CN1153575C - 包含鼠李糖乳杆菌的药物制剂 - Google Patents

Abstract

本发明描述了一种用于预防和/或治疗人和动物中胃肠道疾病的药物制剂，该制剂在至少一种药学上可接受的载体培养基中包含鼠李糖乳杆菌菌株LB21和/或其具有基本相似功能的一种或多种变体，其中微生物保持其存活。

Description

包含鼠李糖乳杆菌的药物制剂

本发明涉及用于预防和/或治疗人和动物中胃肠道疾病的药物制剂。

背景

广泛分布于多种环境中的健康问题是由各种病原微生物引起的腹泻和其它肠道疾病。这些微生物尤其常见于用抗生素治疗或癌症放射治疗的人群、受到压力的人群、出国旅行的旅行者以及日托中心。引起腹泻的肠道病原菌实例有沙门氏菌、志贺氏菌、耶尔森氏菌、大肠杆菌、假单胞菌、艰难梭菌和索氏梭菌、金黄色葡萄球菌、克雷伯氏菌、幽门螺杆菌和弯曲杆菌。

长时间来众所周知微生物通过促进或抑制彼此生长而正反两方面相互影响。这种相互影响现象首先在人皮肤菌群、咽和肠道中得到研究。虽然其内在机制还不完全清楚，但是已发现正常菌群在抵御病原菌方面很重要。侵染的细菌受到正常菌群中细菌不同方式的抑制，其中一种方式是产生抗生素样物质，即所谓的细菌素。与抗生素相反，细菌素虽然在大多数情况下对一群细菌有高度选择性影响，但不影响其余菌群。给感染患者施用具有这种特异性效应的无害细菌的可能性不仅已经得到讨论，而且已经得到一定程度的应用。勿庸质疑施用的细菌必须能在受治疗的环境中建立自身菌群。例如，可以设想在用抗生素治疗后对有由严重腹泻引起的紊乱肠道菌群的患者给以酸奶。然而，至今还未科学地分析过在肠道菌群中发生了什么，并且其效应，如果有的话，在大多数情况下还不确定。这可能是由于以下事实，即在肠道中无建群发生或者加入的细菌无影响导致腹泻细菌的可能性。已进行了一些实验用鼻粘膜、皮肤和咽喉中的无害微生物替代这样的菌群，并且这些实验已证实所谓的再建群是可能的并且可以得到预期效应。

如上所述，已进行实验将细菌施用给患由病原微生物引起的各种疾病的患者，这些实验在大多数情况下没有得到确定结果。显然对哪些菌株最适于实现建群和相互影响的了解还不充分。

通过在确定条件下的研究，确定控制微生物间相互作用的机制的重要基本原理并且开发研究此相互作用的方法在近年来变得可能。这开启了以有意义可重复方式影响此相互作用的可能性，并且因此，也将此可能性在治疗-预防上用于感染的治疗。

在新生婴儿中，与双歧杆菌一起首先在无菌肠道中建群的是乳杆菌菌株。同样在成年人中，乳杆菌是肠道中占优势的正常菌群。许多乳杆菌菌株实际上产生对潜在肠道病原菌有抑制效应的乳酸、乙酸和过氧化氢。这些物质中有些具有抵抗特定菌株的效应，而另外一些具有更广泛的抑制效应。

乳杆菌菌株在肠道菌群中的重要性已在许多不同研究得到证实(参见基本参考文献1-8)。例如，已表明有些乳杆菌菌株防止病原菌的建群、产生细菌素和其它抗微生物成分、刺激免疫系统、降低肿瘤和结肠癌的危险、减少血清胆固醇含量、改善老年人胃肠道的活动性并提高乳糖的耐受性等。基于所有乳杆菌菌株在测试方面均不起作用的事实，也有一些研究未能显示这些效应。在一些研究中，使用的是不适当的乳杆菌制剂，例如冻干成粉状或未包被成胶囊。

WO 96/38159(Lafor Lab有限公司)公开了用于治疗抗生素相关的腹泻的药物组合物，上述组合物尤其含有活的鼠李糖乳杆菌菌株。

Jakult Honsa KK的日本专利申请172,949公开了鼠李糖乳杆菌和干酪乳杆菌与其它物质一起作为抗过敏药剂中的活性成分。

WO 93/01823涉及分离具有在人肠道中建群能力的乳杆菌菌株。例如，鼠李糖乳杆菌菌株271得到分离并且据说尤其以发酵的营养组合物形式对预防或治疗细菌感染有用。讨论的菌株是从成年人肠道中分离的。

EP-A-O271 364涉及用于治疗或预防动物肠道中疾病的制剂。此制剂包含尤其选自鼠李糖乳杆菌表型的一种或多种乳酸菌。此制剂是多种菌株的非特异性混合物并且预期不在人类中使用。此讨论的菌株看来从牛和绵羊中得到分离并且因此不适用于人类。此外，仅仅对牛和绵羊进行了实验。

DT-A1-2,421,066涉及用于将紊乱的肠道菌群重新建立至正常状态的制剂，该制剂包含双歧杆菌的混合物并且也可能包含鼠李糖乳杆菌菌株。

在我们对不同细菌间相互作用的分析中，我们特别研究了某些乳杆菌菌株如何能抵抗由于抗生素摄入而引起的腹泻并防止病原菌如螺杆菌的生长。在实验规模上对乳杆菌培养物进行测试，从中分离到大量具有不同生物特性的克隆。其中之一，鼠李糖乳杆菌LB21，下面也称为“LB21”，已从婴儿粪便中得到分离，并且已证实对大多数对人类不同类型感染至关重要的细菌有特别显著的抑制效应，其中细菌是例如金黄色葡萄球菌、不同种的沙门氏菌、志贺氏菌、假单胞菌、克雷伯氏菌-肠杆菌、弯曲杆菌、艰难梭菌、幽门螺杆菌等。精确地，LB21对肠道病原菌的强烈抑制效应可能是由于它产生特异性低分子量蛋白或特异性低分子量肽，它们是热稳定性的、具有低于5000道尔顿的分子量并且对肠道病原菌有独特方式的有害效应。

然而，上述公开文献中没有一种描述了从婴儿粪便中分离并且与亲缘关系很近的菌株相比对胃肠道疾病有显著改善效应的特异性菌株鼠李糖乳杆菌LB21。

发明目的

本发明的目的是比现有本领域治疗方法更有效地减轻上述健康问题。此目的通过以介绍方式描述的药物制剂来实现，另外该制剂具有在附属权利要求1中定义的特征性条款的特征。优选的实施方案描述于附属的子权利要求中。

发明描述

本发明涉及用于预防和/或治疗人和动物中胃肠道疾病的药物制剂，所述制剂的特征在于在至少一种药学上可接受的载体培养基中包含鼠李糖乳杆菌菌株LB21形式的存活微生物菌株和/或其具有基本相似功能的一种或多种变体，其中微生物保持其存活。更具体地，本发明涉及用于预防和/或治疗抗生素相关的腹泻、胃螺杆菌感染、旅行者腹泻和压力诱导的胃肠道疾病等疾病的药物制剂。

此外，本发明涉及能够预防和/或治疗人和动物中胃肠道疾病并已从约1-8日龄婴儿粪便中分离的鼠李糖乳杆菌菌株NCIMB 40564。

本发明的药物制剂在每ml备好即用制剂中含有10²-10¹²、优选地10⁶-10¹⁰菌落形成单位量的微生物菌株鼠李糖乳杆菌LB21或其变体。

措辞菌落形成单位是指含有一个或多个正在基质上生长的细菌的菌落数。

措辞螺杆菌感染是指胃溃疡症状，其中已鉴定到螺杆菌存在于胃中或小肠的上部。

措辞旅行者腹泻是指因为胃肠道菌群变化，例如在国外或在由例如沙门氏菌或大肠杆菌引起感染的情况下出现的腹泻。

措辞压力诱导的胃肠道疾病是指引起胃痛、腹泻或气体形成等的胃肠道菌群失衡。

在本发明优选的实施方案中，LB21的载体是酸腐或发酵的奶制品如酸奶、酸乳酪、牛奶或者果汁、冰淇淋、汤或水果饮料。细菌菌株可用作制备这样的奶制品的起始培养物，从而得到含有增加数量的优势菌株的酸腐或发酵奶制品。当然，也可以将LB21添加至制备好的奶制品或果汁、汤或冰淇淋中从而以此方式得到培养基中更大数量的所需细菌。此实施方案是高度重要的，因为这样得到的制品是有益于健康并且增值的食品。可以给予这样的制品以预防或治疗频繁影响婴儿的腹泻及其它肠道感染。此外，以抗生素治疗或癌症放射治疗的人群、在胃中有螺杆菌感染的人群和频繁遭遇胃肠道不适应的菌群的出国旅行者可以摄入这样的制品。

此制品也可以用于口腔施用的干燥形式存在，例如胶囊、片剂或粉末；或者以悬浮液形式、最好是冰冻形式存在，例如NaCl溶液、葡萄糖溶液或脱脂牛奶。在此使用的载体介质是本领域技术人员众所周知的常规类型。胶囊可以是对胃液有抗性的类型，从而使细菌受到保护免受胃液影响并仅在肠道中释放。由于相同的原因，可以本领域现有的对胃液有抗性的涂层类型使用片剂。粉末可在使用前有目的地搅拌于水性液体如水、果汁或某些奶制品中。

因此发现该制品有作为针对抗生素相关腹泻的预防和/或治疗药剂的特别大的潜力。

该制品不仅可有利地用于预防和/或治疗人和动物胃和小肠上部中的螺杆菌感染，而且也可针对所谓的旅行者腹泻和压力诱导的胃部疾病。

在根据本发明所述的药物制剂中，也可以掺入某些其它乳酸菌如一种或多种乳球菌或乳杆菌菌株，但优选地也掺入乳酸乳球菌菌株L1A。

同时也发现根据本发明所述的药物制剂对预防和/或治疗下列情况的婴儿特别有利。

a)需要特别护理的新生婴儿和早产婴儿。

这种特别护理可能导致乳杆菌和双歧杆菌的肠道正常建群不能形成，这增加了病原菌形成优势的危险。这也增加了感染的危险和抗生素的使用。LB21的添加可使这些婴儿中的肠道菌群正常化并抵消上述不利发育。

b)处于有增加的患1型糖尿病、celiaki(谷蛋白过敏)和各种自身免疫疾病的危险的状态的婴儿。

导致这些疾病的因素可能是肠道中紊乱的免疫控制使得来自食物、肠道细菌、病毒或其它微生物的抗原(不在体内天然存在的物质)可能引起针对身体自身组织的免疫反应。添加LB21可使肠道菌群正常化并且因此阻碍这些疾病的发生。

c)经历过胆管闭锁(有肝脏内/外胆管完全或部分丧失的先天性畸形)手术的儿童和经历过肝脏移植的儿重。

这类儿童在术后患影响肝/胆管感染的危险增加。提供LB21可通过抑制通常引起这些类型感染的细菌的生长来降低患这些病症的危险。

本发明的药物制剂也可与细胞毒性治疗结合使用。癌症患者频繁用对肠道功能有不利影响并且对肠粘膜的结构和新生长有有害影响的细胞毒素治疗。结果，这种治疗经常引起对营养物吸收的下降和腹泻。进一步的后果是肠道细菌经过减弱的肠粘膜扩散到血管并且导致严重感染。这导致抗生素消耗增加，继而进一步恶化肠道功能并可能意味着各种肠道细菌形成对抗生素的抗性。

通过与用细胞毒素治疗结合提供LB21，可以减轻对肠粘膜功能与结构的不利影响，继而减少由肠道中细菌导致严重感染的危险。

此外，根据本发明所述的药物制剂对于预防儿童过敏如过敏性湿疹以及预防和治疗最重要的老年人便秘是有用的。

当预期用根据本发明所述的药物制剂治疗动物时，载体是适当的饲料，例如乳清、干饲料或浓缩悬浮液形式。

微生物应该以冷冻干燥状态储存，优选地在黑暗和干燥处的脱脂牛奶中，而且优选地在约-70℃温度下冷冻。

本发明制剂的必需剂量可根据诸如患者年龄和状态的因素以及疾病类型和困难程度来加以调整。按照此背景测定适当的剂量在本领域技术人员的能力范围之内。本发明进一步的优势在于较大超剂量的药物操作很少意味着对病人的冒险。

本发明的微生物

作为来自约5日龄健康婴儿粪便的约数百个乳杆菌菌株中一个，分离到上述微生物菌株鼠李糖乳杆菌LB21，然后选择对于本发明目的最有效的菌株。从第一周如出生第一至第8天、优选的约在出生的第5天的婴儿分离LB21是十分重要的。根据Fasola与BioRad方法通过使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)可区分LB21与其它鼠李糖乳杆菌菌株。LB21以前未得到分离和定义，因此是以前完全未知的鼠李糖乳杆菌菌株，发现它在上述健康问题和疾病-健康状态中具有特别有利的效应。

下表显示选择初期的结果，其中将LB21与已经从婴儿粪便中分离的其它乳杆菌菌株就对数种病原体的抑制效应方面进行比较。

                                   相互作用表

病原体	LB6	LB8	LB14	LB18	LB21	LB27	LB32
								大肠杆菌	4/5	1/5	0/5	2/5	5/5	0/5	1/5
克雷伯氏菌	2/5	2/5	1/5	2/5	5/5	1/5	3/5
								肠球菌	0/5	0/5	0/5	1/5	3/5	0/5	1/5
B组链球菌	2/5	0/5	0/5	2/5	5/5	0/5	2/5

如上所述，将LB21作为活性成分包含在本发明制剂中并于1993年6月11日保藏于国立工业与海洋细菌保藏中心(NCIMB)，23St.MacharDrive，Aberdeen AB2 1RY，英国。其保藏号是NCIMB 40564。应当注意该菌株虽然以分类命名鼠李糖乳杆菌L20 05加以保藏，但是该菌株的常用命名后来改为鼠李糖乳杆菌LB21。根据API 50CH系统(API-System-La-Balme les Grottes-38390 Montalieu-Vercieu)对该菌株进行特征区分或分类，这从下面表示特征的表来看是显而易见的。

API 50 CL

37℃，CO₂血琼脂

         化合物                代码                24小时              48小时

0        对照                   -                    -                    -

1        甘油                   -                    -                    -

2        赤藓糖醇               -                    -                    -

3        D-阿拉伯糖             -                    -                    -

4        L-阿拉伯糖             -                    -                    -

5        核糖                   +                    +                    +

6        D-木糖                 -                    -                    -

7        L-木糖                 -                    -                    -

8        侧金盏糖醇             -                    -                    -

9        β-甲基木糖苷          -                    -                    -

10       半乳糖                 +                    +                    +

11       D-葡萄糖               +                    +                    +

12       D-果糖                 +                    +                    +

13       D-甘露糖               +                    +                    +

         化合物                代码               24小时             48小时

14       L-山梨糖               -                    -                  -

15       鼠李糖                 G                    G                  G

16       卫矛醇                 +                    G                  +

17       肌醇                   -                    -                  -

18       甘露醇                 +                    +                  +

19       山梨醇                 +                    G                  +

20       α-甲基-D-甘露糖苷     -                    -                  -

21       α-甲基-2-葡糖苷       -                    -                  -

22       N-乙酰葡糖胺           +                    +                  +

23       苦杏仁苷               G                    -                  G

24       熊果苷                 +                    -                  +

25       七叶苷                 +                    +                  +

26       水杨苷                 +                    +                  +

27       纤维二糖               +                    -                  +

28       麦芽糖                 -                    -                  -

29       乳糖                   +                    +                  +

30       蜜二糖                 -                    -                  -

31       蔗糖                   -                    -                  -

32       海藻糖                 +                    +                  +

33       菊粉                   -                    -                  -

34       松三糖                 +                    -                  +

35       D-棉子糖               -                    -                  -

36       Amidon                 -                    -                  -

37       糖原                   -                    -                  -

38       木糖醇                 -                    -                  -

39       β-龙胆二糖            G                    -                  G

40       D-松二醇               -                    -                  -

41       D-来苏糖               -                    -                  -

42       D-塔格糖               +                    +                  +

43       D-岩藻糖               -                    -                  -

44       L-岩藻糖               -                    -                  -

45       D-阿拉伯糖醇           -                    -                  -

46       L-阿拉伯糖醇           -                    -                  -

47       葡糖酸                 G                    G                  G

48       2-鲸蜡葡糖酸           -                    -                  -

49       5-鲸蜡葡糖酸           -                    -                  -

G＝绿色

+＝完全变成黄色

-＝最初的蓝-浅紫色

在这里强调不同乳杆菌菌株之间有较大差异是重要的，在亚种鼠李糖乳杆菌(LB21)中也是这样。虽然根据本发明所述的药物制剂中的LB21已经确定地鉴定为鼠李糖乳杆菌菌株，但这远不意味着该讨论的菌株与文献如WO 93/01823中所述的其它鼠李糖乳杆菌菌株相同或相似。这些亚种例如在有氧环境中生长状况不同并且在不同温度下生长。显然这不是相同菌株问题，并且对各个亚种(参见上文〕的详细特征分析表明它们具有不同特性，本领域技术人员可理解这一点。较大的差异是例如LB21从婴儿粪便中分离，而WO 93/01823中的菌株271是从成年人肠道中分离的。

然而，根据本发明所述的药物制剂也包含具有与鼠李糖乳杆菌菌株LB21基本相似功能即预防和/或治疗上述胃肠道疾病能力的该菌株的变体如突变体。

进行的实验

穿过胃肠道

乳酸菌益生菌株如本发明制剂中的LB21能够在人和动物小肠和厚壁肠中起作用的要求是它们必须在经过胃部酸性环境时存活。已进行研究以证明鼠李糖乳杆菌LB21能在经过胃部时存活并可在健康志愿者粪便中找到。此外，我们进行了长时间研究，在实验对象停止口服相同菌株后可以在其粪便中发现此菌株。

在实验A部分中，25名健康志愿者提供粪便样品于无菌塑料管中。将样品储存于阴凉处(最高4℃)直至培养。培养前，将样品以1∶10比例混合于0.9％盐溶液中。然后将10μl样品培养于含有128μg/ml万古霉素的Rogosa平板上。将平板于37℃在CO₂环境中培养并且在48小时后读数。参与实验B部分的界限设置在每g粪便大多数为4×10⁴菌落形成单位的万古霉素抗性乳杆菌。

在实验B部分中，上述25名参与的志愿者中有13名在肠道中有相对万古霉素敏感的乳杆菌菌群。要求这些受试者从实验开始前2周到研究的最后一天(全此天)不吃含有乳杆菌的食品。每位受试者每天服用10ml含有10¹¹菌落形成单位活LB21的盐溶液并维持5天。这些受试者在摄入乳杆菌之前提供粪便样品(零样品)，然后从摄入LB21的第4天到完全治愈后12天(含此天)提供粪便样品。取样和样品的培养按照与实验A部分相同的方法进行。鼠李糖乳杆菌LB21的鉴定借助格兰氏染色和API分类(CHL-培养基)进行。

应当注意8号受试者在研究过程中服用青霉素。因此该受试者与该组其余对象在相同时间开始但摄入LB21 10天。

停止摄入LB21后12天中断实验B部分。虽然这样但是LB21仍然可在13名受试者中的4名粪便中发现。在其余9名受试者中，LB21可以在摄入停止后平均5天的粪便中分离到。在服用青霉素的8号受试者中，LB21存在于整个青霉素治疗期间以及摄入停止后2天的粪便中。在这些粪便样品中，LB21以每g粪便10×10³到5×10⁵菌落形成单位的数量级存在。

受试者	停止治疗后LB21存在于粪便中的天数
		1	3
2	6
		3	3
4	12
		5	12
6	3
		7	5
8	2
		9	7
10	12
		11	3
12	7
		13	12

总之，可以确定鼠李糖乳杆菌菌株LB21经过胃部时存活并且可在所有受试者粪便中发现，也在受青霉素治疗的受试者粪便中。13名受试者中的4名在停止口服LB21后12天仍然在粪便中有LB21。其余9名受试者可以在停止摄入LB21后平均5天仍有LB21。全组13名受试者的平均数为6天。

鼠李糖乳杆菌LB21的抑制效应

已经测试上述乳酸细菌LB21对大量肠道病原菌的抑制效应。发现其具有满意的抑制效应，并且也进行实验以研究其是否也能抑制大肠杆菌0-157、艰难梭菌和幽门螺杆菌。

从病人中分离大肠杆菌0-157的2个菌株，一个是tox-而另一个是tox+。同时测试来自患抗生素相关腹泻的患者的5个艰难梭菌菌株和来自临床材料(活检)的3个幽门螺杆菌菌株。在进行互相影响测试时，使用了经调整适于测试细菌的琼脂层方法。该方法是将乳杆菌菌株在MRS培养基(Merck)中于37℃、5％ CO₂中培养过夜。然后将每个菌株分别包埋于MRS琼脂(25ml琼脂)中。将这些琼脂板在上述条件下培养24小时。将新琼脂层[M17琼脂(Merck)，25ml]或血琼脂(BHI+马血)倒至第1层上，然后让第2层固化4小时。然后将测试细菌于37℃分别培养于TY培养基(Holm，SE和Falsen，E，APMIS 1967；69，264)中。将细菌传代至Bertani槽(0.25ml，每ml 10⁶个细菌)中。在新的Bertani槽中将细菌在NaCl中稀释至1∶10。然后用Steers钢针复制器从这些槽中将测试菌株(每槽25株)印至琼脂板上。对于大肠杆菌，将平板于37℃培养，对于艰难梭菌于37℃无氧条件下培养而对于幽门螺杆菌于37℃微需氧环境中培养(Steers等，抗生素与化疗杂志179；9，307)。为了检查，使用无LB的平板。

LB21菌株抑制所有测试的细菌。

最终结果表明LB21菌株对这些肠道病原体有极其满意的抑制效应，这在下表中是显而易见的。

                 乳杆菌LB21的抑制效应

测试细菌	数目	抑制的数目	％抑制
				大肠杆菌肠球菌B组链球菌A组链球菌克霉伯氏菌奇异变型菌沙门氏菌志贺氏菌铜绿假单胞菌耶尔森氏菌腐生葡萄球菌乳杆菌幽门螺杆菌大肠杆菌0-157艰难梭菌	48411005361615151510611325	4834100536161515151040325	10083100100100100100100100199670100100100

测试根据琼脂层方法也在培养液中进行。重复测试并且在数个不同pH值进行测试。

鼠李糖乳杆菌LB21抑制抗生素相关腹泻的能力

31名健康受试者参与研究，16名男性和15名女性。然后根据性别将受试者分组并随机分成测试组或对照组。测试组包括16名受试者而对照组包括15名受试者。测试组的平均年龄为24.6岁，在19-31岁的范围中。对照组的平均年龄为24.4岁，在20-33岁的范围中。由于怀孕和由摄入抗生素引起的麻烦，有2名对照组受试者在研究过程中排除出去。因此排除率达到6.5％。对于最终的粪便测试，又一名对照组受试者由于运动损伤而被排除出去。在研究前最后6个月期间没有受试者是吸烟者或鼻咽吸入者或服用抗生素。除了Kavepenin，在研究过程中不允许任何其它药物。在开始摄入青霉素前2周以及在研究过程中不允许受试者摄入任何发酵的产品。该实验作为双盲安慰剂对照测试进行并且得到Umea大学医学院研究伦理委员会(Umea)的批准。

测试组以及对照组每日2次口服500mg Kavepenin胶囊(苯氧甲基-青霉素钾，Astra Lakemedel，Sodertalje)，持续10天。

测试组给予含有每ml 10¹¹cfu(菌落形成单位)浓度的LB21的冷冻脱脂牛奶。对照组给予脱脂牛奶作为安慰剂。让测试组受试者每日2次摄入5ml含有LB21的冷冻脱脂牛奶或安慰剂。该摄入与青霉素同时开始并持续15天。

在摄入Kavepenin前0天、在摄入Kavepenin和LB21或安慰剂过程中的第10天以及在完成Kavepenin治愈后摄入LB21/安慰剂过程中的第15天收集粪便样品。在样品送至实验室前储存于阴凉处(+4-8℃)，样品在分析之前在实验室中冷冻并储存于-20℃。所有样品在取样的24小时内冷冻。

受试者从摄入Kavepenin前一周到完成治愈后5天(含此天)在表格中记录每天通便次数和粪便粘度。同时记录胃痛和其它个人症状。

将样品称重并且用无菌水以1∶10比例稀释。用试纸(Merck，pH5-10)在混合物中央测定pH。以无菌水稀释后将LB21培养于含有128μg万古霉素的Rogosa平板上。将样品于37℃、CO₂环境中培养48小时。

以无菌水稀释后在Rogosa平板上培养所有乳杆菌。将样品于37℃、无氧条件下培养48小时。然后将样品储存于-20℃。

根据Aronsson等方法进行艰难梭菌毒素的测试。

记录通便频率、粪便粘度、胃痛和其它个人症状，并且计算平均值、中值和范围。

用SPSS for Windows进行统计学计算。结果表示为平均值和中值。在统计学计算前将乳杆菌值对数化(log 10)。根据通便次数、粪便粘度和pH值计算中值和最大值与最小值之间的范围。用Mann-Whitney U测试进行组间统计学比较(通便次数、粪便粘度、乳杆菌、pH)，其中未发现正常范围或者是不可靠的。小于0.05的pH被认为是统计学上显著的。

结果

与安慰剂组相比，摄入LB21的受试者在摄入苯氧甲基青霉素期间有大大减少的通便/腹泻，即分别是0.24和0.98(p＜0.05)。此外，与摄入青霉素之前的情况相比，安慰剂组在青霉素治疗过程中通便频率和胃痛发作增加至相当高的程度。在供给LB21组的粪便中鼠李糖乳杆菌数量也有相当大的增加。然而，在两组中，通便频率或粪便样品中乳杆菌总数方面没有明显差异。而且，这两组中无艰难梭菌毒素出现。

参者文献：

1 Sandine，W.E.1979，乳杆菌在胃肠道中的作用。食物保护杂志42，259-262。

2 Fuller，R.，1986，益生菌。J.Appl.Bacteriol.Symp.增刊1S-7S。

3 Gilliland，S.E.，Nelson，C.R.och Maxwell，C.，1985，嗜酸乳杆菌对胆固醇的同化作用。应用环境微生物学33，15-18。

4 Goldin，B.R.和Gorbach，S.L.，1980，嗜酸乳杆菌营养添加剂对1，2-二甲肼二盐酸诱导的大鼠肠癌的影响。国立癌症研究所杂志64，263-271。

5 Goldin，B.R.和Gorbach，S.L.，1987，乳杆菌GG：一种具有有利于胃肠道存活、粘附和抗微生物活性特性的新菌株。FEMS微生物学综述46，72页。

6 Lessard，M和Brisson，G.J.1987乳杆菌发酵产物对断奶猪生长免疫反应和粪便酶活性的影响。加拿大动物科学杂志62，509-516。

7 Siitonen，S.，Vapaatalo，H.，Salminen，S.，Goldin，A.，Saxelin，M.，Wikberg，R.和Kirkkola，A-L.，1990，乳杆菌GG酸奶酪在预防抗生素相关腹泻中的作用。医学年鉴22，57-59。

8 Fernandes，C.，Shahani，K，Amer，M.，1987，饮食乳杆菌和乳杆菌发酵奶制品的治疗作用。FEMS微生物学综述46：343-356。

Claims (19)

1.一种用于预防和/或治疗人和动物中胃肠道疾病的药物制剂，其特征在于它在至少一种药学上可接受的载体介质中包含具有保藏号NCIMB40564的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus casei rhamnosus)菌株LB21形式的存活微生物菌株和/或其具有基本相似功能的一种或多种变体，其中微生物保持其存活。

2.根据权利要求1中所述的药物制剂，其特征在于微生物菌株以每ml备好即用制剂中10²-10¹²菌落形成单位的量存在。

3.根据权利要求2中所述的药物制剂，其特征在于微生物菌株以每ml备好即用制剂中10⁶-10¹⁰菌落形成单位的量存在。

4.根据权利要求1中所述的药物制剂，其特征在于药学上可接受的载体介质是酸腐或发酵的奶制品。

5.根据权利要求4中所述的药物制剂，其特征在于所述药学上可接受的载体介质是酸奶、酸乳酪和牛奶或者果汁、冰淇淋、汤或水果饮料。

6.根据前述权利要求中的任意一项所述的药物制剂，其特征在于在给动物施用根据本发明所述的药物制剂时，药学上可接受的载体介质是适当的动物饲料。

7.根据权利要求6中所述的药物制剂，其特征在于所述载体介质是乳清、干饲料或浓缩的悬浮液。

8.根据权利要求1中所述的药物制剂，其特征在于已将细菌菌株作为起始培养物添加至载体介质和/或备好即用制剂中。

9.根据权利要求1中所述的药物制剂，其特征在于它与药学上可接受的载体物质一起以干燥形式或者以悬浮液形式存在。

10.根据权利要求9中所述的药物制剂，其特征在于它以胶囊、片剂或粉末的形式存在。

11.根据权利要求9中所述的药物制剂，其特征在于它以冷冻形式存在。

12.根据权利要求9中所述的药物制剂，其特征在于它是NaCl溶液、葡萄糖溶液或脱脂牛奶。

13.根据权利要求1中所述的药物制剂，其特征在于鼠李糖乳杆菌菌株LB21是从约1-8日龄婴儿的粪便中分离得到的。

14.根据权利要求13中所述的药物制剂，其特征在于鼠李糖乳杆菌菌株LB21是从约5日龄婴儿的粪便中分离得到的。

15.根据权利要求1中所述的药物制剂，其特征在于也将至少一种其它乳球菌(Lactococcus)、乳杆菌(Lactobacillus)或双歧杆菌(Bifidobacterium)菌株掺入制剂中。

16.根据权利要求15中所述的药物制剂，其特征在于将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)L1a掺入制剂中。

17.根据权利要求1中所述的药物制剂，其特征在于所述胃肠道疾病是抗生素相关的腹泻、胃和小肠上部中的螺杆菌感染、旅行者腹泻、压力诱导的胃肠道疾病、细胞毒性诱导的肠道疾病、儿童过敏、便秘和/或经历过肝脏移植或由于胆管闭锁而进行手术的儿童的肠道感染，或者新生儿或早产儿中的肠道感染。

18.能够预防和/或治愈人和动物中胃肠道疾病的鼠李糖乳杆菌菌株，其保藏号为NCIMB 40564。

19.根据权利要求18中所述的鼠李糖乳杆菌菌株，其分离自约1-8日龄婴儿的粪便中。