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CN114450303B - Mhc ii类分子及其使用方法 - Google Patents

Mhc ii类分子及其使用方法

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CN114450303B
CN114450303B CN202080068237.7A CN202080068237A CN114450303B CN 114450303 B CN114450303 B CN 114450303B CN 202080068237 A CN202080068237 A CN 202080068237A CN 114450303 B CN114450303 B CN 114450303B
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中津川宗英
山下雪
穆罕默德·阿西克·拉赫曼
郭廷喜
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University Health Network
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Abstract

本公开涉及对CD4具有比天然存在的HLA II类分子更高的亲和力的HLA II类分子。在某些方面，所述HLA II类分子包含具有以下项的DPβ链：(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，或(iii)(i)和(ii)两者兼而有之。本公开的某些方面涉及编码所述HLA II类分子的核酸分子、包含所述核酸分子的载体、包含它们的细胞、及其使用方法。

Description

MHC II类分子及其使用方法
相关申请的交叉引用
本PCT申请要求于2019年7月30日提交的美国临时申请第62/880,496号和于2020年5月22日提交的美国临时申请第63/029,111号的优先权权益，它们各自通过引用以其整体并入本文。
通过EFS-WEB电子提交的序列表的引用
该电子提交的序列表(名称：4285.010PC02_SL_ST25.txt，大小：144,830字节；创建日期：2020年7月28日)的内容通过引用以其整体并入本文。
发明领域
本公开提供了对CD4具有增加的亲和力的主要组织相容性复合物(MHC)II类分子及其用途。
发明背景
免疫疗法已成为对抗包括癌症在内的多种疾病的关键工具。T细胞疗法处于免疫治疗发展的前沿，并且抗肿瘤T细胞的过继转移已被证明可诱导癌症患者的临床反应。
使用对由肿瘤细胞表达的靶表位有特异性的T细胞表达T细胞受体(TCR)进行的定向T细胞疗法是一种有前途的T细胞疗法形式。抗原呈递细胞在其表面展示与主要组织相容性复合物(MHC)相缔合的肽片段，以诱导免疫反应。已证明通过II类改善内源性肽的呈递与癌症患者的生存率改善相关。然而，开发能够特异性靶向MHC II类呈递肽的新的TCR受到MHC II类蛋白对由T细胞表达的CD4的低亲和力的阻碍。
本公开提供了对CD4具有增加的亲和力的MHC II类蛋白以及将其用于鉴定和开发新的MHC II类特异性TCR的方法。
发明内容
本公开的某些方面涉及包含DPβ链的HLA II类分子，其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸。
本公开的某些方面涉及包含DPβ链的HLA II类分子，其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的取代突变，其中所述取代突变是用除亮氨酸之外的氨基酸进行的取代。
在一些方面，DPβ链还包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。
本公开的某些方面涉及包含DPβ链的HLA II类分子，其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。
本公开的某些方面涉及包含DPβ链的HLA II类分子，其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的取代突变，其中所述取代突变是用除缬氨酸之外的氨基酸进行的取代。
在一些方面，DPβ链还包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸。
在一些方面，DPβ链包含与选自SEQ ID NO:1、3、4、和5的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，除亮氨酸之外的氨基酸包含疏水侧链。
在一些方面，除亮氨酸之外的氨基酸选自由以下组成的组：丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸。
在一些方面，除亮氨酸之外的氨基酸是色氨酸。
在一些方面，除缬氨酸之外的氨基酸包含疏水侧链。在一些方面，除缬氨酸之外的氨基酸选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸。在一些方面，除缬氨酸之外的氨基酸是甲硫氨酸。
在一些方面，DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，和在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸。
在一些方面，DPβ链包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。在一些方面，DPβ链包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
在一些方面，DPβ链选自DPB1*01、DPB1*02、DPB1*03、DPB1*04、DPB1*05、DPB1*06、DPB1*08、DPB1*09、DPB1*10、DPB1*100、DPB1*101、DPB1*102、DPB1*103、DPB1*104、DPB1*105、DPB1*106、DPB1*107、DPB1*108、DPB1*109、DPB1*11、DPB1*110、DPB1*111、DPB1*112、DPB1*113、DPB1*114、DPB1*115、DPB1*116、DPB1*117、DPB1*118、DPB1*119、DPB1*120、DPB1*121、DPB1*122、DPB1*123、DPB1*124、DPB1*125、DPB1*126、DPB1*127、DPB1*128、DPB1*129、DPB1*13、DPB1*130、DPB1*131、DPB1*132、DPB1*133、DPB1*134、DPB1*135、DPB1*136、DPB1*137、DPB1*138、DPB1*139、DPB1*14、DPB1*140、DPB1*141、DPB1*142、DPB1*143、DPB1*144、DPB1*145、DPB1*146、DPB1*147、DPB1*148、DPB1*149、DPB1*15、DPB1*150、DPB1*151、DPB1*152、DPB1*153、DPB1*154、DPB1*155、DPB1*156、DPB1*157、DPB1*158、DPB1*159、DPB1*16、DPB1*160、DPB1*161、DPB1*162、DPB1*163、DPB1*164、DPB1*165、DPB1*166、DPB1*167、DPB1*168、DPB1*169、DPB1*17、DPB1*170、DPB1*171、DPB1*172、DPB1*173、DPB1*174、DPB1*175、DPB1*176、DPB1*177、DPB1*178、DPB1*179、DPB1*18、DPB1*180、DPB1*181、DPB1*182、DPB1*183、DPB1*184、DPB1*185、DPB1*186、DPB1*187、DPB1*188、DPB1*189、DPB1*19、DPB1*190、DPB1*191、DPB1*192、DPB1*193、DPB1*194、DPB1*195、DPB1*196、DPB1*197、DPB1*198、DPB1*199、DPB1*20、DPB1*200、DPB1*201、DPB1*202、DPB1*203、DPB1*204、DPB1*205、DPB1*206、DPB1*207、DPB1*208、DPB1*209、DPB1*21、DPB1*210、DPB1*211、DPB1*212、DPB1*213、DPB1*214、DPB1*215、DPB1*216、DPB1*217、DPB1*218、DPB1*219、DPB1*22、DPB1*220、DPB1*221、DPB1*222、DPB1*223、DPB1*224、DPB1*225、DPB1*226、DPB1*227、DPB1*228、DPB1*229、DPB1*23、DPB1*230、DPB1*231、DPB1*232、DPB1*233、DPB1*234、DPB1*235、DPB1*236、DPB1*237、DPB1*238、DPB1*239、DPB1*24、DPB1*240、DPB1*241、DPB1*242、DPB1*243、DPB1*244、DPB1*245、DPB1*246、DPB1*247、DPB1*248、DPB1*249、DPB1*25、DPB1*250、DPB1*251、DPB1*252、DPB1*253、DPB1*254、DPB1*255、DPB1*256、DPB1*257、DPB1*258、DPB1*259、DPB1*26、DPB1*260、DPB1*261、DPB1*262、DPB1*263、DPB1*264、DPB1*265、DPB1*266、DPB1*267、DPB1*268、DPB1*269、DPB1*27、DPB1*270、DPB1*271、DPB1*272、DPB1*273、DPB1*274、DPB1*275、DPB1*276、DPB1*277、DPB1*278、DPB1*279、DPB1*28、DPB1*280、DPB1*281、DPB1*282、DPB1*283、DPB1*284、DPB1*285、DPB1*286、DPB1*287、DPB1*288、DPB1*289、DPB1*29、DPB1*290、DPB1*291、DPB1*292、DPB1*293、DPB1*294、DPB1*295、DPB1*296、DPB1*297、DPB1*298、DPB1*299、DPB1*30、DPB1*300、DPB1*301、DPB1*302、DPB1*303、DPB1*304、DPB1*305、DPB1*306、DPB1*307、DPB1*308、DPB1*309、DPB1*31、DPB1*310、DPB1*311、DPB1*312、DPB1*313、DPB1*314、DPB1*315、DPB1*316、DPB1*317、DPB1*318、DPB1*319、DPB1*32、DPB1*320、DPB1*321、DPB1*322、DPB1*323、DPB1*324、DPB1*325、DPB1*326、DPB1*327、DPB1*328、DPB1*329、DPB1*33、DPB1*330、DPB1*331、DPB1*332、DPB1*333、DPB1*334、DPB1*335、DPB1*336、DPB1*337、DPB1*338、DPB1*339、DPB1*34、DPB1*340、DPB1*341、DPB1*342、DPB1*343、DPB1*344、DPB1*345、DPB1*346、DPB1*347、DPB1*348、DPB1*349、DPB1*35、DPB1*350、DPB1*351、DPB1*352、DPB1*353、DPB1*354、DPB1*355、DPB1*356、DPB1*357、DPB1*358、DPB1*359、DPB1*36、DPB1*360、DPB1*361、DPB1*362、DPB1*363、DPB1*364、DPB1*365、DPB1*366、DPB1*367、DPB1*368、DPB1*369、DPB1*37、DPB1*370、DPB1*371、DPB1*372、DPB1*373、DPB1*374、DPB1*375、DPB1*376、DPB1*377、DPB1*378、DPB1*379、DPB1*38、DPB1*380、DPB1*381、DPB1*382、DPB1*383、DPB1*384、DPB1*385、DPB1*386、DPB1*387、DPB1*388、DPB1*389、DPB1*39、DPB1*390、DPB1*391、DPB1*392、DPB1*393、DPB1*394、DPB1*395、DPB1*396、DPB1*397、DPB1*398、DPB1*399、DPB1*40、DPB1*400、DPB1*401、DPB1*402、DPB1*403、DPB1*404、DPB1*405、DPB1*406、DPB1*407、DPB1*408、DPB1*409、DPB1*41、DPB1*410、DPB1*411、DPB1*412、DPB1*413、DPB1*414、DPB1*415、DPB1*416、DPB1*417、DPB1*418、DPB1*419、DPB1*420、DPB1*421、DPB1*422、DPB1*423、DPB1*424、DPB1*425、DPB1*426、DPB1*427、DPB1*428、DPB1*429、DPB1*430、DPB1*431、DPB1*432、DPB1*433、DPB1*434、DPB1*435、DPB1*436、DPB1*437、DPB1*438、DPB1*439、DPB1*44、DPB1*440、DPB1*441、DPB1*442、DPB1*443、DPB1*444、DPB1*445、DPB1*446、DPB1*447、DPB1*448、DPB1*449、DPB1*45、DPB1*450、DPB1*451、DPB1*452、DPB1*453、DPB1*454、DPB1*455、DPB1*456、DPB1*457、DPB1*458、DPB1*459、DPB1*46、DPB1*460、DPB1*461、DPB1*462、DPB1*463、DPB1*464、DPB1*465、DPB1*466、DPB1*467、DPB1*468、DPB1*469、DPB1*47、DPB1*470、DPB1*471、DPB1*472、DPB1*473、DPB1*474、DPB1*475、DPB1*476、DPB1*477、DPB1*478、DPB1*479、DPB1*48、DPB1*480、DPB1*481、DPB1*482、DPB1*483、DPB1*484、DPB1*485、DPB1*486、DPB1*487、DPB1*488、DPB1*489、DPB1*49、DPB1*490、DPB1*491、DPB1*492、DPB1*493、DPB1*494、DPB1*495、DPB1*496、DPB1*497、DPB1*498、DPB1*499、DPB1*50、DPB1*500、DPB1*501、DPB1*502、DPB1*503、DPB1*504、DPB1*505、DPB1*506、DPB1*507、DPB1*508、DPB1*509、DPB1*51、DPB1*510、DPB1*511、DPB1*512、DPB1*513、DPB1*514、DPB1*515、DPB1*516、DPB1*517、DPB1*518、DPB1*519、DPB1*52、DPB1*520、DPB1*521、DPB1*522、DPB1*523、DPB1*524、DPB1*525、DPB1*526、DPB1*527、DPB1*528、DPB1*529、DPB1*53、DPB1*530、DPB1*531、DPB1*532、DPB1*533、DPB1*534、DPB1*535、DPB1*536、DPB1*537、DPB1*538、DPB1*539、DPB1*54、DPB1*540、DPB1*541、DPB1*542、DPB1*543、DPB1*544、DPB1*545、DPB1*546、DPB1*547、DPB1*548、DPB1*549、DPB1*55、DPB1*550、DPB1*551、DPB1*552、DPB1*553、DPB1*554、DPB1*555、DPB1*556、DPB1*557、DPB1*558、DPB1*559、DPB1*56、DPB1*560、DPB1*561、DPB1*562、DPB1*563、DPB1*564、DPB1*565、DPB1*566、DPB1*567、DPB1*568、DPB1*569、DPB1*57、DPB1*570、DPB1*571、DPB1*572、DPB1*573、DPB1*574、DPB1*575、DPB1*576、DPB1*577、DPB1*578、DPB1*579、DPB1*58、DPB1*580、DPB1*581、DPB1*582、DPB1*583、DPB1*584、DPB1*585、DPB1*586、DPB1*587、DPB1*588、DPB1*589、DPB1*59、DPB1*590、DPB1*591、DPB1*592、DPB1*593、DPB1*594、DPB1*595、DPB1*596、DPB1*597、DPB1*598、DPB1*599、DPB1*60、DPB1*600、DPB1*601、DPB1*602、DPB1*603、DPB1*604、DPB1*605、DPB1*606、DPB1*607、DPB1*608、DPB1*609、DPB1*61、DPB1*610、DPB1*611、DPB1*612、DPB1*613、DPB1*614、DPB1*615、DPB1*616、DPB1*617、DPB1*618、DPB1*619、DPB1*62、DPB1*620、DPB1*621、DPB1*622、DPB1*623、DPB1*624、DPB1*625、DPB1*626、DPB1*627、DPB1*628、DPB1*629、DPB1*63、DPB1*630、DPB1*631、DPB1*632、DPB1*633、DPB1*634、DPB1*635、DPB1*636、DPB1*637、DPB1*638、DPB1*639、DPB1*64、DPB1*640、DPB1*641、DPB1*642、DPB1*643、DPB1*644、DPB1*645、DPB1*646、DPB1*647、DPB1*648、DPB1*649、DPB1*65、DPB1*650、DPB1*651、DPB1*652、DPB1*653、DPB1*654、DPB1*655、DPB1*656、DPB1*657、DPB1*658、DPB1*659、DPB1*66、DPB1*660、DPB1*661、DPB1*662、DPB1*663、DPB1*664、DPB1*665、DPB1*666、DPB1*667、DPB1*668、DPB1*669、DPB1*67、DPB1*670、DPB1*671、DPB1*672、DPB1*673、DPB1*674、DPB1*675、DPB1*676、DPB1*677、DPB1*678、DPB1*679、DPB1*68、DPB1*680、DPB1*681、DPB1*682、DPB1*683、DPB1*684、DPB1*685、DPB1*686、DPB1*687、DPB1*688、DPB1*689、DPB1*69、DPB1*690、DPB1*691、DPB1*692、DPB1*693、DPB1*694、DPB1*695、DPB1*696、DPB1*697、DPB1*698、DPB1*699、DPB1*70、DPB1*700、DPB1*701、DPB1*702、DPB1*703、DPB1*704、DPB1*705、DPB1*706、DPB1*707、DPB1*708、DPB1*709、DPB1*71、DPB1*710、DPB1*711、DPB1*712、DPB1*713、DPB1*714、DPB1*715、DPB1*716、DPB1*717、DPB1*718、DPB1*719、DPB1*72、DPB1*720、DPB1*721、DPB1*722、DPB1*723、DPB1*724、DPB1*725、DPB1*726、DPB1*727、DPB1*728、DPB1*729、DPB1*73、DPB1*730、DPB1*731、DPB1*732、DPB1*733、DPB1*734、DPB1*735、DPB1*736、DPB1*737、DPB1*738、DPB1*739、DPB1*74、DPB1*740、DPB1*741、DPB1*742、DPB1*743、DPB1*744、DPB1*745、DPB1*746、DPB1*747、DPB1*748、DPB1*749、DPB1*75、DPB1*750、DPB1*751、DPB1*752、DPB1*753、DPB1*754、DPB1*755、DPB1*756、DPB1*757、DPB1*758、DPB1*759、DPB1*76、DPB1*760、DPB1*761、DPB1*762、DPB1*763、DPB1*764、DPB1*765、DPB1*766、DPB1*767、DPB1*768、DPB1*769、DPB1*77、DPB1*770、DPB1*771、DPB1*772、DPB1*773、DPB1*774、DPB1*775、DPB1*776、DPB1*777、DPB1*778、DPB1*779、DPB1*78、DPB1*780、DPB1*781、DPB1*782、DPB1*783、DPB1*784、DPB1*785、DPB1*786、DPB1*787、DPB1*788、DPB1*789、DPB1*79、DPB1*790、DPB1*791、DPB1*792、DPB1*794、DPB1*795、DPB1*796、DPB1*797、DPB1*798、DPB1*799、DPB1*80、DPB1*800、DPB1*801、DPB1*802、DPB1*803、DPB1*804、DPB1*805、DPB1*806、DPB1*807、DPB1*808、DPB1*809、DPB1*81、DPB1*810、DPB1*811、DPB1*812、DPB1*813、DPB1*814、DPB1*815、DPB1*816、DPB1*817、DPB1*818、DPB1*819、DPB1*82、DPB1*820、DPB1*821、DPB1*822、DPB1*823、DPB1*824、DPB1*825、DPB1*826、DPB1*827、DPB1*828、DPB1*829、DPB1*83、DPB1*830、DPB1*831、DPB1*832、DPB1*833、DPB1*834、DPB1*835、DPB1*836、DPB1*837、DPB1*838、DPB1*839、DPB1*84、DPB1*840、DPB1*841、DPB1*842、DPB1*843、DPB1*844、DPB1*845、DPB1*846、DPB1*847、DPB1*848、DPB1*849、DPB1*85、DPB1*850、DPB1*851、DPB1*852、DPB1*853、DPB1*854、DPB1*855、DPB1*856、DPB1*857、DPB1*858、DPB1*859、DPB1*86、DPB1*860、DPB1*861、DPB1*862、DPB1*863、DPB1*864、DPB1*865、DPB1*866、DPB1*867、DPB1*868、DPB1*869、DPB1*87、DPB1*870、DPB1*871、DPB1*872、DPB1*873、DPB1*874、DPB1*875、DPB1*876、DPB1*877、DPB1*878、DPB1*879、DPB1*88、DPB1*880、DPB1*881、DPB1*882、DPB1*883、DPB1*884、DPB1*885、DPB1*886、DPB1*887、DPB1*888、DPB1*889、DPB1*89、DPB1*890、DPB1*891、DPB1*892、DPB1*893、DPB1*894、DPB1*895、DPB1*896、DPB1*897、DPB1*898、DPB1*899、DPB1*90、DPB1*900、DPB1*901、DPB1*902、DPB1*903、DPB1*904、DPB1*905、DPB1*906、DPB1*907、DPB1*908、DPB1*909、DPB1*91、DPB1*910、DPB1*911、DPB1*912、DPB1*913、DPB1*914、DPB1*915、DPB1*916、DPB1*917、DPB1*918、DPB1*919、DPB1*92、DPB1*920、DPB1*921、DPB1*922、DPB1*923、DPB1*924、DPB1*925、DPB1*926、DPB1*927、DPB1*928、DPB1*929、DPB1*93、DPB1*930、DPB1*931、DPB1*932、DPB1*933、DPB1*934、DPB1*935、DPB1*936、DPB1*937、DPB1*938、DPB1*939、DPB1*94、DPB1*940、DPB1*941、DPB1*942、DPB1*943、DPB1*944、DPB1*945、DPB1*946、DPB1*947、DPB1*948、DPB1*949、DPB1*95、DPB1*950、DPB1*951、DPB1*952、DPB1*953、DPB1*954、DPB1*955、DPB1*956、DPB1*957、DPB1*958、DPB1*959、DPB1*96、DPB1*960、DPB1*961、DPB1*962、DPB1*963、DPB1*964、DPB1*965、DPB1*97、DPB1*98、和DPB1*99。
在一些方面，DPβ链包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些方面，HLA II类分子还包含DPα链。在一些方面，DPα链选自DPA1*01:03:01:01、DPA1*01:03:01:02、DPA1*01:03:01:03、DPA1*01:03:01:04、DPA1*01:03:01:05、DPA1*01:03:01:06、DPA1*01:03:01:07、DPA1*01:03:01:08、DPA1*01:03:01:09、DPA1*01:03:01:10、DPA1*01:03:01:11、DPA1*01:03:01:12、DPA1*01:03:01:13、DPA1*01:03:01:14、DPA1*01:03:01:15、DPA1*01:03:01:16、DPA1*01:03:01:17、DPA1*01:03:01:18Q、DPA1*01:03:01:19、DPA1*01:03:01:20、DPA1*01:03:01:21、DPA1*01:03:01:22、DPA1*01:03:01:23、DPA1*01:03:02、DPA1*01:03:03、DPA1*01:03:04、DPA1*01:03:05、DPA1*01:03:06、DPA1*01:03:07、DPA1*01:03:08、DPA1*01:03:09、DPA1*01:04、DPA1*01:05、DPA1*01:06:01、DPA1*01:06:02、DPA1*01:07、DPA1*01:08、DPA1*01:09、DPA1*01:10、DPA1*01:11、DPA1*01:12、DPA1*01:13、DPA1*01:14、DPA1*01:15、DPA1*01:16、DPA1*01:17、DPA1*01:18、DPA1*01:19、DPA1*02:01:01:01、DPA1*02:01:01:02、DPA1*02:01:01:03、DPA1*02:01:01:04、DPA1*02:01:01:05、DPA1*02:01:01:06、DPA1*02:01:01:07、DPA1*02:01:01:08、DPA1*02:01:01:09、DPA1*02:01:01:10、DPA1*02:01:01:11、DPA1*02:01:02:01、DPA1*02:01:02:02、DPA1*02:01:03、DPA1*02:01:04、DPA1*02:01:05、DPA1*02:01:06、DPA1*02:01:07、DPA1*02:01:08:01、DPA1*02:01:08:02、DPA1*02:02:02:01、DPA1*02:02:02:02、DPA1*02:02:02:03、DPA1*02:02:02:04、DPA1*02:02:02:05、DPA1*02:02:03、DPA1*02:02:04、DPA1*02:02:05、DPA1*02:02:06、DPA1*02:03、DPA1*02:04、DPA1*02:05、DPA1*02:06、DPA1*02:07:01:01、DPA1*02:07:01:02、DPA1*02:07:01:03、DPA1*02:08、DPA1*02:09、DPA1*02:10、DPA1*02:11、DPA1*02:12、DPA1*02:13N、DPA1*02:14、DPA1*02:15、DPA1*02:16、DPA1*03:01:01:01、DPA1*03:01:01:02、DPA1*03:01:01:03、DPA1*03:01:01:04、DPA1*03:01:01:05、DPA1*03:01:02、DPA1*03:02、DPA1*03:03、DPA1*03:04、DPA1*04:01:01:01、DPA1*04:01:01:02、以及DPA1*04:01:01:03、DPA1*04:02。
在一些方面，DPα链包含与SEQ ID NO:6或8具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、具有至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，DPα链包含SEQ ID NO:6或8所示的氨基酸序列。
在一些方面，HLA II类分子是DP1、DP2、DP3、DP4、DP5、DP6、DP8或DP9等位基因。
在一些方面，所述DPβ链与参考HLA II类分子相比对CD4蛋白的亲和力增加，其中所述参考HLA II类分子包含的DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的亮氨酸和/或(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的缬氨酸。
在一些方面，增加的亲和力是至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、至少约50倍、至少约75倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约300倍、至少约400倍、至少约500倍、或至少约1000倍。
在一些方面，DPβ链与细胞的膜结合。在一些方面，DPβ链不与细胞的膜结合。在一些方面，DPβ链包含全长DPα链的胞外结构域。在一些方面，DPβ链不包含全长DPβ链的跨膜结构域。
在一些方面，DPα链与细胞的膜结合。在一些方面，DPα链不与细胞的膜结合。在一些方面，DPα链包含全长DPα链的胞外结构域。在一些方面，DPα链不包含全长DPα链的跨膜结构域。
在一些方面，DPβ链与惰性颗粒连接或缔合。在一些方面，惰性颗粒是珠。在一些方面，惰性颗粒是纳米粒子。在一些方面，纳米粒子选自聚乙二醇化氧化铁、壳聚糖、葡聚糖、明胶、藻酸盐、脂质体、淀粉、支化聚合物、碳基载体、聚乳酸、聚(氰基)丙烯酸酯、聚乙烯亚胺、嵌段共聚物、聚己内酯、SPIONS、USPIONS、Cd/Zn-硒化物或二氧化硅纳米粒子。在一些方面，纳米粒子是聚乙二醇化氧化铁纳米粒子。
在一些方面，DPβ链包含信号肽。在一些方面，DPα链包含信号肽。在一些方面，信号肽包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
本公开的某些方面涉及编码本文公开的DPβ链的核酸分子。在一些方面，所述核酸分子进一步编码本文公开的DPα链。
在一些方面，所述核酸分子包含与SEQ ID NO:2具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％的序列同一性的核苷酸序列。
本公开的某些方面涉及包含本文公开的核酸分子的载体。
本公开的某些方面涉及包含本文公开的HLA II类分子、本文公开的核酸分子、或本文公开的载体的细胞。在一些方面，细胞是哺乳动物细胞或昆虫细胞。在一些方面，细胞选自K562细胞、T2、HEK293、HEK293T、A375、SK-MEL-28、Me275、COS、成纤维细胞、肿瘤细胞或其任何组合。
在一些方面，细胞缺乏内源性MHC II类DPβ链表达。在一些方面，细胞缺乏内源性MHC II类DPα链表达。
本公开的某些方面涉及鉴定能够结合MHC II类复合物中的表位的T细胞受体的方法，所述方法包括用一种或多种包含所述表位的肽冲击本文公开的细胞，并用APC刺激一个或多个CD4+T细胞。
本公开的某些方面涉及治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，所述方法包括向受试者施用本文公开的MHC II类分子。在一些方面，疾病或病状是癌症或感染。
在一些方面，癌症选自由以下组成的组：黑素瘤、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、胃癌、子宫癌、肺癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、食道癌、小肠癌、尿道癌、慢性或急性白血病、急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、神经胶质瘤、鳞状细胞癌以及所述癌症的组合。
在一些方面，癌症是复发性的或难治性的。在一些方面，癌症是局部晚期的。在一些方面，癌症是晚期的。在一些方面，癌症是转移性的。
在一些方面，HLA II类分子以小于约100μM的KD结合CD4。在一些方面，HLA II类分子以小于约10μM的KD结合CD4。在一些方面，HLA II类分子以约8.9μM或更小的KD结合CD4。
本公开的某些方面涉及包含本文公开的HLA II类分子和肽的复合物，其中所述肽包含选自由SEQ ID NO:32-237组成的组的氨基酸序列。
附图说明
图1A至图1V是说明亲和力成熟的DP4L112W/V141M分子展现出增强的CD4结合能力的数据的图形表示。图1A至图1F是直方图，显示了用空白、野生型或含有L112W、V114M、V141M和M158I取代(DP4L112W/V114M/V141M/M158I)的突变型DPβ链(DPB1*04:01)转导并用抗II类mAb和可溶性CD4(sCD4)染色的稳定表达野生型DPα链(DPA1*01:03)的HLA II类-空K562细胞的结果。图1G是总结了所有可能的DP4回复突变体对sCD4的结合亲和力(MFI；y轴)的条形图，这些突变体与图1A至图1F类似地表达并用sCD4染色。如通过稳态分析所量化的，图1H显示了DP4L112W/V141M和CD4之间的亲和力。图1I显示了由用分级浓度的DP4/WT1肽冲击的表达野生型DP4或DP4L112W/V141M的aAPC刺激的DP4/WT1 TCR克隆9转导的Jurkat 76和Jurkat 76/CD4细胞的IL-2EPISPOT测定的结果。图1J至图1W是表示用抗II类mAb和sCD4染色的表达DPL112W/V141M等位基因(如所示)的K562细胞的直方图。开放直方图代表同型对照染色。*P<0.05，通过学生t检验得到。条形和误差条代表一式三份实验结果的平均值±SD。进行至少2次独立实验。图1X至图1AA是直方图，显示了K562细胞表面上的用指示的抗HLA II类抗体检测到的野生型DP4和DP4L112W/V141M分子。没有II类表达的对照细胞的染色显示为实心灰色。图1AB至图1BH是直方图，显示了指示浓度的表达指示DP4的aAPC或用sCD4染色的II类亲本细胞。图1BI显示了指示浓度的表达野生型DP4或DP4L112W/V141M的aAPC的定量。误差条代表一式三份进行的实验的平均值±标准偏差。图1BJ是生物层干涉传感图，显示了在一定浓度范围内的生物素化的野生型DP4(配体)与sCD4(分析物)的相互作用。图1BK是生物层干涉传感图，显示了在一定浓度范围内的生物素化的DP4L112W/V141M(配体)与sCD4(分析物)的相互作用。图1BJ和1BI中的实验平行进行。所有数据代表两次独立实验。
图2A至图2D是DP4L112W/V141M和人CD4复合物的模型结构的带状图。图2A至图2B是DPA1*01:03、DPB1*04:01和CD4的三元复合物模型结构的两个方向，如所示的。DPB1*04:01-CD4结合界面围上了虚线方框(图2B)。图2C至图2D提供了野生型DP4(图2C)和DP4L112W/V141M(图2D)的CD4结合界面的特写视图。相互作用残基的侧链显示为球棍表示(图2C至图2D)。
图3A至图3P是说明DP4L112W/V141M二聚体染色在人原代CD4+T细胞中表达的同源TCR的数据的图形表示。用DP4/MAGE-A3243-258(R12C9；图3E至图3H)、DP4/WT1328-348(克隆9；图3I至图3L)或DP4/NY-ESO-1157-170(5B8；图3M至图3P)TCR转导原代T细胞并用指示的DP4L112W /V141M二聚体染色(图3B至图3D、图3F至图3H、图3J至图3L和图3N至图3P)。
图4A至图4D是说明了用DP4L112W/V141M二聚体和抗Vβ22 mAb染色的R12C9转导CD4+T细胞的复合染色的散点图。注意，R12C9表示Vβ22。图4E至图4H是说明了用DP4L112W/V141M二聚体和抗NGFR mAb双重染色的克隆9转导的CD4+T细胞的复合染色的散点图。注意，克隆9和ΔNGFR基因与P2A融合。
图5A至图5P是说明了用5μg/ml常规野生型DP4四聚体和DP4L112W/V141M二聚体染色的克隆9转导(图5A至图5H)和5B8转导(图5I至图5P)的原代T细胞的复合染色的散点图。进行至少2次独立实验。
图6A至图6F是说明了用DP4L112W/V141M二聚体进行全面筛选的结果的条形图，其鉴定了一系列新的DP4限制性肿瘤相关抗原。从6个DP4+黑素瘤患者中纯化外周CD4+T细胞，并用分别以来源于肿瘤相关抗原的196种不同肽冲击的表达DP4的aAPC刺激，并用同源DP4L112W /V141M二聚体染色。使用具有最高阳性值的30种肽的结果显示在图6A至图6B中。剩余的166种肽的结果显示在图6C至图6F中。设置每个门以使对照二聚体染色显示<0.2％阳性。阳性二聚体染色定义为染色超过对照二聚体染色3个标准偏差，如虚线所示(>0.6％)。
图7A至图7L是来自黑素瘤患者的肽特异性CD4+T细胞的DP4L112W/V141M二聚体染色的图形表示。从6个DP4+黑素瘤患者中纯化原代CD4+T细胞，并用分别以来源于肿瘤相关抗原的196种不同肽冲击的表达DP4的aAPC刺激，并用同源DP4L112W/V141M二聚体染色，如图6A至图6F所示。显示了DP4L112W/V141M二聚体染色的示例。*P<0.05，通过学生t检验得到。n.s.，不显著。进行至少2次独立实验。
图8A至图8X是数据的图形表示，说明从DP4L112W/V141M二聚体阳性细胞中分离并在人TCR缺陷型CD4+T细胞中重构的DP4限制性TCR以DP4限制性和抗原特异性方式起作用。03-CCND1219-238(图8A至图8D)、05-HSD17B12225-244和09-HSD17B12225-244(图8E至图8J)、05-LGSN296-315(图8K至图8N)、03-MAGE-A2108-127和06-MAGE-A2108-127(图8O至图8T)和05-MUC5AC4922-4941(图8U至图8X)从DP4L112W/V141M二聚体阳性细胞克隆，在TCR缺陷型Jurkat76/CD4细胞中重构，并用相应的DP4L112W/V141M二聚体染色。
图9A至图9G是条形图，说明在IL-2ELISPOT测定中由用相应肽冲击的aAPC刺激的03-CCND1219-238(图9A)、05-HSD17B12225-244(图9B)、09-HSD17B12225-244(图9C)、05-LGSN296-315(图9D)、03-MAGE-A2108-127(图9E)、06-MAGE-A2108-127(图9F)和05-MUC5AC4922-4941(图9G)的IL-2EPISPOT测定的结果。DP4/WT1(克隆9)TCR用作阴性对照。进行至少2次独立实验。*,P<0.05，通过学生t检验得到。条形和误差条代表一式三份实验结果的平均值±SD。
图10A至图10Q是数据的图形表示，显示从DP4L112W/V141M二聚体阳性细胞中分离并在人原代CD4+T细胞中重构的DP4限制性TCR以DP4限制性和抗原特异性方式起作用。03-CCND1219-238(图10A至图10D和图10O)、03-MAGE-A2108-127和06-MAGE-A2108-127(图10E至图10J和图10P)和05-MUC5AC4922-4941(图10K至图10N和图10Q)被逆转录病毒转导到人原代CD4+T细胞中并用相应的DP4L112W/V141M二聚体染色(图10A至图10N)。*P<0.05，通过学生t检验得到。n.s.，不显著。进行至少2次独立实验。*,P<0.05，通过学生t检验得到。条形和误差条代表一式三份实验结果的平均值±SD。
图11A至图11E呈现的数据显示从黑素瘤患者克隆的DP4限制性TCR识别由基于K562的aAPC内源加工和呈递的肽。图11A至图11B是显示了在K562来源的aAPC细胞中内源性表达的CCDN1(图11A)和MAGE-A2(图11B)的凝胶色谱的图像。图11C至图11D是显示了用03-CCND1219-238(图11C)或06-MAGE-A2108-127(图11D)逆转录病毒转导并用未进行肽冲击的HLA-空或DP4-aAPC刺激的人原代T细胞的IFN-γELISPOT测定的结果的条形图(图11C至图11D)。图11E是显示了用05-MUC5AC4922-4941 TCR逆转录病毒转导并用MUC5AC4914-4949小基因转导和未进行肽冲击的HLA-空或DP4-aAPC刺激的人原代T细胞的IFN-γELISPOT测定的结果的条形图。进行至少2次独立实验。*,P<0.05，通过学生t检验得到。条形和误差条代表一式三份实验结果的平均值±SD。
图12A至图12E呈现的数据显示06-MAGE-A2108-127 TCR以DP4和MAGE-A2依赖性方式识别黑素瘤细胞系。图12A是显示K562细胞和所示黑素瘤细胞系中内源性MAGE-A2表达的western印迹图像。图12B至图12E是条形图，显示来自用SK-MEL-21(DP4+MAGE-A2-；图12B)或SK-MEL-37(DP4+MAGE-A2+；图12C)刺激的用06-MAGE-A2108-127 TCR转导的原代人T细胞以及用SK-MEL-28(DP4-MAGE-A2+；图12D)和Me275(DP4-MAGE-A2+；图12E)刺激用DP4转导的情况的IFN-γELISPOT测定的数据。*,P<0.05，通过学生t检验得到。条形和误差条代表一式三份实验结果的平均值±SD。进行至少2次独立实验。
图13A至图13Q是比较用抗HLA II类mAb克隆9-49染色的K562细胞中野生型HLADP*04:01及其衍生物的表达水平的直方图。开放直方图代表同型对照染色。图14A至图14D是显示比较DP4L112W/V141M二聚体和dextramer对内源性TRPC1578-597特异性CD4+T细胞染色的数据的图形表示。通过用肽冲击的和经辐照的DP4+人工APC刺激从黑素瘤患者中扩增内源性(非转导)TRPC1578-597特异性CD4+T细胞并用DP4L112W/V141M TRPC1578-597二聚体(图14B)或TRPC1578-597dextramer(14D)染色。对应的CLIP多聚体用作对照(图14A和图14C)。
图15A至图15F是显示比较DP4L112W/V141M二聚体与常规DP4四聚体和dextramer对内源性NY-ESO-1157-170特异性T细胞染色的数据的图形表示。CD4+T细胞从4号DP4+健康供体中纯化，并用NY-ESO-1157-170脉冲的和辐照的DP4+人工APC刺激一次。如由三种不同的DP4多聚体(DP4L112W/V141M二聚体(图15B)、DP4四聚体(15D)或DP4 dextramer(FIG.15F))所示，分别对扩增的CD4+T细胞进行染色。
图16A至图16Y是显示经历了用DP4L112W/V141M二聚体进行的离体染色的病原体特异性CD4+T细胞的数据的图形表示。从五个DP4+供体中纯化记忆CD4+T细胞，并在没有体外刺激的情况下针对以下病原体相关肽用DP4L112W/V141M二聚体进行离体染色：TT948-968(图16F至图16J)、HSV-2-UL21283-302(图16K至图16O)、Flu-HA527-546(图16P至图16T)和RSV-GP162-175(图16U至图16Y)。CLIP肽用作阴性对照(图16A至图16E)。
图17A至图17W是显示从DP4L112W/V141M二聚体+细胞成功建立的内源性RSV-GP162-175特异性CD4+T细胞克隆的数据的图形表示。从06号DP4+供体中纯化记忆CD4+T细胞，并在没有体外刺激的情况下用DP4L112W/V141M RSV-GP162-175二聚体进行离体染色。然后通过有限稀释克隆二聚体+CD4+T细胞。图17A至图17V是10个二聚体阳性和1个二聚体阴性单细胞克隆的代表性二聚体染色数据的图形表示。84个克隆中的77个(91.7％)成功地用DP4L112W/V141MRSV-GP162-175二聚体染色。图17W是显示了RSV-GP162-175二聚体+单细胞克隆中的抗原特异性IL-2产生的条形图。
图18A至图18S是显示从DP4L112W/V141M二聚体+细胞成功建立的内源性DP4 TT948-968特异性CD4+T细胞克隆的数据的图形表示。从04号DP4+供体中纯化记忆CD4+T细胞，并在没有体外刺激的情况下用DP4L112W/V141M TT948-968二聚体进行离体染色。然后通过有限稀释克隆二聚体+CD4+T细胞。图18A至图18R是8个二聚体阳性和1个二聚体阴性单细胞克隆的代表性二聚体染色数据的图形表示。29个克隆中的26个(89.7％)成功地用DP4L112W/V141M TT948-968二聚体染色。图18S是显示TT948-968二聚体+单细胞克隆中的抗原特异性IL-2产生的条形图。
图19A至图19NN是RSV-GP(图19A至图19P)和TT(图19Q至图19NN)二聚体+单细胞克隆的DP4多聚体染色的图形表示。将RSV-GP二聚体+单细胞克隆(c6、c12、c26和c39)用DP4L112W/V141M RSV-GP162-175二聚体(图19B、图19D、图19F和图19H)或野生型DP4 dextramer(图19J、图19L、图19N和图19P)染色。将TT二聚体+单细胞克隆(c2、c4、c6和c9)分别用三种不同的DP4 TT948-968多聚体(DP4L112W/V141M二聚体(图19R、图19T、图19V和图19X)、野生型DP4四聚体(图19Z、图19BB、图19DD和图19FF)和野生型DP4 dextramer(图19HH、图19JJ、图19LL和图19NN))染色。
具体实施方式
本公开涉及对CD4具有增加的亲和力的MHC II类分子。在一些方面，本公开涉及包含HLA-DP(DP)β链的MHC II类分子，其中所述DPβ链对CD4具有增加的亲和力。
本公开进一步涉及包含DPβ链的MHC II类分子，其中所述DPβ链包含在对应于SEQID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸。在一些方面，DPβ链还包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。
本公开进一步涉及包含DPβ链的MHC II类分子，其中所述DPβ链包含在对应于SEQID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。在一些方面，DPβ链还包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸。
I.术语
为使本公开可更易于被理解，首先定义某些术语。如本申请中所使用的，除非本文另有明确规定，否则以下术语中的每一个应具有下文所述的含义。另外的定义在整个申请中阐述。
应注意术语“一个(种)(a/an)”实体是指一个(种)或多个(种)所述实体；例如”一个(种)核苷酸序列”应理解为表示一个(种)或多个(种)核苷酸序列。因此，术语“一个(种)”、“一个(种)或多个(种)”和“至少一个(种)”在本文中可互换使用。
此外，当在本文中使用时，“和/或”应视为特定公开两个指定特征或组分中的每一者，伴有或不伴有另一者。因此，本文在短语中使用的术语“和/或”诸如“A和/或B”意为包括：“A和B”；“A或B”；“A”(单独)；和“B”(单独)。类似地，在短语中使用的术语“和/或”诸如“A、B和/或C”意图涵盖以下方面中的每一者：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
术语“约”在本文中用于意指近似、大致、约或在……左右。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过使边界延伸高于和低于数值来修饰范围。一般来说，术语“约”在本文中用于以高于和低于值10％上下(升高或降低)的变化来修饰数值。
应了解，每当在本文中以措辞“包含”描述各个方面的情况下，还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的另外类似方面。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科技术语具有与本公开相关领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；Dictionary of Cell andMolecular Biology,第3版,1999,Academic Press；和Oxford Dictionary OfBiochemistry And Molecular Biology,修订板,2000,Oxford University Press，给普通技术人员提供本公开中使用的许多术语的通用字典。
单位、前缀和符号以其Système International de Unites(SI)可接受的形式表示。数值范围包括界定范围的数值。除非另外指示，否则核苷酸序列以5'至3'定向从左至右书写。氨基酸序列以氨基至羧基定向从左至右书写。本文提供的标题并非是对本公开的各个方面的限制，所述各个方面可通过参考说明书整体而得到。因此，通过参考说明书整体，以下紧接着定义的术语得到更充分定义。
“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任一种将剂以物理方式引入受试者。用于本文公开的配制品的示例性施用途径包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内、脊髓或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外施用”意指除肠内和局部施用之外的施用方式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外以及胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。在一些方面，配制品通过非肠胃外途径施用，例如口服。其他非肠胃外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、阴道、直肠、舌下或局部。施用还可以例如进行一次、多次和/或经一个或多个延长的时间段。
如本文所用，术语“HLA”是指人白细胞抗原。在人中，HLA基因编码主要组织相容性复合物(MHC)蛋白。MHC蛋白在细胞的表面上表达，并参与免疫反应的激活。HLA II类基因编码在专职抗原呈递细胞(APC)的表面上表达的MHC II类蛋白。专职APC的非限制性示例包括单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)和B淋巴细胞。一些内皮细胞和上皮细胞在炎症信号被激活后也表达MHC II类分子。缺乏功能性MHC II类分子的人极易感染一系列感染性疾病，并且典型地在年轻时死亡。
如本文所用，“HLA II类分子”或“MHC II类分子”是指编码MHC II类分子的野生型或变体HLA II类基因的蛋白质产物。因此，“HLA II类分子”和“MHC II类分子”在本文中可互换使用。典型的MHC II类分子包含两条蛋白质链：α链和β链。一般来说，天然存在的α链和β链各自包含将α/β链锚定到细胞表面的跨膜结构域，以及携带抗原并与细胞上表达的TCR和/或CD4相互作用的胞外结构域。
MHC II类α和β链两者均由HLA基因复合物编码。HLA复合物位于人6号染色体短臂的6p21.3区域内，并包含多于220个具有不同功能的基因。本领域已知，HLA基因复合物高度变异，具有超过20,000个HLA等位基因和相关等位基因，包括超过250个MHC II类α链等位基因和5,000个MHC II类β链等位基因，编码数千种MHC II类蛋白(参见，例如，hla.alleles.org，上次访问时间为2019年5月20日，通过引用以其整体并入本文)。例如，一种这样的HLA-DP等位基因，DP4，是许多种族群体中最常见的等位基因。各α链和β链通常表达为原蛋白，其还包含被切割掉的信号肽。任何数量的天然存在的信号肽都可用于促进本文公开的α链和β链的表达和定位。一种此类示例是SEQ ID NO:9。
HLA复合物中的三个基因座编码MHC II类蛋白：HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR。HLA-DO和HLA-DM编码与MHC II类分子缔合的蛋白质并支持其构型和功能。表1中提供了代表性的HLA-DP序列。
表1：DPβ链和α链氨基酸和核苷酸序列。
当MHC II类分子与抗原肽复合时，10-30个氨基酸长的抗原肽结合肽结合槽并在细胞外被呈递给CD4+细胞。α链和β链两者都折叠成两个独立的结构域；α多肽的α-1和α-2，以及β多肽的β-1和β-2。被CD4识别和结合的在L112、V114、V141、L156和M158处的不变残基位于β多肽的β-2结构域中。在α-1和β-1结构域之间发现了保持呈递抗原的开放式肽结合槽。在与CD4+T细胞相互作用时，MHC II类复合物与在T细胞表面上表达的T细胞受体(TCR)相互作用。此外，MHC II类分子的β链与T细胞表面上表达的CD4弱相互作用(KD>2mM)。典范CD4氨基酸序列(UniProt-P01730)提供于表2中(SEQ ID NO:10)。
表2：人CD4氨基酸序列
如本文所用，术语“T细胞受体”(TCR)是指能够与靶抗原特异性相互作用的异聚细胞表面受体。如本文所用，“TCR”包括但不限于天然存在的和非天然存在的TCR、全长TCR及其抗原结合部分、嵌合TCR、TCR融合构建体、和合成TCR。在人中，TCR在T细胞的表面上表达，并且它们负责T细胞识别和抗原呈递细胞的靶向。抗原呈递细胞(APC)展示与主要组织相容性复合物(MHC I类或MHC II类)复合(本文也称为与HLA分子(例如HLA II类分子)复合)的外来蛋白(抗原)片段。TCR识别并结合肽:HLA复合物并募集由T细胞表达的CD8(对于MHC I类分子)或CD4(对于MHC II类分子)，从而激活TCR。激活的TCR启动下游信号传导和免疫反应，包括APC的破坏。
通常，TCR可以包含两条链，α链和β链(或不太常见地γ链和δ链)，它们通过二硫键相互连接。每条链都包含可变区(α链可变结构域和β链可变结构域)和恒定区(α链恒定区和β链恒定区)。可变结构域位于细胞膜远侧，并且可变结构域与抗原相互作用。恒定区位于细胞膜近侧。TCR还可以包含跨膜区和短的细胞质尾。如本文所用，术语“恒定区”包括跨膜区和细胞质尾以及(当存在时)传统的“恒定区”。
可变结构域可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其中散布着更保守的区域，称为框架区(FR)。每个α链可变结构域和β链可变结构域包含三个CDR和四个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。每个可变结构域都包含与抗原相互作用的结合结构域。虽然每条链上的所有三个CDR都参与抗原结合，但CDR3被认为是主要的抗原结合区，而CDR1和CDR2被认为主要识别HLA分子。
在没有明确说明的情况下，除非上下文另有指示，否则术语“TCR”还包括本文公开的任何TCR的抗原结合片段或抗原结合部分，并且包括单价和二价片段或部分，以及单链TCR。术语“TCR”不限于与T细胞的表面结合的天然存在的TCR。如本文所用，术语“TCR”进一步指本文所述的在除T细胞之外的细胞(例如，如本文所述天然表达或经修饰以表达CD4的细胞)的表面上表达的TCR或本文所述的不含细胞膜的TCR(例如，分离的TCR或可溶性TCR)。
“抗原结合分子”、“TCR的部分”或“TCR片段”是指TCR的小于整体的任何部分。抗原结合分子可以包括抗原性CDR。
“抗原”是指任何分子，例如肽，其引起免疫反应或能够被TCR结合。如本文所用，“表位”是指引起免疫反应或能够被TCR结合的多肽的一部分。免疫反应可能涉及抗体的产生或特定免疫活性细胞的激活，或两者兼而有之。本领域技术人员将容易理解任何大分子(包括几乎所有的蛋白质或肽)都可以用作抗原。抗原和/或表位可以内源表达，即通过基因组DNA表达，或者可以重组表达。抗原和/或表位可以特异于特定组织，如癌细胞，或者它可以被广泛表达。此外，较大分子的片段可以充当抗原。在一方面，抗原是肿瘤抗原。表位可以存在于较长多肽中(例如，蛋白质中)，或者表位可以作为较长多肽的片段存在。在一些方面，表位与主要组织相容性复合物(MHC)复合(在本文中也称为与HLA分子(例如HLA 1类分子)复合)。
术语“自体”是指来源于同一个体的任何材料，之后将所述材料重新引入所述个体中。例如，自体T细胞疗法包括向受试者施用从同一受试者分离的T细胞。术语“同种异体”是指来源于一个个体的任何材料，然后将所述材料引入同一物种的另一个个体中。例如，同种异体T细胞移植包括向受试者施用从除所述受试者之外的供体获得的T细胞。
“癌症”是指广泛的一组各类疾病，其特征在于体内异常细胞的不受控制的生长。不受调控的细胞分裂和生长导致恶性肿瘤的形成，其侵入邻近组织并且还可以通过淋巴系统或血流转移到身体的远侧部分。“癌症”或“癌组织”可以包括肿瘤。可以通过本发明的方法治疗的癌症的示例包括但不限于免疫系统的癌症，包括淋巴瘤、白血病和其他白细胞恶性肿瘤。在一些方面，本发明的方法可用于减少来源于以下项的肿瘤的肿瘤大小，例如黑素瘤、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、胃癌、子宫癌、肺癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、食道癌、小肠癌、尿道癌、慢性或急性白血病、急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、神经胶质瘤、鳞状细胞癌以及所述癌症的组合。特定的癌症可以对化学疗法或放射疗法有反应，或者癌症可以是难治性的。难治性癌症是指不能适用手术干预的癌症，并且所述癌症最初对化学疗法或放射疗法没有反应，或者随着时间的推移所述癌症变得没有反应。
如本文所用，术语“无进展生存期”可缩写为PFS，是指从治疗日期到根据修订的IWG恶性淋巴瘤反应标准的疾病进展日期或任何原因导致的死亡的时间。
术语“总生存期”可缩写为OS，定义为从治疗日期到死亡日期的时间。
如本文所用，术语“感染”是指外来物质对身体的一个或多个组织的任何类型的侵入。术语“感染”包括但不限于由病毒(包括类病毒和朊病毒)、细菌、真菌、寄生虫及其任何组合引起的感染。
如本文所用，术语“淋巴细胞”包括自然杀伤(NK)细胞、T细胞或B细胞。NK细胞是一种类型的细胞毒性(cytotoxic/cell toxic)淋巴细胞，其代表固有免疫系统的主要组分。NK细胞排斥肿瘤和被病毒感染的细胞。它通过细胞凋亡或程序性细胞死亡过程起作用。它们被称为“自然杀伤物”，因为它们不需要激活即可杀伤细胞。T细胞在细胞介导的免疫中起主要作用(无抗体参与)。T细胞受体(TCR)将T细胞与其他淋巴细胞类型区分开来。胸腺是免疫系统的一个特殊器官，主要负责T细胞的成熟。T细胞有六种类型，即：辅助T细胞(例如CD4+细胞)、细胞毒性T细胞(也称为TC、细胞毒性T淋巴细胞、CTL、T杀伤细胞、溶细胞性T细胞、CD8+T细胞或杀伤T细胞)，记忆T细胞((i)干记忆TSCM细胞，与幼稚细胞一样，是CD45RO-、CCR7+、CD45RA+、CD62L+(L-选择素)、CD27+、CD28+和IL-7Rα+，但它们还表达大量的CD95、IL-2Rβ、CXCR3和LFA-1，并显示出记忆细胞独特的许多功能属性)；(ii)中央记忆TCM细胞表达L-选择素和CCR7，它们分泌IL-2，但不分泌IFNγ或IL-4，和(iii)效应记忆TEM细胞，然而，不表达L-选择素或CCR7但产生效应细胞因子，如IFNγ和IL-4)、调节性T细胞(Treg、抑制性T细胞或CD4+CD25+调节性T细胞)、自然杀伤T细胞(NKT)和γδT细胞。另一方面，B细胞在体液免疫中起主要作用(有抗体参与)。B细胞制造抗体和抗原，并发挥抗原呈递细胞(APC)的作用，并在由抗原相互作用激活后转变为记忆B细胞。在哺乳动物中，未成熟的B细胞在骨髓中形成，它的名字源于此。
术语“修饰的”和“突变的”在本文中用于指核苷酸或氨基酸序列时，是指序列相对于野生型序列或特定参考序列的变化。除非另有说明，术语“修饰的”和“突变的”不需要用于制备修饰或突变的序列(例如，修饰的β链序列)的过程中的步骤。相反，这些术语指示修饰或突变的序列相对于参考序列(例如野生型序列)存在变异。例如，包含在对应于SEQ IDNO:1的氨基酸残基112的位置处的取代突变的DPβ链不需要野生型DPβ链已经物理改变以得到所述DPβ链；而是当正确排列时，所述DPβ链包含在所述位置(残基112)处的如下氨基酸残基，该氨基酸残基不同于野生型或参考DPβ链中对应位置处的氨基酸残基。
如本文所用，术语“任何氨基酸”是指任何已知的氨基酸。氨基酸是包含以下项的有机化合物：(i)胺(-NH2)官能团，(ii)羧基(-COOH)_官能团，和(iii)侧链(R基团)，其中所述侧链特异于每个氨基酸。这包括但不限于任何天然存在的氨基酸以及其任何修饰和变体。约有500种天然存在的氨基酸，其中20种由遗传密码编码。具有带正电的侧链的氨基酸包括精氨酸(Arg；R)、组氨酸(His；H)和赖氨酸(Lys；K)。具有带负电的侧链的氨基酸包括天冬氨酸(Asp；D)和谷氨酸(Glu；E)。具有极性不带电侧链的氨基酸包括丝氨酸(Ser；S)、苏氨酸(Thr；T)、谷氨酰胺(Gln；Q)和天冬酰胺(Asn；N)。具有疏水侧链的氨基酸包括丙氨酸(Ala；A)、异亮氨酸(Ile；I)、亮氨酸(Leu；L)、甲硫氨酸(Met；M)、苯丙氨酸(Phe；F)、缬氨酸(Val；V)、色氨酸(Trp；W)、酪氨酸(Tyr；Y)。色氨酸(Trp；W)、酪氨酸(Tyr；Y)和甲硫氨酸(Met；M)也可归类为极性和/或两亲性氨基酸，因为这些氨基酸通常存在于蛋白质或脂质膜的表面。另外的氨基酸包括半胱氨酸(Cys；C)、硒代半胱氨酸(Sec；U)、甘氨酸(Gly；G)和脯氨酸(Pro；P)。
如本文所用，“在对应于……的位置处”用作用以鉴定多核苷酸中的特定氨基酸残基(例如特定氨基酸位置)或多肽中的特定核酸(例如特定核酸位置)的手段。可以通过将讨论中的序列与参考序列正确比对来确定位置。本领域技术人员将容易理解如何与序列比对以确定相对位置。例如，可在线获得各种比对工具，包括但不限于www.ebi.a c.uk(上次访问时间为2019年5月25日)上获得的“Clustal Omega Mu ltiple Sequence Alignment”。
术语“基因工程化的”或“工程化的”是指修饰细胞的基因组的方法，所述方法包括但不限于缺失编码区或非编码区或其部分，或插入编码区或其部分。在一些方面，修饰的细胞是淋巴细胞，例如表达CD4的T细胞或经修饰的细胞，其可以从患者或供体获得。可以修饰细胞以表达外源构建体，例如像本文公开的T细胞受体(TCR)，其被掺入到细胞基因组中。在一些方面，细胞被修饰以表达CD4。
“免疫反应”是指免疫系统的细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞和嗜中性粒细胞)和由任何这些细胞或肝脏产生的可溶性大分子(包括Ab、细胞因子和补体)的作用，这些可溶性大分子导致选择性靶向、结合、损害、破坏和/或消除脊椎动物体内的入侵病原体、感染病原体的细胞或组织、癌细胞或其他异常细胞、或(在自身免疫或病理学炎症的情况下)正常人体细胞或组织。
术语“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修改免疫反应的方法治疗患有疾病或者处于感染疾病或遭受疾病复发风险下的受试者。免疫疗法的示例包括但不限于T细胞疗法。T细胞疗法可包括过继性T细胞疗法、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫疗法、自体细胞疗法、工程化自体细胞疗法(eACT)和同种异体T细胞移植。
本文所述的免疫疗法中使用的细胞可以来自本领域已知的任何来源。例如，可以在体外从造血干细胞群中分化出T细胞，或者可以从受试者中获得T细胞。T细胞可以从例如外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤中获得。此外，T细胞可以来源于本领域可得到的一种或多种T细胞系。T细胞也可以使用任何数量的本领域技术人员已知的技术(如FICOLLTM分离和/或单采术)由从受试者收集的单位血液中获得。分离T细胞用于T细胞疗法的另外的方法在美国专利公开第2013/0287748号中公开，该专利通过引用以其整体并入本文。免疫疗法还可以包括向受试者施用经修饰的细胞，其中所述经修饰的细胞表达本文公开的CD4和TCR。在一些方面，经修饰的细胞不是T细胞。
如本文所用，“患者”包括患有癌症(例如，淋巴瘤或白血病)的任何人。术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。
术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”在可互换使用，并且是指由通过肽键共价连接的氨基酸残基构成的化合物。蛋白质或肽必须含有至少两个氨基酸，并且对可以组成蛋白质或肽的序列的氨基酸的最大数目没有限制。多肽包括包含通过肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸的任何肽或蛋白质。如本文所用，所述术语既指例如在本领域中也通常称为肽、寡肽和寡聚体的短链，还指在本领域中通常称为蛋白质的更长链，其中有很多类型。“多肽”包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同二聚体、异二聚体、多肽的变体、经修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或其组合。
如本文所用，“刺激”是指由刺激分子与其同源配体结合诱导的初级反应，其中该结合介导信号转导事件。“刺激分子”是T细胞上的分子，例如T细胞受体(TCR)/CD4复合物，其与抗原呈递细胞上存在的同源刺激配体特异性结合。“刺激性配体”是当存在于抗原呈递细胞(例如，aAPC、树突细胞、B细胞等)上时可与T细胞上的刺激性分子特异性结合，从而介导T细胞的初级反应，包括但不限于激活、免疫反应的启动、增殖等。刺激性配体包括但不限于装载有肽、抗CD4抗体、抗CD28抗体、抗CD2抗体和抗CD3抗体的MHC II类分子。
对受试者的“治疗(treatment或treating)”是指对受试者进行的任何类型的干预或处理，或向受试者施用活性剂，目的是逆转、减轻、改善、抑制、减缓或预防症状、并发症或病状或者与疾病相关的生化指标的发作、进展、发展、严重程度或复发。在一个方面，“治疗(treatment或treating)”包括部分缓解。在另一个方面，“治疗(treatment或treating)”包括完全缓解。
使用可选方案(例如，“或”)应理解为是指可选方案中的一者、两者或其任何组合。如本文所用，不定冠词“一个/种(a/an)”应理解为是指任何所描述或列举的组分中的“一个/种或多个/种”。
术语“约”或“基本上包括”是指在本领域普通技术人员确定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，其部分取决于如何测量或确定值或组成，即测量系统的局限性。例如，“约”或“基本上包括”可以指按照本领域实践在1个或超过1个标准偏差内。可选地，“约”或“基本上包括”可以指高达10％(即±10％)的范围。例如，约3mg可包括2.7mg和3.3mg之间(10％)的任何数量。此外，特别是关于生物系统或过程，这些术语可以指高达一个数量级或高达5倍的值。当在本申请和权利要求中提供特定值或组成时，除非另有说明，否则应当假定“约”或“基本上包括”的含义在该特定值或组成的可接受的误差范围内。
如本文所述，除非另有指示，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所述范围内的任何整数的值，并且在适当时包括其分数(如整数的十分之一和百分之一)。
在以下小节中更详细地描述了本发明的各个方面。
II.本公开的组合物
本公开涉及具有增强的CD4结合的HLA II类分子。本公开的某些方面涉及包含β链的HLA II类分子，其中所述β链包含一种或多种突变。在某些方面，β链中的一种或多种突变增加β链对CD4的亲和力。在某些方面，β链是HLA-DP(“DP”)β链。
II.A.MHC II类分子
人白细胞抗原(HLA)系统(人的主要组织相容性复合物[MHC])是免疫系统的重要组成部分，并且由位于6号染色体上的基因控制。它编码在T细胞上专门将抗原肽呈递给T细胞受体(TCR)的细胞表面分子。(另外参见Overview of the Immune System)。呈递抗原(Ag)的MHC分子分为两大类：I类MHC分子和II类MHC分子。
II类MHC分子作为跨膜糖蛋白存在于专职抗原呈递细胞(APC)的表面。完整的II类分子由α链和β链组成。HLA复合物中的三个基因座编码MHC II类蛋白：HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR。表达CD4分子的T细胞与II类MHC分子发生反应。这些淋巴细胞通常具有效应子功能和辅助功能，并激活反应以消除感染细胞内病原体的自身细胞或破坏细胞外寄生虫并帮助其他T细胞，如CD8 T细胞。因为只有专职APC表达II类MHC分子，所以只有这些细胞为CD4 T细胞呈递抗原(CD4分别与MHC II类分子的α链和β链的α-2和β-2结构域的非多态性部分结合)。
在一些方面，HLA II类α和β链选自HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR等位基因。在某些方面，HLA II类β链是HLA-DP等位基因。在某些方面，HLA II类α链是HLA-DP等位基因。
许多HLA-DP等位基因在本领域中是已知的，并且任何已知的等位基因都可以用在本公开中。HLA-DPα链和β链等位基因的示例如表1所示。HLA等位基因的更新清单可在hla.alleles.org/(上次访问时间为2019年2月27日)上获得。
II.A.1.MHC II类β链
在某些方面，HLA II类分子包含DPβ链，其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸。任何除亮氨酸之外的氨基酸可以存在于对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处。在一些方面，除亮氨酸之外的氨基酸是包含疏水侧链的氨基酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸的氨基酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是丙氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是缬氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是异亮氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是甲硫氨酸。在某些方面，在对应于SEQID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是苯丙氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是酪氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是色氨酸。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸由多于一个氨基酸组成，例如，两个氨基酸、三个氨基酸、四个氨基酸、五个氨基酸或者更多。在一些方面，多于一个氨基酸中的至少一个包含疏水侧链。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸由一系列，例如至少2个、至少3个、至少4个或至少5个氨基酸组成，其中所述系列氨基酸中的每一个都包含疏水侧链。
在某些方面，HLA II类分子包含DPβ链，其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。任何除缬氨酸之外的氨基酸都可存在于对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处。在一些方面，除缬氨酸之外的氨基酸是包含疏水侧链的氨基酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是选自丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸的氨基酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是丙氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是异亮氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是亮氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是甲硫氨酸。在某些方面，在对应于SEQ IDNO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是苯丙氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是酪氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是色氨酸。
在一些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸由多于一个氨基酸组成，例如，两个氨基酸、三个氨基酸、四个氨基酸、五个氨基酸或者更多。在一些方面，多于一个氨基酸中的至少一个包含疏水侧链。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸由一系列，例如至少2个、至少3个、至少4个或至少5个氨基酸组成，其中所述系列氨基酸中的每一个都包含疏水侧链。
在本公开的某些方面，MHC II类分子包含相对于野生型DPβ链含有多于一个取代突变的DPβ链。在某些方面，DPβ链相对于野生型DPβ链包含至少两个突变、至少三个突变、至少四个突变、至少五个突变、至少六个突变、至少七个突变、至少八个突变、至少九个突变、或至少十个突变。
在某些方面，DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸和在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。在一些方面，(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，或者在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112位置处的除亮氨酸之外的氨基酸和在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸中的每一个是包含疏水侧链的氨基酸。在一些方面，(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；并且(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸选自丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。
在一些方面，(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是色氨酸；并且(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸选自丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。在一些方面，(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；并且(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是甲硫氨酸。在一些方面，(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸是色氨酸；并且(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是甲硫氨酸。
在某些方面，DPβ链还包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。在一些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸选自丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸是甲硫氨酸。
在某些方面，DPβ链还包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的除甲硫氨酸之外的氨基酸。在一些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的除甲硫氨酸之外的氨基酸选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸。在某些方面，在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的除甲硫氨酸之外的氨基酸是异亮氨酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的除甲硫氨酸之外的氨基酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的甲硫氨酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的异亮氨酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的除甲硫氨酸之外的氨基酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，和(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的异亮氨酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，(iii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，和(iv)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的除甲硫氨酸之外的氨基酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，(iii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的甲硫氨酸，和(iv)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的异亮氨酸。
在一些方面，DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的缬氨酸。在一些方面，DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的甲硫氨酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，和(iii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的缬氨酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，和(iii)在对应于SEQ ID NO:1的对应于氨基酸残基158的位置处的甲硫氨酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的除亮氨酸之外的氨基酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的除缬氨酸之外的氨基酸，(iii)在对应于SEQID NO:1的氨基酸残基114的位置处的缬氨酸，和(iv)在对应于SEQ ID NO:1的对应于氨基酸残基158的位置处的甲硫氨酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，和(iii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的缬氨酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，和(iii)在对应于SEQ ID NO:1的对应于氨基酸残基158的位置处的甲硫氨酸。在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，(iii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的缬氨酸，和(iv)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的甲硫氨酸。
在一些方面，DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，(iii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的甲硫氨酸，和(iv)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基158的位置处的异亮氨酸。
在某些方面，与参考HLA II类分子相比，本文所述的DPβ链对CD4蛋白具有增加的亲和力。在一些方面，参考HLA II类分子是具有野生型DPβ链的HLA II类分子。在一些方面，参考HLA II类分子是具有包含以下项的DPβ链的HLA II类分子：(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的亮氨酸和/或(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的缬氨酸。
在一些方面，增加的对CD4的亲和力是参考HLA II类分子对CD4的亲和力的至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、至少约50倍、至少约75倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约300倍、至少约400倍、至少约500倍、至少约1000倍、至少约1500倍、至少约2000倍、至少约2500倍、至少约3000倍、至少约3500倍、至少约4000倍、至少约4500倍、或至少约4000倍。
在一些方面，增加的对CD4的亲和力是参考HLA II类分子对CD4的亲和力的至少约1.5倍到至少约5000倍、1.5倍到至少约4000倍、1.5倍到至少约3000倍、1.5倍到至少约2000倍、1.5倍到至少约1000倍、10倍到至少约5000倍、10倍到至少约4000倍、10倍到至少约3000倍、10倍到至少约2000倍、10倍到至少约1000倍、10倍到至少约900倍、10倍到至少约800倍、10倍到至少约700倍、10倍到至少约600倍、10倍到至少约500倍、10倍到至少约400倍、10倍到至少约300倍、10倍到至少约200倍、10倍到至少约100倍、100倍到至少约5000倍、100倍到至少约4000倍、100倍到至少约3000倍、100倍到至少约2000倍、100倍到至少约1000倍、100倍到至少约900倍、100倍到至少约800倍、100倍到至少约700倍、100倍到至少约600倍、100倍到至少约500倍、100倍到至少约400倍、100倍到至少约300倍、或100倍到至少约200倍。
在某些方面，DPβ链包含选自以下的等位基因：DPB1*01、DPB1*02、DPB1*03、DPB1*04、DPB1*05、DPB1*06、DPB1*08、DPB1*09、DPB1*10、DPB1*100、DPB1*101、DPB1*102、DPB1*103、DPB1*104、DPB1*105、DPB1*106、DPB1*107、DPB1*108、DPB1*109、DPB1*11、DPB1*110、DPB1*111、DPB1*112、DPB1*113、DPB1*114、DPB1*115、DPB1*116、DPB1*117、DPB1*118、DPB1*119、DPB1*120、DPB1*121、DPB1*122、DPB1*123、DPB1*124、DPB1*125、DPB1*126、DPB1*127、DPB1*128、DPB1*129、DPB1*13、DPB1*130、DPB1*131、DPB1*132、DPB1*133、DPB1*134、DPB1*135、DPB1*136、DPB1*137、DPB1*138、DPB1*139、DPB1*14、DPB1*140、DPB1*141、DPB1*142、DPB1*143、DPB1*144、DPB1*145、DPB1*146、DPB1*147、DPB1*148、DPB1*149、DPB1*15、DPB1*150、DPB1*151、DPB1*152、DPB1*153、DPB1*154、DPB1*155、DPB1*156、DPB1*157、DPB1*158、DPB1*159、DPB1*16、DPB1*160、DPB1*161、DPB1*162、DPB1*163、DPB1*164、DPB1*165、DPB1*166、DPB1*167、DPB1*168、DPB1*169、DPB1*17、DPB1*170、DPB1*171、DPB1*172、DPB1*173、DPB1*174、DPB1*175、DPB1*176、DPB1*177、DPB1*178、DPB1*179、DPB1*18、DPB1*180、DPB1*181、DPB1*182、DPB1*183、DPB1*184、DPB1*185、DPB1*186、DPB1*187、DPB1*188、DPB1*189、DPB1*19、DPB1*190、DPB1*191、DPB1*192、DPB1*193、DPB1*194、DPB1*195、DPB1*196、DPB1*197、DPB1*198、DPB1*199、DPB1*20、DPB1*200、DPB1*201、DPB1*202、DPB1*203、DPB1*204、DPB1*205、DPB1*206、DPB1*207、DPB1*208、DPB1*209、DPB1*21、DPB1*210、DPB1*211、DPB1*212、DPB1*213、DPB1*214、DPB1*215、DPB1*216、DPB1*217、DPB1*218、DPB1*219、DPB1*22、DPB1*220、DPB1*221、DPB1*222、DPB1*223、DPB1*224、DPB1*225、DPB1*226、DPB1*227、DPB1*228、DPB1*229、DPB1*23、DPB1*230、DPB1*231、DPB1*232、DPB1*233、DPB1*234、DPB1*235、DPB1*236、DPB1*237、DPB1*238、DPB1*239、DPB1*24、DPB1*240、DPB1*241、DPB1*242、DPB1*243、DPB1*244、DPB1*245、DPB1*246、DPB1*247、DPB1*248、DPB1*249、DPB1*25、DPB1*250、DPB1*251、DPB1*252、DPB1*253、DPB1*254、DPB1*255、DPB1*256、DPB1*257、DPB1*258、DPB1*259、DPB1*26、DPB1*260、DPB1*261、DPB1*262、DPB1*263、DPB1*264、DPB1*265、DPB1*266、DPB1*267、DPB1*268、DPB1*269、DPB1*27、DPB1*270、DPB1*271、DPB1*272、DPB1*273、DPB1*274、DPB1*275、DPB1*276、DPB1*277、DPB1*278、DPB1*279、DPB1*28、DPB1*280、DPB1*281、DPB1*282、DPB1*283、DPB1*284、DPB1*285、DPB1*286、DPB1*287、DPB1*288、DPB1*289、DPB1*29、DPB1*290、DPB1*291、DPB1*292、DPB1*293、DPB1*294、DPB1*295、DPB1*296、DPB1*297、DPB1*298、DPB1*299、DPB1*30、DPB1*300、DPB1*301、DPB1*302、DPB1*303、DPB1*304、DPB1*305、DPB1*306、DPB1*307、DPB1*308、DPB1*309、DPB1*31、DPB1*310、DPB1*311、DPB1*312、DPB1*313、DPB1*314、DPB1*315、DPB1*316、DPB1*317、DPB1*318、DPB1*319、DPB1*32、DPB1*320、DPB1*321、DPB1*322、DPB1*323、DPB1*324、DPB1*325、DPB1*326、DPB1*327、DPB1*328、DPB1*329、DPB1*33、DPB1*330、DPB1*331、DPB1*332、DPB1*333、DPB1*334、DPB1*335、DPB1*336、DPB1*337、DPB1*338、DPB1*339、DPB1*34、DPB1*340、DPB1*341、DPB1*342、DPB1*343、DPB1*344、DPB1*345、DPB1*346、DPB1*347、DPB1*348、DPB1*349、DPB1*35、DPB1*350、DPB1*351、DPB1*352、DPB1*353、DPB1*354、DPB1*355、DPB1*356、DPB1*357、DPB1*358、DPB1*359、DPB1*36、DPB1*360、DPB1*361、DPB1*362、DPB1*363、DPB1*364、DPB1*365、DPB1*366、DPB1*367、DPB1*368、DPB1*369、DPB1*37、DPB1*370、DPB1*371、DPB1*372、DPB1*373、DPB1*374、DPB1*375、DPB1*376、DPB1*377、DPB1*378、DPB1*379、DPB1*38、DPB1*380、DPB1*381、DPB1*382、DPB1*383、DPB1*384、DPB1*385、DPB1*386、DPB1*387、DPB1*388、DPB1*389、DPB1*39、DPB1*390、DPB1*391、DPB1*392、DPB1*393、DPB1*394、DPB1*395、DPB1*396、DPB1*397、DPB1*398、DPB1*399、DPB1*40、DPB1*400、DPB1*401、DPB1*402、DPB1*403、DPB1*404、DPB1*405、DPB1*406、DPB1*407、DPB1*408、DPB1*409、DPB1*41、DPB1*410、DPB1*411、DPB1*412、DPB1*413、DPB1*414、DPB1*415、DPB1*416、DPB1*417、DPB1*418、DPB1*419、DPB1*420、DPB1*421、DPB1*422、DPB1*423、DPB1*424、DPB1*425、DPB1*426、DPB1*427、DPB1*428、DPB1*429、DPB1*430、DPB1*431、DPB1*432、DPB1*433、DPB1*434、DPB1*435、DPB1*436、DPB1*437、DPB1*438、DPB1*439、DPB1*44、DPB1*440、DPB1*441、DPB1*442、DPB1*443、DPB1*444、DPB1*445、DPB1*446、DPB1*447、DPB1*448、DPB1*449、DPB1*45、DPB1*450、DPB1*451、DPB1*452、DPB1*453、DPB1*454、DPB1*455、DPB1*456、DPB1*457、DPB1*458、DPB1*459、DPB1*46、DPB1*460、DPB1*461、DPB1*462、DPB1*463、DPB1*464、DPB1*465、DPB1*466、DPB1*467、DPB1*468、DPB1*469、DPB1*47、DPB1*470、DPB1*471、DPB1*472、DPB1*473、DPB1*474、DPB1*475、DPB1*476、DPB1*477、DPB1*478、DPB1*479、DPB1*48、DPB1*480、DPB1*481、DPB1*482、DPB1*483、DPB1*484、DPB1*485、DPB1*486、DPB1*487、DPB1*488、DPB1*489、DPB1*49、DPB1*490、DPB1*491、DPB1*492、DPB1*493、DPB1*494、DPB1*495、DPB1*496、DPB1*497、DPB1*498、DPB1*499、DPB1*50、DPB1*500、DPB1*501、DPB1*502、DPB1*503、DPB1*504、DPB1*505、DPB1*506、DPB1*507、DPB1*508、DPB1*509、DPB1*51、DPB1*510、DPB1*511、DPB1*512、DPB1*513、DPB1*514、DPB1*515、DPB1*516、DPB1*517、DPB1*518、DPB1*519、DPB1*52、DPB1*520、DPB1*521、DPB1*522、DPB1*523、DPB1*524、DPB1*525、DPB1*526、DPB1*527、DPB1*528、DPB1*529、DPB1*53、DPB1*530、DPB1*531、DPB1*532、DPB1*533、DPB1*534、DPB1*535、DPB1*536、DPB1*537、DPB1*538、DPB1*539、DPB1*54、DPB1*540、DPB1*541、DPB1*542、DPB1*543、DPB1*544、DPB1*545、DPB1*546、DPB1*547、DPB1*548、DPB1*549、DPB1*55、DPB1*550、DPB1*551、DPB1*552、DPB1*553、DPB1*554、DPB1*555、DPB1*556、DPB1*557、DPB1*558、DPB1*559、DPB1*56、DPB1*560、DPB1*561、DPB1*562、DPB1*563、DPB1*564、DPB1*565、DPB1*566、DPB1*567、DPB1*568、DPB1*569、DPB1*57、DPB1*570、DPB1*571、DPB1*572、DPB1*573、DPB1*574、DPB1*575、DPB1*576、DPB1*577、DPB1*578、DPB1*579、DPB1*58、DPB1*580、DPB1*581、DPB1*582、DPB1*583、DPB1*584、DPB1*585、DPB1*586、DPB1*587、DPB1*588、DPB1*589、DPB1*59、DPB1*590、DPB1*591、DPB1*592、DPB1*593、DPB1*594、DPB1*595、DPB1*596、DPB1*597、DPB1*598、DPB1*599、DPB1*60、DPB1*600、DPB1*601、DPB1*602、DPB1*603、DPB1*604、DPB1*605、DPB1*606、DPB1*607、DPB1*608、DPB1*609、DPB1*61、DPB1*610、DPB1*611、DPB1*612、DPB1*613、DPB1*614、DPB1*615、DPB1*616、DPB1*617、DPB1*618、DPB1*619、DPB1*62、DPB1*620、DPB1*621、DPB1*622、DPB1*623、DPB1*624、DPB1*625、DPB1*626、DPB1*627、DPB1*628、DPB1*629、DPB1*63、DPB1*630、DPB1*631、DPB1*632、DPB1*633、DPB1*634、DPB1*635、DPB1*636、DPB1*637、DPB1*638、DPB1*639、DPB1*64、DPB1*640、DPB1*641、DPB1*642、DPB1*643、DPB1*644、DPB1*645、DPB1*646、DPB1*647、DPB1*648、DPB1*649、DPB1*65、DPB1*650、DPB1*651、DPB1*652、DPB1*653、DPB1*654、DPB1*655、DPB1*656、DPB1*657、DPB1*658、DPB1*659、DPB1*66、DPB1*660、DPB1*661、DPB1*662、DPB1*663、DPB1*664、DPB1*665、DPB1*666、DPB1*667、DPB1*668、DPB1*669、DPB1*67、DPB1*670、DPB1*671、DPB1*672、DPB1*673、DPB1*674、DPB1*675、DPB1*676、DPB1*677、DPB1*678、DPB1*679、DPB1*68、DPB1*680、DPB1*681、DPB1*682、DPB1*683、DPB1*684、DPB1*685、DPB1*686、DPB1*687、DPB1*688、DPB1*689、DPB1*69、DPB1*690、DPB1*691、DPB1*692、DPB1*693、DPB1*694、DPB1*695、DPB1*696、DPB1*697、DPB1*698、DPB1*699、DPB1*70、DPB1*700、DPB1*701、DPB1*702、DPB1*703、DPB1*704、DPB1*705、DPB1*706、DPB1*707、DPB1*708、DPB1*709、DPB1*71、DPB1*710、DPB1*711、DPB1*712、DPB1*713、DPB1*714、DPB1*715、DPB1*716、DPB1*717、DPB1*718、DPB1*719、DPB1*72、DPB1*720、DPB1*721、DPB1*722、DPB1*723、DPB1*724、DPB1*725、DPB1*726、DPB1*727、DPB1*728、DPB1*729、DPB1*73、DPB1*730、DPB1*731、DPB1*732、DPB1*733、DPB1*734、DPB1*735、DPB1*736、DPB1*737、DPB1*738、DPB1*739、DPB1*74、DPB1*740、DPB1*741、DPB1*742、DPB1*743、DPB1*744、DPB1*745、DPB1*746、DPB1*747、DPB1*748、DPB1*749、DPB1*75、DPB1*750、DPB1*751、DPB1*752、DPB1*753、DPB1*754、DPB1*755、DPB1*756、DPB1*757、DPB1*758、DPB1*759、DPB1*76、DPB1*760、DPB1*761、DPB1*762、DPB1*763、DPB1*764、DPB1*765、DPB1*766、DPB1*767、DPB1*768、DPB1*769、DPB1*77、DPB1*770、DPB1*771、DPB1*772、DPB1*773、DPB1*774、DPB1*775、DPB1*776、DPB1*777、DPB1*778、DPB1*779、DPB1*78、DPB1*780、DPB1*781、DPB1*782、DPB1*783、DPB1*784、DPB1*785、DPB1*786、DPB1*787、DPB1*788、DPB1*789、DPB1*79、DPB1*790、DPB1*791、DPB1*792、DPB1*794、DPB1*795、DPB1*796、DPB1*797、DPB1*798、DPB1*799、DPB1*80、DPB1*800、DPB1*801、DPB1*802、DPB1*803、DPB1*804、DPB1*805、DPB1*806、DPB1*807、DPB1*808、DPB1*809、DPB1*81、DPB1*810、DPB1*811、DPB1*812、DPB1*813、DPB1*814、DPB1*815、DPB1*816、DPB1*817、DPB1*818、DPB1*819、DPB1*82、DPB1*820、DPB1*821、DPB1*822、DPB1*823、DPB1*824、DPB1*825、DPB1*826、DPB1*827、DPB1*828、DPB1*829、DPB1*83、DPB1*830、DPB1*831、DPB1*832、DPB1*833、DPB1*834、DPB1*835、DPB1*836、DPB1*837、DPB1*838、DPB1*839、DPB1*84、DPB1*840、DPB1*841、DPB1*842、DPB1*843、DPB1*844、DPB1*845、DPB1*846、DPB1*847、DPB1*848、DPB1*849、DPB1*85、DPB1*850、DPB1*851、DPB1*852、DPB1*853、DPB1*854、DPB1*855、DPB1*856、DPB1*857、DPB1*858、DPB1*859、DPB1*86、DPB1*860、DPB1*861、DPB1*862、DPB1*863、DPB1*864、DPB1*865、DPB1*866、DPB1*867、DPB1*868、DPB1*869、DPB1*87、DPB1*870、DPB1*871、DPB1*872、DPB1*873、DPB1*874、DPB1*875、DPB1*876、DPB1*877、DPB1*878、DPB1*879、DPB1*88、DPB1*880、DPB1*881、DPB1*882、DPB1*883、DPB1*884、DPB1*885、DPB1*886、DPB1*887、DPB1*888、DPB1*889、DPB1*89、DPB1*890、DPB1*891、DPB1*892、DPB1*893、DPB1*894、DPB1*895、DPB1*896、DPB1*897、DPB1*898、DPB1*899、DPB1*90、DPB1*900、DPB1*901、DPB1*902、DPB1*903、DPB1*904、DPB1*905、DPB1*906、DPB1*907、DPB1*908、DPB1*909、DPB1*91、DPB1*910、DPB1*911、DPB1*912、DPB1*913、DPB1*914、DPB1*915、DPB1*916、DPB1*917、DPB1*918、DPB1*919、DPB1*92、DPB1*920、DPB1*921、DPB1*922、DPB1*923、DPB1*924、DPB1*925、DPB1*926、DPB1*927、DPB1*928、DPB1*929、DPB1*93、DPB1*930、DPB1*931、DPB1*932、DPB1*933、DPB1*934、DPB1*935、DPB1*936、DPB1*937、DPB1*938、DPB1*939、DPB1*94、DPB1*940、DPB1*941、DPB1*942、DPB1*943、DPB1*944、DPB1*945、DPB1*946、DPB1*947、DPB1*948、DPB1*949、DPB1*95、DPB1*950、DPB1*951、DPB1*952、DPB1*953、DPB1*954、DPB1*955、DPB1*956、DPB1*957、DPB1*958、DPB1*959、DPB1*96、DPB1*960、DPB1*961、DPB1*962、DPB1*963、DPB1*964、DPB1*965、DPB1*97、DPB1*98、和DPB1*99。在一些方面，DPβ链包含HLA-DPB1*01、HLA-DPB1*02、HLA-DPB1*03、HLA-DPB1*04、HLA-DPB1*05、HLA-DPB1*06、HLA-DPB1*08、或HLA-DPB1*09等位基因。在某些方面，DPβ链包含HLA-DPB1*04等位基因。在特定方面，DPβ链包含HLA-DPB1*04:01等位基因。
在某些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含与SEQ ID NO:3具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性的氨基酸序列，其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，并且其中所述DPβ链包含在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸。在某些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含与SEQ ID NO:3具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性的氨基酸序列，其中所述DPβ链包含(i)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基112的位置处的色氨酸，(ii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基141的位置处的甲硫氨酸，(iii)在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基114的位置处的缬氨酸，和(iv)在对应于SEQ ID NO:1的对应于氨基酸残基158的位置处的甲硫氨酸。在某些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
II.A.2.MHC II类α链
在本公开的一些方面，MHC II类分子还包含α链。在一些方面，α链是野生型α链。在一些方面，α链是DPα链。可以在本公开的组合物和方法中使用任何DPα链。在一些方面，DPα链包含HLA-DPA1*01、HLA-DPA1*02、HLA-DPA1*03、或HLA-DPA1*04等位基因。在某些方面，DPα链包含HLA-DPA1*01等位基因。在某些方面，DPα链包含HLA-DPA1*02等位基因。在某些方面，DPα链包含HLA-DPA1*03等位基因。在某些方面，DPα链包含HLA-DPA1*04等位基因。
在某些方面，DPα链选自DPA1*01:03:01:01、DPA1*01:03:01:02、DPA1*01:03:01:03、DPA1*01:03:01:04、DPA1*01:03:01:05、DPA1*01:03:01:06、DPA1*01:03:01:07、DPA1*01:03:01:08、DPA1*01:03:01:09、DPA1*01:03:01:10、DPA1*01:03:01:11、DPA1*01:03:01:12、DPA1*01:03:01:13、DPA1*01:03:01:14、DPA1*01:03:01:15、DPA1*01:03:01:16、DPA1*01:03:01:17、DPA1*01:03:01:18Q、DPA1*01:03:01:19、DPA1*01:03:01:20、DPA1*01:03:01:21、DPA1*01:03:01:22、DPA1*01:03:01:23、DPA1*01:03:02、DPA1*01:03:03、DPA1*01:03:04、DPA1*01:03:05、DPA1*01:03:06、DPA1*01:03:07、DPA1*01:03:08、DPA1*01:03:09、DPA1*01:04、DPA1*01:05、DPA1*01:06:01、DPA1*01:06:02、DPA1*01:07、DPA1*01:08、DPA1*01:09、DPA1*01:10、DPA1*01:11、DPA1*01:12、DPA1*01:13、DPA1*01:14、DPA1*01:15、DPA1*01:16、DPA1*01:17、DPA1*01:18、DPA1*01:19、DPA1*02:01:01:01、DPA1*02:01:01:02、DPA1*02:01:01:03、DPA1*02:01:01:04、DPA1*02:01:01:05、DPA1*02:01:01:06、DPA1*02:01:01:07、DPA1*02:01:01:08、DPA1*02:01:01:09、DPA1*02:01:01:10、DPA1*02:01:01:11、DPA1*02:01:02:01、DPA1*02:01:02:02、DPA1*02:01:03、DPA1*02:01:04、DPA1*02:01:05、DPA1*02:01:06、DPA1*02:01:07、DPA1*02:01:08:01、DPA1*02:01:08:02、DPA1*02:02:02:01、DPA1*02:02:02:02、DPA1*02:02:02:03、DPA1*02:02:02:04、DPA1*02:02:02:05、DPA1*02:02:03、DPA1*02:02:04、DPA1*02:02:05、DPA1*02:02:06、DPA1*02:03、DPA1*02:04、DPA1*02:05、DPA1*02:06、DPA1*02:07:01:01、DPA1*02:07:01:02、DPA1*02:07:01:03、DPA1*02:08、DPA1*02:09、DPA1*02:10、DPA1*02:11、DPA1*02:12、DPA1*02:13N、DPA1*02:14、DPA1*02:15、DPA1*02:16、DPA1*03:01:01:01、DPA1*03:01:01:02、DPA1*03:01:01:03、DPA1*03:01:01:04、DPA1*03:01:01:05、DPA1*03:01:02、DPA1*03:02、DPA1*03:03、DPA1*03:04、DPA1*04:01:01:01、DPA1*04:01:01:02、DPA1*04:01:01:03、DPA1*04:02、或其任何组合。
II.A.3.信号肽
在一些方面，DPβ链和/或DPα链还包含信号肽。本领域已知的任何信号肽均可用在本文公开的组合物和方法中。在一些方面，DPβ链信号肽与DPα信号肽相同。在一些方面，DPβ链信号肽不同于DPα信号肽。
在一些方面，信号肽来源于天然信号肽。在一些方面，信号肽来源于天然存在的DPβ链信号肽。在一些方面，信号肽包含天然存在的DPβ链信号肽。在一些方面，信号肽来源于天然存在的DPα链信号肽。在一些方面，信号肽包含天然存在的DPα链信号肽。在一些方面，信号肽来源于丝心蛋白轻链(FibL)信号肽。在一些方面，信号肽包含SEQ ID NO:9。在一些方面，信号肽是合成的。
II.A.4.跨膜结构域
在一些方面，DPβ链和/或DPα链还包含跨膜结构域。跨膜结构域可以是任何长度和任何来源。在一些方面，跨膜结构域的长度为至少约1个到至少约50个氨基酸。在一些方面，跨膜结构域来源于天然存在的跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域包含天然存在的跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域来源于天然存在的HLA跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域包含天然存在的HLA跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域来源于天然存在的DPβ链跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域包含天然存在的DPβ链跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域来源于天然存在的DPα链跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域包含天然存在的DPα链跨膜结构域。
II.A.5.亮氨酸拉链
在一些方面，DPβ链和/或DPα链还包含一个或多个亮氨酸拉链(LZip)序列。本领域已知的任何LZip序列均可用在本文公开的组合物和方法中。在一些方面，DPβ链和/或DPα链包含酸性LZip(αLZip)、碱性LZip(βLZip)或两者。在一些方面，一个或多个LZip序列来源于天然存在的LZip序列。在一些方面，一个或多个LZip序列包含天然存在的LZip序列。在一些方面，一个或多个LZip序列是合成的。在某些方面，一个或多个LZip序列包含SEQ ID NO:4(表1)所示的LZip序列。
II.A.6.接头
在一些方面，可用于本公开的DPβ链和/或DPα链还包含接头。本领域已知的任何接头均可用在本文公开的组合物和方法中。在某些方面，接头包括Gly/Ser接头。在一些方面，接头包含选自GlySer、Gly2Ser、Gly3Ser和Gly4Ser的氨基酸序列。在一些方面，接头位于DPα链或DPβ链的胞外结构域的N端。在一些方面，接头位于DPα链或DPβ链的胞外结构域的C端。在一些方面，接头位于DPα链或DPβ链的胞外结构域与跨膜结构域之间。在一些方面，接头位于DPα链或DPβ链的胞外结构域与一个或多个LZip序列之间。在一些方面，接头位于DPα链或DPβ链的胞外结构域与信号肽之间。
任何长度的接头都可以用在本文公开的组合物和方法中。在一些方面，接头的长度为至少一个氨基酸。在一些方面，接头的长度为至少约1个到至少约100个、至少约1个到至少约90个、至少约1个到至少约80个、至少约1个到至少约70个、至少约1个到至少约60个、至少约1个到至少约50个、至少约1个到至少约40个、至少约1个到至少约30个、至少约1个到至少约20个、至少约1个到至少约15个、至少约1个到至少约14个、至少约1个到至少约13个、至少约1个到至少约12个、至少约1个到至少约11个、至少约1个到至少约10个、至少约1个到至少约9个、至少约1个到至少约8个、至少约1个到至少约7个、至少约1个到至少约6个、至少约1个到至少约5个、至少约1个到至少约4个、至少约1个到至少约3个氨基酸。
在一些方面，接头的长度为至少约1个、至少约2个、至少约3个、至少约4个、至少约5个、至少约6个、至少约7个、至少约8个、至少约9个、至少约10个、至少约11个、至少约12个、至少约13个、至少约14个、至少约15个、至少约20个、至少约30个、至少约40个、至少约50个、至少约60个、至少约70个、至少约80个、至少约90个、至少约100个氨基酸。在一些方面，接头的长度为约3个氨基酸。在一些方面，接头的长度为约4个氨基酸。在一些方面，接头的长度为约5个氨基酸。
II.B.细胞
在本公开的某些方面，本公开的MHC II类分子与细胞的膜连接或缔合。在某些方面，MHC II类分子的β链与细胞的膜连接或缔合。在某些方面，MHC II类分子的α链与细胞的膜连接或缔合。在某些方面，MHC II类分子的α链和β链与细胞的膜连接或缔合。
本公开的某些方面涉及包含本文公开的MHC II类分子的细胞。任何细胞都可以用于本文所述的组合物中。在某些方面，细胞是哺乳动物细胞。在一些方面，细胞是昆虫细胞。在一些方面，细胞来源于健康细胞，例如健康成纤维细胞。在一些方面，细胞来源于肿瘤细胞。可用于本公开的细胞的非限制性示例包括K562细胞、T2细胞、HEK293细胞、HEK293T细胞、A375细胞、SK-MEL-28细胞、Me275细胞、COS细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞或其任何组合。在某些方面，细胞是在Hasan等人,Adv.Genet.Eng.4(3):130(2015)(通过引用以其整体并入本文)中公开的任何细胞。
在某些方面，细胞是专职APC。在某些方面，细胞是巨噬细胞、B细胞、树突细胞或其任何组合。
在某些方面，细胞缺乏一种或多种MHC II类等位基因的内源性表达。在一些方面，细胞缺乏HLA-DP等位基因的内源性表达。在一些方面，细胞缺乏HLA-DPα链等位基因的内源性表达。在一些方面，细胞缺乏HLA-DPβ链等位基因的内源性表达。
II.C.可溶性MHC II类分子
在某些方面，MHC II类分子不与细胞膜缔合，例如，MHC II类分子是可溶形式。如本文所用，可溶性MHC II类分子包括本文所述的不与细胞膜缔合的任何MHC II类分子或其部分。在某些方面，MHC II类分子或其部分不与任何膜结合。在一些方面，MHC II类分子或其部分与惰性颗粒结合。在一些方面，MHC II类分子或其部分结合到细胞外囊泡的膜上。在一些方面，MHC II类分子结合到人造膜或人造表面上，例如阵列板的表面上。
本领域已知的任何惰性颗粒均可用在本公开的组合物和方法中。在一些方面，惰性颗粒是珠。在一些方面，珠是玻璃珠、乳胶珠、金属珠或其任何组合。在一些方面，惰性颗粒是纳米粒子(NP)。本领域已知的任何NP均可用在本公开的组合物和方法中。在某些方面，纳米粒子选自聚乙二醇化氧化铁、壳聚糖、葡聚糖、明胶、藻酸盐、脂质体、淀粉、支化聚合物、碳基载体、聚乳酸、聚(氰基)丙烯酸酯、聚乙烯亚胺、嵌段共聚物、聚己内酯、SPIONS、USPIONS、Cd/Zn-硒化物或二氧化硅纳米粒子。在特定方面，纳米粒子是聚乙二醇化氧化铁纳米粒子。可用在本文公开的组合物和方法中的纳米粒子的非限制性示例包括在De Jong和Borm,Int.J.Nanomedicine 3(2):133-49(2008)和Umeshappa等人,Nat.Commun.10(1):2150(2019年5月14日)(各自通过引用以其整体并入本文)中阐述的那些。
在一些方面，MHC II类分子包括全长MHC II类分子的片段，其中α链的跨膜结构域和/或β链的跨膜结构域的一个或多个氨基酸缺失。在一些方面，MHC II类分子包含α链的胞外结构域(例如，如SEQ ID NO:6所示)和/或β链的胞外结构域(例如，如SEQ ID NO:1或3所示)。在某些方面，MHC II类分子包含DPα链，所述DPα链包含与SEQ ID NO:6具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，MHC II类分子包含DPα链，所述DPα链包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在某些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含与SEQ ID NO:1具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。在某些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含与SEQ ID NO:3具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。在某些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含与SEQ ID NO:4具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。在某些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含与SEQ ID NO:5具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，MHC II类分子包含DPβ链，所述DPβ链包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
II.D.核酸分子和载体
本公开的某些方面涉及编码本文公开的MHC II类分子的核酸分子。在一些方面，核酸分子编码本文公开的MHC II类β链。在某些方面，编码MHC II类β链的核酸分子包含与SEQ ID NO:2所示的序列具有至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％序列同一性的核苷酸序列。
在一些方面，核酸分子编码本文公开的MHC II类α链。在某些方面，编码MHC II类α链的核酸分子包含与SEQ ID NO:7所示的序列具有至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％序列同一性的核苷酸序列。
在一些方面，核酸分子编码本文公开的MHC II类α链和本文公开的MHC II类β链两者。在一些方面，编码MHC II类α链的序列在与编码MHC II类β链的序列相同的启动子的控制下。在一些方面，编码MHC II类α链的序列在第一启动子的控制下，并且编码MHC II类β链的序列在第二启动子的控制下。
在一些方面，本公开涉及编码本文公开的MHC II类β链的第一核酸分子和编码本文公开的MHC II类α链的第二核酸分子。
本公开的某些方面涉及包含本文公开的核酸分子的一种载体或一组载体。在一些方面，载体是病毒载体。在一些方面，载体是病毒颗粒或病毒。在一些方面，载体是哺乳动物载体。在一些方面，载体是细菌载体。
在某些方面，载体是逆转录病毒载体。在一些方面，载体是腺病毒载体、慢病毒、仙台病毒、杆状病毒载体、爱泼斯坦巴尔病毒载体、乳多空病毒载体、痘苗病毒载体、单纯疱疹病毒载体或腺相关病毒(AAV)载体。在特定方面，载体是AAV载体。在一些方面，载体是慢病毒。在特定方面，载体是腺病毒载体。在一些方面，载体是仙台病毒。在一些方面，载体是杂合载体。可以在本公开中使用的杂合载体的示例可以在Huang和Kamihira,Biotechnol.Adv.31(2):208-23(2103)(通过引用以其整体并入本文)中找到。
III.本公开的方法
本公开的某些方面涉及治疗受试者的疾病或症状的方法。在一些方面，本公开涉及增强有需要的受试者中的免疫反应的方法。
III.A.治疗肿瘤的方法
本公开的某些方面涉及治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用本文公开的HLA II类分子、本文公开的核酸分子、本文公开的载体或本文公开的细胞。
在一些方面，癌症选自黑素瘤、骨癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、原发纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBC)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、转化型滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、急性或慢性白血病、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、包括由石棉诱导的那些的环境诱导癌症、其他B细胞恶性肿瘤及这些癌症的任何组合。在一些方面，癌症是黑素瘤。
在一些方面，癌症是复发性的。在一些方面，癌症是难治性的。在一些方面，癌症是晚期的。在一些方面，癌症是转移性的。
在一些方面，本文公开的方法治疗受试者的癌症。在一些方面，本文公开的方法降低癌症的一种或多种症状的严重性。在一些方面，本文公开的方法减少来源于所述癌症的肿瘤的大小或数量。在一些方面，相对于未提供本文公开的方法的受试者，本文公开的方法增加了受试者的总生存期。在一些方面，相对于未提供本文公开的方法的受试者，本文公开的方法增加了受试者的无进展生存期。在一些方面，本文公开的方法导致受试者的部分反应。在一些方面，本文公开的方法导致受试者的完全反应。
本公开的某些方面涉及治疗有需要的受试者的感染的方法，所述方法包括向受试者施用本文公开的HLA II类分子、本文公开的核酸分子、本文公开的载体或本文公开的细胞。可以使用本文公开的组合物和方法治疗的感染的非限制性示例包括病毒(包括类病毒和朊病毒)、细菌、真菌、寄生虫或其任何组合的感染。在一些方面，病毒是疱疹病毒、HIV、乳多空病毒、麻疹病毒、风疹病毒、人乳头瘤病毒(HPV)、人T淋巴细胞病毒1、爱泼斯坦-巴尔病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、诺如病毒及其任何组合。在一些方面，细菌选自链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌。在一些方面，细菌感染选自布鲁氏菌病、弯曲杆菌感染、猫抓病、霍乱、大肠杆菌感染、淋病、克雷伯氏菌感染、肠杆菌感染、沙雷氏菌感染、军团菌感染、脑膜炎球菌感染、百日咳、鼠疫、假单胞菌感染、沙门氏菌感染、志贺氏菌病、伤寒、土拉菌病、炭疽病、白喉、肠球菌感染、丹毒丝菌病(Erysipelothricosis)、李斯特菌病、奴卡菌病、肺炎球菌感染、葡萄球菌感染、链球菌感染及其任何组合。在一些实施方案中，寄生虫感染选自蛲虫病、滴虫病、弓形虫病、贾第鞭毛虫病、隐孢子虫病、疟疾、钩虫病、癣菌病、绦虫病、吸虫病及其任何组合。在一些方面，真菌感染选自念珠菌属、糠秕马拉色菌、皮肤癣菌(例如，表皮癣菌属、小孢子菌属和毛癣菌属)或其任何组合。
在一些方面，本文公开的方法包括治疗有需要的受试者的癌症或感染，所述方法包括向受试者施用本文所述的细胞，其中所述细胞包含本文公开的MHC II类分子、本文公开的核酸分子、本文公开的载体或其任何组合。
在一些方面，细胞获自受试者。在一些方面，细胞获自除受试者之外的供体。
III.B.富集靶T细胞群的方法
本公开的某些方面涉及富集从人受试者获得的靶T细胞群的方法。在一些方面，所述方法包括使T细胞与本文公开的HLA II类分子接触。在一些方面，所述方法包括使T细胞与本文公开的细胞(例如)APC接触。在一些方面，在接触之后，相对于接触之前能够结合HLAII类分子的T细胞的数量，富集的T细胞群包含更多数量的能够结合HLA II类分子的T细胞。
本公开的一些方面涉及选择能够靶向患病细胞(例如肿瘤细胞)的T细胞的方法。在一些方面，所述方法包括使分离的T细胞群在体外与包含本文公开的MHC II类分子和多肽的片段的复合物接触，所述多肽为例如由患病细胞表达的抗原，例如肿瘤表达的多肽，例如，表位。在一些方面，T细胞获自人受试者。
从人受试者获得的T细胞可以是本文公开的任何T细胞。在一些方面，从人受试者获得的T细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。
在一些方面，所述方法还包括向人受试者施用富集的T细胞。在一些方面，受试者在接受如本文所述的T细胞之前进行预调理。
本文描述的所有各个方面、方面和选项可以以任何和所有变化形式组合。
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请在此通过引用并入，就如每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地指出通过引用并入本文的程度一样。
已经一般性地描述了本公开，通过参考本文提供的实施例可以获得进一步的理解。这些实施例仅用于说明的目的，而不具有限制性。
实施例
实施例1–方法
细胞
通过密度梯度离心获得外周单核细胞(Ficoll-Paque PLUS,GE Healthcare LifeSciences,Marlborough,MA)。K562细胞系是一种红白血病细胞系，具有缺陷型HLA I/II类表达。先前已经报道了分别表达作为单个HLA等位基因的各种HLA II类基因连同CD80和CD83的基于K562的人工APC(aAPC)(Butler等人,PloS One 7,e30229(2012))。Jurkat 76细胞系是一种T细胞白血病细胞系，其缺乏内源性TCR、CD4和CD8表达。Jurkat 76/CD4细胞通过逆转录病毒转导人CD4基因生成。A375、SK-MEL-21、SK-MEL-28、SK-MEL-37和Me275是黑素瘤细胞系。使HEK293T细胞和黑素瘤细胞系在补充有10％FBS和50μg/ml庆大霉素(ThermoFisher Scientific，Waltham，MA)的DMEM中生长。将K562和Jurkat 76细胞系在补充有10％FBS和50μg/ml庆大霉素的RPMI 1640中培养。
肽
合成肽购自Genscript(Piscataway,NJ)，并以50μg/ml溶解在DMSO中。肽序列如表3所示。
表3：合成肽序列
基因
使用SMARTer RACE 5'/3'试剂盒(Takara Bio,Shiga,Japan)通过cDNA末端的5'-快速扩增(RACE)PCR克隆新的TCR基因，并如前所述进行测序。将所有基因都克隆到pMX逆转录病毒载体中，并使用基于293GPG和PG13细胞的逆转录病毒系统转导到细胞系中。
抗体
将以下抗体用于流式细胞术分析：PE缀合的抗II类(9-49(I3))、APC-Cy7缀合的抗CD4(RPA-T4,Biolegend,San Diego,CA)44、FITC缀合的抗NGFR(ME20.4,Biolegend,SanDiego,CA)、PE缀合的抗His标签(AD1.1.10,Abcam,Cambridge,MA)和FITC缀合的抗Vβ22(IMMU 546,Beckman Coulter,Brea,CA)。根据制造商的说明，使用PE缀合的链霉亲和素(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)，将生物素化的DP4/NY-ESO1157-170和DP4/WT1329-348单体多聚化。用活/死可固定近红外死细胞染色试剂盒465(LIVE/DEAD FixableNear-IR Dead Cell Stain Kit 465)(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)区分死细胞。用Canto II或LSRFortessa X-20(BD Biosciences,Franklin Lakes,NJ)分析染色的细胞。使用FACS Aria II(BD Biosciences,Franklin Lakes,NJ)进行细胞分选。使用FlowJo软件(Tree Star,Ashland,OR)进行数据分析。
将以下抗体用于免疫印迹分析：抗β-肌动蛋白(C4,Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA)、兔多克隆抗MAGE-A2(Abcam,Cambridge,MA)、抗CCND1(EPR2241,Abcam,Cambridge,MA)、HRP缀合的山羊抗小鼠IgG(H+L)二抗(Promega,Fitchburg,WI)和HRP缀合的抗兔IgG(H+L)二抗(Promega,Fitchburg,WI)。
TCR转导至原代T细胞中
分别使用Pan T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)和CD4+T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)纯化CD3+和CD4+T细胞。使用以20:1的E:T比用200Gy辐照的aAPC/mOKT3刺激纯化的T细胞。从第二天开始，通过连续3天在32℃下以1,000×g离心1小时或使用Retronectin涂层板(TakaraBio,Shiga,Japan)，用克隆的TCR基因逆转录病毒转导激活的T细胞。在第二天，将100IU/mlIL-2和10ng/ml IL-15添加到TCR转导的T细胞中。每2-3天补足培养基。
用可溶性CD4染色
可溶性CD4(sCD4)基因是通过GS接头将人CD4胞外结构域与6xHis标签融合生成。用sCD4基因逆转录病毒转导HEK293T细胞，并收获含有sCD4单体的培养上清液。将sCD4用PE标记的抗6xHis标签mAb(AD1.1.10,Abcam,Cambridge,MA)二聚化并使用。将表达HLA II类的K562细胞在山羊血清存在下在室温下用二聚化sCD4染色30分钟。分别表达各种II类基因的K562来源细胞中的表面HLA II类表达如图13A至图13Q所示。
多位点定向DPB1*04:01突变型cDNA文库的构建与筛选
通过使用PCR和以下引物组将多位点定向随机突变插入DPB1*04:01cDNA：对于L112和V114，正向：5'-CACCACAACNNNCTTNNNTGCCACGTG-3'(SEQ ID NO:12)和反向：5'-CACGTGGCANNNAAGNNNGTTGTGGTG-3'(SEQ ID NO:13)；对于V141，正向：5'-ACAGCTGGGGTCNNNTCCACCAACCTG-3'(SEQ ID NO:14)和反向：5'-CAGGTTGGTGGANNNGACCCCAGCTGT-3'(SEQ ID NO:15)；对于L156和M158，正向：5'-CAGATCNNNGTGNNNCTGGAAATGACC-3'(SEQ ID NO:16)和反向：5'-GGTCATTTCCAGNNNCACNNNGATCTG-3'(SEQ ID NO:17)。N代表任何核苷酸。将得到的PCR片段相互融合以构建突变型全长DPB1*04:01cDNA表达文库，该文库在位置L112、V114、V141、L156和M158处携带随机突变。用包装细胞系293GPG产生的重组逆转录病毒以低于30％的转导效率感染稳定表达DPA1*01:03基因的K562细胞。将感染的K562细胞用可溶性CD4二聚体染色，并使用流式细胞术细胞分选仪收集二聚体阳性细胞。从收集的细胞中克隆突变型DPB1*04:01基因，并与上述野生型DPA1*01:03基因一起通过逆转录病毒转导到K562细胞中。
HLA II类单体和二聚体的生成
将野生型II类α基因的胞外结构域通过GGGS接头与酸性亮氨酸拉链融合，随后通过GS接头与6xHis标签融合(参见SEQ ID NO:8)。将携带突变的II类β基因的胞外结构域(参见SEQ ID NO:3)通过GGGS接头(参见SEQ ID NO:4)与碱性亮氨酸拉链类似地连接。使用基于293GPG细胞的逆转录病毒系统用α和β基因转染HEK293T细胞，并在补充有10％FBS和50μg/ml庆大霉素的DMEM中培养。对于DP4二聚体染色，使稳定分泌可溶性DP4L112W/V141M蛋白的HEK293T细胞生长至汇合，并将培养基更换为无血清293SFM II培养基(Thermo FisherScientific,Waltham,MA)。48小时后，收获条件培养基并使用Amicon超滤器(截留分子量(MWCO)10kDa)(MilliporeSigma,Burlington,MA)浓缩。然后在37℃下将含有可溶性HLA II类的上清液与100μg/ml所关注肽混合20-24小时，以进行体外肽交换。将未进行肽交换的单体用作对照。使用镍涂层板(XPressBio,Frederick,MD)和抗His标签生物素化mAb(AD1.1.10,R&D Systems,Minneapolis,MN)通过特异性ELISA测量单体的浓度。使用PE缀合的抗His mAb(AD1.1.10,Abcam,Cambridge,MA)以2:1的摩尔比在4℃下将可溶性HLA II类单体二聚化1.5小时以进行染色。
DP4限制性抗原特异性CD4+T细胞的刺激
使用CD4+T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec，Bergisch Gladbach，Germany)纯化CD4+T细胞。将纯化的T细胞用通过DP4限制性肽以10μg/ml冲击的表达DP4的aAPC刺激，并以20:1的E:T比率在200Gy下辐照。四十八小时后，将10IU/ml IL-2和10ng/ml IL-15添加到CD4+T细胞中。每2-3天补足补充有IL-2(10IU/ml)和IL-15(10ng/ml)的培养基。刺激2周后，对T细胞进行DP4L112W/V141M二聚体染色。
HLA II类二聚体和四聚体染色
将用外源性TCR基因转导的原代T细胞和Jurkat 76/CD4 T细胞在37℃46下用50nM达沙替尼(LC Laboratories，Woburn，MA)预处理30分钟，并在室温下用5-15μg/ml II类二聚体染色4-5小时。洗涤后，用APC-Cy7缀合的抗CD4 mAb、FITC缀合的抗NGFR mAb和PE缀合的抗Vβ22mAb对细胞表面分子进行复染。
ELISPOT测定
如先前报道的，进行细胞因子ELISPOT测定(参见例如Yamashita等人,Nat.Commun.8:15244(2017)；和Anczurowski等人,Sci.Rep.8:4804(2018))。
免疫印迹
如先前报道的，进行免疫印迹分析(参见例如,Yamashita等人,Nat.Commun.8:15244(2017)；和Anczurowski等人,Sci.Rep.8:4804(2018))。
蛋白质建模
使用用于四元结构预测的Swiss-Model工作区基于PDB ID 3S5L和3T0E的结构预测HLA-DP4和人CD4复合物模型结构。
统计分析
使用GraphPad Prism 6.0软件(GraphPad Software,San Diego,CA)进行统计分析。使用非配对的双尾学生t检验来进行两样本比较。没有使用统计方法来预先确定样本量。在实验或结果评估期间，研究人员对分配不是盲的。实验不是随机化的。
生物层干涉传感图
使后接GS接头和10x组氨酸(His)标签的人CD4的胞外结构域(NP_000607.1的残基26-440)在人细胞系A375中稳定表达(SEQ ID NO:245-246；表4)。用TALON金属亲和树脂(Takara Bio,Shiga,Japan)从上清液中纯化重组的10x His标记的CD4蛋白。使用具有10kDa MWCO的Amicon Ultra-15离心柱(MilliporeSigma,Burlington,MA)浓缩洗脱的蛋白质。使用10kDa MWCO迷你透析器(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)将缓冲液交换为HBS-EP(GE Healthcare Life Sciences,Marlborough,MA)。如SDS-PAGE所证实的，重组CD4蛋白的纯度始终>90％。
重组DP4蛋白由DPA1*01:03的胞外结构域和野生型DPB1*04:01或L112W/V141M突变体组成。DPA1*01:03后接酸性亮氨酸拉链、GS接头和10x组氨酸标签，而野生型和突变型DPB1后接碱性亮氨酸拉链、GS接头和生物素化序列(GLNDIFEAQKIEWHE；SEQ ID NO:244)。DPA和DPB基因均在A375-BirA细胞中稳定表达，将这些细胞用编码5'端前导序列和3'端ER保留KDEL基序的密码子优化的BirA基因进行转导。用TALON金属亲和树脂(Takara Bio,Shiga,Japan)从上清液中纯化重组的DP4蛋白。使用具有10kDa MWCO的Vivaspin 500离心柱(GE Healthcare Life Sciences，Marlborough，MA)浓缩洗脱的蛋白质，并复原至在PBS中的工作体积。
通过Octet Red系统(ForteBio,Fremont,CA)测量野生型DP4和DP4L112W/V141M与CD4的结合。使用96孔OptiPlate(Perkin Elmer，Waltham，MA)在25℃下进行实验，样品体积为200μl，并在1,000rpm下持续摇动。将生物素化的重组DP4加载到链霉亲和素涂覆的生物传感器(ForteBio,Fremont,CA)上直至饱和，随后在HBS-EP缓冲液中进行基线测量。通过以下方式来测量缔合：将加载的传感器与滴定浓度的重组CD4(0.8125至26μM)一起孵育400秒，之后在单独的HBS-EP缓冲液中解离300秒。使用GraphPad Prism 7.0中的单位点特异性结合模型拟合稳态分析
表4.可溶性10x His标记的CD4核酸序列
实施例2–DPβ链的L112W/V141M取代增强DP与CD4的结合
生成了在L112、V114、V141、L156和M158(分别对应于DR1β链的L114、V116、V143、L158和M160)处携带随机突变的DPB1*04:01(DP4β)基因的cDNA表达文库，并在II类缺陷型K562细胞中与野生型DPA1*01:03(DPα)基因一起共表达所述文库。在使用可溶性CD4蛋白(sCD4)进行两轮筛选后，分离出具有增强的CD4结合的细胞群，从中分子克隆了携带L112W、V114M、V141M和M158I取代的突变型DP4β基因。当在K562细胞中异位表达时，由野生型DPα链和携带L112W、V114M、V141M和M158I取代(DP4L112W/V114M/V141M/M158I)的克隆的突变型DP4β链组成的突变型DP4分子确实显示与野生型DP4分子相比增强的与sCD4的结合，从而排除了增强的CD4结合是筛选过程的人工产物的可能性(图1A至图1F)。
为了确定四种突变中的哪一种对增强CD4结合至关重要，进行了回复诱变研究。将所有可能的回复DP4突变体都在II类阴性K562细胞上重构并用sCD4染色。L112W和V141M两者而非V114M或M158I单取代分别增强了DP4与sCD4的结合(图1G)。重要的是，L112W/V141M双突变(DP4L112W/V141M)协同增强了DP4/CD4结合(图1G)。有趣的是，V114M和M158I单替换显现都对DP4L112W/V141M突变实现的增强结合具有负面影响(图1G)。以前的研究估计CD4和HLA II类之间的KD值>2mM。使用生物层干涉(BLI)结合测定，测量了DPRL112/V141M对CD4的亲和力。虽然在野生型DP4和CD4之间未检测到结合，但DP4L112W/V141M以8.9μM±1.1的KD与CD4结合(图1H和图1X至图1BK)。该值表示结合亲和力至少提高了200倍。此外，观察到的CD4和DP4L112W/V141M之间的亲和力高于人CD8和HLA I类之间的亲和力(约200μM)，并且与小鼠CD8和小鼠MHC I类之间的亲和力(约10μM)相当。为确认DP4L112W/V141M和CD4之间增强的结合导致增强的CD4+T细胞反应，使用DP4/WT1 TCR(克隆9)转导的CD4-和CD4+Jurkat 76T细胞作为应答细胞，对表达作为单个II类等位基因的野生型DP4或DP4L112W/V141M的人工APC(aAPC)的免疫刺激能力进行了比较。正如所料，携带DP4L112W/V141M的aAPC表现出以CD4依赖性方式的增强的T细胞刺激活性(图1I)。
接下来分析CD4的其他DP等位基因以确定L112W/V141M突变是否也增强结合。尽管野生型DP2、DP5或DP8均不与CD4结合，但当将L112W/V141M双突变引入这些分子的DPβ链中时，所有三种分子都与CD4强烈结合(图1J至图1W)。基于先前报道构建的结构模型(图2A至图2D)揭示，在DP4L112W/V141M-CD4复合物中，两个L112W/V141M突变明显在CD4的K35、Q40和T45的位置诱导疏水效应。这些结果表明，L112W/V141M突变可以增强至少所有4个所测试的DP等位基因的CD4结合。
实施例3–亲和力成熟的DP4L112W/V141M多聚体特异性染色同源TCR
为了确定DP4β的L112W/V141M双突变对DP4多聚体染色的影响，产生了可溶性DP4L112W/V141M单体，然后将其与抗His标签mAb进行二聚化。将原代T细胞分别用对MAGE-A3(克隆R12C9)、WT1(克隆9)和NY-ESO-1(克隆5B8)有特异性的三种不同的DP4限制性TCR分别转导，然后用同源DP4L112W/V141M二聚体染色。如图3A至图3P所示，每种DP4L112W/V141M二聚体特异性染色表达同源TCR的CD4+T细胞。分别用抗Vβ22mAb和抗NGFR mAb连同相应的DP4L112W/V141M二聚体对R12C9和克隆9转导的T细胞进行复合染色，证实几乎所有TCR转导的CD4+T细胞都成功地用相应的DP4L112W/V141M二聚体染色(图4A至图4H)。与常规的野生型DP4四聚体相比，我们的新的DP4L112W/V141M二聚体对DP4/WT1和DP4/NY-ESO-1T细胞两者的染色优于常规野生型DP4四聚体(图5A至图5P)。值得注意的是，即使在可用的最高浓度下，常规的野生型DP4/NY-ESO-1四聚体也无法染色同源T细胞(数据未显示)。
实施例4–DP4L112W/V141M二聚体技术稳健且通用
为了证明DP4L112W/V141M多聚体染色的稳健性和多功能性，针对来源于一系列肿瘤相关抗原的潜在DP4限制性肽的体外免疫原性进行了全面筛选(表3)。使用肽预测算法(NetMHC2 ver.2.2)预测了196种DP4限制性和肿瘤相关抗原来源的20-mer肽并进行化学合成(表3)。外周抗原特异性CD4+T细胞的频率一般很低；因此，将从6名DP4+黑素瘤患者分离的原代CD4+T细胞仅用DP4-aAPC刺激一次，分别用196种肽冲击并用同源DP4L112W/V141M二聚体染色。为了避免潜在的体外引发，使用了弱刺激条件。如图6A至图6F所示，103种预测的DP4肽至少在体外具有免疫原性。
为了验证二聚体染色结果，我们自二聚体阳性T细胞克隆了对CCND1219-238、HSD17B12225-244、LGSN296-315、MAGE-A2108-127和MUC5AC4922-4941有特异性的七种DP4限制性TCR基因(图7A至图7L和表5)。当在人CD4+TCR缺陷型T细胞中进行克隆型重构时，所有这些TCR都被同源DP4L112W/V141M二聚体成功染色(图8A至图8X)，并以DP4限制和抗原特异性方式发挥功能(图9A至图9G)。
在原代T细胞中分别表达的四种TCR中，三种TCR，即03-CCND1219-238、06-MAGE-A2108-127和05-MUC5AC4922-4941，能够识别内源性加工并且由DP4呈递的同源肽(图10A至图10Q和图11A至图11E)。重要的是，06-MAGE-A2108-127转导的原代T细胞能够以DP4和MAGE-A2依赖性方式识别黑素瘤细胞系(图12A至图12E)。
表5：DP4限制性TCR
与CD8相比，CD4作为辅助受体的作用和功能尚未完全阐明。这种信息缺乏主要是因为CD4与II类之间的结合异常弱，这极大地限制了对CD4与II类之间缔合作用的研究。在这项研究中，通过增强的CD4结合分离了亲和力成熟形式的HLA-DP4，即DP4L112W/V141M，并开发了新的DP4L112W/V141M二聚体技术，该技术引入了检测DP4限制性抗原特异性CD4+T细胞的稳健性和严格性。
使用这种DP4L112W/V141M二聚体技术，在体外全面研究了DP4限制性抗肿瘤T细胞反应，并鉴定了多种DP4限制性免疫原性肽和同源TCR基因。HLA-DP4是许多种族群体中最普遍的HLA等位基因，属于DP84Gly群。与其他II类分子不同，DP84Gly分子如DP4组成性地呈递来源于内源性来源的肽，而不管恒定链和HLA-DM表达如何。通过II类改善内源性肽的呈递与癌症患者的生存期改善相关。值得注意的是，首次人体II类限制性TCR基因疗法确实靶向DP4限制性MAGE-A3肽(参见例如Yao等人,J.Immunother.39:191-201(2016))。DP84Gly基因型(如DP2和DP4)充当抗中性粒细胞胞质自身抗体相关血管炎的风险等位基因。DP4分子可以组成性地呈递来源于内源性肿瘤相关抗原的肽，它可能比其他II类分子诱导更多的临床相关抗肿瘤反应，充当保护性II类等位基因。
为了鉴定亲和力成熟的II类分子，本实施例详细说明了β链而非α链中的多个突变，因为β链比α链具有更直接的与CD4的相互作用。α链和/或β链的另外的突变可能会进一步增强II类和CD4之间的结合。然而，使用这种具有过度CD4结合能力的可溶性II类分子可能会导致CD4+T细胞的非特异性染色，从而具有不利影响。
总之，CD4+T细胞在自身免疫性疾病的发展以及对病原体感染和癌症的防护中发挥着关键作用。本文所述的新型HLA II类多聚体技术可以更好地促进对HLA-DP等位基因的HLA II类限制性CD4+T细胞反应的研究。
实施例5–DP4L112W/V141M特异性和结合
分析了内源性(未转导)抗原特异性CD4+T细胞的DP4多聚体染色。新型DP4L112W/V141M二聚体对内源性TRPC1578-597特异性CD4+T细胞的阳性染色(图14A至图14B)比常规DP4dextramer(图14C至图14D)更强。与常规四聚体(图15C至图15D)或dextramer(图15E至图15F)相比，DP4L112W/V141M二聚体显示出显著改善的内源性(未转导)NY-ESO-1157-170特异性CD4+T细胞染色(图15A至图15B；表6)。
表6：DP4限制性TCR
接下来，在没有体外刺激的情况下，用对一系列病原体相关肽有特异性的DP4L112W /V141M二聚体对记忆CD4+T细胞进行离体染色。对于破伤风毒素948-968(TT948-968)、单纯疱疹病毒2型-UL21283-302(HSV-2-UL21283-302)和呼吸道合胞病毒糖蛋白162-175(RSV-GP162-175)，CD4+T细胞的一个小亚群被DP4L112W/V141M二聚体阳性染色(图16A至图16Y)。接下来，我们通过RSV-GP162-175(图17A至图17V)和TT948-968二聚体+CD4+T细胞的限制稀释来建立内源性(未转导)单细胞克隆(图18A至图18R)。这些T细胞克隆显示以抗原特异性方式产生IL-2(图17W和图18S)。从DP4L112W/V141M RSV-GP和TT二聚体+单细胞克隆中分离出多个TCRαβ对，包括一个优势对(表6)。在图17A至图17W和图18A至图18S中，通过RSV-GP162-175和TT948-968二聚体+细胞的限制稀释建立单细胞克隆。当将这些RSV-GP和TT二聚体+单细胞克隆分别用三种不同的DP4多聚体(DP4L112W/V141M二聚体、野生型DP4四聚体或野生型DP4 dextramer)染色时，DP4L112W /V141M二聚体比常规的野生型DP4 RSV-GP dextramer和野生型DP4 TT四聚体和dextramer(图19A至图19NN)显示出更好的RSV-GP-(c12和c39)和TT特异性克隆(c2和c9)染色。
方法
细胞
通过密度梯度离心获得外周单核细胞。先前已经报道了分别表达作为单个HLA等位基因的各种HLA II类基因连同CD80和CD83的基于K562的人工抗原呈递细胞(aAPC)(Butler,M.O.等人,PLoS One7,e30229(2012))。使HEK293T细胞在补充有10％FBS和50μg/ml庆大霉素的DMEM中生长。
肽/抗体
将合成肽以50mg/ml溶解在DMSO中。将以下抗体用于流式细胞术分析：APC-Cy7缀合的抗CD4和PE缀合的抗His标签。
HLA II类单体和二聚体的生成
使用基于293GPG细胞的逆转录病毒系统用α和β基因转染HEK293T细胞(参见Hirano,N.等人,Blood 107,1528-1536(2006)；Butler,M.O.等人,Clin Cancer Res 13，1857-1867(2007)；Hirano,N.等人,Blood 108,2662-2668(2006))并在补充有10％FBS和50μg/ml庆大霉素的DMEM中培养。对于DP4二聚体染色，使稳定分泌可溶性DP4L112W/V141M蛋白的HEK293T细胞生长至汇合，并将培养基更换为无血清293SFM II培养基(Thermo FisherScientific,Waltham,MA)。48小时后，收获条件培养基并使用Amicon超滤器(截留分子量(MWCO)10kDa)(MilliporeSigma,Burlington,MA)浓缩。然后在37℃下将含有可溶性HLA II类的上清液与100μg/ml所关注肽混合20-24小时，以进行体外肽交换。使用镍涂覆板和抗His标签生物素化mAb通过特异性ELISA测量单体浓度。使用PE缀合的抗His mAb以2:1的摩尔比在4℃下将可溶性HLA II类单体二聚化1.5小时以进行染色。
DP4限制性抗原特异性CD4+T细胞的刺激
将CD4+T细胞纯化并且用通过DP4限制性肽以10μg/ml冲击的表达DP4的aAPC刺激，并以20:1的E:T比率在200Gy下辐照。48小时后，将10IU/ml IL-2和10ng/ml IL-15添加到CD4+T细胞中。每2-3天补足补充有IL-2(10IU/ml)和IL-15(10ng/ml)的培养基。刺激2周后，对T细胞进行DP4L112W/V141M二聚体染色。
HLA II类二聚体、四聚体和dextramer染色
在多聚体染色分析中比较DP4四聚体和dextramer。将用抗原特异性TCR基因转导的原代CD4+T细胞在37℃下用50nM达沙替尼预处理30分钟，并在室温下用5-15μg/ml II类二聚体染色4-5小时。洗涤后，用APC-Cy7缀合的抗CD4 mAb对细胞表面分子进行复染。
来自黑素瘤患者的PBMC的未刺激CD4+T细胞的二聚体染色
将100万个CD4+T细胞纯化并在37℃下用50nM达沙替尼预处理30分钟。将细胞在室温下用5-15μg/ml II类二聚体染色4-5小时。洗涤后，用APC-Cy7缀合的抗CD4 mAb对细胞表面分子进行复染。通过流式细胞术确定二聚体+细胞的绝对计数。
DP4二聚体+T细胞的扩增和单T细胞克隆的建立。
为了扩增DP4L112W/V141M二聚体+T细胞，如上所述，将CD4+T细胞进行刺激并用DP4L112W/V141M二聚体染色。将二聚体+细胞通过使用抗PE磁珠进行分选，并通过使用以5-20:1的E:T比率在200Gy下辐照的人工APC/mOKT3进行扩增(参见Butler,M.O.等人,PLoS One 7,e30229(2012))。每2-3天补足补充有IL-2(10IU/ml)和IL-15(10ng/ml)的培养基。两到三周后，对T细胞进行DP4L112W/V141M二聚体染色。如前所述，通过有限稀释产生DP4L112W/V141M二聚体+单细胞克隆(参见Su,L.F.等人,Immunity 38,373-383(2013))。简而言之，在没有达沙替尼预处理的情况下，使用DP4L112W/V141M二聚体纯化和染色记忆CD4+T细胞。对二聚体+细胞进行分选，然后在96孔板中用在20Gy下辐照的来自多个同种异体供体的5μg/ml PHA-P和PBMC刺激。用IL-2(100IU/ml)和IL-15(10ng/ml)刺激1周后补充和补足培养基。两周后，将单细胞克隆用DP4L112W/V141M二聚体染色。
ELISPOT测定
如先前报道的，进行细胞因子ELISPOT测定(参见Yamashita,Y.等人,Nat Commun8,15244(2017)；Anczurowski,M.等人,Sci Rep 8,4804(2018))。
序列表
<110> 大学健康网络
<120> MHC II类分子及其使用方法
<130> 4285.010PC02/C-K/BMD
<150> US 62/880,496
<151> 2019-07-30
<150> US 63/029,111
<151> 2020-05-22
<160> 284
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 196
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 1
Arg Ala Thr Pro Glu Asn Tyr Leu Phe Gln Gly Arg Gln Glu Cys Tyr
1 5 10 15
Ala Phe Asn Gly Thr Gln Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Glu Glu Phe Ala Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val
35 40 45
Thr Glu Leu Gly Arg Pro Ala Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp
50 55 60
Ile Leu Glu Glu Lys Arg Ala Val Pro Asp Arg Met Cys Arg His Asn
65 70 75 80
Tyr Glu Leu Gly Gly Pro Met Thr Leu Gln Arg Arg Val Gln Pro Arg
85 90 95
Val Asn Val Ser Pro Ser Lys Lys Gly Pro Leu Gln His His Asn Leu
100 105 110
Leu Val Cys His Val Thr Asp Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Gln Val Arg
115 120 125
Trp Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Thr Ala Gly Val Val Ser Thr Asn
130 135 140
Leu Ile Arg Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Ile Leu Val Met Leu Glu
145 150 155 160
Met Thr Pro Gln Gln Gly Asp Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Thr
165 170 175
Ser Leu Asp Ser Pro Val Thr Val Glu Trp Lys Ala Gln Ser Asp Ser
180 185 190
Ala Arg Ser Lys
195
<210> 2
<211> 588
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Thr Thr Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Cys Gly Gly Cys Ala Gly Gly Ala Ala Thr Gly Cys Thr Ala Cys
35 40 45
Gly Cys Gly Thr Thr Thr Ala Ala Thr Gly Gly Gly Ala Cys Ala Cys
50 55 60
Ala Gly Cys Gly Cys Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Gly
65 70 75 80
Ala Thr Ala Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys Ala Ala Cys Cys Gly Gly
85 90 95
Gly Ala Gly Gly Ala Gly Thr Thr Cys Gly Cys Gly Cys Gly Cys Thr
100 105 110
Thr Cys Gly Ala Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Gly Thr Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ala Gly Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly
130 135 140
Ala Cys Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys
145 150 155 160
Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys Gly Gly Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly
165 170 175
Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys Ala Gly Ala Ala Gly Gly Ala Cys
180 185 190
Ala Thr Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Gly Cys
195 200 205
Gly Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Gly Gly Ala Cys Ala Gly
210 215 220
Gly Ala Thr Gly Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Ala Cys Ala Ala Cys
225 230 235 240
Thr Ala Cys Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Cys
245 250 255
Cys Cys Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Gly
260 265 270
Cys Cys Gly Ala Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Ala Gly Gly
275 280 285
Gly Thr Gly Ala Ala Thr Gly Thr Thr Thr Cys Cys Cys Cys Cys Thr
290 295 300
Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Cys Cys Thr Thr
305 310 315 320
Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Ala Cys Ala Ala Cys Cys Thr Gly
325 330 335
Cys Thr Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Gly Thr Gly Ala
340 345 350
Cys Gly Gly Ala Thr Thr Thr Cys Thr Ala Cys Cys Cys Ala Gly Gly
355 360 365
Cys Ala Gly Cys Ala Thr Thr Cys Ala Ala Gly Thr Cys Cys Gly Ala
370 375 380
Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Gly Ala Cys
385 390 395 400
Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Ala Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly
405 410 415
Gly Gly Thr Cys Gly Thr Gly Thr Cys Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys
420 425 430
Cys Thr Gly Ala Thr Cys Cys Gly Thr Ala Ala Thr Gly Gly Ala Gly
435 440 445
Ala Cys Thr Gly Gly Ala Cys Cys Thr Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr
450 455 460
Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Ala Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala
465 470 475 480
Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Gly
485 490 495
Gly Ala Gly Ala Thr Gly Thr Cys Thr Ala Cys Ala Cys Cys Thr Gly
500 505 510
Cys Cys Ala Ala Gly Thr Gly Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Cys Cys
515 520 525
Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala Gly Thr Cys Cys Thr Gly
530 535 540
Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala
545 550 555 560
Gly Gly Cys Ala Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Ala Thr Thr Cys Thr
565 570 575
Gly Cys Cys Cys Gly Gly Ala Gly Thr Ala Ala Gly
580 585
<210> 3
<211> 196
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Arg Ala Thr Pro Glu Asn Tyr Leu Phe Gln Gly Arg Gln Glu Cys Tyr
1 5 10 15
Ala Phe Asn Gly Thr Gln Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Glu Glu Phe Ala Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val
35 40 45
Thr Glu Leu Gly Arg Pro Ala Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp
50 55 60
Ile Leu Glu Glu Lys Arg Ala Val Pro Asp Arg Met Cys Arg His Asn
65 70 75 80
Tyr Glu Leu Gly Gly Pro Met Thr Leu Gln Arg Arg Val Gln Pro Arg
85 90 95
Val Asn Val Ser Pro Ser Lys Lys Gly Pro Leu Gln His His Asn Trp
100 105 110
Leu Val Cys His Val Thr Asp Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Gln Val Arg
115 120 125
Trp Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Thr Ala Gly Val Met Ser Thr Asn
130 135 140
Leu Ile Arg Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Ile Leu Val Met Leu Glu
145 150 155 160
Met Thr Pro Gln Gln Gly Asp Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Thr
165 170 175
Ser Leu Asp Ser Pro Val Thr Val Glu Trp Lys Ala Gln Ser Asp Ser
180 185 190
Ala Arg Ser Lys
195
<210> 4
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Met Met Arg Pro Ile Val Leu Val Leu Leu Phe Ala Thr Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala Arg Ala Thr Pro Glu Asn Tyr Leu Phe Gln Gly Arg Gln Glu Cys
20 25 30
Tyr Ala Phe Asn Gly Thr Gln Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Ile Tyr Asn
35 40 45
Arg Glu Glu Phe Ala Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala
50 55 60
Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Ala Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys
65 70 75 80
Asp Ile Leu Glu Glu Lys Arg Ala Val Pro Asp Arg Met Cys Arg His
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Asn Tyr Glu Leu Gly Gly Pro Met Thr Leu Gln Arg Arg Val Gln Pro
100 105 110
Arg Val Asn Val Ser Pro Ser Lys Lys Gly Pro Leu Gln His His Asn
115 120 125
Trp Leu Val Cys His Val Thr Asp Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Gln Val
130 135 140
Arg Trp Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Thr Ala Gly Val Met Ser Thr
145 150 155 160
Asn Leu Ile Arg Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Ile Leu Val Met Leu
165 170 175
Glu Met Thr Pro Gln Gln Gly Asp Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His
180 185 190
Thr Ser Leu Asp Ser Pro Val Thr Val Glu Trp Lys Ala Gln Ser Asp
195 200 205
Ser Ala Arg Ser Lys Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Ile Glu Ala Ala
210 215 220
Phe Leu Glu Arg Glu Asn Thr Ala Leu Glu Thr Arg Val Ala Glu Leu
225 230 235 240
Arg Gln Arg Val Gln Arg Leu Arg Asn Arg Val Ser Gln Tyr Arg Thr
245 250 255
Arg Tyr Gly Pro Leu Gly Gly Gly Lys
260 265
<210> 5
<211> 258
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
Met Met Val Leu Gln Val Ser Ala Ala Pro Arg Thr Val Ala Leu Thr
1 5 10 15
Ala Leu Leu Met Val Leu Leu Thr Ser Val Val Gln Gly Arg Ala Thr
20 25 30
Pro Glu Asn Tyr Leu Phe Gln Gly Arg Gln Glu Cys Tyr Ala Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Gln Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Ile Tyr Asn Arg Glu Glu Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Arg Pro Ala Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile Leu Glu
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
His Val Thr Asp Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Gln Val Arg Trp Phe Leu
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Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Ile Leu Val Met Leu Glu Met Thr Pro
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Ser Pro Val Thr Val Glu Trp Lys Ala Gln Ser Asp Ser Ala Arg Ser
210 215 220
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Gly Val Gly Ile Phe Met His Arg Arg Ser Lys Lys Val Gln Arg Gly
245 250 255
Ser Ala
<210> 6
<211> 192
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Ile Lys Ala Asp His Val Ser Thr Tyr Ala Ala Phe Val Gln Thr His
1 5 10 15
Arg Pro Thr Gly Glu Phe Met Phe Glu Phe Asp Glu Asp Glu Met Phe
20 25 30
Tyr Val Asp Leu Asp Lys Lys Glu Thr Val Trp His Leu Glu Glu Phe
35 40 45
Gly Gln Ala Phe Ser Phe Glu Ala Gln Gly Gly Leu Ala Asn Ile Ala
50 55 60
Ile Leu Asn Asn Asn Leu Asn Thr Leu Ile Gln Arg Ser Asn His Thr
65 70 75 80
Gln Ala Thr Asn Asp Pro Pro Glu Val Thr Val Phe Pro Lys Glu Pro
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100 105 110
Phe Pro Pro Val Leu Asn Val Thr Trp Leu Cys Asn Gly Glu Leu Val
115 120 125
Thr Glu Gly Val Ala Glu Ser Leu Phe Leu Pro Arg Thr Asp Tyr Ser
130 135 140
Phe His Lys Phe His Tyr Leu Thr Phe Val Pro Ser Ala Glu Asp Phe
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Tyr Asp Cys Arg Val Glu His Trp Gly Leu Asp Gln Pro Leu Leu Lys
165 170 175
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180 185 190
<210> 7
<211> 576
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 7
Ala Thr Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly
1 5 10 15
Thr Gly Thr Cys Cys Ala Cys Ala Thr Ala Cys Gly Cys Cys Gly Cys
20 25 30
Cys Thr Thr Cys Gly Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Cys Cys Ala Cys
35 40 45
Ala Gly Ala Cys Cys Cys Ala Cys Cys Gly Gly Cys Gly Ala Gly Thr
50 55 60
Thr Cys Ala Thr Gly Thr Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys Gly Ala
65 70 75 80
Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Gly Ala Gly Ala Thr Gly Thr Thr Cys
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100 105 110
Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Gly Thr Gly
115 120 125
Gly Cys Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Ala Gly Thr Thr Cys
130 135 140
Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Cys Thr
145 150 155 160
Thr Thr Gly Ala Gly Gly Cys Cys Cys Ala Gly Gly Gly Cys Gly Gly
165 170 175
Ala Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Ala Thr Ala Thr Cys Gly Cys Cys
180 185 190
Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Ala Ala Cys Cys
195 200 205
Thr Gly Ala Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys Cys Ala
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Gly Cys Gly Gly Ala Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Cys Cys
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Cys Ala Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys Gly Ala Thr Cys
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Cys Cys Cys Cys Cys Gly Ala Ala Gly Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr
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Gly Thr Thr Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Cys
275 280 285
Gly Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Cys
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Cys Cys Ala Ala Thr Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Gly
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Cys Cys Ala Cys Ala Thr Cys Gly Ala Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys
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Ala Gly Thr Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Cys Cys
405 410 415
Cys Ala Gly Ala Ala Cys Cys Gly Ala Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys
420 425 430
Thr Thr Cys Cys Ala Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Cys Ala Cys Thr
435 440 445
Ala Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Thr Thr Cys Gly Thr Gly Cys Cys
450 455 460
Cys Ala Gly Cys Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Thr Thr Cys
465 470 475 480
Thr Ala Cys Gly Ala Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Gly Thr Gly Gly
485 490 495
Ala Ala Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Gly Ala
500 505 510
Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Ala
515 520 525
Cys Ala Thr Thr Gly Gly Gly Ala Ala Gly Cys Cys Cys Ala Gly Gly
530 535 540
Ala Ala Cys Cys Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Cys Cys
545 550 555 560
Cys Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys Gly Ala Gly Ala Cys Ala
565 570 575
<210> 8
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Met Met Arg Pro Ile Val Leu Val Leu Leu Phe Ala Thr Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala Ile Lys Ala Asp His Val Ser Thr Tyr Ala Ala Phe Val Gln Thr
20 25 30
His Arg Pro Thr Gly Glu Phe Met Phe Glu Phe Asp Glu Asp Glu Met
35 40 45
Phe Tyr Val Asp Leu Asp Lys Lys Glu Thr Val Trp His Leu Glu Glu
50 55 60
Phe Gly Gln Ala Phe Ser Phe Glu Ala Gln Gly Gly Leu Ala Asn Ile
65 70 75 80
Ala Ile Leu Asn Asn Asn Leu Asn Thr Leu Ile Gln Arg Ser Asn His
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Thr Gln Ala Thr Asn Asp Pro Pro Glu Val Thr Val Phe Pro Lys Glu
100 105 110
Pro Val Glu Leu Gly Gln Pro Asn Thr Leu Ile Cys His Ile Asp Lys
115 120 125
Phe Phe Pro Pro Val Leu Asn Val Thr Trp Leu Cys Asn Gly Glu Leu
130 135 140
Val Thr Glu Gly Val Ala Glu Ser Leu Phe Leu Pro Arg Thr Asp Tyr
145 150 155 160
Ser Phe His Lys Phe His Tyr Leu Thr Phe Val Pro Ser Ala Glu Asp
165 170 175
Phe Tyr Asp Cys Arg Val Glu His Trp Gly Leu Asp Gln Pro Leu Leu
180 185 190
Lys His Trp Glu Ala Gln Glu Pro Ile Gln Met Pro Glu Thr Thr Glu
195 200 205
Thr Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Ile Arg Ala Ala Phe Leu Arg Gln
210 215 220
Arg Asn Thr Ala Leu Arg Thr Glu Val Ala Glu Leu Glu Gln Glu Val
225 230 235 240
Gln Arg Leu Glu Asn Glu Val Ser Gln Tyr Glu Thr Arg Tyr Gly Pro
245 250 255
Leu Gly Gly Gly Lys Gly Ser His His His His His His
260 265
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 9
Met Met Arg Pro Ile Val Leu Val Leu Leu Phe Ala Thr Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 10
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Met Asn Arg Gly Val Pro Phe Arg His Leu Leu Leu Val Leu Gln Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Pro Ala Ala Thr Gln Gly Lys Lys Val Val Leu Gly Lys
20 25 30
Lys Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Lys Lys Ser
35 40 45
Ile Gln Phe His Trp Lys Asn Ser Asn Gln Ile Lys Ile Leu Gly Asn
50 55 60
Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu Asn Asp Arg Ala
65 70 75 80
Asp Ser Arg Arg Ser Leu Trp Asp Gln Gly Asn Phe Pro Leu Ile Ile
85 90 95
Lys Asn Leu Lys Ile Glu Asp Ser Asp Thr Tyr Ile Cys Glu Val Glu
100 105 110
Asp Gln Lys Glu Glu Val Gln Leu Leu Val Phe Gly Leu Thr Ala Asn
115 120 125
Ser Asp Thr His Leu Leu Gln Gly Gln Ser Leu Thr Leu Thr Leu Glu
130 135 140
Ser Pro Pro Gly Ser Ser Pro Ser Val Gln Cys Arg Ser Pro Arg Gly
145 150 155 160
Lys Asn Ile Gln Gly Gly Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Leu Glu Leu
165 170 175
Gln Asp Ser Gly Thr Trp Thr Cys Thr Val Leu Gln Asn Gln Lys Lys
180 185 190
Val Glu Phe Lys Ile Asp Ile Val Val Leu Ala Phe Gln Lys Ala Ser
195 200 205
Ser Ile Val Tyr Lys Lys Glu Gly Glu Gln Val Glu Phe Ser Phe Pro
210 215 220
Leu Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu Thr Gly Ser Gly Glu Leu Trp Trp
225 230 235 240
Gln Ala Glu Arg Ala Ser Ser Ser Lys Ser Trp Ile Thr Phe Asp Leu
245 250 255
Lys Asn Lys Glu Val Ser Val Lys Arg Val Thr Gln Asp Pro Lys Leu
260 265 270
Gln Met Gly Lys Lys Leu Pro Leu His Leu Thr Leu Pro Gln Ala Leu
275 280 285
Pro Gln Tyr Ala Gly Ser Gly Asn Leu Thr Leu Ala Leu Glu Ala Lys
290 295 300
Thr Gly Lys Leu His Gln Glu Val Asn Leu Val Val Met Arg Ala Thr
305 310 315 320
Gln Leu Gln Lys Asn Leu Thr Cys Glu Val Trp Gly Pro Thr Ser Pro
325 330 335
Lys Leu Met Leu Ser Leu Lys Leu Glu Asn Lys Glu Ala Lys Val Ser
340 345 350
Lys Arg Glu Lys Ala Val Trp Val Leu Asn Pro Glu Ala Gly Met Trp
355 360 365
Gln Cys Leu Leu Ser Asp Ser Gly Gln Val Leu Leu Glu Ser Asn Ile
370 375 380
Lys Val Leu Pro Thr Trp Ser Thr Pro Val Gln Pro Met Ala Leu Ile
385 390 395 400
Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile
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Phe Phe Cys Val Arg Cys Arg His Arg Arg Arg Gln Ala Glu Arg Met
420 425 430
Ser Gln Ile Lys Arg Leu Leu Ser Glu Lys Lys Thr Cys Gln Cys Pro
435 440 445
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<210> 11
<400> 11
000
<210> 12
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
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1 5 10 15
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20 25
<210> 13
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
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1 5 10 15
Asn Asn Gly Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gly
20 25
<210> 14
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Asn Asn Asn Thr
1 5 10 15
Cys Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys Cys Thr Gly
20 25
<210> 15
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 15
Cys Ala Gly Gly Thr Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Asn Asn Asn Gly
1 5 10 15
Ala Cys Cys Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr
20 25
<210> 16
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Cys Ala Gly Ala Thr Cys Asn Asn Asn Gly Thr Gly Asn Asn Asn Cys
1 5 10 15
Thr Gly Gly Ala Ala Ala Thr Gly Ala Cys Cys
20 25
<210> 17
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Gly Gly Thr Cys Ala Thr Thr Thr Cys Cys Ala Gly Asn Asn Asn Cys
1 5 10 15
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20 25
<210> 18
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Cys Ala Val Cys Thr Leu Tyr Asn Phe Asn Lys Phe Tyr Phe
1 5 10
<210> 19
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 19
Cys Ala Val Ala Pro Tyr Asp Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu Tyr
1 5 10 15
Phe
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Cys Ala Gly Val Lys Asp Ser Asn Tyr Gln Leu Ile Trp
1 5 10
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 21
Cys Ala Leu Ser Asp Leu Ser Tyr Gly Gly Ala Thr Asn Lys Leu Ile
1 5 10 15
Phe
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
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1 5 10
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
Cys Ala Leu Ser Val Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile Phe
1 5 10
<210> 24
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Cys Ala Phe Met Lys Arg Ala Glu Thr Ser Gly Ser Arg Leu Thr Phe
1 5 10 15
<210> 25
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
Cys Ala Ser Leu Thr Asp Asn Asn Glu Gln Phe Phe
1 5 10
<210> 26
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Cys Ala Ser Ser Thr Gly Gln Gly Leu Glu Thr Gln Tyr Phe
1 5 10
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
Cys Ala Trp Ser Ser Tyr Asn Glu Gln Phe Phe
1 5 10
<210> 28
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
Cys Ala Ser Ser Lys Gly Gln Gly Leu Gly Asn Gln Pro Gln His Phe
1 5 10 15
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 29
Cys Ala Ser Arg Arg Asp Leu Ala Ala Phe Phe
1 5 10
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
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<223> 合成构建体
<400> 31
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<220>
<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 104
Gly Thr Val Ala Tyr Leu Ala Leu Arg Ile Ser Tyr Ser Leu Phe Thr
1 5 10 15
Ala Leu Arg Val
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 105
Val Phe Val Gln Ser Val Leu Pro Tyr Phe Val Ala Thr Lys Leu Ala
1 5 10 15
Lys Ile Arg Lys
20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 106
Glu Gly Ile Asp Phe Tyr Thr Ser Ile Thr Arg Ala Arg Phe Glu Glu
1 5 10 15
Leu Cys Ser Asp
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<220>
<223> 合成构建体
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Ser Phe Arg Asp Gly Asp Cys Ser Lys Gly Phe Phe Leu Val Ser Leu
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Leu Val Glu Ile
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<223> 合成构建体
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Ser Ser Glu Asn Lys Pro Ile Arg Ser Ser Tyr Phe Thr Phe Gln Leu
1 5 10 15
Gln Asn Ile Val
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Asp Asp Ala Ala Pro Arg Val Glu Gly Val Pro Val Ala Val His Lys
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His Ala Leu His
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<220>
<223> 合成构建体
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Thr Phe Gly Glu Met Ala Asp Ala Phe Lys Ser Asp Tyr Phe Asn Met
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Pro Val His Met
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Leu Leu Val Ile
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Tyr Asp Leu Leu
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Phe Glu Ile Tyr
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Met Leu Ile Lys
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Leu Leu Ala Arg
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Phe His Arg Val
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Leu Ser Ala Phe
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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Tyr Asn Tyr Ile Ala Ser Phe Phe Ile Glu Thr Gly Phe Cys Asp Ser
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<220>
<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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Phe Tyr Glu Phe
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<220>
<223> 合成构建体
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Cys Cys Lys Ile
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<220>
<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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Tyr Phe Pro Val Ile Phe Gly Lys Ala Ser Glu Phe Met Gln Val Ile
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<220>
<223> 合成构建体
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Tyr Glu Gln Val
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 133
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Tyr Lys Gln Val
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 134
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Leu Ser Ile Phe
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<220>
<223> 合成构建体
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
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<220>
<223> 合成构建体
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成构建体
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
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20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
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20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 141
Ile Leu Leu Gly Ile Phe Phe Leu Cys Trp Gly Pro Phe Phe Leu His
1 5 10 15
Leu Thr Leu Ile
20
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<211> 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 142
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1 5 10 15
Leu Thr Ser Ala
20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 143
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1 5 10 15
Thr Lys Arg Leu
20
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<211> 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 144
Val Ser Arg Ile Ser Ala Ile Phe Ser Thr Phe Ile Gly Glu His Tyr
1 5 10 15
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20
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<211> 20
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 145
Arg Ser Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn Asp Phe Phe
1 5 10 15
Asn Lys Ile Val
20
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<211> 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 146
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Leu Leu His Phe
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 147
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1 5 10 15
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20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 148
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1 5 10 15
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20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 149
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Tyr Asn Glu Val
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 150
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20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 151
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Tyr Asp Ser Glu
20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 152
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1 5 10 15
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 153
Lys Gly Arg Val Gly Pro Leu Leu Ala Cys Ile Ile Gly Thr Gln Phe
1 5 10 15
Arg Lys Leu Arg
20
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<211> 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成构建体
<400> 154
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1 5 10 15
Gln Ile Thr Arg
20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 155
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<220>
<223> 合成构建体
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 157
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成构建体
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20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 159
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20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成构建体
<400> 160
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成构建体
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 162
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1 5 10 15
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20
<210> 163
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 163
Met Arg Ala Leu Gln Ile Val Tyr Gly Ile Arg Leu Glu His Phe Tyr
1 5 10 15
Met Met Pro Val
20
<210> 164
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 164
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1 5 10 15
Ile Ile Arg Thr
20
<210> 165
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 165
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1 5 10 15
Trp Lys Leu Leu
20
<210> 166
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 166
Gln Ile Ala Ala Val Cys Arg Glu Cys Leu Gln Ala Leu Glu Phe Leu
1 5 10 15
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20
<210> 167
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 167
Val Glu Lys Arg Gly Ser Ala Lys Glu Leu Leu Gln His Pro Phe Leu
1 5 10 15
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20
<210> 168
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 168
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1 5 10 15
Leu Lys Leu Gln
20
<210> 169
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 169
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20
<210> 170
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 170
Arg Lys Gln Arg Arg Ser Arg Thr Thr Phe Thr Ala Glu Gln Leu Glu
1 5 10 15
Glu Leu Glu Arg
20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 171
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1 5 10 15
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20
<210> 172
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 172
Val Trp Asn Gly Pro Val Gly Val Phe Glu Trp Glu Ala Phe Ala Arg
1 5 10 15
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20
<210> 173
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 173
Gln Ala Gly Ala Gln Glu Ala Gln Pro Leu Gln Pro Ser His Phe Leu
1 5 10 15
Asp Ile Ser Glu
20
<210> 174
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 174
Asn Leu Pro Leu Val Ser Ser Thr Tyr Asp Leu Met Ser Ser Ala Tyr
1 5 10 15
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20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 175
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20
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<223> 合成构建体
<400> 176
Leu Ala Thr Gly Glu Lys Gly Phe Gly Tyr Lys Asn Ser Lys Phe His
1 5 10 15
Arg Val Ile Lys
20
<210> 177
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 177
Ser Leu Gln Cys Leu Gln Ala Leu Tyr Val Asp Ser Leu Phe Phe Leu
1 5 10 15
Arg Gly Arg Leu
20
<210> 178
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 178
Tyr Gln Cys Lys Val Cys Pro Ala Lys Phe Thr Gln Phe Val His Leu
1 5 10 15
Lys Leu His Lys
20
<210> 179
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 179
Glu Val Ala Ala Lys Thr Leu Pro Phe Tyr Lys Asp Tyr Phe Asn Val
1 5 10 15
Pro Tyr Pro Leu
20
<210> 180
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 180
Lys Leu Asn Leu Gly Thr Val Gly Phe Tyr Arg Thr Gln Tyr Ser Ser
1 5 10 15
Ala Met Leu Glu
20
<210> 181
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 181
Ser His Thr Asp Phe Tyr Glu Glu Ile Gln Glu Phe Val Lys Asp Val
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ile
20
<210> 182
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 182
Glu Leu Tyr Asn Arg Tyr Gln Gly Gly Phe Leu Ile Ser Arg Leu Ile
1 5 10 15
Lys Leu Ser Val
20
<210> 183
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 183
Cys Lys Leu Ser Ser Ala Arg Trp Gly Val Cys Trp Val Asn Phe Glu
1 5 10 15
Ala Leu Ile Ile
20
<210> 184
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 184
Ser Arg Leu Gly Pro Thr Leu Met Cys Leu Leu Ser Thr Gln Phe Lys
1 5 10 15
Arg Leu Arg Asp
20
<210> 185
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 185
Gln Gly Lys Asp Val Leu Met Asn Asn Gly Leu Lys Met Asp Gln Phe
1 5 10 15
Cys Lys Glu His
20
<210> 186
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 186
Asn Thr Lys Phe Ser Glu Glu Glu Leu Cys Ser Trp Tyr Gln Ser Phe
1 5 10 15
Leu Lys Asp Cys
20
<210> 187
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 187
Met Glu Lys Asp Ser Leu Pro Arg Phe Val Arg Ser Glu Phe Tyr Gln
1 5 10 15
Glu Leu Ile Lys
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 188
Tyr Gly Leu Ala Ser Phe Lys Ser Phe Leu Lys Ser Glu Phe Ser Glu
1 5 10 15
Glu Asn Leu Glu
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 189
Cys Gly Lys Thr Cys Leu Leu Ile Val Phe Ser Lys Asp Gln Phe Pro
1 5 10 15
Glu Val Tyr Val
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 190
Pro Asp Tyr Asp Val Trp Ile Leu Met Thr Val Val Gly Thr Ile Phe
1 5 10 15
Val Ile Ile Leu
20
<210> 191
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 191
Tyr Leu Thr Pro Asp Leu Trp Lys Glu Thr Val Phe Thr Lys Ser Pro
1 5 10 15
Tyr Gln Glu Phe
20
<210> 192
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 192
Lys Val Lys Arg Gln Phe Val Glu Phe Thr Ile Lys Glu Ala Ala Arg
1 5 10 15
Phe Lys Lys Val
20
<210> 193
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 193
Met Asp Gln Glu Phe Gly Val Ser Thr Leu Val Glu Glu Glu Phe Gly
1 5 10 15
Gln Arg Arg Gln
20
<210> 194
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 194
Arg Gln Lys Met Ser Glu Ile Phe Pro Leu Thr Glu Glu Leu Trp Leu
1 5 10 15
Glu Trp Leu His
20
<210> 195
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 195
Leu Ser Asn Val Glu Val Phe Met Val Ile Ser Phe Ser Ser Tyr Lys
1 5 10 15
Leu Phe Lys Ser
20
<210> 196
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 196
Thr Leu Arg Asp Lys Ala Ser Gly Val Cys Ile Asp Ser Glu Phe Phe
1 5 10 15
Leu Thr Thr Ala
20
<210> 197
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 197
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1 5 10 15
Met Lys Lys Lys
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 198
His His His Leu Leu Gln Glu Tyr Glu Ile Glu Arg Ser Phe Phe Leu
1 5 10 15
Arg Met Lys Cys
20
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 199
Leu Leu Val Pro Leu Leu Leu Ser Leu Phe Val Leu Gly Leu Phe Leu
1 5 10 15
Trp Phe Leu Lys
20
<210> 200
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 200
Val Gln Arg Leu Trp Val Ser Arg Leu Leu Arg His Arg Lys Ala Gln
1 5 10 15
Leu Leu Leu Val
20
<210> 201
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 201
Ser Gln Ile Ala Tyr Thr Ser Leu Ser Leu Pro His Tyr Gly Ser Ala
1 5 10 15
Phe Pro Ser Ile
20
<210> 202
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 202
Asn Phe Glu Ser Met Ser Leu Gly Ser Phe Ser Ser Ser Ser Ala Leu
1 5 10 15
Asp Arg Asp Leu
20
<210> 203
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 203
Arg Glu Gln Pro Asp Asn Ile Pro Ala Phe Ala Ala Ala Tyr Phe Glu
1 5 10 15
Ser Leu Leu Glu
20
<210> 204
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 204
Lys Ala Phe Asp Asp Ile Ala Lys Tyr Phe Ser Lys Glu Glu Trp Glu
1 5 10 15
Lys Met Lys Ala
20
<210> 205
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 205
Lys Ala Phe Asp Asp Ile Ala Lys Tyr Phe Ser Lys Lys Glu Trp Glu
1 5 10 15
Lys Met Lys Ser
20
<210> 206
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 206
Leu Leu Gly Thr Ile His Ala Leu Ile Phe Ala Trp Asn Lys Trp Ile
1 5 10 15
Asp Ile Lys Gln
20
<210> 207
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 207
Phe Leu Pro Ile Val Val Leu Ile Phe Lys Ser Ile Leu Phe Leu Pro
1 5 10 15
Cys Leu Arg Lys
20
<210> 208
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 208
Pro Ile Lys Ile Ala Ala Ile Ile Ala Ser Leu Thr Phe Leu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Leu Arg Glu
20
<210> 209
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 209
Lys Ile Ala Ala Ile Ile Ala Ser Leu Thr Phe Leu Tyr Thr Leu Leu
1 5 10 15
Arg Glu Val Ile
20
<210> 210
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 210
Leu Ala Leu Gly Leu Phe Val Cys Phe Tyr Ala Tyr Asn Phe Val Arg
1 5 10 15
Asp Val Leu Gln
20
<210> 211
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 211
Ala Val Thr Asp His Pro Asp Arg Leu Trp Ala Trp Glu Lys Phe Val
1 5 10 15
Tyr Leu Asp Glu
20
<210> 212
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 212
Leu Arg Ser Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg
1 5 10 15
Leu Phe Phe Tyr
20
<210> 213
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 213
Arg Ser Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu
1 5 10 15
Phe Phe Tyr Arg
20
<210> 214
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 214
Leu Asp Ser Leu Gly Gln Trp Asn Tyr Thr Phe Ala Ser Thr Glu Gly
1 5 10 15
Gln Tyr Leu Leu
20
<210> 215
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 215
Leu Ser Asn Asn Ser Leu Val Ser Leu Thr Tyr Val Ser Phe Arg Asn
1 5 10 15
Leu Thr His Leu
20
<210> 216
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 216
Ala Pro Lys Ser Gln Phe Gly Arg Ile Ile His Thr Pro Phe Met Lys
1 5 10 15
Phe Ile Ile His
20
<210> 217
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 217
Ile Ile His Gly Ala Ser Tyr Phe Thr Phe Leu Leu Leu Leu Asn Leu
1 5 10 15
Tyr Ser Leu Val
20
<210> 218
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 218
Asn Gln Leu Ser Phe Val Met Asn Ser Leu Tyr Leu Ala Thr Phe Ala
1 5 10 15
Leu Lys Val Val
20
<210> 219
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 219
Gln Gln Ser Asn Asp Thr Phe His Ser Phe Ile Gly Thr Cys Phe Ala
1 5 10 15
Leu Phe Trp Tyr
20
<210> 220
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 220
Pro Leu Leu Thr Thr Lys Arg Val Phe Trp Lys Gly Val Leu Glu Glu
1 5 10 15
Leu Leu Trp Phe
20
<210> 221
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 221
Asp Pro Ile Phe Leu Leu His His Ala Phe Val Asp Ser Ile Phe Glu
1 5 10 15
Gln Trp Leu Arg
20
<210> 222
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 222
Gln Arg Cys Leu Arg Asp Ile Leu Asp Gly Phe Phe Pro Ser Glu Leu
1 5 10 15
Gln Arg Leu Tyr
20
<210> 223
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 223
Leu Ala Ala Ala Ser Gly Gln Asn Arg Met Thr Gln Gly Gln His Phe
1 5 10 15
Leu Gln Lys Val
20
<210> 224
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 224
Arg Arg Cys Asp Arg Val Thr Arg Leu Glu Phe Leu Pro Phe His Phe
1 5 10 15
Leu Leu Ala Thr
20
<210> 225
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 225
Cys Ala Thr Trp Lys Val Ile Cys Lys Ser Cys Ile Ser Gln Thr Pro
1 5 10 15
Gly Ile Asn Leu
20
<210> 226
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 226
Leu Gln Ile Gln Ser Leu Ile Ser Cys Trp Ala Phe Trp Thr Thr Trp
1 5 10 15
Thr Gln Ser Cys
20
<210> 227
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 227
Val Ser Thr Ala Asn Val Gly Asp Ile Leu Ser Ala Ala Arg Leu Leu
1 5 10 15
Glu Ile Pro Ala
20
<210> 228
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 228
Leu Pro Lys Pro Pro Lys Pro Val Ser Lys Met Arg Met Ala Thr Pro
1 5 10 15
Leu Leu Met Gln Ala Leu Pro Met
20
<210> 229
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 229
Lys Lys Leu Leu Thr Gln His Phe Val Gln Glu Asn Tyr Leu Glu Tyr
1 5 10 15
<210> 230
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 230
Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His
1 5 10 15
Ser Arg Lys His Thr
20
<210> 231
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 231
Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe
1 5 10
<210> 232
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 232
Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg
1 5 10 15
Arg Ser Leu Ala
20
<210> 233
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 233
Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr
1 5 10
<210> 234
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 234
Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln
1 5 10 15
Ala Ser Gln Glu
20
<210> 235
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 235
Thr Gly Ser Asn Cys Pro Pro His Ile Glu Asn Phe Ser Asp Ile Asp
1 5 10 15
Met Gly Glu Ile
20
<210> 236
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 236
Glu Thr Leu Leu Arg Ala Val Glu Ser Tyr Leu Leu
1 5 10
<210> 237
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 237
Arg Gly Tyr Phe Lys Met Arg Thr Gly Lys Ser Ser Ile Met Arg Ser
1 5 10 15
<210> 238
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 238
Met Met Arg Pro Ile Val Leu Val Leu Leu Phe Ala Thr Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala Arg Ala Thr Pro Glu Asn Tyr Leu Phe Gln Gly Arg Gln Glu Cys
20 25 30
Tyr Ala Phe Asn Gly Thr Gln Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Ile Tyr Asn
35 40 45
Arg Glu Glu Phe Ala Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala
50 55 60
Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Ala Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys
65 70 75 80
Asp Ile Leu Glu Glu Lys Arg Ala Val Pro Asp Arg Met Cys Arg His
85 90 95
Asn Tyr Glu Leu Gly Gly Pro Met Thr Leu Gln Arg Arg Val Gln Pro
100 105 110
Arg Val Asn Val Ser Pro Ser Lys Lys Gly Pro Leu Gln His His Asn
115 120 125
Leu Leu Val Cys His Val Thr Asp Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Gln Val
130 135 140
Arg Trp Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Thr Ala Gly Val Val Ser Thr
145 150 155 160
Asn Leu Ile Arg Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Ile Leu Val Met Leu
165 170 175
Glu Met Thr Pro Gln Gln Gly Asp Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His
180 185 190
Thr Ser Leu Asp Ser Pro Val Thr Val Glu Trp Lys Ala Gln Ser Asp
195 200 205
Ser Ala Arg Ser Lys Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Ile Glu Ala Ala
210 215 220
Phe Leu Glu Arg Glu Asn Thr Ala Leu Glu Thr Arg Val Ala Glu Leu
225 230 235 240
Arg Gln Arg Val Gln Arg Leu Arg Asn Arg Val Ser Gln Tyr Arg Thr
245 250 255
Arg Tyr Gly Pro Leu Gly Gly Gly Lys Gly Ser Gly Leu Asn Asp Ile
260 265 270
Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
275 280
<210> 239
<211> 849
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 239
Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gly Gly Cys Cys Cys Ala Thr Cys Gly
1 5 10 15
Thr Gly Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Thr Thr
20 25 30
Cys Gly Cys Cys Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Cys Cys Cys Thr Gly
35 40 45
Gly Cys Cys Ala Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys Cys Cys Gly
50 55 60
Ala Gly Ala Ala Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Cys Ala
65 70 75 80
Gly Gly Gly Cys Cys Gly Gly Cys Ala Gly Gly Ala Ala Thr Gly Cys
85 90 95
Thr Ala Cys Gly Cys Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys Gly Gly Cys Ala
100 105 110
Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Gly Ala
115 120 125
Ala Cys Gly Gly Thr Ala Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys Ala Ala Cys
130 135 140
Cys Gly Gly Gly Ala Ala Gly Ala Gly Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala
145 150 155 160
Gly Ala Thr Thr Cys Gly Ala Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Gly Thr
165 170 175
Gly Gly Gly Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys Ala Gly Ala Gly Cys Cys
180 185 190
Gly Thr Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Cys Ala
195 200 205
Gly Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Ala Gly Thr Ala
210 215 220
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys Ala Gly Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala
245 250 255
Ala Gly Cys Gly Gly Gly Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Gly Ala
260 265 270
Cys Cys Gly Gly Ala Thr Gly Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Ala Cys
275 280 285
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
Ala Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Gly Cys Ala Gly Ala Ala Cys Cys
530 535 540
Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr
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565 570 575
Gly Thr Gly Cys Thr Ala Gly Cys Thr Thr Thr Cys Cys Ala Gly Ala
580 585 590
Ala Gly Gly Cys Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Ala Gly Thr
595 600 605
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675 680 685
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Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys
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Ala Ala Gly Thr Cys Thr Thr Gly Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr
725 730 735
Thr Thr Gly Ala Cys Cys Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala
740 745 750
Gly Gly Ala Ala Gly Thr Gly Thr Cys Thr Gly Thr Ala Ala Ala Ala
755 760 765
Cys Gly Gly Gly Thr Thr Ala Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Cys
770 775 780
Cys Thr Ala Ala Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly Gly
785 790 795 800
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805 810 815
Cys Ala Cys Cys Thr Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys
820 825 830
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835 840 845
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995 1000 1005
Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Cys Ala
1010 1015 1020
Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Cys Gly Ala Ala Gly Cys Gly Gly
1025 1030 1035
Gly Ala Gly Ala Ala Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Thr Gly Gly
1040 1045 1050
Gly Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly
1055 1060 1065
Gly Cys Gly Gly Gly Gly Ala Thr Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly
1070 1075 1080
Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Gly Thr Gly Ala Cys
1085 1090 1095
Thr Cys Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly Gly Thr Cys Cys Thr Gly
1100 1105 1110
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Thr Cys
1115 1120 1125
Ala Ala Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Cys Cys Cys Ala Cys Ala
1130 1135 1140
Thr Gly Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys
1145 1150 1155
Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Thr
1160 1165 1170
Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Thr Gly Ala
1175 1180 1185
<210> 246
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 246
Met Met Arg Pro Ile Val Leu Val Leu Leu Phe Ala Thr Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala Lys Lys Val Val Leu Gly Lys Lys Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr
20 25 30
Cys Thr Ala Ser Gln Lys Lys Ser Ile Gln Phe His Trp Lys Asn Ser
35 40 45
Asn Gln Ile Lys Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly
50 55 60
Pro Ser Lys Leu Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg Ser Leu Trp Asp
65 70 75 80
Gln Gly Asn Phe Pro Leu Ile Ile Lys Asn Leu Lys Ile Glu Asp Ser
85 90 95
Asp Thr Tyr Ile Cys Glu Val Glu Asp Gln Lys Glu Glu Val Gln Leu
100 105 110
Leu Val Phe Gly Leu Thr Ala Asn Ser Asp Thr His Leu Leu Gln Gly
115 120 125
Gln Ser Leu Thr Leu Thr Leu Glu Ser Pro Pro Gly Ser Ser Pro Ser
130 135 140
Val Gln Cys Arg Ser Pro Arg Gly Lys Asn Ile Gln Gly Gly Lys Thr
145 150 155 160
Leu Ser Val Ser Gln Leu Glu Leu Gln Asp Ser Gly Thr Trp Thr Cys
165 170 175
Thr Val Leu Gln Asn Gln Lys Lys Val Glu Phe Lys Ile Asp Ile Val
180 185 190
Val Leu Ala Phe Gln Lys Ala Ser Ser Ile Val Tyr Lys Lys Glu Gly
195 200 205
Glu Gln Val Glu Phe Ser Phe Pro Leu Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu
210 215 220
Thr Gly Ser Gly Glu Leu Trp Trp Gln Ala Glu Arg Ala Ser Ser Ser
225 230 235 240
Lys Ser Trp Ile Thr Phe Asp Leu Lys Asn Lys Glu Val Ser Val Lys
245 250 255
Arg Val Thr Gln Asp Pro Lys Leu Gln Met Gly Lys Lys Leu Pro Leu
260 265 270
His Leu Thr Leu Pro Gln Ala Leu Pro Gln Tyr Ala Gly Ser Gly Asn
275 280 285
Leu Thr Leu Ala Leu Glu Ala Lys Thr Gly Lys Leu His Gln Glu Val
290 295 300
Asn Leu Val Val Met Arg Ala Thr Gln Leu Gln Lys Asn Leu Thr Cys
305 310 315 320
Glu Val Trp Gly Pro Thr Ser Pro Lys Leu Met Leu Ser Leu Lys Leu
325 330 335
Glu Asn Lys Glu Ala Lys Val Ser Lys Arg Glu Lys Ala Val Trp Val
340 345 350
Leu Asn Pro Glu Ala Gly Met Trp Gln Cys Leu Leu Ser Asp Ser Gly
355 360 365
Gln Val Leu Leu Glu Ser Asn Ile Lys Val Leu Pro Thr Trp Gly Ser
370 375 380
His His His His His His His His His His
385 390
<210> 247
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 247
Cys Val Val Ser Gly Gly Val Asn Gly Gly Ala Thr Asn Lys Leu Ile
1 5 10 15
Phe
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<220>
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<223> 合成构建体
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Cys Ala Ala Ser Val Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu Tyr Phe
1 5 10 15
<210> 250
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1 5 10
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<220>
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Cys Ala Ser Ser Leu Pro Ser Gly Gly Ala Pro Gly Thr Gly Glu Leu
1 5 10 15
Phe Phe
<210> 265
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 265
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1 5 10 15
<210> 266
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<212> PRT
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<220>
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Cys Ser Val Gln Gly Gly Leu Asp Ser Asn Tyr Gly Tyr Thr Phe
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Cys Ala Ala Ser Val Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu Tyr Phe
1 5 10 15
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1 5 10 15
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<223> 合成构建体
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1 5 10 15
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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1 5 10 15
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1 5 10
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<211> 14
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1 5 10
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<223> 合成构建体
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Cys Ala Gly Arg Ser Gly Gly Ser Asn Tyr Lys Leu Thr Phe
1 5 10
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成构建体
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1 5 10 15
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Cys Ala Gly Arg Ser Gly Gly Ser Asn Tyr Lys Leu Thr Phe
1 5 10
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 284
Cys Ala Ser Ser Ile Ala Thr Thr Asn Thr Gly Glu Leu Phe Phe
1 5 10 15

Claims (9)

1.一种包含DP β链的HLA II类分子，其中所述DP β链包含胞外结构域，其中所述胞外结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.如权利要求1所述的HLA II类分子，其中所述DP β链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 4所示。
3.如权利要求1或2所述的HLA II类分子，其还包含DP α链。
4.如权利要求3所述的HLA II类分子，其中所述DP α链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 6所示。
5. 如权利要求3所述的HLA II类分子，其中所述DP α链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 8所示。
6. 如权利要求1至5中任一项所述的HLA II类分子，其为DP1等位基因。
7. 如权利要求1至6中任一项所述的HLA II类分子，其中所述DP β链与细胞的膜结合。
8. 如权利要求3至7中任一项所述的HLA II类分子，其中所述DP α链与细胞的膜结合。
9. 如权利要求1和3至8中任一项所述的HLA II类分子，其中所述DP β链包含信号肽。
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