CN115803057A

CN115803057A - 治疗多发性骨髓瘤的方法

Info

Publication number: CN115803057A
Application number: CN202180047696.1A
Authority: CN
Inventors: B·布鲁洛; U·谢伦伯格
Original assignee: Turnerone
Current assignee: Turnerone
Priority date: 2020-04-29
Filing date: 2021-04-29
Publication date: 2023-03-14
Also published as: US20210403587A1; CA3185805A1; BR112022024483A2; WO2021222616A1; AU2021263926A1; EP4142791A1

Abstract

提供了通过向有需要的患者施用多特异性抗体来治疗多发性骨髓瘤的方法。还提供了制备此类抗体的方法，以及包含此类抗体的组合物，包括药物组合物。

Description

治疗多发性骨髓瘤的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年4月29日提交的美国临时专利申请第63/017,597号，以及于2020年9月1日提交的美国临时专利申请第63/073,343号，以及于2020年11月25日提交的美国临时专利申请第63/118,624号的申请日的优先权，这些申请的公开内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及通过向有需要的患者施用多特异性抗体来治疗多发性骨髓瘤的方法。本发明还涉及制备此类抗体的方法，以及包含此类抗体的组合物，包括药物组合物。

背景技术

多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞恶性肿瘤，并且是美国(US)每年发病率约30,000例的第二常见造血系统癌症。这种疾病的特征在于骨髓中克隆性浆细胞的增殖，并且通常伴随着单克隆免疫球蛋白的产生(最常见的是IgG，尽管IgA和仅有轻链的变体也是常见的)。超过80％的患者年龄大于60岁，发病年龄中位数为68岁；大约2％的病例在40岁之前被诊断出来(Jemal A等人，《癌症统计学(Cancer statistics)》，2008；58(2)：71-96.；WaxmanAJ等人，《血液(Blood)》2010；1月1日；Pulte D等人，《肿瘤学家(The Oncologist.)》2011；10月3日)。这种疾病主要局限于骨和骨髓，导致血细胞减少、骨痛、骨折、感染、高钙血症和肾衰竭。另外，椎体的病理性骨折会导致严重的神经系统后遗症。尽管发病率显著，但骨髓瘤治疗——包括蛋白酶体抑制剂、沙利度胺(thalidomide)衍生物、自体干细胞治疗、嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗和抗CD38单克隆抗体(mAb)治疗——的改善使中位生存期延长了5年以上，其中一些患者存活≥10年(Kumar SK等人，《血液》2008；111(5)：2516-20.；Turesson I等人，《临床肿瘤学杂志(Journal of Clinical Oncology.)》2010；28(5)：830.；Palumbo A等人，《新英格兰医学期刊(New England Journal of Medicine.)》2016；375(8)：754-66.；Dimopoulos MA等，《新英格兰医学期刊》2016；375(14)：1319-31；Mikkilineni L等人，《血液》2017；1月1日)。然而，目前还没有治愈性疗法。

晚期MM的治疗选择有限。尽管结合了PI、IMiD和抗CD38 mAb治疗的治疗方案取得了成功，但对这些疗法复发或难治的患者具有有限的治疗选择(Pick M等人，《欧洲血液病学杂志(European Journal ofHaematology.)》2018；100(5)：494-501)。本发明的各方面包括治疗这一患者群体的方法。

发明内容

本发明的各方面包括用于在有需要的患者中治疗多发性骨髓瘤(MM)的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

在一些实施例中，其中治疗周期重复两次或更多次。在一些实施例中，TNB-383B作为单一疗法施用于患者。在一些实施例中，TNB-383B通过静脉内输注(IV)施用。在一些实施例中，MM是复发性MM。在一些实施例中，MM是难治性MM。在一些实施例中，患者已经接受至少三种既往治疗线。在一些实施例中，既往治疗线中的一者包含用蛋白酶体抑制剂(PI)治疗。在一些实施例中，既往治疗线中的一者包含用免疫调节酰亚胺(IMiD)治疗。在一些实施例中，既往治疗线中的一者包含用抗CD38抗体治疗。在一些实施例中，抗CD38抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗CD38单克隆抗体是达雷木单抗(daratumumab)。

在一些实施例中，患者不是已知在MM中提供临床益处的一种或多种治疗方案的候选者。

本发明的各方面包括用于改善经诊断患有MM的患者的客观应答率(ORR)的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

本发明的各方面包括用于改善经诊断患有MM的患者的临床受益率(CBR)的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

本发明的各方面包括用于改善经诊断患有MM的患者的总存活(OS)率的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

本发明的各方面包括用于改善经诊断患有MM的患者的无进展存活(PFS)率的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

本发明的各方面包括用于改善经诊断患有MM的患者的进展时间(TTP)的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

本发明的各方面包括用于改善经诊断患有MM的患者的应答时间(TTR)的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

本发明的各方面包括用于改善经诊断患有MM的患者的客观应答持续时间(DOR)的方法，该方法包含根据21天的治疗周期向患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

在一些实施例中，改善为至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。

在一些实施例中，修改治疗周期以在剂量之间增加更多时间。在一些实施例中，治疗周期被修改为28天的治疗周期。

在一些实施例中，通过从给药方案中持续消除一个或多个治疗周期来修改治疗周期。在一些实施例中，从给药方案中消除每第三个治疗周期。

在一些实施例中，修改治疗周期以增加给药频率。在一些实施例中，通过将剂量之间的时间减少至14天来修改治疗周期。

在一些实施例中，通过将剂量分成多个部分，并在连续的几天内将多个部分中的每一个施用于患者来修改治疗周期。

在一些实施例中，通过将剂量分成两半并在连续两天的每一天向患者施用剂量的一半来修改治疗周期。

在一些实施例中，该方法进一步包含在施用TNB-383B之前用降低超敏反应的风险或严重性的药剂对患者进行前驱用药。在一些实施例中，降低超敏反应的风险或严重性的药剂选自由以下组成的组：地塞米松(dexamethasone)、苯海拉明(diphenhydramine)、对乙酰氨基酚(acetaminophen)、雷尼替丁(ranitidine)、其任何等效物或其任何组合。在一些实施例中，在施用TNB-383B之前15至60分钟施用降低超敏反应的风险或严重性的药剂。

在一些实施例中，最大耐受剂量(MTD)选自由以下组成的组：25μg、75μg、200μg、600μg、1,800μg、5,400μg、10,000μg、20,000μg、30,000μg、40,000μg、50,000μg、60,000μg、70,000μg、80,000μg、90,000μg、100,000μg、110,000μg、120,000μg、130,000μg、140,000μg、150,000μg、160,000μg、170,000μg和180,000μg。

本发明的各方面包括用于在有需要的患者中治疗复发性或难治性多发性骨髓瘤的方法，该方法包含以10mg至100mg范围内的固定剂量向患者施用TNB-383B，每3周(21天)施用一次，其中患者已接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

本发明的各方面包括用于在有需要的患者中治疗复发性或难治性多发性骨髓瘤的方法，该方法包含以60mg的固定剂量向患者施用TNB-383B，每3周(21天)施用一次，其中患者已接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

这些和其它方面将在本公开的其余部分(包括实例)中进一步解释。

附图说明

图1是示出了包含剂量递增阶段(A组)和剂量扩展阶段(B组)的实例治疗方法的示意图。

图2是示出了包含剂量递增阶段(A组)的实例治疗方法的示意图，并提供了关于不同患者群组的治疗的额外细节。

图3是示出了针对表现出细胞因子释放综合征(CRS)的体征和/或症状的受试者的建议治疗指南的示意图。

图4是TNB-383B的示意图，其是三链抗体样分子(TCA)，以二价构型包含一条包含对CD3具有结合亲和力的重链/轻链对的臂，和包含对BCMA具有结合亲和力的仅有重链可变区的第二条臂。

图5提供了对入组临床研究的受试者观察到的受试者人口统计、受试者处理情况和疾病特征的总结。

图6提供了在临床研究中观察到的常见不良事件的总结。

图7是总结在临床研究中从受试者观察到的CRS应答的图表。

图8是总结在临床研究中观察到的按剂量组的受试者应答的图。

图9是示出了在临床研究期间对治疗有应答的27名受试者的轨迹的游泳图。

图10是示出了在临床研究期间观察到的TNB-383B的PK数据的图。

图11提供了与在1剂治疗后通过血清学达到VGPR的受试者的病例研究相关的信息总结。

具体实施方式

除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些技术在本领域技术范围内。这些技术在文献中有充分说明，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)》(M.J.Gait编辑，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编辑，1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(Academic Press，Inc.(Academic Press，Inc.))；《最新分子生物学实验方法汇编(Current Protocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编辑，1987，并定期更新)；《PCR：聚合酶链式反应(PCR：The Polymerase Chain Reaction)》，(Mullis等人编辑，1994)；《分子克隆实用指南(APractical Guide to MolecularCloning)》(Perbal Bernard V.，1988)；《噬菌体展示：实验室手册(Phage Display：ALaboratory Manual)》(Barbas等人，2001)；Harlow，Lane和Harlow，《使用抗体：实验室手册：便携式协议I号(Using Antibodies：A Laboratory Manual：Portable ProtocolNo.I)》，冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)(1998)；以及Harlow和Lane，《抗体：实验室手册(Antibodies：A Laboratory Manual)》，冷泉港实验室；(1988)。

在提供数值范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确说明，在该范围的上限和下限之间的每个中间值至下限单位的十分之一，以及在该规定范围内的任何其它规定或中间值都涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围内，也涵盖在本发明内，在所述范围内受到任何具体排除的限制。在所述范围包括一个或两个界限的情况下，排除那些包括的界限中的一个或两个的范围也包括在本发明中。

除非另有说明，本文中的抗体残基根据Kabat编号系统(例如，Kabat等人，《免疫学意义上的序列(Sequences of Immunological Interest)》第5版，马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院公共卫生服务中心(1991))进行编号。

在以下描述中，阐述了许多具体细节以提供对本发明的更彻底的理解。然而，对于本领域技术人员显而易见的是，可以在没有这些具体细节中的一个或多个的情况下实践本发明。在其它情况下，为了避免模糊本发明，没有描述本领域技术人员熟知的公知特征和过程。

在整个公开中引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物，通过引用整体并入本文。

I.定义

“包含”是指在组合物/方法/试剂盒中需要列举的元素，但是在权利要求的范围内可以包括其它元素以形成组合物/方法/试剂盒等。

“基本上由......组成”是指将所描述的组合物或方法的范围限制为不会实质上影响本发明的基本和新颖特征的特定材料或步骤。

“由......组成”是指从组合物、方法或试剂盒中排除权利要求中未指定的任何元素、步骤或成分。

本文的抗体残基根据Kabat编号系统和EU编号系统进行编号。当提及可变结构域中的残基(大约重链的1至113位残基)时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat等人，《免疫学意义上的序列》第5版，马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院公共卫生服务中心(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号系统”或“EU索引”(例如，Kabat等人报道的EU索引，见上文)。“Kabat中的EU索引”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。除非本文另有说明，否则提及抗体可变结构域中的残基编号是指通过Kabat编号系统进行的残基编号。除非本文另有说明，否则提及抗体恒定结构域中的残基编号是指通过EU编号系统进行的残基编号。

抗体，也称为免疫球蛋白，通常包含至少一条重链和一条轻链，其中重链和轻链的氨基末端结构域在序列上是可变的，因此通常称为可变区结构域，或可变重链(VH)或可变轻链(VH)结构域。这两个结构域通常缔合形成特异性结合区，尽管如本文所讨论的，特异性结合也可以用仅重链可变序列获得，并且抗体的多种非天然构型是本领域已知和使用的。

“功能性”或“生物活性”抗体或抗原结合分子(包括本文所述的仅重链抗体和多特异性(例如，双特异性)三链抗体样分子(TCA))是能够在结构、调节、生物化学或生物物理事件中发挥其一种或多种天然活性的抗体或抗原结合分子。例如，功能性抗体或其它结合分子(例如，TCA)可以具有特异性结合抗原的能力，并且该结合可能反过来引发或改变细胞或分子事件，如信号转导或酶活性。功能性抗体或其它结合分子(例如，TCA)也可以阻断受体的配体活化或充当激动剂或拮抗剂。抗体或其它结合分子(例如，TCA)发挥其一种或多种天然活性的能力取决于若干因素，包括多肽链的适当折叠和组装。

术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用，并且具体地涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、单体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、仅重链抗体、三链抗体、单链Fv(scFv)、纳米抗体等，并且还包括抗体片段，只要它们表现出所需的生物活性(Miller等人(2003)《免疫学杂志(Jour.of Immunology)》170：4854-4861)。抗体可以是鼠的、人的、人源化的、嵌合的，或来源于其它物种。

术语抗体可以指全长重链、全长轻链、完整的免疫球蛋白分子；或任何这些多肽的免疫活性部分，即包含免疫特异性结合感兴趣靶的抗原或其部分的抗原结合位点的多肽，此类靶包括但不限于癌细胞或产生与自身免疫性疾病相关的自身免疫抗体的细胞。本文公开的免疫球蛋白可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类，包括具有提供降低的或增强的效应细胞活性的改变的Fc部分的工程化亚类。本发明抗体的轻链可以是κ轻链(Vκ)或λ轻链(Vλ)。免疫球蛋白可以来源于任何物种。在一个方面，免疫球蛋白主要来源于人。

如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即，包含该群体的个体抗体是相同的，除了可能以少量存在的可能的天然发生的突变。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。根据本发明的单克隆抗体可以通过Kohler等人(1975)《自然(Nature)》256：495首次描述的杂交瘤方法制备，也可以例如通过重组蛋白生产方法制备(参见，例如，美国专利第4,816,567号)。

与抗体结合使用的术语“可变的”是指这样的事实，即抗体可变结构域的某些部分在抗体之间的序列上广泛不同，并且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，这种可变性不是均匀分布在抗体的整个可变结构域中。它集中在轻链和重链可变结构域中称为高变区的三个节段中。可变结构域的更高度保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR，大部分采用β-折叠构型，通过三个高变区连接，高变区形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的高变区通过FR紧密地结合在一起，并且与来自另一条链的高变区一起，有助于形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人，《免疫学意义上的蛋白质序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)》，第5版马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院公共卫生服务中心(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应子功能，如抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

术语“高变区”在本文中是指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，重链可变结构域中的残基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat等人，《免疫学意义上的蛋白质序列》，第5版马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院公共卫生服务中心(1991)和/或来自重链可变结构域中“高变环”残基26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)的那些残基；Chothia和Lesk《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196：901-917(1987))。在一些实施例中，“CDR”是指如Lefranc，MP等人，国际免疫遗传学数据库(IMGT)，《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》，27：209-212(1999)中定义的抗体的互补决定区。“构架区”或“FR”残基是除了本文定义的高变区/CDR残基之外的那些可变结构域残基。

本文示出了示例性的CDR命名，然而本领域技术人员将理解，CDR的许多定义是常用的，包括Kabat定义(参见Zhao等人《一种用于确定抗体互补决定区的基于种系知识的计算方法(A germline knowledge based computational approach for determiningantibody complementarity determining regions.)》《分子免疫学(MolImmunol.)》2010；47：694-700)，其基于序列可变性并且是最常用的。Chothia的定义是基于结构环区域的位置(Chothia等人，《免疫球蛋白高变区的构象(Conformations of immunoglobulinhypervariable regions)》《自然》1989；342：877-883)。感兴趣的替代CDR定义包括但不限于Honegger《免疫球蛋白可变结构域的另一种编号方案：自动建模和分析工具(Yetanother numbering scheme for immunoglobulin variable domains：an automaticmodeling and analysis tool)》《分子生物学杂志》2001；309：657-670；Ofran等人《互补决定区(CDR)的自动识别揭示了CDR和B细胞表位的特有特征(Automated identification ofcomplementarity determining regions(CDRs)reveals peculiar characteristics ofCDRs and B-cell epitopes)》《免疫学杂志(J Immunol.)》2008；181：6230-6235；Almagro《识别不同大小抗原的抗体的特异性决定残基的差异的鉴定：抗体库合理设计的含义(Identification of differences in the specificity-determining residues ofantibodies that recognize antigens of different size：implications for therational design of antibody repertoires)》《分子识别杂志(J Mol Recognit.)》2004；17：132-143；和Padlan等人《抗体中特异性决定残基的鉴定(Identification ofspecificity-determining residues in antibodies)》《美国实验生物学学会联合会杂志(Faseb J.)》1995；9：133-139公开的那些，其各自通过引用具体并入本文。

术语“仅重链抗体”和“重链抗体”在本文中可互换使用，并且在最广泛的意义上是指缺乏常规抗体的轻链的抗体或抗体的一个或多个部分，例如抗体的一个或多个臂。这些术语具体包括但不限于包含VH抗原结合结构域和CH2和CH3恒定结构域，不存在CH1结构域的同型二聚体抗体；此类抗体的功能性(抗原结合)变体、可溶性VH变体、包含一个可变结构域(V-NAR)和五个C-样恒定结构域(C-NAR)的同型二聚体的Ig-NAR及其功能性片段；以及可溶性单结构域抗体(sUniDabs^TM)。在一个实施例中，仅重链抗体由可变区抗原结合结构域组成，可变区抗原结合结构域由构架1、CDR1、构架2、CDR2、构架3、CDR3和构架4组成。在另一实施例中，仅重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分以及CH2和CH3结构域组成。在另一实施例中，仅重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH2结构域组成。在另一实施例中，仅重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH3结构域组成。其中CH2和/或CH3结构域被截短的仅重链抗体也包括在本文中。在另一实施例中，重链由抗原结合结构域和至少一个CH(CH1、CH2、CH3或CH4)结构域组成，但没有铰链区。仅重链抗体可以是二聚体的形式，其中两条重链是二硫键附接的或以其它方式彼此共价或非共价附接。仅重链抗体可属于IgG亚类，但属于其它亚类(如IgM、IgA、IgD和IgE亚类)的抗体也包括在本文中。在一个具体的实施例中，重链抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型，特别是IgG1亚型。在一个实施例中，本文的仅重链抗体用作嵌合抗原受体(CAR)的结合(靶向)结构域。该定义具体包括由人免疫球蛋白转基因大鼠(UniRat^TM)产生的仅人重链抗体，称为UniAbs^TM。UniAbs^TM的可变区(VH)被称为UniDabs^TM，并且是可以与Fc区或血清白蛋白连接的通用构件，用于开发具有多特异性、增加的效力和延长的半衰期的新型疗法。由于同型二聚体UniAbs^TM缺乏轻链，因此缺乏VL结构域，抗原被一个单一结构域识别，即重链抗体的重链可变结构域(VH或VHH)。

本文所用的“完整抗体链”是包含全长可变区和全长恒定区(Fc)的抗体链。完整的“常规”抗体包含完整的轻链和完整的重链，以及分泌型IgG的轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域CH1、铰链、CH2和CH3。其它同种型，如IgM或IgA，可以具有不同的CH结构域。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。完整抗体可以具有一种或多种“效应子功能”，其是指可归因于抗体的Fc恒定区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性。抗体效应子功能的实例包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；以及细胞表面受体的下调。恒定区变体包括改变效应子分布、与Fc受体结合等的那些变体。

根据其重链的Fc(恒定结构域)的氨基酸序列，抗体和各种抗原结合蛋白可以以不同的类别提供。存在五大类重链Fc区：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可以进一步分为“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同类别的抗体的Fc恒定结构域可分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是众所周知的。Ig形式包括铰链修饰或无铰链形式(Roux等人(1998)《免疫学杂志》161：4083-4090；Lurnd等人(2000)《欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)》267：7246-7256；US 2005/0048572；US 2004/0229310)。基于其恒定结构域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的抗体的轻链可被指定为两种类型之一，称为κ(kappa)和λ(lambda)。根据本发明实施例的抗体可以包含κ轻链序列或λ轻链序列。

“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的“效应子功能”。效应子功能的非限制性实例包括C1q结合；CDC；Fc-受体结合；ADCC；ADCP；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调等。此类效应子功能通常需要Fc区与受体(例如，FcγRI；FcγRIIA；FcγRIIB1；FcγRIIB2；FcγRIIIA；FcγRIIIB受体和低亲和力FcRn受体)相互作用；并且可以使用本领域已知的各种测定法进行评估。“死的”或“沉默的”Fc是已经被突变以在例如延长血清半衰期方面保持活性但不活化高亲和力Fc受体或对Fc受体具有降低的亲和力的Fc。

“天然序列Fc区”包含与天然存在的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括，例如，天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区域；天然序列人IgG3 Fc区域；和天然序列人IgG4 Fc区，以及其天然存在的变体。

“变体Fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰，优选地一个或多个氨基酸取代而不同于天然序列Fc区的氨基酸序列。优选地，变体Fc区与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比具有至少一个氨基酸取代，例如，在天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区中约一至约十个氨基酸取代，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代，优选地约一至约五个氨基酸取代。本文的变体Fc区优选地与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区具有至少约80％的同源性，最优选地与其具有至少约90％的同源性，更优选地与其具有至少约95％的同源性。

人IgG4 Fc氨基酸序列(UniProtKB编号P01861)在本文中提供为SEQ ID NO：45。沉默的IgG1描述于例如Boesch，A.W.等人的《IgG Fc结合相互作用的高度平行表征(Highlyparallel characterization of IgG Fc binding interactions)》《单克隆抗体(MAbs)》，2014，6(4)：第915-27页，其公开内容通过引用整体并入本文。

其它Fc变体也是可能的，包括但不限于缺失能够形成二硫键的区域，或在天然Fc的N-末端消除某些氨基酸残基，或向其中添加甲硫氨酸残基的变体。因此，在一些实施例中，抗体的一个或多个Fc部分可以在铰链区中包含一个或多个突变以消除二硫键。在又一实施例中，Fc的铰链区可以被完全去除。在另一实施例中，抗体可以包含Fc变体。

此外，通过取代(突变)、缺失或添加氨基酸残基以实现补体结合或Fc受体结合，可以构建Fc变体以去除或显著降低效应子功能。例如但不限于，缺失可以发生在补体结合位点，如Clq结合位点。国际专利公开号WO 97/34631和WO 96/32478中公开了制备这种免疫球蛋白Fc片段的序列衍生物的技术。另外，可以通过磷酸化、硫酸化、酰化、糖基化、甲基化、法尼基化、乙酰化、酰胺化等修饰Fc结构域。

在一些实施例中，抗体包含变体人IgG4 CH3结构域序列，其包含T366W突变，在本文中可任选地被称为IgG4 CH3结序列。在一些实施例中，抗体包含变体人IgG4 CH3结构域序列，其包含T366S突变、L368A突变和Y407V突变，在本文中可任选地被称为IgG4 CH3穴序列。本文所述的IgG4 CH3突变可以以任何合适的方式使用，以便在抗体二聚体中的第一单体的第一重链恒定区上放置“结(knob)”，并在抗体二聚体中的第二单体的第二重链恒定区上放置“穴(hole)”，从而促进抗体中所需的重链多肽亚基对的适当配对(异二聚化)。

在一些实施例中，抗体包含重链多肽亚基，重链多肽亚基包含变体人IgG4 Fc区，其包含S228P突变、F234A突变、L235A突变和T366W突变(结)。在一些实施例中，抗体包含重链多肽亚基，重链多肽亚基包含变体人IgG4 Fc区，其包含S228P突变、F234A突变、L235A突变、T366S突变、L368A突变和Y407V突变(穴)。

术语“包含Fc区的抗体(Fc-region-comprising antibody)”是指包含Fc区的抗体。Fc区的C-末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)可以例如在抗体的纯化期间或通过编码抗体的核酸的重组工程来去除。因此，根据本发明的具有Fc区的抗体可以包含具有或不具有K447的抗体。

本发明的各方面包括包含单价或二价构型的仅重链可变区的抗体。如本文所用，关于仅重链可变区结构域所用的术语“单价构型”是指仅存在一个仅重链可变区结构域，其具有单个结合位点。相反，关于仅重链可变区结构域使用的术语“二价构型”是指存在两个仅重链可变区结构域(每个具有单个结合位点)，并且通过接头序列连接(参见图4)。接头序列的非限制性实例在本文中进一步讨论，并且包括但不限于各种长度的GS接头序列。当仅重链可变区呈二价构型时，这两个仅重链可变区结构域中的每一个可以对相同抗原或对不同抗原(例如，对相同蛋白质上的不同表位；对两种不同的蛋白质，等等)具有结合亲和力。然而，除非另有特别说明，否则表示为“二价构型”的仅重链可变区应理解为含有通过接头序列连接的两个相同的仅重链可变区结构域，其中两个相同的仅重链可变区结构域中的每一个对相同的靶抗原具有结合亲和力。

本发明的各方面包括具有多特异性构型的抗体，其包括但不限于双特异性、三特异性等。多种方法和蛋白质构型是已知的并用于双特异性单克隆抗体(BsMAB)、三特异性抗体等。

通过重组融合两种或多种抗体的可变结构域，已经开发了多种生产多价人工抗体的方法。在一些实施例中，多肽上的第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域通过多肽接头连接。这种多肽接头的一个非限制性实例是GS接头，其具有四个甘氨酸残基，随后一个丝氨酸残基的氨基酸序列，并且其中该序列重复n次，其中n是1至约10范围内的整数，如2、3、4、5、6、7、8或9。此类接头的非限制性实例包括GGGGS(SEQ ID NO：23)(n＝1)和GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：24)(n＝2)。也可以使用其它合适的接头，并且描述于例如Chen等人《先进药物输送评论(Adv Drug Deliv Rev.)》2013年10月15日；65(10)：1357-69，其公开内容通过引用整体并入本文。

术语“三链抗体样分子”或“TCA”在本文中用于指抗体样分子，其包含三个多肽亚基、基本上由其组成或由其组成，其中两个多肽亚基包含单克隆抗体的一条重链和一条轻链，基本上由单克隆抗体的一条重链和一条轻链组成或由单克隆抗体的一条重链和一条轻链组成，或此类抗体链的功能性抗原结合片段，其包含抗原结合区和至少一个CH结构域。该重链/轻链对对第一抗原具有结合特异性。第三多肽亚基包含仅重链抗体、基本上由其组成或由其组成，其包含Fc部分，Fc部分包含CH2和/或CH3和/或CH4结构域，不存在CH1结构域；以及一个或多个抗原结合结构域(例如，两个抗原结合结构域)，其结合第二抗原的表位或第一抗原的不同表位，其中此类结合结构域衍生自抗体重链或轻链的可变区或与其具有序列同一性。此类可变区的部分可以由V_H和/或V_L基因节段、D和JH基因节段或JL基因节段编码。可变区可以由重排的V_HDJ_H、V_LDJ_H、V_HJ_L或V_LJ_L基因节段编码。

TCA结合化合物利用“仅重链抗体”或“重链抗体”或“重链多肽”，如本文所用，其意指包含重链恒定区CH2和/或CH3和/或CH4但不包含CH1结构域的单链抗体。在一个实施例中，重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分以及CH2和CH3结构域组成。在另一实施例中，重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH2结构域组成。在另一实施例中，重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH3结构域组成。其中CH2和/或CH3结构域被截短的重链抗体也包括在本文中。在另一实施例中，重链由抗原结合结构域和至少一个CH(CH1、CH2、CH3或CH4)结构域组成，但没有铰链区。仅重链抗体可以是二聚体形式，其中两条重链通过二硫键或其它方式彼此共价或非共价附接，并且可以任选地包括一个或多个CH结构域之间的不对称界面以促进多肽链之间的正确配对。重链抗体可属于IgG亚类，但属于其它亚类(如IgM、IgA、IgD和IgE亚类)的抗体也包括在本文中。在一个具体的实施例中，重链抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型，特别是IgG1亚型或IgG4亚型。TCA结合化合物的非限制性实例描述于例如WO2017/223111和WO2018/052503中，其公开内容通过引用整体并入本文。

重链抗体构成由骆驼科动物(例如，骆驼和美洲驼)产生的IgG抗体的约四分之一(Hamers-Casterman C.等人《自然》363，446-448(1993))。这些抗体由两条重链形成，但没有轻链。因此，可变抗原结合部分被称为VHH结构域，它代表最小的天然存在的完整抗原结合位点，长度仅为约120个氨基酸(Desmyter，A.等人《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》276，26285-26290(2001))。具有高特异性和亲和力的重链抗体可以通过免疫针对多种抗原生成(van der Linden，R.H.等人《生物化学与生物物理学报(Biochim.Biophys.Acta.)》1431，37-46(1999))，并且VHH部分可容易地在酵母中克隆和表达(Frenken，L.G.J.等人《生物技术杂志(J.Biotechnol.)》78，11-21(2000))。它们的表达水平、溶解度和稳定性显著高于经典的F(ab)或Fv片段(Ghahroudi，M.A.等人《欧洲生化学会联合会快报(FEBS Lett.)》414，521-526(1997))。鲨鱼也被证明在其抗体中具有单一VH样结构域，称为VNAR。(Nuttall等人《欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)》270，3543-3554(2003)；Nuttall等人《功能和生物信息学(Function and Bioinformatics)》55，187-197(2004)；Dooley等人，《分子免疫学(Molecular Immunology)》40，25-33(2003))。

术语“CD3”指人CD3蛋白多亚基复合物。CD3蛋白多亚基复合物由6条不同的多肽链组成。这些包括CD3γ链(SwissProt P09693)、CD3δ链(SwissProtP04234)、两条CD3ε链(SwissProt P07766)和一条CD3ζ链同型二聚体(SwissProt 20963)，并且其与T细胞受体α和β链缔合。除非另有说明，否则术语“CD3”包括由细胞(包括T细胞)天然表达或可在用编码那些多肽的基因或cDNA转染的细胞上表达的任何CD3变体、同种型和物种同系物。

“BCMA×CD3抗体”是多特异性仅重链抗体，例如双特异性仅重链抗体，其包含两个不同的抗原结合区，其中一个与抗原BCMA特异性结合，另一个与CD3特异性结合。

本文所用的术语“BCMA”涉及人B细胞成熟抗原，也称为BCMA、CD269和TNFRSF17(UniProt Q02223)，其是优先在分化的浆细胞中表达的肿瘤坏死受体超家族的成员。根据UniProt，人BCMA的细胞外结构域由氨基酸1至54(或5至51)组成。

术语“仅抗BCMA重链抗体”和“仅BCMA重链抗体”在本文中用于指免疫特异性结合BCMA的如上文定义的仅重链抗体。

相对于参考多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”被定义为在比对序列并引入缺口(如果需要)以获得最大百分比序列同一性且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分之后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于测定氨基酸序列同一性百分比的比对可以通过本领域技术人员已知的各种方式实现，例如使用公众可获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在被比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2生成％氨基酸序列同一性值。

“分离的”抗体是已经从其天然环境的组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染组分是会干扰抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在优选的实施例中，抗体将被纯化(1)到大于抗体重量的95％，如通过Lowry方法测定的，最优选地大于99重量％，(2)通过使用旋转杯测序仪达到足以N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)通过SDS-PAGE在还原或非还原条件下使用考马斯蓝或优选地银染达到均一性。分离的抗体包括重组细胞内原位的抗体，因为抗体天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常通过至少一个纯化步骤制备分离的抗体。

本发明的抗体包括多特异性抗体。多特异性抗体具有一种以上的结合特异性。术语“多特异性”具体包括“双特异性”和“三特异性”，以及高阶独立特异性结合亲和力，如高阶多表位特异性，以及四价抗体和抗体片段。术语“多特异性抗体”、“仅多特异性重链抗体”、“多特异性重链抗体”和“多特异性UniAb^TM”在本文中以最广泛的含义使用，并且涵盖具有多于一种结合特异性的所有抗体。

“表位”是抗原分子表面上与单个抗体分子结合的位点。通常抗原具有几个或许多不同的表位并与许多不同的抗体反应。该术语具体包括线性表位和构象表位。

“表位作图”是鉴定抗体在其靶抗原上的结合位点或表位的过程。抗体表位可以是线性表位或构象表位。线性表位由蛋白质中氨基酸的连续序列形成。构象表位由蛋白质序列中不连续但在蛋白质折叠成其三维结构时结合在一起的氨基酸形成。

本文所用的术语“化合价”是指抗体分子中特定数目的结合位点。

“单价”抗体具有一个结合位点。因此，单价抗体也是单特异性的。

“多价”抗体具有两个或多个结合位点。因此，术语“二价”、“三价”和“四价”分别是指存在两个结合位点、三个结合位点和四个结合位点。因此，根据本发明的双特异性抗体至少是二价的，并且可以是三价的、四价的或多价的。根据本发明实施例的二价抗体可以具有两个结合相同表位(即，二价单表位)或两个不同表位(即，二价双表位)的结合位点。

多种方法和蛋白质构型是已知的并用于制备双特异性单克隆抗体(BsMAB)、三特异性抗体等。

术语“三链抗体样分子”或“TCA”在本文中用于指抗体样分子，其包含三个多肽亚基、基本上由其组成或由其组成，其中两个多肽亚基包含单克隆抗体的一条重链和一条轻链、基本上由单克隆抗体的一条重链和一条轻链组成或由单克隆抗体的一条重链和一条轻链组成，或此类抗体链的功能性抗原结合片段，其包含抗原结合区和至少一个CH结构域。该重链/轻链对对第一抗原具有结合特异性。第三多肽亚基包含仅重链抗体、基本上由其组成或由其组成，其包含Fc部分和抗原结合结构域，Fc部分包含CH2和/或CH3和/或CH4结构域，不存在CH1结构域，抗原结合结构域结合第二抗原的表位或第一抗原的不同表位，其中此类结合结构域衍生自抗体重链或轻链的可变区或与其具有序列同一性。此类可变区的部分可以由V_H和/或V_L基因节段、D和J_H基因节段或J_L基因节段编码。可变区可以由重排的V_HDJ_H、V_LDJ_H、V_HJ_L或V_LJ_L基因节段编码。TCA蛋白利用上文定义的仅重链抗体。

本文所用的术语“人抗体”包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本文的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基，例如通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变引入的突变。术语“人抗体”具体包括具有人重链可变区序列的仅重链抗体，其由转基因动物(如转基因大鼠或小鼠)产生，特别是由如上定义的UniRats^TM产生的UniAbs^TM。

“嵌合抗体”或“嵌合免疫球蛋白”是指包含来自至少两个不同Ig基因座的氨基酸序列的免疫球蛋白分子，例如包含由人Ig基因座编码的部分和由大鼠Ig基因座编码的部分的转基因抗体。嵌合抗体包括具有非人Fc区或人工Fc区的转基因抗体和人独特型抗体。此类免疫球蛋白可以从本发明的动物中分离，这些动物已经被工程化以产生此类嵌合抗体。

如本文所用，术语“效应细胞”是指与免疫应答的认知和活化阶段相反，参与免疫应答的效应阶段的免疫细胞。一些效应细胞表达特异性Fc受体并执行特异性免疫功能。在一些实施例中，如天然杀伤细胞等效应细胞能够诱导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。例如，表达FcR的单核细胞和巨噬细胞参与靶细胞的特异性杀伤和将抗原呈递给免疫系统的其它组分，或与呈递抗原的细胞结合。在一些实施例中，效应细胞可以吞噬靶抗原或靶细胞。

“人效应细胞”是表达如T细胞受体或FcR等受体并执行效应子功能的白细胞。优选地，细胞至少表达FcγRIII并执行ADCC效应子功能。介导ADCC的人白细胞的实例包括天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和中性粒细胞；优选地NK细胞。效应细胞可以从其天然来源中分离，例如，如本文所述的血液或PBMC。

术语“免疫细胞”在本文中以最广泛的含义使用，包括但不限于髓样或淋巴样来源的细胞，例如淋巴细胞(如B细胞和T细胞，包括溶细胞性T细胞(CTL))、杀伤细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、多形核细胞，如中性粒细胞、粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞。

抗体“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性。抗体效应子功能的实例包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调等。

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”和“ADCC”是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如，天然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体并随后引起靶细胞裂解。介导ADCC的原代细胞、NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达总结在Ravetch和Kinet《免疫学年度评论(Annu.Rev.Immunol)》9：457-92(1991)第464页的表3中。为了评估感兴趣分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定，如美国专利第5,500,362号或第5,821,337号中描述的。可用于此类测定的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。替代地或附加地，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在如Clynes等人《美国国家科学院院刊(PNAS(USA))》95：652-656(1998)公开的动物模型中。

“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指分子在补体存在下裂解靶的能力。补体活化途径由补体系统的第一组分(C1q)与和同族抗原复合的分子(例如抗体)的结合启动。为了评估补体活化，可以进行CDC测定，例如如Gazzano-Santoro等人，《免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)》202：163(1996)中描述的。

“结合亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1∶1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法测量。低亲和力抗体通常缓慢地结合抗原并且倾向于容易解离，而高亲和力抗体通常更快地结合抗原并且倾向于保持结合。

如本文所用，“Kd”或“Kd值”是指使用Octet QK384仪器(Fortebio公司，加利福尼亚州门洛帕克)以动力学模式通过生物层干涉测量法测定的解离常数。例如，用小鼠-Fc融合抗原装载抗小鼠Fc传感器，然后浸入含抗体的孔中以测量浓度依赖性缔合速率(kon)。在最后步骤中测量抗体解离速率(koff)，其中将传感器浸入仅含有缓冲液的孔中。Kd是koff/kon的比值。(更多细节参见Concepcion，J等人，《组合化学和高通量筛选(Comb Chem HighThroughput Screen)》，12(8)，791-800，2009)。

本文所用的术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等通常是指获得所需的药理学和/或生理学效果。该作用在完全或部分预防疾病或其症状方面可以是预防性的和/或在部分或完全治愈疾病和/或由该疾病引起的副作用方面可以是治疗性的。本文所用的“治疗”涵盖对哺乳动物疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防疾病在可能易患该疾病但尚未诊断为患有该疾病的受试者中发生；(b)抑制疾病，即阻止其发展；或(c)缓解疾病，即引起疾病消退。治疗剂可以在疾病或损伤发作之前、期间或之后施用。正在进行的疾病的治疗是特别感兴趣的，其中该治疗稳定或减少患者的不良临床症状。这种治疗最好在受影响组织的功能完全丧失之前进行。受试者疗法可以在疾病的症状阶段期间施用，并且在一些情况下在疾病的症状阶段之后施用。

“治疗有效量”是指给予受试者治疗益处所必需的活性剂的量。例如，“治疗有效量”是诱导、改善或以其它方式引起与疾病相关的病理学症状、疾病进展或生理状况的改善或改善对病症的抵抗力的量。

本发明上下文中的术语“B细胞赘生物”或“成熟B细胞赘生物”包括但不限于所有淋巴样白血病和淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、幼淋巴细胞性白血病、前体B成淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、套细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt′slymphoma)、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、多发性骨髓瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、如浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤等浆细胞赘生物、单克隆免疫球蛋白沉积病、重链病、MALT淋巴瘤、结节性边缘B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、原发性渗出性淋巴瘤和AIDS相关的非霍奇金淋巴瘤。

术语“以BCMA表达为特征”广泛地指其中BCMA表达与作为疾病或病症的特征的一种或多种病理过程相关或有关的任何疾病或病症。此类病症包括但不限于B细胞瘤。

术语“受试者”、“个体”和“患者”在本文中可互换使用，是指正在评估治疗和/或正在治疗的哺乳动物。在实施例中，哺乳动物是人。术语“受试者”、“个体”和“患者”涵盖但不限于患有癌症的个体、患有自身免疫性疾病的个体、患有病原体感染的个体等。受试者可以是人，但也包括其它哺乳动物，特别是用作人类疾病的实验室模型的那些哺乳动物，例如小鼠、大鼠等。

术语“药物制剂”是指这样的制剂，其形式使得活性成分的生物活性是有效的，并且其不含对将施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的额外组分。此类制剂是无菌的。“药学上可接受的”赋形剂(媒介物、添加剂)是可以合理地施用于受试哺乳动物以提供所用活性成分的有效剂量的那些。

“无菌”制剂是无菌的或不含或基本上不含所有活微生物及其孢子。“冷冻”制剂是在低于0℃的温度下的制剂。

“稳定”制剂是其中的蛋白质在储存时基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。优选地，该制剂在储存时基本上保持其物理和化学稳定性，以及其生物活性。通常基于制剂的预期保质期选择储存期。在本领域中有各种用于测量蛋白质稳定性的分析技术，并例如在《肽和蛋白质药物递送(Peptide and Protein DrugDelivery)》247-301Vincent Lee编辑，马塞尔·德克尔出版社(Marcel Dekker，Inc.)，纽约州纽约出版(1991)和Jones.A.《先进药物输送评论(Adv.Drug Delivery Rev.)》10：29-90)(1993)中综述。稳定性可以在选定的温度和选定的时间内测量。可以以各种不同的方式定性地和/或定量地评估稳定性，包括评估聚集体形成(例如使用尺寸排阻色谱法、通过测量浊度，和/或通过目视检查)；通过使用阳离子交换层析、图像毛细管等电聚焦(icIEF)或毛细管区带电泳来评估电荷异质性；氨基末端或羧基末端序列分析；质谱分析；SDS-PAGE分析以比较减少的和完整的抗体；肽图谱(例如胰蛋白酶或LYS-C)分析；评估抗体的生物活性或抗原结合功能；等等。不稳定可能涉及以下任何一项或多项：聚集、脱酰胺(例如，Asn脱酰胺)、氧化(例如，Met氧化)、异构化(例如，Asp异构化)、剪切/水解/片段化(例如，铰链区片段化)、琥珀酰亚胺形成、未配对的半胱氨酸、N-末端延伸、C-末端加工、糖基化差异等。

本文使用的缩写包括以下：β(末端相消除速率常数)；ADA(抗药物抗体)；ADCC(抗体依赖性细胞毒性)；AE(不良事件)；ALP(碱性磷酸酶)；ALT(丙氨酸氨基转移酶)；ANC(绝对中性粒细胞计数)；APRIL(A增殖诱导配体)；AST(天冬氨酸转氨酶)；AUC(浓度-时间曲线下面积)；AUCt(从时间零点到最后可测量浓度的时间的血清浓度-时间曲线下面积)；BCMA(B细胞成熟抗原(也称为TNFRSF17))；BUN(血尿素氮)；CAR(嵌合抗原受体)；CBR(临床受益率)；CI(置信区间)；CL(清除率)；Cmax(最大观测血清浓度)；CNS(中枢神经系统)；CR(完全应答)；CRS(细胞因子释放综合征)；Css(稳态浓度)；CT(计算机断层扫描)；CTCAE(不良事件通用术语标准)；DLT(剂量限制性毒性)；DNA(脱氧核糖核酸)；DOR(应答持续时间)；ECG(心电图)；ECHO(超声心动图)；ECOG(东部肿瘤协作组)；eCRF(电子病例报告表)；EDC(电子数据捕获)；EE(可评估疗效)；ELISA(酶联免疫吸附测定)；EOT(治疗结束)；FFPE(福尔马林固定石蜡包埋)；FIH(人体首次)；FISH(荧光原位杂交)；FLC(游离轻链)；GCP(良好临床实践)；HAV-IgM(甲肝病毒免疫球蛋白M)；HBsAg(乙型肝炎表面抗原)；HBV(乙型肝炎病毒)；HCV(丙型肝炎病毒)；HCVAb(丙型肝炎病毒抗体)；HIV(人类免疫缺陷病毒)；IB(研究者手册)；ICH(国际协调会议)；IEC(独立伦理委员会)；IMiD(免疫调节酰亚胺)；IMWG(国际骨髓瘤工作组)；INR(国际标准化比率)；IRB(机构审查委员会)；IV(静脉内输注)；LDH(乳酸脱氢酶)；mAb(单克隆抗体)；MABEL(最小预期生物效应水平)；MedDRA(监管活动医学词典)；MM(多发性骨髓瘤)；MR(轻微应答)；MRI(磁共振成像)；MTD(最大耐受剂量)；MUGA(多门控采集扫描)；NCI(国家癌症研究所)；MTD(最大耐受剂量)；NCA(非房室分析)；ORR(客观应答率)；OS(总存活期)；PBMC(外周血单核细胞)；PC(阳性对照)；PET(正电子发射断层摄影术)；PI(蛋白酶体抑制剂)；PD(药效学)；PK(药代动力学)；PFS(无进展存活)；PR(部分应答)；PT(凝血酶原时间)；Q3W(每3周一次)；QTc(针对心率校正的QT间期)；RNA(核糖核酸)；RP2D(推荐的第2阶段剂量)；SAE(严重不良事件)；sCR(严格的完全应答)；SIFE(血清免疫固定电泳)；SMG(安全监控组)；SPEP(血清蛋白电泳)；t_1/2(终末相消除半衰期)；T-BsAbs(T细胞参与双特异性抗体)；TEAE(治疗突发不良事件)；Tmax(达到最大观测血清浓度的时间)；Treg细胞(调节性T细胞)；TTP(进展时间)；TTR(应答时间)；UIFE(尿液免疫固定电泳)；ULN(正常值上限)；UPEP(尿蛋白电泳)；US(美国)；V1(中央室容积)；VGPR(非常好的部分应答)。

II.具体描述

TNB-383B

本发明涉及通过向有需要的患者施用双特异性三链抗体样分子(TCA)来治疗多发性骨髓瘤的方法。在一个优选的实施例中，TCA被称为TNB-383B，并且包含：与轻链可变结构域(VL)配对的抗CD3 VH结构域，其中VH结构域和VL结构域一起对CD3具有结合亲和力；二价构型的对BCMA具有结合亲和力的仅重链抗体的重链可变结构域；以及包含第一重链恒定区序列和第二重链恒定区序列的变体人IgG4 Fc结构域，第一重链恒定区序列包含S228P突变、F234A突变、L235A突变和T366W突变(结)，第二重链恒定区序列包含S228P突变、F234A突变、L235A突变、T366S突变、L368A突变和Y407V突变(穴)。

在一些实施例中，多特异性抗体包含与轻链可变结构域配对的CD3结合VH结构域。在某些实施例中，轻链是固定轻链。在一些实施例中，CD3结合VH结构域在人VH构架中包含SEQ ID NO：1的CDR1序列、SEQ ID NO：2的CDR2序列、以及SEQ ID NO：3的CDR3序列。在一些实施例中，固定轻链在人VL构架中包含SEQ ID NO：4的CDR1序列、SEQ ID NO：5的CDR2序列、以及SEQ ID NO：6的CDR3序列。CD3结合VH结构域和轻链可变结构域一起对CD3具有结合亲和力。在一些实施例中，CD3结合VH结构域包含SEQ ID NO：7的重链可变区序列。在一些实施例中，CD3结合VH结构域包含与SEQ ID NO：7的重链可变区序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％百分比同一性的序列。在一些实施例中，固定轻链包含SEQ ID NO：8的轻链可变区序列。在一些实施例中，固定轻链包含与SEQ ID NO：8的重链可变区序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％百分比同一性的序列。

包含上述CD3结合VH结构域和轻链可变结构域的多特异性抗体具有有利的性质，例如，如PCT公开号WO2018/052503中所述，其公开内容通过引用整体并入本文。

表1.抗CD3重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列。

表2.抗CD3重链和轻链可变区氨基酸序列。

表3：具有沉默突变的人IgG4 Fc区序列。

表4：附加序列。

表5：附加序列。

在一些实施例中，提供了双特异性或多特异性抗体，其可以具有本文讨论的任何构型，包括但不限于双特异性三链抗体样分子。在一些实施例中，双特异性抗体可以包含至少一个对BCMA具有结合特异性的重链可变区，和至少一个对不同蛋白质(例如，CD3)具有结合特异性的重链可变区。在一些实施例中，双特异性抗体可以包含对第一抗原具有结合特异性的重链/轻链对，和来自仅重链抗体的重链，其包含Fc部分和抗原结合结构域，Fc部分包含CH2和/或CH3和/或CH4结构域，不存在CH1结构域，抗原结合结构域以单价或二价构型结合第二抗原的表位或第一抗原的不同表位。在一个具体实施例中，双特异性抗体包含对效应细胞上的抗原(例如，T细胞上的CD3蛋白)具有结合特异性的重链/轻链对，和来自包含对BCMA具有结合特异性的呈单价或二价构型的抗原结合结构域的仅重链抗体的重链。

在一些实施例中，当本发明的抗体是双特异性抗体时，抗体的一条臂(一个结合部分或一个结合单位)对人BCMA具有特异性，而另一条臂可以对靶细胞、肿瘤相关抗原、例如整联蛋白等靶向抗原、病原体抗原、检查点蛋白等具有特异性。靶细胞具体包括癌细胞。在一些实施例中，抗体的一条臂(一个结合部分或一个结合单位)对人BCMA具有特异性，而另一条臂对CD3具有特异性。

在一些实施例中，抗体包含抗CD3轻链多肽、抗CD3重链多肽和抗BCMA重链多肽，该抗CD3轻链多肽包含与SEQ ID NO：10的序列连接的SEQ ID NO：8的序列，该抗CD3重链多肽包含SEQ ID NO：12、13、14、15、18或19中任一个的序列，该抗BCMA重链多肽包含SEQ ID NO：20、21或22中任一个的序列。在一个优选的实施例中，抗体是包含第一多肽、第二多肽和第三多肽的TCA，第一多肽包含SEQ ID NO：11，第二多肽包含SEQ ID NO：18，第三多肽包含SEQID NO：20、21或22。在一个优选的实施例中，抗体是包含第一多肽、第二多肽和第三多肽的TCA，第一多肽包含SEQ ID NO：11，第二多肽包含SEQ ID NO：18，第三多肽包含SEQ ID NO：20。在一个优选的实施例中，抗体是由第一多肽、第二多肽和第三多肽组成的TCA，第一多肽由SEQ ID NO：11组成，第二多肽由SEQ ID NO：18组成，第三多肽由SEQ ID NO：21组成。在一个优选的实施例中，抗体是包含第一多肽、第二多肽和第三多肽的TCA，第一多肽包含SEQID NO：11，第二多肽包含SEQ ID NO：18，第三多肽包含SEQ ID NO：22。在一个优选的实施例中，抗体是由第一多肽、第二多肽和第三多肽组成的TCA，第一多肽由SEQ ID NO：11组成，第二多肽由SEQ ID NO：18组成，第三多肽由SEQ ID NO：20组成。在一个优选的实施例中，TNB-383B由第一多肽、第二多肽和第三多肽组成，第一多肽由SEQ ID NO：11组成，第二多肽由SEQ ID NO：18组成，第三多肽由SEQ ID NO：20组成。

抗体的制备

本发明的多特异性抗体可以通过本领域已知的方法制备。在优选的实施例中，本文的重链抗体由转基因动物产生，包括转基因小鼠和大鼠，优选地其中内源性免疫球蛋白基因被敲除或失效的大鼠。在优选的实施例中，本文的重链抗体在UniRat^TM中产生。UniRat^TM使其内源性免疫球蛋白基因沉默，并使用人免疫球蛋白重链转座来表达多样化的天然优化的全人HCAb库。虽然可以使用各种技术敲除或沉默大鼠中的内源性免疫球蛋白基因座，但在UniRat^TM中，使用锌指(内切)核酸酶(ZNF)技术使内源性大鼠重链J-基因座、轻链Cκ基因座和轻链Cλ基因座失活。用于显微注射到卵母细胞中的ZNF构建体可以产生IgH和IgL敲除(KO)系。详情参见例如Geurts等人，2009，《科学(Science)325：433。Menoret等人，2010，《欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol.)》40：2932-2941报告了Ig重链敲除大鼠的特征。ZNF技术的优点在于，通过高达几kb的缺失来沉默基因或基因座的非同源末端连接也可以提供用于同源整合的靶位点(Cui等人，2011，《自然·生物技术(NatBiotechnol)》29：64-67)。在UniRat^TM中产生的人重链抗体被称为UniAbs^TM，可以结合不能用常规抗体攻击的表位。它们的高特异性、亲和力和小尺寸使得它们对于单特异性和多特异性应用是理想的。

除了UniAbs^TM，本文特别包括缺乏骆驼科VHH构架和突变的仅重链抗体，以及它们的功能性VH区。此类仅重链抗体可以例如在包含例如WO2006/008548中描述的全人类仅重链基因座的转基因大鼠或小鼠中产生，但是也可以使用其它转基因哺乳动物，如兔、豚鼠、大鼠，优选地大鼠和小鼠。仅重链抗体，包括其VHH或VH功能片段，也可以通过重组DNA技术，通过在合适的真核或原核宿主中表达编码核酸来产生，这些宿主包括例如哺乳动物细胞(例如，CHO细胞)、大肠杆菌(E.coli)或酵母。

仅重链抗体的结构域结合了抗体和小分子药物的优点：可以是单价或多价的；具有低毒性；并且制造成本低。由于它们的小尺寸，这些结构域易于施用，包括口服或局部施用，其特征在于高稳定性，包括胃肠稳定性；并且它们的半衰期可以根据所需用途或适应症进行调整。另外，HCAb的VH和VHH结构域可以以成本有效的方式制造。

在一个具体的实施例中，本发明的重链抗体，包括UniAbs^TM，在FR4区的第一位置(根据Kabat编号系统的氨基酸位置101)具有天然氨基酸残基，其被另一个氨基酸残基取代，另一个氨基酸残基能够破坏包含在该位置的天然氨基酸残基或与该位置的天然氨基酸残基缔合的表面暴露的疏水性贴剂。这种疏水性贴剂通常包埋在与抗体轻链恒定区的界面中，但在HCAb中变得暴露在表面，并且至少部分用于HCAb的不需要的聚集和轻链缔合。取代的氨基酸残基优选地带电荷，更优选地带正电荷，如赖氨酸(Lys，K)、精氨酸(Arg，R)或组氨酸(His，H)，优选地精氨酸(R)。在优选的实施例中，来源于转基因动物的仅重链抗体在101位含有Trp到Arg的突变。所得的HCAb优选地在没有聚集的生理条件下具有高抗原结合亲和力和溶解度。

作为本发明的一部分，在ELISA蛋白和细胞结合测定中鉴定了具有来自UniRat^TM动物的结合人CD3和BCMA的独特序列的人重链抗体(UniAb^TM)。所鉴定的重链可变区(VH)序列(参见，例如，表2、4和5)对蛋白结合和/或对表达靶蛋白(例如，CD3或BCMA)的细胞的结合是阳性的，并且对不表达靶蛋白的细胞的结合都是阴性的。

与靶蛋白上的非重叠表位结合的重链抗体，例如UniAbs^TM，可以通过竞争结合测定来鉴定，如酶联免疫测定(ELISA测定)或流式细胞术竞争结合测定。例如，可以使用结合靶抗原的已知抗体和感兴趣的抗体之间的竞争。通过使用这种方法，可以将一组抗体分成与参考抗体竞争的抗体和不与参考抗体竞争的抗体。非竞争性抗体被鉴定为结合不与参考抗体结合的表位重叠的独特表位。通常，固定一种抗体，结合抗原，并且在ELISA测定中测试第二种标记的(例如，生物素化的)抗体结合捕获的抗原的能力。这也可以通过使用表面等离子体共振(SPR)平台，包括ProteOn XPR36(伯乐公司(BioRad，Inc))、Biacore 2000和Biacore T200(GE医疗生命科学部(GE Healthcare Life Sciences))，和MX96 SPR成像仪(Ibis科技公司)，以及在如Octet Red384和Octet HTX(颇尔富迪公司(ForteBio，PallInc))等生物层干涉测量平台上进行。更多细节参见本文的实例。

典型地，通过标准技术，如通过上述竞争结合试验测定，如果抗体导致参考抗体与靶抗原的结合减少约15至100％，则抗体与参考抗体“竞争”。在各种实施例中，相对抑制为至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或更高。

使用方法

本文所述的抗体和药物组合物可用于治疗以靶蛋白(例如，CD3、BCMA)表达为特征的疾病和病况，包括但不限于本文进一步描述的病况和疾病。在优选的实施例中，本文所述的抗体和药物组合物可用于治疗以BCMA表达为特征的疾病和病况。

本文包含抗BCMA抗体的药物组合物可用于治疗B细胞相关病症，包括B细胞和浆细胞恶性肿瘤和以BCMA表达或过表达为特征的自身免疫性病症。

此类B细胞相关病症包括B细胞和浆细胞恶性肿瘤和自身免疫性病症，包括但不限于多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、小非裂解细胞淋巴瘤、地方性伯基特氏淋巴瘤、散发性伯基特氏淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、结外粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、结节性单核细胞样B细胞淋巴瘤、脾淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、免疫母细胞性淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、肺B细胞血管中心性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、不确定恶性潜能的B细胞增殖、淋巴瘤样肉芽肿病、移植后淋巴组织增生性病症、免疫调节性病症、类风湿性关节炎、重症肌无力、特发性血小板减少性紫癜、抗磷脂综合征、恰加斯氏病(Chagas′disease)、格雷夫斯病(Grave′s disease)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)、结节性多动脉炎、舍格伦综合征(Sjogren′s syndrome)、寻常性天疱疮、硬皮病、多发性硬化、抗磷脂综合征、ANCA相关血管炎、古德巴斯捷氏病(Goodpasture′s disease)、川崎病(Kawasaki disease)、自身免疫性溶血性贫血和快速进行性肾小球肾炎、重链病、原发性或免疫细胞相关淀粉样变性或单克隆丙种球蛋白病。

以BCMA表达为特征的浆细胞病症包括多发性骨髓瘤(MM)。MM是一种B细胞恶性肿瘤，其特征在于骨髓区室中异常浆细胞的单克隆扩增和累积。目前对MM的治疗经常导致缓解，但几乎所有患者最终都会复发并死亡。有大量证据表明，在异基因造血干细胞移植的情况下，免疫介导的骨髓瘤细胞消除；然而，这种方法的毒性很高，很少有患者治愈。尽管一些单克隆抗体已经在临床前研究和早期临床试验中显示出治疗MM的前景，但是尚未最终证实任何单克隆抗体治疗MM的一致临床疗效。因此，非常需要新的疗法，包括用于MM的免疫疗法(参见，例如，Carpenter等人，《临床癌症研究》2013，19(8)：2048-2060)。

BCMA通过其增殖诱导配体APRIL的过表达或活化，已知其在体内促进人多发性骨髓瘤(MM)的进展。还显示BCMA促进小鼠中携带p53突变的异种移植MM细胞的体内生长。由于APRIL/BCMA途径的活性通过肿瘤细胞与其支持性骨髓微环境之间的双向相互作用在MM发病机理和耐药性中起重要作用，因此BCMA已被鉴定为治疗MM的靶。更多详情参见，例如，Yu-Tsu Tai等人，《血液(Blood)》2016；127(25)：3225-3236。

涉及浆细胞即表达BCMA的另一种B细胞病症是系统性红斑狼疮(SLE)，也称为狼疮。SLE是一种全身性的自身免疫性疾病，其可以影响身体的任何部分，并且表现为免疫系统攻击身体自身的细胞和组织，导致慢性炎症和组织损伤。这是一种III型超敏反应，其中抗体-免疫复合物沉淀并引起进一步的免疫应答(Inaki和Lee，《自然综说风湿病学(NatRev Rheumatol)》2010；6：326-337)。

本发明的仅抗BCMA重链抗体(UniAb)可用于开发治疗MM、SLE和其它以BCMA表达为特征的B细胞病症或浆细胞病症的治疗剂，如上面列出的那些。特别地，本发明的仅抗BCMA重链抗体(UniAb)是单独或与其它MM治疗联合治疗MM的候选药物。

用于治疗疾病的本发明组合物的有效剂量根据许多不同因素而变化，包括施用方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、施用的其它药物，以及治疗是预防性的还是治疗性的。通常，患者是人，但也可以治疗非人哺乳动物，例如，如狗、猫、马等伴侣动物、如兔、小鼠、大鼠等实验室哺乳动物，等等。可以滴定治疗剂量以优化安全性和疗效。

典型地，组合物被制备为可注射的液体溶液或悬浮液；也可以制备适于在注射前溶解于或悬浮于液体媒介物中的固体形式。本文的药物组合物适于直接或在固体(例如，冻干的)组合物重构后静脉内或皮下施用。制剂也可以被乳化或包封在脂质体或微粒中，如聚丙交酯、聚乙交酯或共聚物，用于增强佐剂效应，如上所述。Langer，《科学》249：1527，1990和Hanes，《先进药物输送评论》28：97-119，1997。本发明的活性剂可以以长效注射剂或植入制剂的形式施用，其可以以允许活性成分持续或脉冲释放的方式配制。药物组合物通常配制为无菌的、基本上等渗的并且完全符合美国食品和药物管理局(U.S.Food and DrugAdministration)的所有良好生产规范(GMP)规定。

本文所述的抗体和抗体结构的毒性可以通过标准药学方法在细胞培养物或实验动物中测定，例如通过测定LD50(使群体的50％致死的剂量)或LD100(使群体的100％致死的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数。从这些细胞培养测定和动物研究中获得的数据可用于配制对人体无毒的剂量范围。本文所述抗体的剂量优选地在包括具有很少或没有毒性的有效剂量的循环浓度范围内。剂量可以在该范围内变化，这取决于所用的剂型和所用的施用途径。确切的制剂、施用途径和剂量可以由个体医师根据患者的病况来选择。

用于施用的组合物将通常包含溶解在药学上可接受的载体，优选地水性载体中的抗体或其它试剂(例如，另一种消融剂)。可以使用各种水性载体，例如缓冲盐水等。这些溶液是无菌的并且通常不含不期望的物质。这些组合物可以通过常规的公知灭菌技术灭菌。组合物可以含有接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。活性剂在这些制剂中的浓度可以广泛地变化，并且将主要基于流体体积、粘度、体重等根据所选择的特定施用模式和患者的需要进行选择(例如，《雷明登氏药学全书(Remington′s Pharmaceutical Science)》(第15版，1980)和Goodman和Gillman，《治疗学的药理学基础(The Pharmacological Basisof Therapeutics)》(Hardman等人编辑，1996))。

本发明的各方面包括通过向先前已经接受蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)治疗的患者施用TNB-383B作为第四线疗法来治疗复发性或难治性多发性骨髓瘤的方法。在一些实施例中，TNB-383B作为复发性或难治性多发性骨髓瘤的第四线疗法以10mg至100mg范围内的固定剂量施用于先前已经用蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)治疗的患者，每三周施用一次。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以10mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以20mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以30mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以40mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以50mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以60mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以70mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以80mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以90mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，一种方法包含将TNB-383B作为第四线疗法以100mg的固定剂量施用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者，每3周(21天)施用一次，该患者已经接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

在一些实施例中，该方法进一步包含联合疗法，其中将一种或多种额外的多发性骨髓瘤治疗，例如一种或多种化疗药物与TNB-383B联合施用于患者，如上所述。

包含本发明的活性剂及其制剂和使用说明书的试剂盒也在本发明的范围内。试剂盒可以进一步含有至少一种额外的试剂，例如化疗药物等。试剂盒通常包括指示试剂盒内容物的预期用途的标签。本文所用的术语“标签”包括在试剂盒上或与试剂盒一起提供的，或以其它方式伴随试剂盒的任何文字或记录材料。

本发明的各方面包括用于评估TNB-383B在患有复发性或难治性多发性骨髓瘤(MM)的受试者中的安全性、药物动力学(PK)、药效学(PD)和临床活性的方法，该患者已接受至少3种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38 mAb(例如，达雷木单抗)。“治疗线/方案”定义为不受进行性疾病中断的治疗过程(包含至少1个周期)，除非在药物由于毒性而不耐受的情况下。

本发明的各方面包括涉及单一疗法剂量递增方案(A组)和单一疗法剂量扩展方案(B组)的方法(图1)。

单一疗法剂量递增(A组)：

在一些实施例中，该方法涉及评估每三周一次(Q3w，21天周期)施用单药剂TNB-383B疗法在患有复发性/难治性MM的患者中的安全性、耐受性、PK和PD曲线，该患者已接受至少3种既往治疗线，包括PI、IMiD和抗CD38 mAb(例如，达雷木单抗)。

在一些实施例中，该方法涉及在21天的周期中施用单剂量的TNB-383B持续至少一个周期。在一些实施例中，TNB-383B剂量选自由以下组成的组：25μg、75μg、200μg、600μg、1,800μg、5,400μg、10,000μg、20,000μg、30,000μg、40,000μg、50,000μg、60,000μg、70,000μg、80,000μg、90,000μg、100,000μg、110,000μg、120,000μg、130,000μg、140,000μg、150,000μg、160,000μg、170,000μg和180,000μg。

在一些实施例中，该方法涉及以第一剂量的Q3W给药方案开始的剂量递增，然后对患者施用增加的剂量。在某些实施例中，剂量递增视患者在第一剂量下无药物相关毒性(例如，2+级毒性)的证据而定。在一些实施例中，该方法涉及替代的给药方案。例如，在一些实施例中，可以将给药切换到不同的频率(例如，每4周一次)，或者可以从给药方案中始终消除一些周期(例如，每计划的第三个周期将被取消)。如果将给药方案切换为更频繁地发生，则任何剂量修改都不应导致预测的稳态浓度(CSS)或Cmax大于针对下一个较低剂量水平所鉴定的那些。也可以基于数据审查，在连续2天内分次给药指定剂量(以减少细胞因子释放)。在一些实施例中，剂量限制性毒性(DLT)标准用于作出关于剂量递增的决定。最大耐受剂量(MTD)定义为6名可评估受试者中＜2名出现DLT的最高剂量水平。在一些实施例中，剂量递增是基于临床上显著的毒性、DLT事件、PK和PD发现(当可用时)，并且通过安全性监测器来实施。在一些实施例中，MTD选自由以下组成的组：25μg、75μg、200μg、600μg、1,800μg、5,400μg、10,000μg、20,000μg、30,000μg、40,000μg、50,000μg、60,000μg、70,000μg、80,000μg、90,000μg、100,000μg、110,000μg、120,000μg、130,000μg、140,000μg、150,000μg、160,000μg、170,000μg和180,000μg。

在一些实施例中，如果给定群组中的多个(例如，前3个)DLT可评估受试者(或最低3个剂量水平的第一可评估受试者)在第一周期期间完成安全性评估而未出现DLT，则实施后续(较高)剂量水平的剂量递增。在一些实施例中，如果给定剂量水平下的1名受试者出现DLT，则将该相同剂量水平扩展至6名受试者(或在群组1至3中2+级毒性不符合DLT标准的情况下为3名受试者；图2)。在一些实施例中，如果观察到2+级毒性，则将随后的单个患者群组转化成3+3群组。在3+3研究设计中，3名患者入组对应于给定剂量水平的群组。在一些实施例中，如果安全监测仪认为合适(例如，基于PK/PD数据)，则将单个患者群组转化成3+3群组。在一些实施例中，如果6名受试者中的2名出现DLT，则剂量递增将停止，因为将会超过MTD。在此类实施例中，先前的剂量水平可以被宣布为MTD，或者低于不可耐受剂量的新的中间剂量可以基于数据的审查来评估。在一些实施例中，如果6名可评估受试者中的1名出现DLT，则继续递增至下一个建议的剂量水平。给定上述算法，如果真实DLT率为10％，则递增到下一较高剂量的概率约为90％，如果真实DLT率为20％，则为70％，如果真实DLT率为33％，则为43％，如果真实DLT率为50％，则为17％。在一些实施例中，如果未达到MTD，或未鉴定出RP2D，则可以在审查所有当前可用的安全性和PK/PD数据后评估更高的剂量水平(增加不超过50％)。

A组的剂量递增方案的非限制性实例示于表6中，剂量递增指南的非限制性实例示于表7中。

表6.单一疗法剂量递增：A组

^a受试者的大致人数基于任何群组中缺乏剂量相关毒性。受试者的实际人数取决于安全性和其它发现。将MTD群组扩展到6名受试者以进一步表征群组。

^b可能发生从任何剂量水平(起始25μg除外)的剂量降级以改进MTD和/或RP2D的测定。

^c如果SMG审查群组N期间的可用数据对于进一步递增而言不明确(例如，基于非DLT AE的发生、稳定疗效、疑似RP2D)，则SMG可自行决定将群组N和/或群组N-1扩展至每个最多9名患者。

^d在群组13至15中可入组大约18名额外受试者，每个群组总共最多9名受试者。

表7.单一治疗剂量递增指南

出现毒性的受试者人数	剂量递增结果
		1人中的0人	在下一个剂量水平开始入组。
1人中的1人(2+级)	在当前剂量水平下共入组3名受试者。
		1人中的1人(DLT)	在当前剂量水平下共入组6名受试者。
3人中的0人	在下一个剂量水平开始入组。
		3人中的1人(DLT)	在当前剂量水平下共入组6名受试者。
6人中的1人(DLT)	在下一个剂量水平开始入组。
		6人中的2人(或≥33.3％，DLT)	停止剂量递增，之前的剂量确定为MTD或评估的新的中间剂量。

缩写：DLT＝剂量限制性毒性；MTD＝最大耐受剂量

在一些实施例中，在群组N的第1周期的安全性审查完成之后，且如果认为该剂量是安全的(例如，安全性监测器核可进一步剂量递增或群组N的剂量被确定为RP2D)，则以低于群组N的TNB-383B的剂量继续接受治疗的任何受试者可以随后以群组N的剂量接受治疗(例如，当群组5的安全性审查完成并且已经决定递增到群组6时，来自群组1至4的仍在治疗中的任何患者可以使其剂量增加到对应于群组5的剂量)。在一些实施例中，受试者必须先前已接受至少2个周期的TNB-383B，没有任何导致剂量减少的药物相关毒性，以符合这种剂量递增的条件。

单一疗法剂量扩展-B组：

在一些实施例中，该方法涉及评估TNB-383B单一疗法在已经接受了至少3种既往治疗线(包括暴露于PI、IMiD和抗CD38 mAb(例如，达雷木单抗))的患有复发性或难治性MM的患者中的MTD(或RP2D)。在一些实施例中，一旦已经基于来自单一疗法剂量递增阶段(A组)的数据选择MTD(或RP2D)，就开始剂量扩展。在一些实施例中，基于在研究的剂量递增部分期间收集的安全性、耐受性和PK/PD数据选择B组的MTD(或RP2D)和给药频率。在观察窗口内的所有受试者(例如，在用TNB-383B治疗下或在最后一次剂量后但在90天随访期内且尚未开始新的治疗线的状态下的受试者)评估方案的安全性和耐受性、PK/PD曲线以及每次增加6名受试者参与研究时的初步活动证据。在单一疗法剂量扩展阶段已经开始之后，如果剂量水平/频率被修改，则任何剂量修改都不应导致预测的CSS或Cmax大于针对先前选择的MTD/RP2D所鉴定的那些。

在一些实施例中，患者在初始药物施用前28天内经历筛选程序。符合入选标准和不符合任何排除标准的成年受试者有资格接受治疗。

入选标准：

1.受试者年龄必须为≥18岁。

2.暴露于PI和IMiD，以及

抗CD38抗体(例如，达雷木单抗)的三种或更多种既往治疗线。为了有资格参加本研究，受试者必须不是已知在MM中提供临床益处的治疗方案的候选者。

3.受试者的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为≤2。

4.受试者能够理解并遵守方案中概述的参数，并能够签署知情同意书。

5.受试者必须具有足够的骨髓功能，定义为：绝对中性粒细胞计数(ANC)≥1000/mm³；血小板≥50,000/mm³；血红蛋白≥8.0g/dL。在评估前允许输血和/或生长因子支持，但在筛选合格受试者前，中性粒细胞、血小板和血红蛋白必须在输血和/或生长因子施用后至少72小时保持稳定。

6.根据MDRD公式估算，受试者必须具有eGFR≥30mL/分钟。

7.受试者必须具有总胆红素≤1.5×正常值上限(ULN；除非受试者已知诊断为吉尔伯特综合征，其中胆红素必须<3×ULN)，天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)≤3×ULN。

8.在研究治疗开始前，血清钙(用白蛋白校正)等于或低于ULN范围(如果高钙血症通过第1周期第1天的标准治疗得到缓解，则受试者可入组高钙血症设定)。

9.如果是女性，受试者必须是绝经后的(至少连续12个月)，或永久手术不育的，或对于有生育能力的女性，实行至少一种方案规定的女性节育方法和一种男性节育方法(输精管切除术或避孕套)，从第1周期第1天开始至最后一剂研究药物后至少6个月。

10.可测量的疾病：受试者具有MM的诊断并且记录了先前接受过PI、IMiD和抗CD38mAb疗法(例如，达雷木单抗)治疗作为3种或更多种治疗线的一部分。如果受试者的移植后状态＞12周(自体)或＞1年(同种异体)，则先前的方案没有最大数量限制，既往骨髓移植是可接受的。为了有资格参加本研究，受试者必须不是已知在MM中提供临床益处的治疗方案的候选者。

可测量的疾病定义为以下各项中的至少1项：

·血清M蛋白≥0.5g/dL(≥5g/L)

·尿M蛋白≥200mg/24小时

·血清游离轻链(FLC)测定：涉及的FLC水平≥10mg/dl(≥100mg/L)以及血清FLC比值异常(＜0.26或＞1.65)。

11.受试者已证实前一次的MM治疗出现复发/进展迹象，或受试者对前一次的MM治疗出现复发/难治。(“复发性/难治性”定义为对先前治疗具有最小应答[MR]或较好应答史，现在在最后一次治疗后60天内出现疾病进展的受试者。“复发”定义为先前治疗的骨髓瘤进展且需要开始挽救治疗，而不满足国际骨髓瘤工作组[IMWG]关于复发/难治性的统一应答标准)。

12.受试者有足够的肿瘤骨髓样品存档(如有)或同意接受新的治疗前骨髓肿瘤活检。

排除标准

如果受试者符合以下任何标准，则他/她没有资格接受治疗：

1.受试者在入组后3年内被诊断或治疗为另一种恶性肿瘤，但皮肤基底细胞癌或鳞状细胞癌、原位恶性肿瘤、治愈性治疗后的低风险前列腺癌或晚期恶性肿瘤的完全切除/治愈性治疗除外。

2.受试者有其骨髓瘤累及CNS的病史。

3.受试者有≥3级周围神经病变病史。

4.受试者有浆细胞白血病、POEMS综合征或淀粉样变性病史。

5.受试者在入组后21天内接受了另一种研究药物。

6.受试者曾经接受BCMA靶向治疗。将不排除已经接受针对非BCMA靶的靶向治疗的受试者。

7.受试者在接受第一剂研究药物治疗后12周内接受外周自体干细胞移植，或在1年内接受同种异体移植。

8.受试者有任何医学或精神病，根据研究者或研究医学监查员的意见，这些疾病将受试者置于不可接受的高毒性风险，可能干扰治疗的成功或安全递送，或可能干扰研究产品的评估或受试者安全性或研究结果的解释。实例包括严重粘膜/内出血史、严重精神疾患、药物滥用(包括活动性酒精中毒)或已知对研究药物制剂的组分过敏或超敏反应的病史。

9.受试者在接受第一剂研究治疗前的21天内或在抗癌药物的5个半衰期内(以较短者为准)接受治疗癌症的任何疗法(包括放射、化学疗法、生物制剂、细胞疗法和/或剂量>20mg的类固醇)或接受大外科手术。

10.受试者已知患有需要胃肠外抗感染治疗的活动性感染。在完成抗生素治疗和症状缓解后，从感染的观点来看，认为受试者符合研究条件。

11.人类免疫缺陷病毒(HIV)或慢性或活动性乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)受试者的确认阳性检测结果。有HBV或HCV病史且有治愈记录(HBV：HBsAg阴性；HCV：治疗结束24周后检测不到HCV核糖核酸(RNA))的受试者可入组。

12.主要心脏异常，例如但不限于以下情况：不受控制的心绞痛或不稳定的危及生命的心律失常、筛选前<12周的心肌梗死史、纽约心脏协会≥3级充血性心力衰竭、严重心功能不全或持续性QTc延长(＞480毫秒，QTc Fridericia)。

13.受试者在先前抗癌治疗中出现未缓解的AE≥2级(美国国家癌症研究所(NCI)不良事件通用术语标准(CTCAE]v5.0)，以下情况除外：

·脱发症。

·周围神经病变(周围神经病变≥3级将被排除)。

·贫血或血小板减少症(血小板减少症必须为4级才能触发排除，分别为3级伴有症状或出血，或尽管输血支持但在72小时内复发)。

·在与研究医学监查员协商后，具有不可逆毒性且合理预期不会因任何研究产品而恶化的受试者(例如，听力损失)可入选。

在一些实施例中，TNB-383B最初以IV输注Q3W施用，其中1个治疗周期是21天。在一些实施例中，在单一疗法剂量递增阶段(A组)中以IV输注(Q3W)形式施用25μg初始剂量的TNB-383B，且在后续群组中递增到180,000μg的预计最大剂量(表6)。在一些实施例中，在B组中，所有受试者以MTD和/或RP2D接受TNB-383B。受试者可以继续接受TNB-383B，只要他们不符合任何受试者停药标准。

在一些实施例中，在输注TNB-383B之前15至60分钟向受试者预先给药地塞米松(5至20mg IV)或等效物、苯海拉明(25至50mg IV)或等效物(例如，西替利嗪(Cetirizine)10mg PO×1)、对乙酰氨基酚650至1000mg PO和雷尼替丁150mg PO/IV或等效物，以降低通常在mAb治疗中观察到的超敏反应的风险和严重性。

在一些实施例中，在2小时(±10分钟)内给予第一次TNB-383B输注。如果在第一剂量的TNB-383B期间未发生输注反应，则在一些实施例中可以缩短后续剂量的TNB-383B的输注持续时间。在一些实施例中，在第一次输注后监测受试者4小时，并且在每次后续输注后监测受试者2小时。为清楚起见，第1周期中输注后4小时的密切观察应发生在受试者首次服用TNB-383B后住院期间。在一些实施例中，受试者在第一剂量的TNB-383B后从第1天到第3天住院治疗总计48小时。

剂型的制备/重构：

在一些实施例中，TNB-383B药物产品(活性)以小瓶中的溶液形式提供，以每小瓶10mL可提取体积的药物产品配制成2mg/mL，并且通过IV输注施用。在一些实施例中，TNB-383B分两步稀释。第一稀释步骤使用随试剂盒提供的非DEHP 50mL IV袋将TNB-383B的浓度降低100倍至20μg/mL。第二稀释步骤需要将指定体积的预稀释的TNB-383B剂量依赖性转移到也随试剂盒一起提供的不含DEHP的250mL IV袋中。选择最终浓度以达到所需的施用剂量。在一些实施例中，用于每个稀释步骤的稀释剂是盐水，其中在添加活性TNB-383B药物产品之前添加IV稳定剂溶液(IVSS)。IVSS随每个试剂盒一起提供，由一个20mL的玻璃瓶组成，可提取体积为20mL。IVSS小瓶以12.5倍的浓度配制，IV袋中的工作浓度为1倍。

在一些实施例中，在单一稀释步骤中制备TNB-383B，其中将剂量依赖性体积的TNB-383B从药物产品小瓶直接转移到随试剂盒提供的250mL不含DEHP的IV袋中。稀释剂是在添加活性TNB-383B药物产品之前添加了IVSS的盐水。

在一些实施例中，含有TNB-383B的最终稀释液的IV袋在受控室温(20℃至25℃)下的总储存时间(包括输注时间)不超过6小时(或在2℃到8℃下为12小时)以使药物产品的降解和微生物污染的风险最小化。在一些实施例中，随着额外的无菌性/稳定性数据变得可用，存储时间被修改/更新。

在一些实施例中，在每个剂量下施用的总体积为250mL。输注速率由输注泵及其各自的含有在线过滤器的无DEHP输注套件控制。

在一些实施例中，将TNB-383B药物产品小瓶储存在2℃至8℃下。IVSS小瓶在环境温度下储存。稀释的活性药物制剂已在最低(100ng/mL)和最高剂量(160μg/mL)下测试，在受控室温(20℃至25℃)下暴露于光达6小时和在2℃至8℃下达12小时用于输液器相容性。

东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态：

本发明的各方面包括在筛选时，在给药前每个周期的第1天，在EOT就诊时或在受试者停药时以及在最后一剂TNB-383B后的90天随访时评估受试者的ECOG体能状态。使用表8中的评分方法记录ECOG体能状态。

表8：东部肿瘤协作组(ECOG)体能评分

临床实验室测试：

本发明的各方面包括至少在筛选时(由中心实验室进行)和在随后的当地就诊，EOT就诊和90天随访时获得用于表9中概述的临床实验室测试的样品。

经认证的实验室用于处理和提供临床实验室测试的结果。在研究开始之前获得实验室参考范围。用于特定测试的临床评估的基线实验室测试结果定义为TNB-383B的初始剂量之前的最后测量。

表9：临床实验室测试

表9：临床实验室试验(续)

缩写：Ab＝抗体；APRIL＝增殖诱导配体；aPTT＝活化部分凝血活酶时间；ALT＝丙氨酸转氨酶；AST＝天冬氨酸转氨酶；BCMA＝B细胞成熟抗原；BUN＝血液尿素氮；ELISA＝酶联免疫吸附测定；

FISH＝荧光原位杂交；GGT＝γ-谷氨酰转移酶；HBsAg＝乙型肝炎表面抗原；HCV＝丙型肝炎病毒；IFN＝干扰素；IL＝白介素；LDH＝乳酸脱氢酶；

MCH＝平均红细胞血红蛋白；PT＝凝血酶原时间；MCHC＝平均红细胞血红蛋白浓度；MCV＝平均红细胞体积；RBC＝红细胞；SFLC＝血清游离轻链；SIFE＝血清免疫固定电泳；SPEP＝血清蛋白电泳；TNF＝肿瘤坏死因子；UIFE＝尿免疫泳电泳；UPEP＝尿蛋白电泳；WBC＝白细胞；

^a列举的细胞因子将是最低限度评估的细胞因子；可以对提交用于细胞因子分析的样品中的其它细胞因子进行分析。

肿瘤评估：

本发明的各方面涉及在施用第一剂量的TNB-383B之前28天内使用正电子发射断层摄影术(PET)-CT、对比增强CT或磁共振成像(MRI)对每个患者进行基线骨骼调查；如果有临床指征，也可进行CT和/或MRI用于髓外疾病评估。根据临床指征重复成像。如果可能，在需要成像的每次就诊时应对受试者使用相同的模态。

肿瘤组织：

本发明的各方面涉及在筛选时收集每个受试者的足够的存档肿瘤组织(在筛选前过去6个月内收集)和/或新获得的活检组织；如果没有存档的肿瘤组织可用，在一些实施例中进行治疗前骨髓活检。“足够的”存档活检被定义为足够的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)材料(块或载玻片)，以对受试者的肿瘤进行和演绎8至10次苏木精和伊红和/或免疫组织化学染色，并附有包括浆细胞标志物(至少CD38和CD138)的流式细胞术报告。在一些实施例中，在分子和细胞水平上分析肿瘤样品以确定基线生物标志物水平和相对于基线的变化如何与临床结果、安全性和耐药性相关。在一些实施例中，除了在疑似CR和可能的疑似进展时IMWG要求的活检/抽吸之外，在第3周期第1天(C3D1)进行骨髓活检/抽吸以进行额外的探索性生物标志物分析。

在一些实施例中，治疗前和进展期的活检均取自患者的同一病变，或至少取自同一解剖部位。收集配对的新获得的肿瘤样品用于评估肿瘤微环境中的TNB-383B PD。在一些实施例中，通过流式细胞术分析骨髓活检以定量受试者肿瘤细胞上的BCMA密度。在一些实施例中，还进行了如肿瘤细胞的细胞遗传学、荧光原位杂交(FISH)的研究或测序研究，以及通过流式细胞术评估T细胞亚群。在一些实施例中，治疗前和疑似CR活检提供肿瘤应答和探索性生物标志物(例如，BCMA表达水平)之间的相关数据，而C3D1和疑似进展的活检阐明肿瘤耐药性的机制，如果存在和可检测的话。在一些实施例中，如果发现受试者的子集对治疗有应答，则研究肿瘤特异性脱氧核糖核酸(DNA)改变。在某些实施例中，该方法阐明了是否有任何遗传决定簇与应答相关。另外，由于抗肿瘤免疫应答可能与体细胞突变负荷有关，因此在某些实施例中检查肿瘤突变负荷。

样品分析：

在一些实施例中，在指定的时间点从受试者收集血液和/或组织样品以评估PK、PD和应答生物标志物以及ADA。在一些实施例中，从受试者收集用于探索性生物标志物分析(例如，可溶性BCMA和APRIL)的血清样品。在一些实施例中，从受试者收集用于探索性生物标志物分析(例如，可溶性BCMA、APRIL、CRS相关细胞因子、TCR测序和T细胞亚群)的样品。在一些实施例中，在第1周期第1天给药前收集用于DNA和RNA分离的全血样品。

活性、药代动力学、药效学、药物遗传学和安全性评估/变量：

活性变量：

在一些实施例中，通过SPEP、UPEP和/或FLC的变化来测量活性(Kumar S等人，《国际骨髓瘤工作组对于多发性骨髓瘤的应答和微小残留病评估的共识标准(InternationalMyeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residualdisease assessment in multiple myeloma)》，《柳叶刀肿瘤学(The Lancet Oncology.)》2016；17(8)：e328-46)。在一些实施例中，用于满足治疗资格标准的相同参数用于评估应答。在一些实施例中，指示临床活性的实验室值(表10)通过第二测试来验证，其可在第一测试的结果可用时立即进行。在一些实施例中，活性终点(使用IMWG统一应答标准确定)包括客观应答率(ORR，定义为严格完全应答[sCR]+完全应答[CR]+非常好的部分应答[VGPR]+部分应答[PR])、临床受益率(CBR；定义为24周的CR+PR+MR)、总存活期(OS)、无进展存活期(PFS)、进展时间(TTP)、应答时间(TTR)和客观应答持续时间(DOR)。

表10：活性测量

表10：活动测量(续)

表10：活动测量(续)

缩写：ASCT＝自体干细胞移植；CRAB特征＝钙升高、肾衰竭、贫血、溶骨性病变；¹⁸F-FDG PET＝¹⁸F-氟脱氧葡萄糖PET；FCM＝流式细胞术；FLC＝游离轻链；IMWG＝国际骨髓瘤工作组；MFC＝多参数流式细胞术M蛋白＝骨髓瘤蛋白MRD＝微小残留病NGF＝下一代流变仪；NGS＝下一代测序；SPD＝所测病变最大垂直直径的乘积之和；SUVmax＝最大标准化摄取值。

药代动力学变量：

该方法的各方面涉及使用非房室方法测定TNB-383B的PK参数值，包括在第1周期中输注后的最大观测血清浓度(Cmax)、达到Cmax的时间(Tmax)、从时间0到最后可测量浓度的时间的浓度-时间曲线下面积(AUCt)、清除率(CL)、终末相消除速率常数(β)和终末半衰期(t_1/2)。在一些实施例中，ADA测定的结果在事后分析。

药物浓度测量：

收集血样用于TNB-383B测定：

在一些实施例中，在一个或多个指定时间点从患者抽取血液，并用于TNB-383B PK分析。血液抽取时间点的非限制性实例例如下所列，并且也在表11和表12中提供。

·周期1：第1天：给药前，输注结束时和输注后3、6和9小时；以及第2、3、8和15天。

·周期2：第1天：给药前，输注结束时；以及第15天。

·周期3：第1天：给药前，输注结束时，输注后3、6、9小时；以及第15天。

·周期4和5：第1天：给药前和输注结束时。

·周期6：第1天：给药前，输注结束时和输注后3、6和9小时；以及第2天和第15天。

·周期7(以及所有后续周期)：第1天：给药前和输注结束时。

·计划外/治疗结束(EOT)和90天随访

·周期1：第1天：给药前，输注结束时和输注后3、6、9小时；以及第2、3、8和15天。

·周期2：第1天：给药前，输注结束时；以及第15天。

·周期3：第1天：给药前，输注结束时和输注后3、6和9小时，以及第8天和第15天。

·周期4和5：第1天：给药前和输注结束时。

·周期7(以及所有后续周期)：第1天：给药前和输注结束时。

·治疗结束，疑似CR和90天随访

收集血样用于抗药物抗体(ADA)测定：

在一些实施例中，分析样品的抗药物抗体。在一些实施例中，在PK非线性的情况下，在PK采样时间点期间进行额外的ADA测试。(见表11和表12)。在一些实施例中，在每个周期的第1天给药TNB-383B之前抽取ADA样品。

表11：血样收集实例时间表(A组)

缩写：EOI＝输注结束：EOT＝治疗结束；min＝分钟；N/A＝不适用；PK＝药代动力学；Unsched＝＝计划外。

^a在同一时间点收集的样品将包含在单次抽血中。将用于PK、生物标志物评估和ADA测试的血样运送至中心实验室。

^b将对ADA和生物标志物(可溶性BCMA和APRIL)的测试进行集中批量分析。将在适当的PK采样时间点进行额外的ADA测试。

^c在疑似细胞因子释放综合征/神经毒性的情况下，将按照机构指南收集细胞因子并进行局部分析。

^d收集样品并集中批量分析多种细胞因子。在疑似细胞因子释放综合征/神经毒性的情况下，将按照护理标准收集细胞因子并进行局部分析。

^e一旦有足够的TNB-383B半衰期数据，且如果T_1/2超过18天，则可以在对应于约5xT_1/2的时间进行最后一次治疗后90天的就诊，以便在T≥5×T_1/2时获取PK和ADA数据。

^f在研究期间的任何时间都可能会发生计划外就诊。所示的研究活动将由研究者自行决定进行。

表12：血样收集实例时间表(B组)

缩写：EOI＝输注结束；min＝分钟；EOT＝治疗结束；N/A＝不适用；PK＝药代动力学；Unsched＝计划外。

^a在同一时间点收集的样品将包含在单次抽血中。表2中包括的所有血样将运送至中心实验室。

^b可溶性BCMA和APRIL将集中进行批量分析。

^c一旦受试者被认为符合研究条件，但在第1周期第1天给药前，将收集任选的药物基因组学样品。

^e一旦有足够的TNB-383B半衰期数据，且如果T_1/2超过18天，则可以在对应于约5xT_1/2的时间进行最后一次治疗后90天的就诊，以便在T≥5×T_1/2获取PK数据。

探索性研究变量：

在一些实施例中，收集样品以对已知的和新的生物标志物进行探索性研究。待分析的生物标志物的类型可以包括但不限于核酸、蛋白质、脂质或代谢物。在一些实施例中，分析样品作为影响受试者对TNB-383B的应答或受试者疾病或相关病况的发展和进展的因素的事后评估的一部分。在一些实施例中，样品用于开发新的诊断测试、治疗、研究方法或技术。

安全性变量：

本发明的各方面涉及在整个治疗过程中监测患者的不良事件、实验室概况、身体检查和生命体征。在一些实施例中，不良事件根据NCI-CTCAE版本5.0进行分级。在一些实施例中，使用标准PK、统计、临床和实验室程序。在一些实施例中，抽取血液并分析PD标志物，其可以提供关于为额外的治疗方法选择合适剂量的TNB-383B的有用信息。在一些实施例中，档案组织用于为额外的治疗方法选择TNB-383B的适当剂量，以及用于选择适当的受试者群体进行治疗。

最大耐受剂量的确定：

最大耐受剂量(MTD)定义为6名受试者中少于2名出现DLT的最高剂量水平。在一些实施例中，MTD选自由以下组成的组：25μg、75μg、200μg、600μg、1,800μg、5,400μg、10,000μg、20,000μg、30,000μg、40,000μg、50,000μg、60,000μg、70,000μg、80,000μg、90,000μg、100,000μg、110,000μg、120,000μg、130,000μg、140,000μg、150,000μg、160,000μg、170,000μg和180,000μg。

确定推荐的第2阶段剂量：

如果达到MTD，RP2D(推荐的第2阶段剂量)将不会是高于MTD的剂量，并将根据发生的DLT类型和鉴定的MTD进行选择。如果未达到MTD，则将根据安全性、PK和其它可用数据定义RP2D。

剂量递增的剂量限制性毒性(DLT)定义：

在一些实施例中，用于剂量递增目的的DLT观察期是在第一剂TNB-383B后的前21天；在第一观察期发生的事件上确定剂量限制性毒性。当做出剂量递增决定时，可以评估发生在DLT窗口之外的事件。药物相关事件定义为研究者或医学监查员无法确定归因于患者基础疾病、其它医学状况或伴随用药或手术的任何不良反应。将使用NCI-CTCAE版本5.0。本文提供了DLT定义。

非血液学剂量限制性毒性：

非血液学DLT定义为以下TEAE中的任一种：

·非血液学AE≥3级，但以下情况除外：

о3级或4级孤立电解质异常(即无临床后果发生的异常)，在有干预或无干预的情况下，在72小时内消退至<2级。

о在72小时内对最佳医疗管理作出应答的3级低血糖症/高血糖症。

о在72小时内对最佳医疗管理作出应答的3级恶心/呕吐/腹泻。

о任何等级的脱发或白癜风。

о3级疲劳持续<10天。

·任何需要将下一个计划周期的启动延迟>21天的AE。

血液学剂量限制性毒性

血液学DLT定义为以下任一项：

·≥3级CRS。

·4级中性粒细胞减少症>5天。

·需要输注血小板的3级血小板减少症或4级血小板减少症。

о在研究过程中，血小板计数＜10,000/mm³的受试者应至少每72小时监测一次(或由研究者自行决定更频繁)，直至恢复至＞50,000/mm³。应根据主要研究者的决定和机构指南进行血小板输注。需要恢复至＞50,000/mm³才能继续治疗。

·与需要红细胞输血的临床显著缺氧症状相关的3级贫血或与基础疾病无关的4级贫血。

о在没有临床上显著的缺氧症状(即，呼吸急促、氧饱和度降低等)的情况下的红细胞输注将不被认为是DLT。中度贫血不是进入研究的受试者的排除标准，而是MM受试者的预期结果。然而，血红蛋白＜8g/dL的受试者应至少每72小时监测一次(或由研究者自行决定更频繁)，直至恢复至≥8g/dL。红细胞输注应按照机构指南进行。需要恢复至≥8g/dL才能继续治疗。

·淋巴细胞减少不视为DLT。

·任何需要将下一个计划周期的启动延迟＞21天的AE。

细胞因子释放综合征剂量限制性毒性：

本发明的各方面涉及监测患者中细胞因子释放综合征(CRS)的证据。存在或不存在神经毒性的细胞因子释放综合征(CRS)是与T细胞重定向疗法(CAR和T-BsAb/BiTE)相关的主要毒性。CRS由于免疫系统的过度活化而发生，并且主要由促炎细胞因子(最重要的是IL-6)的分泌介导。体征和症状是全身性炎症的体征和症状，如败血症、过敏反应和肿瘤溶解综合征，包括以下症状：高热/寒战、低血压、缺氧、神经系统变化、疼痛、恶心和头痛。荟萃分析表明，临床发现，特别是发热，通常是CRS发作的第一指标(Hay KA等人，《血液》，2017年1月1日；Wang Z等人，《生物标志物研究(Biomarker Research)》2018；6(1)：4.)。CRS历史上发生在第一次CAR/T-BsAb施用的14天内，并且通常不发生在随后的周期中。如果怀疑有CRS症状，表13可用于对毒性进行分级，图3提供了治疗指南，如果未制定治疗方案，其可用于受试者管理。

表13：CRS分级指南

来源：CTCAEv 5.0

神经剂量限制性毒性：

本发明的各方面涉及监测神经毒性(NT)的证据。神经毒性(NT)由不清楚的病因引起，但已被假定为源自内皮活化/微血管病，可能是单核细胞/巨噬细胞分泌IL-1的下游(Gust J等人，《癌症探索(Cancer Discovery)》，2017；10月12日；Giavridis T等人，《自然医学(Nature Medicine)》，2018：1.；Norelli M等人，《自然医学》，2018；1.)。发病通常发生在CRS时或之后(大多数为CRS≥3级)。已经描述了在施用抗CDl9 T-BsAb后分离的NT(Velasquez MP等人，《血液》2017；1月1日)。NT的症状包括：谵妄、头痛、焦虑不安、失语症、CNS出血、共济失调、精神错乱、癫痫发作、嗜睡和震颤。NT管理的建议指南见表14。

表14：神经系统毒性管理的建议指南

缩写：AE＝不良事件；CT＝计算机断层扫描；EEG＝脑电图；ICU＝重症监护室；IV＝静脉内输注；LP＝腰椎穿刺；MRI＝磁共振成像。

活性分析：

本发明的各方面涉及使用IMWG统一应答标准评估应答和疾病进展。在一些实施例中，针对单一疗法剂量递增阶段(A组)和单一疗法剂量扩展阶段(B组)两者确定客观应答率(ORR)、DOR、PFS和CBR。在一些实施例中，确定PFS的卡普兰-梅尔估计值(Kaplan-Meierestimates)和中值PFS、OS和TTP的相关CI。对于单一疗法剂量扩展阶段(B组)，在一些实施例中，基于EE群体进行活性分析，并且对安全性群体重复活性分析，除非2个群体的样品量相同。在一些实施例中，将来自单一疗法剂量递增阶段(A组)的MTD或RP2D分析酌情与单一疗法剂量扩展阶段(B组)合并。

客观应答率(ORR)：

本发明的各方面涉及确定客观应答率(ORR)。客观应答率定义为对治疗具有确认的部分或完全应答的受试者的比例。在一些实施例中，每个剂量群组的ORR通过汇集的所有测试位点来估计。在一些实施例中，ORR的双侧80％精确二项式CI也使用克洛珀-皮尔森方法(Clopper-Pearson method)以及最佳总体应答(CR、PR、SD、PD)来总结。

无进展存活期(PFS)：

本发明的各方面涉及确定无进展存活期(PFS)。无进展存活时间定义为从第一剂量的TNB-383B到进展或死亡的时间，以先发生者为准。在一些实施例中，如果两个事件都没有发生，则在最后一次肿瘤评估的日期对受试者进行审查。在一些实施例中，卡普兰-梅尔方法将用于分析PFS。

客观应答持续时间(DOR)：

本发明的各方面涉及确定客观应答持续时间(DOR)。受试者的客观应答持续时间定义为从最初的客观应答到疾病进展或死亡的时间，以先发生者为准。在一些实施例中，如果受试者没有进展或死亡，则受试者将在最后一次肿瘤评估之日被审查，类似于PFS分析的审查规则。在一些实施例中，以与PFS分析相同的方式分析DOR。

临床受益率(CBR)：

本发明的各方面涉及确定临床受益率(CBR)。在对治疗有应答后至少24周内确认完全、部分或最小应答的受试者比例。在一些实施例中，通过汇集的所有测试位点估计每个组的CBR。在一些实施例中，CBR的双侧80％精确二项式CI也将使用克洛珀-皮尔森方法来总结。

安全性分析：

本发明的各方面涉及进行一次或多次安全性分析。在一些实施例中，在疗程结束时，通过评估AE、SUSAR/SAE、实验室测定的变化、生命体征参数和所有其它可用的相关数据来评估TNB-383B的安全性。在一些实施例中，该方法涉及提供连续变量的描述性统计和离散变量的频率/百分比。在一些实施例中，安全性群体允许以80％的置信度检测少至21％的受试者中发生的SAE。

不良事件：

本发明的各方面涉及分析不良事件，包括但不限于治疗突发不良事件(TEAE)。治疗突发不良事件(TEAE)定义为在第一剂量的TNB-383B时或之后直到停止给药后90天或直到受试者开始另一种抗癌疗法(以较早发生者为准)发生或恶化的事件。

在一些实施例中，TEAE按剂量群组进行总结，总体包括药物相关的AE、按强度分类的AE、死亡、SAE和由于AE的停药。在一些实施例中，单一疗法剂量递增阶段中的剂量群组的DLT类似地通过群组和整体进行总结。在一些实施例中，还提供了特别感兴趣的AE的附加概要和/或列表。

临床实验室测试：

本发明的各方面涉及对接受治疗的患者进行基线实验室测试。在一些实施例中，还进行来自后续时间点的疾病应答评估实验室测试。在一些实施例中，使用描述性统计学通过剂量群组和时间点分析和总结临床实验室结果相对于基线的变化。在一些实施例中，提供了从基线到最后一次可用就诊的偏移的概要。在一些实施例中，相对于在最终就诊时具有低于、处于或高于正常范围的值的受试者的比例，以在基线时具有低于、处于或高于特定实验室测试的正常范围的值的受试者的比例计算偏移。在一些实施例中，符合NCI-CTCAE版本5.0的实验室异常和治疗后出现的实验室异常通过治疗组和整体进行总结。

药代动力学

列表和总结统计

在一些实施例中，针对每个受试者和每个剂量水平将TNB-383B的血清浓度和PK参数值制表，且针对每次采样时间和每个参数计算汇总统计数据。

剂量比例分析：

在一些实施例中，如下分析来自第1周期第1天评估的特定给药方案的TNB-383B的药物动力学参数。对剂量标准化的Cmax和剂量标准化的AUC进行分析。用于统计分析的模型包括作为分类变量的TNB-383B的剂量水平。在一些实施例中，在初始模型中包括协变量，例如年龄、种族、性别和可能解释群体中的一些可变性的其它协变量。在一些实施例中，如果回归系数在α水平0.10不显著，则可以从模型中去除协变量。在一些实施例中，对Cmax和AUC采用自然对数变换，除非数据清楚地表明其它变换或未变换的变量在剂量水平上提供更接近对称的概率分布和/或更接近同质的方差。当研究至少3个TNB-383B剂量水平时，对选择为对剂量的近似线性函数或剂量的对数敏感的剂量水平效应中的对照进行测试。

缺失值和模型违规

在一些实施例中，所有可用的数据都包括在任何剂量比例分析中。在一些实施例中，如果存在适当的理由，则可以从分析中排除一个或多个数据点。通常，PK变量(Cmax、AUC等)的值通过简单地使用可用数据来确定，而不替换缺失的单个浓度值。然而，如果缺失的单个浓度导致PK参数值可能过低或过高到有意义的程度，则可以暂时认为PK参数值缺失。在这种情况下，可以计算缺失单个浓度的值，使得PK参数的适当值可以包括在分析中。在一些实施例中，使用考虑受试者的个体特征的适当方法获得推算值。

如果鉴定出异常值和/或观察到显著的非正态概率分布(在对Cmax和AUC进行对数变换之后)，则也可以进行非参数分析。这种模型违规可以通过图形方法、非正态性的度量(例如，偏度、峰度)或其它适当的方法进行鉴定。如果不同的剂量水平具有不等方差到可能影响结论的程度，则可以使用允许不等方差的近似方法。在一些实施例中，可以解决由于不良事件而过早中断治疗的受试者的缺失数据的偏差的可能性。

生物标志物：

本发明的各方面涉及探索性生物标志物分析。在一些实施例中，通过测量时间点/就诊来分析和总结生物标志物的基线、基线后和相对于基线的变化的描述性统计。在一些实施例中，进行探索性分析以评估每种生物标志物或生物标志物的组合与临床结果的关联、与作用机制相关的生物标志物的调节，以及潜在地预测治疗应答的生物标志物或生物标志物的组合。

实例

实例1：TNB-383B在复发性/难治性多发性骨髓瘤中的I期研究的初步结果

背景：TNB-383B是一种结合了独特抗CD3部分和2个仅重链抗BCMA部分的BCMA×CD3双特异性T细胞重定向抗体，抗CD3部分优先活化效应子而非调节T细胞，并且使细胞因子释放与抗肿瘤活性解偶联，在仅重链抗BCMA部分，TAA与CD3的化学计量比为2：1。呈现了正在进行的TNB-383B第1阶段剂量递增和扩展FIH研究的结果(NCT03933735)。

方法：符合条件的患者患有RRMM并且已经接受过包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节药物(IMiD)和抗CD38单克隆抗体的至少3种既往治疗线。患者患者在1至2小时内通过Q3W IV输注接受递增剂量的TNB-383B进行治疗(无递增剂量)。主要目的是确定TNB-383B的安全性/耐受性和临床药理学并鉴定MTD/RP2D。该研究使用3+3设计进行剂量递增，额外的患者以清除剂量水平入组。允许早期剂量群组的患者增加至最高清除剂量水平。通过IMWG标准评估应答，并根据CTCAE v5.0对不良事件进行分级。通过骨髓样品的NGS进行微小残留病(MRD)评估。

结果：向38名受试者给药TNB-383B(0.025至40mg)。表15总结了研究入组时的人口统计和疾病特征。最常见的Gr3/4AE为贫血(6/38；16％)和血小板减少症(5/38；13％)。最常见的药物相关AE为CRS(8/38；21％)和头痛(5/38；13％)。在75μg观察到Gr2 CRS的孤立病例，但在5.4mg及以上观察到所有其它CRS。所有CRS病例均为1级(5/8)或2级(3/8)，均仅在第一剂TNB-383B后发生。除3名受试者外，所有受试者均接受液体和泰勒诺治疗(Tylenol)(另3名接受1剂托珠单抗(tocilizumab))。在20mg剂量下观察到一例DLT，Gr3精神错乱，在6小时内消退，无后遗症。未观察到IRR。1例受试者因伴有CRS的Gr3中性粒细胞减少症需要进行剂量调整；在耐受后续剂量且未发生任何事件后，受试者恢复其全剂量。5名受试者在随访过程中死于其基础疾病。15名受试者停止治疗，所有治疗均针对进行性疾病。初步PK数据支持TNB-383B的Q3W给药。分别在200μg和1.8mg时，在一名患者中观察到活性；在5.4至20mg的剂量下，观察到55％(12/22)的ORR。应答的深度和持续时间总结在表16中。

结论：TNB-383B在高达40mg的剂量下良好耐受，不需要分步/分次给药。在剂量≥5.4mg下观察到55％的初步ORR，包括深度(3VGPR/3CR)和持久(长达24周)应答，尽管仅每3周给药一次。

表15：患者人口统计和疾病特征总结

	0.025至1.8mg	≥5.4mg	总计
				受试者	N＝15	N＝23	N＝38
男性	10(67％)	11(48％)	21(55％)
				女性	5(33％)	12(52％)	17(45％)
年龄中位数(范围)	72(56-83)	68(37-78)	68(37-83)
				既往治疗线中位数(范围)	8(4-12)	7(4-13)	7(4-13)

表16：应答总结

	0.025至1.8mg	≥5.4mg	总计
				受试者	N＝15	N＝23	N＝38
ORR	2(13％)	12(52％)	14(37％)
				sCR/CR	0	3(13％)	3(7.9％)
VGPR	1(6.7％)	3(13％)	4(11％)
				PR	1(6.7％)	6(26％)	7(18％)
以周为单位的中位数DOR(范围)	24(21-27)	9(3-21)	9(3-27)

实例2：TNB-383B在复发性/难治性多发性骨髓瘤中的I期研究的进一步初步结果

背景：TNB-383B是一种结合了独特抗CD3部分和2个仅重链抗BCMA部分的BCMA×CD3双特异性T细胞重定向抗体，抗CD3部分优先活化效应子而非调节T细胞，并且使细胞因子释放与抗肿瘤活性解偶联，在仅重链抗BCMA部分，TAA与CD3的化学计量比为2∶1。呈现了正在进行的TNB-383B第1阶段剂量递增和扩展FIH研究的结果(NCT03933735)。

结果：向58名受试者给药TNB-383B(0.025至60mg)。图5总结了研究入组时的人口统计和疾病特征。观察到的最常见AE总结在图6中。细胞因子释放综合征(CRS)是研究中最常见的AE，影响45％的受试者。在大约20％的所有受试者中观察到血液毒性。最常见的3级或4级非血液学不良事件是14％患者的感染。这些感染在特征和持续时间上与先前在复发性/难治性骨髓瘤群体中描述的感染相似。其它3级或更高级别的AE是罕见的。尽管在40mg或更高的剂量下，治疗相关的AE由于CRS而增加，但包括3或4级的非CRS AE至今仍保持稳定。迄今已观察到2种剂量限制性毒性：3级精神错乱与ICANS无关，被认为与短暂性发热有关，4级血小板减少症在周期结束时恢复正常水平。

使用较高剂量的TNB-383B未观察到非CRS AE的发生率显著增加。当剂量大于或等于40mg时，由于CRS增加，TRAE增加。如上所述，观察到两例DLT，均缓解，无后遗症。这些包括20mg时的Gr3精神错乱(与ICANS无关)和60mg时的Gr4血小板减少症。研究中发生了两例死亡，均归因于COVID-19(与研究药物无关)。

图7提供了作为剂量函数的CRS的总结。如上所述，45％的治疗患者经历了一定程度的CRS。在40mg或更高的剂量下，80％的患者出现CRS。然而，所有CRS病例限于1级和2级，在任何给定剂量下没有3级或更高级别的病例。此外，在任何剂量下都不需要分次给药。

确实经历CRS的受试者主要用液体和对乙酰氨基酚进行治疗。根据PI的判断，只有五名患者因其症状接受了托珠单抗治疗。没有受试者接受地塞米松治疗CRS。CRS发作通常发生在给药24小时内，中位持续时间为1天。有趣的是，尽管实施了高达6倍的递增，但接受剂量递增的患者均未在增加的剂量下发生CRS。

如上所述，随着TNB-383B的剂量增加，观察到CRS的严重程度最低程度地恶化。仅在1名受试者中观察到CRS在C1后的复发，在接受患者内剂量递增的受试者中未观察到CRS。不需要TNB-383B的分步/分次给药，并且在所有剂量水平下研究药物均为单次施用。

图8是总结了对治疗的应答的图。接受40至60mg剂量治疗的那些患者的总应答率(ORR)为80％。其中，超过70％达到VGPR或更好。四例MRD可评估受试者中有三例为MRD阴性(10^-6时为2例，10^-5时为1例)。在一名患者中以低至200微克的剂量观察到活性。与较小剂量相比，以较高剂量治疗的15名患者的应答显著改善。在较高剂量中观察到的应答深度从其余研究患者突出，60％达到VGPR，13％达到CR或更好。

图9是示出了在研究中对治疗有应答的27名患者的轨迹的游泳图。数据截止时，应答者中治疗的中位时间为18周，治疗的最长时间为66周。27名应答者中的22名仍在接受治疗。

在停药的应答者中，有2名出现了进行性疾病，1名出现了4级血小板减少症的DLT，2名死于COVID-19感染。在大多数情况下，使用第一剂量的TNB-383-B观察到显著响应。此外，随着患者继续接受治疗，应答随着时间的推移而加深。

实例3：TNB-383B的药代动力学(PK)表征

图10是TNB-383B的PK数据图，其表征为临床研究的主要终点。目前可用的PK数据如图10所示，与典型的抗体疗法一致。在剂量高达1.8mg时，PK不是剂量成比例的，可能是由于靶介导的清除。在5.4mg及以上的剂量下，PK大致与剂量成比例，且在20mg或以上的剂量下，TNB-383B显示15至18天的半衰期，支持每3周一次的给药方案。

实例4：病例研究

图11显示了对患有高风险细胞遗传学且对IMiD、PI和单克隆抗体难治的59岁非裔美国男性受试者的病例研究分析。该受试者在研究入组之前患有广泛的浆细胞瘤，如图11中的筛选图像组所证明的。该受试者在接受1剂治疗后通过血清学获得VGPR。在第2次和第5次治疗剂量后的重复成像显示，他的髓外浆细胞瘤显著减少，如第2周期和第5周期图所示。受试者仍在接受治疗，持续达到VGPR。

实例5：迄今为止的研究结论

迄今为止从TNB-383B的临床研究获得的结论包括以下：

TNB-383-B是一种靶向BCMA和CD3的新型双特异性T细胞参与免疫疗法，其在所有测试剂量下耐受性良好，几乎没有脱靶毒性。这种现成的BCMA靶向疗法在施用第一剂后经过短暂的住院治疗后就可以在办公室环境中安全地进行。迄今为止，在任何剂量下都没有观察到3级或更高级别的CRS，并且不需要逐步加大剂量。

在40mg和更高的剂量下ORR达到80％，尽管患者群体接受过多种既往治疗线，但仍有大量的VGPR或更好的应答。由于其安全性、疗效和每3周一次给药的便利性，该药剂成为骨髓瘤治疗的一个有前途的选择。正在进行本研究的递增和扩展部分。

Claims

1.一种用于在有需要的患者中治疗多发性骨髓瘤(MM)的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗周期重复两次或更多次。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中TNB-383B作为单一疗法施用于所述患者。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中TNB-383B通过静脉内输注(IV)施用。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MM是复发性MM。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MM是难治性MM。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者已经接受至少三种既往治疗线。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述既往治疗线中的一者包含用蛋白酶体抑制剂(PI)治疗。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述既往治疗线中的一者包含用免疫调节酰亚胺(IMiD)治疗。

10.根据权利要求7所述的方法，其中所述既往治疗线中的一者包含用抗CD38抗体治疗。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗CD38抗体是单克隆抗体。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述抗CD38单克隆抗体是达雷木单抗(daratumumab)。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者不是已知在MM中提供临床益处的一种或多种治疗方案的候选者。

14.一种用于改善经诊断患有MM的患者的客观应答率(ORR)的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

15.一种用于改善经诊断患有MM的患者的临床受益率(CBR)的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

16.一种用于改善经诊断患有MM的患者的总存活(OS)率的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

17.一种用于改善经诊断患有MM的患者的无进展存活(PFS)率的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

18.一种用于改善经诊断患有MM的患者的进展时间(TTP)的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

19.一种用于改善经诊断患有MM的患者的应答时间(TTR)的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

20.一种用于改善经诊断患有MM的患者的客观应答持续时间(DOR)的方法，所述方法包含根据21天的治疗周期向所述患者施用治疗有效量的TNB-383B，其中TNB-383B的所述治疗有效量大于或等于25μg且小于或等于最大耐受剂量(MTD)。

21.根据权利要求14至20中任一项所述的方法，其中所述改善为至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。

22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中修改所述治疗周期以在剂量之间增加更多时间。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述治疗周期被修改为28天的治疗周期。

24.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中通过从给药方案中持续消除一个或多个治疗周期来修改所述治疗周期。

25.根据权利要求24所述的方法，其中从所述给药方案中消除每第三个治疗周期。

26.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中修改所述治疗周期以增加给药频率。

27.根据权利要求26所述的方法，其中通过将剂量之间的时间减少至14天来修改所述治疗周期。

28.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过将剂量分成多个部分，并在连续的几天内将所述多个部分中的每一个施用于所述患者来修改所述治疗周期。

29.根据权利要求28所述的方法，其中通过将所述剂量分成两半并在连续两天的每一天向所述患者施用所述剂量的一半来修改所述治疗周期。

30.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包含在施用TNB-383B之前用降低超敏反应的风险或严重性的药剂对所述患者进行前驱用药。

31.根据权利要求30所述的方法，其中降低超敏反应的风险或严重性的药剂选自由以下组成的组：地塞米松(dexamethasone)、苯海拉明(diphenhydramine)、对乙酰氨基酚(acetaminophen)、雷尼替丁(ranitidine)、其任何等效物或其任何组合。

32.根据权利要求30至31中任一项所述的方法，其中在施用TNB-383B之前15至60分钟施用所述降低超敏反应的风险或严重性的药剂。

33.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MTD选自由以下组成的组：25μg、75μg、200μg、600μg、1,800μg、5,400μg、10,000μg、20,000μg、30,000μg、40,000μg、50,000μg、60,000μg、70,000μg、80,000μg、90,000μg、100,000μg、110,000μg、120,000μg、130,000μg、140,000μg、150,000μg、160,000μg、170,000μg和180,000μg。

34.一种用于在有需要的患者中治疗复发性或难治性多发性骨髓瘤的方法，所述方法包含以10mg至100mg范围内的固定剂量向所述患者施用TNB-383B，每3周(21天)施用一次，其中所述患者已接受至少三种既往治疗线，包括蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节酰亚胺(IMiD)和抗CD38单克隆抗体(mAb)。

35.根据权利要求34所述的方法，其中TNB-383B的所述固定剂量是60mg。