CN115128177A - 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 - Google Patents
利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115128177A CN115128177A CN202110675542.9A CN202110675542A CN115128177A CN 115128177 A CN115128177 A CN 115128177A CN 202110675542 A CN202110675542 A CN 202110675542A CN 115128177 A CN115128177 A CN 115128177A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- toluenesulfonate
- solution
- ganciclovir
- ethyl
- methyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000012535 impurity Substances 0.000 title claims abstract description 102
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 38
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 title claims abstract description 38
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 title claims abstract description 37
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title abstract description 4
- VRZVPALEJCLXPR-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-methylbenzenesulfonate Chemical compound CCOS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 VRZVPALEJCLXPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 56
- VUQUOGPMUUJORT-UHFFFAOYSA-N methyl 4-methylbenzenesulfonate Chemical compound COS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 VUQUOGPMUUJORT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 36
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 34
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims abstract 6
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims abstract 6
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 61
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 42
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 19
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 16
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 15
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 14
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 13
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 8
- FGDQGIKMWOAFIK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;phosphoric acid Chemical group CC#N.OP(O)(O)=O FGDQGIKMWOAFIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 24
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 241000025505 Pyrrosia Species 0.000 abstract 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 21
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 15
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 101150041393 rsd gene Proteins 0.000 description 9
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 5
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 4
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 3
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M Methanesulfonate Chemical compound CS([O-])(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007118 DNA alkylation Effects 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000005456 alcohol based solvent Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000005228 aryl sulfonate group Chemical group 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical class OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- QNXFUWFRTWSSOK-UHFFFAOYSA-N n-acetyl-n-(6-oxo-3,7-dihydropurin-2-yl)acetamide Chemical compound O=C1NC(N(C(C)=O)C(=O)C)=NC2=C1NC=N2 QNXFUWFRTWSSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- -1 p-toluenesulfonic acid ester Chemical class 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000000581 reactive spray deposition Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical compound ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
- G01N30/52—Physical parameters
- G01N30/54—Temperature
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法。本发明采用十八烷基键合硅胶为固定相，以0.1％磷酸水溶液：乙腈＝50:50为流动相，采用等度洗脱方式，所建立的高效液相分析方法能够准确测定更昔洛韦缩合物中2种潜在基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯。本HPLC‑UV方法操作简单，分析时间短，灵敏度可达0.8ppm，为更昔洛韦缩合物质量标准的提高及其他洛韦类基因毒性杂质的研究提供了可靠依据。本发明使用设备仪器均为普通，操作极为简便，大大节约了检测成本和检测时间。
Description
技术领域
本发明涉及化学测定技术领域，尤其是一种利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法。
背景技术
基因毒性杂质是(genotoxic impurity,GTI)指在药物中以痕量水平存在，能够和DNA直接或间接发生反应，诱导DNA损伤，导致基因突变或具有致癌倾向的物质。基因毒性杂质具有在极低暴露水平下即可造成人体遗传物质损伤的特点，因此对用药安全性造成严重威胁。磺酸脂类是一种潜在的基因毒性杂质，研究表明，磺酸脂具有诱变性，能够直接或者经代谢活化后间接地将自身结构上的烷基残基转移到富电子的DNA碱基上，而引起DNA的烷基化，从而导致遗传物质的损伤。磺酸酯类杂质通常来源于药物合成过程中磺酸或者衍生物，如磺酰氯、磺酸酐和低级醇溶剂(如甲醇、乙醇、异丙醇等)之间发生的副反应。
更昔洛韦缩合物经更昔洛韦侧链和二乙酰鸟嘌呤合成，加入对甲苯磺酸作为催化剂，在重结晶步骤又使用了甲醇，乙醇作为溶剂，存在产生基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯的风险，反应过程如下所示：
对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯属于芳基磺酸酯类，这类物质大多具有沸点高，难挥发性或不挥发性的特性，可采用高效液相色谱法(LC)和液相色谱-串联质谱法(LC-MS)进行测定。Tayor等(参见Taylor G E,Gosling M,PearceA.low level determinationof p-toluenesulfonate and benzenesulfonate esters in drug substance by highperformance liquid chromatography/mass spectrometry[J]JChromatogra 20061119,1119(1-2):231-237)采用LC-MS法检测药物中的对甲苯磺酸酯和苯磺酸酯，以ZobaxRC C8(250mm×4.6mm×5μm)为色谱柱，检测灵敏度明显提高；Cappiello等(参见Cappiello A,Faminglini G,Palma P,et al.A new liquid chromatogra-phy-mass spectrometryapproach for generic screening and quantitation ofpotential genotoxicalkylation compounds without derivatization[J]JPharm BiomedAnal,1255(17):286-290)采用EI-LC-MS法测定了药物中的对甲苯磺酸酯，LOD为0.13～1.5ppm。
由于基因毒性杂质在药物含量中极低，测定比较困难，液质联用灵敏度高，但价格昂贵，限制了它的推广使用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，建立一种高效液相色谱(HPLC-UV)方法,用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，有机相与磷酸盐缓冲液的混合溶剂作为流动相等度洗脱，可检测出磺酸酯类杂质，且灵敏度高(灵敏度可达0.8ppm)，可以简便快速测定更昔洛韦缩合物中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的含量，有效控制原料药质量。
更昔洛韦中基因毒性杂质包括对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯，其中，对甲苯磺酸甲酯的结构式如式Ⅰ所示，分子式为C8H10O3S，分子量为186.04；对甲苯磺酸乙酯的结构式如式Ⅱ所示，分子式为C9H12O3S，分子量为200.05。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，利用高效液相色谱法分析检测更昔洛韦缩合物中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯杂质含量，具有如下步骤：
(1)、对照品溶液的配制：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品，用稀释剂溶解稀释制成混合溶液，作为基因毒性杂质对照品溶液；
(2)、供试品溶液的配制：取更昔洛韦缩合物原料药置入量瓶，加稀释剂定容至刻度，超声提取，过滤，取滤液进样，作为供试品溶液；
(3)、色谱条件：流动相为乙腈-磷酸水溶液；采用等度洗脱的方式；流速：1.1～1.3mL/min；柱温：22～32℃；检测波长：225nm；进样量：20μL；十八烷基键合硅胶色谱柱；洗脱时间为30min；
(4)、检测色谱图：量取上述供试品溶液和上述对照品溶液各20μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
(5)、分析：供试品溶液色谱图中没有与对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯保留时间一致的色谱峰，则判断更昔洛韦缩合物样品中不含对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯；
或者，供试品溶液色谱图中有与对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯保留时间一致的色谱峰，则按峰面积外标法计算杂质含量；
杂质含量(ppm)＝Cs×AT×106/(As×CT)；
式中AT为供试品中各杂质的峰面积；As为杂质对照品的峰面积；Cs为杂质对照品的浓度；CT为供试品的浓度。
步骤(3)色谱检测条件下，对甲苯磺酸甲酯的保留时间为6.4min；对甲苯磺酸乙酯的保留时间为8.5min，由此可知该色谱检测条件下，对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯能够完全分离。
进一步地，所述步骤(1)和步骤(2)中的稀释剂均为甲醇。更昔洛韦缩合物、对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯在甲醇中均具有良好的溶解性，且稳定性试验表明，供试品溶液和对照品溶液在24h内均稳定。但是对甲苯磺酸酯类杂质在甲醇-水溶液中进行酯的酸水解反应导致其杂质不稳定，因此步骤(1)和步骤(2)中选择甲醇作为稀释剂。
进一步地，所述步骤(2)中超声提取时间为5分钟；采用0.45μm微孔滤膜过滤。准确度试验结果表明：超声5min和超声20min均符合外标法的回收率要求(含量在0.1～1.0ppm的杂质含量测定回收率结果应在75％～120％之间，RSD≤8.0％)，无明显差别，从时间成本考虑，选择采用超声5min。选用孔径0.45μm和孔径0.22μm过滤，均符合外标法的回收率要求，无明显差别，本发明使用高效液相色谱仪，经0.45μm滤膜过滤的样品即可满足进样要求，选择0.45μm。
进一步地，所述步骤(3)中流动相中的乙腈-磷酸水溶液的体积比为50：50；磷酸水溶液的质量百分比为0.08％～0.12％。
进一步地，所述步骤(3)中磷酸水溶液的质量浓度为0.10％。
进一步地，所述步骤(3)中色谱柱为Agilent Eclipse plus C18，250×4.6mm，5μm；流速为1.0mL/min；柱温：27℃。
本发明的有益效果是：本发明设计合理，具有以下优点：
(1)、本发明的检测方法系统适用性良好，专属性试验表明空白溶剂对杂质的检测无影响，专属性强；
(2)、本发明的检测方法检测两杂质的灵敏度较高，准确度良好；
(3)、本发明的检测方法采用的对照品溶液和供试品溶液在室温放置，溶液稳定性试验表明，溶液稳定性良好；
(4)、设备仪器均为普通，方法操作简单，大大节约了检测成本和检测时间，具有良好的实际应用价值，对于更昔洛韦缩合物原料药质量标准的制定和提升具有重要作用，同时也为其他采用类似起始原材料和合成路线的洛韦类药物的基因毒性杂质研究提供了参考依据。
附图说明
下面结合附图对本发明进一步说明。
图1是对甲苯磺酸甲酯在190nm～400nm的紫外光谱扫描图；
图2是对甲苯磺酸乙酯在190nm～400nm的紫外光谱扫描图；
图3是空白溶剂(稀释剂)的色谱图；
图4是基因毒性杂质对照品混合溶液的色谱图；
图5是系统适用性溶液的色谱图；
图6是对甲苯磺酸甲酯的线性结果；
图7是对甲苯磺酸乙酯的线性结果；
图8是检测限试验对照品溶液的色谱图；
图9是定量限试验对照品溶液的色谱图。
具体实施方式
现在结合附图对本发明作进一步的说明。
1、仪器与试药
本发明的检测方法中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明的检测方法中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明的检测方法中所用的仪器与试剂：安捷伦1260液相色谱仪(配备DAD紫外检测器)以及分析仪器配置的OpenLab 2.2液相色谱工作站；甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、磷酸(分析纯)、纯化水。
2、本发明HPLC检测方法的确定
2.1、采集波长的确定
将对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯进行紫外光谱扫描：精密称取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品适量，分别加甲醇溶解并稀释制成含对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯约80ng/mL的溶液；取各溶液在190nm～400nm范围内扫描，结果如表1中所示，紫外光谱扫描图如图1～图2所示。
表1对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的最大吸收波长
| 名称 | 最大吸收波长 |
| 对甲苯磺酸甲酯 | 226nm |
| 对甲苯磺酸乙酯 | 228nm |
由表1、图1和图2可以看出，对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯均在225nm附近波长处有较大吸收，表明对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯可以选用HPLC法，以紫外检测器进行检测，且可以选择225nm作为检测波长。
2.2、流动相比例的确定
溶液配制：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品各0.08g，精密称定，用甲醇溶解并逐级稀释至每1mL含各杂质400ng的溶液，作为杂质对照品储备液；精密称取更昔洛韦缩合物0.5g，置5mL量瓶中，精密量取1.0mL杂质对照品储备液加入，再加甲醇定容至刻度，超声5min，经0.45μm滤膜过滤后，取滤液作为系统适用性溶液。
流动相配制：分别配制不同比例的流动相，0.1％H3PO4水溶液：乙腈＝40:60，0.1％H3PO4水溶液：乙腈＝50:50，0.1％H3PO4水溶液：乙腈＝60:40。
分别用不同流动相平衡后，精密取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如表2所示。
表2不同流动相比例的系统适用性结果
由表2可以看出，提高乙腈比例可以减小分离度，缩短保留时间，峰形尖锐，相反，提高磷酸水溶液的比例会增大分离度，延长保留时间，峰形变宽。选用的乙腈-磷酸水溶液的体积比为50:50，既能保证供试品溶液对基因杂质的测定不产生干扰，分离度良好，又能获得合适的保留时间。
2.3、缓冲盐浓度的确定
溶液配制：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品各0.08g，精密称定，用甲醇溶解并逐级稀释至每1mL含各杂质400ng的溶液，作为杂质对照品储备液；精密称取更昔洛韦缩合物0.5g，置5mL量瓶中，精密量取1.0mL杂质对照品储备液加入，再加甲醇定容至刻度，超声5min，经0.45μm滤膜过滤后，取滤液作为系统适用性溶液。
流动相配制：分别配制不同浓度的缓冲盐，0～0.12％H3PO4水溶液：乙腈＝50:50。分别用不同流动相平衡后，精密取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如表3所示。
表3不同浓度缓冲盐的系统适用性结果
由表3可以看出，在流动相中添加磷酸有利于改善峰形，并且有轻微增强流动相洗脱能力的作用，选用磷酸水溶液的质量百分比为0.1％即可获得良好的峰形。继续增大磷酸水溶液的质量百分比，对峰形和保留时间没有显著改善。
2.4、流速的确定
溶液配制：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品各0.08g，精密称定，用甲醇溶解并逐级稀释至每1mL含各杂质400ng的溶液，作为杂质对照品储备液；精密称取更昔洛韦缩合物0.5g，置5mL量瓶中，精密量取1.0mL杂质对照品储备液加入，再加甲醇定容至刻度，超声5min，经0.45μm滤膜过滤后，取滤液作为系统适用性溶液。
色谱条件：流动相为乙腈-磷酸水溶液；采用等度洗脱的方式；柱温：27℃；检测波长：225nm；进样量：20μL；十八烷基键合硅胶色谱柱；洗脱时间为30min；设置不同流速：1.0～1.4mL/min；
精密取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如表4所示。
表4不同流速的系统适用性结果
如表4所示，增大流速会导致分离度减小，保留时间缩短，峰形尖锐，相反，减小流速会导致分离度提高，保留时间增大，峰形变宽。为确保更昔洛韦缩合物主成分出峰后，基因毒性杂质顺利出峰并有效分离，且不被主成分和更昔洛韦缩合物中的杂质峰干扰，同时又能获得合适的保留时间和良好的峰形，选用的流速1.2mL/min。
2.5、色谱柱的选择
溶液配制：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品各0.08g，精密称定，用甲醇溶解并逐级稀释至每1mL含各杂质400ng的溶液，作为杂质对照品储备液；精密称取更昔洛韦缩合物0.5g，置5mL量瓶中，精密量取1.0mL杂质对照品储备液加入，再加甲醇定容至刻度，超声5min，经0.45μm滤膜过滤后，取滤液作为系统适用性溶液。
本发明选取不同固定相类型的色谱柱，精密取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如表5所示。
表5不同色谱柱的系统适用性结果
如表5所示，综合考虑柱效，峰分离度，峰形，保留时间，选择色谱柱AgilentEclipse plus C18，250×4.6mm，5μm。
3、供试品更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的分离测定
3.1、相关溶液的配制
基因毒性杂质对照品储备液：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1mL含400ng的溶液，作为基因毒性杂质对照品储备液。
基因毒性杂质对照品溶液：取基因毒性杂质对照品储备液适量，精密量取，用甲醇稀释制成每1mL中各约含80ng的混合溶液，作为基因毒性杂质对照品溶液。
系统适用性溶液：取更昔洛韦缩合物原料药0.5g置5mL量瓶，精密称定，精密量取1.0mL基因毒性杂质对照品储备液加入，再加甲醇定容至刻度，超声5min，经0.45μm滤膜过滤后，取滤液进样。
3.2、色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，色谱柱为Agilent Eclipse plus C18，250×4.6mm，5μm；
检测波长：225nm；
流速：1.2mL/min；
柱温：27℃；
进样量：20μL；
流动相：0.1％(质量百分比)；
磷酸水：乙腈＝50:50(体积比)。
3.3、检测色谱图，分离测定
精密量取空白溶剂(稀释剂)、上述基因毒性杂质对照品溶液、系统适用性溶液各20μL，注入液相色谱仪进行等度洗脱，记录色谱图，测定结果如表6所示，色谱图如图3～图5所示。
表6系统适用性结果
| 名称 | 保留时间(min) | 塔板数(N) | 分离度(R) |
| 对甲苯磺酸甲酯 | 6.407 | 5288 | / |
| 对甲苯磺酸乙酯 | 8.463 | 5696 | 5.1 |
| 相邻峰 | 12.041 | 14490 | 8.4 |
由表6中的数据可以看出，系统适用性溶液出峰顺序依次为更昔洛韦缩合物、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯，相邻杂质峰，各杂质与主峰分离度均大于1.5，分离度良好，塔板数较高，符合检测要求。
图3～图5依次为空白溶剂、基因毒性杂质对照品溶液和系统适用性溶液的HPLC色谱图，可以看出，空白溶剂(稀释剂)不干扰杂质的检测。
4、精密度实验
取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，用甲醇稀释制成每1mL中各约含80ng的混合溶液，作为基因毒性杂质对照品溶液。取对照品混合溶液(对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯)依次进样6次，计算精密度，结果如表7所示。
表7精密度结果
如表7所示，对照品混合溶液进样6次，对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯的峰面积的相对偏差分别为1.5％、1.1％，符合外标法计算要求，故该色谱条件精密度良好。
5、线性关系实验
取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品适量，加甲醇稀释制成每1mL约含各对照品400ng的溶液，作为线性储备液；分别精密量取线性储备液适量，加甲醇稀释制成定量限、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、120ng/mL、160ng/mL浓度的溶液，作为各浓度线性溶液。
分别精密量取上述各溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度C(ng/mL)对峰面积(A)作线性方程，结果见表8和表9。
表8对甲苯磺酸甲酯线性结果
表9对甲苯磺酸乙酯线性结果
由表8可知，对甲苯磺酸甲酯在15.852ng/mL～158.52ng/mL的浓度范围内，线性关系良好，线性方程为：y＝0.0591x+0.0275，r2＝0.9992，如图6所示；由表9可知，对甲苯磺酸乙酯在15.848ng/mL～158.48μg/mL的浓度范围内，线性关系良好，线性方程为：y＝0.0547x+0.0718，r2＝0.9995，如图7所示。
6、方法学验证-定量限和检测限
6.1、定量限
取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释制成一定浓度的溶液，将此溶液用稀释剂逐级稀释至适宜浓度，在基因毒性杂质检测色谱条件下，以信噪比为10：1附近时注入色谱仪的量确定检测限浓度，结果如表10所示，色谱图如图8所示。
表10定量限结果
由表10中数据可以看出，两种杂质的定量限浓度分别为15.852ng/mL、15.848ng/mL，分别相当于主成分的0.16ppm、0.16ppm，实验结果表明本品在较浓度下可以进行定量检出。
上述对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的定量限的结果表明，本发明方法符合低浓度定量的检测要求，完全满足更昔洛韦缩合物基毒杂质涵盖限度的检测。
6.2、检测限
取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释制成一定浓度的溶液，将此溶液用稀释剂逐级稀释至适宜浓度，在基因毒性杂质检测色谱条件下，以信噪比约为3：1附近时注入色谱仪的量确定检测限浓度，结果如表11所示，色谱图如图9所示。
表11检测限结果
由表11中的数据可以看出，两种杂质的检测限浓度分别为4.954ng/mL、4.952ng/mL，分别相当于主成分的0.05ppm、0.05ppm，实验结果表明本发明的色谱条件灵敏度高，适合对两种杂质的检测。
7、准确度试验
为了考察基因毒性杂质测定方法的准确度，进行回收率测定。称取更昔洛韦缩合物供试品0.5g，精密称定，置5mL量瓶中，作为准确度验证空白样品；分别取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品0.08g，用甲醇逐级稀释，制成每1mL中约含400ng的混合溶液，作为杂质混合储备液。再精密量取2.0mL杂质混合储备液至10mL量瓶，用甲醇稀释制成每1mL中约含80ng的混合溶液，作为杂质混合液。
以基因杂质的含量(0.8ppm基质样品浓度)为基准100％，精密量取杂质混合液1.0mL，杂质混合储备液1.0mL、1.5mL分别置于含有基质样品的5mL量瓶中，混匀，用甲醇定容，配制成含杂质20％、100％、150％的溶液，同法平行3次，作为供试品溶液。具体配制方法见表12。
表12准确度各种溶液的配制方法
精密量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，量取峰面积(其中供试品中对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯的峰面积需扣除样品基质中对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯的峰面积)，计算回收率，实验结果见下表13和表14。
回收率计算公式：
杂质回收率％＝测得量/加入量×100％
加入量(ng)＝杂质称样量×P×V添×109/稀释倍数
测得量(ng)＝WS×(A准杂-A供杂×W准/W准空)×109/(AS×100×100×100)
式中：V添为准确度验证溶液中添加杂质混合储备液或杂质混合液的体积，mL；P为杂质对照品的含量(％)；WS为杂质对照品的称样量(g)；A准杂为准确度验证溶液色谱图中的杂质峰面积；A供杂为准确度验证空白溶液色谱图中的杂质峰面积；W准为配制准确度验证溶液更昔洛韦缩合物的称样量(g)；W准空为配制准确度验证空白溶液更昔洛韦缩合物的称样量(g)；稀释倍数为直接加杂质混合储备液为106，杂质混合液为5×106；AS为对照溶液中6次杂质峰面积的平均值。
表13对甲苯磺酸甲酯准确度结果
表14对甲苯磺酸乙酯准确度结果
从表13～14可以看出，样品前处理采用超声5min，经0.45μm滤膜过滤条件下，对甲苯磺酸甲酯在每个浓度下平均回收率在101.3％～106.0％范围内，RSD在1.3％～2.9％范围内；对甲苯磺酸乙酯在每个浓度下平均回收率在103.1％～106.7％范围内，RSD在0.8％～2.3％范围内；
样品前处理采用超声5min，经0.22μm滤膜过滤条件下，对甲苯磺酸甲酯在每个浓度下平均回收率在104.0％～106.9％范围内，RSD在0.4％～1.9％范围内；对甲苯磺酸乙酯在每个浓度下平均回收率在102.6％～106.7％范围内，RSD在0.5％～4.3％范围内；
样品前处理采用超声20min，经0.45μm滤膜过滤条件下，对甲苯磺酸甲酯在每个浓度下平均回收率在96.6％～105.2％范围内，RSD在1.1％～1.7％范围内；对甲苯磺酸乙酯在每个浓度下平均回收率在104.4％～108.0％范围内，RSD在1.6％～4.4％范围内；
符合外标法的回收率要求(含量在0.1～1.0ppm的杂质含量测定回收率结果应在75％～120％之间，RSD≤8.0％)。表明该方法检测对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯的准确度良好。从时间和成本考虑，选择采用超声5min，经0.45μm滤膜过滤的样品前处理条件。
8、稳定性试验
对照品稳定性试验溶液配制：取0.08g对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再用甲醇逐级稀释至每1mL含上述对照品80ng的对照品溶液。取上述对照品溶液，在常温放置24小时，分别于0h、2h、4h、6.5h、9h、12h和24h进样20μL，记录色谱图；以对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的峰面积变化情况衡量对照品溶液稳定性，结果见表15。
表15对照品溶液稳定性
由表15可以看出，在室温24小时内，对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯对照品峰面积RSD分别为0.8％、1.0％，均小于5.0％，无较大变化；更昔洛韦缩合物供试品溶液在常温放置0h和24h后，均未检出对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯，表明供试品溶液在室温下24h内稳定。
9、耐用性试验
为考察色谱条件发生微小变化时，本发明方法对样品检测的耐受程度，对其进行色谱条件耐用性考察，具体参数变化如下：
表16色谱条件变动参数
系统适用性溶液配制：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品各0.08g，精密称定，用甲醇溶解并逐级稀释每1mL含各杂质400ng的溶液，作为杂质对照品储备液；精密称取更昔洛韦缩合物0.5g，置5mL量瓶中，精密量取1.0mL杂质对照品储备液加入，再加甲醇定容至刻度，超声5min，经0.45μm滤膜过滤后，取滤液作为系统适用性溶液。
精密取上述溶液20μL，注入液相色谱仪，考察各条件耐用性，结果如表17～表20所示：
表17耐用性不同流速-系统适用性结果
表18耐用性不同柱温-系统适用性结果
表19耐用性不同流动相组成-系统适用性结果
表20耐用性不同色谱柱-系统适用性结果
由上述结果可知，对色谱条件进行微调，不同流速、不同柱温和不同色谱柱条件下，各杂质测定结果基本一致，表明本发明方法的色谱条件中，色谱条件微变对更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质测定无影响，本发明方法色谱条件耐用性良好。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
Claims (6)
1.一种利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，其特征在于：利用高效液相色谱法分析检测更昔洛韦缩合物中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯杂质含量，具有如下步骤：
(1)、对照品溶液的配制：取对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照品，用稀释剂溶解稀释制成混合溶液，作为基因毒性杂质对照品溶液；
(2)、供试品溶液的配制：取更昔洛韦缩合物原料药置入量瓶，加稀释剂定容至刻度，超声提取，过滤，取滤液进样，作为供试品溶液；
(3)、色谱条件：流动相为乙腈-磷酸水溶液；采用等度洗脱的方式；流速：1.1～1.3mL/min；柱温：22～32℃；检测波长：225nm；进样量：20μL；十八烷基键合硅胶色谱柱；洗脱时间为30min；
(4)、检测色谱图：量取上述供试品溶液和上述对照品溶液各20μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
(5)、分离测定：供试品溶液色谱图中没有与对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯保留时间一致的色谱峰，则判断更昔洛韦缩合物样品中不含对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯；
或者，供试品溶液色谱图中有与对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯保留时间一致的色谱峰，则按峰面积外标法计算杂质含量，杂质含量(ppm)＝Cs×AT×106/(As×CT)；
式中AT为供试品中各杂质的峰面积；As为杂质对照品的峰面积；Cs为杂质对照品的浓度；CT为供试品的浓度。
2.根据权利要求1所述的利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)中的稀释剂均为甲醇。
3.根据权利要求1所述的利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述步骤(2)中超声提取时间为5分钟；采用0.45μm微孔滤膜过滤。
4.根据权利要求1所述的利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述步骤(3)中流动相中的乙腈-磷酸水溶液的体积比为50：50；磷酸水溶液的质量百分比为0.08％～0.12％。
5.根据权利要求4所述的利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述步骤(3)中磷酸水溶液的质量浓度为0.10％。
6.根据权利要求1所述的利用HPLC法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述步骤(3)中色谱柱为Agilent Eclipse plus C18，250×4.6mm，5μm；流速为1.0mL/min；柱温：27℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110675542.9A CN115128177A (zh) | 2021-06-18 | 2021-06-18 | 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110675542.9A CN115128177A (zh) | 2021-06-18 | 2021-06-18 | 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115128177A true CN115128177A (zh) | 2022-09-30 |
Family
ID=83375168
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110675542.9A Pending CN115128177A (zh) | 2021-06-18 | 2021-06-18 | 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115128177A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117288869A (zh) * | 2023-11-24 | 2023-12-26 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107014909A (zh) * | 2016-01-27 | 2017-08-04 | 重庆华邦制药有限公司 | 泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质的分离与测定方法 |
| CN107037153A (zh) * | 2017-04-21 | 2017-08-11 | 常州佳德医药科技有限公司 | 高效液相色谱法检测al58805原料药或药物制剂中基因毒性杂质的方法 |
| WO2017152689A1 (zh) * | 2016-03-11 | 2017-09-14 | 江苏豪森药业集团有限公司 | 伊马替尼基因杂质的高灵敏度分析方法 |
| CN107655983A (zh) * | 2016-07-25 | 2018-02-02 | 重庆华邦胜凯制药有限公司 | 盐酸厄洛替尼的关键起始原料三乙炔苯胺中潜在基因毒性杂质的分离与测定方法 |
| CN109580825A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-05 | 山东铂源药业有限公司 | 消旋卡多曲中对甲苯磺酸酯类物质的检测方法 |
| CN111239286A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-06-05 | 北京阳光诺和药物研究有限公司 | 一种检测替诺呋韦中基因毒性杂质的方法 |
| CN112067723A (zh) * | 2020-09-18 | 2020-12-11 | 北京华亘安邦科技有限公司 | 药物中对甲苯磺酸酯的uplc-ms检测方法 |
| CN112697903A (zh) * | 2020-12-07 | 2021-04-23 | 株洲千金药业股份有限公司 | 一种检测恩替卡韦中遗传毒性杂质的方法及应用 |
-
2021
- 2021-06-18 CN CN202110675542.9A patent/CN115128177A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107014909A (zh) * | 2016-01-27 | 2017-08-04 | 重庆华邦制药有限公司 | 泊沙康唑中间体z及其基因毒性杂质的分离与测定方法 |
| WO2017152689A1 (zh) * | 2016-03-11 | 2017-09-14 | 江苏豪森药业集团有限公司 | 伊马替尼基因杂质的高灵敏度分析方法 |
| CN107655983A (zh) * | 2016-07-25 | 2018-02-02 | 重庆华邦胜凯制药有限公司 | 盐酸厄洛替尼的关键起始原料三乙炔苯胺中潜在基因毒性杂质的分离与测定方法 |
| CN107037153A (zh) * | 2017-04-21 | 2017-08-11 | 常州佳德医药科技有限公司 | 高效液相色谱法检测al58805原料药或药物制剂中基因毒性杂质的方法 |
| CN109580825A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-05 | 山东铂源药业有限公司 | 消旋卡多曲中对甲苯磺酸酯类物质的检测方法 |
| CN111239286A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-06-05 | 北京阳光诺和药物研究有限公司 | 一种检测替诺呋韦中基因毒性杂质的方法 |
| CN112067723A (zh) * | 2020-09-18 | 2020-12-11 | 北京华亘安邦科技有限公司 | 药物中对甲苯磺酸酯的uplc-ms检测方法 |
| CN112697903A (zh) * | 2020-12-07 | 2021-04-23 | 株洲千金药业股份有限公司 | 一种检测恩替卡韦中遗传毒性杂质的方法及应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 徐玉红;李玉珍;王蔓琳;李成;: "RP-HPLC测定盐酸伐昔洛韦分散片的含量及有关物质", 实用药物与临床, no. 02 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117288869A (zh) * | 2023-11-24 | 2023-12-26 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法 |
| CN117288869B (zh) * | 2023-11-24 | 2024-02-09 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110031557B (zh) | 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯、5-异喹啉磺酸乙酯的检测方法 | |
| CN108459106B (zh) | 一种测定盐酸法舒地尔中高哌嗪含量的方法 | |
| CN115453012A (zh) | 一种同时测定氢溴酸伏硫西汀中多个位置异构体的反相hplc方法 | |
| CN115128177A (zh) | 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 | |
| CN114965749B (zh) | 一种舒必利原料药中有关物质的检测方法 | |
| CN110220989B (zh) | 一种检测盐酸法舒地尔及其9种有关物质的方法 | |
| CN113804781A (zh) | 丹曲林钠中水合肼的检测分析方法 | |
| CN115015457B (zh) | 高效液相色谱分析司来帕格中溴乙酸杂质的方法 | |
| CN111624276B (zh) | 同时检测盐酸法舒地尔中基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯和5-异喹啉磺酸乙酯的方法 | |
| CN111505163B (zh) | 一种检测苯乙基甲磺酸酯类物质的方法 | |
| CN115754071B (zh) | 高效液相色谱测定反应液中甘氨酸和二酮哌嗪含量的方法 | |
| CN114594168A (zh) | 一种吲哚布芬杂质的检测方法 | |
| CN110954629A (zh) | 一种呋塞米中糠胺含量测定的控制方法 | |
| CN105467027B (zh) | 一种用气相色谱法分离测定米诺膦酸中间体有关物质的方法 | |
| CN110895264A (zh) | 一种替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的测定方法 | |
| CN109387588B (zh) | 水溶性紫外吸收剂的分离方法及其应用 | |
| Bhalchim et al. | Simultaneous detection of homovanillic acid (HVA) and vanillyl mandelic acid (VMA) in urine sample by HPLC method | |
| CN114200067B (zh) | 一种6-溴-3-羟基吡嗪-2-甲酰胺及杂质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN117630202B (zh) | 盐酸丁螺环酮中间体杂质的检测方法 | |
| Bhalchim et al. | Assessment and quantification of homovanillic acid and vanillylmandelic acid in rodent urine samples using a validated high-performance liquid chromatography-ultraviolet method | |
| CN111307985A (zh) | 一种检测降压类药物中间体中基因毒性杂质的方法 | |
| CN119555819B (zh) | 同时测定5-羟甲基糠醛和双-(5-甲酰基糠基)醚含量的方法 | |
| CN115236258B (zh) | 同时测定样品中甘氨酸酐和dl-蛋氨酸亚砜的方法 | |
| CN112305100B (zh) | 一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法 | |
| CN113777204B (zh) | 一种对羟基苯乙酮有关物质的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220930 |