CN114813720A - 饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒及数字化量化方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒及数字化量化方法，属于化学分析检测领域。本发明建立了色相H值与抗氧化物总抗氧化性间的线性相关性，结合显色剂的显色变色过程，通过手机等数字成像设备采集显色结果，数字成像获得的色相H值实现快速测定饮品的抗氧化能力。本发明开发了新颖的多色显色试剂盒，实现便于数字化量化的总抗氧化能力的方法，为饮品的抗氧化能力品质鉴定建立更加高效且直观的评价方法。

Description

饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒及数字化量化方法

技术领域

本发明属于化学分析检测领域，涉及一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒及数字化量化方法。

背景技术

在健康的机体中，自由基在较低水平中处于动态平衡，过量的自由基将严重破坏细胞的正常生理活动，损伤体内的核酸等生物大分子。如果这一现象长期持续，将导致癌症及肿瘤、心脑血管疾病、机体老化、神经系统疾病等的发生。天然抗氧化剂，如茶多酚、类胡萝卜素等，其结构中多数带有羟基、酚基、苯环、三键等，它们可作为氢原子供体和电子受体，结合自由基发生亲核、亲电反应，降低其对机体的影响。对天然产物进行抗氧化性检测并给出评价，可在合理选择饮品、促进身体健康等方面提供可靠参考。

现有的抗氧化能力测定多采用单色吸收模式，如专利申请号：202011221282.X《一种高灵敏度总抗氧化能力检测试剂盒及其使用方法》其原理是利用铁离子还原/抗氧化能力法(FRAP法)，在低pH值下，样品中的抗氧化剂将Fe³⁺TPTZ络合物还原为Fe²⁺TPTZ，呈现蓝色。于593nm处测定吸光度，吸光度与样品中抗氧化剂的还原能力成正比，因此可测量总体抗氧化能力。此类方法显色是根据朗伯比尔定律，通过吸光度的变化，实现对抗氧化能力的测试，需要专业的分光光度计或酶标仪进行定量。但是显色物质的吸光度及颜色的深浅除了与待测物的浓度有关，还与光透过待测溶液的光程有关，所以单色模式量化过程具有一定的挑战性。现亟需一种简单、快速的评价摄入饮品抗氧化能力的试剂盒及相关的数字量化的方法。

在色彩数据采集上，应用最为广泛的颜色标准是RGB色彩模式，该色彩模式是通过测量红(R)、绿(G)、蓝(B)三个颜色通道的变化以及此三通道叠加来获得数值变化，从而表示不同的颜色及不同的颜色深浅。而在色彩识别上HSV色彩空间颜色模式具有其独有的特点，HSV色彩空间即利用色相(H)、饱和度(S)、亮度(V)三个分量表示颜色。受到拍摄角度，背景光等影响，同一物体在不同拍摄环境中的RGB信息变化较大，但是使用HSV色彩空间则能够更直观的表现色彩的色相、明暗、饱和度等情况。而色相H值与物体本身的所呈现出的颜色相关，单一色相值可更便捷表征不同环境下物体的颜色。

为了实现通过色相H值对饮品总抗氧化能力的数字化的量化及可视化定量，亟需开发一种可以通过色相变化来显示饮品总抗氧化性的多色显色试剂，即检测试剂与不同抗氧化性能力的饮品相互作用呈现出不同的颜色，且颜色的色相H值与饮品的总抗氧化性成正比。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒及数字化量化方法，建立了显色结果的色相H值与抗氧化物总抗氧化性间的线性相关性，根据显色结果所获得的H值实现快速测定饮品的抗氧化能力，为饮品的抗氧化能力品质鉴定建立更加高效且直观的评价方法。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是：

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，所述多色检测试剂盒包括显色液A、检测液B和标准样品，显色液A、检测液B与标准样品反应后，可实现多色显色，具体的：

所述的显色液A：包括100-2000μM的3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)，1-1000nM的辣根过氧化物酶(HRP)，pH为4-10、浓度为100-1000mM的缓冲溶液，质量分数为0.1％-10.0％的表面活性剂。

所述的检测液B：包括100-2000μM的氧化剂，浓度为100-1000mM、pH为4-10的缓冲溶液。

所述的标准样品：包括浓度分别为0μM、25μM、50μM和75μM的抗坏血酸(Vc)。

进一步的，所述显色液A中缓冲溶液包括醋酸-醋酸钠缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、PBS缓冲溶液或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液。

进一步的，所述显色液A中表面活性剂包括吐温20、吐温60、吐温80或曲拉通X100。

进一步的，所述检测液B中氧化剂包括过氧化脲或过氧化氢。

进一步的，所述检测液B中缓冲溶液包括醋酸-醋酸钠缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、PBS缓冲溶液或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液。

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒的数字化量化方法，本发明根据TMB在不同氧化程度下可以显示多种颜色的特性，配制可实现多色显色的检测液，该检测液分为显色液A和检测液B，其中显色液A含有一定浓度的TMB及加快反应速度的HRP，检测液B含有一定量的氧化剂，先将A液B液等体积混合获得具有一定氧化能力的检测液C，并将待测还原性样品稀释10-100倍获得待测试样品，以Vc为标准样品，通过多色显示实现饮品总抗氧化能力的检测，其中总抗氧化能力用Vc当量来衡量。包括如下步骤：

步骤1，取等体积的显色液A和检测液B加入到离心管中或更大体积的容器中，室温反应1-10分钟，获得检测液C。检测液B以过氧化脲或过氧化氢为氧化剂，利用辣根过氧化物酶的催化活性加快反应速度，在检测前将显色液A中的TMB氧化为TMB²⁺，呈黄色。

步骤2，将标准样品与检测液C等体积混合，进行显色，得到表征抗氧化能力(Vc当量)与显色H值的线性关系式。

2.1)将四个不同浓度的等体积标准样品加入四个容器中，在各容器中均加入检测液C，其中，加入的检测液C与每份标准样品的体积相同，室温反应1-10分钟，进行显色。显色过程中：检测液C中的TMB²⁺被不同浓度的Vc所还原，分别呈现黄绿、绿、蓝绿或蓝色，而蓝色是TMB⁺的颜色，其它颜色为TMB²⁺与TMB⁺混合的颜色，在此变色过程中TMB²⁺被还原的程度与Vc的浓度成正比。

2.2)通过手机对检测试剂盒的四个显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的四个H值，以标准样品Vc的浓度为X轴，H值为Y轴，进行拟合得到H值与Vc浓度的线性关系式，其中Vc浓度对应总抗氧化能力。通过研究表明，Vc浓度只有在0-75μM时，其H值与Vc浓度能够呈良好的线性关系。

步骤3，得到待测样品的总抗氧化能力

3.1)对待测样品进行稀释N倍，将稀释后的待测样品溶液加入与步骤2.1)相同的容器中，再加入检测液C，其中检测液C、待测样品溶液的体积均与步骤2.1)相同，室温反应1-10分钟，进行显色。检测液C中的TMB²⁺也能够被待测试样品溶液中的还原性物质进行还原，呈现颜色。

3.2)通过目测比对的方法获得合适的稀释倍数N，将步骤3.1)稀释后的待测样品溶液呈现的颜色与步骤2.1)的四个颜色进行比对，大致判断步骤3.1)稀释后的待测样品溶液的H值是否在0～75μM Vc的显色范围内：若颜色为纯蓝或浅蓝，则H值可以直接判断大于75μM Vc的显色H值，则增大稀释倍数N，重复步骤3.1)、步骤3.2)；若颜色在黄绿～蓝色之间，则可判断H值在0～75μM Vc的显色范围内，进行步骤3.3)。

3.3)通过手机对待测样品溶液的显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的H值：

3.3.1)若H值在0～75μM Vc的显色H值范围内，则将该H值代入步骤2.2)得到的线性关系式中，进而得到其对应的Vc当量浓度，再乘以稀释倍数N，得到最终待测样品的Vc当量浓度，也就得到了待测样品的总抗氧化能力。

3.3.2)若H值大于75μM Vc的显色H值，则需要返回步骤3.1)对稀释后的待测样品溶液继续稀释，保证待测试样品溶液的显色的H值在0～75μM Vc的显色H值范围内；继而重复步骤3.3.1)，得到待测样品的总抗氧化能力。

本方法适用于检测一种待测样品或高通量同时检测多种待测样品。

本发明的有益效果为：

TMB²⁺被还原的程度的数字量化方法，通常可采用酶标仪或分光光度计，TMB²⁺呈黄色其吸收波长为450nm，TMB⁺呈蓝色其吸收波长为650nm，当TMB²⁺被不同浓度的Vc或还原性物质还原至TMB⁺的过程中450nm波长的吸收减弱，而650nm波长的吸收增强，但是此方法所需设备昂贵，需要专业技术人员操作。本发明结合显色剂的显色变色过程，通过手机等数字成像设备采集显色结果，数字成像获得的色相H值与0-75μM的Vc或等Vc当量的还原性物质的量成正比。即本发明开发了新颖的多色显色试剂盒，首次将显色结果的H值与饮品的总抗氧化能力相关联，实现便于数字化量化及目测量化饮品的总抗氧化能力的方法，能够准确且高效的得到待检测样品溶液的总抗氧化能力。

附图说明

图1为本发明TMB显色的原理。

图2为本发明实施例1用于检测标准样品浓度分别为0、25、50、75μmol/LVc的工作曲线。

图3为本发明实施例1用于检测饮品(红茶、普洱、某茶)样品显色结果的H值及总抗氧化能力(Vc当量)。

图4为本发明实施例2用于检测标准样品浓度分别为0、25、50、75μmol/LVc的工作曲线。

图5为本发明实施例2用于检测饮品(红茶、普洱、某茶)样品显色结果的H值及总抗氧化能力(Vc当量)。

图6为本发明实施例3用于检测标准样品浓度分别为0、25、50、75μmol/LVc的工作曲线。

图7为本发明实施例3用于检测饮品(红茶、普洱、某茶)样品显色结果的H值及总抗氧化能力(Vc当量)。

图8为本发明实施例4用于检测标准样品浓度分别为0、25、50、75μmol/LVc的工作曲线。

图9为本发明实施例4用于检测饮品(红茶、普洱、某茶)样品显色结果的H值及总抗氧化能力(Vc当量)。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清晰，以下结合附图及具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，该具体实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。

实施例1

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，包括以下溶液：

显色液A：包括200μM的TMB，10nM HRP，pH为5.4、浓度为100mM的PBS缓冲溶液，质量分数为0.2％的表面活性剂吐温20。

检测液B：包括200μM的过氧化脲，pH为5.4、浓度为500mM的PBS缓冲溶液。

标准样品：包括浓度分别为0μM、25μM、50μM和75μM抗坏血酸(Vc)。

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒的数字化量化方法，包括如下步骤：

步骤1，取等体积显色液A和检测液B加入到离心管中，室温反应1-10分钟，获得检测液C。

步骤2，将标准样品与检测液C等体积混合，进行显色，得到表征抗氧化能力与H值的线性关系式。

2.1)将四个不同浓度的等体积标准样品加入四个容器中，在各容器中均加入检测液C，其中，加入的检测液C与每份标准样品的体积相同，室温反应5分钟，进行显色。

2.2)通过手机对检测试剂盒的四个显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的四个H值，以标准样品的Vc浓度为X轴，H值为Y轴，进行拟合得到H值与Vc浓度的线性关系式，其中Vc浓度对应总抗氧化能力。

步骤3，得到待测样品的总抗氧化能力

3.1)对待测样品(分别为红茶、普洱和某茶)稀释50倍，将稀释后的待测样品溶液加入与步骤2.1)相同的容器中，再加入检测液C，其中检测液C、待测样品溶液的体积均与步骤2.1)相同，室温反应5分钟，进行显色。

3.2)通过目测比对的方法，将步骤3.1)稀释后待测样品溶液呈现的颜色与步骤2.1)的四个颜色进行比对，大致判断步骤3.1)的H值是在0～75μM Vc的显色范围内，获得合适的稀释倍数是50。

3.3)通过手机分别对三个待测试样品溶液的显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的H值，所得H值在0～75μM Vc的显色H值范围内，将所的H值代入步骤2.2)得到的线性关系式中，进而得到其对应的Vc当量浓度，再乘以稀释倍数50，得到最终待测样品的Vc当量浓度，也就得到了待测样品的总抗氧化能力。

该方法的显色原理如图1所示，无色的TMB加入等摩尔比的过氧化脲，利用辣根过氧化物酶的催化活性加快反应速度，在检测前将TMB氧化为TMB²⁺，呈黄色，TMB²⁺被不同浓度的Vc或还原性物质所还原分别呈现黄绿、绿、蓝绿、蓝色，而蓝色是TMB⁺的颜色，其它颜色为TMB²⁺与TMB⁺混合的颜色，在此变色过程中TMB²⁺被还原的程度与Vc或还原性物质的浓度成正比。

通过四点法得到色相H值与Vc浓度的工作曲线为：

H＝A*C_Vc+B (1)

式中，H代表色相值，C_Vc代表Vc的浓度当量，A代表该方法的斜率系数，B代表Vc浓度为0μM时的色相值，A、B值与检测液C的配方有关。通过步骤2.2)获得的线性关系式如图2所示。

采用本发明所述方法检测待测样品(分别为红茶、普洱和某茶)，得到的总抗氧化能力的H值及Vc当量如下表1所示：

表1实施例1中标准样品及待测样品的总抗氧化能力的H值及Vc当量列表

如图3所示，由于实际样品稀释倍数是50，根据工作曲线换算可知各待测样品的总抗氧化能力，红茶为2.33mmol/L、普洱为1.37mmol/L、某茶为2.65mmol/L(Vc当量)。

实施例2

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，包括以下溶液：

显色液A：包括100μM的TMB，1nM HRP，pH为4.0、浓度为500mM醋酸-醋酸钠缓冲溶液，质量分数为0.1％的表面活性剂吐温60。

检测液B：包括100μM的过氧化脲，pH为4.0、浓度为100mM醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

标准样品：包括浓度分别为0μM、25μM、50μM和75μM的抗坏血酸(Vc)。

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒的数字化量化方法，包括如下步骤：

步骤1，取等体积显色液A和检测液B加入到离心管中，室温反应1分钟，获得检测液C。

步骤2，将标准样品与检测液C等体积混合，进行显色，得到表征抗氧化能力与H值的线性关系式。

2.1)将四个不同浓度的等体积标准样品加入四个容器中，在各容器中均加入检测液C，其中，加入的检测液C与每份标准样品的体积相同，室温反应1分钟，进行显色。

2.2)通过手机对检测试剂盒的四个显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的四个H值，以标准样品的Vc浓度为X轴，H值为Y轴，进行拟合得到H值与Vc浓度的线性关系式，其中Vc浓度对应总抗氧化能力。

步骤3，得到待测样品的总抗氧化能力

3.1)对待测样品溶液(分别为红茶、普洱和某茶)稀释25倍，将稀释后的待测样品溶液加入与步骤2.1)相同的容器中，再加入检测液C，其中检测液C、待测样品溶液的体积均与步骤2.1)相同，室温反应1分钟，进行显色。

3.2)通过目测，将步骤3.1)稀释后待测样品呈现的颜色与步骤2.1)的四个颜色进行比对，大致判断步骤3.1)的H值是在0～75μM Vc的显色范围内，获得合适的稀释倍数是50。

3.3)通过手机分别对三个待测试样品溶液的显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的H值，所得H值在0～75μM Vc的显色H值范围内，将所的H值代入步骤2.2)得到的线性关系式中，进而得到其对应的Vc当量浓度，再乘以稀释倍数50，得到最终待测样品的Vc当量浓度，也就得到了待测样品的总抗氧化能力。

通过步骤2.2)得到的线性关系式如图4所示。

采用本发明所述方法检测待测样品(分别为红茶、普洱和某茶)，得到的总抗氧化能力的H值及Vc当量如下表2所示：

表2实施例2中标准样品及待测样品的总抗氧化能力的H值及Vc当量列表

如图5所示，由于实际样品稀释倍数是50，根据工作曲线换算可知各待测样品的总抗氧化能力，红茶为2.25mmol/L、普洱为1.36mmol/L、某茶为2.52mmol/L(Vc当量)。

实施例3

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，包括以下溶液：

显色液A：包括500μM的TMB，500nM HRP，pH为7.0、浓度为100mM Tris-HCl缓冲溶液，质量分数为5％的表面活性剂吐温80。

检测液B：包括500μM的过氧化脲，pH为7.0、浓度为100mM Tris-HCl缓冲溶液。

标准样品：包括浓度分别为0μM、25μM、50μM和75μM的抗坏血酸(Vc)。

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒的数字化量化方法，包括如下步骤：

步骤1，取等体积显色液A和检测液B加入到离心管中或更大体积的容器中，室温反应10分钟，获得检测液C。

步骤2，将标准样品与检测液C等体积混合，进行显色，得到表征抗氧化能力与H值的线性关系式。

2.1)将四个不同浓度的等体积标准样品加入四个容器中，在各容器中均加入检测液C，其中，加入的检测液C与每份标准样品的体积相同，室温反应10分钟，进行显色。

2.2)通过手机对检测试剂盒的四个显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的四个H值，以标准样品的Vc浓度为X轴，H值为Y轴，进行拟合得到H值与Vc浓度的线性关系式，其中Vc浓度对应总抗氧化能力。

步骤3，得到待测样品的总抗氧化能力

3.1)对待测样品溶液(分别为红茶、普洱和某茶)进行稀释50倍，将稀释后的待测样品溶液加入与步骤2.1)相同的容器中，再加入检测液C，其中检测液C、待测样品溶液的体积均与步骤2.1)相同，室温反应10分钟，进行显色。

3.2)通过目测，将步骤3.1)稀释后待测样品呈现的颜色与步骤2.1)的四个颜色进行比对，大致判断步骤3.1)的H值是在0～75μM Vc的显色范围内，获得合适的稀释倍数是50。

3.3)通过手机分别对三个待测试样品溶液的显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的H值，所得H值在0～75μM Vc的显色H值范围内，将所的H值代入步骤2.2)得到的线性关系式中，进而得到其对应的Vc当量浓度，再乘以稀释倍数50，得到最终待测样品的Vc当量浓度，也就得到了待测样品的总抗氧化能力。

通过步骤2.2)得到的线性关系式如图6所示。

采用本发明所述方法检测待测样品(分别为红茶、普洱和某茶)，得到的总抗氧化能力的H值及Vc含量如下表3所示：

表3实施例3中标准样品及待测样品的总抗氧化能力的H值及Vc当量列表

如图7所示，由于实际样品稀释倍数是50，根据工作曲线换算可知各待测样品的总抗氧化能力，红茶为2.26mmol/L、普洱为1.36mmol/L、某茶为2.63mmol/L(Vc当量)。

实施例4

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，包括以下溶液：

显色液A：包括2000μM的TMB，1000nM HRP，pH为10、浓度为1000mM碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液，质量分数为10％的表面活性剂曲拉通X100。

检测液B：包括2000μM的过氧化氢，pH为10、浓度为1000mM碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液。

标准样品：包括浓度分别为0μM、25μM、50μM和75μM的抗坏血酸(Vc)。

一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒的数字化量化方法，包括如下步骤：

步骤1，取等体积显色液A和检测液B加入到离心管中或更大体积的容器中，室温反应10分钟，获得检测液C。

步骤2，将标准样品与检测液C等体积混合，进行显色，得到表征抗氧化能力与H值的线性关系式。

2.1)将四个不同浓度的等体积标准样品加入四个容器中，在各容器中均加入检测液C，其中，加入的检测液C与每份标准样品的体积相同，室温反应10分钟，进行显色。

2.2)通过手机对检测试剂盒的四个显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的四个H值，以标准样品的Vc浓度为X轴，H值为Y轴，进行拟合得到H值与Vc浓度的线性关系式，其中Vc浓度对应总抗氧化能力。

步骤3，得到待测样品的总抗氧化能力

3.1)对待测样品溶液(分别为红茶、普洱和某茶)进行稀释50倍，将稀释后的待测样品溶液加入与步骤2.1)相同的容器中，再加入检测液C，其中检测液C、待测样品溶液的体积均与步骤2.1)相同，室温反应10分钟，进行显色。检测液C中的TMB²⁺也能够被待测试样品溶液中的还原性物质进行还原，呈现颜色。

3.2)通过目测，将步骤3.1)稀释后待测样品呈现的颜色与步骤2.1)的四个颜色进行比对，大致判断步骤3.1)的H值是在0～75μM Vc的显色范围内，获得合适的稀释倍数是50。

3.3)通过手机分别对三个待测试样品溶液的显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的H值，所得H值在0～75μM Vc的显色H值范围内，将所的H值代入步骤2.2)得到的线性关系式中，进而得到其对应的Vc当量浓度，再乘以稀释倍数50，得到最终待测样品的Vc当量浓度，也就得到了待测样品的总抗氧化能力。

通过步骤2.2)得到的线性关系式如图8所示。

采用本发明所述方法检测待测样品(分别为红茶、普洱和某茶)，得到的总抗氧化能力的H值及Vc含量如下表4所示：

表4实施例4中标准样品及待测样品的总抗氧化能力的H值及Vc当量列表

如图9所示，由于实际样品稀释倍数是50，根据工作曲线换算可知各待测样品的总抗氧化能力，红茶为2.22mmol/L、普洱为1.34mmol/L、某茶为2.58mmol/L(Vc当量)。

以上所述实施例仅表达本发明的实施方式，但并不能因此而理解为对本发明专利的范围的限制，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，其特征在于，包括以下溶液：

显色液A：包括100-2000μM的3,3',5,5'-四甲基联苯胺，1-1000nM的辣根过氧化物酶，pH为4-10、浓度为100-1000mM的缓冲溶液，质量分数为0.1％-10.0％的表面活性剂；

检测液B：包括100-2000μM的氧化剂，浓度为100-1000mM、pH为4-10的缓冲溶液；

标准样品：包括浓度分别为0μM、25μM、50μM和75μM的抗坏血酸，即Vc。

2.根据权利要求1所述的一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，其特征在于，所述的显色液A中缓冲溶液包括醋酸-醋酸钠缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、PBS缓冲溶液或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液。

3.根据权利要求1所述的一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，其特征在于，所述的显色液A中表面活性剂包括吐温20、吐温60、吐温80或曲拉通X100。

4.根据权利要求1所述的一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，其特征在于，所述的检测液B中氧化剂包括过氧化脲或过氧化氢。

5.根据权利要求1所述的一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒，其特征在于，所述的检测液B中缓冲溶液包括醋酸-醋酸钠缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、PBS缓冲溶液或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液。

6.根据权利要求1-5任一所述的一种饮品总抗氧化能力多色检测试剂盒的数字化量化方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，取等体积显色液A和检测液B加入到离心管中或更大体积的容器中，室温反应1-10分钟，获得检测液C；

步骤2，将标准样品与检测液C等体积混合，进行显色，得到表征抗氧化能力，即Vc当量，与显色H值的线性关系式；

2.1)将四个不同浓度的等体积标准样品加入四个容器中，在各容器中均加入检测液C，其中，加入的检测液C与每份标准样品的体积相同，室温反应1-10分钟，进行显色；

2.2)通过手机对检测试剂盒的四个显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的四个H值，以标准样品Vc的浓度为X轴，H值为Y轴，进行拟合得到H值与Vc浓度的线性关系式，其中Vc浓度对应总抗氧化能力；

步骤3，得到待测样品的总抗氧化能力；

3.1)对待测样品进行稀释N倍，将稀释后的待测样品溶液加入与步骤2.1)相同的容器中，再加入检测液C，其中检测液C、待测样品溶液的体积均与步骤2.1)相同，室温反应1-10分钟，进行显色；

3.2)通过目测比对的方法获得合适的稀释倍数N，将步骤3.1)稀释后的待测样品溶液呈现的颜色与步骤2.1)的四个颜色进行比对，初步判断步骤3.1)稀释后的待测样品溶液的H值是否在0～75μM Vc的显色范围内：若颜色为纯蓝或浅蓝，则H值可以直接判断大于75μMVc的显色H值，则增大稀释倍数N，重复步骤3.1)、步骤3.2)；若颜色在黄绿～蓝色之间，则可判断H值在0～75μM Vc的显色范围内，进行步骤3.3)；

3.3)通过手机对待测样品溶液的显色结果进行拍照，利用图像软件获得显色结果的H值：

3.3.1)若H值在0～75μM Vc的显色H值范围内，则将该H值代入步骤2.2)得到的线性关系式中，进而得到其对应的Vc当量浓度，再乘以稀释倍数N，得到最终待测样品的Vc当量浓度，也就得到了待测样品的总抗氧化能力；

3.3.2)若H值大于75μM Vc的显色H值，则需要返回步骤3.1)对稀释后的待测样品溶液继续稀释，保证待测试样品溶液的显色的H值在0～75μM Vc的显色H值范围内；继而重复步骤3.3.1)，得到待测样品的总抗氧化能力。

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