡树提取物，应用于化妆品中具有抑菌祛痘的功效。
(2)本申请所述麦卢卡树提取物的制备方法，在采用超临界二氧化碳萃取后，流入分离器中进行5-15MPa的加压分离，可以进一步提高分离效率，增加有效成分的溶出，达到萃取和分离的双重作用，具有工艺流程简单、提取效率高，且无有机溶剂残留、无环境污染的优势。
(3)通过本申请所述麦卢卡树提取物的制备方法制得的麦卢卡树提取物，可以选择性地抑制不良细菌(痤疮丙酸杆菌)生物膜的形成，同时帮助皮肤有益菌(表皮葡萄球菌)的生物膜形成，从而达到平衡皮肤微生态的作用。
附图说明
图1为SZ95细胞油红O染色镜检图，从左到右依次为阴性对照、实施例1-3、对比例1；
图2为皮脂含量抑制率对比图；
图3为菌群生长调节图；
图4为菌群生物膜的形成调节图
图5为祛痘效果图；
图6为皮肤皮脂含量减少率柱形图。
具体实施方式
实施例1
一种麦卢卡树提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取麦卢卡树新鲜枝叶，干燥，粉碎，装入萃取釜中；
(2)将超临界二氧化碳流体注入萃取釜中，在一定温度和压力下，萃取60min，得萃取物；
(3)将步骤2的萃取物随二氧化碳流入分离器中，在一定压力和温度下，分离，得收集液，备用；
(4)将步骤3的收集液溶解于溶剂中，搅拌均匀，过滤，得麦卢卡树提取物溶液。
所述步骤1中粉碎后需要过筛，筛孔为60目，取筛下物。
所述步骤2超临界萃取的温度为40℃，萃取压力为20MPa，二氧化碳的流量为15L/h。
所述步骤3中分离的压力为10MPa，分离温度为25℃。
所述步骤4中溶剂为辛基十二醇。所述麦卢卡树提取物溶液中麦卢卡树提取物的质量分数为1％。
实施例2
一种麦卢卡树提取物的制备方法，具体步骤同实施例1，不同点在于所述麦卢卡树提取物溶液中麦卢卡树提取物的质量分数为5％。
实施例3
一种麦卢卡树提取物的制备方法，具体步骤同实施例1，不同点在于所述麦卢卡树提取物溶液中麦卢卡树提取物的质量分数为10％。
对比例1
一种麦卢卡树提取物的制备方法，包括以下步骤：
取麦卢卡树新鲜枝叶自然干燥，粉碎，过60目筛，按照料液比1：4(重量计)加入去离子水，用精油提取器进行加热回流提取，水沸腾后开始计时，提取60min，收集精油，然后加入辛基十二醇，搅拌均匀，过滤，得到重量百分比为5％麦卢卡树提取物的溶液。
性能测试
1.皮脂含量抑制率测试：皮脂腺细胞SZ95皮脂含量检测试验
皮脂腺是皮肤重要的附属器官，主要功能为合成与分泌皮脂，抑制皮脂分泌过多是抑制痤疮形成的主要靶点之一。
选取体外培养的SZ95人皮脂腺细胞，培养于DMEM培养基中，添加10％新生胎牛血清、100IU/ml青霉素和100μg/ml，置于37℃，5％CO2培养箱中，每3天传代一次。选取对数期的SZ95细胞，弃去培养液，用PBS液清洗1次，加入0.25％胰酶室温放置2min，培养液终止消化，1000rpm离心3min，用完全DMEM培养液重悬细胞，计数，调节细胞浓度为3×105/ml。每孔100μl加入48孔板，24h后，细胞贴壁，加入相同量的实施例1(超临界萃取法，含质量分数1％麦卢卡树提取物)、实施例2(超临界萃取法，含质量分数5％麦卢卡树提取物)、实施例3(超临界萃取法，含质量分数10％麦卢卡树提取物)、实施例4(水蒸气蒸馏法，含质量分数5％麦卢卡树提取物)和阴性对照(细胞+培养基)，于37℃，5％CO2恒温培养箱培养72h，小心轻缓倒去培养液，加入50μl油红O染色液，染色10min，弃掉多余染色液，40％异丙醇轻洗2次，加入ddH2O，镜检观察，拍照；然后弃去ddH2O，100％异丙醇溶解(200μl/well)，于492nm检测吸光度，计算方法如下：
皮脂含量抑制率％＝100-OD492待测样品组/OD492阴性对照组×100
结果如图1-2所示，其中可知：
1)实施例1-3的抑制效果和麦卢卡树提取物的含量百分比呈正相关，说明本发明制备的麦卢卡树提取物具有优秀的抑制皮脂分泌的作用；
2)实施例2对皮脂含量的抑制效果优于对比例1，说明相同含量条件下，超临界萃取法与传统水蒸气蒸馏法制备的麦卢卡树提取物相比，超临界萃取法不仅工艺简单、提取效率高，兼具优秀的控油效果。
2.菌群生长调节和菌群生物膜调节测试：调节菌群生长、生物膜形成试验
分别取痤疮菌株(RT4、RT5)和非痤疮菌株(RT6)接种培养，配置成浓度为1000CFU/ml，然后分别加入相同量的待测样品(实施例2、对比例1)和阴性对照(培养基)，在37℃和无氧条件下培养，24h后取样，处理并点板，计算活菌总数，结果见图3。
分别取痤疮菌株(RT4、RT5)和非痤疮菌株(RT6)接种培养，配置成浓度为1x108CFU/ml，分别加入每孔100μl的待测样品(实施例2、对比例1)和阴性对照(培养基)至96孔板，培养板在37℃培养24h，然后除去各孔未附着的细菌(生物膜中的细菌会附着)。最后用2％结晶紫(CV)染料溶液冲洗并晾干，溶解结合的染料，用微孔板检测仪定量测定生物膜的生物量，采用595nm处的光密度(OD595)，测量值减去被CV染色的空白孔，以抵消背景干扰，结果见图4。
由图3可知，相比于对比例1，实施例2可以明显抑制痤疮丙酸杆菌的生长，且对有益菌表皮葡萄群菌没有影响；
由图4可知，相比于对比例1，实施例2可以完全抑制痤疮丙酸杆菌生物膜的形成，且能显著增加益菌表皮葡萄群菌的生物膜形成能力；
3.祛痘效果测试：
使用在化妆品配方中的添加质量分数为1％的实施例2乳液，涂抹于痘痘处，早晚各1次，每次约1粒黄豆大小，连续使用3天，利用C-CUBE(PIXIENCE，France)进行拍照，结果如图5。从左至右依次为3名具有代表性的痘痘肌的志愿者。
测试方法：采用的是世界公认的SEBUMETER法，使用0.1mm厚的特殊消光胶带吸收人体皮肤上的油脂后，就会变成一种半透明的胶带，它的透光量就会发生变化，吸收的油脂越多，透光量就越大，这样就可以测量出皮肤油脂的含量。
筛选油性肌肤的志愿者30名，男性16名，女性14名，年龄在20-35岁，随机分为2组，每组15人。采用世界公认的SEBUMETER法进行测试。志愿者分别使用含质量分数1％实施例2、质量分数1％对比例1的乳液，每天早、晚各1次全脸涂抹，在产品使用后2周、4周，在产品使用后2周、4周，利用Sebumeter SM815测量皮肤油脂，结果如图6。所述乳液配方包括：
Claims (10)
1.一种麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取麦卢卡树新鲜枝叶，干燥，粉碎，装入萃取釜中；
(2)将超临界二氧化碳流体注入萃取釜中，在一定温度和压力下，萃取30-120min，得萃取物；
(3)将步骤2的萃取物随二氧化碳流入分离器中，在一定压力和温度下，分离，得收集液，备用；
(4)将步骤3的收集液溶解于溶剂中，搅拌均匀，过滤，得麦卢卡树提取物溶液。
2.根据权利要求1所述麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中粉碎后需要过筛，筛孔为40-60目，取筛下物。
3.根据权利要求1所述麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤2超临界萃取的温度为30-50℃，萃取压力为10-30MPa。
4.根据权利要求1所述麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤2超临界萃取中二氧化碳的流量为10-30L/h。
5.根据权利要求1所述麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤3中分离的压力为5-15MPa，分离温度为25-35℃。
6.根据权利要求1所述麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤4中溶剂为脂肪醇，优选的，所述脂肪醇为碳原子数为8-30的脂肪醇溶剂。
7.根据权利要求1所述麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，所述麦卢卡树提取物溶液中麦卢卡树提取物的质量分数为1-10％。
8.根据权利要求7所述麦卢卡树提取物的制备方法，其特征在于，所述麦卢卡树提取物中倍半萜酮的质量分数为20-40％。
9.一种根据权利要求1-8任一项所述麦卢卡树提取物的制备方法制得的麦卢卡树提取物。
10.一种根据权利要求9所述麦卢卡树提取物的制备方法制得的麦卢卡树提取物的应用，其特征在于，应用于具有抑菌祛痘功效的化妆品中，优选的，所述麦卢卡树提取物在化妆品配方中的添加质量分数为0.1-10％。
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