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CN115006404A - 一种具有视神经保护功效的药物组合物及其应用 - Google Patents

一种具有视神经保护功效的药物组合物及其应用 Download PDF

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CN115006404A
CN115006404A CN202210947006.4A CN202210947006A CN115006404A CN 115006404 A CN115006404 A CN 115006404A CN 202210947006 A CN202210947006 A CN 202210947006A CN 115006404 A CN115006404 A CN 115006404A
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CN
China
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pharmaceutical composition
optic nerve
eye
acid
sodium
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Application number
CN202210947006.4A
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王尧龙
袁华
张黎
朱吉
牟婕
林燕
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Kunming Pharmaceutical Group Biotechnology Lufeng County Co ltd
KPC Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Kunming Pharmaceutical Group Biotechnology Lufeng County Co ltd
KPC Pharmaceuticals Inc
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Abstract

本发明公开了一种具有视神经保护功效的药物组合物及其应用，所述具有视神经保护功效的药物组合物的活性成分由大麻二酚、四氢大麻酚和WIN‑55,212‑2组成。以所述药物组合物为活性成分的眼外用制剂为滴眼液、眼用凝胶、眼膏、眼外用湿敷巾或眼外用雾化液。本发明提供的药物组合物由大麻二酚（CBD）、四氢大麻酚（THC）、WIN‑55,212‑2组成，组方来源广泛，且各成分的配比合理，能够起到协同作用，能够降低视神经受损模型小鼠眼压至正常水平，同时降低模型小鼠玻璃体谷氨酸浓度，还能在基因层面上影响小鼠相关视神经细胞基因的表达，具有显著的降眼压、保护视神经的功效。

Description

一种具有视神经保护功效的药物组合物及其应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有视神经保护功效的药物组合物及其应用。
背景技术
视网膜神经病变是一组涉及视神经萎缩和视网膜神经节细胞减少的疾病，可以根据病因学归类为不同的疾病，包括外伤性视神经病变、缺血性视神经病变、青光眼性视神经病变、炎性视神经病变、中毒性／营养性视神经病变和遗传性视神经病变等。视网膜神经节细胞（Retinal Ganglion Cells，RGCs）的凋亡及高眼压的形成是这些视神经疾病发病的共同特征，一般来说，若眼压降低30~40%，发展成为青光眼性视神经病变的危险性会减低超过65%，临床使用噻吗心安及倍他洛尔等控制眼压，但效果反应并不明确。近年来，随着视神经损伤后的RGCs凋亡通路的研究中取得了相当大的进展，这不仅提高了有关RGCs的神经生物学认识，也激发了对新型神经保护疗法的探索，保护和挽救损伤的RGCs，降低眼压，使其免受细胞毒性刺激的视神经保护策略是临床治疗视神经疾病的关键目的。
理想的治疗视网膜神经变性疾病药物应具备下列条件：（1）在降眼压方面具备确切疗效；（2）能持续性产生降眼压效果；（3）能改善眼部视乳头血流循环且没有不良影响；（4）能与其他药物组方产生叠加效应；（5）全身和局部无明显副作用；（6）价格适当且使用方便。大麻作为一种具有潜在医用价值的药物，自1971年Helper和Frank发现吸食大麻素可以降低25％～30％的眼压后，人们开启了大麻素在治疗视网膜神经变性疾病上的多种研究，对于高眼压的治疗大多限制于肾上腺素能激动剂，此类药物可降低眼压但作用持续时间较短。大麻素类化合物可通过激活CB受体系统来调减眼压且作用效果持续2小时以上，目前已经在整个眼部尤其是睫状体和虹膜中发现了CB1大麻素受体，表明了内源性大麻素系统在神经递质调节，眼压调节中发挥的生理作用，经典大麻素类化合物左旋－Δ9－四氢大麻酚［（-）Δ9-tetra-hydrocannabinol，THC］，可以抑制N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）诱导的Ca2＋摄取，可以有效清除过氧基和抑制肿瘤坏死因子α的合成，从而起到神经保护作用。氨烷基吲哚类化合物WIN-55,212-2，可以通过CB1受体引起细胞内Ca2＋的释放，进而对视网膜的突触部、内核层、神经节细胞层及光感受器具有调节作用，大麻二酚（CBD）也可以阻滞NMDA诱导的视网膜神经毒性。经笔者将上述大麻素进行剂量配比试验发现，三种大麻素类化合物经过剂量调试达成了协同作用，产生了1+1+1＞3的疗效，可显著性达到降眼压效果，显著性降低小鼠玻璃体谷氨酸浓度、显著性降低小鼠RGCs的损伤及凋亡、在基因层面通过调节NGF/ Ntrk1/NGFR受体的亲和度介导的神经修复机制，显著性的产生保护视神经的功效。
目前，尚未有关于采用大麻素功效组合物降低玻璃体谷氨酸浓、降低RGCs的损伤、凋亡以及保护视神经的研究，也未见有保护视神经的功效的大麻素配方眼外用制剂的药品上市。鉴于此，本发明旨在提供一种组方合理、来源广泛安全、具有良好神经保护功效的药物组合物。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种具有视神经保护功效的药物组合物，本发明的第二目的是提供所述药物组合物的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述具有视神经保护功效的药物组合物的活性成分由大麻二酚、四氢大麻酚和WIN-55,212-2组成。
本发明的第二目的是这样实现的，所述应用为在制备保护视神经的眼外用制剂中的应用。
所述眼用制剂为滴眼液、眼用凝胶、眼膏、眼外用湿敷巾或眼外用雾化液。
本发明以视神经受损小鼠为动物模型，设置空白组、对照组及实验组，实验组采用本发明的药物组合物，使用本发明的药物组合物、空白组及对照组对小鼠进行视神经相关指标的检测，观察空白组、对照组及实验组对小鼠眼压、玻璃体谷氨酸浓度及视神经相关基因表达的影响，发现本发明的药物组合物可以显著降低小鼠眼压、小鼠玻璃体谷氨酸浓度以及降低小鼠RGCs的损伤及凋亡。同时在基因层面进行验证，发现实验组中的小鼠视神经的保护功能可能与促进视网膜组织中NGF基因表达有关。本发明的组合物通过调节NGF/Ntrk1/NGFR受体的亲和度介导的神经修复机制，显著性的产生保护视神经的功效。
本发明的有益效果为：
本发明的药物组合物包括大麻二酚（CBD）、四氢大麻酚（THC）、WIN-55,212-2，组方来源广泛，且各成分的配比合理，能够起到协同作用，能够降低视神经受损模型小鼠眼压至正常水平，同时降低模型小鼠玻璃体谷氨酸浓度，另外，还能在基因层面上影响小鼠相关视神经细胞基因的表达，具有降眼压、保护视神经的功效。
附图说明
图1为空白组、对照组及实验例1对视神经受损小鼠模型眼压的影响；
图2为空白组、对照组及实验例1对视神经受损小鼠模型玻璃体谷氨酸浓度的影响；
图3为空白组、对照组及实验例1对RGC数目的影响；
图4为空白组、对照组及实验例1对小鼠中视神经相关凋亡基因表达的影响；
图5中（A）-（F）分别为空白组、对照组和实验例1分别与实验例2-7的药物对视神经受损小鼠模型眼压的影响；
图6中（A）为空白组、实验例1和对比例2对视神经受损小鼠模型眼压的影响；（B）为空白组、实验例1和对比例1对视神经受损小鼠模型眼压的影响。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的详细说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所做的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明一种具有视神经保护功效的药物组合物，其活性成分包含大麻二酚、四氢大麻酚和WIN-55,212-2。
优选地，所述大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2的质量比为5-3：3-1：1。
进一步优选地，大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2的质量比范围为5-4：2-1：1。
再进一步优选地，所述大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2的质量比范围为5：1：1。
本发明还提供了所述具有视神经保护功效的药物组合物在制备保护视神经的眼外用制剂中的应用。
所述眼外用制剂为滴眼液、眼膏、眼用凝胶、眼外用湿敷巾或眼外用雾化液。
所述眼外用制剂按重量百分比包含7% ~ 9%的所述药物组合物，余量为药学上可接受的载体。
所述药学上可接受载体为Tocrisolve TM 100溶液、眼膏基质、增稠剂、酸碱调节剂、等渗调节剂、电解质剂、防腐剂中的一种或多种，其中，按重量百分比，药物可接受载体用量如下：眼膏基质80%~95%、增稠剂 0.1~ 10.0％、酸碱调节剂 0.01~ 5.0％、PH 值至7.0~ 9.0，等渗调节剂 0 ~ 8.0％、调节渗透压至 280~320mmol/L 或渗透压比值至 0.7～1.5，电解质剂 0.001 ~0.5％、防腐剂 0~ 0.5％。
所述增稠剂选自卡波姆、硫酸软骨素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚丙烯酰胺、甘油、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、氢化硬性蓖麻油、聚丙烯醇、泊洛沙姆、羧甲基纤维素纳、右旋糖酐、丙二醇、吐温、聚乙烯吡咯烷酮、壳聚糖、玻璃酸钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、交联型聚丙烯酰胺中的一种或多种；
所述酸碱调节剂选自硼酸、硼砂、冰醋酸、三乙醇胺、枸橼酸、枸橼酸钠、盐酸、乙酸、乙酸钠、酒石酸、酒石酸钠、氢氧化钠、磷酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸中的一种或多种；
所述等渗调节剂选自甘油、丙二醇、丙三醇、氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇中的一种或多种；
所述电解质剂选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、氯化锌、甘氨酸中的一种或多种；
所述防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、三氯叔丁醇、硫柳汞、氧氰化汞、苯氧乙醇、氯己定、苯甲酸、苯甲酸钠、氯甲酚、苯扎溴铵、苯扎氯铵、羟苯乙酯中的一种或多种。
所述眼外用制剂还包含马齿苋、睡莲、香柠檬、狗牙蔷薇、冰片中的一种或多种药物活性物质。
所述眼外用制剂的制备方法如下：称取有效剂量的药物组合物和按照眼外用制剂配比的Tocrisolve TM 100溶液、眼膏基质、增稠剂、酸碱调节剂、等渗调节剂、电解质剂、防腐剂，按照现代制药工艺制备成滴眼液、眼膏、眼用凝胶、眼外用湿敷巾、眼外用雾化液。
所述滴眼液作用于人体时的使用剂量和使用方法：
一般滴药时，需受试者仰头，左手食指拉开下眼睑，由右手将滴眼液滴入结膜囊内（每次药滴使用量平均为0.03ml），滴完药，大约闭眼睛5-10分钟，药物吸收充分后睁眼。为促进药液的眼部吸收，且不被冲溢出眼外，重复滴药的最短间隔为五分钟，一日2-3次。
实施例1
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分由大麻二酚、四氢大麻酚和WIN-55,212-2组成，大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2质量比为5：1：1。
实施例2
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分由大麻二酚、四氢大麻酚和WIN-55,212-2组成，大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2的质量比为4：2：1。
实施例3
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分由大麻二酚、四氢大麻酚和WIN-55,212-2组成，大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2质量比为3：3：1。
实施例4
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分由大麻二酚、WIN-55,212-2组成，大麻二酚、WIN-55,212-2的质量比为2：1。
制备方法参照实施例1。
实施例5
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分由大麻二酚、WIN-55,212-2组成，大麻二酚、WIN-55,212-2的质量比为3：1。
实施例6
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分为大麻二酚。
实施例7
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分为WIN-55,212-2。
实施例8
一种具有视神经保护功效的药物组合物，所述药物组合物的活性成分为四氢大麻酚。
实施例9
一种滴眼液制备方法如下 ：将取实施例1所述药物组合物8.75mg，按照配比溶于50ml Tocrisolve TM 100溶液，分别添加0.6%卡波姆、0.15%份氯化钠、0.1%尼泊金甲酯一起搅拌均匀，加热使其完全溶解，加Tocrisolve TM 100至100ml，等渗调节剂调节渗透压至300mmol/L，酸碱调节剂调节 PH 至7.5，用200目筛布过滤，得过滤液，采用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下分装于滴眼液瓶中密封，即得大麻素滴眼液成品。
实施例10
一种眼膏的制备方法如下：将凡士林60%、液体石蜡15%、羊毛脂15%，于低温加热熔化，加入苯扎氯铵0.1%，经保温滤斗过滤，采用温度160℃，时间45min 热压灭菌，待其冷却后得眼膏基质，取实施例1所述药物组合物8.75mg，按照配比溶于100ml Tocrisolve TM 100溶液中，根据质量比添加10%，搅拌均匀成糊状，逐渐加入眼膏基质之内，搅拌均匀，无菌条件下分装于眼膏管中密封，即得大麻素眼膏成品。
实施例11
一种眼用凝胶制备方法如下：取实施例1所述药物组合物8.75mg，按照配比溶于100ml Tocrisolve TM 100溶液中，分别与羟丙甲基纤维素0.3%、氢化硬性蓖麻油0.5%、丙二醇0.1%、氯化钠0.5%、硼酸0.1%、羟苯乙酯0.3%一起搅拌均匀，加热使其完全溶解，形成大麻素溶液；将8%卡波姆撒于Tocrisolve TM 100溶液中，溶胀成凝胶溶液，加入上述大麻素溶液，充分搅拌，用200目筛布过滤，得过滤液，采用温度为100℃，时间为45min高压灭菌，或者采用 0.45μm 微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下分装，即得大麻素眼用凝胶成品。
实施例12
一种眼外用湿敷巾制备方法如下 ：将实施例1所述药物组合物8.75mg，按照配比溶于50ml Tocrisolve TM 100溶液中，根据质量比，分别与马齿苋提取物1.5%、1.5%睡莲提取物、0.3%香柠檬果油、0.5%狗牙蔷薇果油、1%冰片一起搅拌均匀，加热使其完全溶解，加Tocrisolve TM 100溶液至100ml，等渗调节剂调节渗透压至300mmol/L，酸碱调节剂调节PH至7.5，用200目筛布过滤，得过滤液，采用高压灭菌或过滤除菌，即得大麻素溶液；将医用无纺布剪成6×12cm长条形状，以温度为100℃，时间为45min高压灭菌备用，将无纺布浸泡大麻溶液之内，塑料袋和塑料密封机用紫外线照射灭菌消毒，将浸泡过药液的无纺布放入塑料袋之内，1 条无纺布密封于 1 个小塑料袋内，12小袋密封在1个大塑料袋之内，密封即得大麻素眼外用湿敷巾成品，或者采用预包装后钴-60辐照灭菌。
实施例13
一种眼外用雾化液制备方法，按以下步骤实现：将实施例1所述药物组合物8.75mg，按照配比溶于50ml Tocrisolve TM 100溶液中，根据质量比，分别与马齿苋提取物1.5%、1.5%睡莲提取物、0.3%香柠檬果油、0.5%狗牙蔷薇果油、1%冰片一起搅拌均匀，加热使其完全溶解，加Tocrisolve TM 100溶液至100 ml，等渗调节剂调节渗透压至300mmol/L，酸碱调节剂调节PH至7.5，用 200 目筛布过滤，得过滤液，采用高压灭菌或过滤除菌，无菌条件下，分装于密封瓶内，即得大麻素眼外用雾化液成品。
实验例1
1. 大麻素滴眼液制备
1.1实验动物
健康成年KM雄性小鼠30只，无眼疾，体重20~25g，由昆明医科大学实验动物学部提供。小鼠完全随机分为空白组10只（正常组）、对照组10只（高眼压模型组）、实验组10只（实施例1大麻素配比组），各20眼。
药物和试剂
4%水合氯醛、4%中性甲醛（购自Sigma-Aldrich公司）；1%氯霉素眼药水（购自山东博士伦福瑞达制药有限公司）；1%利多卡因（购自武汉贝尔卡药业有限公司 ）、大麻二酚（CBD）、四氢大麻酚（THC）、WIN-55，212-2、谷氨酸标准品（购自北纳生物检验检测有限公司）；TocrisolveTM100（购自香港先进技术工业有限公司）；邻苯二甲醛（OPA）、硼酸、甲醇、巯基丙酸、柠檬酸钠、硝酸钠 等（购自上海方野化工有限公司）Trizol （购自ThermoScientific公司）；逆转录试剂盒 （购自promega公司，货号：A3500）；SYBR Premix Ex Taq（TaKaRa公司，货号：RR420A）；引物由上海赛百盛基因技术有限公司合成并进行质量检测。
主要仪器
Reichert 7CR眼压计（购自上海伊沐医疗器械有限公司）；Agilent 100型液相色谱仪（购自南京科捷控股集团）；超净工作台（上海舍岩仪器有限公司）；高压灭菌锅（山东博科仪器有限公司）；X -22R高速冷冻离心机（BECKMAN公司）；体视显微镜（上海点应光学仪器）；Real Time-PCR（Thermo Fisher Scientific公司）。
大麻素滴眼液配置
将大麻二酚（CBD）25mg、四氢大麻酚（THC）5mg、WIN-55,212-21 5mg晶体混匀（质量比5:1:1），将8.75mg 上述组合物溶于100 ml Tocrisolve TM 100中，振荡混匀，充分振荡，得到最终浓度为8.75%的大麻素滴眼液40ml，置于4℃冰箱中避光保存。
视神经损伤小鼠模型制作
造模前7d测量基础眼压，由专人于每日的固定时间测量两次。除正常对照组以外，均采用小鼠4%水合氯醛（1ml/100g）腹腔麻醉，1%利多卡因滴眼，将连接生理盐水瓶输液管的5号头皮针刺入前房，保持输液瓶与小鼠垂直高度150cm。眼底镜观察可见视网膜缺血苍白、水肿，眼头皮针底血流阻断，15～30min后球结膜水肿苍白，眼球变得不透明。注射后分时段测量眼压，动物体温保持在36～37℃，随时滴加生理盐水保持角膜湿润。确定眼压稳定升高以上为造模成功，在此期间眼压下降者复注一次，滴加1%氯霉素防止感染。
实验方法
2.1给药及眼压测定
成功造模8d后，空白组及对照组每天用生理盐水点双眼，早晚各一次。实验组每天用8.75%的大麻素滴眼液点双眼，早晚各一次。每日均用药前半小时测量眼压一次。
高效液相色谱法检测玻璃体谷氨酸浓度
治疗16d后，脊椎脱臼法处死试验小鼠，抽取后极部玻璃体0.1ml，生理盐水稀释至0.5ml，置于1.5mlEppendorf管中，-70℃冷冻保存。
衍生化试剂配制
将6.7mg 邻苯二甲醛溶解在12ml甲醇中，取出1ml，加入5μl琉基丙酸，然后用pH为9.6±0.02的硼酸钠缓冲溶液定容到10ml，最终pH为9.0±0.05。避光陈化120min以上，以降低试剂空白。保存在4℃冰箱中备用。
衍生化反应及高效液相色谱测定谷氨酸含量
玻璃体样本迅速解冻后，8000r/min离心10min，取上清，各加入100μl衍生化试剂，反应15min后，自动进样器进60μl。通过标准品（10μg/ml）的测定，采用外算法根据色谱峰面积计算样品中的谷氨酸含量。
视网膜切片RGCs计数
完整摘除双眼眼球，角巩膜缘做缝线标记及固定液处理，常规酒精梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。切片机进行切片，片厚约5μm，HE染色，封片。光镜下在后极部视乳头颞侧随机选取三个视野，读取三张连续切片的RGC数目，取平均数进行记录。
实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）检测视网膜组织相关基因水平
空白组、对照组及实验组取材小鼠视网膜组织，Trizol 法提取总RNA，测定RNA浓度及纯度后，在逆转录酶催化下合成cDNA，继而进行视网膜组织相关基因的实时荧光定量PCR检测。
所用视网膜组织相关基因引物序列如下表1所示：
表1 视神经相关基因引物
Figure 127941DEST_PATH_IMAGE001
使用SYBR premix Ex-Taq II试剂盒（日本TaKaRa）在应用的实时PCR系统上进行定量实时PCR，并使用循环95°C 15 s、60°C 30 s进行45次扩增，72℃、30s，以β-actin mRNA为内参对照，采用比较性2-△△CT法分析基因表达数据，每组重复3次。
统计学方法
采用SPSS 13.0 软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用独立样本t检验，数据呈正态分布，以均数±标准差表示，以 P< 0.05为差异有统计学意义。
结果与分析
3.1眼压实验结果
空白组、对照组及实验组在8d、16d 两个时间段绘制眼压柱状图。在16d中，平均眼压为每个实验组小鼠眼压的均值，空白组平均眼压为21.13 ±0.97mmHg，对照组平均眼压为41.79±2.32 mmHg，实验组平均眼压为23.74±1.67 mmHg，与空白组及对照组比较，使用组方治疗以后，实验组眼压明显下降且接近于空白组，与对照组具有显著性差异（P<0.01）。
实验表明，该实验组能显著性降低小鼠眼压（P< 0.01），结果如图1所示。
玻璃体谷氨酸浓度
为了研究该组方在小鼠抑制蛋白质毒素释放及积累方面的作用，我们同时评估了空白组、对照组及实验组的玻璃体谷氨酸浓度。通过组方处理后的实验组的玻璃体谷氨酸浓度为1.04±0.44μg/ml，与正常组谷氨酸浓度0.76±0.20μg/ml比较无显著性差异（p＞0.05），与对照组谷氨酸浓度7.69±1.01μg/ml比较具备显著性差异（p＜0.01），说明应用组方治疗以后，可以有效防止局部的谷氨酸浓度增高，从而减轻RGC及视神经的损伤。
实验表明，该实验组能显著性降低小鼠玻璃体谷氨酸浓度（P< 0.01），结果如图2所示。
数目观察
为了直观评估组方对RGCs凋亡方面的影响，我们对空白组、对照组及实验组RGCs数目进行统计，通过组方处理后的实验组的RGCs数目为51.40±6.04个，与正常组RGCs数目56.60±6.09个比较无显著性差异（p＞0.05），与对照组RGCs数目20.90±3.18个比较具备显著性差异（p＜0.01）。
实验表明，该实验组能显著性降低小鼠RGCs的损伤及凋亡（P< 0.01），结果如图3所示。
视神经分子机制研究
空白组、对照组及实验组提取小鼠视网膜组织RNA，以实时荧光定量PCR的2-△△CT值表示该基因在小鼠体内的mRNA相对表达水平。如图4A-4B所示，与β-actin mRNA作为内参进行分析，其实验组表达量NGF mRNA 0.87±0.30、Ntrk1 mRNA 0.68±0.10、Nfkb1 mRNA0.89±0.14 相对于对照组表达量NGF mRNA 0.32±0.07、Ntrk1 mRNA 0.19±0.04、Nfkb1mRNA 0.47±0.14显著性上调（P<0.05）；实验组表达量MAPK8 mRNA 1.11±0.21、NGFR mRNA1.28±0.12相对于对照组表达量MAPK8 mRNA 2.17±0.48、NGFR mRNA 1.77±0.33显著性下降（P<0.05）；详情见表这一结果进一步证明了实验组的组合物中的小鼠视神经的保护可能与调节NGF/ Ntrk1/NGFR受体的亲和度介导的神经修复机制有关。结果表明该实验组的组合物能够促进视神经损伤小鼠视网膜组织中NGF的表达，并提高NGF与其高亲和力受体Ntrk1的表达，从而激发神经生长因子与Ntrk1受体结合后所介导的神经修复机制；实验组的组合物可以降低NGF的低亲和力受体MAPK8、NGFR表达，从而抑制NGF与NGFR结合后所介导的神经细胞凋亡机制。
实验例2
按照实施例2的配方配置药物组合物，参照实验例1的方法制备滴眼液，并对视神经受损小鼠进行眼压试验。试验结果如图5中（A）和（B）所示，对小鼠的16d平均眼压影响结果如下表2所示。
实验例3
按照实施例3的配方配置药物组合物，参照实验例1的方法制备滴眼液，并对视神经受损小鼠进行眼压试验。试验结果如图5中（A）和（B）所示，对小鼠的16d平均眼压影响结果如表2所示。
实验例4-8
分别按照实施例4-8的配方配置药物，参照实验例1的方法制备滴眼液，并对视神经受损小鼠进行眼压试验。试验结果分别如图5中（C）-（F）所示，对小鼠的16d平均眼压影响结果如表2所示。
对比例1
本对比例中药物组合物由以下配比的原料组成：大麻二酚（CBD）、倍他洛尔、WIN-55,212-2，且质量比为5：1：1。参照实验例1的方法制备滴眼液，并对视神经受损小鼠进行眼压试验。试验结果如图5中（A）和（B）所示，对小鼠的16d平均眼压影响结果如表2所示。
对比例2
本对比例中药物组合物由以下配比的原料组成：大麻二酚（CBD）、噻吗心安、WIN-55,212-2，且质量比为5：1：1，参照实验例1的方法制备滴眼液，并对视神经受损小鼠进行眼压试验。试验结果如图5中（A）和（B）所示，对小鼠的16d平均眼压影响结果如表2所示。
对比例3
本对比例中药物的活性成分为噻吗心安，参照实验例1的方法制备滴眼液，并对视神经受损小鼠进行眼压试验。其对小鼠的16d平均眼压影响结果如表2所示。
对比例4
本对比例中药物的活性成分为倍他洛尔，参照实验例1的方法制备滴眼液，并对视神经受损小鼠进行眼压试验。其对小鼠的16d平均眼压影响结果如表2所示。
表2 各实验例及对比例药物组合物对小鼠的16d平均眼压影响结果
Figure DEST_PATH_IMAGE002
由表2以及图5A-图5F的结果可以看出，实验例2-3与实验例1的成分相同，但配比不同，对小鼠眼压的影响不同，其中实施例1对小鼠眼压的降低效果最佳，其次是实施例2和实施例3配比的组合物，单体药物实施例6-7降眼压效果不佳。
由表2以及图6中（A）和（B）的结果可以看出，与对比例1和对比例2相比，实验例1-3中添加了四氢大麻酚（THC）的药物组合物对小鼠眼压的降低效果更好，其中，实施例1对小鼠眼压的降低效果最佳。

Claims (10)

1.一种具有视神经保护功效的药物组合物，其特征在于：它由药物活性物质大麻二酚、四氢大麻酚和WIN-55,212-2组成。
2.根据权利要求1所述的一种具有视神经保护功效的药物组合物，其特征在于，所述大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2的质量比为5-3：3-1：1。
3.根据权利要求2所述的一种具有视神经保护功效的药物组合物，其特征在于，大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2的质量比范围为5-4：2-1：1。
4.根据权利要求3所述的一种具有视神经保护功效的药物组合物，其特征在于，所述大麻二酚、四氢大麻酚、WIN-55,212-2的质量比范围为5：1：1。
5.权利要求1所述具有视神经保护功效的药物组合物在制备保护视神经的眼外用制剂中的应用。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述眼外用制剂为滴眼液、眼膏、眼用凝胶、眼外用湿敷巾或眼外用雾化液。
7.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述眼外用制剂按重量百分比包含7% ~ 9%的权利要求1所述药物组合物，余量为药学上可接受的载体。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体为Tocrisolve TM100溶液、眼膏基质、增稠剂、酸碱调节剂、等渗调节剂、电解质剂、防腐剂中的一种或多种，其中，按重量百分比，药物可接受载体用量如下：眼膏基质80%~95%、增稠剂 0.1~ 10.0％、酸碱调节剂 0.01~ 5.0％、PH 值至 7.0~ 9.0，等渗调节剂 0 ~ 8.0％、调节渗透压至 280~320mmol/L 或渗透压比值至 0.7～1.5，电解质剂 0.001 ~0.5％、防腐剂 0~ 0.5％。
9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，
a、所述增稠剂选自卡波姆、硫酸软骨素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚丙烯酰胺、甘油、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、氢化硬性蓖麻油、聚丙烯醇、泊洛沙姆、羧甲基纤维素纳、右旋糖酐、丙二醇、吐温、聚乙烯吡咯烷酮、壳聚糖、玻璃酸钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、交联型聚丙烯酰胺中的一种或多种；
b、所述酸碱调节剂选自硼酸、硼砂、冰醋酸、三乙醇胺、枸橼酸、枸橼酸钠、盐酸、乙酸、乙酸钠、酒石酸、酒石酸钠、氢氧化钠、磷酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸中的一种或多种；
c、所述等渗调节剂选自甘油、丙二醇、丙三醇、氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇中的一种或多种；
d、所述电解质剂选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、氯化锌、甘氨酸中的一种或多种；
e、防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、三氯叔丁醇、硫柳汞、氧氰化汞、苯氧乙醇、氯己定、苯甲酸、苯甲酸钠、氯甲酚、苯扎溴铵、苯扎氯铵、羟苯乙酯中的一种或多种。
10.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述眼外用制剂还包含马齿苋、睡莲、香柠檬、狗牙蔷薇、冰片中的一种或多种药物活性物质。
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