CN115286701A - 一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点及其应用 - Google Patents
一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点及其应用。所述的靶点为Fas相关死亡结构域FADD蛋白，所述的FADD蛋白的序列为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明的通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白的表达来实现，所述的基因的序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白是指将野生型人FADD蛋白的第194位丝氨酸突变为丙氨酸、或将小鼠FADD蛋白的第191位丝氨酸突变为丙氨酸之后获得的蛋白。本发明模拟非磷酸化FADD(S191A)小鼠表现出更严重的肠道炎症。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及到调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点及其应用。
背景技术
肠上皮内淋巴细胞(IELs)是肠黏膜免疫系统中绝大多数的免疫细胞，大约90％的IELs表达T细胞受体(TCR)(Olivares-Villagomez D等人,Trends Immunol.2018,39(4):264-275)。TCR为所有T细胞表面的特征性标志，以非共价键与CD3结合，形成TCR-CD3复合物。TCR分为两类：TCR1和TCR2；TCR1由γ和δ两条链组成，TCR2由α和β两条链组成。根据其TCR表达谱，TCR+IELs可分为两个主要亚群：一种是胸腺依赖性的常规T细胞，与CD4或CD8αβ共同受体一起表达TCRαβ；另一种是独立于胸腺发育的非常规IELs，与CD8αα同源二聚体共同表达TCRαβ或TCRγδ(Lambolez F等,J Exp Med.2002,195(4):437-449；Peaudecerf L等,Mucosal Immunol.2011,4(1):93-101；McDonald BD等,Nat Rev Immunol.2018,18(8):514-525)。这些不同的亚群对肠黏膜稳态有不同的贡献：非常规IELs(TCRαβ+CD8αα+和TCRγδ+CD8αα+)保护肠上皮免受自身配体和炎症的攻击(Qiu Y等,Dig Dis Sci.2016,61(6):1451-1460)；传统的TCRαβ+IELs响应外来攻击和微生物负荷(Ishibashi H等,DiagnPathol.2016,11；Mayassi T等,Mucosal Immunol.2018,11(5):1281-1289)。失调的IELs群体划分与炎症性肠病(IBD)密切相关，例如克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)(Vivinus-Nebot M等,Gut.2014,63(5):744-752；Kuhn KA等,Mucosal Immunol.2018,11(2):357-368；Regner EH等,Arthritis Res Ther.2018,20(1):149)。
IBD的传统治疗药物主要包括水杨酸制剂、糖皮质激素以及免疫抑制药三大类。根据研究参与致病的相关因子包括γ干扰素(interferongamma,IFN-γ)，肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactoralpha,TNF-α)，白细胞介素(interleukin)-12(IL-12)和IL-18，抗炎因子包括IL-10和转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)等，通过抑制炎症因子以及上调免疫调节因子表达来恢复细胞因子的稳态平衡可以达到治疗炎症性肠病IBD的效果。
事实上，由于组织中存在大量效应淋巴细胞，健康的肠粘膜显示出慢性炎症反应的许多特征。人类小肠和大肠以TCRαβ+IELs为主，在小鼠中也是如此。大肠中更多的微生物负荷导致产生更多适应性诱导的TCRαβ+IELs，这些IELs源自外周激活的CD8+T细胞，随后迁移到肠上皮(Beagley KW等,J Immunol.1995,154(11):5611-5619)。最近的研究报道，抗原经历的TCRαβ+CD8αβ+IELs的表型与存在于外周淋巴器官(如脾脏)中的抗原经历的CD8+T细胞的表型不同(McDonald BD等,Nat Rev Immunol.2018,18(8):514-525)。然而，这些IELs发展的监管因素仍有待研究。
尽管IBD患者有各种治疗方式，但到目前为止效果并不令人满意。最近的研究表明，Fas相关死亡域结合蛋白(FADD)在胚胎发生、先天免疫、T细胞活化和增殖中发挥着重要作用。FADD是所有已知死亡受体(DR)诱导的细胞凋亡所需的衔接蛋白，T细胞特异性FADD敲除小鼠(lck-cre或CD4-creFADD)显示外周FADD缺陷的T细胞未能对TCR刺激诱导的增殖做出反应。
由FADD信号调节的TCR诱导的细胞增殖取决于其C端S191(小鼠)或S194(人)的磷酸化(Hua ZC等,Immunity.2003,18(4):513-521；Zhang J等,2004,56(7):395-401)。FADD(S191D)转基因小鼠在FADD-/-背景下在Ser191位点处突变为Asp，表现出许多免疫发育问题，包括胸腺细胞发育缺陷。FADD(S191D)类似于FADD缺陷，导致T细胞的增殖缺陷。有趣的是，FADD(S191A)小鼠在FADD-/-背景下在Ser191位点处突变为Ala，表现出正常数量的胸腺细胞(Hua ZC等,Immunity.2003,18(4):513-521)。
目前，缺乏一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点及其应用。
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点及其应用，为CD8+T细胞功能障碍的炎症性肠病提供了新的治疗方法。
本发明比较野生型(WT)小鼠和FADD(S191A)(FADD非磷酸化)小鼠肠上皮内淋巴细胞(IELs)群体的差异，发现FADD非磷酸化或磷酸化水平对哺乳动物的肠道粘膜稳态的影响；本发明的第二个目的是探究FADD(S191A)对不同IELs群体增殖和扩张的作用；本发明的第三个目的是探究FADD(S191A)诱导的IELs群体对IBD发生的影响。
为解决上述问题和实现上述目标，在对模拟非磷酸化的FADD(S191A)蛋白和带有磷酸化的野生型FADD进行比较的基础上，本发明采用如下的技术方案：本发明的一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点，所述的靶点为Fas相关死亡结构域FADD蛋白，所述的FADD蛋白的序列为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列(第191号位点为Ser)。
本发明所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，通过调控哺乳动物或者哺乳动物来源细胞的FADD非磷酸化或磷酸化水平来实现。
进一步地，通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白的表达来实现，所述的基因的序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。
进一步地，通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白是指将野生型人FADD蛋白的第194位丝氨酸突变为丙氨酸、或将小鼠FADD蛋白的第191位丝氨酸突变为丙氨酸之后获得的蛋白。
更进一步地，所述的调控哺乳动物或者哺乳动物来源细胞的FADD非磷酸化是通过用能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的物质来处理和作用于哺乳动物或者哺乳动物来源细胞而实现。
进一步地，所述的哺乳动物为小鼠或人。
进一步地，筛选能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的物质，包括能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的大分子物质：蛋白质、核酸或者多糖，或者小分子物质：脂肪酸、维生素、天然产物、化学合成或者化学改造的产物、有机小分子或者无机分子，或者纳米分子。
本发明所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或调控哺乳动物的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增、或炎症性肠病的靶点及调节方法在调节肠道粘膜稳态、或炎症性肠病中的应用，所述的靶点及调节方法促进了TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs的快速扩增，所述的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增为TCRαβ+CD8+型肠上皮内淋巴细胞IELs亚群，所述的TCRαβ+CD8+的肠上皮内淋巴细胞IELs亚群快速扩增为TCRαβ+CD8αα+型IELs和TCRαβ+CD8αβ+型IELs亚群。
进一步地，FADD非磷酸化或者磷酸化水平降低导致结肠炎模型小鼠表现出更严重的肠道炎症；FADD部分磷酸化则相对减轻了结肠炎模型小鼠的肠道炎症，FADD及其磷酸化可以成为结肠炎的治疗靶点。
进一步地，Fas相关死亡结构域蛋白非磷酸化或者磷酸化水平降低导致结肠炎模型小鼠的血清中IFN-γ、TNF-α、IL-1和IL-6炎症因子的水平显著升高；FADD部分磷酸化则相对改善了结肠炎模型小鼠的血清中IFN-γ、TNF-α、IL-1和IL-6炎症因子的水平。
有益效果：本发明发现FADD是调节哺乳动物的肠道粘膜稳态、或调控哺乳动物的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增、TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs的快速扩增为TCRαβ+CD8+型肠上皮内淋巴细胞IELs亚群快速扩增、TCRαβ+CD8+的肠上皮内淋巴细胞IELs亚群快速扩增为TCRαβ+CD8αα+型IELs和TCRαβ+CD8αβ+型IELs亚群的快速扩增的靶点。结肠炎小鼠模型结果表明：模拟非磷酸化FADD(S191A)小鼠表现出更严重的肠道炎症；FADD磷酸化(野生型FADD)小鼠则表现出减轻的肠道炎症及其血清中相对低水的IFN-γ、TNF-α、IL-1和IL-6炎症因子。从而证明：通过调控FADD的磷酸化水平可以减轻或治疗肠道炎症。
附图说明
图1为本发明的6-8周龄的野生型FADD和FADD(S191A)小鼠的胸腺、脾脏和淋巴结细胞计数结果。
图2为本发明的小鼠胸腺、脾和淋巴结中CD4和CD8细胞的百分比。数字表示每个门中细胞的百分比，FADD-A为FADD(S191A)小鼠的缩写。
图3为本发明的8周龄的WT和FADD(S191A)小鼠肠道中总LPL和IEL的数量。
图4为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠肠道IELs细胞的FACS分析(流式细胞荧光分选技术)。针对TCRαβ和TCRγδ子集对IELs进行染色，TCRαβ+IELs的门控进一步分析了CD4、CD8α和CD8β的表达，CD8αα细胞被门控为CD8α+CD8β-。
图5为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠肠道TCRαβ+IELs、TCRγδ+IELs、CD4+、CD8+、CD8αβ+、CD8αα+细胞的数量。
图6为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠小肠切片中TCRαβ+和TCRγδ+IELs的免疫荧光染色代表性图像(40倍)及其计数结果。
图7为本发明的接受WT或FADD(S191A)小鼠骨髓细胞移植的NCG小鼠(缺乏T细胞、B细胞和NK细胞的高度免疫缺陷小鼠)肠道中总IELs和LPL数量。
图8为本发明的WT/NCG和FADD-A/NCG小鼠IELs细胞的流式细胞术分析。
图9为本发明的混合骨髓嵌合体中总IELs的数量。混合骨髓嵌合体是将BoyJ小鼠(CD45.1)和FADD(S191A)小鼠(CD45.2)或WT小鼠(CD45.2)的骨髓混合到NCG小鼠中。
图10为本发明的来自CD45.1或CD45.2的混合骨髓细胞的IEL的百分比和数量。
图11为本发明的来自混合嵌合体的CD45.1+或CD45.2+IELs中指定标记的流式细胞术分析。
图12为本发明的BrdU染色处理WT或FADD(S191A)小鼠的实验结果。
图13为本发明的3至10周大的WT或FADD(S191A)小鼠中总IELs和LPL的数量变化。
图14为本发明的3至10周大的WT或FADD(S191A)小鼠中总IELs的TCRαβ+和TCRγδ+T细胞的数量
图15为本发明的抗生素治疗的WT和FADD(S191A)小鼠的IELs的数量。
图16为本发明的WT或FADD(S191A)小鼠原代CD8+T细胞的CFSE实验结果。
图17为本发明的WT或FADD(S191A)小鼠原代CD8+T细胞的蛋白质印迹分析。
图18为本发明的T细胞活化过程中FADD磷酸化的变化。
图19为本发明的CD8+T细胞中p-FADD(S191)的FACS分析。
图20为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠的结肠照片。Sham为假手术处理对照组；TNBS-colitis为结肠炎小鼠模型组。
图21为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠的结肠长度定量结果。
图22为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠的体重变化曲线。
图23为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠结肠切片的H&E染色结果。
图24为本发明的WT和FADD(S191A)小鼠血清中炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β和IL-6的产生水平。
具体实施方式
根据以下实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
本发明的一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点，所述的靶点为Fas相关死亡结构域FADD蛋白，所述的FADD蛋白的序列为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列(第191号位点为Ser)。
本发明所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，通过调控哺乳动物或者哺乳动物来源细胞的FADD非磷酸化或磷酸化水平来实现。
通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白的表达来实现，所述的基因的序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。
通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白是指将野生型人FADD蛋白的第194位丝氨酸突变为丙氨酸、或将小鼠FADD蛋白的第191位丝氨酸突变为丙氨酸之后获得的蛋白。
所述的调控哺乳动物或者哺乳动物来源细胞的FADD非磷酸化是通过用能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的物质来处理和作用于哺乳动物或者哺乳动物来源细胞而实现。
所述的哺乳动物为小鼠或人。
筛选能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的物质，包括能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的大分子物质：蛋白质、核酸或者多糖，或者小分子物质：脂肪酸、维生素、天然产物、化学合成或者化学改造的产物、有机小分子或者无机分子，或者纳米分子。
本发明所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或调控哺乳动物的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增、或炎症性肠病的靶点及调节方法在调节肠道粘膜稳态、或炎症性肠病中的应用，所述的靶点及调节方法促进了TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs的快速扩增，所述的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增为TCRαβ+CD8+型肠上皮内淋巴细胞IELs亚群，所述的TCRαβ+CD8+的肠上皮内淋巴细胞IELs亚群快速扩增为TCRαβ+CD8αα+型IELs和TCRαβ+CD8αβ+型IELs亚群。
FADD非磷酸化或者磷酸化水平降低导致结肠炎模型小鼠表现出更严重的肠道炎症；FADD部分磷酸化则相对减轻了结肠炎模型小鼠的肠道炎症，FADD及其磷酸化可以成为结肠炎的治疗靶点。
Fas相关死亡结构域蛋白非磷酸化或者磷酸化水平降低导致结肠炎模型小鼠的血清中IFN-γ、TNF-α、IL-1和IL-6炎症因子的水平显著升高；FADD部分磷酸化则相对改善了结肠炎模型小鼠的血清中IFN-γ、TNF-α、IL-1和IL-6炎症因子的水平。
实施例1
FADD(S191A)小鼠模型构建及全身免疫组织分析
1.1实验材料
1.1.1小鼠
FADD(S191A)小鼠由发明人在美国加州大学伯克利分校的Aster Winoto博士实验室构建。NCG小鼠(NODprkdc-/-IL-2Rg-/-基因型的高度免疫缺陷小鼠)购自南京大学(中国南京)模型动物遗传学研究中心。BoyJ鼠是南京医科大学的王晓明教授捐赠。所有动物实验均经南京大学动物护理与使用委员会(NJU-ACUC)批准。
1.1.2试剂
胎牛血清FCS(fetal calf serum)购自Thermo；二硫苏糖醇DTT购自碧云天；CMFDA购自Invitrogen；10×PBS购自南京生兴生物；RPMI 1640；悬液芯片；
Percoll母液；巯基乙酸盐购自北京索莱宝；台盼蓝染料；FITC结合的TCRαβ、APC结合的TCRγδ、PE结合的CD8α、PercpCy5.5结合的CD8β、PE/Cy7结合的CD4、FITC结合的CD45.1和PercpCy5结合的CD45.2。
1.1.3仪器和耗材
流式细胞仪购于BD；振荡器购自江苏省其林贝尔；自动细胞计数仪购自Invitrogen；高压灭菌锅购自南京易普易达；荧光显微镜购自德国Carl Zeiss AG，型号Zeiss AX10；离心机购自赛默飞世尔公司；FACS分析在配备Cell Quest软件(BDBiosciences，Franklin Lakes，NJ)的FACS Calibur流式细胞仪上进行。
1.1.4溶液
CMF溶液：100mL 10×HBSS(不含钙镁)；100mL 10×HEPES-碳酸氢钠缓冲液，20mLFBS加水至1L，过滤除菌。4℃可以储存两周。4个样品只需800mL。
CMF/FCS/DTT：加8mL FCS至92mL CMF中，加入15.4mg DTT(二硫苏糖醇)(现用现配)4个样品，只需200mL。
1×Percoll储液(现用现配)：90mL Percoll加入10mL 10×PBS。
44％Percoll溶液：44mL 1×Percoll储液加入56mL RPMI 1640。
67％Percoll溶液：67mL 1×Percoll储液加入33mL RPMI 1640。用HCl调节pH至7.2，放冰上待用。所有溶液使用时，必须保持温度为4℃或冰浴。
1.2实验方法
1.2.1构建FADD(S191A)小鼠模型
为了评估FADD(S191A)小鼠对肠粘膜免疫研究的适用性，本发明首先构建了FADD(S191A)小鼠模型并分析了其是否具有正常的免疫系统。FADD(S191A)小鼠由携带突变FADD的转基因小鼠与FADD+/-小鼠交配至少两代产生，因此FADD(S191A)小鼠仅表达突变FADD来模拟具有FADD-/-等位基因的组成型非磷酸化FADD。
1.2.2肠上皮淋巴细胞的提取
(1)处死小鼠，腹中线切口，拉紧皮肤。
(2)用镊子夹起肠顶端，慢慢将结肠拖出腹腔，在阑尾处剪断下端，拖出结肠至肛门处剪断。
(3)将20mL注射器内注满4℃ CMF溶液，用镊子夹起结肠，放入大烧杯，将18-G或者20-G的针头塞入肠腔内，缓缓对注射器针筒施加压力(每分钟5mL)。如果冲洗过程中如果出现渗漏或者堵塞，将镊子移动到问题部位，重新插入注射器，继续灌注CMF。用40mL 4℃ CMF冲洗整个肠道。
(4)将肠组织放在CMF浸湿的滤纸上，用两把镊子去除剩余的脂肪和连接组织。将镊子水平放在肠表面，轻轻沿肠外表面挤压以排除肠腔内黏液。将肠纵向切开，并侧向剪成约0.5cm的片。小肠处需用剪刀减掉派氏结，结肠上无派氏结，不需剪去。
(5)将肠组织片放入50mL尖底离心管，并加入40mL 4℃ CMF溶液。上下颠倒离心管数次，待组织沉淀，倒掉上清。重复三次至上清相对澄清。
(6)将组织放入一个含有20mL CMF/FCS/DTT溶液的50mL锥形瓶，封口膜封口后放入摇床，37℃，220rpm孵育20min。
(7)将溶液和组织转移至50mL尖底离心管，用最大强度涡旋震荡15s。等组织沉降下来，用细胞筛过滤将上清转移至另一个50mL尖底离心管。
(8)向肠组织块中加入20mL CMF/FCS/DTT溶液，重复第7步。合并两次操作的上清。去除形成的碎片，冰上保存上清。
(9)将组织片放回50mL锥形瓶，重复6到8步，合并上清。4℃，400×g离心5min。用5mL 4℃预冷的RPMI 1640重悬沉淀，冰上保存。
(10)4℃，400×g离心5min。用8mL室温的44％Percoll重悬细胞。
(11)准备若干个17×100mm的管子，用FCS依次润洗这些管子，丢弃FCS。
(12)每管加入5mL 67％Percoll，慢慢加入8mL 44％的Percoll细胞悬液。4℃，600×g离心30min。
(13)吸走梯度上层一半的液体，直到距离相界面(细胞层)约2cm。收集相界面，用4℃RPMI 1640按1:3稀释细胞。4℃，400×g离心5min，使之沉淀抱团。
(14)用Typan blue统计活细胞。
(15)孵育抗体后流式细胞术进行分析。
1.3实验结果与分析
对FADD(S191A)小鼠进行肠道IELs群体分析时，与野生型(WT)小鼠相比，FADD(S191A)小鼠在胸腺、脾脏和淋巴结的表型上没有差异(图1)。CD4和CD8谱的流式细胞术分析还表明，FADD(S191A)小鼠的胸腺细胞、脾细胞和淋巴结的T细胞群与WT小鼠相似(图2)。因此，FADD(S191A)小鼠具有正常的全身免疫组织，可以适用于对肠粘膜免疫的研究。
实施例2
FADD(S191A)导致肠道IEL发育异常
2.1实验材料
2.1.1小鼠
FADD(S191A)小鼠由发明人在美国加州大学伯克利分校的Aster Winoto博士实验室构建。BoyJ鼠是南京医科大学的王晓明教授捐赠，中国南京。所有动物实验均经南京大学动物护理与使用委员会(NJU-ACUC)批准。
2.1.2试剂
胎牛血清FCS(fetal calf serum)购自Thermo；二硫苏糖醇DTT购自碧云天；CMFDA购自Invitrogen；10×PBS购自南京生兴生物；RPMI 1640；悬液芯片；
Percoll母液；巯基乙酸盐购自北京索莱宝；台盼蓝染料；FITC结合的TCRαβ、APC结合的TCRγδ、PE结合的CD8α、PercpCy5.5结合的CD8β、PE/Cy7结合的CD4、FITC结合的CD45.1和PercpCy5结合的CD45.2。VIII型胶原酶购自Sigma；DNase I购自生工生物；
2.1.3仪器
冷冻切片机购自Leica；流式细胞仪购于BD；振荡器购自江苏省其林贝尔；荧光显微镜购自德国Carl Zeiss AG，型号Zeiss AX10；离心机购自赛默飞世尔公司；FACS分析在配备Cell Quest软件(BD Biosciences，Franklin Lakes，NJ)的FACS Calibur流式细胞仪上进行。
2.2实验方法
IEL和LPL的分离：
根据先前发表的方法分离和制备粘膜淋巴细胞。清洗切开的小肠小段，然后在含有10％FCS和1mM DTT的CMF溶液中以220rpm剧烈摇动，在37℃下孵育30分钟。用尼龙网过滤悬浮液以去除碎片，并通过40-70％不连续梯度Percoll(Solarbio，北京，中国)以600g离心20分钟。收集了40-70％相间的IEL。对于LPL分离，组织在RPMI-1640中消化，辅以300U/mlVIII型胶原酶(Sigma-Aldrich，St Louis，MO，USA)、0.1mg/ml DNase I(Sangon Biotech，中国上海)和10％FCS在220rpm、37℃下保持30分钟，然后通过Percoll密度离心以44％-67％进行分级。这些细胞在PBS中洗涤一次并用于FACS分析实验。
荧光免疫组化：
用冷冻切片机(Leica，CM1950，德国)将冷冻的肠组织切成10μm的切片。5％正常山羊血清封闭后，冰冻切片与FITC标记的TCRαβ(553171，BD pharmingen)或TCRγδ(11-5811-82，eBioscience)抗体在4℃下避光孵育3小时，最后复染使用DAPI进行荧光显微镜观察(Zeiss AX10，Carl Zeiss AG，德国)。
2.3实验结果与分析
在肠道中，效应细胞存在于两个主要隔室中，即固有层淋巴细胞(LPLs)和上皮内淋巴细胞(IELs)，LPLs在表型和功能上与外周淋巴细胞相似。通过流式细胞术对FADD(S191A)小鼠与野生型FADD小鼠肠道LPLs和IELs的差异性进行分析，结果表明：来自FADD(S191A)小鼠的LPLs的细胞计数与野生型FADD小鼠相似(图3)。与野生型FADD小鼠相比，在FADD(S191A)小鼠中观察到异常IELs几乎增加了10倍(图3)。
使用一组TCRαβ和TCRγδ指标对IEL中TCRγδ+和TCRαβ+子集的比例变化进行分析，结果表明FADD(S191A)小鼠中TCRγδ+和TCRαβ+子集的比例变化与野生型FADD小鼠不同(图4)。门控TCRαβ+子集用于分析CD4和CD8谱，结果显示TCRαβ+CD8+亚群的FADD(S191A)IEL增加。为了细化CD8亚群，使用CD8α和CD8β进一步分析了TCRαβ+亚群。在FADD(S191A)IEL中观察到TCRαβ+CD8αα+比例的显著增加(图4)。然而，细胞计数表明FADD(S191A)小鼠具有正常数量的TCRγδ+IEL，并且增加的IEL群体主要是TCRαβ+IEL，在TCRαβ+CD8αβ+和TCRαβ+CD8αα+中(图5)。为了确认体内TCRγδ+和TCRαβ+IEL数量的差异，本发明对FADD(S191A)小鼠和野生型FADD小鼠的小肠切片进行了荧光免疫组织化学染色。在FADD(S191A)小鼠的绒毛中观察到更多数量的TCRαβ阳性染色，其中TCRγδ阳性染色在这些小鼠中没有变化(图6)。
实施例3
FADD(S191A)诱导小鼠TCRαβ+IEL过度扩增
3.1实验材料
3.1.1小鼠
FADD(S191A)小鼠由发明人在美国加州大学伯克利分校的Aster Winoto博士实验室构建。Boy鼠是南京医科大学的王晓明教授捐赠，中国南京。所有动物实验均经南京大学动物护理与使用委员会(NJU-ACUC)批准。
3.2实验方法
骨髓(BM)嵌合体移植：
对于BM移植，NCG小鼠接受2Gy的γ辐射和静脉注射。注射来自WT或FADD(S191A)小鼠的2×106总骨髓细胞(BMC)。根据先前描述的程序生成具有混合骨髓嵌合体的小鼠。简而言之，来自供体小FADD(S191A)或野生型FADD小鼠(CD45.2+)和BoyJ小鼠(CD45.1+)的骨髓细胞在PBS缓冲液中以1:1的比例混合。将在200μl PBS中的总共2×106混合BM静脉内移植到辐照(2.5Gy)NCG小鼠中。移植后28天处死受体小鼠，制备肠道IEL用于FACS分析。
3.3实验结果与分析
为了排除由FADD(S191A)在小鼠中全身表达引起的潜在因素，从野生型FADD或FADD(S191A)小鼠中分离骨髓细胞(BMC)并注射到NCG受体小鼠中(缺乏T细胞、B细胞的高度免疫缺陷小鼠和NK细胞)。注射后28天，在IEL室中，与野生型FADD/NCG小鼠相比，来自FADD(S191A)/NCG小鼠的总IEL显著增加(～8倍)，而总LPL相似(图7)，与FADD(S191A)小鼠的表型一致。与FADD(S191A)小鼠相似，TCRαβ+亚群的比例和细胞数量显著增加，FADD(S191A)/NCG小鼠中TCRαβ+CD8αα+的比例也显著增加(图8)。
为了更好地探讨FADD对肠道IEL种群扩张的影响，本发明生成了混合BM嵌合体。BM嵌合体是将BoyJ小鼠(CD45.1)和FADD(S191A)小鼠(CD45.2)或野生型FADD小鼠(CD45.2)的骨髓混合到NCG小鼠中，从而建立竞争性分析。两组混合BM嵌合体之间的IEL总数没有差异(图9)。
CD45.1和CD45.2对IEL的分析显示，与来自WT-BMC的CD45.1+IEL相比，来自供体FADD(S191A)-BMC的CD45.2+IEL显著增加(～4倍)(图10)。然后通过门控CD45.1或CD45.2，进一步分析TCRαβ和TCRγδ表明来自FADD(S191A)-BMCs的CD45.2+IEL主要是TCRαβ+细胞(高达92％)，与CD45.1+IEL完全不同(图11)。此外，与CD45.1+IEL相比，来自FADD(S191A)-BMC的CD45.2+IEL中TCRαβ+CD8αα+的比例也增加，这与FADD(S191A)小鼠中的观察结果一致(图11)。
实施例4
FADD(S191A)促进TCRαβ+IEL的增殖，而不是TCRγδ+IEL
4.1实验材料
4.1.1小鼠
FADD(S191A)小鼠由发明人在美国加州大学伯克利分校的Aster Winoto博士实验室构建。BoyJ鼠是南京医科大学的王晓明教授捐赠，中国南京。所有动物实验均经南京大学动物护理与使用委员会(NJU-ACUC)批准。
4.1.2试剂
溴脱氧尿苷(BrdU)；BrdU流动试剂盒(BD pharmingen)；甲硝唑(1g/L)、硫酸新霉素(1g/L)、氨苄青霉素(1g/L)和万古霉素(0.5g/L)购自Cayman Chemical；
4.2实验方法
BrdU实验：
溴脱氧尿苷(BrdU)是增殖细胞的标志物。连续7天以8小时的间隔每天两次在小鼠腹膜中注射BrdU(50mg/kg)。解剖小鼠后，收集IELs并用BrdU流动试剂盒(BD pharmingen)染色，通过流式细胞术进行分析。
抗生素治疗：
根据报道的方法，使用四种抗生素去除肠道中的共生细菌。简而言之，为小鼠提供补充有甲硝唑(1g/L)、硫酸新霉素(1g/L)、氨苄青霉素(1g/L)和万古霉素(0.5g/L)(CaymanChemical，Michigan，USA)的无菌水从5周龄开始，持续2周。向小鼠提供含有抗生素的水，每周更换两次。
胸腺去除术：
8周龄野生型FADD小鼠和FADD(S191A)小鼠腹腔注射0.1％戊巴比妥100μl用于麻醉。然后用剃刀轻轻刮掉小鼠腹部的毛发，并用酒精消毒。用消毒过的手术刀依次切开小鼠的皮层和肌肉层，将呼吸机导管插入小鼠的气管，辅助小鼠在手术过程中呼吸。在小鼠胸腔上方2cm处切下肌肉层，再切下2或3根肋骨。此时，用镊子轻轻取出胸腺，然后依次缝合皮层和肌肉层。去除胸腺的小鼠喂养一个月。
4.3实验结果与分析
为了监测肠粘膜内的T细胞增殖，本发明进行了体内BrdU掺入。用BrdU溶液给药3天后，收集肠道IEL以通过FACS分析确定BrdU的掺入。野生型FADD和FADD(S191A)小鼠中类似比例的TCRγδ+IEL被BrdU标记，但具有BrdU阳性染色的TCRαβ+IEL的百分比在FADD(S191A)小鼠中增加至～86％(图12)，表明IEL过多在FADD(S191A)小鼠中，TCRαβ+IEL显著加速增殖的结果。
为了验证FADD(S191A)对TCRαβ+IEL发育的增殖作用，本发明追踪了3至10周龄小鼠的IEL发育。与野生型FADD小鼠相比，FADD(S191A)小鼠的总IEL从第5周开始增加，并随着年龄的增长迅速增加(图13)。LPL在5周时增加，但逐渐恢复到正常水平，与WT小鼠相似(图13)。对IEL群体的下一步分析表明TCRαβ+IELs的数量显示异常增加，这与总IELs的趋势一致，而FADD(S191A)小鼠中的TCRγδ+IELs保持正常，类似于野生型FADD小鼠(图14)。考虑到TCRαβ+IEL在肠道中的积累很可能来自食物和微生物群，小鼠接受了抗生素组合治疗以减少微生物群。正如预期的那样，抗生素治疗小鼠的总IEL降低，尤其是抗生素治疗的FADD(S191A)小鼠(图15)。进一步分析表明，FADD(S191A)诱导的过量TCRαβ+IELs在抗生素治疗后几乎被消除，但TCRγδ+IELs在抗生素治疗的小鼠中没有变化(图15)。
由于绝大多数TCRαβ+T-IEL是胸腺衍生的外周T细胞，随后迁移到肠上皮，本发明检测了去除胸腺的FADD(S191A)小鼠中T-IEL的发育。在切除胸腺一个月后，胸腺切除的FADD(S191A)小鼠的总IEL恢复到与胸腺切除的野生型FADD小鼠相似的数量(图15)。FADD(S191A)小鼠(图8)的IELs总数变得正常。一致地，在切除胸腺的FADD(S191A)小鼠CD8+TCRγδ+细胞的天然T-IEL亚群也被重建为类似于野生型FADD小鼠的正常表型。这表明受FADD(S191A)影响的肠T细胞来源于胸腺，而不是T-IELs的局部发育。
实施例5
FADD(S191A)促进TCRαβ+CD8+T细胞的快速增殖
5.1实验材料
5.1.1小鼠
FADD(S191A)小鼠由发明人在美国加州大学伯克利分校的Aster Winoto博士实验室构建。BoyJ鼠是南京医科大学的王晓明教授捐赠，中国南京。所有动物实验均经南京大学动物护理与使用委员会(NJU-ACUC)批准。
5.1.2试剂
1×BD IMagTM缓冲液；小鼠CD4+磁性微珠(551539，BD Pharmingen)；小鼠CD8+磁性微珠(551516，BD Pharmingen)；
5.2实验方法
原代T细胞的磁珠分选：
从淋巴结中制备小鼠原代T细胞并重悬于1×BD IMagTM缓冲液中。1x107细胞100ul与50μl小鼠CD4+(551539)或CD8α+(551516)磁性微珠(BD Pharmingen)混合。将样品管置于细胞分离磁体(IMagnetTM，BD Pharmingen)中，用1×BD IMagTM缓冲液洗涤细胞3次。根据制造商推荐的方案洗脱所需的细胞。
5.3实验结果与分析
为了进一步检查FADD对TCR介导的细胞扩增的调节，本发明从淋巴结中分离原代T细胞用于CFSE测定。在CD3/CD28共刺激后，来自FADD(S191A)小鼠的TCRαβ+CD8+T细胞表现出加速增殖，明显快于来自野生型FADD小鼠的增殖(图16)。一致地，在FADD(S191A)CD8+T细胞中观察到IKK和NF-κB的更强激活(图17)。考虑到FADD(S191A)模拟未磷酸化的FADD，本发明进一步检测了T细胞活化过程中FADD磷酸化的变化。免疫印迹表明存在响应TCR激活的FADD去磷酸化过程(图18)。类似的结果通过流式细胞术(FACS)分析和磷酸FADD的细胞内染色得到证实(图19)。野生型FADD和FADD(S191A)的FADD蛋白质水平并无差异、但是在野生型FADD中，FADD存在少量蛋白被磷酸化的状态，结果导致FADD(S191A)CD8+T细胞中NF-κB被强烈激活。
实施例6
FADD(S191A)导致TNBS诱导的结肠炎更严重的炎症
6.1实验材料
6.1.1小鼠
FADD(S191A)小鼠由发明人在美国加州大学伯克利分校的Aster Winoto博士实验室构建。BoyJ鼠是南京医科大学的王晓明教授捐赠，中国南京。所有动物实验均经南京大学动物护理与使用委员会(NJU-ACUC)批准。
6.2实验方法：
小鼠TNBS肠炎造模：
(1)挑取16～18g小鼠若干只，放入代谢笼内禁食24h。
(2)药品配制：50％无水乙醇+48％的5％TNBS母液+2％ddH2O。
(3)乙醚吸入麻醉小鼠后，注射器吸取0.1mL配置好的药品，与灌胃针(内径为1.2mm)相连，一只手固定小鼠，另一手将导管旋转导入距肛门约5～6cm的结肠内，TNBS造模组缓慢注入终浓度0.1mL TNBS，对照组注入等量PBS。在注入药物时要头低尾高，防止灌注液体外溢，液体全部推入结肠后，缓慢抽出灌胃针，灌注后倒挂小鼠1min。
(4)自然清醒，常规饲养。
(5)每天记录体重，观察小鼠粪便状态、进食情况和精神状态。
H&E染色
苏木精(Hematoxylin，H)作为碱性染料，将核内核糖体染成蓝紫色。伊红(Eosin，E)是酸性染料，能将胞质染成红色或淡红色。
(1)剪取结肠炎症部位投入PFA固定液中，使组织蛋白变性凝固。
(2)梯度浓度的酒精逐步脱水→二甲苯浸蜡包埋。
(3)组织块浸入石蜡中包埋，冷却。
(4)固定蜡块，切成5μm薄片。在热水中烫平后放到载玻片上，烘干。
(5)染色：苏木精溶液数分钟→酸水及氨水中分色数秒→流水冲洗1h→蒸馏水片刻→70％酒精脱水10min→90％酒精脱水10min→酒精伊红染色液染色3min。滴上树胶封片。
6.3实验结果与分析
为了评估FADD(S191A)诱导的异常IEL群体对IBD发生的影响，本发明建立了TNBS诱导的结肠炎小鼠模型。与野生型FADD小鼠相比，FADD(S191A)小鼠表现出更严重的疾病，其特征是肠道出血、结肠长度缩短和体重减轻(图20-22)。FADD(S191A)小鼠结肠标本的免疫组化检测也观察到隐窝变形、黏膜损伤、坏死等病理变化，提示FADD(S191A)导致结肠炎加重(图23)。在患有结肠炎的FADD(S191A)小鼠的血清中检测到IFN-γ和TNF-α的显著增加(图24)。重要的促炎细胞因子IL-1和IL-6在结肠炎小鼠中也升高，在患有结肠炎的FADD(S191A)小鼠中显著升高，也表明FADD(S191A)小鼠的严重炎症(图24)。FADD(S191A)小鼠中这些炎症因子的基础水平是正常的，类似于肠道出血、结肠长度缩短和体重减轻小鼠中的(图24)，这与FADD(S191A)小鼠中不存在自发性肠炎一致。与FADD(S191A)小鼠中FADD处于非磷酸化状态相比，野生型FADD小鼠中FADD蛋白的少量磷酸化就大大减轻TNBS诱导的结肠炎的各项指标的严重程度，同时结肠炎相关的促炎细胞因子的水平也大大降低。这充分说明FADD是结肠炎的一个干预靶点，通过对FADD磷酸化与非磷酸化等的磷酸化水平的调控可以达到治疗结肠炎的效果。
上述说明示出并描述了本发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改，并能够在本发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
序列表
<110> 江苏靶标生物医药研究所有限公司南京吉芮康生物科技研究院有限公司
<120> 一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点及其应用
<130> 2022
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 205
<212> PRT
<213> 人工序列(FADD蛋白的氨基酸序列)
<400> 1
Met Asp Pro Phe Leu Val Leu Leu His Ser Leu Ser Gly Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Asn Asp Leu Met Glu Leu Lys Phe Leu Cys Arg Glu Arg Val Ser
20 25 30
Lys Arg Lys Leu Glu Arg Val Gln Ser Gly Leu Asp Leu Phe Thr Val
35 40 45
Leu Leu Glu Gln Asn Asp Leu Glu Arg Gly His Thr Gly Leu Leu Arg
50 55 60
Glu Leu Leu Ala Ser Leu Arg Arg His Asp Leu Leu Gln Arg Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Glu Ala Gly Thr Ala Thr Ala Ala Pro Pro Gly Glu Ala Asp
85 90 95
Leu Gln Val Ala Phe Asp Ile Val Cys Asp Asn Val Gly Arg Asp Trp
100 105 110
Lys Arg Leu Ala Arg Glu Leu Lys Val Ser Glu Ala Lys Met Asp Gly
115 120 125
Ile Glu Glu Lys Tyr Pro Arg Ser Leu Ser Glu Arg Val Arg Glu Ser
130 135 140
Leu Lys Val Trp Lys Asn Ala Glu Lys Lys Asn Ala Ser Val Ala Gly
145 150 155 160
Leu Val Lys Ala Leu Arg Thr Cys Arg Leu Asn Leu Val Ala Asp Leu
165 170 175
Val Glu Glu Ala Gln Glu Ser Val Ser Lys Ser Glu Asn Met Ala Pro
180 185 190
Val Leu Arg Asp Ser Thr Val Ser Ser Ser Glu Thr Pro
195 200 205
<210> 2
<211> 618
<212> DNA
<213> 人工序列(编码FADD蛋白的基因的核酸序列)
<400> 2
atggacccat tcctggtgct gctgcactcg ctgtccggca gcctgtcggg caacgatctg 60
atggagctca agttcttgtg ccgcgagcgc gtgagcaaac gaaagctgga gcgcgtgcag 120
agtggcctgg acctgttcac ggtgctgctg gagcagaacg acctggagcg cgggcacacc 180
gggctgctgc gcgagttgct ggcctcgctg cgccgacacg atctactgca gcgcctggac 240
gacttcgagg cggggacggc gaccgctgcg cccccggggg aggcagatct gcaggtggca 300
tttgacattg tgtgtgacaa tgtggggaga gactggaaaa gactggcccg cgagctgaag 360
gtgtctgagg ccaagatgga tgggattgag gagaagtacc cccgaagtct gagtgagcgg 420
gtaagggaga gtctgaaagt ctggaagaat gctgagaaga agaacgcctc ggtggccgga 480
ctggtcaagg cgctgcggac ctgcaggctg aatctggtgg ctgacctggt ggaagaagcc 540
caggaatctg tgagcaagag tgagaatatg gcccccgtac taagggattc aactgtgtct 600
tcctcagaaa caccctga 618
Claims (10)
1.一种调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点，其特征在于：所述的靶点为Fas相关死亡结构域FADD蛋白，所述的FADD蛋白的序列为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。
2.权利要求1所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，其特征在于：通过调控哺乳动物或者哺乳动物来源细胞的FADD非磷酸化或磷酸化水平来实现。
3.根据权利要求2所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，其特征在于：通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白的表达来实现，所述的基因的序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，其特征在于：通过模拟FADD非磷酸化的基因对应的蛋白是指将野生型人FADD蛋白的第194位丝氨酸突变为丙氨酸、或将小鼠FADD蛋白的第191位丝氨酸突变为丙氨酸之后获得的蛋白。
5.根据权利要求3所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，其特征在于：所述的调控哺乳动物或者哺乳动物来源细胞的FADD非磷酸化是通过用能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的物质来处理和作用于哺乳动物或者哺乳动物来源细胞而实现。
6.根据权利要求1所述调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，其特征在于：所述的哺乳动物为小鼠或人。
7.根据权利要求1所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或炎症性肠病的靶点的方法，其特征在于：筛选能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的物质，包括能够实现哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD非磷酸化或者能够降低哺乳动物或者哺乳动物来源细胞FADD的磷酸化水平的大分子物质：蛋白质、核酸或者多糖，或者小分子物质：脂肪酸、维生素、天然产物、化学合成或者化学改造的产物、有机小分子或者无机分子，或者纳米分子。
8.权利要求1至7任一项所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或调控哺乳动物的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增、或炎症性肠病的靶点及调节方法在调节肠道粘膜稳态、或炎症性肠病中的应用，其特征在于：所述的靶点及调节方法促进了TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs的快速扩增，所述的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增为TCRαβ+CD8+型肠上皮内淋巴细胞IELs亚群，所述的TCRαβ+CD8+的肠上皮内淋巴细胞IELs亚群快速扩增为TCRαβ+CD8αα+型IELs和TCRαβ+CD8αβ+型IELs亚群。
9.权利要求1至7任一项所述的调节哺乳动物的肠道粘膜稳态或调控哺乳动物的TCRαβ+型肠上皮内淋巴细胞IELs快速扩增、或炎症性肠病的靶点及调节方法在调节肠道粘膜稳态、或炎症性肠病中的应用，其特征在于：FADD非磷酸化或者磷酸化水平降低导致结肠炎模型小鼠表现出更严重的肠道炎症，可以成为结肠炎的治疗靶点。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：Fas相关死亡结构域蛋白非磷酸化或者磷酸化水平降低导致结肠炎模型小鼠的血清中IFN-γ、TNF-α、IL-1和IL-6炎症因子的水平显著升高。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1491894A2 (en) * | 2003-06-25 | 2004-12-29 | Eppendorf Ag | Method for the determination of cell activation |
| WO2006089264A2 (en) * | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli |
| CN102643344A (zh) * | 2003-07-26 | 2012-08-22 | 新兴产品开发西雅图有限公司 | 结合构建体及其使用方法 |
| US20130216538A1 (en) * | 2002-12-27 | 2013-08-22 | Domantis Limited | Compositions and Methods for Treating Inflammatory Disorders |
| US20150284455A1 (en) * | 2012-11-06 | 2015-10-08 | Scholar Rock, Inc. | Compositions and methods for modulating cell signaling |
| WO2017180587A2 (en) * | 2016-04-11 | 2017-10-19 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Regulated biocircuit systems |
-
2022
- 2022-03-07 CN CN202210221469.2A patent/CN115286701A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130216538A1 (en) * | 2002-12-27 | 2013-08-22 | Domantis Limited | Compositions and Methods for Treating Inflammatory Disorders |
| EP1491894A2 (en) * | 2003-06-25 | 2004-12-29 | Eppendorf Ag | Method for the determination of cell activation |
| CN102643344A (zh) * | 2003-07-26 | 2012-08-22 | 新兴产品开发西雅图有限公司 | 结合构建体及其使用方法 |
| WO2006089264A2 (en) * | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli |
| US20150284455A1 (en) * | 2012-11-06 | 2015-10-08 | Scholar Rock, Inc. | Compositions and methods for modulating cell signaling |
| WO2017180587A2 (en) * | 2016-04-11 | 2017-10-19 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Regulated biocircuit systems |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| JING ZHANG等: "FADD and its Phosphorylation", IUBMB LIFE, vol. 56, no. 7, pages 399 * |
| RAMOS-MIGUEL A等: "FAS-associated death domain protein [Mus musculus]", GENBANK DATABASE, pages 034305 * |
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