CN115811977A

CN115811977A - 变构egfr抑制剂及其使用方法

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Publication number: CN115811977A
Application number: CN202180041075.2A
Authority: CN
Inventors: D·A·斯科特; T·格罗; T·贝耶特; D·黑普纳; K·E·吉普森; 黄世充; S·斯特劳德
Original assignee: Dana Farber Cancer Institute Inc
Current assignee: Dana Farber Cancer Institute Inc
Priority date: 2020-06-09
Filing date: 2021-06-09
Publication date: 2023-03-17
Also published as: CA3181982A1; NZ795548A; KR20230033645A; SA522441639B1; JP7785701B2; WO2021252661A1; BR112022025139A2; CO2022019316A2; EP4161516A4; IL298935A; JP2025168374A; US20230212171A1; JP2023529701A; MX2022015739A; AU2021289729A1; JP2025170326A; EP4161516A1; ECSP22098041A

Abstract

本公开涉及充当表皮生长因子受体(EGFR)的变构抑制剂的化合物；包含所述化合物的药物组合物；以及治疗或预防激酶介导的病症，包括癌症和其他增殖性疾病的方法。

Description

变构EGFR抑制剂及其使用方法

相关申请

本申请要求于2020年6月9日提交的美国临时申请号63/036,622和于2020年11月9日提交的美国临时申请号63/111,429的优先权，所述申请的全部内容以引用方式并入本文。

关于联邦资助研究或开发的声明

本发明根据国家卫生研究(NIH)所授予的授权号R01 CA201049下的政府资助产生。政府对本发明享有一定权利。

背景技术

表皮生长因子受体(EGFR,Erb-B1)属于受体酪氨酸激酶家族，所述激酶可介导正常细胞和恶性细胞的增殖、分化和存活(Arteaga,C.L.,J.Clin.Oncol.19,2001,32-40)。EGFR的失调与许多类型的人类癌症有关，并且所述受体的过表达存在于至少70％的人类癌症中(Seymour,L.K.,Curr.Drug Targets 2,2001,117-133)，所述人类癌症包括非小肺细胞癌、乳腺癌、神经胶质瘤、头颈部鳞状细胞癌和前列腺癌(Raymond,E.等人,Drugs 60(增刊1),2000,15-23,讨论41-2；Salomon,D.S.等人,Crit.Rev.Oncol.Hematol.19,1995,183-232；Voldborg B.R.等人,Ann.Oncol.8,1997,1197-1206)。因此，EGFR已成为设计和开发能够特异性结合并抑制癌细胞中受体酪氨酸激酶活性和信号转导途径的诊断剂和治疗剂的有吸引力的靶标。例如，EGFR酪氨酸激酶(EGFR-TK)可逆抑制剂

已被FDA批准用于治疗NSCLC和晚期胰腺癌。其他抗EGFR靶向分子也已获批准，包括拉帕替尼和

表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)是EGFR突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的有效临床疗法(Mok,T.S.等人,N.Engl.J.Med.361,2009,947-57；Paez,J.G.等人,Science 304,2004,1497-500；Lynch,T.J.等人,N.Engl.J.Med.350,2004,2129-39；Rosell,R.等人,Lancet Oncol.13,2012,239-46)。几项随机临床试验表明，当用作晚期EGFR突变NSCLC的初始全身治疗时，如通过反应率(RR)和无进展生存期(PFS)衡量的，EGFRTKI比化学疗法更有效(Mok,T.S.等人,N.Engl.J.Med.361,2009,947-57；Rosell,R.等人,Lancet Oncol.13,2012,239-46；Sequest,L.V.等人,J.Clin.Oncol.31,2013,3327-34；Wu,Y.L.等人,Lancet Oncol.15,2014,213-22；Maemondo,M.等人,N.Engl.J.Med.362,2010,2380-8；Zhou,C.等人,Lancet Oncol.12,2011,735-42；Mitsudomi,T.等人,LancetOncol.11,2010,121-8)。然而，绝大多数患者在成功使用EGFR TKI治疗后会出现疾病进展。在60％的患者中检测到的最常见的获得性耐药机制是在EGFR的位置T790处的继发性突变(T790M)(Yu,H.A.等人,Clin.Cancer Res.19,2013,2240-7)。这种突变导致ATP亲和力增加，从而使可逆EGFR TKI吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)更难以结合EGFRTKI结构域(Yun C.H.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 105,2008,2070-5)。

用于抑制含有EGFR T790M的癌症的共价EGFR抑制剂已经出现。然而，在肺癌患者中，阿法替尼(afatinib)仅对未接受过EGFR TKI的EGFR突变癌症有效，并且在对吉非替尼或厄洛替尼产生耐药性的NSCLC患者中的RR小于10％(Miller,V.A.等人Lancet Oncol.13,2012,528-38)。阿法替尼是突变型和野生型(WT)EGFR两者的有效抑制剂。抑制WT EGFR会导致毒性，包括皮疹和腹泻，这限制了将患者的阿法替尼剂量增加到抑制EGFR T790M所需剂量的能力。包括工具化合物WZ4002和临床化合物CO-1686和AZD9291在内的不可逆嘧啶EGFR抑制剂克服了阿法替尼的许多局限性(Zhou,W.等人,Nature 462,2009,1070-4；Walter,A.O.等人,Cancer Discov.3,2013,1404-15；Cross,D.A.E.等人,Cancer Discov.4,2014,1046-61)。它们不仅对EGFR T790M更有效，而且相对于WT EGFR选择性地抑制突变体，因此与阿法替尼相比，导致临床疗效增加和毒性更小(Zhou,W.等人；Walter A.O.等人,Cross,D.A.E.等人)。

然而，目前所有的EGFR TKI都针对ATP位点，并且虽然第三代不可逆抑制剂可以克服T790M，但它们都因C797S突变而变得无效，这种突变已经在接受治疗的患者中出现。西妥昔单抗(Cetuximab)是一种阻断受体二聚化的抗EGFR抗体，它在EGFR突变的NSCLC中无效，因为激酶的突变活化实际上是受体二聚化的“下游”。

目前，尚无具有靶向突变EGFR的替代性作用机制的合适化合物可用。因此，需要具有靶向突变EGFR的替代性作用机制的强效小分子EGFR抑制剂。

发明内容

在一个方面，本文提供了一种式I化合物：

或其药学上可接受的盐；

其中：

表示任选的双键；

A和A'各自独立地为CH、CR⁸或N；

W是N或C；

Z选自由以下组成的组：S、O、N、NH、N-Me、CH₂、CH、C-卤代、C-(C₁-C₃烷基)或C-(C₁-C₃烷氧基)；

X和Y各自独立地为S、O、N、CH、NR³或CR³；

条件是X、Y或Z中的至少一个是CH；

R¹选自由以下组成的组：C(O)NHR⁹、6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元杂环烷基和3-10元环烷基，其中芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选地被一个、两个或三个R⁸取代；

R²选自由以下组成的组：6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元杂环烷基和3-10元环烷基，所有这些任选地被一个、两个或三个R⁶取代；

R³在每次出现时独立地选自由以下组成的组：卤素、OR⁴、NR⁴R⁴、SO₂R⁴、SO₂NHR⁴、NHSO₂R⁴、C(O)OR⁴、C(O)NHR⁴、NHC(O)R⁴、C(O)R⁴、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、3-7元环烷基、C₄-C₇环烯基、C₆-C₁₀芳基、5-6元杂芳基和5-7元杂环基，其中烷基、烯基或炔基各自任选地被R⁴取代一次、两次或三次，并且其中芳基、杂芳基或杂环基各自任选地被R⁵取代一次、两次或三次；

R⁴在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、C₁-C₆烷基、(CH₂)_0-3-(C₃-C₇环烷基)、(CH₂)_0-3-(C₄-C₇环烯基)、(CH₂)_0-3-(C₆-C₁₀芳基)、(CH₂)_0-3-(5-6元杂芳基)和(CH₂)_0-3-(5-7元杂环基)，其中芳基、杂芳基或杂环基各自任选地被R⁵取代一次、两次或三次；

R⁵在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₃烷基胺、3-10元环烷基、卤素、COOH、C(O)O(C₁-C₆烷基)、O(CH₂)_1-3-OH、NH₂、NH(C₁-C₆烷基)、N(C₁-C₆烷基)₂、OH、CN、(CH₂)_0-3-(C₆-C₁₀芳基)、(CH₂)_0-3-(5-6元杂芳基)和(CH₂)_0-3-(5-7元杂环基)，其中芳基、杂芳基或杂环基各自任选地被R⁷取代一次、两次或三次；

或者，两个R⁵与它们所连接的原子一起可以形成5-10元杂芳基、6-10元芳基、3-10元杂环烷基或3-10元环烷基，所有这些都可以任选地被R⁷取代一次、两次或三次；

R⁶在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤代烷氧基、C₁-C₃烷基胺、卤素、OH、NO₂、NH₂、NH(C₁-C₆烷基)、N(C₁-C₆烷基)₂、(CH₂)_1-4OH、S(O)_0-2H、S(O)_0-2NH₂或CN；

或者，两个R⁶与它们所连接的原子一起可以形成5-10元杂芳基、6-10元芳基、3-10元杂环烷基或3-10元环烷基；

R⁷在每次出现时独立地选自由独立地选自以下的取代基组成的组：C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤素、NH₂、NH(C₁-C₆烷基)、N(C₁-C₆烷基)₂、SO₂NH₂、SO₂NH(C₁-C₆烷基)、SO₂N(C₁-C₆烷基)₂、(CH₂)_1-2-OH、C(O)(CH₂)_1-2-OH、C(O)(C₁-C₆烷基)和C(O)O(C₁-C₆烷基)；

或者，两个R⁷与它们所连接的原子一起可以形成5-10元杂芳基、6-10元芳基、3-10元杂环烷基或3-10元环烷基；

R⁸在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤代烷氧基、C₁-C₃烷基胺、3-6元环烷基、卤素、OH、NO₂、NH₂、NH(C₁-C₆烷基)、N(C₁-C₆烷基)₂、(CH₂)_1-4OH、S(O)_0-2H、S(O)_0-2NH₂或CN；并且

R⁹选自由以下组成的组：6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元杂环烷基和3-10元环烷基，所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代。

在另一方面，本文提供了一种药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体。

在又另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

在又另一个方面，本文提供了一种抑制有需要的受试者的激酶的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

在一方面，本文提供了一种治疗或预防有需要的受试者的激酶介导的病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

具体实施方式

定义

下文列出了用于描述本文公开的化合物和组合物的各种术语的定义。这些定义适用于在整个说明书和权利要求书中使用的术语，除非在特定情况下另有限制，单独或作为更大基团的一部分。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语通常具有与本领域普通技术人员通常理解相同的含义。通常，本文使用的命名法以及细胞培养、分子遗传学、有机化学和肽化学的实验室程序是本领域熟知和常用的那些。

如本文所用，冠词“一个/种(a/an)”是指一个或多于一个(即，至少一个)的冠词的语法对象。举例来说，“一个元素”意指一个元素或多于一个元素。此外，术语“包括(including)”以及其他形式，诸如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不受限制。

如本文所用，术语“约”将被本领域普通技术人员理解并且将在一定程度上随其使用的上下文而变化。如本文所用，当提及诸如量、持续时间等的可测量值时，术语“约”意在涵盖相对于规定值的±20％或±10％，包括±5％、±1％和±0.1％的变化，因为此类变化适于执行所公开的方法。

如本文所用，术语“施用”等是指向受试者提供治疗剂。本领域存在多种施用治疗剂的技术，包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部和局部施用。

术语“治疗(treat)”、“治疗(treated)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括减少或减轻至少一种与所治疗的状态、病症或疾病相关或由其引起的症状。在某些实施方案中，治疗包括将有效量的用于与癌症相关的病状的本文公开的化合物与野生型或突变型EGFR接触。

如本文所用，术语“预防(prevent)”或“预防(prevention)”意指如果没有发生任何病症或疾病，则不发展病症或疾病，或者如果已经发展病症或疾病，则没有进一步病症或疾病发展。还考虑了一个人预防与病症或疾病相关的一些或所有症状的能力。

如本文所用，术语“患者”、“个体”或“受试者”是指人或非人哺乳动物。非人哺乳动物包括例如家畜和宠物，例如羊、牛、猪、犬、猫和海洋哺乳动物。优选地，患者、受试者或个体是人。

如本文所用，术语“有效量”、“药物有效量”和“治疗有效量”是指药剂的无毒但足以提供所需生物学结果的量。该结果可以是疾病的体征、症状或病因的减少或缓解，或生物系统的任何其他预期的改变。在任何个别情况下适当治疗量可由本领域普通技术人员使用常规实验确定。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指诸如载体或稀释剂的材料，其不会消除化合物的生物活性或性质，并且是相对无毒的，即该材料可以向个体施用而不会引起不希望的生物学效应或以有害方式与包含它的组合物的任何组分相互作用。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有酸或碱部分转化为其盐形式来修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基诸如胺的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基诸如羧酸的碱金属盐或有机盐等。本公开的药学上可接受的盐包括母体化合物的例如由无毒无机或有机酸形成的常规无毒盐。本公开的药学上可接受的盐可以由含有碱性部分或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，此类盐可通过将游离酸或碱形式的这些化合物与化学计算量的于水中或有机溶剂中或者二者的混合物中的适当碱或酸反应来制备；通常优选使用非水性介质，诸如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。短语“药学上可接受的盐”不限于单盐或1:1盐。例如，“药学上可接受的盐”还包括双盐，例如双盐酸盐。合适的盐的列表可见于Remington'sPharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)，所述文献各自以引用方式整体并入本文。

如本文所用，术语“前药”是指将在体内经历代谢活化以产生活性药物的前体化合物。因此，例如，本文提供的化合物的前药在施用于受试者时将经历代谢活化以产生化合物。

如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指至少一种可用于本公开中的化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或受试者。本领域存在多种施用化合物的技术，包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部和局部施用。

如本文所用，术语“药物组合”意指由将超过一种活性成分混合或组合所产生的产物，并包括所述活性成分的固定组合和非固定组合两者。术语“固定组合”意指将活性成分例如本公开的化合物和助剂两者以单一实体或剂量的形式同时地施用于患者。术语“非固定组合”意指将活性成分例如本公开的化合物和助剂两者以单独实体形式同时、并行或依序在无特定时间限制下施用于患者，其中此施用在患者体内提供治疗有效水平的两种化合物。后者还应用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成分。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”意指参与在患者体内载运可用于本公开的化合物或将所述化合物运输到患者体内以使其可以执行其预期功能的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常，此类构建体从身体的一个器官或部分载运或运输到身体的另一个器官或部分。在与制剂的其他成分(包括可用于本公开的化合物)相容并且对患者无害的意义上，每种载体必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和它们的衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及药物制剂中使用的其他无毒的可相容物质。

如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与可用于本公开的化合物的活性相容并且可为患者在生理学上接受的任何和所有涂层、抗细菌剂和抗真菌剂以及吸收延迟剂等。补充性活性化合物也可并入组合物中。“药学上可接受的载体”可以还包括本文公开的化合物的药学上可接受的盐。可包含在药物组合物中的其他附加成分是本领域中已知的并且例如描述于Remington's Pharmaceutical Sciences(Genaro,Ed.,Mack PublishingCo.,1985,Easton,PA)中，所述文献以引用方式并入本文。

如本文所用，术语“EGFR”是指表皮生长因子受体(或者称为ErbB-1或HER1)并且可以是指野生型受体或包含一个或多个突变的受体。

如本文所用，术语“HER”或“Her”是指ErbB受体酪氨酸激酶家族的成员，包括EGFR、ERBB2、HER3和HER4。

如本文所用，术语“变构位点”是指EGFR上除ATP结合位点之外的位点，例如以EGFR的晶体结构为特征的位点。“变构位点”可以是靠近ATP结合位点的位点，例如以EGFR的晶体结构为特征的位点。例如，一个变构位点包括表皮生长因子受体(EGFR)的以下氨基酸残基中的一个或多个：Lys745、Leu788、Ala743、Cys755、Leu777、Phe856、Asp855、Met766、Ile759、Glu762和/或Ala763。

如本文所用，术语“防止EGFR二聚体形成的剂”或其复述是指防止二聚体形成的剂，其中“活化剂”亚基的C叶片接触“受体”亚基的N叶片。防止EGFR二聚体形成的剂的实例包括但不限于西妥昔单抗、曲妥珠单抗(trastuzumab)、帕尼单抗(panitumumab)和Mig6。

除非另有说明，否则如本文所用，术语“烷基”单独或作为另一取代基的一部分，意指具有指定碳原子数的直链或支链烃(即C₁-C₆烷基意指具有一至六个碳原子的烷基)并且包括直链和支链。实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。C₁-C₆烷基的其他实例包括乙基、甲基、异丙基、异丁基、正戊基和正己基。

如本文所用，术语“卤代烷基”是指如上文所定义的被一个或多个卤代取代基取代的烷基，其中烷基和卤代如本文所定义。卤代烷基包括例如氯甲基、三氟甲基、溴乙基、氯氟乙基等。

如本文使用，术语“烷氧基”是指基团–O-烷基，其中烷基如本文所定义。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。

如本文使用，术语“烷基胺”是指基团–NH-烷基，其中烷基如本文所定义。烷基胺包括例如甲胺、乙胺、异丙胺、正丙胺、正丁胺、仲丁胺、叔丁胺等。

如本文使用，术语“卤代烷氧基”是指基团–O-卤代烷基，其中卤代烷基如本文所定义。卤代烷氧基包括例如氯甲氧基、三氟甲氧基、溴乙氧基、氯氟乙氧基等。

如本文所用，术语“烯基”是指衍生自烃部分的单价基团，在某些实施方案中，所述烃部分含有两个至六个或两个至八个碳原子且具有至少一个碳-碳双键。烯基可以是或不是与另一个基团的连接点。术语“烯基”包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基、庚烯基、辛烯基等。

如本文所用，术语“炔基”是指衍生自烃部分的单价基团，在某些实施方案中，所述烃部分含有两个至六个或两个至八个碳原子且具有至少一个碳-碳三键。炔基可以是或不是与另一个基团的连接点。术语“炔基”包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、庚炔基、辛炔基等。

除非另有说明，否则如本文所用，术语“卤代”或“卤素”单独或作为另一取代基的一部分，意指氟、氯、溴或碘原子，优选地为氟、氯或溴，更优选地为氟或氯。

如本文所用，术语“环烷基”意指具有1、2或3个环的完全饱和的非芳族碳环体系，其中此类环可以是稠合的。术语“稠合”意指通过使两个相邻原子与第一环共同(即，共享)而存在(即，连接或形成)第二环。环烷基还包括本质上可与具有3-8个原子的双环内的每个单个环桥接或成螺环的双环结构。术语“环烷基”包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、二环[3.1.0]己基、螺[3.3]庚基和二环[1.1.1]戊基。

如本文所用，术语“环烯基”意指具有1、2或3个环的部分饱和的非芳族碳环体系，其中此类环可以是稠合的，并且其中至少一个环包含sp²碳-碳键。术语“环烯基”包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、二环[3.1.0]己烯基、螺[3.3]庚烯基和二环[1.1.1]戊烯基。

如本文所用，术语“杂环基”或“杂环烷基”意指含有1、2、3或4个独立地选自N、O和S的杂原子并具有1、2或3个环的非芳族碳环体系，其中此类环可以是稠合的，其中稠合如上文所定义。杂环基还包括本质上可与具有3-8个原子的双环内的每个单个环桥接或呈螺环并含有0、1或2个N、O或S原子的双环结构。术语“杂环基”包括环状酯(即内酯)和环状酰胺(即内酰胺)，并且还具体地包括但不限于环氧基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基(即环氧乙烷基)、吡喃基、二噁烷基、氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、2,5-二氢-1H-吡咯基、噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、硫代吗啉基、1,3-噁嗪基、1,3-噻嗪基、2-氮杂二环[2.1.1]己基、5-氮杂二环[2.1.1]己基、6-氮杂二环[3.1.1]庚基、2-氮杂二环[2.2.1]庚基、3-氮杂二环[3.1.1]庚基、2-氮杂二环[3.1.1]庚基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、2-氮杂二环-[3.1.0]己基、3-氮杂二环[3.2.1]辛基、8-氮杂二环[3.2.1]辛基、3-氧杂-7-氮杂二环[3.3.1]-壬基、3-氧杂-9-氮杂二环[3.3.1]壬基、2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚基、6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.1]庚基、2-氮杂螺[3.3]庚基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、2-氧杂螺-[3.3]庚基、2-氧杂螺[3.5]壬基、3-氧杂螺[5.3]壬基和8-氧杂二环[3.2.1]辛基。

如本文所用，术语“芳族”是指具有一个或多个多不饱和环并具有芳族特征，即具有(4n+2)离域的π(pi)电子的碳环或杂环，其中n是整数。

如本文所用，术语“芳基”意指含有1、2或3个环的芳族碳环体系，其中此类环可以是稠合的，其中稠合如上文所定义。如果环是稠合的，则其中一个环必须是完全不饱和的，并且稠合的环可以是完全饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的。术语“芳基”包括但不限于苯基、萘基、茚满基和1,2,3,4-四氢萘基。在一些实施方案中，芳基具有6个碳原子。在一些实施方案中，芳基具有六至十个碳原子。在一些实施方案中，芳基具有六至十六个碳原子。

如本文所用，术语“杂芳基”意指含有1、2、3或4个独立地选自N、O和S的杂原子并具有1、2或3个环的芳族碳环体系，其中此类环可以是稠合的，其中稠合如上文所定义。术语“杂芳基”包括但不限于呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、5,6,7,8-四氢异喹啉基、5,6,7,8-四氢喹啉基、6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶基、6,7-二氢-5H-环戊并-[c]吡啶基、1,4,5,6-四氢环戊并[c]吡唑基、2,4,5,6-四氢环戊并[c]吡唑基、5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑基、6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]-三唑基、5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶基、4,5,6,7-四氢-1H-吲唑基和4,5,6,7-四氢-2H-吲唑基。

应当理解，如果芳基、杂芳基、环烷基或杂环基部分可以通过不同的环原子键合或以其他方式连接到指定的部分(即，在未指明特定的连接点的情况下显示或描述)，那么规定所有可能的点，不论通过碳原子或例如通过三价氮原子。例如，术语“吡啶基”意指2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基，术语“噻吩基”意指2-噻吩基或3-噻吩基，等等。

如本文所用，术语“取代的”意指原子或一组原子已取代氢作为连接至另一个基团的取代基。

如本文所用，术语“任选地被取代”意指所提及的基团可以是取代的或未取代的。在一个实施方案中，所提及的基团任选地被零个取代基取代，即所提及的基团是未取代。在另一个实施方案中，所提及的基团任选地被一个或多个单独且独立地选自本文所述的基团的附加基团取代。

化合物

本文提供了作为表皮生长因子受体(EGFR)的变构抑制剂的化合物，其可用于治疗激酶介导的疾病，包括癌症和其他增殖性疾病。

在一个方面，本文提供了一种式I化合物：

或其药学上可接受的盐；

其中：

表示任选的双键；

A和A'各自独立地为CH、CR⁸或N；

W是N、C或CH；

X和Y各自独立地为S、O、N、CH、NR³或CR³；

条件是X、Y或Z中的至少一个是CH；

在另一个方面，本文提供了式X化合物：

或其药学上可接受的盐；

其中：

表示任选的双键；

A和A'各自独立地为CH、CR⁸或N；

或者，A不存在；

W是N、C或CH；

X和Y各自独立地为S、O、N、CH、NR³或CR³；

条件是X、Y或Z中的至少一个是CH；

在式X的一个方面，A和A'各自独立地为CH₂、CHR⁸、NH或NR⁸；其中其余变量在本文中定义。

在另一个方面，本文提供了式XX化合物：

或其药学上可接受的盐；

其中：

A和A'各自独立地为CH₂、CHR⁸、NH或NR⁸；

或者，A不存在；

Z选自由以下组成的组：N、CH、C-卤代、C-(C₁-C₃烷基)或C-(C₁-C₃烷氧基)；

X和Y各自独立地为N、CH、或CR³；

条件是X、Y或Z中的至少一个是CH；

在一个实施方案中，R²是6-10元芳基或5-10元杂芳基，它们两者任选地被一个、两个或三个R⁶取代。在另一个实施方案中，R²是任选地被一个、两个或三个R⁶取代的6-10元芳基。在又另一个实施方案中，R²是任选地被一个、两个或三个R⁶取代的5-10元杂芳基。在又另一个实施方案中，R²是任选地被一个、两个或三个R⁶取代的苯基。在一个实施方案中，R²是任选地被一个、两个或三个R⁶取代的吡啶基。

在另一个实施方案中，A和A'各自独立地为CH₂或CHR⁸。

在另一个实施方案中，式I化合物为式II化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式II化合物为式IIa化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式I化合物为式III化合物：

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式III化合物为式IIIa化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式I化合物为式IV化合物：

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式IV化合物为式IVa化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式IV化合物为式IVb化合物：

或其药学上可接受的盐。

在式IIa、IIIa、IVa和IVb的一个实施方案中，

R¹选自由以下组成的组：苯并咪唑、咪唑并吡啶、吲哚、三唑、吡唑、咪唑、吡啶酰胺和噻唑酰胺，所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代；

R⁷是C₁-C₃烷基；并且

每个R⁸在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、卤素、OH和NH₂。

在一个实施方案中，式I化合物为式V化合物：

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式I化合物为式VI化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式I化合物为式VII化合物：

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式I化合物为式VIII化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式I化合物为式IX化合物：

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式X化合物为式Xa化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式X化合物为式Xb化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，式XX化合物为式XXa化合物：

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式XXa化合物为式XXb化合物：

或其药学上可接受的盐。

在又另一个实施方案中，式XXa化合物为式XXc化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案或式XXb和XXc中，

R⁷是C₁-C₃烷基；并且

R⁸在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、卤素、OH和NH₂。

在一个实施方案中，R³在每次出现时独立地选自由以下组成的组：卤素、OR⁴、NR⁴R⁴、C(O)NHR⁴、C₁-C₆烷基、C₂-C₆炔基、C₆-C₁₀芳基，其中烷基和炔基任选地被R⁴取代一次、两次或三次，并且芳基任选地被R⁵取代一次、两次或三次。

在另一个实施方案中，R³是OR⁴。在又另一个实施方案中，R³是NR⁴R⁴。在又另一个实施方案中，R³是任选地被R⁴取代一次、两次或三次的C₂-C₆炔基。在一个实施方案中，R³是任选地被R⁵取代一次、两次或三次的C₆-C₁₀芳基。在另一个实施方案中，R³为C(O)NHR⁴。

在又另一个实施方案中，R³在每次出现时独立地选自由以下组成的组：卤素、甲基、

在另一个实施方案中，R⁶在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤代烷氧基、C₁-C₃烷基胺、卤素、OH、NO₂、NH₂、NH(C₁-C₆烷基)、N(C₁-C₆烷基)₂、(CH₂)_1-4OH、S(O)_0-2H、S(O)_0-2NH₂或CN；在又另一个实施方案中，R⁶在每次出现时独立地为羟基或卤代。在一个实施方案中，R⁶是氯。在另一个实施方案中，R⁶是氟。在又另一个实施方案中，R⁶是羟基。

在一个实施方案中，R¹选自由以下组成的组：苯并咪唑、咪唑并吡啶、吲哚、三唑、吡唑、咪唑、吡啶酰胺和噻唑酰胺，所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代；

在另一个实施方案中，R¹选自由以下组成的组：

所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代。

在又另一个实施方案中，R¹选自由以下组成的组：

所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代。

在另一个实施方案中，R¹是

在又另一个实施方案中，R¹是

在又另一个实施方案中，R¹是

在一个实施方案中，R⁷为C₁-C₃烷基。在另一个实施方案中，R⁷为甲基。

在又另一个实施方案中，R⁸在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、卤素、OH和NH₂。

在一个实施方案中，式I化合物选自由表1中的化合物组成的组。

表1.

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式X化合物选自由表2中的化合物组成的组。

表2.

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，式XX化合物选自由表3中的化合物组成的组。

表3.

本文公开的化合物可以互变异构体和光学异构体(例如，对映异构体、非对映异构体、非对映异构体混合物、外消旋混合物等)存在。

本领域通常熟知将在体内转化以提供本文公开的化合物的任何化合物是本公开范围内的前药。

在一方面，本文提供了一种药物组合物，其包含本文公开的任一种化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体。

在一个实施方案中，所述组合物还包含第二活性剂。在另一个实施方案中，第二活性剂选自由MEK抑制剂、PI3K抑制剂和mTor抑制剂组成的组。在又另一个实施方案中，第二活性剂防止在受试者中形成EGFR二聚体。在又另一个实施方案中，第二活性剂选自由西妥昔单抗、曲妥珠单抗和帕尼单抗组成的组。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼(osimertinib)、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在另一个方面，本文提供了药物组合物，其包含本公开的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。在另一个方面，药物组合物还包含第二活性剂和药学上可接受的载体，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。

结合至EGFR中的变构位点的化合物，例如本公开的化合物(例如，本文公开的式的化合物)，任选地与第二活性剂组合，能够调节EGFR活性，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，本公开的化合物能够在没有第二活性剂(例如，诸如西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗的抗体)的情况下抑制或降低EGFR活性。在其他实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂组合。在一个实施方案中，第二活性剂防止EGFR二聚体形成和/或能够抑制或降低EGFR活性。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

治疗方法

在一个方面，本文提供了一种治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的本文公开的化合物。在一个实施方案中，癌症选自由以下组成的组：肺癌、结肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌、甲状腺癌、神经胶质瘤、鳞状细胞癌和前列腺癌。在另一实施方案中，所述癌症为非小细胞肺癌(NSCLC)。

在另一方面，本文提供了一种抑制有需要的个体的激酶的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的本文提供的化合物。在一个实施方案中，激酶是EGFR。

在又另一个方面，本文提供了一种治疗或预防有需要的个体的激酶介导的病症的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的本公开的化合物。在一个实施方案中，激酶介导的病症对EGFR靶向疗法具有抗性。在另一个实施方案中，EGFR治疗的疗法选自由吉非替尼、厄洛替尼或奥希替尼组成的组。

在一些实施方案中，本公开的化合物能够调节(例如，抑制或降低)含有一个或多个突变的EGFR的活性。在一些实施方案中，突变EGFR含有一个或多个选自T790M、L718Q、L844V、V948R、L858R、I941R、C797S和Del的突变。在其他实施方案中，突变EGFR包含突变组合，其中所述组合选自Del/L718Q、Del/L844V、Del/T790M、Del/T790M/L718Q、Del/T790M/L844V、L858R/L718Q、L858R/L844V、L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、Del/T790M、Del/T790M/C797S、L858R/T790M/C797S和L858R/T790M/L718Q。在其他实施方案中，突变EGFR包含突变组合，其中所述组合选自Del/L844V、L858R/L844V、L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M。在其他实施方案中，突变EGFR包含突变组合，其中所述组合选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M。

在一些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合能够调节(例如，抑制或降低)含有一个或多个突变的EGFR的活性，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，突变EGFR含有一个或多个选自T790M、L718Q、L844V、V948R、L858R、I941R、C797S和Del的突变。在其他实施方案中，突变EGFR包含突变组合，其中所述组合选自Del/L718Q、Del/L844V、Del/T790M、Del/T790M/L718Q、Del/T790M/L844V、L858R/L718Q、L858R/L844V、L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、Del/T790M、Del/T790M/C797S、L858R/T790M/C797S和L858R/T790M/L718Q。在其他实施方案中，突变EGFR包含突变组合，其中所述组合选自Del/L844V、L858R/L844V、L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M。在其他实施方案中，突变EGFR包含突变组合，其中所述组合选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。

在一些实施方案中，本公开的化合物能够调节(例如，抑制或降低)含有一个或多个突变的EGFR的活性，但是不影响野生型EGFR的活性。

在其他实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合能够调节(例如，抑制或降低)含有一个或多个突变的EGFR的活性，但是不影响野生型EGFR的活性，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

调节含有一个或多个突变(例如本文所述的突变)的EGFR，但不调节野生型EGFR，提供了一种治疗、预防或改善疾病的方法，所述疾病包括但不限于癌症和转移、炎症、关节炎、系统性红斑狼疮、皮肤相关病症、肺部病症、心血管疾病、缺血、神经退行性病症、肝脏疾病、胃肠道病症、病毒和细菌感染、中枢神经系统病症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化症、脊髓损伤和周围神经病变。

在一些实施方案中，本公开的化合物对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR更大的抑制。在某些实施方案中，本公开的化合物对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或100倍的抑制。在各种实施方案中，本公开的化合物对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR 1000倍的抑制。在各种实施方案中，本公开的化合物对具有本文所述的突变组合(例如，L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M)的EGFR表现出相对于野生型EGFR多至10000倍的抑制。

在其他实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR更大的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或100倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在各种实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR多至1000倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在各种实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有本文所述的突变组合(例如，L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M)的EGFR表现出相对于野生型EGFR多至10000倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在一些实施方案中，本公开的化合物对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约2倍至约10倍的抑制。在各种实施方案中，本公开的化合物对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约10倍至约100倍的抑制。在各种实施方案中，本公开的化合物对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约100倍至约1000倍的抑制。在各种实施方案中，本公开的化合物对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约1000倍至约10000倍的抑制。

在其他实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约2倍至约10倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在其他实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约10倍至约100倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在其他实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约100倍至约1000倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在其他实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR表现出相对于野生型EGFR约1000倍至约10000倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在其他实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在某些实施方案中，本公开的化合物对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少2倍的抑制。在某些实施方案中，本公开的化合物对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少3倍的抑制。在某些实施方案中，本公开的化合物对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少5倍的抑制。在某些实施方案中，本公开的化合物对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少10倍的抑制。在某些实施方案中，本公开的化合物对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少25倍的抑制。在某些实施方案中，本公开的化合物对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少50倍的抑制。在某些实施方案中，本公开的化合物对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少100倍的抑制。

在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少2倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少3倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少5倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少10倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少25倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少50倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在某些实施方案中，本公开的化合物与第二活性剂的组合对具有选自L858R/T790M、L858R/T790M/I941R、L858R/T790M/C797S、Del/T790M、Del/T790M/C797S和L858R/T790M的突变组合的EGFR表现出相对于野生型EGFR至少100倍的抑制，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在一些实施方案中，EGFR活性的抑制通过IC₅₀测量。

在一些实施方案中，EGFR活性的抑制通过EC₅₀测量。

在一些实施方案中，本公开的化合物对EGFR的抑制可以通过生化测定来测量。通过说明性和非限制性实例，均相时间分辨荧光(HTRF)测定可用于使用本文公开的条件和实验参数确定EGFR活性的抑制。例如，HTRF测定可以使用约1μM的底物(例如，生物素-Lck-肽底物)浓度；约0.2nM至约40nM的EGFR(突变体或WT)浓度；和约0.000282μM至约50μM的抑制剂浓度。在这些条件下筛选的本公开的化合物可以例如表现出约1nM至>1μM；约1nM至约400nM；约1nM至约150nM；约1nM至约75nM；约1nM至约40nM；约1nM至约25nM；约1nM至约15nM；或约1nM至约10nM的IC₅₀值。在某些实施方案中，在上述条件下针对具有选自L858R/T790M、L858R和T790M的突变或突变组合的EGFR的抑制来筛选的本公开的化合物可以例如表现出约1nM至>1μM；约1nM至约400nM；约1nM至约150nM；约1nM至约75nM；约1nM至约40nM；约1nM至约25nM；约1nM至约15nM；或约1nM至约10nM的IC₅₀值。

在一些实施方案中，本公开的化合物与EGFR中的变构位点结合。在一些实施方案中，本公开的化合物与表皮生长因子受体(EGFR)的选自Lys745、Leu788和Ala 743的至少一个氨基酸残基相互作用。在其他实施方案中，本公开的化合物与表皮生长因子受体(EGFR)的选自Cys755、Leu777、Phe856和Asp855的至少一个氨基酸残基相互作用。在其他实施方案中，本公开的化合物与表皮生长因子受体(EGFR)的选自Met766、Ile759、Glu762和Ala763的至少一个氨基酸残基相互作用。在其他实施方案中，本公开的化合物与表皮生长因子受体(EGFR)的选自Lys745、Leu788和Ala 743的至少一个氨基酸残基；表皮生长因子受体(EGFR)的选自Cys755、Leu777、Phe856和Asp855的至少一个氨基酸残基；以及表皮生长因子受体(EGFR)的选自Met766、Ile759、Glu762和Ala763的至少一个氨基酸残基相互作用。在其他实施方案中，本公开的化合物不与表皮生长因子受体(EGFR)的选自Met793、Gly796和Cys797的任何氨基酸残基相互作用。

在一些实施方案中，本公开提供了一种包含变构激酶抑制剂的化合物，其中所述化合物是相对于野生型EGFR更有效的耐药性EGFR突变体的抑制剂。例如，所述化合物在抑制耐药性EGFR突变体的激酶活性方面的效力可以是相对于野生型EGFR至少约2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍。在一些实施方案中，耐药EGFR突变体对一种或多种已知EGFR抑制剂具有抗性，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼。

在一些实施方案中，耐药EGFR突变体包含致敏突变，例如Del和L858R。

在一些实施方案中，本公开提供了包含变构激酶抑制剂的化合物与第二活性剂的组合，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成，其中所述化合物是相对于野生型EGFR更有效的耐药性EGFR突变体的抑制剂。例如，化合物与第二活性剂的组合在抑制耐药性EGFR突变体的激酶活性方面的效力可以是相对于野生型EGFR至少约2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，耐药EGFR突变体对一种或多种已知EGFR抑制剂具有抗性，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼。在一些实施方案中，耐药EGFR突变体包含致敏突变，例如Del和L858R。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在一些实施方案中，本公开提供了一种包含变构激酶抑制剂的化合物，其中所述化合物以相对于具有致敏突变但不具有耐药性突变的EGFR突变体在效力方面小于10倍的差异(例如，通过IC₅₀测量)，抑制具有致敏突变(例如，Del和L858R)和耐药突变(例如，T790M、L718Q、C797S和L844V)的耐药EGFR突变体的激酶活性。在一些实施方案中，效力差异小于约9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍、3倍或2倍。

在其他实施方案中，本公开提供了包含变构激酶抑制剂的化合物与第二活性剂的组合，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成，其中所述化合物以相对于具有致敏突变但不具有耐药性突变的EGFR突变体在效力方面小于10倍的差异(例如，通过IC₅₀测量)，抑制具有致敏突变(例如，Del和L858R)和耐药突变(例如，T790M、L718Q、C797S和L844V)的耐药EGFR突变体的激酶活性。在一些实施方案中，效力差异小于约9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍、3倍或2倍。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在一些实施方案中，本公开提供了一种包含变构激酶抑制剂的化合物，其中在抑制含有如本文所述的一个或多个突变例如T790M、L718Q、L844V、L858R、C797S和Del的EGFR的活性方面，所述化合物比一种或多种已知EGFR抑制剂更有效，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼。例如，所述化合物在抑制含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR的活性方面的效力(例如，如通过IC₅₀测量)可以是吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼的至少约2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍。

在其他实施方案中，本公开提供了包含变构激酶抑制剂的化合物与第二活性剂的组合，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成，其中在抑制含有如本文所述的一个或多个突变例如T790M、L718Q、L844V、L858R、C797S和Del的EGFR的活性方面，所述化合物与第二活性剂的组合比一种或多种已知EGFR抑制剂更有效，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼。例如，所述化合物与第二活性剂的组合在抑制含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR的活性方面的效力(例如，如通过IC₅₀测量)可以是吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼的至少约2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在一些实施方案中，本公开提供了一种包含变构激酶抑制剂的化合物，其中所述化合物在抑制野生型EGFR的活性方面的效力低于一种或多种已知EGFR抑制剂，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼。例如，所述化合物在抑制野生型EGFR的活性方面的效力可以是吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼的至少约1/2倍、1/3倍、1/5倍、1/10倍、1/25倍、1/50倍或约1/100倍(例如，如通过IC₅₀测量)。

在其他实施方案中，本公开提供了包含变构激酶抑制剂的化合物与第二活性剂的组合，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成，其中化合物与第二活性剂的组合在抑制野生型EGFR的活性方面的效力低于一种或多种已知EGFR抑制剂，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼。例如，与第二活性剂组合的化合物在抑制野生型EGFR的活性方面的效力是吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、WZ4002、HKI-272、CL-387785和奥希替尼的至少约1/2倍、1/3倍、1/5倍、1/10倍、1/25倍、1/50倍或约1/100倍(例如，如通过IC₅₀测量)，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

抑制剂的效力可以通过EC₅₀值确定。如在基本相似的条件下测定，具有较低EC₅₀值的化合物相对于具有较高EC₅₀值的化合物是更有效的抑制剂。在一些实施方案中，基本相似的条件包括在体外或体内测定EGFR依赖性磷酸化水平(例如，在表达野生型EGFR、突变EGFR或其任何片段的3T3细胞中)。

抑制剂的效力也可以通过IC₅₀值来确定。如在基本相似的条件下测定，具有较低IC₅₀值的化合物相对于具有较高IC₅₀值的化合物是更有效的抑制剂。在一些实施方案中，基本相似的条件包括在体外或体内测定EGFR依赖性磷酸化水平(例如，在表达野生型EGFR、突变EGFR或其任何片段的3T3细胞中)。

EGFR致敏突变包括但不限于L858R、G719S、G719C、G719A、L861Q、外显子19中的缺失和/或外显子20中的插入。耐药性EGFR突变体可以具有但不限于包含T790M、T854A、L718Q、C797S或D761Y的耐药性突变。

野生型EGFR与含有如本文所述的一个或多个突变的EGFR之间的选择性也可以使用细胞增殖测定法来测量，其中细胞增殖取决于激酶活性。例如，可以使用以合适型式的野生型EGFR(例如VIII；含有WT EGFR激酶结构域)转染的鼠Ba/F3细胞，或以L858R/T790M、Del/T790M/L718Q、L858R/T790M/L718Q、L858R/T790M/C797S、Del/T790M/C797S、L858R/T790M/I941R或外显子19缺失/T790M转染的Ba/F3细胞。在一系列抑制剂浓度(10μM、3μM、1.1μM、330nM、110nM、33nM、11nM、3nM、1nM)下进行增殖测定并计算EC₅₀。

测量对EGFR活性的影响的另一种方法是测定EGFR磷酸化。可以将野生型或突变型(L858R/T790M、Del/T790M、Del/T790M/L718Q、L858R/T790M/C797S、Del/T790M/C797S、L858R/T790M/I941R或L858R/T790M/L718Q)EGFR转染到NIH-3T3细胞(其通常不表达内源性EGFR)中，并且可以测定抑制剂(使用上述浓度)抑制EGFR磷酸化的能力。将细胞暴露于浓度渐增的抑制剂6小时，并用EGF刺激10分钟。通过使用磷酸特异性(Y1068)EGFR抗体进行蛋白质印迹来分析对EGFR磷酸化的影响。

在另一个方面，本公开涉及与EGFR中的变构位点结合的化合物，其中所述化合物对含有如本文所述的一个或多个突变(例如，L858R/T790M、Del/T790M、Del/T790M/L718Q、L858R/T790M/C797S、Del/T790M/C797S、L858R/T790M/I941R或L858R/T790M/L718Q)的EGFR表现出相对于野生型EGFR于2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、100倍或1000倍抑制。

在其他实施方案中，本公开涉及与第二活性剂组合的结合至EGFR中的变构位点的化合物，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成，其中化合物与第二活性剂的组合对含有如本文所述的一个或多个突变(例如，L858R/T790M、Del/T790M、Del/T790M/L718Q、L858R/T790M/C797S、Del/T790M/C797S、L858R/T790M/I941R、或者L858R/T790M/L718Q)的EGFR表现出相对于野生型EGFR于2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍、100倍或1000倍抑制。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在又另一个方面，本公开提供一种抑制表皮生长因子受体(EGFR)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述方法还包括施用第二活性剂，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在另一个方面，本文提供了一种治疗或预防疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述疾病由激酶介导。在另外的实施方案中，激酶包含突变的半胱氨酸残基。在另外的实施方案中，突变的半胱氨酸残基位于EGFR中相当于Cys 797的位置中或附近，所述位置包括Jak3、Blk、Bmx、Btk、HER2(ErbB2)、HER4(ErbB4)、Itk、Tec和Txk中的此类位置。在一些实施方案中，所述方法还包括施用第二活性剂，其中所述第二活性剂防止激酶二聚体形成。在一些实施方案中，防止激酶二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在一些实施方案中，疾病由EGFR介导(例如，EGFR在疾病的起始或发展中起作用)。在一些实施方案中，疾病由Her-激酶介导。在另外的实施方案中，Her-激酶是HER1、HER2或HER4。

在某些实施方案中，疾病对已知EGFR抑制剂具有抗性，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼或奥希替尼。在某些实施方案中，进行诊断测试以确定疾病是否与EGFR中的活化突变相关。在某些实施方案中，进行诊断测试以确定疾病是否与携带活化突变和/或耐药性突变的EGFR相关。活化突变包括但不限于L858R、G719S、G719C、G719A、L718Q、L861Q、外显子19中的缺失和/或外显子20中的插入。耐药性EGFR突变体可以具有但不限于包含T790M、T854A、L718Q、C797S或D761Y的耐药性突变。诊断测试可包括测序、焦磷酸测序、PCR、RT-PCR或本领域技术人员已知可检测核苷酸序列的类似分析技术。

在某些实施方案中，所述疾病为癌症或增殖性疾病。

在另外的实施方案中，所述疾病是肺癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、皮肤癌、骨癌、胃癌(gastric cancer)、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝细胞癌、乳头状肾癌、头颈部鳞状细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或实体瘤。在另外的实施方案中，所述疾病是肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤、鳞状细胞癌或前列腺癌。在又另外的实施方案中，所述疾病是非小细胞肺癌。

在又另一个方面，本文提供一种治疗激酶介导的病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物是HER1、HER2或HER4的抑制剂。在其他实施方案中，向受试者施用另外的治疗剂。在其他实施方案中，化合物和另外的治疗剂同时或依次施用。

在另一个方面，本公开提供一种治疗激酶介导的病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐和第二活性剂，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，所述化合物是HER1、HER2或HER4的抑制剂。在其他实施方案中，向受试者施用另外的治疗剂。在其他实施方案中，化合物、防止EGFR二聚体形成的第二活性剂和另外的治疗剂同时或依次施用。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在其他实施方案中，疾病是癌症。在另外的实施方案中，所述癌症是肺癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝细胞癌、乳头状肾癌、头颈部鳞状细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或实体瘤。在另外的实施方案中，所述疾病是肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤、鳞状细胞癌或前列腺癌。在又另外的实施方案中，所述疾病是非小细胞肺癌。

在另一个方面，本文提供了一种治疗癌症的方法，其中所述癌细胞包含活化的EGFR，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一个方面，本文提供了一种治疗癌症的方法，其中所述癌细胞包含活化的EGFR，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐和第二活性剂，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

在某些实施方案中，EGFR活化选自EGFR突变、EGFR扩增、EGFR表达和配体介导的EGFR活化。

在另外的实施方案中，EGFR的突变选自G719S、G719C、G719A、L858R、L861Q、外显子19缺失突变和外显子20插入突变。

在又另一个方面，本文提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其中所述受试者被鉴定为需要EGFR抑制来治疗癌症，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，被鉴定为需要EGFR抑制的受试者对已知EGFR抑制剂具有抗性，所述已知EGFR抑制剂包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼或奥希替尼。在某些实施方案中，进行诊断测试以确定受试者是否具有EGFR中的活化突变。在某些实施方案中，进行诊断测试以确定受试者是否具有携带活化突变和/或耐药性突变的EGFR。活化突变包括但不限于L858R、G719S、G719C、G719A、L718Q、L861Q、外显子19中的缺失和/或外显子20中的插入。耐药性EGFR突变体可以具有但不限于包含T790M、T854A、L718Q、C797S或D761Y的耐药性突变。诊断测试可包括测序、焦磷酸测序、PCR、RT-PCR或本领域技术人员已知可检测核苷酸序列的类似分析技术。

在一个方面，本文提供了一种预防受试者对已知EGFR抑制剂(包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼或奥希替尼)产生抗性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一个方面，本文提供了一种预防疾病对已知EGFR抑制剂(包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼或奥希替尼)产生抗性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐和第二活性剂，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。

在本文公开的方法的一个实施方案中，受试者是人。

在另一个方面，本公开提供了本文公开的化合物或其药学上可接受的盐，用于制备用于治疗或预防EGFR起作用的疾病的药物。

在一个方面，本文提供一种治疗或预防选自由以下组成的组的病状的方法：自身免疫疾病、炎性疾病、增殖性和过度增殖性疾病、免疫介导的疾病、骨疾病、代谢疾病、神经和神经退行性疾病、心血管疾病、激素相关疾病、过敏、哮喘和阿尔茨海默病。在其他实施方案中，所述病状选自增殖性病症和神经退行性病症。

本公开的一个方面提供了可用于治疗以过度或异常细胞增殖为特征的疾病、病症和病状的化合物。此类疾病包括但不限于增殖性或过度增殖性疾病以及神经退行性疾病。增殖性和过度增殖性疾病的实例包括但不限于癌症。术语“癌症”包括但不限于以下癌症：乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、结肠直肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、骨髓病症、淋巴样病症、霍奇金氏病、毛细胞癌、口腔癌和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌、慢性髓性白血病(CML)和白血病。术语“癌症”包括但不限于以下癌症：骨髓瘤、淋巴瘤或选自胃癌、肾癌、头颈癌、口咽癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、子宫内膜癌、肝癌、非霍奇金淋巴瘤和肺癌的癌症。

术语“癌症”是指由恶性肿瘤细胞增殖引起的任何癌症，例如肿瘤、赘生物、癌瘤、肉瘤、白血病、淋巴瘤等。例如，癌症包括但不限于间皮瘤、白血病和淋巴瘤，例如皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、非皮肤外周T细胞淋巴瘤、与人T细胞淋巴营养病毒(HTLV)相关的淋巴瘤例如成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、B细胞淋巴瘤、急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、成人T细胞白血病淋巴瘤、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)或肝细胞癌。另外的实例包括骨髓增生异常综合征，儿童实体瘤诸如脑瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、Wilms瘤、骨肿瘤和软组织肉瘤，成人常见实体瘤诸如头颈癌(例如口腔癌、喉癌、鼻咽癌和食道癌)、泌尿生殖系统癌(例如前列腺癌、膀胱癌、肾癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌)、肺癌(例如小细胞癌和非小细胞癌)、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤和其他皮肤癌、胃癌、脑肿瘤、与Gorlin综合征相关的肿瘤(例如髓母细胞瘤、脑膜瘤等)和肝癌。可以通过主题化合物治疗的其他示例性形式的癌症包括但不限于骨骼肌或平滑肌癌症、胃癌、小肠癌、直肠癌、唾液腺癌、子宫内膜癌、肾上腺癌、肛门癌、直肠癌、甲状旁腺癌和垂体癌。

本文所述的化合物可用于预防、治疗和研究的其他癌症是例如结肠癌、家族性腺瘤性息肉病癌和遗传性非息肉病性结肠直肠癌或黑色素瘤。此外，癌症包括但不限于唇癌、喉癌、下咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺癌(甲状腺髓样癌和甲状腺乳头状癌)、肾癌、肾实质癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑色素瘤、脑肿瘤诸如胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、髓母细胞瘤和周围神经外胚层肿瘤、胆囊癌、支气管癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、畸胎瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、颅咽管瘤(craniopharyngeoma)、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、尤文肉瘤和浆细胞瘤。在本公开的一个方面，本公开提供了一种或多种本公开的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症包括但不限于本文公开的各种类型的癌症。

在一些实施方案中，本公开的化合物可用于治疗癌症，例如结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌和肺癌；和骨髓增殖性病症，诸如真性红细胞增多症、血小板增多症、髓样化生伴骨髓纤维化、慢性髓细胞性白血病、慢性粒单核细胞白血病、高嗜酸细胞综合征、幼年型粒单核细胞白血病和系统性肥大细胞病。在一些实施方案中，本公开的化合物可用于治疗造血病症，特别是急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、急性早幼粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病(ALL)。

如本文所提供的术语“癌细胞”包括受任一种上文确定的病状折磨的细胞。

本公开进一步提供了一种用于治疗或预防细胞增殖性病症例如增生、发育异常和癌前病变的方法。发育异常是病理学家在活检物中可识别的最早形式的癌前病变。可以施用主题化合物以防止所述增生、发育异常或癌前病变继续扩大或变成癌。癌前病变的实例可能发生在皮肤、食道组织、乳房和宫颈上皮内组织中。

神经退行性疾病的实例包括但不限于肾上腺脑白质营养不良(ALD)、亚历山大病(Alexander's disease)、阿尔珀病(Alper's disease)、阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症(Lou Gehrig病)、共济失调毛细血管扩张症、巴顿病(Batten disease)(也称为Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten病)、牛海绵状脑病(BSE)、Canavan病、Cockayne综合征、皮质基底节变性、Creutzfeldt-Jakob病、家族性致死性失眠、额颞叶变性、亨廷顿病(Huntington's disease)、HIV相关性痴呆、肯尼迪病(Kennedy's disease)、Krabbe病、路易体痴呆、神经疏螺旋体病(neuroborreliosis)、Machado-Joseph病(脊髓小脑性共济失调3型)、多系统萎缩、多发性硬化症、嗜睡症、尼曼皮克病(Niemann Pick disease)、帕金森病(Parkinson's disease)、Pelizaeus-Merzbacher病、皮克病(Pick's disease)、原发性侧索硬化症、朊病毒病、进行性核上性麻痹、Refsum病、Sandhoff病、Schilder病、恶性贫血继发性脊髓亚急性联合变性、Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten病(也称为Batten病)、脊髓小脑共济失调(具有不同特征的多种类型)、脊髓性肌萎缩症、Steele-Richardson-Olszewski病、脊髓痨和中毒性脑病。

本公开的另一方面提供了一种用于治疗选自增殖性或过度增殖性疾病或神经退行性疾病的疾病或减轻其严重性的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的化合物或包含化合物的药学上可接受的组合物。在其他实施方案中，所述方法还包括施用第二活性剂，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

本公开的化合物和组合物作为EGFR激酶抑制剂的活性可以在体外、体内或在细胞系中测定。体外测定包括确定活化激酶的激酶活性或ATP酶活性的抑制的测定。替代性体外测定对抑制剂结合蛋白激酶的能力进行定量，并且可以通过在结合前放射性标记抑制剂、分离抑制剂/激酶络合物并确定结合的放射性标记的量或通过运行竞争实验来测量，在所述竞争实验中将新的抑制剂与结合至已知放射性配体的激酶一起孵育。用于测定在本公开中用作各种激酶抑制剂的化合物的详细条件在以下实施例中阐述。

根据前述内容，本公开进一步提供了一种用于预防或治疗需要此类治疗的受试者的任何上述疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐和任选的第二活性剂，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。对于上述任何用途，所需剂量将根据施用方式、待治疗的特定病状和所需效果而变化。

在其他实施方案中，化合物和防止EGFR二聚体形成的第二活性剂同时或依次施用。

施用/剂量/制剂

用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微型乳液、溶液、悬浮液、糖浆剂以及酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂；增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯以及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包含佐剂，诸如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、调味剂以及芳香剂。

可注射制剂(例如无菌可注射水性或油性悬浮液)可根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂还可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如如1,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受媒介物和溶剂是水、林格氏溶液(U.S.P.)以及等渗氯化钠溶液。此外，通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为了这个目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，诸如油酸的脂肪酸用于制备可注射制剂。

为了延长药物的作用，经常需要使皮下或肌肉内注射的药物的吸收减缓。这可通过使用水溶性差的结晶或非晶物质的液体悬浮液来达成。药物的吸收速率则取决于它的溶解速率，所述溶解速率又可取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将药物溶解或悬浮于油媒介物中来完成肠胃外施用的药物形式的延迟吸收。

用于直肠或阴道施用的组合物优选地为栓剂，其可通过将本公开的化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，所述栓剂在室温下为固体但在体温下为液体并因此在直肠或阴道腔中融化并释放活性组分。

在使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中也可使用类似类型的固体组合物作为填充剂。

活性化合物还可为具有如上所述的一种或多种赋形剂的微包封形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可制备成具有包衣和壳，诸如肠溶包衣、控释包衣和药物配制领域中熟知的其他包衣。在此类固体剂型中，活性化合物可以混合有至少一种惰性稀释剂诸如蔗糖、乳糖或淀粉。按照惯例，此类剂型还可包含除惰性稀释剂之外的另外的物质，例如压片润滑剂以及其他压片助剂诸如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。

用于本公开化合物的局部或经皮施用的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和可能需要的任何所需防腐剂或缓冲剂混合。眼用制剂、滴耳剂、眼用软膏剂、粉剂和溶液也涵盖在本公开的范围内。

除本公开的活性化合物之外，所述软膏、糊剂、乳膏和凝胶也可包含赋形剂，诸如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石以及氧化锌、或其混合物。

除本公开的化合物之外，粉剂和喷雾剂可以包含赋形剂诸如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙以及聚酰胺粉末、或这些物质的混合物。喷雾剂可另外含有常用的推进剂，例如氯氟烃。

经皮贴剂具有向身体提供受控的化合物递送的附加优点。此类剂型可通过将化合物溶解或分配于适当的介质中来制备。还可使用吸收增强剂来增加化合物穿过皮肤的通量。可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。

根据本公开的治疗方法，在例如人或其他动物的受试者中，通过以达到预期结果所需的量和时间向受试者施用治疗有效量的本公开化合物来治疗或预防病症。如本文所用，术语本公开的化合物的“治疗有效量”意指化合物的足以减轻受试者的病症症状的量。如医学领域所熟知的，本公开的化合物的治疗有效量将在适于任何医学治疗的合理效益风险比下。

通常，本公开的化合物将通过本领域已知的任何常用和可接受的方式以治疗有效量，单独或与一种或多种治疗剂组合施用。治疗有效量可根据疾病的严重性、受试者的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其他因素而广泛变化。一般而言，指示令人满意的结果以约0.03至2.5mg/kg体重的日剂量全身性地获得。在较大哺乳动物例如人中，指示的日剂量在约0.5mg至约100mg的范围内，方便地例如以每天最多四次的分剂量或以延迟形式施用。用于口服施用的合适单位剂型包含约1至50mg活性成分。

在某些实施方案中，本公开的化合物的治疗量或剂量可以在约0.1mg/Kg至约500mg/Kg或者约1至约50mg/Kg范围内。通常，根据本公开的治疗方案包括每天以单剂量或多剂量向需要这种治疗的患者施用约10mg至约1000mg的本公开的化合物。治疗量或剂量也将根据施用途径以及与其他剂共同使用的可能性而变化。

在受试者的病状改善后，如果需要，可以施用本公开的化合物、组合物或组合的维持剂量。随后，可以根据症状将施用剂量或频率或两者降低至保持病状改善的水平；当症状减轻到理想水平时，应停止治疗。然而，在疾病症状出现任何复发时，受试者可能需要长期的间歇性治疗。

然而，应理解将由主治医师在可靠的医学判断范围内决定本公开化合物和组合物的总每日用法。对于任何具体受试者，特定的抑制剂量将取决于多种因素，包括正在治疗的病症和所述病症的严重性；采用的特定化合物的活性；采用的特定组合物；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间、施用途径及采用的特定化合物的排泄速率；治疗持续时间；与采用的特定化合物组合或同时使用的药物；及医药领域熟知的类似因素。

本公开还提供一种药物组合，例如试剂盒，其包含a)第一剂，所述第一剂是本文公开的本公开的化合物，呈游离形式或药学上可接受的盐形式，和b)至少一种助剂。所述试剂盒可以包含其施用说明书。

在某些实施方案中，这些组合物任选地进一步包含一种或多种其他治疗剂。例如，防止EGFR二聚体形成的剂、化学治疗剂或其他抗增殖剂可以与本公开的化合物组合以治疗增殖性疾病和癌症。

可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白，例如人血清白蛋白；缓冲物质，例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物；水；盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白；磷酸氢二钠；磷酸氢钾；氯化钠；锌盐；胶体二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物；羊毛脂；糖类，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油类，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，例如丙二醇或聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；和磷酸盐缓冲溶液。此外，根据配方师的判断，组合物中还可以存在诸如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁的无毒相容性润滑剂，以及着色剂、脱模剂、涂层剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。蛋白激酶抑制剂或其药用盐可配制成药物组合物以施用于动物或人。包含有效治疗或预防蛋白激酶介导的病状的量的蛋白质抑制剂和药学上可接受的载体的这些药物组合物是本公开的其他实施方案。

试剂盒

在一个方面，本文提供了一种试剂盒，其包含能够抑制激酶活性的化合物以及用于治疗癌症的说明书，所述化合物选自本文公开的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，所述试剂盒还包含用于进行测试以确定受试者是否具有EGFR的活化突变和/或耐药性突变的组分。

在另一个方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含能够抑制EGFR活性的化合物，所述化合物选自本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一个方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含能够抑制激酶活性的化合物，所述化合物选自本文公开的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐；第二活性剂，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成；和用于治疗癌症的说明书。在某些实施方案中，所述试剂盒还包含用于进行测试以确定受试者是否具有EGFR的活化突变和/或耐药性突变的组分。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。

在另一个方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含能够抑制EGFR活性的化合物和第二活性剂，所述化合物选自本文公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述第二活性剂防止EGFR二聚体形成。在一些实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是抗体。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或帕尼单抗。在另外的实施方案中，防止EGFR二聚体形成的第二活性剂是西妥昔单抗。在一个实施方案中，第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。在另一个实施方案中，ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼。

本公开通过以下实施例和合成方案进一步说明，所述实施例和合成方案不应被解释为将本公开的范围或精神限制于本文所述的具体程序。应当理解，提供这些实施例是为了说明某些实施方案，并且不意图由此限制本公开的范围。还应当理解，可能必须采用本领域技术人员可以想到的各种其他实施方案、修改以及等效方案而不背离本发明的精神和/或所附权利要求的范围。

实施例

通过以下实施例进一步说明本发明，所述实施例决不应当被解释为进一步的限制。除非另有说明，否则本公开的实践将采用本领域技术范围内的有机合成、细胞生物学、细胞培养和分子生物学的常规技术。

缩写

AcOH 乙酸

ACN 乙腈

DCM 二氯甲烷

DIEA 二异丙基乙胺

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

Et₂O 乙醚

EtOAc 乙酸乙酯；

HATU (1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐

MeOH 甲醇

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

实施例1：制备2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2, 4]-三嗪-3(4H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；盐酸盐(001)

方案1.

2-(6-溴-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-3(4H)-基)-2-苯乙酸甲酯

将6-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮(321mg,1.5mmol)、2-溴-2-苯乙酸甲酯(378mg,1.65mmol)、Cs₂CO₃(975mg,3.0mmol)和DMF(3mL)的混合物在50℃下搅拌1.5h。添加另一份2-溴-2-苯乙酸甲酯(147mg，0.65mmol)并将反应混合物再加热1小时。冷却后，将反应混合物倒入饱和盐水(10mL)中并用EtOAc(2x20mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过正相快速色谱法(0-75％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(445mg,82％)。

2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-3(4H)- 基)-2-苯乙酸

在N₂下，将密封小瓶中的2-(6-溴-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-3(4H)-基)-2-苯基乙酸甲酯(100mg,0.0.28mmol)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基)哌啶(92mg,0.3mmol)、Na₂CO₃(89mg,0.84mmol)、Pd(dppf)Cl₂-DCM(46mg,0.056mmol)于二噁烷(1.5mL)和H₂O(0.5mL)中的混合物加热至95℃持续16h。使混合物冷却，通过注射式过滤器过滤，并通过反相HPLC，用0-80％ACN/H₂O(0.038％TFA改性剂)洗脱来纯化，得到标题化合物(125mg，78％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)d 9.40(br s,1H)8.17(d,1H)7.82(s,1H)7.74(d,2H)7.51(m,2H)7.46(m,3H)7.43(d,1H)7.26(d,2H)6.46(s,1H)3.53(d,2H)3.08(m,2H)2.83(d,3H)2.81(m,1H)2.03(d,2H)1.84(m,2H)。

2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-3(4H)- 基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；盐酸盐(001)

将2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-3(4H)-基)-2-苯乙酸(60mg,0.14mmol)、2-氨基噻唑(20mg,0.20mmol)、HATU(103mg,0.27mmol)、DIEA(71μL,0.41mmol)于DMF(2mL)中的混合物在50℃下搅拌1.5h。冷却后，将反应混合物通过反相HPLC，用0-80％ACN/H₂O(0.038％TFA改性剂)洗脱来纯化。将粗产物通过硅胶色谱法(DCM中的0-10％7N甲醇NH₃)进一步纯化。将残余物溶解在MeOH(5mL)中，用4NHCl/二噁烷(0.5mL)处理并在减压下浓缩。将残余物用Et₂O研磨，过滤并干燥，得到标题化合物(57mg,79％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)d 9.33(br s,1H)8.19(d,1H)7.75(d,2H)7.57(s,1H)7.51(m,4H)7.44(m,3H)7.33(d,1H)7.26(d,1H)6.81(s,1H)3.53(d,2H)3.08(m,2H)2.84(d,3H)2.81(m,1H)2.03(m,2H)1.83(m,2H)。

以下实施例通过与实施例1类似的方法由2-溴-2-苯乙酸甲酯和相应的双环起始材料制备：

实施例2：制备3-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(苯基)甲基)-6-(4-(1-甲基哌啶-4- 基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮；盐酸盐(002)

方案2.

N-(2-氨基苯基)-2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代吡咯并[2,1-f][1, 2,4]-三嗪-3(4H)-基)-2-苯乙酰胺

将2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-3(4H)-基)-2-苯乙酸(60mg,0.14mmol)、苯-1,2-二胺(75mg,0.69mmol)、HATU(174mg,0.46mmol)、DIEA(120mL,0.69mmol)于DMF(3mL)中的混合物在50℃下搅拌1h。冷却后，将混合物通过反相HPLC，用0-80％ACN/H₂O(0.038％TFA改性剂)洗脱来纯化，得到标题化合物(80mg，65％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)d 9.97(s,1H)9.32(br s,1H)8.17(d,1H)7.75(d,2H)7.63(s,1H)7.53(m,4H)7.48(m,1H)7.46(d,1H)7.26(d,2H)7.23(dd,1H)6.98(m,1H)6.82(s,1H)6.78(dd,1H)6.61(m,1H)3.53(d,2H)3.08(m,2H)2.83(d,3H)2.81(m,1H)2.03(d,2H)1.83(m,2H)。

3-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(苯基)甲基)-6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)吡咯并 [2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮；盐酸盐(002)

将N-(2-氨基苯基)-2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-3(4H)-基)-2-苯乙酰胺(80mg,0.15mmol)和AcOH(3mL)的溶液加热至100℃持续1h。在减压下除去过量AcOH。将残余物溶解在EtOAc(5mL)中并用1N NaOH(5mL)、水(5mL)和饱和盐水(5mL)洗涤。然后将有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物用硅胶色谱法(0-5％7N甲醇NH₃/DCM)纯化并将产物溶解在MeOH(5mL)中，用4N HCl的二噁烷溶液(1mL)处理并加压浓缩。将所得固体与Et₂O一起研磨，过滤并干燥，得到标题化合物(19mg，25％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)d 10.09(br s,1H)8.21(d,1H)8.08(s,1H)7.75(d,2H)7.64(m,2H)7.51(s,1H)7.48(m,4H)7.44(m,2H)7.30(m,2H)7.26(d,2H)3.50(d,2H)3.06(m,2H)2.80(m,1H)2.79(d,3H)1.96(m,4H)。

以下实施例通过与实施例2类似的方法由2-溴-2-苯乙酸甲酯和相应的双环起始材料制备：

实施例3：制备2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代噻吩并[3,2-d]嘧啶-3 (4H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(003)

方案3.

2-(6-溴-4-氧代噻吩并[3,2-d]嘧啶-3(4H)-基)-2-苯乙酸甲酯

将6-溴噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(250mg,1.08mmol)、2-溴-2-苯乙酸甲酯(296mg,1.29mmol)和Cs₂CO₃(543mg,1.5mmol)于DMF(3mL)中的混合物在50℃下搅拌2h。冷却后，将反应混合物倒入饱和盐水(约30mL)中并用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过硅胶色谱法，洗脱(0-50％EtOAc/己烷)来纯化，得到标题化合物(250mg,61％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)d 8.47(s,1H)8.37(s,1H)7.52(m,2H)7.45(m,3H)6.64(s,1H)3.77(s,3H)。

2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代噻吩并[3,2-d]嘧啶-3(4H)-基)-2-苯乙酸甲酯

在N₂下，将密封小瓶中的2-(6-溴-4-氧代噻吩并[3,2-d]嘧啶-3(4H)-基)-2-苯乙酸甲酯(250mg,0.83mmol)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)-哌啶(275mg,0.91mmol)、Pd(dppf)Cl₂-DCM(68mg,0.083mmol)和Na₂CO₃(264mg,2.89mmol)于二噁烷(3.0mL)和水(1.0mL)中的混合物在100℃下加热1h。冷却后，将反应混合物通过注射式过滤器过滤，并通过反相HPLC，用0-80％ACN/H₂O(0.038％TFA改性剂)洗脱来纯化，得到标题化合物(65mg，16％)。

2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代噻吩并[3,2-d]嘧啶-3(4H)-基)-2-苯乙酸

将2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代噻吩并[3,2-d]嘧啶-3(4H)-基)-2-苯基乙酸甲酯(65mg，0.14mmol)、LiOH-H₂O(24mg，0.72mmol)、THF(1.0mL)、MeOH(1mL)和水(1mL)的混合物搅拌60分钟。在减压下除去溶剂并将残余物溶解在水(5mL)中。将溶液的pH用1.5N HCl调节至pH 5(pH试纸)。将沉淀物与水(2x5mL)一起研磨，过滤并在60℃、高真空下干燥过夜，得到标题化合物(64mg，定量)，其无需进一步纯化即用于后续步骤。

2-(6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-4-氧代噻吩并[3,2-d]嘧啶-3(4H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(003)

该化合物以与化合物001类似的方式由上述酸制备，并通过反相HPLC，用0-80％ACN/H₂O(0.038％TFA改性剂)洗脱来纯化，得到标题化合物(43mg,94％)。

实施例4：5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-羟基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮；盐酸盐(012)

方案4

步骤1. 2-(2-溴-4-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基)-2-(5-氟-2-甲氧基-苯基)乙酸甲酯

在0℃下，向2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(0.300g,1.29mmol)于THF(6mL)中的溶液中添加氢化钠(0.077g，1.93mmol，在矿物油中，60％)。在同一温度下搅拌0.5h后，将2-溴-2-(5-氟-2-甲氧基苯基)-乙酸甲酯(0.714g,2.58mmol)于THF(4mL)中的溶液逐滴添加到反应混合物中。在室温下搅拌2h后，将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物(0.552g,定量)。MS m/z:428.0[M+1]⁺。

步驟2. 2-(2-溴-4-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基)-2-(5-氟-2-甲氧基-苯基)乙酸

向2-(2-溴-4-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基)-2-(5-氟-2-甲氧基-苯基)乙酸甲酯(0.552g,1.28mmol)于THF/水(20mL,1/1)中的溶液中添加氢氧化锂(0.092g,3.84mmol)。在室温下搅拌1h后，在减压下除去溶剂，将所得残余物用HCl(1M)调节至pH 3。通过过滤收集所得固体并将其用水洗涤，得到标题化合物(0.45g,85％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ:7.35(s,1H),7.16-7.25(m,1H),7.06-7.14(m,1H),6.97-7.05(m,1H),6.17(s,1H),3.76(s,3H),3.61-3.70(m,1H),3.25-3.27(m,1H),2.77-3.05(m,2H)；MS m/z:414.1[M+1]⁺。

步骤3.5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-甲氧基-苯基)甲基]-2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮

向2-(2-溴-4-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基)-2-(5-氟-2-甲氧基-苯基)乙酸(0.450g,1.08mmol)、1,2-二氨基苯(0.174g,1.61mmol)和HATU(0.612g,1.61mmol)于DMF(8mL)中的溶液中添加DIPEA(0.562mL,3.23mmol)。在室温下搅拌1h后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤两次。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到酰胺中间体，其无需进一步纯化即用于下一步反应。MS m/z:504.0[M+1]⁺。

向上述酰胺中间体中添加乙酸(10mL)。在80℃下搅拌1h后，在减压下除去溶剂。将粗产物通过C18柱色谱，用含有10mM乙酸铵的0-100％ACN/水洗脱来纯化，得到标题化合物(0.4g,77％)。¹HNMR(DMSO-d₆)δ:12.59(br s,1H),7.40-7.69(m,2H),7.35(s,1H),7.07-7.28(m,5H),6.77-6.89(m,1H),3.64-3.81(m,4H),3.37-3.43(m,1H),2.85-3.12(m,2H)；MSm/z:486.1[M+1]⁺。

步骤4. 5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-甲氧基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4- 哌啶基)苯基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮

在氮气下，将5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-甲氧基-苯基)甲基]-2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮(0.200g,0.411mmol)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)哌啶(0.148g,0.493mmol)、Pd(dppf)Cl₂(0.030g,0.041mmol)和碳酸钠(0.130g,1.23mmol)于二噁烷/水(9:1,6mL)中的混合物在100℃下加热2h。冷却后，将反应混合物过滤，将滤液浓缩并通过硅胶快速色谱，用0-15％甲醇/二氯甲烷洗脱来纯化，得到标题化合物(0.2g,84％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.56(s,1H),7.56-7.64(m,4H),7.41-7.49(m,1H),7.10-7.31(m,7H),6.83-6.90(m,1H),3.66-3.82(m,4H),3.40-3.46(m,1H),2.90-3.17(m,4H),2.52-2.56(m,1H),2.30(s,3H),2.04-2.21(m,2H),1.64-1.81(m,4H)。MS m/z:581.5[M+1]⁺。

步驟5. 5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-羟基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮；盐酸盐

在0℃下，向5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-甲氧基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮(0.200g,0.344mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三溴化硼(0.859g,3.43mmol)。在室温下搅拌2h后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并倒入冰水中。将水相用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过反相HPLC，用0-100％ACN/水(0.05％HCl改性剂)洗脱来纯化，得到标题化合物(0.107g,55％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.06-10.82(m,2H),7.69-7.78(m,2H),7.60-7.67(m,3H),7.39-7.53(m,2H),7.29(d,2H),6.96-7.20(m,4H),3.76-3.87(m,1H),3.49-3.62(m,3H),2.94-3.20(m,4H),2.68-2.88(m,4H),1.91-2.08(m,4H)；MS m/z:567.5[M+1]⁺。

以下实施例通过与实施例4类似的方法由2-溴-2-(5-氟-2-甲氧基苯基)乙酸甲酯和相应的双环起始材料制备：

实施例5：制备6-[(R)-1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-羟基-苯基)甲基]-2-[4-(1- 甲基-4-哌啶基)苯基]噻吩并[2,3-c]吡啶-7-酮和6-[(S)-1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-羟基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]噻吩并[2,3-c]吡啶-7-酮(015和016)

在40℃下，将6-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-羟基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]噻吩并[2,3-c]吡啶-7-酮；盐酸盐(009,0.300g,0.470mmol)通过制备SFC，使用Chiral Technologies Chiralpak IA(5微米250x10mm)管柱，在10MPa下用50％(MeOH中的0.3％TEA)/50％CO₂洗脱来纯化，以便分离对映异构体。每个分离的对映异构体的手性中心的绝对构型是未知的。第一洗脱峰(015)(93mg,35％产率，99.6:0.4er)；[α]²⁰ _D+58.2(c＝0.91,MeOH)；¹H NMR(DMSO-d₆)δ:12.79(br s,1H),10.01(br s,1H),7.70-7.80(m,3H),7.65(s,1H),7.46-7.61(m,2H),7.32-7.40(m,3H),7.16-7.25(m,2H),7.05-7.14(m,1H),6.85-6.93(m,1H),6.75(d,1H),6.59-6.68(m,1H),2.87(d,2H),2.43-2.48(m,1H),2.20(s,3H),1.90-2.04(m,2H),1.62-1.78(m,4H)；MS m/z:565.2[M+1]⁺。第二洗脱峰(016)(95mg,36％产率，99.4:0.6er)；[α]²⁰ _D-52.5(c＝0.92,MeOH)；¹H NMR(DMSO-d₆)δ:12.79(br s,1H),10.02(br s,1H),7.70-7.78(m,3H),7.65(s,1H),7.44-7.60(m,2H),7.33-7.40(m,3H),7.15-7.24(m,2H),7.06-7.13(m,1H),6.86-6.93(m,1H),6.75(d,1H),6.59-6.69(m,1H),2.87(d,2H),2.41-2.47(m,1H),2.20(s,3H),1.92-2.03(m,2H),1.60-1.79(m,4H)；MS m/z:565.2[M+1]⁺。

实施例6：5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-羟基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-4-酮；盐酸盐(013)

方案5

步骤1. 2-溴-4-氟-1-(甲氧基甲氧基)苯

在0℃下，向2-溴-4-氟苯酚(100g,523mmol)于THF(1L)中的溶液中添加氢化钠(23.0g，575mmol，在矿物油中，60％)持续4h，然后添加甲氧基甲基氯(44.9mL，601mmol)。在室温下搅拌10h后，将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱，用石油醚中的1-10％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到标题化合物(80g,65％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.30(dd,1H),7.12(dd,1H),6.97(m,1H),5.07-5.24(m,2H),3.46-3.62(m,3H)。

步骤2. 2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-氧代-乙酸乙酯

在-78℃下向2-溴-4-氟-1-(甲氧基甲氧基)苯(80.0g,340mmol)于THF(1L)中的溶液中逐滴添加正丁基锂(在己烷中，2.5M，142mL，357mmol)。在-78℃下搅拌1h后，将反应混合物插管至草酸二乙酯(74.4g，510mmol)在THF(500mL)中的预冷却(-78℃)溶液中。在完成添加之后，使反应混合物升温至室温。将反应混合物用水淬灭且用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱，用石油醚中的10％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到标题化合物(70g,80％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.57(dd,1H),7.26-7.31(m,1H),7.18-7.23(m,1H),5.15(s,2H),4.37-4.43(m,2H),3.46-3.50(m,3H),1.35-1.41(m,3H)。

步骤3. 2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-羟基亚胺基-乙酸乙酯

向盐酸羟胺(37.9g,546mmol)于乙醇(500mL)中的溶液中添加2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-氧代-乙酸乙酯(70.0g,273mmol)和乙酸钠(44.7g,132mmol)。在80℃下搅拌2.5h后，在减压下除去溶剂并将所得残余物在水与二氯甲烷之间分配。将水相再用二氯甲烷萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物(68g,92％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.76(br s,1H),7.17-7.23(m,1H),7.07-7.14(m,2H),5.10(s,2H),4.31-4.39(m,2H),3.44-3.48(m,3H),1.35-1.40(m,3H)。

步骤4. 2-氨基-2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]乙酸乙酯

向雷尼镍(1.46g,25.0mmol)于EtOH/THF(650mL，4/1)中的溶液中添加2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-羟基亚胺基-乙酸乙酯(34.0g,125mmol)。将烧瓶抽空并用氢气回填，并将反应混合物在氢气气氛(50psi)下在70℃搅拌24h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将所述硅藻土垫用乙醇洗涤数次。在减压下浓缩滤液并将其通过硅胶色谱法，用石油醚中的33％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到标题化合物(30.6g，48％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:7.23(dd,1H),7.04-7.08(m,2H),5.14-5.18(m,2H),4.66(s,1H),3.92-4.12(m,2H),3.37(s,3H),1.06-1.22(m,3H)。

步骤5. 5-溴-2-[[[2-乙氧基-1-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-氧代-乙基] 氨基]甲基]噻吩-3-羧酸甲酯

向2-氨基-2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]乙酸乙酯(0.409g,1.59mmol)和5-溴-2-(溴甲基)噻吩-3-羧酸甲酯(0.500g,1.59mmol)于DMF(15mL)中的溶液中添加DIPEA(0.789mL,4.77mmol)。将反应混合物在80℃下加热3h。将反应混合物冷却至室温后，将其倒入水中并且用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法，用石油醚中的0-25％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到标题化合物(0.32g,41％)；MS m/z:491.8[M+1]

步骤6. 2-(2-溴-4-氧代-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)-2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)-苯基]乙酸乙酯

向5-溴-2-[[[2-乙氧基-1-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-2-氧代-乙基]氨基]甲基]噻吩-3-羧酸甲酯(0.610g,1.24mmol)于甲苯(20mL)中的溶液中添加甲苯中的三甲基铝(2M,1.86mL,3.72mmol)。将反应混合物在110℃下加热4h。将反应混合物冷却至室温后，将其倒入饱和氯化铵溶液中并且用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法，用石油醚中的1-10％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到标题化合物(0.13g,23％)。MS m/z:458.0[M+1]⁺。

步驟7. 2-(2-溴-4-氧代-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)-2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)-苯基]乙酸

向2-(2-溴-4-氧代-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)-2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]乙酸乙酯(0.130g,0.283mmol)于THF/水(8mL,1/1)中的溶液添中加氢氧化锂(0.021g,0.849mmol)。在室温下搅拌2h后，在减压下除去溶剂，将所得残余物用HCl(1M)调节至pH 4。通过过滤收集所得固体，将其用水洗涤，以得到标题化合物(0.09g,74％)。MS m/z:429.9[M+1]⁺。

步骤8. 5-[1H-苯并咪唑-2-基-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]甲基]-2-溴-6H- 噻吩并[2,3-c]吡咯-4-酮

向2-(2-溴-4-氧代-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5-基)-2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]乙酸(0.090g,0.209mmol)、1,2-二氨基苯(0.027g,0.250mmol)和HATU(0.103g,0.271mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(0.103mL,0.627mmol)。在室温下搅拌4h后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤两次。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到酰胺中间体，其无需进一步纯化即用于下一步反应。MS m/z:519.9[M+1]⁺。

向上述酰胺中间体中添加乙酸(8mL)。在80℃下搅拌1h后，在减压下除去溶剂。将粗产物通过C18柱色谱，用含有10mM乙酸铵的0-100％ACN/水洗脱来纯化，得到标题化合物(0.07g,73％)。MS m/z:502.0[M+1]⁺。

步骤9. 5-[1H-苯并咪唑-2-基-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]甲基]-2-[4-(1- 甲基-4-哌啶基)苯基]-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-4-酮

在氮气下，将5-[1H-苯并咪唑-2-基-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]甲基]-2-溴-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-4-酮(0.070g,0.139mmol)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)哌啶(0.050g,0.166mmol)、Pd(dppf)Cl₂(0.010g,0.014mmol)和碳酸钠(0.046g,0.416mmol)于二噁烷/水(4:1,3mL)中的混合物在100℃下加热4h。冷却后，将反应混合物过滤，将滤液浓缩并通过硅胶快速色谱，用1-10％甲醇/二氯甲烷洗脱来纯化，得到标题化合物(0.05g,60％)。MS m/z:597.2[M+1]⁺。

步驟10. 5-[1H-苯并咪唑-2-基-(5-氟-2-羟基-苯基)甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-4-酮；盐酸盐

将5-[1H-苯并咪唑-2-基-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]甲基]-2-[4-(1-甲基-4-哌啶基)苯基]-6H-噻吩并[2,3-c]吡咯-4-酮(0.050g,0.084mmol)添加到甲醇中的HCl(1.25M,2mL,2.50mmol)。在室温下搅拌1h后，在减压下除去溶剂。将粗产物通过反相HPLC，用0-100％ACN/水(0.05％HCl改性剂)洗脱来纯化，得到标题化合物(0.01g,22％)。¹H NMR(400MHz,methanol-d₄)δ:7.63-7.75(m,4H),7.50-7.59(m,3H),7.37(d,2H),7.12-7.20(m,2H),7.07(s,1H),6.95-7.01(m,1H),4.90-4.99(m,2H)4.46(d,1H),3.66-3.78(m,2H),3.12-3.24(m,2H),2.93(s,3H),1.93-2.21(m,4H)；MS m/z:553.1[M+1]⁺。

以下实施例通过与实施例6类似的方法由2-氨基-2-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]乙酸乙酯和相应的起始材料制备：

实施例7：制备化合物019和020

方案6

步骤1. 2-溴-4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮

在密封微波小瓶中，将2-溴噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮(233mg,1mmol)、Selectfluor(354mg,1mmol)和二甲基乙酰胺(3mL)的混合物在搅拌下加热到150℃持续15分钟。冷却至室温后，将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/水(0.038％TFA)洗脱来纯化，得到标题化合物(47mg,19％)。NMR MS m/z:247.8[M+1]⁺。

步骤2. 2-(2-溴-4-氟-7-氧代噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)-基)-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯

将2-溴-4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮(140mg,0.59mmol)、2-溴-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯(218mg,0.71mmol)、碳酸铯(391mg,1.08mmol)和DMF(2mL)的混合物加热到30℃持续6小时。冷却后，将整个反应混合物通过快速色谱，用0-50％EtOAc/己烷洗脱来纯化，得到标题化合物(107mg,38％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:7.34(s,1H),7.22(dd,1H),7.14(dd,1H),7.10(d,1H),7.07(dd,1H)6.93(s,1H),5.15(s,2H),3.86(s,3H),3.39(s,3H)；MS m/z:475.8[M+1]⁺。

步骤3. 2-(4-氟-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-7-氧代噻吩并[2,3-c]吡啶-6 (7H)-基)-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸

将2-(2-溴-4-氟-7-氧代噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)-基)-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯(100mg,0.21mmol)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)哌啶(67mg,0.63mmol)、Na₂CO₃(67mg,0.63mmol)、二噁烷(3mL)和水(1mL)的混合物在真空下脱气两次并且重新充满N₂。添加PdCl₂dppf-dcm(19mg,0.023mmol)并将rxn混合物重新充满N₂。将rxn混合物加热至95℃持续6小时。将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/水(0.038％TFA)洗脱来纯化，得到标题化合物(40mg,52％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:9.46(br s,1H),7.88(m,3H),7.45(d,1H),7.39(d,2H),7.28(dd,1H),7.26(dd,1H),7.21(dd,1H),6.70(s,1H),5.23(d,1H),5.19(d,1H),3.54(d,2H),3.27(s,3H),3.09(m,2H),2.88(m,1H),2.84(d,3H),2.05(d,2H),1.86(m,2H)；MS m/z:555.1[M+1]⁺。

步骤4. 2-(4-氟-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-7-氧代噻吩并[2,3-c]吡啶-6 (7H)-基)-2-(5-氟-2-羟苯基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(019)

将2-(4-氟-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-7-氧代噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)-基)-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸(20mg,0.036mmol)、HATU(27mg,0.072)、2-氨噻唑(5.4mg,0.072mmol)、DIEA(19mL,0.108mmol)和DMF(2mL)的混合物在室温下搅拌过夜。将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/水(0.038％TFA)洗脱来纯化。MS m/z:637.2[M+1]⁺。

将这种材料用DCM:TFA(1:1,4mL)处理30分钟。在减压下除去溶剂并将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/水(0.038％TFA)洗脱来纯化，得到标题化合物(4.8mg，经过2个步骤，22％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:10.17(s,1H),9.41(br s,1H),7.90(m,3H),7.51(d,1H),7.39(d,2H),7.30(d,1H),7.21(m,1H),7.15(d,1H),6.96(dd,1H),6.95(s,1H),6.88(dd,1H),3.55(d,2H),3.10(m,2H),2.88(m,1H),2.83(d,3H),2.05(d,2H),1.86(m,2H)；MS m/z:593.1[M+1]⁺。

步骤5. 6-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(5-氟-2-羟苯基)甲基)-4-氟-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮(020)

将2-(4-氟-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-7-氧代噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)-基)-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸(20mg,0.036mmol)、HATU(27mg,0.072)、1,2苯二胺(8mg,0.072mmol)、DIEA(19mL,0.108mmol)和DMF(2mL)的混合物在室温下搅拌过夜。将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/水(0.038％TFA)洗脱来纯化。MS m/z:645.4[M+1]⁺。

将这种材料溶解在AcOH(3mL)中，并将溶液加热至100℃持续1小时。在减压下除去溶剂。MS m/z:627.1[M+1]⁺。

将这种材料用DCM:TFA(1:1,4mL)处理30分钟。在减压下除去溶剂并将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/水(0.038％TFA)洗脱来纯化，得到标题化合物(5.7mg，经过3个步骤，27％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:10.12(br s,1H),9.46(br s,1H),7.91(s,1H),7.88(d,2H),7.61(s,1H),7.58(m,2H),7.47(d,1H),7.39(d,2H),7.24(m,2H),7.15(m,1H),6.93(dd,1H),6.74(dd,1H),3.54(d,2H),3.09(m,2H),2.88(m,1H),2.83(d,3H),2.05(d,2H),1.86(m,2H)；MS m/z:583.2[M+1]⁺。

以下实施例通过与化合物019类似的方法由2-溴-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯和相应的起始材料制备：

以下实施例通过与化合物020类似的方法由2-溴-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯和相应的起始材料制备：

2-溴-N-(新戊酰氧基)噻唑-5-甲酰胺

在20分钟内，将乙二酰氯(15mL，30mmol，DCM中的2M溶液)逐滴添加到2-溴噻唑-5-羧酸(4.2g,20mmol)和无水DMF(4滴)于DCM(20mL)中的悬浮液中。将反应物在室温下搅拌3天，在减压下除去溶剂，得到酰基氯。将盐酸羟胺(1.39g,20mmol)添加到K₂CO₃(5.52g,20mmol)于EtOAc(40mL)和水(20mL)的2:1混合物中的两相混合物中。将所得溶液冷却至0℃，然后在20分钟内逐滴添加粗制酰基氯于EtOAc(12mL)中的溶液。使反应物升温至室温，得到浓稠的白色悬浮液。4小时后，在约10分钟内逐滴添加新戊酰氯(2.46mL,20mmol)。2小时后，再添加新戊酰氯(0.5mL)并将反应物搅拌16小时。将混合物用水(125mL)稀释并用EtOAc(2x125mL)萃取。将合并的有机萃取物用水和饱和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，将残余物通过快速色谱0-35％EtOAc/己烷来纯化，得到2.44g(40％)的白色固体。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:8.22(s,1H),1.28(s,9H)；MS m/z:308.8[M+1]⁺。

2-溴噻唑并[5,4-c]吡啶-4(5H)-酮

将2-溴-N-(新戊酰氧基)噻唑-5-羧酰胺(233mg,1mmol)、CsCO₃(58mg,0.3mmol)、[Cp*RhCl₂]₂(12mg,0.02mmol)于MeOH(8mL)中的混合物脱气并且用N₂充满两次。添加乙酸乙烯酯(131mL,1.5mmol)并将混合物加热至45℃持续60小时。将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/水(0.038％TFA)洗脱来纯化，得到标题化合物(16mg,7％)。MS m/z:232.8[M+1]⁺。

2-(5-氟-2-甲氧基苯基)乙酸甲酯

在0℃下，在15分钟内将亚硫酰氯(5.8mL,81.3mmol)逐滴添加到2-(5-氟-2-甲氧基苯基)乙酸(5.0g,27.1mmol)于MeOH(3mL)中的溶液中。将混合物在60℃下加热16小时，在减压下除去溶剂。添加EtOAc(100mL)和饱和盐水(100mL)，并将pH用饱和NaHCO₃溶液调节至9。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，得到标题化合物(5.13g,95％)，其无需进一步纯化即使用。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:6.96(m,2H),6.81(m,1H),3.81(s,3H),3.72(s,3H),3.63(s,2H)。

2-(5-氟-2-羟苯基)乙酸甲酯

在-78℃下，在45分钟内，将BBr₃(77mL，DCM中的1M)逐滴添加到2-(5-氟-2-甲氧基苯基)乙酸甲酯于DCM(100mL)中的溶液中并且将混合物搅拌1小时。然后将反应物用水(50mL)淬灭。添加DCM(100mL)和水(50mL)，并将pH用饱和NaHCO₃溶液调节至8。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，得到标题化合物(4.38g，92％)，其无需进一步纯化即使用。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:7.16(s,1H),6.90(dd,1H),6.85(dd,1H),3.79(s,3H),3.66(s,2H),3.67(s,2H)。

2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯

将二异丙基乙胺(12.4mL，71.4mmol)和氯甲基甲基醚(4.52mL，59.5mmol)2-(5-氟-2-羟苯基)乙酸甲酯添加至2-(5-氟-2-羟苯基)乙酸甲酯(4.38g,23.8mmol)于DCM(150mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌20小时。添加DCM(100mL)和盐水(100mL)，将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，将残余物通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到标题化合物(4.78g，88％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:7.07(dd,1H),6.96(dd,1H),6.94(m,1H),5.16(s,2H),3.72(s,3H),3.66(s,2H),3.48(s,3H)。

2-溴-2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯

将NBS(3.05g,17.1mmol)和过氧化二苯甲酰(396mg,1.63mmol)添加至2-(5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基)乙酸甲酯(3.72g,16.3mmol)于CCl₄(80mL)中的溶液中。将反应混合物在80℃搅拌20小时。添加EtOAc(150mL)和盐水(100mL)，将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，将残余物通过硅胶色谱法(0-10％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到标题化合物(3.59g,72％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:7.41(dd,1H),7.09(dd,1H),7.02(m,1H),5.85(s,1H),5.22(d,1H),5.21(d,1H),3.82(s,3H),3.51(s,3H)。

实施例8：制备6-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(5-氟-2-羟苯基)甲基-d)-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮,(024)

在70℃下，将6-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(5-氟-2-羟苯基)甲基)-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮(009,20mg,0.035mmol)、氧化氘(350mL,19.3mmol)、DIEA(38mL,6.3mmol)和无水THF(1mL)的溶液搅拌60小时。将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/H₂O(0.038％TFA改性剂)洗脱来纯化，得到标题化合物(12mg,62％)。NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:¹H 10.06(br s,1H),9.39(br s,1H),7.80(d,2H),7.77(s,1H),7.57(m,2H),7.38(m,3H),7.24(m,2H),7.13(m,1H),6.92(dd,1H),6.78(d,1H),6.69(dd,1H),3.54(m,2H),3.09(m,2H),2.87(m,1H),2.84(d,3H),2.06(d,2H),1.85(m,2H)。MS,m/z 566.15,[M+1]⁺。

实施例9：制备6-((1H-吲哚-2-基)(苯基)甲基)-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基) 噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮(025)

方案7

步骤1. 2-甲酰基-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯

将三乙胺(0.6mL,4.0mmol)、DMAP(41mg,0.34mmol)、1H-吲哚-2-甲醛(0.5g,3.4mmol)和THF(15mL)的溶液冷却至0℃。逐滴添加二碳酸二叔丁酯(0.87g，4.0mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在减压下除去溶剂并将残余物在水(30mL)和EtOAc(30mL)之间分配。将水相用EtOAc萃取并将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(0-30％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(570mg,68％)。¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ:10.46(s,1H),8.19(d,1H),7.70(d,1H),7.51(t,1H),7.46(s,1H),7.33(t,1H),1.74(s,9H)。

步骤2. 2-(羟基(苯基)甲基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯

在N₂中，在0℃下，将溴化苯镁(THF中的1M，2.79mL,2.79mmol)逐滴添加到2-甲酰基-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(0.57g,2.32mmol)于无水THF中的溶液。在0℃下，将反应物搅拌30min并且用饱和NH₄Cl水溶液(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(2x20mL)萃取，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(0-30％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(500mg,67％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:7.99(d,1H),7.45(d,3H),7.39(m,2H),7.34(m,1H),7.31(m,1H),7.23(t,1H),6.23(s,1H),6.21(d,1H),4.71(br d,1H),1.67(s,9H)。

步骤3. 2-(((甲基磺酰基)氧基)(苯基)甲基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯

在0℃下，将甲磺酰氯(143mL,1.86mmol)逐滴添加到2-(羟基(苯基)甲基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(300mg,0.93mmol)、DIEA(647mL,3.72mmol)和无水DCM(10mL)的溶液中。将反应物在0℃下搅拌15min并且在室温下搅拌1小时，然后用DCM(10mL)稀释并且用冰水(20mL)淬灭。收集有机层，将其干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩，以得到粗甲磺酸盐，其无需进一步纯化即用于下一步骤。

步骤4. 6-((1H-吲哚-2-基)(苯基)甲基)-2-溴噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮

将来自步骤3的材料溶解在DMF(3mL)中并逐滴添加到2-溴噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮(193mg,0.81mmol)和Cs₂CO₃(673mg,1.86mmol)于DMF(8mL)中的溶液。将反应混合物在36℃下加热6小时。在冷却后，将反应混合物倾入冰水(20mL)中并且用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(0-30％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(120mg，30％，经过两个步骤)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:9.81(s,1H),7.62(s,1H),7.58(d,1H),7.39(m,4H),7.33(m,2H),7.23(m,2H),7.13(t,1H),7.09(s,1H),6.50(d,1H),6.31(s,1H),

步骤4. 6-((1H-吲哚-2-基)(苯基)甲基)-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)噻吩并 [2,3-c]吡啶-7(6H)-酮

将6-((1H-吲哚-2-基)(苯基)甲基)-2-溴噻吩并[2,3-c]吡啶-7(6H)-酮(120mg,0.27mmol)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)哌啶(90mg,0.3mmol)、Na₂CO₃(86mg,0.81mmol)、二噁烷(3mL)和水(1mL)的混合物脱气并且用N₂充满两次。添加PdCl₂dppf-dcm(44mg,0.054mmol)并将混合物脱气并充满N₂。将反应混合物加热至95℃持续20分钟。冷却后，将整个反应混合物通过RP-HPLC，用0-80％ACN/H₂O(0.038％TFA)洗脱来纯化，得到标题化合物(54mg,38％)。NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:¹H 11.42(s,1H),9.43(br s,1H),7.80(d,2H),7.77(s,1H),7.50(d,2H),7.44(m,2H),7.38(m,3H),7.31(m,4H),7.11(t,1H),7.00(t,1H),6.78(d,1H),6.09(s,1H),3.54(d,2H),3.10(m,2H),2.87(m,1H),2.84(d,3H),2.06(d,2H),1.86(m,2H)。MS m/z:530.25[M+1]⁺。

实施例10：基于HTRF的EGFR生化测定

使用均相时间分辨荧光(HTRF)测定法(Cisbio)，进行EGFR生化活性测量。首先使用D300数字液体分配器(HP)将抑制剂和DMSO标准化分配到空的黑色低容量384孔板(Corning)。所有反应均在室温下进行，并使用Multidrop Combi Reagent Dispenser(ThermoFisher)将溶液添加到板中。反应混合物(10μL终体积)在反应缓冲液(50mM HEPESpH 7.0、5mM MgCl₂、1mM MnCl₂、0.01％BSA、2mMTCEP、0.1mM NaVO₄)中，含有1μM酪氨酸激酶肽-生物素底物和突变EGFR。调整酶浓度以适应不同的激酶活性(L858R 0.1nM,L858R/T790M 0.02nM)。将酶反应溶液(2x浓度，5μL)添加到含有化合物的384孔板中并孵育30分钟。通过添加5μL ATP至终浓度为100μM来开始酶反应，并且反应20分钟。通过添加10μL于含有EDTA的检测缓冲液中的磷酸酪氨酸抗体-铕(III)穴状化合物(体积比为1比180)和链霉亲和素-XL665(46.7nM)来淬灭反应物，然后在室温下孵育1小时，并用PHERAstar读板器(激发＝337nm，发射＝620nm和665nm)读取。在GraphPad Prism 7.0d中用非线性最小二乘拟合由抑制曲线(从1.0μM到0.130nM的11点曲线或从1.0μM到0.130pM的23点曲线)一式三份地确定IC₅₀值。所得数据示出于下表4中。

表4.

实施例11：Ba/F3细胞增殖模型

先前已描述EGFR突变体L858R和L858R/T790M Ba/F3细胞(Zhou,W.等人Nature462,2009,1070-1074)。所有细胞系均保存在补充有10％FBS、100单位/mL青霉素、100单位/mL链霉素的RPMI 1640(Cellgro；Mediatech Inc.，Herndon，CA)中。根据制造商的说明，使用Quick Change Site-Directed Mutagenesis试剂盒(Stratagene；La Jolla，CA)通过定点诱变来引入EGFR I941R突变。所有构建体均通过DNA测序确认。使用Cre重组系统(Agilent Technologies,Santa Clara,CA)将构建体穿梭到逆转录病毒载体JP1540中。然后按照标准方案用逆转录病毒感染Ba/F3细胞，如先前所述(Zhou等人Nature 2009)。通过在嘌呤霉素(2μg/ml)中选择来获得稳定的克隆。

通过Cell Titer Glo测定法(Promega,Madison,WI)评估生长和生长抑制，并根据制造商的说明进行。Cell Titer Glo测定是用于基于存在的ATP的定量来确定活细胞的数量的基于发光的方法，ATP与存在的代谢活性细胞的数量成正比。不同EGFR基因型的Ba/F3细胞暴露于作为单一剂或与1μg/mL西妥昔单抗组合的化合物达72小时，并且根据经验确定每次实验使用的细胞数量，如先前确定的(Zh ou等人,Nature 2009)。所有实验点在384孔板中一式三份设置，并且所有实验至少重复三次。使用光谱仪检测发光信号，并使用适用于Windows的GraphPad Prism 5.0版(GraphPad Software；www.graphpad.com)以图形方式显示数据。使用具有S型剂量反应的非线性回归模型来拟合曲线。本文公开的化合物的该测定结果示出于下表5中。

表5.

所公开的主题的范围不受本文描述的具体实施方案和实施例限制。实际上，根据上文的描述和附图，除所述的那些之外，对本发明的各种修改对于本领域的技术人员是显而易见的。此类修改也在附属权利要求书的范围内。

本文引用的所有参考文献(例如出版物或专利或专利申请)以引用方式整体并且出于所有目的并入本文，其程度如同每个单独参考文献(例如出版物或专利或专利申请)具体地和单独地被指示为以引用方式出于所有目的整体并入。其他实施方案在以下权利要求内。

Claims

1.一种式I化合物：

或其药学上可接受的盐；

其中：

表示单键或双键；

A和A'各自独立地为CH、CR⁸或N；

W是N或C；

X和Y各自独立地为S、O、N、CH、NR³或CR³；

条件是X、Y或Z中的至少一个是CH；

R⁴在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、C₁-C₆烷基、(CH₂)_0-3-(C₃-C₇环烷基)、(CH₂)_0-3-(C₄-C₇环烯基)、(CH₂)_0-3-(C₆-C₁₀芳基)、(CH₂)_0-3-(5-6元杂芳基)和(CH₂)_0-3-(5-7元杂环基)，其中所述芳基、杂芳基或杂环基各自任选地被R⁵取代一次、两次或三次；

R⁵在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₃烷基胺、3-10元环烷基、卤素、COOH、C(O)O(C₁-C₆烷基)、O(CH₂)_1-3-OH、NH₂、NH(C₁-C₆烷基)、N(C₁-C₆烷基)₂、OH、CN、(CH₂)_0-3-(C₆-C₁₀芳基)、(CH₂)_0-3-(5-6元杂芳基)和(CH₂)_0-3-(5-7元杂环基)，其中所述芳基、杂芳基或杂环基各自任选地被R⁷取代一次、两次或三次；

R⁶在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤代烷氧基、C₁-C₃烷基胺、卤素、OH、NO₂、NH₂、NH(C₁-C₆烷基)、N(C₁-C₆烷基)₂、(CH₂)_1- ₄OH、S(O)_0-2H、S(O)_0-2NH₂或CN；

2.一种式X化合物：

或其药学上可接受的盐；

其中：

表示单键或双键；

A和A'各自独立地为CH、CR⁸或N；

或者，A不存在；

W是N、C或CH；

X和Y各自独立地为S、O、N、CH、NR³或CR³；

条件是X、Y或Z中的至少一个是CH；

3.如权利要求2所述的化合物，其中所述式X化合物为式Xa化合物：

或其药学上可接受的盐。

4.如权利要求2所述的化合物，其中所述式X化合物为式Xb化合物：

或其药学上可接受的盐。

5.一种式XX化合物：

或其药学上可接受的盐；

其中：

A和A'各自独立地为CH₂、CHR⁸、NH或NR⁸；

或者，A不存在；

X和Y各自独立地为N、CH、或CR³；

条件是X、Y或Z中的至少一个是CH；

6.如权利要求5所述的化合物，其中所述式XX化合物为式XXa化合物：

或其药学上可接受的盐。

7.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式II化合物：

或其药学上可接受的盐。

8.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式III化合物：

或其药学上可接受的盐。

9.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式IV化合物：

或其药学上可接受的盐。

10.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式V化合物：

或其药学上可接受的盐。

11.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式VI化合物：

或其药学上可接受的盐。

12.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式VII化合物：

或其药学上可接受的盐。

13.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式VIII化合物：

或其药学上可接受的盐。

14.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物为式IX化合物：

或其药学上可接受的盐。

15.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中R²是6-10元芳基或5-10元杂芳基，两者均任选地被一个、两个或三个R⁶取代。

16.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中R²是任选地被一个、两个或三个R⁶取代的苯基。

17.如权利要求1-16中任一项所述的化合物，其中R³在每次出现时独立地选自由以下组成的组：卤素、OR⁴、NR⁴R⁴、C(O)NHR⁴、C₁-C₆烷基、C₂-C₆炔基、C₆-C₁₀芳基，其中烷基和炔基任选地被R⁴取代一次、两次或三次，并且芳基任选地被R⁵取代一次、两次或三次。

18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中R³在每次出现时独立地选自由以下组成的组：卤素、甲基、

19.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶在每次出现时独立地为羟基或卤代。

20.如权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中R¹选自由以下组成的组：苯并咪唑、咪唑并吡啶、吲哚、三唑、吡唑、咪唑、吡啶酰胺和噻唑酰胺，所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代。

21.如权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中R¹选自由以下组成的组：

所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代。

22.如权利要求1-21中任一项所述的化合物，其中R¹选自由以下组成的组：

所有这些任选地被一个、两个或三个R⁸取代。

23.如权利要求1-22中任一项所述的化合物，其中R⁷为C₁-C₃烷基。

24.如权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中R⁸在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基、卤素、OH和NH₂。

25.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I化合物选自由以下组成的组：

或其药学上可接受的盐。

26.如权利要求2所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：

或其药学上可接受的盐。

27.如权利要求5所述的化合物，其中所述式XX化合物选自由以下组成的组：

或其药学上可接受的盐。

28.一种药物组合物，其包含如权利要求1-27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体。

29.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述组合物还包含第二活性剂。

30.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述第二活性剂选自由以下组成的组：MEK抑制剂、PI3K抑制剂和mTor抑制剂。

31.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述第二活性剂防止受试者中的EGFR二聚体形成。

32.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述第二活性剂选自由以下组成的组：西妥昔单抗、曲妥珠单抗和帕尼单抗。

33.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述第二活性剂是ATP竞争性EGFR抑制剂。

34.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述ATP竞争性EGFR抑制剂是奥希替尼、吉非替尼或厄洛替尼。

35.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-27中任一项所述的化合物或根据权利要求28-34中任一项所述的组合物。

36.根据权利要求35所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：肺癌、结肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌、甲状腺癌、神经胶质瘤、鳞状细胞癌和前列腺癌。

37.根据权利要求35所述的方法，其中所述癌症为非小细胞肺癌(NSCLC)。

38.一种抑制有需要的受试者的激酶的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-27中任一项所述的化合物或根据权利要求28-34中任一项所述的组合物。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述激酶为EGFR。

40.一种治疗或预防有需要的受试者的激酶介导的病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-27中任一项所述的化合物或根据权利要求28-34中任一项所述的组合物。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述激酶介导的病症对EGFR靶向疗法具有抗性。

42.根据权利要求41所述的方法，其中所述EGFR治疗的疗法选自由以下组成的组：吉非替尼、厄洛替尼和奥希替尼。