CN115104576A - Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，涉及生物医学技术领域。本发明方法包括如下步骤：步骤S1：建立糖尿病和系膜增生性肾炎小鼠模型，进行体内动物实验，并使用人肾小球系膜细胞，进行体外细胞实验；步骤S2：基于上述步骤，结合临床肾穿刺标本检测；步骤S3：基于上述步骤S1和步骤S2，阐明Cdk5通过对eEF2的磷酸化作用参与肾小球系膜细胞ECM合成‑降解稳态失衡，导致肾小球硬化的机制；步骤S4：完成Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病肾病肾小球细胞外基质沉积中的操作。本发明Cdk5通过对eEF2的磷酸化作用参与肾小球系膜细胞ECM合成‑降解稳态失衡，导致肾小球硬化的机制，并为糖尿病的防治提供新的靶点及策略。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法。
背景技术
糖尿病肾病又名糖尿病肾小球硬化症，是由多种病因引起以慢性高血糖为特征的代谢紊乱，高血糖是由于胰岛素分泌或作用的缺陷，或者两者同时存在而引起。除碳水化合物外，尚有蛋白质、脂肪代谢异常；
糖尿病肾病是糖尿病最重要的微血管并发症之一，肾小球系膜细胞增殖，细胞外基质合成增多，分解减少，最终导致细胞外基质(ECM)过度堆积，肾小球硬化；
目前对于细胞周期素依赖性蛋白激酶5在糖尿病肾病中的作用及机制的研究，发现患者肾小球系膜区Cdk5表达显著增加，但其具体作用及机制尚不清楚；因此，我们提出Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病肾病肾小球细胞外基质沉积中的应用及方法。
发明内容
本发明的目的在于提供Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，解决上述背景中提出的问题。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明为Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，包括如下步骤：
步骤S1：建立糖尿病和系膜增生性肾炎小鼠模型，进行体内动物实验，并使用人肾小球系膜细胞，进行体外细胞实验；
步骤S2：基于上述步骤，结合临床肾穿刺标本检测；
步骤S3：基于上述步骤S1和步骤S2，阐明Cdk5通过对eEF2的磷酸化作用参与肾小球系膜细胞ECM合成-降解稳态失衡，导致肾小球硬化的机制，并为糖尿病的防治提供新的靶点及策略；
步骤S4：完成Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病肾病肾小球细胞外基质沉积中的操作。
所述步骤S1中糖尿病小鼠模型采用6-8周龄雄性小鼠，包括NODSCID小鼠、CD-1小鼠、C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠、NMRI小鼠。
所述糖尿病小鼠模型中进行生化指标的检测，包括血清肌酐、尿素氮水平的检测，并分别在第4周、第8周、第12周进行病理取材，观察小鼠病理形态学变化。
所述步骤S1中系膜增生性肾小球肾炎模型选用6周龄雄性Sprague Dawley大鼠，体重160-200g，从实验的第1天起以含20mg的BSA水溶液，隔日灌胃，共14周。
所述步骤S1中系膜增生性肾小球肾炎模型，Sprague Dawley大鼠第1天皮下注射完全弗氏佐剂0.2ml，其中含BSA 2mg；第8天经皮下注射不完全弗氏试剂0.2ml，其中含BSA2mg，同时静脉注射SEB，0.4mg/kg，第15天再静脉注射SEB，0.4mg/kg。
所述步骤S1中系膜增生性肾小球肾炎模型，分别在第10周、12周、14周进行尿红细胞镜检、尿蛋白检测以及24小时尿蛋白定量，同时对肾脏病理切片进行H&E、PAS、PASM及Masson染色，光镜观察肾小球的病理变化，并进行肾小球系膜细胞计数和肾小球系膜增生程度评价。
Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病防治中的操作应用。
本发明具有以下有益效果：
一、本发明Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，Cdk5通过对eEF2的磷酸化作用参与肾小球系膜细胞ECM合成-降解稳态失衡，导致肾小球硬化的机制，并为糖尿病的防治提供新的靶点及策略。
二、本发明Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，操作快捷简便，可控性强，适应性强。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1所示：本发明为Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，包括如下步骤：
步骤S1：建立糖尿病和系膜增生性肾炎小鼠模型，进行体内动物实验，并使用人肾小球系膜细胞，进行体外细胞实验；
糖尿病小鼠模型采用6-8周龄雄性小鼠，包括NODSCID小鼠、CD-1小鼠、C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠、NMRI小鼠；糖尿病小鼠模型中进行生化指标的检测，包括血清肌酐、尿素氮水平的检测，并分别在第4周、第8周、第12周进行病理取材，观察小鼠病理形态学变化。
系膜增生性肾小球肾炎模型选用6周龄雄性Sprague Dawley大鼠，体重160-200g，从实验的第1天起以含20mg的BSA水溶液，隔日灌胃，共14周，Sprague Dawley大鼠第1天皮下注射完全弗氏佐剂0.2ml，其中含BSA 2mg；第8天经皮下注射不完全弗氏试剂0.2ml，其中含BSA2mg，同时静脉注射SEB，0.4mg/kg，第15天再静脉注射SEB，0.4mg/kg；分别在第10周、12周、14周进行尿红细胞镜检、尿蛋白检测以及24小时尿蛋白定量，同时对肾脏病理切片进行H&E、PAS、PASM及Masson染色，光镜观察肾小球的病理变化，并进行肾小球系膜细胞计数和肾小球系膜增生程度评价。
步骤S2：基于上述步骤，结合临床肾穿刺标本检测；
步骤S3：基于上述步骤S1和步骤S2，阐明Cdk5通过对eEF2的磷酸化作用参与肾小球系膜细胞ECM合成-降解稳态失衡，导致肾小球硬化的机制，并为糖尿病的防治提供新的靶点及策略；
步骤S4：完成Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病肾病肾小球细胞外基质沉积中的操作。
本方案实验结果显示，高糖及TGF-β1刺激下，系膜细胞Cdk5表达显著增加，且与细胞外基质增多密切相关，质谱分析结果显示，Cdk5与eEF2在高糖和TGF-β1条件下有明显的蛋白结合，eEF2作为真核延伸因子，主要在翻译阶段参与蛋白质的合成，可能与细胞外基质的增多密切相关。
其中，质谱分析使试样中各组分电离生成不同荷质比的离子，经加速电场的作用，形成离子束，进入质量分析器，利用电场和磁场使发生相反的速度色散—离子束中速度较慢的离子通过电场后偏转大，速度快的偏转小；在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转，即速度慢的离子依然偏转大，速度快的偏转小；当两个场的偏转作用彼此补偿时，它们的轨道便相交于一点；与此同时，在磁场中还能发生质量的分离，这样就使具有同一质荷比而速度不同的离子聚焦在同一点上，不同质荷比的离子聚焦在不同的点上，将它们分别聚焦而得到质谱图，从而确定其质量。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (7)
1.Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，其特征在于，所述Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病肾病肾小球细胞外基质沉积中的方法，包括如下步骤：
步骤S1：建立糖尿病和系膜增生性肾炎小鼠模型，进行体内动物实验，并使用人肾小球系膜细胞，进行体外细胞实验；
步骤S2：基于上述步骤，结合临床肾穿刺标本检测；
步骤S3：基于上述步骤S1和步骤S2，阐明Cdk5通过对eEF2的磷酸化作用参与肾小球系膜细胞ECM合成-降解稳态失衡，导致肾小球硬化的机制；
步骤S4：完成Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病肾病肾小球细胞外基质沉积中的操作。
2.根据权利要求1所述的Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，其特征在于，所述步骤S1中糖尿病小鼠模型采用6-8周龄雄性小鼠，包括NODSCID小鼠、CD-1小鼠、C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠、NMRI小鼠。
3.根据权利要求2所述的Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，其特征在于，所述糖尿病小鼠模型中进行生化指标的检测，包括血清肌酐、尿素氮水平的检测，并分别在第4周、第8周、第12周进行病理取材，观察小鼠病理形态学变化。
4.根据权利要求3所述的Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，其特征在于，所述步骤S1中系膜增生性肾小球肾炎模型选用6周龄雄性Sprague Dawley大鼠，体重160-200g，从实验的第1天起以含20mg的BSA水溶液，隔日灌胃，共14周。
5.根据权利要求4所述的Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，其特征在于，所述步骤S1中系膜增生性肾小球肾炎模型，Sprague Dawley大鼠第1天皮下注射完全弗氏佐剂0.2ml，其中含BSA 2mg；第8天经皮下注射不完全弗氏试剂0.2ml，其中含BSA2mg，同时静脉注射SEB，0.4mg/kg，第15天再静脉注射SEB，0.4mg/kg。
6.根据权利要求5所述的Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法，其特征在于，所述步骤S1中系膜增生性肾小球肾炎模型，分别在第10周、12周、14周进行尿红细胞镜检、尿蛋白检测以及24小时尿蛋白定量，同时对肾脏病理切片进行H&E、PAS、PASM及Masson染色，光镜观察肾小球的病理变化，并进行肾小球系膜细胞计数和肾小球系膜增生程度评价。
7.根据权利要求1-6任意一所述的Cdk5调控eEF2磷酸化在糖尿病防治中的操作应用。
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| CN202210820934.4A Pending CN115104576A (zh) | 2022-07-12 | 2022-07-12 | Cdk5调控eEF2在糖尿病肾病防治中的操作方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115104576A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101809020A (zh) * | 2007-09-12 | 2010-08-18 | 国家科研中心 | 作为CDK抑制剂的perharidines |
| WO2022011274A1 (en) * | 2020-07-10 | 2022-01-13 | Goldfinch Bio, Inc. | Substituted 1,6-naphthyridine inhibitors of cdk5 |
-
2022
- 2022-07-12 CN CN202210820934.4A patent/CN115104576A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101809020A (zh) * | 2007-09-12 | 2010-08-18 | 国家科研中心 | 作为CDK抑制剂的perharidines |
| WO2022011274A1 (en) * | 2020-07-10 | 2022-01-13 | Goldfinch Bio, Inc. | Substituted 1,6-naphthyridine inhibitors of cdk5 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
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| 周毅等: "TGF-β1调控Cdk5表达在人肾系膜细胞外基质沉积中的作用", 中国药理学通报, vol. 37, no. 12, 31 December 2021 (2021-12-31), pages 1688 - 1693 * |
| 杨亚坤: "Cdk5在糖尿病肾病系膜细胞基质合成中的作用", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑, no. 02, 15 February 2022 (2022-02-15) * |
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