CN114539226A - 一种含吲哚类衍生物自由碱的晶型及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含吲哚类衍生物自由碱的晶型及其制备方法和应用。具体涉及一种通式(I)所示化合物、其晶型、制备方法和含有治疗有效量的该化合物或其晶型的药物组合物以及其作为激酶抑制剂，尤其是作为受体酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，更具体地，作为EGFR或HER2抑制剂在治疗癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS等相关疾病的用途，本发明化合物在EGFR以及HER2 20外显子突变中展现良好的抑制活性。
Description
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种含吲哚类衍生物自由碱的晶型及其制备方法和应用。
背景技术
细胞中存在多种信号通路互相作用控制着细胞的增殖、生长、迁移以及凋亡。信号通路的异常激活会导致肿瘤的发生。受体酪氨酸激酶在细胞的调控中发挥重要作用。表皮生长因子受体(EGFR)为跨膜蛋白酪氨酸激酶ErbB受体家族(包括ErbB1，ErbB2，ErbB3，ErbB4)的一员，通过与其配体表皮生长因子(EGF)的结合，可以在膜上形成同源二聚体，或者与ErbB家族中其他的受体(如ErbB2,ErbB3,ErbB4)形成异源二聚体，导致EGFR酪氨酸激酶活性的激活。激活的EGFR可以磷酸化不同的底物，从而激活下游的PI3K-AKT通路以及RAS-MAPK通路等，在细胞存活、增殖以及凋亡等多个过程中发挥作用。
EGFR信号通路的失调包括配体以及受体的表达升高，EGFR基因扩增以及突变等等，可促进细胞向恶性转化，从而导致多种肿瘤的发生。中国的非小细胞肺癌(NSCLC)患者中约35％左右为EGFR突变，其中最常见的突变类型为19外显子缺失突变(Del19)以及21外显子L858R激活突变，二者占据EGFR突变的约80％左右。EGFR 20外显子插入突变为EGFR突变的另一大突变，占NSCLC中EGFR突变的4％～10％，突变类型多达几十种，常见的突变类型为Ex20Ins D770_N771InsSVD，Ex20Ins V769_D770InsASV等。
多年来针对NSCLC中EGFR突变研发出了大量的靶向药，比如针对经典Del19突变以及L858R突变的一代可逆性的酪氨酸酶抑制剂(TKI)吉非替尼和厄洛替尼，二代不可逆共价结合抑制剂阿法替尼，以及针对耐药突变EGFR T790M的三代抑制剂奥希替尼，均有非常好的临床效果。但是目前市场上的EGFR抑制剂对于EGFR 20外显子插入突变的作用很差，病人生存期很短，该靶点需要特异性更强的抑制剂，存在较大的临床需求。
HER2作为ErbB家族的另一成员，其扩增以及突变在多种癌症中均有发生。其中在NSCLC中HER2的突变占4％左右，而HER2突变90％左右为20外显子插入突变，其中最常见的突变类型为p.A775_G776insYVMA，目前上市的EGFR抑制剂对其效果一般。
目前已有多家国内外药企针对EGFR&HER2 20外显子插入突变展开了积极的研究，其中Spectrum公司的Poziotinib、Takeda的TAK-788以及Rain Therapeutics的Tarloxotinib均已进入临床研究，另外Cullinan&Taiho公司的化合物TAS-6417也在临床前实验中展现了较好的活性。由于很多EGFR抑制剂对EGFR野生型抑制作用较强，导致临床上出现皮疹等副作用，而对于EGFR 20外显子插入突变以及HER2 20外显子插入突变靶点的抑制活性也有待提高，因此对EGFR以及HER2 20外显子突变效果明显且对野生型EGFR选择性高的化合物仍存在极大需求，具有很好的市场前景。
专利PCT/CN2020/091558中公开了一系列含吲哚类衍生物抑制剂的结构，在后续的研发中，为了产物易于处理、过滤和干燥，寻求适合的便于储存、产品长期稳定、生物利用度高的晶体，本发明对上述化合物的自由碱晶型进行了全面的研究。
发明内容
专利PCT/CN2020/091558中所涉及的所有内容均以引证的方式添加到本发明中。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示化合物的晶型，
其中：
R1选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)NRaa(CH2)nRbb或-(CH2)nN＝S(O)RaaRbb；所述氨基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代；
R2选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
R3选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
Raa和Rbb各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；所述氨基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代；
x为0～4的整数；且
n为0～4的整数。
在本发明优选方案中，所述通式(I)所示的晶型，其中R1选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(O)NRaa(CH2)nRbb或-(CH2)nN＝S(O)RaaRbb；所述氨基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基取代；
优选地，R1选自氢、氘、卤素、氰基、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、5-6元杂芳基、-C(O)NRaa(CH2)nRbb或-(CH2)nN＝S(O)RaaRbb，所述C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基和5-6元杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基和C1-6卤代烷氧基中的一个或多个取代基取代；
更优选地，R1选自氢、氘、氰基、5-6元杂芳基、-C(O)NRaa(CH2)nRbb或-(CH2)nN＝S(O)RaaRbb，所述5-6元杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、C1-3烷基和C1-3氘代烷基中的一个或多个取代基取代；
最优选地，R1选自氢、氰基、噁唑基、吡唑基、
Raa和Rbb各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基或5-10元杂芳基；所述氨基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基取代；
x为0～2的整数；且
n为0～2的整数。
在本发明优选方案中，所述通式(I)所示的晶型，其中R2选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基或3-8元杂环基；
优选氢、氘、卤素、氰基、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷基或3-6元杂环基；
更优选氢、氘、甲基、乙基、丙基、环丙基或氧杂环丁基；
最优选氢、甲基、环丙基或氧杂环丁基。
在本发明优选方案中，所述通式(I)所示的晶型，R3选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基；
优选氢、氘、卤素、氰基、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基或C1-3卤代烷氧基；
更优选氢、氘、氟、氯、溴、甲氧基或乙氧基；
最优选氢、氟或甲氧基。
在本发明更优选方案中，化合物为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺、N-(5-((5-氰基-4-(6-甲氧基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺、N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-5-氟-6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺、N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-5-(噁唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺。
在本发明更优选方案中，提供化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型。
在本发明进一步优选的实施方案中，提供化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(实施例1)的晶型A。
晶型A的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为7.1±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为22.7±0.2°、20.4±0.2°、22.3±0.2°、13.4±0.2°、12.9±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为17.5±0.2°、20.8±0.2°、9.6±0.2°、22.0±0.2°、25.6±0.2°、14.9±0.2°、15.6±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
晶型A的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为7.1±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°、22.7±0.2°、20.4±0.2°、22.3±0.2°、13.4±0.2°、12.9±0.2、17.5±0.2°、20.8±0.2°、9.6±0.2°、22.0±0.2°、25.6±0.2°、14.9±0.2°、15.6±0.2°、28.1±0.2°、9.4±0.2°、24.1±0.2°、16.2±0.2°、19.3±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表1所示。
表1
进一步优选地，实施例1所示化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型A，其X-射线粉末衍射图谱基本如图1所示；其DSC图谱基本如图2所示；其TGA图谱基本如图3所示。
在本发明进一步优选的实施方案中，提供化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(实施例1)的晶型B。
晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为6.5±0.2°处具有衍射峰；或者在20.7±0.2°处具有衍射峰；或者在20.9±0.2°处具有衍射峰；或者在21.0±0.2°处具有衍射峰；或者在21.4±0.2°处具有衍射峰；或者在15.6±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；或者在21.6±0.2°处具有衍射峰；或者在9.2±0.2°处具有衍射峰；或者在25.1±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为6.5±0.2°、20.7±0.2°、20.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含21.0±0.2°、21.4±0.2°、15.6±0.2°、23.8±0.2°、21.6±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为9.2±0.2°、25.1±0.2°、10.7±0.2°、12.4±0.2°、17.4±0.2°、17.6±0.2°、14.5±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
晶型B的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为6.5±0.2°、20.7±0.2°、20.9±0.2°、21.0±0.2°、21.4±0.2°、15.6±0.2°、23.8±0.2°、21.6±0.2°、9.2±0.2°、25.1±0.2°、10.7±0.2°、12.4±0.2°、17.4±0.2°、17.6±0.2°、14.5±0.2°、23.4±0.2°、20.5±0.2°、13.5±0.2°、16.9±0.2°、24.7±0.2°中的一处或多处具有衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处、10处有衍射峰；
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表2所示。
表2
进一步优选地，实施例1所示化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型B，其X-射线粉末衍射图谱基本如图4所示；其DSC图谱基本如图5所示；其TGA图谱基本如图6所示。
在本发明进一步优选的实施方案中，提供化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(实施例1)的晶型C。
晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为7.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.1±0.2°处具有衍射峰；或者在9.0±0.2°处具有衍射峰；或者在22.7±0.2°处具有衍射峰；或者在14.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.9±0.2°处具有衍射峰；或者在22.5±0.2°处具有衍射峰；或者在20.3±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在23.2±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
晶型C的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为7.1±0.2°、18.1±0.2°、9.0±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含22.7±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°、22.5±0.2°、20.3±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.2±0.2°、23.2±0.2°、23.1±0.2°、20.7±0.2°、22.0±0.2°、17.5±0.2°、12.9±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
晶型C的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为7.1±0.2°、18.1±0.2°、9.0±0.2°、22.7±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°、22.5±0.2°、20.3±0.2°、22.2±0.2°、23.2±0.2°、23.1±0.2°、20.7±0.2°、22.0±0.2°、17.5±0.2°、12.9±0.2°、12.9±0.2°、21.9±0.2°、13.4±0.2°、10.7±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表3所示。
表3
进一步优选地，实施例1所示化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型C，其X-射线粉末衍射图谱基本如图7所示；其DSC图谱基本如图8所示；其TGA图谱基本如图9所示。
在本发明进一步优选的实施方案中，提供化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(实施例1)的晶型D。
晶型D的X-射线粉末衍射图谱在2θ为26.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在10.6±0.2°处具有衍射峰；或者在14.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.3±0.2°处具有衍射峰；或者在15.9±0.2°处具有衍射峰；或者在7.0±0.2°处具有衍射峰；或者在9.0±0.2°处具有衍射峰；或者在19.0±0.2°处具有衍射峰；或者在8.3±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
晶型D的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为26.2±0.2°、22.2±0.2°、10.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含14.5±0.2°、21.3±0.2°、15.9±0.2°、7.0±0.2°、9.0±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
晶型D的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.0±0.2°、8.3±0.2°、26.9±0.2°、18.1±0.2°、20.1±0.2°、21.8±0.2°、19.8±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
晶型D的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为26.2±0.2°、22.2±0.2°、10.6±0.2°、14.5±0.2°、21.3±0.2°、15.9±0.2°、7.0±0.2°、9.0±0.2°、19.0±0.2°、8.3±0.2°、26.9±0.2°、18.1±0.2°、20.1±0.2°、21.8±0.2°、19.8±0.2°、18.3±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表4所示。
表4
进一步优选地，化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型D，其X-射线粉末衍射图谱基本如图10所示；其DSC图谱基本如图11所示；其TGA图谱基本如图12所示。
在本发明进一步优选的实施方案中，提供化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(实施例1)的晶型E。
晶型E的X-射线粉末衍射图谱在2θ为6.3±0.2°处具有衍射峰；或者在12.6±0.2°处具有衍射峰；或者在9.9±0.2°处具有衍射峰；或者在21.1±0.2°处具有衍射峰；或者在13.2±0.2°处具有衍射峰；或者在26.2±0.2°处具有衍射峰；或者在20.0±0.2°处具有衍射峰；或者在16.9±0.2°处具有衍射峰；或者在15.5±0.2°处具有衍射峰；或者在25.3±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
晶型E的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为6.3±0.2°、12.6±0.2°、9.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含21.1±0.2°、13.2±0.2°、26.2±0.2°、20.0±0.2°、16.9±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
晶型E的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为15.5±0.2°、25.3±0.2°、27.4±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处；进一步优选，包含其中任意2处、3处；
晶型E的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为6.3±0.2°、12.6±0.2°、9.9±0.2°、21.1±0.2°、13.2±0.2°、26.2±0.2°、20.0±0.2°、16.9±0.2°、15.5±0.2°、25.3±0.2°、27.4±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，使用Cu-Kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的X-射线特征衍射峰如表5所示。
表5
进一步优选地，化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型E，其X-射线粉末衍射图谱基本如图13所示；其DSC图谱基本如图14所示；其TGA图谱基本如图15所示。
在本发明进一步优选的实施方式中，化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型A、晶型B、晶型C、晶型D、晶型E的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置分别与图1、图4、图7、图10和图13对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优先±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°。
在本发明优选的实施方案中，通式(I)所述任一化合物的晶型，所述晶型为含溶剂或不含溶剂的晶型，其中所述的溶剂选自水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、88％丙酮、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、正丙醇、叔丁醇、2-丁酮、3-戊酮、正庚烷、庚烷、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、环己烷、甲基叔丁基醚或异丙醚中的一种或多种。
在本发明优选的实施方案中，通式(I)所述任一化合物的晶型，所述溶剂的个数为为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明优选的实施方案中，通式(I)所述化合物的晶型为非溶剂晶型，优选为无水晶型。
在本发明优选的实施方案中，通式(I)所述化合物的晶型为水合物晶型，水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
在本发明更优选的实施方案中，化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型为非溶剂化合物，优选为无水物或水合物。
在本发明更优选的实施方案中，化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的水合物晶型中水的个数为0.2-3，优选0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0.5、1、2或3。
本领域普通技术人员所熟知的是，XRPD可能会因检测方法、条件和仪器的原因产生一定的位移和强度偏差。作为本发明晶型的一个具体示例，其XRPD如图谱X所示，但普通技术人员了解的是，当关键特征峰位移2θ偏差在±0.5，尤其在±0.2左右时，均可以被认定为同一晶型。
另一方面，本发明还涉及一种制备通式(I)所述化合物的晶型的方法，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱，用不良溶剂混悬，悬浮密度优选为50～200mg/mL；
2)以上所得混悬液在一定温度下振摇一定时间，优选温度为0～50℃，时间为1～15天；
3)将以上混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体干燥至恒重得到目标产物，例如放入45～55℃真空干燥箱中烘干至恒重得到目标产物；
其中：
所述的不良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、乙醇、88％丙酮、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、甲基叔丁基醚、正庚烷、苯、甲苯、氯苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、叔丁醇、2-丁酮和3-戊酮中的一种或多种；优选甲苯、1,4-二氧六环、3-戊酮、乙酸乙酯、甲醇和甲酸乙酯中的一种或多种。
本发明还涉及一种制备通式(I)所述化合物的晶型的方法，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱，用良溶剂溶解；
2)向以上所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出；优选在0～50℃温度下向以上所得溶液中加入反溶剂；
3)将以上混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体干燥至恒重得到目标产物，例如放入45～55℃真空干燥箱中烘干至恒重；
其中：
所述的良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、乙醇、88％丙酮、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、氯苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、叔丁醇、2-丁酮和3-戊酮中的一种或多种；优选二氯甲烷、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基亚砜、乙腈和2-丁酮中的一种或多种。
所述的不良溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、甲苯、正庚烷、水、醋酸异丙酯、环己烷、甲基叔丁基醚和异丙醚中的一种或多种；优选水、正庚烷、环己烷和甲基叔丁基醚中的一种或多种。
本发明的目的还在于提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的所述式(I)所示通式化合物的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的目的还在于提供了所述式(I)所示通式化合物晶型以及药物组合物在制备激酶抑制剂药物中的应用。
本发明的目的还在于提供了所述的通式(I)所示化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型，以及药物组合物在制备激酶抑制剂药物中的应用。
所述激酶抑制剂为受体酪氨酸激酶抑制剂，优选HER2抑制剂、EGFR抑制剂和EGFR单抗及其联用相关药物，更优选HER2 20外显子突变体抑制剂、EGFR20外显子突变体抑制剂和EGFR20外显子突变体单抗及其联用相关药物。
本发明的目的在于提供了所述的通式(I)所示化合物的晶型以及所述的药物组合物在治疗癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS相关疾病药物中的应用，优选地，所述癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS相关疾病是由HER2 20外显子突变和/或EGFR20外显子突变介导的疾病。
本发明的目的还在于提供了所述的通式(I)所示化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型以及所述的药物组合物在治疗癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS相关疾病药物中的应用，优选地，所述癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS相关疾病是由HER2 20外显子突变和/或EGFR20外显子突变介导的疾病。
所述的癌症选自乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、胃癌、直肠癌、胰腺癌、脑癌、肝癌、实体瘤、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小细胞肺癌。
第三代EGFR抑制剂主要是针对EGFR激活突变体和T790M耐药性突变体抑制性高，本发明的化合物在EGFR和/或HER2 20外显子插入突变靶点方面较第三代EGFR抑制剂表现出以下显著优势：
1、显著提高Ba/F3 EGFR突变细胞株抑制活性，优选化合物的活性高10倍以上，甚至20倍；
2、提高在Ba/F3 EGFR突变细胞株和A431细胞株增殖抑制活性的选择性，优选化合物高3倍以上，甚至10倍；
3、在小鼠原B细胞Ba/F3 EGFR-D770-N771ins_SVD移植瘤模型上的体内药效肿瘤抑瘤率上也表现出显著性优势。
发明的详细说明
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基及其各种支链异构体等。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至8个碳原子，最优选包含3至6个碳原子。环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子；最优选包含3至6个环原子。杂环基的非限制性实例包括氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为三唑基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、嘧啶基或噻唑基；更有选吡唑基和噁唑基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。
“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“羧基”指-C(O)OH。
“THF”指四氢呋喃。
“MeOH”指甲醇。
“Pd2(dba)3”指三(二亚苄基丙酮)二钯。
“X选自A、B、或C”、“X选自A、B和C”、“X为A、B或C”、“X为A、B和C”等不同用语均表达了相同的意义，即表示X可以是A、B、C中的任意一种或几种。
本发明所述的氢原子均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢原子也均可被氘原子取代。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。可选的取代基包括包括氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氧代基、硫代基、烷基、烯基、炔基、氘代烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、烷硫基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代，优选氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氧代基、硫代基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6卤代烷氧基、C3-12环烷基、3-12元杂环基、C6-14芳基和5-14元杂芳基。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
附图说明
图1为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A的XRPD图示。
图2为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A的DSC图示。
图3为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A的TGA图示。
图4为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型B的XRPD图示。
图5为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型B的DSC图示。
图6为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型B的TGA图示。
图7为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型C的XRPD图示。
图8为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型C的DSC图示。
图9为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型C的TGA图示。
图10为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型D的XRPD图示。
图11为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型D的DSC图示。
图12为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型D的TGA图示。
图13为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型E的XRPD图示。
图14为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型E的DSC图示。
图15为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型E的TGA图示。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
一、化合物的制备
实施例
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用200～300目烟台黄海硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
实施例1
N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
第一步：2-氯-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈的制备
将2,4-二氯嘧啶-5-甲腈(2g,12mmol)溶于二氯乙烷(30mL)，冷却至0℃，加入三氯化铁(3.9g,24mmol)，反应在室温下搅拌半小时，加入1-环丙基-1H-吲哚(2.17g,14mmol)，反应在60℃下搅拌2小时。加入水(30mL)，过滤，滤液用二氯甲烷(30mL x 2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗品用柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯：100/1～3/1)纯化得到2-氯-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(1.6g,产率：47％)褐色固体。
第二步：4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈的制备
将2-氯-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(1g,3.4mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(0.7g,3.7mmol)和对甲苯磺酸(0.7g,3.7mmol)溶于2-戊醇(40mL)，反应在100℃下搅拌过夜。冷却至室温，加入水(50mL)，用二氯甲烷(50mL x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗品用柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯：100/1～1/1～二氯甲烷/乙酸乙酯：100/1～10/1)纯化得到4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈(1g,67％)褐色固体。
第三步：4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈的制备
将4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈(0.4g,0.9mmol)溶于乙腈(20mL)，加入碳酸钾(0.37g,2.7mmol)和N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(0.11g,1.1mmol)，反应在80℃下搅拌1小时。冷却至室温，反应液过滤，滤液旋干，得到粗品4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈(0.48g,产率：100％crude)黄色固体。
第四步：2-((5-氨基-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈的制备
将4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈(0.48g,0.97mmol)溶于乙醇(20mL)，加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和铁粉(0.54g,9.7mmol)，反应在80℃下搅拌2小时。冷却至室温，反应液过滤，滤液用二氯甲烷(20mL x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到2-((5-氨基-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(0.4g，产率：88％)黄色固体。
第五步：N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备
将2-((5-氨基-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(0.4g,0.8mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，冷却至0℃，加入三乙胺(0.12g,1.2mmol)，再加入3-氯丙酰氯化(0.12g,0.97mmol)，反应在0℃下搅拌1小时。加入3M氢氧化钠溶液(3mL)，反应在室温下搅拌1小时。加入水(30mL)，用二氯甲烷(30mL x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗品用prep-TLC分离(二氯甲烷/MeOH：20/1)纯化得到N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(0.15g，产率：34％)黄色固体。
MS m/z(ESI):551.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.08(s,1H),9.42(s,1H),8.68(s,1H),8.49-8.47(m,2H),7.76(s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.30-7.26(m,2H),6.81(s,1H),6.39(s,2H),5.69-5.67(m,1H),3.89(s,3H),3.48-3.44(m,1H),2.93-2.91(m,2H),2.73(s,3H),2.35-2.30(m,8H),1.17-1.11(m,4H).
实施例2
N-(5-((4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-5-(噁唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
实施例2的制备方法参照实施例1，具有合成路线如下：
MS m/z(ESI):593.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.65(s,1H),8.86(s,1H),8.14–7.98(m,1H),7.76(s,1H),7.57–7.44(m,2H),7.21–7.12(m,2H),7.02–6.94(m,1H),6.73(s,1H),6.47(d,J＝17.2Hz,1H),5.73(d,J＝11.7Hz,1H),5.40–5.22(m,1H),3.88(s,3H),3.43–3.36(m,1H),3.22–3.04(m,2H),2.88(s,2H),2.73(s,3H),2.70–2.35(m,6H),2.25–2.18(m,1H),2.05–1.96(m,1H),1.15–1.01(m,4H).
实施例6
N-(5-((5-氰基-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
第一步：3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚的制备
冰浴下，将吲哚(5.0g,54.86mmol)溶解于2-甲基四氢呋喃(50mL)，然后滴加甲基溴化镁(3.0M 2-甲基四氢呋喃溶液，18.3mL,54.86mmol)，维持内温在30℃以内，滴加结束后，室温搅拌30分钟。然后滴加2，4-二氯-5-溴嘧啶的2-甲基四氢呋喃溶液(5.0g,21.94mmol,10mL溶剂),滴加结束后，反应在室温下搅拌半小时，然后加热至70℃，反应14小时。冷却至室温，将反应液倒入到饱和氯化铵水溶液中，有固体析出，过滤得到固体。将得到的固体重新悬浮于水中，超声，过滤得到固体，干燥得到产物3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(4.0g,产率：59％，黄色固体)。
MS m/z(ESI):308.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.21(s,1H),8.86(s,1H),8.80(s,1H),8.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.55(d,J＝7.2Hz,1H),7.30-7.23(m,2H).
第二步：5-溴-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺的制备
将3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲哚(0.50g,1.62mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(0.33g,1.78mmol)和对甲苯磺酸(0.34g,1.78mmol)溶于2-戊醇(25mL)，100℃下反应14小时。冷却至室温，反应液用饱和碳酸氢钠溶液中和，室温下搅拌20分钟，过滤，滤饼用2-戊醇洗涤，最后用石油醚洗涤，滤饼干燥得到5-溴-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(0.40g,54％，土黄色固体)。
MS m/z(ESI):458.0，460.0[M+H]+.
第三步：N1-(5-溴-4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺的制备
将5-溴-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(0.40g,0.87mmol)溶于乙腈(20mL)，加入碳酸钾(0.36g,2.61mmol)和N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(0.10g,0.96mmol)，反应在80℃下搅拌两小时。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯稀释，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到N1-(5-溴-4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(0.40g,产率：87％，红色固体)。
MS m/z(ESI):540.2，542.2[M+H]+.
第四步：N1-(5-溴-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺的制备
室温下，将N1-(5-溴-4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(0.30g,0.56mmol)，碳酸铯(0.13g,0.72mmol)和3-碘-氧杂环丁环(0.36g,1.11mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(8mL),微波110℃反应1.5小时，冷却至室温。反应液用乙酸乙酯稀释，过滤，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用硅胶制备板分离(二氯甲烷：甲醇：20：1)得到N1-(5-溴-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(0.12g，产率：36％，红色固体)。
MS m/z(ESI):596.0[M+H]+.
第五步：2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈的制备
室温下，将N1-(5-溴-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(0.12g,0.20mmol)，Pd2(dba)3(18.4mg，0.02mmol)，X-Phos(19mg,0.04mmol)，氰化锌(23.5mg，0.20mmol)和锌粉(13mg，0.20mmol)溶解于N，N-二甲基乙酰胺(3mL)，置换氮气，微波110℃反应1.5小时。冷却至室温，过滤，固体用乙酸乙酯洗涤，有机相减压浓缩，粗产物用制备板分离(二氯甲烷：甲醇：20：1)得到2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(0.096g,产率：88％，黄色固体)。
MS m/z(ESI):543.1[M+H]+.
第六步：2-((5-氨基-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈的制备
将2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(0.12g,0.22mmol)溶于乙醇(10mL)，然后加入氯化铵水溶液(0.06g,1.1mmol,水，2mL)和铁粉(0.12g,2.2mmol)，反应在80℃下搅拌2小时。冷却至室温，反应液过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，减压去除有机溶剂，残留物用二氯甲烷和水溶解，分层，水相再用二氯甲烷(20mL x 2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到2-((5-氨基-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(0.095g，产率：83.8％，黄色油状物)。
MS m/z(ESI):513.2[M+H]+.
第七步：N-(5-((5-氰基-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备
将2-((5-氨基-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(0.075g,0.146mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，冷却至0℃，加入三乙胺(0.03g,0.292mmol)，再加入3-氯丙酰氯化(0.024g,0.19mmol)，反应在0℃下搅拌1小时。反应结束，旋干，粗产物用二氯甲烷溶解，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗产物用乙腈(5mL)溶解，然后加入氢氧化钠水溶液(0.058g,1.46mmol,水，0.5mL),40℃反应两小时。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯稀释，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗品用制备色谱纯化得到N-(5-((5-氰基-4-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(0.04g，产率：48％，黄色固体)。
MS m/z(ESI):567.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.15-9.82(br,1H),9.45(s,1H),8.69(s,2H),8.55-8.38(br,1H)7.80(s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.33-7.29(m,2H),6.78(s,1H),6.42-6.38(m,1H),5.72-5.66(m,2H),5.28-5.13(m,5H),3.90(s,3H),3.13-2.95(br,2H),2.74(s,3H),2.61-2.24(br,6H),1.85-1.53(m,2H).
实施例9
N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-6-甲氧基吡啶-3-基)丙烯酰胺
第一步：6-氯-2-甲氧基吡啶-3-胺的制备
将6-氯-2-甲氧基-3-硝基吡啶(5g,26.6mmol)溶于乙醇(100mL)和水(30mL)，加入氯化铵(7.0g,133mmol)，分批加入铁粉(7.5g,133mmol)，反应在85℃下搅拌2小时。反应液冷却至室温，通过硅藻土过滤，滤液加入乙酸乙酯(150mL)和饱和食盐水(120mL)，分出有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到6-氯-2-甲氧基吡啶-3-胺(4g,产率：95％)褐色固体。
MS m/z(ESI):159.1[M+H]+.
第二步：N-(6-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)乙酰胺的制备
将6-氯-2-甲氧基吡啶-3-胺(4.0g,25.0mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，加入二异丙基乙基胺(4.8g,37.5mmol)，冷却至0℃，加入乙酰氯(2.4g,30.0mmol)，继续搅拌2小时。反应液依次用80mL水,80mL 1N盐酸及80mL饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到N-(6-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)乙酰胺(4.0g,产率：79％)褐色固体。
MS m/z(ESI):201.1[M+H]+.
第三步：N-(6-氯-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)乙酰胺的制备
将6-氯-2-甲氧基吡啶-3-胺(2.0g,10.0mmol)溶于三氟乙酸酐(20mL)，冷却至-10℃，滴加发烟硝酸(0.5mL,10mmol)，继续搅拌2小时。向反应液加入碎冰，用二氯甲烷(50mL)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到N-(6-氯-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)乙酰胺(1.6g,产率：65％)褐色固体。
MS m/z(ESI):244.1[M-H]+.
第四步：N-(6-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)乙酰胺的制备
将N-(6-氯-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)乙酰胺(1.6g,6.5mmol)溶于乙腈(30mL)，加入N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(1g,9.8mmol)，反应在80℃下搅拌3小时。溶剂旋干，粗品用柱层析分离(二氯甲烷/甲醇：100/1～10/1)纯化得到N-(6-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)乙酰胺(0.9g,产率：45％)褐色固体。
MS m/z(ESI):312.1[M+H]+.
第五步：N2-(2-(二甲氨基)乙基)-6-甲氧基-N2-甲基-3-硝基吡啶-2,5-二胺的制备
将N-(6-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)乙酰胺(0.9g,2.9mmol)溶于甲醇(30mL)，浓盐酸(5mL)，反应在60℃下搅拌3小时。溶剂旋干，加入二氯甲烷(50mL)和饱和碳酸氢钠(50mL)，搅拌至无气泡析出，分出有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗品用柱层析分离(二氯甲烷/甲醇：100/1～10/1)纯化得到N2-(2-(二甲氨基)乙基)-6-甲氧基-N2-甲基-3-硝基吡啶-2,5-二胺(0.15g,产率：19％)褐色固体。
MS m/z(ESI):270.1[M+H]+.
第六步：4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((6-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲腈的制备
将N2-(2-(二甲氨基)乙基)-6-甲氧基-N2-甲基-3-硝基吡啶-2,5-二胺(0.11g,0.41mmol)，2-氯-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(0.12g,0.41mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.18g,0.2mmol)，x-phos(0.2g,0.41mmol)，叔丁醇钠(0.12g,1.2mmol)溶于二氧六环(5mL)，置换氮气，反应在140℃微波下搅拌1小时。冷却至室温，反应液过滤，滤液旋干，粗品用prep-TLC(二氯甲烷/甲醇：20/1)分离，得到4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈(0.1g,产率：47％)黄色固体。
MS m/z(ESI):528.1[M+H]+.
第七步：2-((5-氨基-6-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈的制备
将4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.15mmol)溶于甲醇(10mL)，0℃下加入雷尼镍(80mg)和85％水合肼(90mg,1.5mmol)，反应在室温搅拌2小时。反应液过滤，滤液旋干，加入水(15mL)，用二氯甲烷(15mL x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到2-((5-氨基-6-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(80mg,产率：100％crude)褐色固体。
MS m/z(ESI):498.1[M+H]+.
第八步：N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-6-甲氧基吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备
将2-((5-氨基-6-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基吡啶-3-基)氨基)-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.16mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，冷却至0℃，加入三乙胺(24mg,0.24mmol)，再加入3-氯丙酰氯(25mg,0.19mmol)，反应在0℃下搅拌1小时。加入水(10mL)，用二氯甲烷(10mL x2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，加入四氢呋喃(5mL)，加入氢氧化钠(64mg,1.6mmol)的水(0.5mL)溶液，反应在40℃下搅拌过夜。加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗品用prep-HPLC分离得到N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-6-甲氧基吡啶-3-基)丙烯酰胺(0.9mg，产率：0.7％)黄色固体。
MS m/z(ESI):552.1[M+H]+.
其他实施例的制备方法如下：
二、生物学测试评价
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
1.测试酶学实验
测试例1、本发明化合物对EGFR 20外显子插入突变激酶活性抑制作用的测定
实验目的：该测试例的目的是测量化合物对EGFR 20外显子插入突变激酶活性的抑制能力。
实验仪器：离心机(Eppendorf 5810R)，酶标仪(BioTek Synergy H1)，移液器(Eppendorf&Rainin)
实验方法：本实验采用TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)方法研究化合物对EGFR 20外显子插入突变激酶的抑制活性。本实验在384孔板中展开，配制实验缓冲液(50mMHEPES，1mM EGTA，10mM MgCl2，2mM DTT，0.01％Tween-20)，使用实验缓冲液将化合物梯度稀释为不同的浓度，每孔2.5μL加入到384孔板中，再加入2.5μL稀释好的EGFR激酶溶液(0.001-0.5nM)，室温孵育10分钟，加入5μL ULight-poly GT/ATP混合溶液，室温孵育30分钟到60分钟，加入5μL EDTA终止反应和5μL Eu标记抗体检测液，室温孵育1小时，酶标仪测定各板孔的665nm荧光信号值。
实验数据处理方法：
使用665nm处的荧光信号值计算抑制率((阳性对照孔值-样品孔值)/(阳性对照孔值-阴性对照孔值))*100％，并将浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC50值，具体数据如下表1所示：
表1化合物对EGFR 20外显子插入突变激酶抑制活性IC50
实验结论：
通过以上方案得出本发明的实施例化合物在EGFR 20外显子插入突变激酶活性抑制实验中具有较好的抑制作用。
测试例2、本发明化合物对EGFR野生型激酶活性抑制作用的测定
实验目的：该测试例的目的是测量化合物对EGFR野生型激酶活性的抑制能力。
实验仪器：离心机(Eppendorf 5810R)，酶标仪(BioTek Synergy H1)，移液器(Eppendorf&Rainin)
实验方法：本实验采用TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)方法研究化合物对EGFR野生型激酶的抑制活性。本实验在384孔板中展开，配制实验缓冲液(50mM HEPES，1mMEGTA，10mM MgCl2，2mM DTT，0.01％Tween-20)，使用实验缓冲液将化合物梯度稀释为不同的浓度，每孔2μL加入到384孔板中，再加入4μL稀释好的EGFR激酶溶液(0.001-0.5nM)，室温孵育10分钟，加入4μLULight-poly GT/ATP混合溶液，室温孵育30分钟到60分钟，加入5μLEDTA终止反应和5μL Eu标记抗体检测液，室温孵育1小时，酶标仪测定各板孔的665nm荧光信号值。
实验数据处理方法：
使用665nm处的荧光信号值计算抑制率((阳性对照孔值-样品孔值)/(阳性对照孔值-阴性对照孔值))*100％，并将浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC50值，具体数据如下表2所示：
表2化合物对EGFR野生型激酶抑制活性IC50
实验结论：
通过以上方案得出本发明的实施例化合物在EGFR野生型激酶抑制试验中抑制作用较小。
测试例3、本发明化合物对Ba/F3 EGFR突变细胞株和A431细胞株增殖抑制作用的测定
实验目的：该测试例的目的是测量化合物对Ba/F3 EGFR突变细胞株和A431细胞株增殖活性的抑制作用。
实验仪器：酶标仪(BioTek Synergy H1)，移液器(Eppendorf&Rainin)
实验方法：
培养Ba/F3 EGFR突变细胞至合适的密度时，收集细胞，使用完全培养基将细胞调整为合适的细胞浓度，将细胞悬液铺于96孔板，每孔90μL，放入37℃，5％CO2培养箱贴壁过夜，使用DMSO以及培养基配制不同浓度的化合物溶液，设置溶媒对照，将化合物溶液加入到96孔板中，每孔10μL，放入37℃，5％CO2培养箱中继续培养72h～144h后，加入CellTiter-Glo溶液，振荡混合均匀后，避光孵育10分钟，用BioTek Synergy H1酶标仪进行读数。
实验方法：
培养A431细胞至合适的密度时，收集细胞，使用完全培养基将细胞调整为合适的细胞浓度，将细胞悬液铺于96孔板，每孔90μL，放入37℃，5％CO2培养箱贴壁过夜，使用DMSO以及培养基配制不同浓度的化合物溶液，设置溶媒对照，将化合物溶液加入到96孔板中，每孔10μL，放入37℃，5％CO2培养箱中继续培养72h后，加入CellTiter-Glo溶液，振荡混合均匀后，避光孵育10分钟，用BioTek Synergy H1酶标仪进行读数。
实验数据处理方法：
使用发光信号值计算抑制率，将浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC50值，具体数据如下表3所示：
表3化合物对Ba/F3 EGFR突变细胞株和A431细胞株增殖抑制活性IC50
实验结论：
通过以上方案得出本发明的实施例化合物在Ba/F3 EGFR突变细胞增殖活性的抑制试验中具有良好的抑制作用，对A431细胞具有较差的抑制作用，对比数据可知，本发明系列实施例对Ba/F3 EGFR突变细胞增殖活性的抑制具有高选择性。
三、晶型研究
1.实验仪器
1.1物理化学检测仪器的一些参数
2.化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺不同晶型的制备
2.1晶型A的制备
将4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)-2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基)嘧啶-5-甲腈66.0g、四氢呋喃660mL加入到2L的三口瓶中；加入钯炭(6.6g)，N2液面下鼓泡半小时；氢气置换3次，加热到35～40℃反应20h-24h，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(100mL)，过滤完成N2保护滤液，降温至0-5℃，加入三乙胺(12.6g)；控温0-5℃，滴加3-氯丙酰氯(23.7g)的四氢呋喃(120mL)溶液，约45分钟滴加完毕；保持0-5℃温度下反应2～3小时，过滤，滤饼用四氢呋喃(100mL)洗涤，随后再用100ml正庚烷淋洗，得到N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)3-氯丙酰胺盐酸盐(98.9g，产率100％)。
将N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)3-氯丙酰胺盐酸盐50.0g、THF 420mL加入2L三口瓶，搅拌；滴加氢氧化钾42.0g水溶液42mL，约10min滴加完毕，保持室温搅拌30min；升温至35～40℃反应1h，原料反应完全；冷却到室温，加入水500mL，搅拌10分钟后静置分层，保留有机相，水相再用2-甲基四氢呋喃300mL萃取；合并有机相，依次用水200mL和饱和食盐水200mL洗涤；有机相中加入活性炭2.5g以及无水硫酸钠25g，室温(20±5℃)搅拌1h；过滤，滤液浓缩得黄色固体约70g，加入2-甲基四氢呋喃150mL，加热到80℃回流，加热搅拌1小时，自然冷却到室温；冰浴(0～5℃)冷却，继续搅拌1小时，过滤，滤饼用2-甲基四氢呋喃(50ml)洗涤，得到目标产物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A(24.0g，产率69.7％)，经检测分析，具有如图1所示XRPD图谱，如图2所示的DSC图谱，如图3所示的TGA图谱。
2.2晶型B的制备
称取10mg N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A，加入100μL甲苯溶剂，25℃打浆两周，离心，50℃真空干燥至恒重，得到N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型B，经检测分析。具有如图4所示XRPD图谱，如图5所示的DSC图谱，如图6所示的TGA图谱。
2.3晶型C的制备
称取10mg化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A，加入100μL1，4-二氧六环溶剂，25℃打浆两周，离心，50℃真空干燥至恒重，得到化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型C。经检测分析。具有如图7所示的XRPD图谱，如图8所示的DSC图谱，如图9所示的TGA图谱。
2.4晶型D的制备
称取10mg化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A，加入100μL甲酸乙酯溶剂，25℃打浆两周，离心，50℃真空干燥至恒重，得到化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型D。经检测分析，其有如下如图10所示的XRPD图、如图11所示的DSC图及如图12所示的TGA图。
2.5晶型E的制备
称取10mg化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A，加入100μL甲酸乙酯溶剂，50℃打浆一天，离心，50℃真空干燥至恒重，得到化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型E。经检测分析，其有如下如图13所示的XRPD图、如图14所示的DSC图及如图15所示的TGA图。
3.固体稳定性实验
3.1实验目的：
考察化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A在光照5000lx、高温60℃、高湿92.5％RH、高温高湿50℃75％RH条件下，化合物的物理化学稳定性，为化合物贮存提供依据。
3.2仪器和液相分析条件
3.2.1仪器与设备：
| 仪器名称 | 型号 |
| 分析天平 | Sartorius BSA224S-CW |
| 纯水机 | Milli-Q Plus，Millipore |
| 高效液相色谱仪 | Agilent1260 |
| 泵 | Agilent G1311B |
| 进样器 | G1329B |
| 柱温箱 | G1316A |
| 检测器 | G1315D |
3.2.2色谱条件：
3.3实验方案：
取化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺的晶型A约1mg，于光照5000lx、高温60℃、高湿92.5％RH、高温高湿50℃75％RH条件下，考察5天、10天，用HPLC，外标法测定含量，并采用色谱峰面积归一化法计算有关物质的变化。
3.4实验结果：
3.5实验结论：
以上数据表明，化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A在光照条件下较稳定，在高温60℃、高湿92.5％RH、高温高湿50℃75％RH条件下有降解，在后期贮藏过程中需要阴凉保存。
4.动态引湿性实验
4.1实验目的：
考察化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A在不同相对湿度条件下的引湿性，为化合物贮存提供依据。
4.2实验方案：
将化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A置于不同相对湿度的饱和水蒸气中，使化合物与水蒸气达到动态平衡，并计算平衡后化合物吸湿增重的百分数。
4.3实验结果及结论：
化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A在RH80％条件下吸湿增重约0.521％，略有引湿性。经0-95％相对湿度条件下吸湿与解吸湿循环2次，晶型A的XRPD谱图并未发生改变，即晶型未转变。
5.不同介质中溶解度实验
5.1实验目的：
比较化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A在pH1-8 USP缓冲液、人工模拟胃液(FaSSGF)、禁食人工模拟肠液(FaSSIF)、非禁食人工模拟肠液(FeSSIF)、禁食人工模拟结肠液(FaSSCoF)、非禁食人工模拟结肠液(FeSSCoF)以及纯水等媒介中溶解度大小，为可成药性评估提供依据。
5.2实验方案：
将化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A 1mg混悬到不同介质中24小时，用HPLC，外标法测定化合物37℃下的热力学溶解度。
5.3实验结果：
| 样品名称 | 晶型A溶解度(mg/mL) |
| pH1 | >1 |
| pH 2 | >1 |
| pH 3 | 0.02 |
| pH 4 | 0.01 |
| pH 5 | 0.01 |
| pH 6 | 0.00 |
| pH 7 | 0.00 |
| pH 8 | 0.00 |
| H<sub>2</sub>O | 0.00 |
| FaSSGF | >1 |
| FaSSIF | 0.16 |
| FeSSIF | >1 |
| FaSSCoF | 0.00 |
| FeSSCoF | 0.09 |
5.4实验结论：
对比化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A在不同介质中的溶解度，晶型A在酸性条件下溶解度较好。
6.热力学稳定实验
6.1实验目的：
通过多晶筛选，找到比较稳定的化合物化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型。
6.2实验方案：
选择有一定溶解度的有机溶剂、水，将不同晶型悬浮于溶剂体系中，25℃搅拌打浆2周或1天后，离心，弃掉上清液，固体在50℃条件真空干燥(-0.1Mpa)16小时后，测定固体的XRPD、DSC及TGA，并进行比较。
6.3实验结果：
6.4实验结论：
通过打浆，改变结晶溶剂、结晶方式共得到5种晶型，分别为化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A、晶型B、晶型C、晶型D、晶型E。通过对比不同晶型的DSC图谱，可以判断出化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶型A的热力学稳定性更好，且为无水合物。
7.大鼠药代动力学研究
7.1实验目的：
研究化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺自由碱晶型A的大鼠药代参数。
7.2实验仪器和试剂：
7.2.1仪器：
7.2.2试剂：
7.3实验动物：
| 动物种属 | 品系 | 年龄 | 性别 | 供应商 |
| 大鼠 | SD | 7周，体重200g | 雄性 | 昭衍(苏州)新药研究中心有限公司 |
7.4受试化合物：
化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺自由碱晶型A。
7.5实验方案：
将化合物N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺自由碱晶型A，用含0.5％的HPMC(羟丙基甲基纤维素)K4M(1％Tween80)的水溶液混悬均匀后，灌胃，大鼠给药，平行三只大鼠，给药剂量为30mg/kg，化合物的量全部折算成相同自由碱的量。
7.6实验结果：
表7.1大鼠药代实验结果
7.7实验结论：
从表中大鼠药代实验结果可以看出，30mg/kg剂量下，本发明化合物5N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺自由碱晶型A表现出良好的代谢性质。
Claims (10)
1.一种通式(I)所示化合物的晶型，
其中：
R1选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)NRaa(CH2)nRbb或-(CH2)nN＝S(O)RaaRbb；所述氨基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代；
优选地，R1选自氢、氘、卤素、氰基、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、5-6元杂芳基、-C(O)NRaa(CH2)nRbb或-(CH2)nN＝S(O)RaaRbb，所述C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基和5-6元杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基和C1-6卤代烷氧基中的一个或多个取代基取代；
更优选地，R1选自氢、氘、氰基、5-6元杂芳基、-C(O)NRaa(CH2)nRbb或-(CH2)nN＝S(O)RaaRbb，所述5-6元杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、C1-3烷基和C1-3氘代烷基中的一个或多个取代基取代；
最优选地，R1选自氢、氰基、噁唑基、吡唑基、
R2选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
优选氢、氘、卤素、氰基、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷基或3-6元杂环基；
更优选氢、氘、甲基、乙基、丙基、环丙基或氧杂环丁基；
最优选氢、甲基、环丙基或氧杂环丁基；
R3选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
优选氢、氘、卤素、氰基、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基或C1-3卤代烷氧基；
更优选氢、氘、氟、氯、溴、甲氧基或乙氧基；
最优选氢、氟或甲氧基；
Raa和Rbb各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；所述氨基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代；
优选地，Raa和Rbb各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基或5-10元杂芳基；所述氨基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基，任选地，进一步被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-10芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基取代；
x为0～4的整数；
优选地，x为0～2的整数；且
n为0～4的整数；优选为0～2的整数。
2.根据权利要求1所述化合物的晶型，其特征在于，具体化合物结构如下：
3.根据权利要求1或2所述化合物的晶型，其特征在于，化合物为N-(5-((5-氰基-4-(1-环丙基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺，其特征在于，所述晶型为晶型A、晶型B、晶型C、晶型D、晶型E，其中：
晶型A的X-射线粉末衍射图谱在2θ为7.1±0.2°处具有衍射峰；或者在14.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.9±0.2°处具有衍射峰；或者在22.7±0.2°处具有衍射峰；或者在20.4±0.2°处具有衍射峰；或者在22.3±0.2°处具有衍射峰；或者在13.4±0.2°处具有衍射峰；或者在12.9±0.2°处具有衍射峰；或者在17.5±0.2°处具有衍射峰；或者在20.8±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
优选地，晶型A的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为7.1±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中2处，更优选包含3处；任选的，进一步还可以包含2θ为22.7±0.2°、20.4±0.2°、22.3±0.2°、13.4±0.2°、12.9±0.2中的至少一处，优选包含其中2处、3处、4处或5处；
更优选地，晶型A的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为17.5±0.2°、20.8±0.2°、9.6±0.2°、22.0±0.2°、25.6±0.2°、14.9±0.2°、15.6±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
进一步优选地，晶型A的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为7.1±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°、22.7±0.2°、20.4±0.2°、22.3±0.2°、13.4±0.2°、12.9±0.2、17.5±0.2°、20.8±0.2°、9.6±0.2°、22.0±0.2°、25.6±0.2°、14.9±0.2°、15.6±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，晶型A的X-射线粉末衍射图谱如图1所示；
晶型B的X-射线粉末衍射图谱在2θ为6.5±0.2°处具有衍射峰；或者在20.7±0.2°处具有衍射峰；或者在20.9±0.2°处具有衍射峰；或者在21.0±0.2°处具有衍射峰；或者在21.4±0.2°处具有衍射峰；或者在15.6±0.2°处具有衍射峰；或者在23.8±0.2°处具有衍射峰；或者在21.6±0.2°处具有衍射峰；或者在9.2±0.2°处具有衍射峰；或者在25.1±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
优选地，晶型B的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为6.5±0.2°、20.7±0.2°、20.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含21.0±0.2°、21.4±0.2°、15.6±0.2°、23.8±0.2°、21.6±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
更优选地，晶型B的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为9.2±0.2°、25.1±0.2°、10.7±0.2°、12.4±0.2°、17.4±0.2°、17.6±0.2°、14.5±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
进一步优选地，晶型B的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为6.5±0.2°、20.7±0.2°、20.9±0.2°、21.0±0.2°、21.4±0.2°、15.6±0.2°、23.8±0.2°、21.6±0.2°、9.2±0.2°、25.1±0.2°、10.7±0.2°、12.4±0.2°、17.4±0.2°、17.6±0.2°、14.5±0.2°中的一处或多处具有衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处、10处有衍射峰；
最优选地，晶型B的X-射线粉末衍射图谱如图4所示；
晶型C的X-射线粉末衍射图谱在2θ为7.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.1±0.2°处具有衍射峰；或者在9.0±0.2°处具有衍射峰；或者在22.7±0.2°处具有衍射峰；或者在14.1±0.2°处具有衍射峰；或者在18.9±0.2°处具有衍射峰；或者在22.5±0.2°处具有衍射峰；或者在20.3±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在23.2±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
优选地，晶型C的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为7.1±0.2°、18.1±0.2°、9.0±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含22.7±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°、22.5±0.2°、20.3±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
更优选地，晶型C的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.2±0.2°、23.2±0.2°、23.1±0.2°、20.7±0.2°、22.0±0.2°、17.5±0.2°、12.9±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
进一步优选地，晶型C的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为7.1±0.2°、18.1±0.2°、9.0±0.2°、22.7±0.2°、14.1±0.2°、18.9±0.2°、22.5±0.2°、20.3±0.2°、22.2±0.2°、23.2±0.2°、23.1±0.2°、20.7±0.2°、22.0±0.2°、17.5±0.2°、12.9±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，晶型C的X-射线粉末衍射图谱如图7所示；
晶型D的X-射线粉末衍射图谱在2θ为26.2±0.2°处具有衍射峰；或者在22.2±0.2°处具有衍射峰；或者在10.6±0.2°处具有衍射峰；或者在14.5±0.2°处具有衍射峰；或者在21.3±0.2°处具有衍射峰；或者在15.9±0.2°处具有衍射峰；或者在7.0±0.2°处具有衍射峰；或者在9.0±0.2°处具有衍射峰；或者在19.0±0.2°处具有衍射峰；或者在8.3±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
优选地，晶型D的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为26.2±0.2°、22.2±0.2°、10.6±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含14.5±0.2°、21.3±0.2°、15.9±0.2°、7.0±0.2°、9.0±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
更优选地，晶型D的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为19.0±0.2°、8.3±0.2°、26.9±0.2°、18.1±0.2°、20.1±0.2°、21.8±0.2°、19.8±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
进一步优选地，晶型D的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为26.2±0.2°、22.2±0.2°、10.6±0.2°、14.5±0.2°、21.3±0.2°、15.9±0.2°、7.0±0.2°、9.0±0.2°、19.0±0.2°、8.3±0.2°、26.9±0.2°、18.1±0.2°、20.1±0.2°、21.8±0.2°、19.8±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，晶型D的X-射线粉末衍射图谱如图10所示；
晶型E的X-射线粉末衍射图谱在2θ为6.3±0.2°处具有衍射峰；或者在12.6±0.2°处具有衍射峰；或者在9.9±0.2°处具有衍射峰；或者在21.1±0.2°处具有衍射峰；或者在13.2±0.2°处具有衍射峰；或者在26.2±0.2°处具有衍射峰；或者在20.0±0.2°处具有衍射峰；或者在16.9±0.2°处具有衍射峰；或者在15.5±0.2°处具有衍射峰；或者在25.3±0.2°处具有衍射峰；优选包含上述衍射衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处；更优选包含其中任意6处、7处或8处；
优选地，晶型E的X-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为6.3±0.2°、12.6±0.2°、9.9±0.2°中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含21.1±0.2°、13.2±0.2°、26.2±0.2°、20.0±0.2°、16.9±0.2°中的至少一条；优选包含其中2条、3条、4条或5条；
更优选地，晶型E的X-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为15.5±0.2°、25.3±0.2°、27.4±0.2°中的一处或多出衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处；进一步优选，包含其中任意2处、3处；
进一步优选地，晶型E的X-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为6.3±0.2°、12.6±0.2°、9.9±0.2°、21.1±0.2°、13.2±0.2°、26.2±0.2°、20.0±0.2°、16.9±0.2°、15.5±0.2°、25.3±0.2°、27.4±0.2°中的一处或多处衍射峰；优选的，包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
最优选地，晶型E的X-射线粉末衍射图谱如图13所示。
4.根据权利要求3所述化合物的晶型，其特征在于，所述晶型A、晶型B、晶型C、晶型D、晶型E的X-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置分别与图1、图4、图7、图10和图13对应位置衍射峰的2θ误差为±0.2°～±0.5°，优先±0.2°～±0.3°，最优选±0.2°。
5.根据权利要求3所述化合物的晶型，其特征在于，所述晶型A具有如图2所示的DSC图谱；或者具有如图3所示的TGA图谱；所述晶型B具有如图5所示的DSC图谱；或者具有如图6所示的TGA图谱；所述晶型C具有如图8所示的DSC图谱；或者具有如图9所示的TGA图谱；所述晶型D具有如图11所示的DSC图谱；或者具有如图12所示的TGA图谱；所述晶型E具有如图14所示的DSC图谱；或者具有如图15所示的TGA图谱。
6.制备权利要求1-5任一项所述化合物的晶型的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱，用不良溶剂混悬；
2)将上步骤1)的混悬液在一定温度下振摇一定时间；
3)将步骤2)的混悬液快速离心，去除上清液，剩余固体干燥至恒重得到目标产物；
其中：
所述的不良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、乙醇、88％丙酮、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、甲基叔丁基醚、正庚烷、苯、甲苯、氯苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、叔丁醇、2-丁酮和3-戊酮中的一种或多种；优选甲苯、1,4-二氧六环、3-戊酮、乙酸乙酯、甲醇和甲酸乙酯中的一种或多种。
7.制备权利要求1-5任一项所述化合物晶型的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
1)称取适量的自由碱，用良溶剂溶解；
2)向以上所得溶液中加入反溶剂，搅拌至固体析出；
3)快速离心，去除上清液，剩余固体干燥至恒重；
其中：
所述的良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、乙醇、88％丙酮、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、苯、甲苯、氯苯、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、叔丁醇、2-丁酮和3-戊酮中的一种或多种；优选二氯甲烷、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基亚砜、乙腈和2-丁酮中的一种或多种；
所述的不良溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、甲苯、正庚烷、水、醋酸异丙酯、环己烷、甲基叔丁基醚和异丙醚中的一种或多种；优选水、正庚烷、环己烷和甲基叔丁基醚中的一种或多种。
8.一种药物组合物，其含有治疗有效量的权利要求1-5中任一项所述化合物的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
9.根据权利要求1-5任一项所述化合物的晶型，以及权利要求8所述的药物组合物在制备激酶抑制剂药物中的应用；优选地，激酶抑制剂为受体酪氨酸激酶抑制剂，更优选HER2抑制剂、EGFR抑制剂和EGFR单抗及其联用相关药物，进一步优选HER2 20外显子突变体抑制剂、EGFR20外显子突变体抑制剂和EGFR20外显子突变体单抗及其联用相关药物。
10.根据权利要求1-5任一项所述化合物的晶型，以及权利要求8所述的药物组合物在制备治疗癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS相关疾病药物中的应用，优选地，所述癌症、炎症、慢性肝病、糖尿病、心血管疾病和AIDS相关疾病是由HER2 20外显子突变和/或EGFR20外显子突变介导的疾病；更优选地，癌症选自乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、胃癌、直肠癌、胰腺癌、脑癌、肝癌、实体瘤、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小细胞肺癌。
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