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CN114854900B - 一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的irap分子标记引物及其鉴定方法 - Google Patents

一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的irap分子标记引物及其鉴定方法

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CN114854900B
CN114854900B CN202210693762.9A CN202210693762A CN114854900B CN 114854900 B CN114854900 B CN 114854900B CN 202210693762 A CN202210693762 A CN 202210693762A CN 114854900 B CN114854900 B CN 114854900B
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Abstract

本发明公开了一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物，其特征在于：所述的IRAP分子标记引物为Ty1‑6、Ty1‑7、Ty1‑9、Ty1‑15、Ty1‑18、Ty1‑20、Ty1‑25、Ty3‑2、Ty3‑3、Ty3‑5、Ty3‑6、Ty3‑9、Ty3‑14及Ty3‑16中的一种或一种以上混合。本发明从分子水平基于反转录转座子的特性进行检测，结果更为准确可靠；通过对数十种沙子空心李种质进行检测，经多次重复，检测结果均保持一致，结果准确可靠。

Description

一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记 引物及其鉴定方法
技术领域
本发明属于分子生物学领域，涉及利用李反转录转座子的RT序列开发IRAP引物、PCR扩增体系确立及其应用。
背景技术
沙子空心李(Prunus salicina Lindl.cv'Shazikongxinli'),蔷薇科李属植物，是贵州省沿河县孕育的地方特色李品种，2006年被评为中国国家地理标志保护产品，其栽培历史悠久，口感独特。沙子空心李一直是贵州沿河县重点项目及经济支柱产业之一，截至2021年末为止，沙子空心李的种植面积达4.5万亩，年产量2万余吨，经济效益达3.2亿元。
目前，沙子空心李在长期的人工干预和自然变异下，劣质基因微突变积累，造成一些原始优良种性逐渐减弱；另外，沿河县大力推广沙子空心李种植面积时，不注重果园的科学管理，重栽轻管或栽而不管，同时种苗繁育存在不规范、来源众多等问题，导致当前沙子空心李生产出现果实成熟期不一，果实品质参差不齐等现象，损坏了沙子空心李的品牌声誉。目前沙子空心李在种质资源鉴定及指纹图谱构建等方面存在空白，没有明确的鉴定技术，因而有必要开发一种高效准确的分子鉴定技术，为沙子空心李优异种质的鉴别、保存及新种质挖掘提供服务。
IRAP(逆转座子位点扩增多态性)是一种基于植物反转录转座子序列间多态性的分子标记，目前已广泛应用于种质资源鉴定、亲缘关系鉴别及遗传多样性分析等方面，具有高通量、基因组覆盖范围广、多态性丰富及异质性高等优点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种异质性鉴定水平高、分辨率好、稳定可靠、高效快捷基于基因水平上的鉴定方法。本方法可直接应用于沙子空心李种质资源鉴别、指纹图谱构建、亲缘关系鉴定及遗传多样性分析，为优异种质的保存、辅助育种及种质产权保护提供有效的手段。本发明需要解决的关键技术是高效IRAP引物的获得及PCR扩增体系的确立。
本发明的技术方案是：一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物及其鉴定方法，其特征在于：所述的IRAP分子标记引物为Ty1-6、Ty1-7、Ty1-9、Ty1-15、Ty1-18、Ty1-20、Ty1-25、Ty3-2、Ty3-3、Ty3-5、Ty3-6、Ty3-9、Ty3-14及Ty3-16中的一种或一种以上混合。
所述的IRAP分子标记，包括以下几个步骤：
S1，提取供试沙子空心李幼嫩叶片基因组DNA；
S2，基于李反转录转座子Ty1-copia和Ty3-gypsy的RT序列设计IRAP引物；
S3，取S1的DNA，经PCR反应扩增过后通过1.5％琼脂糖凝胶电泳，对设计的引物进行初步筛选，保留具备多态性，条带清晰的IRAP引物；
S4，利用初步筛选获得的IRAP引物对所有供试材料进行IRAP分子标记分析，每个引物重复2-3次，根据扩增条带的有无、多少及大小判定结果。
S3中PCR反应最优体系为：30ng/μl模板DNA 1.0μl，引物1.3μl，PCR Mix 5.0μl及2.7μlddH2O。
S3中所述的PCR反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性30s，51℃-58℃退火30s，72℃延伸1min，共40次循环，72℃再反应10min，4℃保存。
S1中所述幼嫩叶片是指叶龄15-20d新鲜或-80℃下保存的叶片。
S3中PCR反应所使用的Mix包括0.4mM Taq DNA聚合酶、0.4mM dNTP、4mM MgCl2及0.4mM常规缓冲液。
本发明的有益效果：1.结果准确可靠：传统沙子空心李鉴定方法主要从植物学性状方面检测，受外界环境影响大，误差显著，而本发明从分子水平基于反转录转座子的特性进行检测，结果更为准确可靠；通过对数十种沙子空心李种质进行检测，经多次重复，检测结果均保持一致，结果准确可靠。
2.操作简便快捷，不受时空影响：传统沙子空心李植物学标记易受季节、地理因素限制，而本发明的IRAP标记仅需要待检样品约30ng DNA，通过普通PCR及常规凝胶电泳即可获得检测结果。
3.多态性好，结果灵敏度高：通过对数十种空心李种质进行检测，IRAP引物的多态性普遍较高，能高效鉴别不同的种质。
4.确定了10μl IRAP-PCR的最优体系，经济高效，更适合沙子空心李IRAP标记的检测。
5.本发明基于在植物基因组中广泛存在的反转录转座子序列开发空心李IRAP标记引物，能有效用于李种或李近缘物种的种质资源鉴别、亲缘关系鉴定及指纹图谱构建等工作，对种质知识产权保护及优异种质的辅助育种工作提供实际参考意义。
附图说明
图1为10μl沙子空心李IRAP-PCR反应体系的正交实验结果图，3个PCR循环次数梯度；图中：(1-16泳道分别表示正交实验表表1中编号1-16的PCR体系；M为DNA Marker)；
图2为14条IRAP引物PCR扩增后经1.5％琼脂糖凝胶电泳初筛结果；图中：(1-8分别表示8个不同沙子空心李种质；M为DNA Marker)；
图3为引物Ty3-2对92个沙子空心李种质检测的检测图；图中：(泳道编号对应92个空心李种质编号；M为DNA Marker)；
图4为引物Ty3-5对92个沙子空心李种质检测的检测图；图中：(泳道编号对应92个空心李种质编号；M为DNA Marker)；
图5为引物Ty3-6对92个沙子空心李种质检测的检测图；图中：(泳道编号对应92个空心李种质编号；M为DNA Marker)。
具体实施方式
为对本发明的技术实施方案进行清晰、详细地阐述，下面将结合本发明实施例中的附图进行介绍；该实施例仅是本发明中实施例之一。
实施例1
1.IRAP引物设计
通过Clustal W对李反转录转座子Ty1-copia和Ty3-gypsy的RT序列(NCBI：KF278998—KF279023及KF279024—KF279041)进行多序列比对，获得保守区域，利用Primer5.0程序对获得的保守序列设计单向引物。引物设计参数为：引物长度19-25bp之间；CG含量40％-60％；退火温度Tm值在50-64℃间；尽量避免引物二聚体、发夹结构等；共设计了65条IRAP单向引物，通过上海生工合成。
2.10μl IRAP标记PCR体系建立
选取一条IRAP引物，设计L16(43)正交试验确定10μl沙子空心李IRAP-PCR反应体系的主要影响因素Mix、引物和模板DNA用量(表1)，并分别对PCR循环次数设置3个梯度：30、35及40次。
表1：Mix、引物及模板DNA4个水平正交实验表
10μl IRAP-PCR正交实验结果如图1所示，选定扩增体系为体系7：30ng/μl模板DNA1.0μl，IRAP引物(10-5mol/L)1.3μl及Mix 5.0μl，其中Mix含0.4mM Taq DNA聚合酶、0.4mMdNTP、4mM MgCl2。
2)PCR扩增程序如下：
3.IRAP引物筛选：随机选取8个供试样品叶龄在15-20d之间的叶片，利用天根DNAsecure Plant Kit植物基因组DNA提取试剂盒提取DNA；经1％琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测质量及浓度后，用缓冲液TE稀释样品DNA至约30ng/μl，-20℃保存。
以上述8个供试样品DNA为模板DNA，对设计合成的65条IRAP引物进行PCR反应，随后在含绿色荧光核酸染料的1.5％琼脂糖凝胶中以6V/cm电压电泳40min，于凝胶成像系统中观察并保存，保留条带清晰，多态性良好的IRAP引物，如图2所示。
筛选后的引物见下表：
表2：IRAP引物序列表
实施例2：
通过上述实施例1中已对IRAP引物初步筛选，保留了14条多态性良好的引物。利用筛选出的IRAP引物对所要鉴定的供试材料进行鉴别；下面以引物Ty3-2、Ty3-5及Ty3-6为例。
1.引物相关信息。
表3：引物相关信息
引物编号 引物序列 退火温度Tm(℃)
Ty3-2 GAATCGGTATCCATTGTCG 52.2
Ty3-5 CAACGCTCCAACTTCTTTC 52.3
Ty3-6 CCGCCCTTTCATTGACGACT 58.0
2.沙子空心李种质基因组DNA提取.
以92份沙子空心李种质为供试材料，如表4。通过天根DNAsecure Plant Kit植物基因组DNA提取试剂盒提取供试材料DNA，经1％琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测质量及浓度后，用缓冲液TE稀释样品DNA至约30ng/μl，-20℃保存。
表4：92份沙子空心李种质编号及名称
3.供试种质IRAP标记检测
根据实施例1中确定的PCR反应体系及程序，利用引物Ty3-2、Ty3-5及Ty3-6对92份沙子空心李进行PCR扩增，通过2％琼脂糖凝胶电泳过后，在凝胶成像系统中保存图像。
4.数据处理及分析
每个IRAP引物重复实验2-3次，仅统计可重复的清晰条带；统计每个引物条带扩增情况，相同电泳位置处存在条带赋值为“1”，无则赋值为“0”，获得每个供试材料各个引物的数据矩阵。
5.指纹图谱构建
不同供试种质在同一引物或几条引物间扩增条带存在差异即多态性，通过使用最少的引物达到鉴定尽量多种质的原则，确定核心引物，进而建立每个沙子空心李种质特有的指纹图谱，达到种质鉴别及保存的目的。
以Ty3-2标记引物为核心引物为例，利用其获得的0/1数据矩阵构建92份沙子空心李种质指纹图谱，结果如表5所示；Ty3-2共能鉴定出86个沙子空心李种质，其中N38、S10、L1、L24、P2及P3这6个沙子空心李种质则不能完全鉴别出，其可通过引物Ty3-2与Ty3-5或Ty3-6组成一组核心引物进一步鉴别，获得如表6或表7中的结果。本发明共获得14条IRAP引物，这14条引物中以任意两个或两个以上的引物为核心引物可将供试的沙子空心李种质完全鉴别，获得每个种质特有的指纹图谱。
表5 92个沙子空心李种质Ty3-2引物标记的指纹图谱
表6 6个沙子空心李种质Ty3-2及Ty3-5标记引物指纹图谱
表7 6个沙子空心李种质Ty3-2及Ty3-6标记引物指纹图谱
以上实施例仅是本发明的具体实施例之一，本发明还存在其他的实施方法，一律在本发明所要求的保护范围之内。
<110> 贵州大学
<120>一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物及其鉴定方法
<160> 14
<210> 1
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<400> 14
cccatacatc cttcatcaca g 21

Claims (6)

1.一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物，其特征在于：所述的IRAP分子标记引物为Ty3-2与Ty3-5或Ty3-6组合，所述的Ty3-2的序列如SEQ ID NO:8所示，所述的Ty3-5的序列如SEQ ID NO:10所示，所述的Ty3-6的序列如SEQ ID NO:11所示。
2.根据权利要求1所述的一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物的筛选方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
S1，提取供试沙子空心李幼嫩叶片基因组DNA；
S2，基于李反转录转座子Ty1-copia和Ty3-gypsy的RT序列设计IRAP引物；所述的李反转录转座子Ty1-copia和Ty3-gypsy的RT序列为NCBI：KF278998—KF279023及KF279024—KF279041；
S3，取S1的DNA，经PCR反应扩增过后通过1.5％琼脂糖凝胶电泳，对设计的引物进行初步筛选，保留具备多态性，条带清晰的IRAP引物；
S4，利用初步筛选获得的IRAP引物对所有供试材料进行IRAP分子标记分析，每个引物重复2-3次，根据扩增条带的有无、多少及大小判定结果。
3.根据权利要求2所述的一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物的筛选方法，其特征在于：S3中PCR反应体系为：30ng/μl模板DNA 1.0μl，引物1.3μl，PCR Mix 5.0μl及2.7μlddH2O。
4.根据权利要求2所述的一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物的筛选方法，其特征在于：S3中PCR反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性30s，51℃-58℃退火30s，72℃延伸1min，共40次循环，72℃再反应10min，4℃保存。
5.根据权利要求2所述的一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物的筛选方法，其特征在于：S1中所述的沙子空心李幼嫩叶片是指叶龄15-20d新鲜或-80℃下保存的叶片。
6.根据权利要求3所述的一种基于反转录转座子鉴定沙子空心李种质的IRAP分子标记引物的筛选方法，其特征在于：S3中PCR反应所使用的PCR Mix包括0.4mM Taq DNA聚合酶、0.4mM dNTP、4mM MgCl2及0.4mM常规缓冲液。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118879903B (zh) * 2024-06-21 2025-03-28 贵州大学 基于反转录转座子序列的黄精irap标记序列、试剂盒及用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561276A (zh) * 2014-12-22 2015-04-29 贵州大学 一种利用irap分子标记对马尾松种质鉴定的方法
CN106048032A (zh) * 2016-07-21 2016-10-26 东莞市香蕉蔬菜研究所 一种香蕉b基因组鉴定的scar分子标记及其鉴定方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008157432A1 (en) * 2007-06-15 2008-12-24 E. I. Dupont De Nemours & Company Polynucleotides and methods for making plants resistant to fungal pathogens
CN111607663B (zh) * 2020-07-08 2022-07-05 云南农业大学 基于茶树逆转录转座子序列开发的irap分子标记及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561276A (zh) * 2014-12-22 2015-04-29 贵州大学 一种利用irap分子标记对马尾松种质鉴定的方法
CN106048032A (zh) * 2016-07-21 2016-10-26 东莞市香蕉蔬菜研究所 一种香蕉b基因组鉴定的scar分子标记及其鉴定方法

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