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CN115246832B - 一类去泛素化酶usp25和usp28靶向抑制剂及制备和应用 - Google Patents

一类去泛素化酶usp25和usp28靶向抑制剂及制备和应用 Download PDF

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CN115246832B CN202210683757.XA CN202210683757A CN115246832B CN 115246832 B CN115246832 B CN 115246832B CN 202210683757 A CN202210683757 A CN 202210683757A CN 115246832 B CN115246832 B CN 115246832B
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Abstract

本公开涉及一类去泛素化酶USP25和USP28靶向抑制剂及制备和应用，具体涉及式I所示的化合物或其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或前药，其组合物、制备方法和用途。

Description

一类去泛素化酶USP25和USP28靶向抑制剂及制备和应用
技术领域：
本发明涉及化学药物的合成及药理学应用领域，涉及泛素特异性蛋白酶25(USP25)和泛素特异性蛋白酶28(USP28)的抑制剂及其用途。该抑制剂用于预防和/或治疗与USP25和USP28相关的疾病或紊乱。
具体地说，本发明涉及一类泛素特异性蛋白酶USP25和USP28抑制剂及其组合物、以其治疗USP25和USP28相关疾病的方法，及其化学合成制备方法。
背景技术：
泛素(Ubiquitin)是一种在生物细胞中广泛存在的小分子调节蛋白(8.5KDa)。泛素化是指泛素蛋白在一系列特殊的酶作用下，对靶蛋白进行特异性修饰的过程。通常情况下，多聚泛素化的蛋白会被蛋白酶体降解，而单泛素化的蛋白会参与细胞通路的调控。泛素化过程可以被一类叫做去泛素化酶(Deubiquitinating Enzymes，DUBs)的蛋白酶逆转，它们通过去除靶蛋白上的泛素蛋白来调节各种细胞过程。DUBs由大约100个人类基因编码，分为7个家族(USP，UCH，SENP，JAMM，OUT，MJD，MINDY)其中最大的家族是泛素特异性蛋白酶(USP)，有50多个蛋白成员。在论文报道中已经指出了一些DUBs在肿瘤细胞或者炎症的发生过程之中产生了作用。
USP25是去泛素化酶系统的关键成员之一，USP25的蛋白结构中包含两个肽酶区域，一个可与泛素结合的区域、以及两个可与泛素相互作用的基序。和泛素水解酶活性相关的区域是肽酶区域。表达USP25的基因最早在1999年被鉴定出来(by RebecaValero.Etc.)，USP25蛋白属于去去泛素酶家族成员之一，去泛素化酶在细胞内蛋白降解过程中发挥重要作用(Valero，R.；Marfany，G.；González-Angulo，O.；González-González，G.；Puelles，L.；Gonzàlez-Duarte，R.USP25，a Novel Gene Encoding aDeubiquitinating Enzyme，Is Located in the Gene-Poor Region21q11.2.Genomics1999，62(3)，395-405.)。进一步的研究发现了USP25在多种细胞生理过程中起到调节的作用。A.Bosch-Comas等在2006年的报道指出，USP25基因可以编码产生三种蛋白质亚型。其中较长的USP25亚型(USP25m)的表达仅存在肌肉组织之中，并且在肌肉生成过程中上调。USP25m与三种肌节蛋白相互作用：肌动蛋白alpha-1(ACTA1)、细丝蛋白C(FLNC)和肌球蛋白结合蛋白C1(MyBPC1)，它们与肌肉分化和维持密切相关，并与严重肌病的发病机制有关(Bosch-Comas，A.；Lindsten，K.；Gonzàlez-Duarte，R.；Masucci，M.G.；Marfany，G.The Ubiquitin-Specific Protease USP25 Interacts with ThreeSarcomeric Proteins.Cell.Mol.Life Sci.2006，63(6)，723-734.)。Michael Cholay等在2010年的研究鉴定并表征了SYK和USP25之间的相互作用，发现SYK可以特异性的磷酸化USP25并改变其细胞层面的表达水平。(Cholay，M.；Reverdy，C.；Benarous，R.；Colland，F.；Daviet，L.Functional Interaction between the Ubiquitin-Specific Protease 25andthe SYK Tyrosine Kinase.Exp.Cell Res.2010，316(4)，667-675.)Jessica R.Blount等在2012年发现了USP25在内质网相关的降解过程(ERAD)中发挥的作用，即USP25通过泛素连接酶HRD1反作用于ERAD底物的泛素化过程，使它们免于被蛋白酶体降解。(Blount，J.R.；Burr，A.A.；Denuc，A.；Marfany，G.；Todi，S.V.Ubiquitin-Specific Protease25Functions in Endoplasmic Reficulum-Associated Degradation.PLoS One 2012，7(5)，1-9.)。
Zhong，Bo等2012年发现USP25可以负向调节白细胞介素17(IL-17)介导的信号通路和炎症过程。研究指出USP25的过表达抑制了IL-17触发的信号传导，而USP25缺乏导致抑制剂IκBα和激酶Jnk的更多磷酸化，以及趋化因子和细胞因子的更高表达，同时延长了趋化因子CXCL1编码mRNA的半衰期。与此一致，Usp25-/-小鼠在体内对IL-17依赖性炎症和自身免疫表现出更高的敏感性。研究同时解释这一过程的机制，即IL-17刺激诱导USP25与TRAF5和TRAF6结合，USP25移除了由Act1介导的TRAF5和TRAF6中通过Lys63连接的泛素化。表明USP25它可以抑制以及调节IL-17触发的信号。(Zhong，B.；Liu，X.；Wang，X.；Chang，S.H.；Liu，X.；Wang，A.；Reynolds，J.M.；Dong，C.Negative Regulation of IL-17-MediatedSignaling and Inflammation by the Ubiquitin-Specific ProteaseUSP25.Nat.Immunol.2012，13(11)，1110-1117.)。更进一步的研究发现USP25可以作为Toll-like受体(TLR)信号通路的调节剂，并且在受到TLR4的配体脂多糖(LPS)的刺激后，可以与肿瘤坏死因子受体TRAF3和TRAF6相作用。通过在TLR4激活期间抑制TRAF3的降解，USP25能够平衡先天免疫反应。(Zhong，B.；Liu，X.；Wang，X.；Liu，X.；Li，H.；Damay，B.G.；Lin，X.；Sun，S.C.；Dong，C.Ubiquitin-Specific Protease 25Regulates TLR4-DependentInnate Immune Responses through Deubiquitination of the Adaptor ProteinTRAF3.Sci.Signal.2013，6(275)，1-11.)
Zhong，Huijuan等发现USP25可以负向调节由病毒感染触发的I型干扰素(IFN)的信号通路，USP25的过表达抑制病毒诱导的IFN-β、干扰素调节因子3(IRF3)和核因子-κB(NF-κB)的活化，以及IRF3和NF-κB亚基p65的磷酸化。(Zhong，H.；Wang，D.；Fang，L.；Zhang，H.；Luo，R.；Shang，M.；Ouyang，C.；Chen，H.；Xiao，S.Ubiquitin-Specific Proteases25Negatively Regulates Virus-Induced Type I Interferon Signaling.2013，8(11)，1-14.)。Xu，Daicha等研究发现USP25可以作为Wnt/β-catenin信号通路的正向调节剂。Wnt信号通路的异常激活在人类癌症发展中起重要作用，研究发现发现USP25可以直接与tankyrases作用以促进其去泛素化和稳定化USP25的敲除可以促tankyrases的降解，降低随后的Axin的稳定性，从而上调Wnt信号传导.(Xu，D.；Liu，J.；Fu，T.；Shan，B.；Qian，L.；Pan，L.；Yuan，J.USP25 Regulates WNT Signalling by Controlling the Stability ofTankyrases.Genes Dev.2017，31(10)，1024-1035.)
具体到和USP25相关的疾病研究中，Shibata，Norihito等发现USP25抑制了携带费城染色体(Ph)的细胞BCR-AB蛋白的降解。通过敲除USP25，BCR-ABL介导的信号传导和白血病细胞增殖受到抑制，研究表明USP25可以成为针对慢性粒细胞性白血病(CML)的新靶标(Shibata，N.；Ohoka，N.；Tsuji，G.；Demizu，Y.；Miyawaza，K.；Ui-Tei，K.；Akiyama，T.；Naito，M.Deubiquitylase USP25 Prevents Degradation of BCR-ABL Protein andEnsures Proliferation of Ph-Positive Leukemia Cells.Oncogene 2020，39(19)，3867-3878.)Nino，Carlos A.等研究指出表皮生长因子受体EGFE的突变会导致细胞的异常增殖。这一过程往往发生在肿瘤细胞的早期，并在肿瘤的生长和发展中扮演了重要的作用。E3泛素连接酶Cb1在USP25的协助之下，可以与EGFR结合来抑制EGFR的降解。在这一过程中USP25对EGFR的下调过程起负向调节作用。在药物的研发中有希望通过USP25作为目标，对依赖于EGFR的肿瘤的生长发展进行干预(，C.A.；Wollscheid，N.；Giangreco，G.；Maspero，E.；Polo，S.Usp25 Regulates Egfr Fate by Modulating Egf-InducedUbiquitylation Dynamics.Biomolecules 2020，10(11)。)。多囊卵巢综合征(PCOS)是一种与卵泡发育异常相关的内分泌相关疾病，是全球不孕症的主要原因。Gao，Yue等研究发现USP25可以通过去泛素化PTEN调节PI3K/AKT信号通路，从而影响颗粒细胞(GCs)的增殖和凋亡，促进多囊卵巢综合征(PCOS)的发病。研究发现PCOS患者和小鼠中USP25表达升高。在小鼠模型中观察到USP25缺失后，小鼠PCOS症状的减轻。在USP25敲低后，在KGN细胞中发现增殖增加、细胞凋亡减少、磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路激活和PTEN表达降低。(Gao，Y.；Chen，J.；Ji，R.；Ding，J.；Zhang，Y.；Yang，J.USP25 Regulates theProliferation and Apoptosis of Ovarian Granulosa Cells in Polycystic OvarySyndrome by Modulating the PI3K/AKT Pathway via DeubiquitinatingPTEN.Front.Cell Dev.Biol.2021，9(November)，1-14.)此外，也有研究指出了USP25的过量表达与阿尔兹海默症之间的关系(Zheng，Q.；Li，G.；Wang，S.；Zhou，Y.；Liu，K.；Gao，Y.；Zhou，Y.；Zheng，L.；Zhu，L.；Deng，Q.；Wu，M.；Di，A.；Zhang，L.；Zhao，Y.；Zhang，H.；Sun，H.；Dong，C.；Xu，H.；Wang，X.Trisomy 21-Induced Dysregulation of MicroglialHomeostasis in Alzheimer’s Brains Is Mediated by USP25.Sci.Adv.2021，7(1)，1-14.)
USP28与USP25的结构具有相似性，其氨基酸序列高度同源。USP28同样也是被Rebeca Valero等于2001年鉴定出来，并且报道这种新基因优先表达在心脏和肌肉中。(Valero，R.；Bayés，M.；Sánchez-font，M.F.；González-，O.；Gonzàlez-duarte，R.；Marfany，G.Characterization of Alternatively Spliced Products and Tissue-Specific Isoforms of USP28 and USP25.2001，1-10.)。Zhang，Dong等发现USP28可以调节Chk2-p53-PUMA信号通路，这一信号通路可以诱导因为DNA双链断裂产生细胞凋亡。USP28和Chk2都是DNA损伤诱导的细胞凋亡所必需的，它们部分通过调节p53诱导的促凋亡基因(如PUMA)来实现这一功能(Zhang，D.；Zaugg，K.；Mak，T.W.；Elledge，S.J.A Role for theDeubiquitinating Enzyme USP28 in Control of the DNA-Damage Response.Cell2006，126(3)，529-542.)MYC原癌基因编码一种转录因子，该因子与许多人类肿瘤的发生有关。USP28是人类肿瘤细胞中MYC稳定性所必需的。USP28通过与FBW7α的相互作用与MYC结合，其对MYC的稳定对肿瘤细胞增殖至关重要，研究中同时发现USP28在结肠癌和乳腺癌中都有高表达水平(Popov，N.，Wanzel，M.，Madiredjo，M.et al.The ubiquitin-specificprotease USP28 is req.uired for MYC stability.Nat Cell Biol 9，765-774(2007))。
在乳腺癌中，LSD1是一种关键的染色质调节剂，通过H3K4me1/2的去甲基化来控制细胞的多能性和分化，LSD1的过表达与其在肿瘤发生中的致癌作用相关。Wu，Yadi等研究发现USP28是LSD1的去泛素酶。USP28通过去泛素化与LSD1相互作用并使其稳定。USP28过表达与多种癌细胞系和乳腺肿瘤样本中的LSD1上调相关。敲除USP28导致LSD1不稳定，导致体外抑制癌症干细胞(CSC)样特征并抑制体内致瘤性，这一研究成果为乳腺癌的治疗提供了一种新的可行方法(Wu，Y.；Wang，Y.；Yang，X.H.；Kang，T.；Zhao，Y.；Wang，C.；Evers，B.M.；Zhou，B.P.The Deubiquitinase USP28 Stabilizes LSD1 and Confers Stem-Cell-likeTraits to Breast Cancer Cells.Cell Rep.2013，5(1)，224-236.)。
Guo，Guiying等报道了USP28与膀胱癌的相关性。通过实时聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹在24对膀胱癌和邻近的非癌组织中测定USP28的mRNA和蛋白质表达水平，发现与邻近的非癌组织相比，USP28在mRNA和蛋白质水平上的表达水平更高(均P＜0.01)，Usp28表达被确定为生存的独立预测因子(P＝0.001)(Guo，G.，Xu，Y.，Gong，M.et al.USP28 is apotential prognostic marker for bladder cancer.Tumor Biol.35，4017-4022(2014).)
Lei Zhang等指出了USP28的过表达与非小细胞肺癌(NSCLC)关系。NSCLC中USP28的高mRNA和蛋白水平均与低患者存活率相关。USP28的过表达促进了NSCLC细胞的生长，反之亦然。数据表明，USP28是一种肿瘤促进因子，是NSCLC的一个有希望的治疗靶点(Zhang，L.；Li，D.；Qian，J.Overexpression of Deubiquitinating Enzyme USP28 Promoted Non-Small Cell Lung Cancer Growth.2015，19(4)，799-805.)。
在结直肠癌中，Diefenbacher，Markus E.等在小鼠模型中发现USP28可以拮抗c-MYC(一种已知的USP28底物)以及2addnl，肠道中的致癌因子c-JUN和NOTCH1的泛素依赖性降解。缺乏USP28的小鼠没有明显的不良表型，但表现出肠道增殖减少和分泌谱系细胞分化受损。在结直肠癌的小鼠模型中，USP28缺失导致肠道肿瘤减少，重要的是，在已建立的肿瘤中，USP28缺失减少了肿瘤大小并显着延长了寿命。USP28缺乏促进了肿瘤细胞分化并伴随着增殖减少，这表明USP28在肠道稳态和结直肠癌模型中的作用相似。因此，抑制USP28的酶活性可能是癌症治疗的潜在靶点(Diefenbacher，M.E.；Popov，N.；Blake，S.M.；Schülein-，C.；Nye，E.；Spencer-Dene，B.；Jaenicke，L.A.；Eilers，M.；Behrens，A.TheDeubiquitinase USP28 Controls Intestinal Homeostasis and Promotes ColorectalCancer.J.Clin.Invest.2014，124(8)，3407-3418)。
综上所述，靶向USP25和USP28的小分子抑制剂及其在组合物中的使用，有可能成为癌症和其他USP25和USP28相关疾病的治疗方法。
发明内容
本申请的目的之一是提供一类具有USP25和/或USP28抑制活性的化合物。
根据本发明，提供下式I所示的化合物或其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或前药：
其中
R1选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基硫基，C1-C6烷基氨基，二(C1-C6烷基)氨基，C3-C6环烷基氨基，C6-C14芳基，5至7元杂芳基，其中，所述5至7元杂芳基包含选自N、O、S中的一个或多个杂原子；
优选地，R1选自：氢，卤素，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基硫基，C1-C3烷基氨基，二(C1-C3烷基)氨基，C3-C4环烷基氨基，C6-C10芳基，5至6元杂芳基，其中，所述5至6元杂芳基包含选自N、O、S中的一个或多个杂原子；
更优选地，R1选自：氢，苯基，噻吩基，卤素，甲基，乙基，异丙基，甲氧基，-S-CH3，-N(CH3)2，-NH-C3H7，-NH-环丁基；
R2选自：H，-N(Ra)(Rb)，-C(O)N(Rc)(Rd)，其中
Ra，Rb，Rc和Rd各自独立地选自氢，取代或未取代的C1-C6烷基，其中，用于取代的取代基选自氨基，羟基，C1-C6烷基氨基，二(C1-C6烷基)氨基，3至7元含氮饱和杂环基，未取代或卤素、氰基、C1-C6烷基或卤代C1-C6烷基取代的C6-C14芳基，
或者Ra和Rb以及Rc和Rd分别与和它们相连的氮一起形成未取代或氨基、硝基、卤素取代的3至7元饱和杂环，其中，该3至7元饱和杂环包含1或2个选自N、O、S的杂原子；
优选地，R2选自：H，-N(Ra)(Rb)，-C(O)N(Rc)(Rd)，其中
Ra，Rb，Rc和Rd各自独立地选自氢，取代或未取代的C1-C4烷基，其中，用于取代的取代基选自氨基，羟基，C1-C4烷基氨基，二(C1-C4烷基)氨基，3至6元含有1或2个氮原子的饱和杂环基，未取代或卤素、氰基、C1-C4烷基或卤代C1-C4烷基取代的C6-C10芳基，
或者Ra和Rb以及Rc和Rd分别与和它们相连的氮一起形成未取代或氨基取代的4至6元饱和杂环，其中，该4至6元饱和杂环包含1或2个N原子；
更优选地，R2选自：H，-NH-(CH2)2-NH2，-NH-(CH2)3-NH2，-NH-(CH2)4-NH2，-NH-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-N(CH3)2，-N(CH3)-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-OH，-C(O)NH-(CH2)2-NH2，哌嗪基，
R3，R4，R5各自独立地选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，卤代C1-C6烷基，卤代C1-C6烷氧基，C1-C6烷基磺酰基；
优选地，R3，R4，R5各自独立地选自：氢，卤素，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷基，卤代C1-C4烷氧基，C1-C4烷基磺酰基；
更优选地，R3，R4，R5各自独立地选自：氢，甲基，乙基，正丙基，异丙基，甲氧基，乙氧基，卤素，-CF3，-OCF3，-SO2-CH3；
A1和A2各自独立地为N或C-R6，其中，R6选自：氢，C1-C6烷基，卤代C1-C6烷基；优选地，A1和A2各自独立地为N或C-R6，其中，R6选自：氢，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基；
更优选地，A1是CH，N或C-CF3；
A2是CH或N；
X和Y各自独立地选自N和C-R7，其中，R7选自：氢，未取代或氨基取代的4至7元含氮饱和杂环基；
优选地，X和Y各自独立地选自N和C-R7，其中，R7选自：氢，未取代或氨基取代的5至6元含有1或2个氮原子的饱和杂环基；
更优选地，
X是CH或N；
Y是N或C-R7，其中
R7选自：氢，哌嗪基，
n为1，2或3。
例如，在一个实施方式中，
R1选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基硫基，C1-C6烷基氨基，二(C1-C6烷基)氨基，C3-C6环烷基氨基，C6-C14芳基，5至7元杂芳基，其中，所述5至7元杂芳基包含选自N、O、S中的一个或多个杂原子；
R2选自：H，-N(Ra)(Rb)，-C(O)N(Rc)(Rd)，其中
Ra，Rb，Rc和Rd各自独立地选自氢，取代或未取代的C1-C6烷基，其中，用于取代的取代基选自氨基，羟基，C1-C6烷基氨基，二(C1-C6烷基)氨基，3至7元含氮饱和杂环基，未取代或卤素、氰基、C1-C6烷基或卤代C1-C6烷基取代的C6-C14芳基，
或者Ra和Rb以及Rc和Rd分别与和它们相连的氮一起形成未取代或氨基、硝基、卤素取代的3至7元饱和杂环，其中，该3至7元饱和杂环包含1或2个选自N、O、S的杂原子；
R3，R4，R5各自独立地选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，卤代C1-C6烷基，卤代C1-C6烷氧基，C1-C6烷基磺酰基；
A1和A2各自独立地为N或C-R6，其中，R6选自：氢，C1-C6烷基，卤代C1-C6烷基；
X是CH或N；
Y是N或C-R7，其中
R7选自：氢，哌嗪基，
n为1，2或3。
例如，在一个实施方式中，
R1选自：氢，卤素，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基硫基，C1-C3烷基氨基，二(C1-C3烷基)氨基，C3-C4环烷基氨基，C6-C10芳基，5至6元杂芳基，其中，所述5至6元杂芳基包含选自N、O、S中的一个或多个杂原子；
R2选自：H，-N(Ra)(Rb)，-C(O)N(Rc)(Rd)，其中
Ra，Rb，Rc和Rd各自独立地选自氢，取代或未取代的C1-C4烷基，其中，用于取代的取代基选自氨基，羟基，C1-C4烷基氨基，二(C1-C4烷基)氨基，3至6元含有1或2个氮原子的饱和杂环基，未取代或卤素、氰基、C1-C4烷基或卤代C1-C4烷基取代的C6-C10芳基，
或者Ra和Rb以及Rc和Rd分别与和它们相连的氮一起形成未取代或氨基取代的4至6元饱和杂环，其中，该4至6元饱和杂环包含1或2个N原子；
R3，R4，R5各自独立地选自：氢，卤素，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷基，卤代C1-C4烷氧基，C1-C4烷基磺酰基；
A1和A2各自独立地为N或C-R6，其中，R6选自：氢，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基；
X和Y各自独立地选自N和C-R7，其中，R7选自：氢，未取代或氨基取代的5至6元含有1或2个氮原子的饱和杂环基；
n为1，2或3。
例如，在一个实施方式中，
R1选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基硫基，C1-C6烷基氨基，二(C1-C6烷基)氨基，C3-C6环烷基氨基，C6-C14芳基，5至7元杂芳基，其中，所述5至7元杂芳基包含选自N、O、S中的一个或多个杂原子；
R2选自：H，-NH-(CH2)2-NH2，-NH-(CH2)3-NH2，-NH-(CH2)4-NH2，-NH-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-N(CH3)2，-N(CH3)-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-OH，-C(O)NH-(CH2)2-NH2，哌嗪基，
R3，R4，R5各自独立地选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，卤代C1-C6烷基，卤代C1-C6烷氧基，C1-C6烷基磺酰基；
A1和A2各自独立地为N或C-R6，其中，R6选自：氢，C1-C6烷基，卤代C1-C6烷基；
X是CH或N；
Y是N或C-R7，其中
R7选自：氢，哌嗪基，
n为1，2或3。
例如，在一个实施方式中，
R1选自：氢，苯基，噻吩基，卤素，甲基，乙基，异丙基，甲氧基，-S-CH3，-N(CH3)2，-NH-C3H7，-NH-环丁基；
R2选自：H，-NH-(CH2)2-NH2，-NH-(CH2)3-NH2，-NH-(CH2)4-NH2，-NH-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-N(CH3)2，-N(CH3)-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-OH，-C(O)NH-(CH2)2-NH2，哌嗪基，
R3，R4，R5各自独立地选自：氢，甲基，乙基，正丙基，异丙基，甲氧基，乙氧基，卤素，-CF3，-OCF3，-SO2-CH3；
A1是CH，N或C-CF3；
A2是CH或N；
X是CH或N；
Y是N或C-R7，其中
R7选自：氢，哌嗪基，
n为1，2或3。
具体地，根据本发明式I所示的化合物可具有以下所示结构：
本发明的另一个目的是提供一种药物组合物，所述药物组合物包含如上所述的式I所示的化合物或其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或前药作为活性成分，及任选的药学上可接受的载体。
本发明的另一个目的是提供如上所述的式I所示的化合物或其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或前药在制备USP25和/或USP28抑制剂的用途。
根据本发明的一方面，提供如上所述的式I所示的化合物或其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或前药在制备用于预防或治疗与USP25和/或USP28相关疾病的药物的用途。
本发明的另一个目的是提供一种预防或治疗与USP25和/或USP28相关的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如上所述的式I所示的化合物或其消旋体、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或前药，或所述药物组合物。
本发明中，所述与USP25和/或USP28相关的疾病包括癌症(如结直肠癌、)、炎症、自身免疫疾病、以及神经退行性疾病等。
本发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。
本发明中，“药学上可接受的载体”用于将本发明的活性物质或其生理上可接受的盐传送给动物或人的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。
本发明的药物组合物可以是多种形式，如片剂、胶囊、粉末、糖浆、溶液状、悬浮液和气雾剂等。所述组合物可以含有选自甜味剂、着色剂和防腐剂中的一种或多种成分。
本公开的化合物可以用作单一疗法或联合疗法。在一些实施方案中，联合疗法包括用化学治疗剂，治疗性抗体，放射线，细胞疗法或免疫疗法治疗受试者。
定义
如本文所用，术语“烷基”，单独或作为另一基团的一部分使用时，是指直链或支链脂族饱和烃基。在一些实施方式中，烷基可包含1至6个碳原子，即C1-C6烷基，包括C1烷基(如甲基)，C2烷基(如乙基)，C3烷基(如丙基或异丙基)，C4烷基，C5烷基和C6烷基。在一个实施方式中，烷基为直链C1-C4烷基。在另一个实施方式中，烷基为支链C3-6烷基。例如，本文所用的C1-C4烷基是指选自甲基、乙基、丙基(正丙基)、异丙基、丁基(正丁基)、仲丁基、叔丁基和异丁基的基团。任选取代的C1-C4烷基是指所定义的C1-C4烷基，其任选地被如本文所述的一个或多个允许的取代基取代。
如本文所用，术语“烷氧基”，单独或作为另一基团的一部分使用时，是指式-ORa1的基团，其中Ra1为烷基。
如本文所用，术语“烷基氨基”，单独或作为另一基团的一部分使用时，是指式-NHRa1的基团，其中Ra1为烷基。
如本文所用，术语“卤代烷基”，单独或作为另一基团的一部分使用时，是指被一个或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的烷基。例如，卤代C1-C6烷基，是指所定义的C1-C6烷基中的一个或多个氢原子被卤素取代，如三氟甲基(-CF3)、2，2，2-三氟乙基(-CH2CF3)
如本文所用，术语“芳基”，单独或作为另一基团的一部分使用时，是指具有在芳香环系统(“C6-C14芳基”)中提供的6-14个碳原子和0个杂原子的单环或多环(例如双环)基团。在一些实施方式中，芳基具有6个环碳原子(“C6芳基”；例如，苯基)。在一些实施方式中，芳基具有10个环碳原子(“C10芳基”；例如，萘基，如1-萘基和2-萘基)。在一些实施方式中，芳基具有14个环碳原子(“C14芳基”；例如，蒽基)。
术语“杂芳基”是指含有至少一个选自氮、氧或硫的杂原子作为环成员的单环或双环芳香环基团；“5-7元杂芳基”指包含5至7个环原子的杂芳基。杂芳基的例子包括但不仅限于下列基团：吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、喹啉基等。
“饱和杂环基”或“饱和杂环”，单独或作为另一基团的一部分使用时，是指具有环碳原子和1-4个环杂原子(其中每个杂原子独立地选自氮、氧、硫)的饱和环系统的基团，例如3-7元饱和杂环基是指环碳原子和环杂原子的总数为3至7的饱和环系统的基团。
示例性的含有氮杂原子的4至6元饱和杂环基包括氮杂环丁基，氮杂环戊基，氮杂环己基，哌啶基，哌嗪基等。
在如上所定义的杂环基和杂芳基中，对其连接点不限定，只要其满足价态需求即可。例如，在化合价允许的情况下，在含有一个或多个氮原子的杂环基中，连接点可以是碳或氮原子。例如哌嗪基(哌嗪)，其连接点可以是碳原子也可以是氮原子。例如噻吩基，其连接点可在邻位或间位，包括
如本文所用，术语“烷基磺酰基”是指如上定义的烷基与磺酰基连接再通过磺酰基连接至母核，例如所述“C1-C6烷基磺酰基”指“C1-C6烷基-SO2-”基团，其中，C1-C6烷基如上所述。
如本文所用，术语“卤素”包括氟、氯、溴、碘。
具体实施方式
制备例：示例地，本发明的化合物可以通过如下合成路线制备
以下反应中用到的片段可通过商业途径购买得到或通过所示反应制备得到：
将化合物F10(1eq.)溶于干燥DMSO中，冰浴搅拌5min，加入KOH(3eq.)，I2(1.25eq.)，25℃反应5h，反应完成后，EtOAc与饱和食盐水洗涤，收集有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到F11(收率55％)。
合成路线1：
将化合物r1(1eq.)溶于干燥DMF中，冷却到0℃，缓慢加入NaH(2eq.)，0℃下搅拌1h，加入F7(1.5eq.)，搅拌反应12h，滴加冰水，停止反应，用EtOAc和饱和食盐水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A1(收率62％)。
将化合物A1(1eq.)溶于干燥DMF中，加入碳酸钾(3eq.)，单-Boc-乙二胺(2eq.)，110℃反应12h，反应完成后，用EtOAc和饱和食盐水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A2(收率5％)。
将化合物A2(1eq.)溶于干燥CH2Cl2中，加入Et3N(3eq.)，0℃搅拌5min，滴加TMSOTf(5eq.)，反应2h，反应完成后，冰浴下用冰水淬灭，用CH2Cl2和水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶薄层层析分离得到I-1(收率31％)。
实施例1：通过合成路线1可得。
I-1(9.5mg，45％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.36(s，1H)，7.47(d，J＝5.9Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.12(t，J＝9.3Hz，1H)，6.88(d，J＝3.3Hz，1H)，6.46(s，1H)，5.70(s，1H)，5.39(s，2H)，3.70(t，J＝5.5Hz，2H)，3.04(t，J＝5.7Hz，2H)ppm.
质谱：C16H16F4N5[M+H]+理论值：354.1，实测值：354.1。
实施例2：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-2。
I-2(8.7mg，14.27％产率).1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.59(s，1H)，7.53(s，1H)，7.48(s，1H)，7.33-7.29(m，2H)，7.03(d，J＝3.6Hz，1H)，5.69(s，2H)，3.64(s，2H)，3.53(s，2H)ppm.
质谱：C16H16N5F4[M+H]+理论值：354.1，实测值：354.1。
实施例3：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-3。
I-3(13.2mg，24.02％产率).质谱：C16H17N5F3[M+H]+理论值：336.1，实测值：336.0。
实施例4：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-4。
I-4(37.0mg，35.5％产率).1H NMR(500MHz，Methanol-d4)δ8.66(s，1H)，7.37(d，J＝3.6Hz，1H)，7.32(t，J＝8.0Hz，1H)，6.96(dd，J＝8.3，2.5Hz，1H)，6.91(t，J＝2.1Hz，1H)，6.89-6.82(m，2H)，5.62(s，2H)，4.02(t，J＝6.1Hz，2H)，3.78(s，3H)，3.28(s，2H)ppm.
质谱：C16H20N5O[M+H]+理论值：298.2，实测值：298.0。
实施例5：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-5。
I-5(7.3mg，14.25％产率).1H NMR(500MHz，Methanol-d4)δ8.64(s，1H)，7.37(d，J＝3.5Hz，1H)，7.23(s，4H)，6.85(d，J＝3.5Hz，1H)，5.60(s，2H)，4.02(s，2H)，3.28(d，J＝6.0Hz，2H)，2.33(s，3H)ppm.
质谱：C16H20N5[M+H]+理论值：282.1，实测值：282.2。
实施例6：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-6。
I-6(5.8mg，10.13％产率).1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.73(s，1H)，7.72(d，J＝10.0Hz，2H)，7.62(t，J＝7.7Hz，1H)，7.53(d，J＝7.8Hz，1H)，7.37(d，J＝3.5Hz，1H)，6.88(d，J＝3.5Hz，1H)，5.76(s，2H)，4.04(t，J＝6.1Hz，2H)，3.33(d，J＝8.3Hz，2H)ppm.
质谱：C16H17N5F3[M+H]+理论值：336.1，实测值：336.1。
实施例7：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-7。
I-7(46.0mg，36.35％产率).1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.67(s，1H)，7.41(d，J＝8.5Hz，2H)，7.36-7.29(m，3H)，6.87(d，J＝3.5Hz，1H)，5.66(s，2H)，4.03(t，J＝6.0Hz，2H)，3.29(s，2H)ppm.
质谱：C15H17N5Cl[M+H]+理论值：302.1，实测值：302.1。
实施例8：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-8。
I-8(180.0mg，94.43％产率).1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.66(s，1H)，7.39(dd，J＝8.6，5.2Hz，2H)，7.36(d，J＝3.5Hz，1H)，7.15(t，J＝8.6Hz，2H)，6.86(d，J＝3.5Hz，1H)，5.64(s，2H)，4.02(t，J＝6.0Hz，2H)，3.29(s，2H)ppm.
质谱：C15H17N5F[M+H]+理论值：286.1，实测值：286.2。
实施例9：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-9。
I-9(175.0mg，64.58％产率).1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.70(s，1H)，7.43(d，J＝8.6Hz，2H)，7.36(d，J＝3.5Hz，1H)，7.33(d，J＝8.3Hz，2H)，6.87(d，J＝3.5Hz，1H)，5.70(s，2H)，4.03(t，J＝6.0Hz，2H)，3.29(s，2H)ppm.
质谱：C16H17N5OF3[M+H]+理论值：351.1，实测值：352.1。
实施例10：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-10。
I-10(6.5mg，13.25％产率).质谱：C16H19N5F[M+H]+理论值：299.2，实测值：299.1。
实施例11：通过合成路线1，适应替换F7为可得I-11。
I-11(2.1mg，31％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.21(d，J＝5.0Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.19(s，2H)，7.10(d，J＝5.2Hz，1H)，6.83(d，J＝8.1Hz，1H)，6.56(d，J＝3.4Hz，1H)，5.35(s，2H)，3.73(s，2H)，3.21(s，2H)ppm.
质谱：C17H17F4N4[M+H]+理论值：353.1，实测值：353.1。
实施例12：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为以及替换F1为F4可得I-12。
I-12(2.6mg，4％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.16(d，J＝5.4Hz，1H)，7.50(d，J＝6.4Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.16-7.05(m，2H)，6.49(d，J＝5.5Hz，1H)，6.43(d，J＝3.6Hz，1H)，5.48(s，2H)，3.83(s，4H)，3.46-3.38(m，4H)ppm.
质谱：C19H19F4N4[M+H]+理论值：379.1，实测值：379.1。
实施例13：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为2-羟基乙胺可得I-13。
I-13(4.2mg，32％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.31(s，1H)，7.49-7.43(m，1H)，7.37-7.32(m，1H)，7.12(t，J＝9.3Hz，1H)，6.95(s，1H)，6.88(d，J＝3.5Hz，1H)，6.78(d，J＝3.5Hz，1H)，5.38(s，2H)，3.92-3.86(m，2H)，3.77(dd，J＝9.2，4.9Hz，2H)ppm.
质谱：C16H15F4N4O[M+H]+理论值：355.1，实测值：355.1。
实施例14：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为2-羟基乙胺以及替换F1为F2可得I-14。
I-14(6.7mg，41％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.49-7.43(m，1H)，7.40-7.33(m，1H)，7.14(t，J＝9.3Hz，1H)，6.84(d，J＝3.6Hz，1H)，6.39(d，J＝3.6Hz，1H)，5.65(s，1H)，5.34(s，2H)，3.93-3.87(m，2H)，3.79(dd，J＝9.8，5.6Hz，2H)ppm.
质谱：C16H14ClF4N4O[M+H]+理论值：389.1，实测值：389.1。
实施例15：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-15。
I-15(15.2mg，39％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(s，1H)，7.49(dd，J＝6.6，1.9Hz，1H)，7.41-7.34(m，1H)，7.31(td，J＝7.9，5.9Hz，1H)，7.20-7.06(m，3H)，6.97(td，J＝8.3，2.2Hz，1H)，6.90(d，J＝3.6Hz，1H)，6.38(d，J＝3.6Hz，1H)，5.45(s，1H)，5.40(s，2H)，4.86(d，J＝5.9Hz，2H)ppm.
质谱：C21H16F5N4[M+H]+理论值：419.1，实测值：419.1。
实施例16：通过合成路线1，适应替换单-Boe-乙二胺为可得I-16。
I-16(13.2mg，40％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(s，1H)，7.48(dd，J＝6.6，1.9Hz，1H)，7.40-7.30(m，3H)，7.15-7.07(m，1H)，7.02(ddd，J＝10.7，5.9，2.5Hz，2H)，6.89(d，J＝3.6Hz，1H)，6.37(d，J＝3.6Hz，1H)，5.47(s，1H)，5.38(s，2H)，4.81(d，J＝5.7Hz，2H)ppm.
质谱：C21H16F5N4[M+H]+理论值：419.1，实测值：419.1。
实施例17：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-17。
I-17(8.6mg，38％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.40(s，1H)，7.49(dd，J＝6.5，1.9Hz，1H)，7.40-7.33(m，2H)，7.27(d，J＝1.7Hz，1H)，7.26-7.23(m，2H)，7.12(t，J＝9.3Hz，1H)，6.90(d，J＝3.6Hz，1H)，6.38(d，J＝3.6Hz，1H)，5.46(s，1H)，5.39(s，2H)，4.83(d，J＝5.9Hz，2H)ppm.
质谱：C21H16ClF4N4[M+H]+理论值：435.1，实测值：435.1。
实施例18：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-18。
I-18(11.8mg，42％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.38(s，1H)，7.62-7.59(m，2H)，7.51-7.47(m，3H)，7.41-7.35(m，1H)，7.16-7.10(m，1H)，6.93(d，J＝3.6Hz，1H)，6.39(d，J＝3.6Hz，1H)，5.57(s，1H)，5.40(s，2H)，4.93(d，J＝6.1Hz，2H)ppm.
质谱：C22H16F4N5[M+H]+理论值：426.1，实测值：426.1。
实施例19：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-19。
I-19(9.2mg，51％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.36(s，1H)，7.49(d，J＝5.7Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.13(t，J＝9.3Hz，1H)，6.97(d，J＝3.6Hz，1H)，6.53(d，J＝3.6Hz，1H)，5.41(s，3H)，4.23-4.10(m，4H)，3.30-3.17(m，4H)ppm.
质谱：C18H18F4N5[M+H]+理论值：380.1，实测值：380.1。
实施例20：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为以及替换F1为F2可得I-20。
I-20(10.1mg，36％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.50(d，J＝4.9Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.16(t，J＝9.0Hz，1H)，6.93(s，1H)，6.52(s，1H)，5.37(s，2H)，4.26(s，4H)，3.29(s，4H)ppm.
质谱：C18H17ClF4N5[M+H]+理论值：414.1，实测值：414.1。
实施例21：通过合成路线1，适应替换F1为F2可得I-21。
I-21(7.5mg，31％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.46(d，J＝5.7Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.14(t，J＝9.2Hz，1H)，6.81(d，J＝3.1Hz，1H)，6.42(d，J＝2.7Hz，1H)，5.91(s，1H)，5.34(s，2H)，3.67(dd，J＝10.9，5.3Hz，2H)，3.02(t，J＝5.6Hz，2H)ppm.
质谱：C16H15ClF4N5[M+H]+理论值：388.1，实测值：388.1。
实施例22：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-22。
I-22(8.7mg，52％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.29(s，1H)，7.50(d，J＝6.4Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.14(t，J＝9.3Hz，1H)，6.98(d，J＝3.6Hz，1H)，6.72(d，J＝3.6Hz，1H)，5.41(s，2H)，4.15(t，J＝6.0Hz，2H)，3.53(s，3H)，3.35(t，J＝6.0Hz，2H)，2.79(s，3H)ppm.
质谱：C18H20F4N5[M+H]+理论值：382.2，实测值：382.2。
实施例23：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-23。
I-23(11.2mg，54％产率).1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.30(s，1H)，7.55(d，J＝18.0Hz，2H)，7.26(d，J＝10.5Hz，2H)，6.75(s，1H)，5.46(s，2H)，3.91(s，2H)，3.40(s，2H)，2.95(s，6H)ppm.
质谱：C18H20F4N5[M+H]+理论值：382.2，实测值：382.2。
实施例24：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-24。
I-24(21mg，60％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.36(s，1H)，7.46(dd，J＝6.6，1.9Hz，1H)，7.37-7.31(m，1H)，7.14-7.07(m，1H)，6.86(d，J＝3.6Hz，1H)，6.45(d，J＝3.5Hz，1H)，5.97(s，1H)，5.37(s，2H)，3.73(dd，J＝10.7，5.2Hz，2H)，2.92(d，J＝5.8Hz，2H)，2.46(s，3H)ppm.
质谱：C17H18F4N5[M+H]+理论值：368.1，实测值：368.1。
实施例25：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-25。
I-25(6.4mg，62％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.35(s，1H)，7.50-7.41(m，1H)，7.39-7.30(m，1H)，7.11(t，J＝9.3Hz，1H)，6.86(d，J＝3.5Hz，1H)，6.42(d，J＝3.5Hz，1H)，6.35(s，1H)，5.37(s，2H)，3.73(t，J＝6.3Hz，2H)，2.90(t，J＝6.3Hz，2H)，1.89-1.76(m，2H)ppm.
质谱：C17H18F4N5[M+H]+理论值：368.1，实测值：368.1。
实施例26：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-26。
I-26(9.2mg，65％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.29(s，1H)，7.41(d，J＝5.3Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.05(t，J＝9.3Hz，1H)，6.81(d，J＝3.4Hz，1H)，6.49(d，J＝3.4Hz，1H)，6.23(s，1H)，5.30(s，2H)，3.53(s，2H)，2.86(s，2H)，1.68(s，4H)ppm.
质谱：C18H20F4N5[M+H]+理论值：382.2，实测值：382.2。
实施例27：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-27。
I-27(8.1mg，42％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.33(s，1H)，7.44(d，J＝6.4Hz，1H)，7.33(dd，J＝5.4，2.8Hz，1H)，7.11(t，J＝9.3Hz，1H)，6.86(d，J＝3.5Hz，1H)，6.40(d，J＝3.5Hz，1H)，5.37(s，2H)，4.62(t，J＝7.9Hz，2H)，4.07(dt，J＝17.3，6.2Hz，1H)，4.01(dd，J＝8.5，5.2Hz，2H)ppm.
质谱：C17H16F4N5[M+H]+理论值：366.1，实测值：366.1。
实施例28：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-28。
I-28(7.4mg，39％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.25(s，1H)，7.45(s，1H)，7.29(s，1H)，7.08(d，J＝8.0Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.49(s，1H)，5.30(s，2H)，3.94(d，J＝41.4Hz，2H)，3.75(s，1H)，3.59(d，J＝117.2Hz，2H)，1.29(d，J＝28.1Hz，2H)ppm.
质谱：C18H18F4N5[M+H]+理论值：380.1，实测值：380.1。
实施例29：通过合成路线1，适应替换F1为F5可得I-29。
I-29(12.0mg，51％产率).1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.35(s，1H)，8.27(s，1H)，7.74(d，J＝6.6Hz，1H)，7.71-7.61(m，1H)，7.37-7.25(m，1H)，5.51(s，2H)，3.92(s，2H)，3.29(d，J＝15.0Hz，2H)ppm.
质谱：C15H15F4N6[M+H]+理论值：355.1，实测值：355.1。
实施例30：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-30。
I-30(4.6mg，43％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.32(s，1H)，7.75(s，1H)，7.46(d，J＝6.6Hz，1H)，7.36-7.30(m，1H)，7.15(d，J＝3.5Hz，1H)，7.11(t，J＝9.3Hz，1H)，6.86(d，J＝3.5Hz，1H)，5.38(s，2H)，4.90(s，1H)，3.42(t，J＝16.4Hz，2H)，3.35-3.28(m，1H)，3.01(dd，J＝19.9，7.8Hz，1H)，2.32(dd，J＝27.9，13.0Hz，1H)，2.13(d，J＝11.1Hz，1H)，1.88-1.76(m，2H)ppm.
质谱：C19H20F4N5[M+H]+理论值：394.2，实测值：394.2。
实施例31：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为以及替换F1为F5可得I-31。
I-31(9.2mg，51％产率).1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.29(d，J＝10.8Hz，2H)，7.78(d，J＝6.6Hz，1H)，7.74-7.64(m，1H)，7.39-7.23(m，1H)，5.52(s，2H)，4.49(s，4H)，3.26(s，4H)ppm.
质谱：C17H17F4N6[M+H]+理论值：381.1，实测值：381.1。
实施例32：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-32。
I-32(9.1mg，50％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)68.31(s，1H)，7.49(d，J＝5.3Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.12(t，J＝9.3Hz，1H)，6.97(d，J＝3.6Hz，1H)，6.84(d，J＝3.7Hz，1H)，5.38(s，2H)，4.89(d，J＝10.3Hz，1H)，4.57(d，J＝13.1Hz，1H)，3.47(dd，J＝12.6，10.1Hz，1H)，3.40-3.31(m，1H)，2.34(d，J＝8.7Hz，1H)，1.89(dd，J＝12.5，6.1Hz，2H)，1.64(dd，J＝25.7，12.2Hz，1H)，1.31-1.20(m，1H)ppm.
质谱：C19H20F4N5[M+H]+理论值：394.2，实测值：394.2。
实施例33：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为2-羟基乙胺以及替换F1为F5可得I-33。
I-33(7.3mg，55％产率).1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.27(s，2H)，7.77(d，J＝6.6Hz，1H)，7.71-7.62(m，1H)，7.37-7.27(m，1H)，5.52(s，2H)，3.80(d，J＝4.5Hz，2H)，3.75(s，2H)ppm.
质谱：C15H14F4N5O[M+H]+理论值：356.1，实测值：356.1。
实施例34：通过合成路线1，适应替换F1为F2以及替换F7为可得I-34。
I-34(20.2mg，40％产率).1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.89(d，J＝7.89Hz，2H)，7.40(d，J＝7.41Hz，2H)，7.15(d，J＝7.16Hz，1H)，6.60(d，J＝6.60Hz，1H)，5.47(s，2H)，4.57(s，1H)，3.77(t，J＝3.78Hz，2H)，3.18(t，J＝3.17Hz，2H)，3.08(s，3H)ppm.(21210712-S)
质谱：C16H19N5O2SCl[M+H]+理论值：380.1，实测值：380.1。
实施例35：通过合成路线1，适应替换F1为F6可得I-35。
I-35(10.0mg，产率18％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.73-7.71(m，1H)，7.51-7.42(m，2H)，7.14(d，J＝3.5Hz，1H)，6.56(d，J＝3.5Hz，1H)，5.36(s，2H)，3.52-3.49(m，2H)，2.83(t，J＝6.4Hz，2H)，2.39(s，3H)；质谱：C17H18F4N5[M+H]+计算值：368.15，实测值：368.0。
实施例36：通过合成路线1，适应替换F1为F3可得I-36。
I-36(2.0mg，产率16％)。1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ7.66(d，J＝7.0Hz，1H)，7.62-7.55(m，1H)，7.32-7.25(m，1H)，7.07(d，J＝3.6Hz，1H)，6.52(d，J＝3.6Hz，1H)，5.40(s，2H)，3.81(t，J＝5.7Hz，2H)，3.25(t，J＝5.7Hz，2H)，2.57(s，3H)；质谱：C17H18F4N5S[M+H]+计算值：400.12，实测值：400.0。
合成路线2：
将原料F1(500mg，3.27mmol)，碳酸钾(903mg，6.54mmol)加入反应管中，加入DMF溶剂(5mL)，室温加入单-Boc-乙二胺(785mg，4.91mmol)。该体系于50℃反应12h。反应结束，冷却至室温，加入水和乙酸乙酯，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，经饱和食盐水反洗3次，无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析分离纯化得到化合物A3(670mg，74％)。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ10.55(s，1H)，8.37(brs，1H)，7.08(d，J＝3.6Hz，1H)，6.42(d，J＝3.4Hz，1H)，5.98(brs，1H)，5.21(brs，1H)，3.78-8.74(m，2H)，3.50(d，J＝5.2Hz，2H)，1.44(s，9H)。
将原料A3(300mg，1.08mmol)，Ir[df(CF3)ppy]2(dtbbpy)PF6(12mg，0.01mmol)，TTMS(537mg，2.16mmol)，TFA(246mg，2.16mmol)依次加入反应管中，加入丙酮(1mL)，氩气鼓泡20min，置于34W蓝色LED灯体系中，室温反应16h。反应结束，旋干，加入乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢化钠溶液洗涤2次，无水硫酸钠干燥，经制备型硅胶薄层色谱分离纯化得到化合物A4(15mg，4.7％)。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ11.39(s，1H)，7.05(d，J＝3.5Hz，1H)，6.37(d，J＝3.5Hz，1H)，5.89(brs，1H)，5.70(brs，1H)，3.80(q，J＝5.5Hz，2H)，3.46(q，J＝5.3Hz，2H)，3.18-3.07(m，1H)，1.43-1.42(m，15H)；质谱：C16H26N5O2[M+H]+计算值：320.2，实测值：320.1。
将上述所得化合物A4(15mg，0.05mmol)溶于丙酮中，加入F7(14mg，0.06mmol)，K2C03(20mg，0.15mmol)。该体系于55℃反应6-12h。反应结束，冷却至室温，过滤，旋干，经制备型薄层色谱分离纯化得到化合物A5(8mg，产率33％)。质谱：C24H30F4N5O2[M+H]+计算值：496.2，实测值：496.1。
将上述所得化合物A5加入反应管中，加入2mL二氯甲烷，置于冰浴中，加入三氟乙酸(0.25mL)。室温下反应1-2h。反应结束，真空除去大量有机溶剂，加入二氯甲烷，滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝9-10。随后，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析分离纯化得到化合物I-37
实施例37：通过合成路线2可得。
I-37(5.0mg，产率75％)。1H NMR(500MHz，Methanol-d4)δ7.66-7.64(m，1H)，7.58-7.55(m，1H)，7.28-7.24(m，1H)，7.14(d，J＝3.6Hz，1H)，6.57(d，J＝3.5Hz，1H)，5.43(s，2H)，3.87-3.80(m，2H)，3.29-3.27(m，2H)，3.07(q，J＝6.9Hz，1H)，1.34(d，J＝6.9Hz，6H)；质谱：C19H22F4N5[M+H]+计算值：396.2，实测值：396.1。
合成路线3：
将原料F2(500mg，2.67mmol)、K2CO3(1.1g，7.97mmol)加入反应管中，加入DMF(5mL)，室温加入单-Boc-乙二胺(641mg，4mmol)。该反应于50℃反应12h。反应结束，冷却至室温，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和食盐水反洗2次，无水硫酸钠干燥，旋干，经硅胶柱层析分离纯化得到化合物A6(660mg，产率79％)。1H NMR(500MHz，Chloroform-d)δ10.07(s，1H)，7.04-7.03(m，1H)，6.40(s，1H)，6.32(s，1H)，5.07(s，1H)，3.73(q，J＝5.3Hz，2H)，3.48(q，J＝5.8Hz，2H)，1.43(s，9H)。
将上述得到化合物A6(100mg，0.32mmol)溶于t-BuOH(0.5mL)中，加入二甲胺盐酸盐(260mg，3.2mmol)，室温加入DIPEA(0.5mL)。该反应于120℃反应18h。反应结束，冷却至室温，旋干，经硅胶柱层析分离纯化得到化合物A7(30mg，产率31％)。质谱：C15H25N6O2[M+H]+计算值：321.2，实测值：321.1。
将化合物A7(30mg，0.09mmol)溶于丙酮中，加入K2CO3(25mg，0.2mmol)和F7(26mg，0.1mmol)。该体系于55℃反应，经点板跟踪，即反应6-12h。反应结束，过滤，旋干，经硅胶柱层析分离纯化得到化合物A8(16mg，产率36％)。质谱：C23H29F4N6O2[M+H]+计算值：497.23，实测值：497.1。
将上述所得化合物A8加入反应管中，加入2mL二氯甲烷，置于冰浴中，加入三氟乙酸(0.25mL)。室温下反应1-2h。反应结束，真空除去大量有机溶剂，加入二氯甲烷，滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝9-10。随后，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析分离纯化得到化合物I-38
实施例38：通过合成路线3可得。
I-38(7mg，产率47％)。1H NMR(500MHz，Methanol-d4)δ7.66-7.64(m，1H)，7.58-7.55(mz，1H)，7.26-7.22(m，1H)，6.78(d，J＝3.6Hz，1H)，6.38(d，J＝3.6Hz，1H)，5.27(s，2H)，3.79(t，J＝5.7Hz，2H)，3.29-3.24(m，2H)，3.16(s，6H)；
质谱：C18H21F4N6[M+H]+计算值：397.18，实测值：397.1。
实施例39：通过合成路线3，适应替换二甲胺盐酸盐为正丙胺可得I-39。
I-39(8mg，产率61％)。1HNMR(500MHz，Methanol-d4)δ7.60-7.58(m，1H)，7.54-7.51(m，1H)，7.26-7.23(m，1H)，6.80(d，J＝3.6Hz，1H)，6.43(d，J＝3.6Hz，1H)，5.27(s，2H)，3.75(dd，J＝6.1，4.8Hz，2H)，3.38-3.33(m，2H)，3.22(dd，J＝6.1，4.8HZ，2H)，1.62(h，J＝7.4Hz，2H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H)；
质谱：C19H23F4N6[M+H]+计算值：411.19，实测值：411.1。
实施例40：通过合成路线3，适应替换二甲胺盐酸盐可得。
I-40(4mg，产率45％)。1H NMR(500MHz，Methanol-d4)δ7.60-7.58(m，1H)，7.54-7.51(m，1H)，7.26-7.23(m，1H)，6.80(d，J＝3.6Hz，1H)，6.42(d，J＝3.6Hz，1H)，5.27(s，2H)，4.45(p，J＝8.1Hz，1H)，3.79-3.71(m，2H)，3.24-3.17(m，2H)，2.41-2.30(m，2H)，2.01-1.88(m，2H)，1.80-1.70(m，2H)；
质谱：C20H23F4N6[M+H]+计算值：423.19，实测值：423.1。
合成路线4：
将化合物F2(1eq.)溶于干燥DMF中，冷却到0℃，缓慢加入NaH(2eq.)，0℃下搅拌1h，加入F7(1.5eq.)，搅拌反应12h，滴加冰水，停止反应，用EtOAc和饱和食盐水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A9(收率62％)。
将化合物A9(1eq.)溶于异丙醇，加入乙二胺(2eq.)，DIPEA(3eq.)，77℃反应8h，反应完成后直接浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A10(收率45％)。
称量化合物A10(1eq.)，苯硼酸(2eq.)，K2CO3(3eq.)，Pd(dppf)2Cl2(0.1eq.)，抽真空，充氮气，氮气氛下加入溶剂dioxane和水，90℃反应6h，反应完成后，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到I-42(收率50％)。
实施例41：通过合成路线3，适应替换苯硼酸为可得I-41。
I-41(7.1mg，31％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.88(d，J＝3.0Hz，1H)，7.58(d，J＝6.3Hz，2H)，7.41(s，1H)，7.30(d，J＝4.8Hz，1H)，7.06(dd，J＝10.9，7.1Hz，2H)，6.81-6.74(m，2H)，5.26(s，2H)，4.01(s，2H)，3.41(d，J＝8.4Hz，2H)ppm.
质谱：C20H18F4N5S[M+H]+理论值：436.1，实测值：436.2。
实施例42：通过合成路线4可得。
I-42(8.2mg，65％产率).1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.47-8.36(m，2H)，7.79-7.72(m，1H)，7.67-7.57(m，1H)，7.50-7.38(m，3H)，7.29-7.22(m，1H)，7.21(d，J＝3.5Hz，1H)，6.68(d，J＝3.5Hz，1H)，5.49(s，2H)，3.99(t，J＝5.7Hz，2H)，3.37(t，J＝5.7Hz，2H)ppm.
质谱：C22H20F4N5[M+H]+理论值：430.2，实测值：430.2。
合成路线5：
将化合物F8(1eq.)溶于丙酮中，加入K2CO3(2eq.)和F7(1eq.)。该体系于55℃反应，经点板跟踪，即反应6-12h。反应结束，过滤，旋干，经硅胶柱层析分离纯化得到化合物A11(16mg，产率36％)。质谱：C23H29F4N6O2[M+H]+计算值：497.23，实测值：497.1。
将化合物A11(1eq.)溶于THF与MeOH混合溶剂中，加入1N LiOH(10eq.)溶液，60℃反应12h，反应完成后，旋干有机溶剂，CH2Cl2和水萃取，1N盐酸调节pH为4-5，收集有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A12(收率73％)。
将化合物A12(1eq.)溶于干燥DMF中，加入单-Boc-乙二胺(1.1eq.)，EDCI(1.1eq.)，HOBt(1.1eq.)，DIPEA(3eq.)，60℃搅拌12h，反应完成后，用EtOAc和饱和食盐水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶薄层层析分离得到A13(收率11％)。
将化合物A13(1eq.)溶于干燥CH2Cl2中，加入Et3N(3eq.)，0℃搅拌5min，滴加TMSOTf(5eq.)，反应2h，反应完成后，冰浴下用冰水淬灭，用CH2Cl2和水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶薄层层析分离得到I-43(收率29％)
实施例43：通过合成路线5可得。
I-43(2.3mg，93％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.50(s，1H)，8.25(d，J＝4.8Hz，1H)，7.46(d，J＝4.8Hz，1H)，7.37(d，J＝5.3Hz，1H)，7.32(d，J＝6.9Hz，1H)，7.07-6.95(m，2H)，6.81(s，1H)，5.38(s，2H)，3.67(s，2H)，3.17-3.12(m，2H)ppm.
质谱：C18H17F4N4O[M+H]+理论值：381.1，实测值：381.1
合成路线6
将化合物F9(1eq.)溶于干燥DMF中，加入N-碘代丁二酰亚胺NIS(1.3eq.)，置换氮气，避光，80℃反应3h，反应完成后，EtOAc与饱和食盐水洗涤，然后饱和NaHCO3溶液洗涤，最后饱和Na2S2O3溶液洗涤，收集有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A14(收率45％)。
将化合物A14(1eq.)溶于干燥DMF中，加入Cs2CO3(3eq.)，加入F7(1.3eq.)，25℃搅拌12h，反应完成后，用EtOAc和饱和食盐水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A15(收率51％)。
称量化合物A15(1eq.)，Cs2CO3(3eq.)，Pd2(dba)3(0.05eq.)，配体CAS：161265-03-8(0.1eq.)，3-Boc-氨基哌啶(1.2eq.)，置换氮气，氮气氛下加入干燥的甲苯，110℃反应12h，反应完成后，直接浓缩，通过硅胶薄层层析分离得到A16(收率63％)
将化合物A16(1eq.)溶于干燥CH2Cl2中，加入Et3N(3eq.)，0℃搅拌5min，滴加TMSOTf(5eq.)，室温反应2h，反应完成后，冰浴下用冰水淬灭，用CH2Cl2和水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶薄层层析分离得到I-44(收率26％)。
实施例44：通过合成路线6可得。
I-44(5.2mg，26％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.37(s，1H)，8.83(s，1H)，7.63(d，J＝6.6Hz，1H)，7.53(d，J＝5.1Hz，1H)，7.17-7.12(m，1H)，5.45(d，J＝6.7Hz，3H)，4.19(d，J＝9.1Hz，1H)，3.81-3.70(m，1H)，3.38(s，1H)，3.29(dd，J＝14.2，6.9Hz，1H)，2.20(d，J＝10.4Hz，1H)，2.00(dd，J＝11.3，3.2Hz，1H)，1.92(d，J＝8.9Hz，1H)，1.76(d，J＝8.7Hz，1H)ppm.
质谱：C18H19F4N6[M+H]+理论值：395.2，实测值：395.2。
实施例45：通过合成路线6，适应替换3-Boc-氨基哌啶为可得I-45。
I-45(3.2mg，24％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.10(s，1H)，8.92(s，1H)，7.65(d，J＝6.6Hz，1H)，7.54(d，J＝3.9Hz，1H)，7.18-7.13(m，1H)，5.48(s，2H)，3.78-3.70(m，4H)，3.29(d，J＝5.5Hz，4H)ppm.
质谱：C17H17F4N6[M+H]+理论值：381.1，实测值：381.1。
实施例46：通过合成路线6，适应替换3-Boc-氨基哌啶为以及替换F9为可得I-46。
I-46(9.7mg，31％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.66(d，J＝8.2Hz，1H)，7.53-7.45(m，1H)，7.35(d，J＝7.9Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.22(d，J＝8.5Hz，1H)，7.11(dd，J＝19.6，8.7Hz，2H)，5.40(s，2H)，3.79-3.66(m，4H)，3.42-3.28(m，4H)ppm.
质谱：C19H19F4N4[M+H]+理论值：379.1，实测值：379.1。
实施例47：通过合成路线6，适应替换F9为可得I-47。
I-47(2.8mg，25％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(d，J＝8.2Hz，1H)，7.46(d，J＝6.6Hz，1H)，7.31(s，1H)，7.27(d，J＝7.5Hz，1H)，7.09(ddd，J＝18.5，13.7，7.9Hz，3H)，5.36(s，2H)，3.88(d，J＝12.5Hz，1H)，3.64(d，J＝6.1Hz，1H)，3.51(dd，J＝12.2，7.7Hz，1H)，3.44(dd，J＝12.5，5.2Hz，1H)，3.27-3.19(m，1H)，2.09(d，J＝7.6Hz，1H)，1.99(dd，J＝17.2，9.0Hz，2H)，1.79-1.63(m，1H)ppm.
质谱：C20H21F4N4[M+H]+理论值：393.2，实测值：393.2。
实施例48：通过合成路线6，适应替换3-Boc-氨基哌啶为以及替换F9为可得。
I-48(8.5mg，41％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.77(d，J＝8.2Hz，1H)，7.47(dd，J＝6.7，1.9Hz，1H)，7.34-7-30(m，1H)，7.29-7.24(m，1H)，7.09(dd，J＝16.5，8.7Hz，2H)，6.95(dd，J＝11.2，4.0Hz，1H)，5.31(s，2H)，4.07-4.00(m，1H)，3.99-3.88(m，3H)，3.59(dt，J＝9.3，7.3Hz，1H)，2.42(dd，J＝13.5，6.9Hz，2H)ppm.
质谱：C19H19F4N4[M+H]+理论值：379.1，实测值：379.1。
实施例49：通过合成路线6，适应替换3-Boc-氨基哌啶为以及替换F9为F10可得I-49。
I-49(9.7mg，39％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.92(s，1H)，7.56(dd，J＝8.9，1.2Hz，1H)，7.52(d，J＝4.4Hz，1H)，7.35(d，J＝8.8Hz，2H)，7.16(t，J＝9.3Hz，1H)，5.44(s，2H)，3.91-3.74(m，4H)，3.51-3.37(m，4H)ppm.
质谱：C20H18F7N4[M+H]+理论值：447.1，实测值：447.1。
实施例50：通过合成路线6，适应替换F9为F10可得I-50。
I-50(8.7mg，40％产率).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.14(s，1H)，7.55-7.47(m，2H)，7.38-7.35(m，1H)，7.30(d，J＝8.9Hz，1H)，7.17-7.12(m，1H)，5.43(s，2H)，4.05(dd，J＝12.0，2.8Hz，1H)，3.60(dd，J＝8.1，4.5Hz，1H)，3.58-3.50(m，1H)，3.41-3.21(m，2H)，2.28-2.18(m，1H)，2.00-1.92(m，1H)，1.92-1.83(m，1H)，1.83-1.72(m，1H)ppm.
质谱：C21H20F7N4[M+H]+理论值：461.1，实测值：461.1。
实施例51：通过合成路线6，适应替换F9为F11可得A17。将A17制备A18反应中，3-Boc-氨基哌啶替换为单-Boc-哌嗪，碱换为叔丁醇钠，配体换为CAS：13716-12-6，其它条件不变，由此通过A17制备A18，并最终得到I-51
I-51(3.2mg，25％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(s，1H)，7.43(d，J＝8.8Hz，2H)，7.27(s，1H)，7.15(d，J＝9.4Hz，2H)，6.81(d，J＝3.8Hz，1H)，5.29(s，2H)，3.35(d，J＝8.1Hz，8H)ppm.
质谱：C21H19F7N3[M+H]+理论值：446.1，实测值：446.1。
合成路线7
将化合物F11(1eq.)溶于干燥THF中，冰浴，缓慢加入LiAlH4(3eq.)，0℃反应12h，反应完成后，加入2倍的无水THF稀释反应液，冰浴下，缓慢滴加冰水，消耗未反应的LiAlH4，无水Na2SO4干燥，过滤，通过硅胶柱层析分离得到A19(收率65％)。
称量PPh3(1.5eq.)，置换氮气，A19(1eq.)溶于干燥CH2Cl2中，加入反应管，冰浴下加入CBr4(1.1eq.)，30℃搅拌2h，反应完成后，冰水淬灭反应，用CH2Cl2和水萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，室温旋蒸，除去大部分CH2Cl2，产物A20沸点低，操作过程中要小心产物丢失，不纯化，混合物直接下一步。
称量A20(1eq.)，K2CO3(3eq.)，F1(1eq.)，加入溶剂CH3CN，25℃反应12h，反应完成后，过滤，浓缩，通过硅胶柱层析分离得到A21(A19到A21两步收率25％)
将化合物A21(1eq.)溶于异丙醇中，加入乙二胺(2eq.)，DIPEA(3eq.)，77℃反应12h，反应完成后，浓缩，通过硅胶薄层层析分离得到I-52，并通过反相半制备HPLC进一步纯化(收率34％)。
实施例52：通过合成路线7可得。
I-52(11mg，47％产率).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.33(s，1H)，7.25-7.22(m，1H)，7.22-7.18(m，1H)，7.09-7.00(m，1H)，6.67(d，J＝3.5Hz，1H)，6.31(d，J＝3.5Hz，1H)，5.54(s，1H)，4.41(t，J＝7.0Hz，2H)，3.68(dd，J＝11.5，5.6Hz，2H)，3.15(t，J＝7.0Hz，2H)，3.03(s，2H)ppm.
质谱：C17H18F4N5[M+H]+理论值：368.1，实测值：368.1。
实施例53：通过合成路线1，适应替换单-Boc-乙二胺为可得I-53。
I-53(9.7mg，34.14％产率)。质谱：C22H16N4F7[M+H]+理论值：469.1，实测值：469.1。
酶活性抑制测试方法：
USP25酶活性抑制测试方法：反应体系溶液为50mM Tris(pH 7.5)，150mM NaCl，1mM DTT，0.05％Tween-20.室温下将10ul 20nM USP25(50mM Tris pH 7.5，150mM NaCl，1mM DTT，20％glycerol)移液到96孔板中；加入10ul不同浓度的化合物，共同孵育20分钟；最后加入10u120uM底物Ub-AMC反应30分钟。反应体系中USP25蛋白终浓度为4nM，底物Ub-AMC终浓度为4uM，DMSO终浓度为1％。在多功能酶标仪Synergy Neo2(BioTek)上以动力学模式检测荧光信号(激发波长360nm和发射波长460nm)；使用前30分钟内的荧光信号变化计算反应速率，该变化在该测定的线性区间内。为了验证化合物不干扰检测系统，在上述反应中不加入蛋白作为对照来测试化合物对反应的影响。
Ki，化合物处理的USP25反应30分钟荧光信号变化值；K0，对照DMSO处理的USP25反应30分钟荧光信号变化值.
USP28酶活性抑制测试方法：
反应体系溶液为50mM Tris(pH 7.5)，150mM NaCl，1mM DTT，0.05％Tween-20.室温下将10ul 10nM USP28(50mM Tris pH7.5，150mM NaCl，1mM DTT，20％glycerol)移液到96孔板中；加入10ul不同浓度的化合物，共同孵育20分钟；最后加入10ul 5uM底物Ub-AMC反应15分钟。反应体系中USP28蛋白终浓度为2nM，底物Ub-AMC终浓度为1uM，DMSO终浓度为1％。在多功能酶标仪Synergy Neo2(BioTek)上以动力学模式检测荧光信号(激发波长360nm和发射波长460nm)；使用前15分钟内的荧光信号变化计算反应速率，该变化在该测定的线性区间内。为了验证化合物不干扰检测系统，在上述反应中不加入蛋白作为对照来测试化合物对反应的影响。
Ki，化合物处理的USP28反应30分钟荧光信号变化值；K0，对照DMSO处理的USP28反应30分钟荧光信号变化值.
化合物活性抑制测试结果：
化合物100uM单点浓度活性抑制测试结果
部分化合物活性抑制测试结果：
表格中符号对应IC50的结果如下：
“++++”：1uM-10uM；“+++”：10uM-30uM；“++”：30uM-50uM；“+”：50uM-100uM；“-”：＞100uM

Claims (16)

1.式I所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中
R1选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基氨基，二(C1-C6烷基)氨基，C3-C6环烷基氨基，C6-C14芳基，5至7元杂芳基，其中，所述5至7元杂芳基包含选自N、O、S中的一个或多个杂原子；
R2选自：H，-N(Ra)(Rb)，-C(O)N(Rc)(Rd)，其中
Ra，Rb，Rc和Rd各自独立地选自氢，取代或未取代的C1-C6烷基，其中，用于取代的取代基选自氨基，羟基，C1-C6烷基氨基，二(C1-C6烷基)氨基，3至7元含氮饱和杂环基，未取代或被卤素、氰基、C1-C6烷基或卤代C1-C6烷基取代的C6-C14芳基，Ra，Rb不同时为氢；
或者Ra和Rb以及Rc和Rd分别与和它们相连的氮一起形成未取代或氨基、硝基取代的3至7元饱和杂环，其中，该3至7元饱和杂环包含1或2个选自N、O、S的杂原子；
R3选自：F，C1-C6烷基，卤代C1-C6烷基，卤代C1-C6烷氧基；
R4，R5各自独立地选自：氢，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，卤代C1-C6烷基，卤代C1-C6烷氧基，C1-C6烷基磺酰基；
A1和A2各自独立地为N或C-R6，其中，R6选自：氢，C1-C6烷基，卤代C1-C6烷基；
X和Y各自独立地选自N和C-R7但不同时为N，其中，R7选自：氢，未取代或氨基取代的4至7元含氮饱和杂环基；
n为1，2或3。
2.权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，R1选自：氢，卤素，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基氨基，二(C1-C3烷基)氨基，C3-C4环烷基氨基，C6-C10芳基，5至6元杂芳基，其中，所述5至6元杂芳基包含选自N、O、S中的一个或多个杂原子。
3.权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，R1选自：氢，苯基，噻吩基，卤素，甲基，乙基，异丙基，甲氧基，-N(CH3)2，-NH-C3H7，-NH-环丁基。
4.权利要求1至3任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，R2选自：H，-N(Ra)(Rb)，-C(O)N(Rc)(Rd)，其中
Ra，Rb，Rc和Rd各自独立地选自氢，取代或未取代的C1-C4烷基，其中，用于取代的取代基选自氨基，羟基，C1-C4烷基氨基，二(C1-C4烷基)氨基，3至6元含有1或2个氮原子的饱和杂环基，未取代或卤素、氰基、C1-C4烷基或卤代C1-C4烷基取代的C6-C10芳基，Ra，Rb不同时为氢；
或者Ra和Rb以及Rc和Rd分别与和它们相连的氮一起形成未取代或氨基取代的4至6元饱和杂环，其中，该4至6元饱和杂环包含1或2个N原子。
5.权利要求1至3任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，R2选自：H，-NH-(CH2)2-NH2，-NH-(CH2)3-NH2，-NH-(CH2)4-NH2，-NH-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-N(CH3)2，-N(CH3)-(CH2)2-NH-CH3，-NH-(CH2)2-OH，-C(O)NH-(CH2)2-NH2，哌嗪基，
6.权利要求1至3中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，R3选自：F，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基，卤代C1-C4烷氧基；
R4，R5各自独立地选自：氢，卤素，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤代C1-C4烷基，卤代C1-C4烷氧基，C1-C4烷基磺酰基。
7.权利要求1至3中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，R3选自：F，甲基，乙基，正丙基，异丙基，-CF3，-OCF3；
R4，R5各自独立地选自：氢，甲基，乙基，正丙基，异丙基，甲氧基，乙氧基，卤素，-CF3，-OCF3，-SO2-CH3。
8.权利要求1至3中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，A1和A2各自独立地为N或C-R6，其中，R6选自：氢，C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基。
9.权利要求1至3中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，A1是CH，N或C-CF3；A2是CH或N。
10.权利要求1至3中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，X和Y各自独立地选自N和C-R7，其中，R7选自：氢，未取代或氨基取代的5至6元含有1或2个氮原子的饱和杂环基。
11.权利要求1至3中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
其中，X是CH或N；
Y是N或C-R7，其中
R7选自：氢，哌嗪基，
12.如下所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐：
13.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至12中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐作为活性成分，及任选的药学上可接受的载体。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物，用于制备USP25和USP28抑制剂的用途。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，或其立体异构体、互变异构体、多晶型物、药学上可接受的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物，在制备用于预防或治疗与USP25和USP28相关疾病的药物的用途。
16.根据权利要求15所述的用途，其中，所述与USP25和USP28相关的疾病包括癌症、炎症、自身免疫疾病、以及神经退行性疾病。
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