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CN114878817A - 基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法 - Google Patents

基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法 Download PDF

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CN114878817A
CN114878817A CN202210616461.6A CN202210616461A CN114878817A CN 114878817 A CN114878817 A CN 114878817A CN 202210616461 A CN202210616461 A CN 202210616461A CN 114878817 A CN114878817 A CN 114878817A
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mesenchymal stem
stem cell
antibody
cells
flow cytometry
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CN202210616461.6A
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郎士伟
姜宏梁
张杨
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Wuhan Hongren Biomedical Co ltd
Original Assignee
Wuhan Hongren Biomedical Co ltd
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
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Abstract

本发明公开了一种基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，涉及血清中的抗体检测技术领域；其具体方法是先取间充质干细胞悬液，离心、洗涤，加入阳性质控样品溶液或待测样品溶液，密封、室温震荡孵育，重复洗涤若干次，让干细胞抗体与加入的干细胞结合；然后加入荧光标记的二抗溶液，密封，室温避光震荡孵育，重复洗涤若干次；重悬细胞，利用流式细胞仪上机检测荧光信号，荧光信号的强度与阳性抗体的浓度成正比。本发明填补了针对利用流式细胞技术直接检测抗间充质干细胞抗体的领域的技术空白，检测准确，灵敏度高，对于干细胞药物的新药研发具有重要的意义。

Description

基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法
技术领域
本发明涉及血清中的抗体检测技术领域，特别涉及基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法。
背景技术
药物的免疫原性是指药物诱发对自身或相关蛋白的免疫应答或免疫相关事件的能力。免疫原性影响广泛，可能没有任何影响，也可能影响药效，更严重的时候还会产生严重的副作用甚至危及生命。鉴于此，生物药的研发过程中，中国，美国和欧盟等相关法规均要求在临床研发阶段开展免疫原性的检测和评估。
对于蛋白类药物(抗体，融合蛋白，多肽，ADC等)，免疫原性的检测可以用配体结合试验的方法(ELISA等)检测；对于基因编辑的基因治疗产品(如AAV载体，CART细胞等)，也可以同样用配体结合试验来检测引入的外源蛋白的免疫原性。然而，干细胞药物的免疫原性检测一直是一个挑战：首先，经典的配体结合试验并不适用于细胞的检测；其次，与CART细胞不同，干细胞本身也并未引入外源基因，因而也不能通过检测表达的外源蛋白的免疫原性来评估干细胞药物的免疫原性。
目前，现有技术中，对于干细胞免疫原性评估均是通过间接的方法评估整个免疫系统的反应，比如通过免疫分型检测T/B/NK细胞的比例；或者通过检测细胞因子、趋化因子、黏附因子等生物标志物的水平来反应免疫系统的激活状态等。这些方法都是通过其他指标侧面反映干细胞是否刺激机体产生了免疫原性，而不能直接检测抗干细胞的抗体水平。
发明内容
针对利用流式细胞技术直接检测抗间充质干细胞抗体的领域的技术空白，本发明提供了基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，在待测样本中加入间充质干细胞，让血清中的抗干细胞抗体与间充质干细胞的特异性结合；随后再加入荧光素标记的二抗与抗干细胞抗体结合，这样便形成了荧光素标记二抗-抗干细胞抗体-干细胞的结合产物；最后利用流式细胞术即可检测出带有荧光标记的干细胞，其响应信号值与抗干细胞抗体的浓度呈正相关。具体通过以下技术实现。
基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取间充质干细胞悬液于容器中，离心弃上清；洗涤，再次离心弃上清；
S2、在容器中加入阳性质控样品溶液或待测样品溶液，密封、室温震荡孵育；洗涤，离心弃上清，重复若干次；
所述阳性质控样品溶液是将抗干细胞表面抗原的抗体用正常混合血清为稀释液按浓度梯度混合配制而成；
一般而言，干细胞表面抗原的抗体有许多种，常用的可以选择如CD44抗体，CD90抗体，CD133抗体等；
S3、在容器中加入荧光标记的二抗溶液，密封，室温避光震荡孵育；然后洗涤，离心弃上清，重复若干次；
S4、重悬细胞，利用流式细胞仪上机检测荧光信号。
优选地，步骤S1中，容器中加入间充质干细胞悬液的体积以间充质干细胞数量为(0.5-5)×105个为准。
优选地，步骤S1-S3中，离心的方式均为500-1500rpm离心5min，洗涤过程使用的洗涤液为200-1000μL 1×PBS缓冲液。
优选地，步骤S2中，所述阳性质控样品溶液的浓度为31.25ng/mL、62.5ng/mL、250ng/mL、500ng/mL和5000ng/mL。
优选地，步骤S3中，所使用的二抗溶液是使用荧光标记的二抗的储备液用PBS缓冲液按1:10稀释制备而成。本发明中所使用的二抗可以选择常见的可以结合干细胞表面抗原的抗体的抗体，例如Protein L等，荧光标记所用的荧光素也可以使用PE等各类常用的荧光素。
优选地，步骤S2中震荡孵育的方式为100-500rpm，室温孵育20-60min；步骤S3中，震荡孵育的方式为100-500rpm，室温避光孵育15-45min。
优选地，步骤S4中，流式细胞仪的检测参数如下表1所示。
表1流式细胞仪的检测参数
Figure BDA0003674499350000021
Figure BDA0003674499350000031
更优选地，步骤S1之前还包括间充质干细胞的复苏和传代培养过程。
进一步优选地，间充质干细胞的复苏过程的具体步骤为：先取冻存的间充质干细胞放入CM培养基中，38℃水浴至细胞融化；然后离心、吹打混匀，弃上清；再加入CM培养基重悬混匀，在5％CO2环境中，37℃恒温培养完成间充质干细胞的复苏。
进一步优选地，所述间充质干细胞的传代过程的具体步骤为：先取经过复苏的间充质干细胞，漂洗弃去旧培养基；然后加入细胞分离液，在5％CO2环境中37℃恒温孵育，直至肉眼观察到细胞完全脱离培养容器的底面；再加入CM培养基重悬吹打，进行细胞计数，配制获得细胞传代溶液。
与现有技术相比，本发明的有益之处在于：本发明首次使用流式细胞技术直接检测抗干细胞药物的免疫原性，填补了领域的空白；整个流式分析过程操作简单，重复性好；灵敏度较高，可达100ng/mL左右。
附图说明
图1为临界值分析计算示意图；
图2为阳性对照的信号值折线图。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动条件下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
试验例：
1、试验药物
(1)注射用间充质干细胞(脐带)：批号202106C07，规格2×107个/5mL，供应商天津昂塞细胞基因工程有限公司，液氮储存；
(2)阳性对照抗体：Anti-CD44 antibody(抗CD44抗体)，-90℃至-60℃储存，供应商Sino Biological，批号HB06AP2601-B，规格/浓度1.00mg/mL；
(3)二抗：Protein L-PE(Recombinant Protein L(PE conjugated))，供应商SinoBiological，货号11044-H07E-P，批号HR16JA1001，规格/浓度0.1mg/mL；
(4)完全培养基(CM培养基)：供应商天津昂塞细胞基因工程有限公司，批号C20211203；
(5)1×PBS缓冲液：供应商Gibco，规格/货号C10010500BT/500mL
(6)空白基质：个体人血清和混合人血清，均为未受免疫的阴性血清，混合人血清由至少20个个体血清等体积混合而成。存储条件≤-10℃。
2、试验耗材和仪器
试验仪器或耗材如下表2所示。
表2试验仪器或耗材列表
名称 规格/货号 供应商/生产商
电子天平(十万分之一) BT125D 赛多利斯
旋涡混合仪 MX-S Dragon LAB
可调式单通道移液器 Eppendorf不同体积 Eppendorf
可调式多通道移液器 Eppendorf不同体积 Eppendorf
流式细胞仪 BDFACSCanoII BD
微孔板振荡器 88880024 Thermo fisher
纯水仪 Master-S15UV HHitech
细胞培养瓶(不同规格) T25，T75，T150 Coring
聚丙烯离心管 0.5、1.5、2、15和50mL Axygen
移液器吸头 不同容积 Axygen
试剂瓶 500mL、1000mL和2000mL 蜀牛
96孔稀释板 267245 NUNC
封板膜 BS3027000 BIOLEADER
细胞计数仪 LUNA-II Logosbio
倒置显微镜 CKX41 Olympus
二氧化碳培养箱 Thermo Forma 311 Thermo fisher
超净台 SW-CJ-2FD 苏州安泰
生化培养箱 LRH-150F 上海齐欣科学仪器有限公司
水浴锅 DK-98-II 天津市泰斯特仪器有限公司
液氮罐 YDS-125-50B 查特生物医疗有限公司
3、试验溶液配制
(1)Protein L-PE溶液：将Protein L-PE溶液(Stock 1)，使用稀释缓冲液(1×PBS)进行1:20稀释，以锡箔纸包裹放置；避光储存，现配现用；
(2)阴性质控样品(NC)：混合人血清用作本实验的阴性质控品；
(3)阳性质控样品：将阳性对照抗体加标到NC中配制成一系列不同浓度的阳性样本。
Anti-CD44 antibody(Stock 2)，浓度为1.00mg/mL，用于抗间充质干细胞抗体的阳性样品配制，配方如下表3所示。
表3抗间充质干细胞抗体的阳性质控样品配置方法
Figure BDA0003674499350000051
4、分析方法
(1)细胞复苏
使用10代以内的细胞，复苏第一代细胞不用于项目试验。如果使用的细胞超过10代次，建议重新复苏构建细胞系。
①开启恒温水浴锅，预热至38℃；在一支15mL离心管中加入约9mL CM培养基；
②从液氮罐中冻存的间充质干细胞工作细胞库中取出一只冻存的间充质干细胞，立刻将冻存管管身部分浸入水浴锅中轻轻摇晃以融化冻存的细胞，直到中间只剩一块小冰晶，将冻存管取出，酒精消毒后置于无菌操作台内；
③将冻存管内所有悬液转移到第2步的离心管中，吹打混匀，在冷冻离心机中200g离心5min后去上清；
④加入约8mL CM培养基重悬混匀，转移至1个T25培养皿中；轻轻摇匀后，在5％CO2、37℃环境中恒温培养箱中培养；注意检查细胞状态，生长异常的细胞不可用于实验；
(2)细胞传代
本方法中的传代时间和传代相关参数仅根据前期细胞培养数据给定，如下表5、6所示。当然也可结合实际情况，在细胞汇合度达到80％左右时进行细胞传代，并以次为依据调整传代策略。每次使用0.25％Trypsin-EDTA(1×)解离细胞后细胞代次+1。
①从二氧化碳培养箱中取出细胞，置于医用洁净台中；吸弃旧培养基，使用适量的(见表6)1×PBS轻轻漂洗细胞，吸弃PBS；
②加入适量的(见表6)0.25％Trypsin-EDTA(1×)溶液，在37℃，5％CO2条件下孵育4min，取出后应可肉眼观察到细胞完全脱离培养瓶底面，若未脱离应继续孵育至细胞脱离；
③在培养瓶中加入适量的(见表6)CM培养基，吹打混匀后，将全部悬液转移至15mL离心管中，200g离心5min，弃上清。
④加入适量的(见表6)CM培养基重悬吹打均匀后平行取两份20μL用于细胞计数。
⑤根据细胞计数的结果配制细胞传代溶液，依据以下公式计算需取用的细胞悬液体积；需要的细胞总数可参照表4获得；
细胞悬液体积(mL)＝需要的细胞总数(cells)/计数获得的活细胞密度(cells/mL)；
⑥将细胞悬液按步骤④中获得的体积加入预存有适量(见表5)CM培养基的对应培养瓶中，摇匀后在培养箱内以37℃，5％CO2条件培养。
表4细胞传代周期
培养瓶型号 传代周期(天) 细胞数(个/瓶)
T75 2 6.00E+6
T75 3 3.00E+6
T75 4 1.50E+6
T25 2 2.40E+6
T25 3 1.20E+6
T25 4 6.00E+5
表5细胞传代相关参数
培养瓶型号 T25 T75
漂洗用PBS体积(mL) 5 10
消化用Trypsin-EDTA(1×)体积(mL) 1 2
终止消化用CGM体积(mL) 3 6
离心后重悬用CM培养基体积(mL) 2 4
培养瓶中预存CM培养基体积(mL) 6 11
(3)细胞换液
如果细胞未到传代所需汇合度，而培养基已经变黄，或因为其它原因需要更换培养基，可根据以下步骤更换。
①吸弃旧培养基，使用适量的(见上表6)1×PBS轻轻漂洗细胞，吸弃PBS；
②加入与旧培养基等体积的CM培养基，摇匀后在培养箱内以37℃，5％CO2条件培养；
(4)取间充质干细胞悬液于96孔板的每个孔中，1200rpm离心5min弃上清；
在96孔板中每孔加入200μL 1×PBS洗涤，1200rpm再次离心5min弃上清；每个孔中的间充质干细胞数量为1.2×105/孔；
(5)根据实验需要，在96孔板中每孔加入100μL加入阳性质控样品溶液(抗CD44抗体)、阴性质控样本、单个个体血清或待测样品溶液，贴好封板膜后置于微孔板振荡器上，350rpm室温震荡孵育30±2min；
在96孔板中每孔加入200μL 1×PBS洗涤细胞，1200rpm再次离心5min弃上清，重复该洗涤操作3次；
(6)在96孔板中每孔加入二抗(Protein L-PE)溶液，密封，贴好封板膜后置于微孔板振荡器上，350rpm室温震荡孵育15±1min；
在96孔板中每孔加入200μL 1×PBS洗涤细胞，1200rpm再次离心5min弃上清，重复该洗涤操作3次；
(7)在96孔板中每孔加入200μL 1×PBS重悬细胞，利用流式细胞仪上机检测PE荧光信号，收集细胞数量为10000events。
(8)细胞计数
上述细胞传代和后续的流式检测时需计算细胞数，根据以下方法计算。
①向平行取样的20μL细胞悬液中加入20μL台盼蓝(0.4％)溶液，吹打混匀；
②两平行样各取10μL上机，使用细胞计数仪用CELL2021014模板(见表6)测定活细胞密度，两次测量的％CV应不大于15％；
③以两次测量活细胞密度的平均值作为汇报活细胞密度，以两次测量细胞活率的平均值作为汇报细胞活率。
表6 CELL2021014细胞细胞计数仪参数
Figure BDA0003674499350000071
(9)分析临界值和灵敏度的计算
①分析临界值的计算：在免疫原性的评估方法中，临界值(Cut Point，CP)用来判断样本为阴性或阳性。临界值是用至少30个阴性的个体血清的检测信号值来评估。若样本信号值低于CP则判定为阴性，等于或高于CP则为阳性。
在计算CP时，首先将每个阴性血清的信号响应除以对应分析板的阴性质控(NC)响应值，进行标准化转换(S/N)，然后排除异常值后所得的数据用于统计分析；
如果数据呈现正太分布，CP为正态分布的95％或99％的单侧上限(显着性水平：α＝0.05或0.01)；如果数据为非正态分布，将采用经验的非参数方法，CP为基于非对数转换数据的95％或99％分位数(95th Percentile或99th Percentile)。
②灵敏度的计算：抗药抗体(ADA)的灵敏度被定义为阳性对照抗体在分析检测中能够持续给出阳性信号值的最低浓度。使用梯度稀释的阳性对照(L1-L6)来计算检测灵敏度，在相应分析批中通过内插法计算对应板的临界值(PSCP)的阳性对照浓度的平均值和标准偏差(SD)计算检测灵敏度：
检测灵敏度＝PSCP对应的抗体平均浓度+tα＝0.05,df×SD；
其中tα＝0.05的值对应于T分布5％假阴性率(单侧95％置信区间)，df是自由度，取决于计算中使用的滴定曲线的数量。例如，对于预期的6条独立抗体滴定曲线，df＝6-1＝5，计算公式为：检测灵敏度＝PSCP对应的抗体平均浓度+2.015×SD)。
5、分析结果
①临界值(CP)的确定。试验用50个阴性个体血清，3个实验人员共6个分析批次检测，共产生300个数据，剔除8个异常值后292个数据用于分析，每个原始数据用检测批次的NC值进行标准化转换(S/N)，再将所有数据一起进行正态分布检测，结果为非正态分布。
用非参数方法，CP为基于非对数转换数据的95％分位数(95th 99th Percentile)，经计算CP＝1.23，如附图1所示。
②阳性对照质控，试验用抗CD44抗体作为阳性对照，用混合人血清梯度稀释至终浓度为5000、500、250、125、62.5和31.25ng/mL。如图2所示，检测结果显示，随着阳性质控浓度的增加，采用本发明的方法所得到的信号值也相应增加，说明本方法能够特异检测抗干细胞的抗体。
③灵敏度检测。灵敏度共2个分析批，每个分析批含3组(共6组数据)梯度稀释的阳性质控样本，计算结果如下表7所示。
表7灵敏度的分析结果
Figure BDA0003674499350000091
首先确定分析批的板临界点信号值(PSCP):PSCP＝分析批阴性对照信号值×CP；然后通过内插法计算每组稀释样本中PSCP对应的阳性对照浓度：临界值对应回算浓度(ng/mL)＝(高于PSCP浓度-低于PSCP浓度)×(PSCP-PSCP信号值)/(高于PSCP信号值-低于PSCP信号值)+低于PSCP浓度。
因此，计算得到的灵敏度＝6组临界值对应回算浓度的平均值+2.015×SD，最后计算的灵敏度为97.34ng/mL。
以上具体实施方式详细描述了本发明的实施，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节。在本发明的权利要求书和技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单改型和改变，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取间充质干细胞悬液于容器中，离心弃上清；洗涤，再次离心弃上清；
S2、在容器中加入阳性质控样品溶液或待测样品溶液，密封、室温震荡孵育；洗涤，离心弃上清，重复若干次；
所述阳性质控样品溶液是将抗干细胞表面抗原的抗体用正常混合血清为稀释液按浓度梯度混合配制而成；
S3、在容器中加入荧光标记的二抗溶液，密封，室温避光震荡孵育；然后洗涤，离心弃上清，重复若干次；
S4、重悬细胞，利用流式细胞仪上机检测荧光信号。
2.根据权利要求1所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，步骤S1中，容器中加入间充质干细胞悬液的体积以间充质干细胞数量为(0.5-5)×105个为准。
3.根据权利要求1所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，步骤S1-S3中，离心的方式均为500-1500rpm离心5min，洗涤过程使用的洗涤液为200-1000μL 1×PBS缓冲液。
4.根据权利要求1所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述阳性质控样品溶液的浓度为31.25ng/mL、62.5ng/mL、250ng/mL、500ng/mL和5000ng/mL。
5.根据权利要求1所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，步骤S3中，所使用的二抗溶液是使用荧光标记的二抗的储备液用PBS缓冲液按1:10稀释制备而成。
6.根据权利要求1所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，步骤S2中震荡孵育的方式为100-500rpm，室温孵育20-60min；步骤S3中，震荡孵育的方式为100-500rpm，室温避光孵育15-45min。
7.根据权利要求1所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，步骤S4中，流式细胞仪的检测参数为：
Figure FDA0003674499340000011
Figure FDA0003674499340000021
8.根据权利要求1-7任一项所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，步骤S1之前还包括间充质干细胞的复苏和传代培养过程。
9.根据权利要求8所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，间充质干细胞的复苏过程的具体步骤为：先取冻存的间充质干细胞放入CM培养基中，38℃水浴至细胞融化；然后离心、吹打混匀，弃上清；再加入CM培养基重悬混匀，在5％CO2环境中，37℃恒温培养完成间充质干细胞的复苏。
10.根据权利要求9所述的基于流式细胞技术的血清中抗间充质干细胞抗体的检测方法，其特征在于，所述间充质干细胞的传代过程的具体步骤为：先取经过复苏的间充质干细胞，漂洗弃去旧培养基；然后加入细胞分离液，在5％CO2环境中37℃恒温孵育，直至肉眼观察到细胞完全脱离培养容器的底面；再加入CM培养基重悬吹打，进行细胞计数，配制获得细胞传代溶液。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN120142127A (zh) * 2025-05-16 2025-06-13 上海荻硕贝肯基因科技有限公司 一种供者特异性抗体的检测方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19927306A1 (de) * 1999-06-15 2000-12-21 Ibfb Gmbh Privates Inst Fuer B Ein GPI-verankertes Antigen auf Zelloberflächen von Fibroblasten und mesenchymalen Stammzellen, seine Verwendung zur Gewinnung von monoklonalen Antikörpern und darauf aufbauende Testkite
US20050214873A1 (en) * 2002-09-09 2005-09-29 Hans-Joerg Buehring Antibody for isolating and/or identifying mesenchymal stem cells, and method for isolating and/or identifying mesenchymal stem cells
CN101696974A (zh) * 2009-09-29 2010-04-21 同昕生物技术（北京）有限公司 Hla抗体特异性检测方法及细胞盘与试剂盒
CN112710596A (zh) * 2020-11-30 2021-04-27 浙江正熙生物医药有限公司 使用流式细胞仪定性/定量检测目标抗体浓度的方法
CN112946264A (zh) * 2021-01-29 2021-06-11 刘韬 用于流式细胞检测的样本前处理方法和免疫细胞检测方法
WO2022018276A1 (en) * 2020-07-24 2022-01-27 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) FLOW CYTOMETRY MULTIPLEXED METHOD FOR THE DETECTION OF SARS-CoV-2 ANTIBODIES

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19927306A1 (de) * 1999-06-15 2000-12-21 Ibfb Gmbh Privates Inst Fuer B Ein GPI-verankertes Antigen auf Zelloberflächen von Fibroblasten und mesenchymalen Stammzellen, seine Verwendung zur Gewinnung von monoklonalen Antikörpern und darauf aufbauende Testkite
US20050214873A1 (en) * 2002-09-09 2005-09-29 Hans-Joerg Buehring Antibody for isolating and/or identifying mesenchymal stem cells, and method for isolating and/or identifying mesenchymal stem cells
CN101696974A (zh) * 2009-09-29 2010-04-21 同昕生物技术（北京）有限公司 Hla抗体特异性检测方法及细胞盘与试剂盒
WO2022018276A1 (en) * 2020-07-24 2022-01-27 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) FLOW CYTOMETRY MULTIPLEXED METHOD FOR THE DETECTION OF SARS-CoV-2 ANTIBODIES
CN112710596A (zh) * 2020-11-30 2021-04-27 浙江正熙生物医药有限公司 使用流式细胞仪定性/定量检测目标抗体浓度的方法
CN112946264A (zh) * 2021-01-29 2021-06-11 刘韬 用于流式细胞检测的样本前处理方法和免疫细胞检测方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN120142127A (zh) * 2025-05-16 2025-06-13 上海荻硕贝肯基因科技有限公司 一种供者特异性抗体的检测方法

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