[go: up one dir, main page]

CN114085236A - 醛结合物和其用途 - Google Patents

醛结合物和其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN114085236A
CN114085236A CN202111347099.9A CN202111347099A CN114085236A CN 114085236 A CN114085236 A CN 114085236A CN 202111347099 A CN202111347099 A CN 202111347099A CN 114085236 A CN114085236 A CN 114085236A
Authority
CN
China
Prior art keywords
independently selected
nitrogen
optionally substituted
sulfur
oxygen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111347099.9A
Other languages
English (en)
Inventor
托德·布雷迪
斯科特·杨
威廉姆·A·金尼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aldeyra Therapeutics Inc
Original Assignee
Aldeyra Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aldeyra Therapeutics Inc filed Critical Aldeyra Therapeutics Inc
Publication of CN114085236A publication Critical patent/CN114085236A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system having sulfur as a ring hetero atom, e.g. ticlopidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4906—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4926—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom having six membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/494—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with more than one nitrogen as the only hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/69—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing fluorine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D265/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D265/04—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines
    • C07D265/12—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D265/14—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D265/16—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring with only hydrogen or carbon atoms directly attached in positions 2 and 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/06—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/14—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本申请涉及醛结合物和其用途。本发明提供了通过使用伯胺清除如MDA和HNE等毒性醛来治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的疾病、病症或病状和/或降低其风险的化合物和其使用方法，所述疾病、病症或病状包括眼部病症、皮肤病症、与糜烂性毒剂的有害效应相关的病状，以及自体免疫、发炎、神经和心血管疾病。

Description

醛结合物和其用途
本申请是申请日为2016年8月22日、申请号为201680059226.6，发明名称为醛结合物和其用途的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本申请涉及醛结合物和其用途。
背景技术
细胞在代谢和发炎过程中产生产生了毒性醛类，如丙二醛(MDA)和4-羟基-2-壬烯醛(HNE或4HNE)。这些醛类对蛋白质、碳水化合物、脂质和DNA具有高度反应性，从而产生经化学修饰的生物分子，激活炎性介体，如NF-κB，且损伤多种器官。举例来说，视黄醛能够与磷脂酰乙醇胺(PE)反应而形成称为A2E的高毒性化合物，其是脂褐质(lipofuscin)的组分，脂褐质被认为涉及年龄相关性黄斑变性(AMD)的发展和进展。许多身体防御机制的功能是清除或降低毒性醛类的含量。新颖的小分子治疗剂能够用于清除视网膜中“逃逸”的视黄醛，从而减少A2E形成并且减轻AMD风险(参见WO2006/12794)。
醛类牵涉到多种多样的病理学病状，如干眼、白内障、圆锥形角膜、富克氏角膜内皮营养不良(Fuch's endothelial dystrophy in the cornea)、葡萄膜炎、过敏结膜炎、眼瘢痕类天疱疮、与屈光性角膜切除术(PRK)愈合或其它角膜愈合相关的病状、与泪脂质降解或泪腺机能不良相关的病状、炎性眼病状(如眼部红斑痤疮(伴有/不伴有睑板腺机能不良))，和非眼部病症或病状，如皮肤癌、牛皮癣、接触性皮炎、异位性皮肤炎、寻常痤疮、休格连-拉森综合症(Sjogren-Larsson Syndrome)、局部缺血再灌注损伤、炎症、糖尿病、神经变性(例如帕金森病(Parkinson's disease))、硬皮病、肌肉萎缩性侧索硬化、自体免疫病症(例如狼疮)、心血管病症(例如动脉粥样硬化)，以及与糜烂性毒剂的有害效应相关的病状(内格雷-萨尔瓦格雷(Negre-Salvagre)等人(2008)，英国药理学杂志(Br J Pharmacol.)153(1):6-20；中村(Nakamura)等人，2007，眼科研究与视力学(Invest Ophthalmol VisSci)48:1552；巴蒂斯塔(Batista)等人，2012，分子视觉(Molecular Vision)18:194；肯尼(Kenney)等人，2003；巴兹(Baz)等人，2004，国际皮肤病学杂志(Int J Dermatol)43:494；奥古斯丁(Augustin)等人，1994，格拉芙临床与实验眼科学(Graefe’s Clin ExpOphthalmol.)233:694)。因此，减少或消除醛类应该改善这些病理学病状的症状并且减缓其进展。
MDA、HNE和其它毒性醛类通过多种代谢机制产生，所述代谢机制包括：脂肪醇、鞘脂、糖脂、植醇、脂肪酸、二十碳四烯酸代谢(里索(Rizzo)等人，2007，分子遗传学和代谢(Mol Genet Metab.)90(1):1-9)、多元胺代谢(伍德(Wood)等人(2006))、脂质过氧化反应、氧化性代谢(布迪(Buddi)等人，2002，组织化学与细胞化学杂志(J Histochem Cytochem.)50(3):341-51；周(Zhou)等人，2005，实验眼科研究(Exp Eye Res.)80(4):567-80；周等人，2005，生物化学杂志(J Biol Chem.)280(27):25377-82)，和葡萄糖代谢(波齐(Pozzi)等人，2009，美国肾脏病学会杂志(J Am Soc Nephrol.)20(10):2119-25)。醛类能够与蛋白质、磷脂、碳水化合物和DNA上的伯氨基和其它化学部分发生交联，在许多情况下引起中毒后果，如突变诱发和癌发生(玛莱特(Marnett)，2002，毒理学(Toxicology)181-182:219-22.)。MDA与病变角膜、圆锥形角膜、大疱和其它角膜病以及富克氏角膜内皮营养不良相关(布迪等人，同上)。另外，皮肤病，例如休格连-拉森综合症，可能与如十八醛和十六醛等脂肪醛的积聚有关(里索(Rizzo)等人，2010，皮肤病症相关档案研究(Arch Dermatol Res.)302(6):443-51)。另外，增强的脂质过氧化反应和所引起的醛产生与糜烂性毒剂的毒性效应相关(舒托(Sciuto)等人，2004，吸入毒理学(Inhal Toxicol.)16(8):565-80；和帕耳(Pal)等人，2009，自由基生物学和医药(Free Radic Biol Med.)47(11):1640-51)。
所属领域中尚未提出通过投与充当醛(例如MDA和/或HNE)清除剂的小分子治疗剂来治疗与毒性醛相关的各种病状。因此，存在着治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的疾病或病症和/或减少其风险的需求。本发明解决了此类需求。
相应地，仍存在治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的疾病或病症和/或减少其风险的需求。
发明内容
现已发现，本发明的化合物和其组合物适用于治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的疾病、病症或病状和/或减少其风险。此类化合物具有通式I且通过氨基甲醇与生物学相关醛的反应产生：
Figure BDA0003354581690000031
或其医药学上可接受的盐，其中R1和骨架各如本文所定义且在实施例中描述。
附图说明
图1描绘了投与单次剂量的NS2之后，野生型小鼠血清、脑和肝脏中的NS2含量与NS2-SSA加成物形成时间过程的曲线。
图2描绘了野生型小鼠和缺乏SSADH的小鼠的组织中的NS2-SSA加成物含量。
图3描绘了NS2作为单次剂量投与SSADH基因剔除的小鼠之后，NS2-SSA加成物在脑、肝脏和肾脏中的含量。
图4描绘了经媒剂或NS2处理的野生型和SSADH剔除式小鼠的组织中的GHB、SSA和D-2-HG含量。
图5描绘了相较于野生型小鼠，接受一次剂量的10mg/kg NS2或媒剂(IP)的SSADH剔除式小鼠(22-23日龄)的GHB/SSA和D-2-HG/SSA含量。处理之后8小时，收集脑、肝脏和肾脏(统计分析：司徒登氏t检验(student's t test)(**p<0.01))。
图6描绘了经媒剂或NS2处理的野生型和SSADH剔除式小鼠的组织中的NS2-SSA加成物含量。
图7描绘了心脏纤维母细胞的显微照片，所述心脏纤维母细胞经波形蛋白(红色)和α-SMA(绿色)与DAPI(蓝色)染色以标示核：(A)初始接种时的细胞展示不含α-SMA的小圆形细胞；(B)未刺激的细胞展示形态发生显著变化和α-SMA增加；和(C)经H2O2刺激的细胞展示α-SMA出现强烈的上调和细胞形状的显著变化。
图8描绘了使用以下处理的经α-SMA(绿色)、波形蛋白(红色)和DAPI(蓝色)染色的未刺激心脏纤维母细胞的显微照片：(A)和(E)无NS2；(B)和(F)10μM NS2；(C)和(G)100μMNS2；(D)和(H)1mM NS2。E-H组的细胞亚群放大率较高以展示出在NS2处理的情况下形态的变化。
图9描绘了使用以下处理的经α-SMA(绿色)、波形蛋白(红色)和DAPI(蓝色)染色的经H2O2刺激的心脏纤维母细胞的显微照片：(A)和(E)无NS2；(B)和(F)10μM NS2；(C)和(G)100μM NS2；(D)和(H)1mM NS2。E-H组的细胞亚群放大率较高以展示出在NS2处理的情况下形态的变化。
图10描绘：(A)心脏纤维母细胞中的α-SMA含量的西方印迹，以及(B)NS2处理对未刺激和经H2O2刺激的细胞中的α-SMA的影响，其中NS2处理表明未刺激细胞中的α-SMA含量在所有剂量下均降低，而经H2O2刺激的细胞中的α-SMA含量在较高剂量下降低。
图11描绘了经DAP(蓝色)和NFκB(红色)染色的细胞的显微照片且展示出NFκB迁移到未刺激的心脏纤维母细胞的核：(A)个别通道的检查表明NS2处理限制了NFκB迁移；和(B)具有核NFκB的细胞％的统计分析。1mM NS2无法得到足够的细胞供分析用且因此不予以展现。
图12描绘：(A)未刺激和经刺激的心脏纤维母细胞中的NFκB的西方印迹；和(B)统计分析表明NS2在所有剂量下均使未刺激的细胞中的NFκB含量降低且在较高剂量下使经H2O2刺激的细胞中的NFκB含量降低。
图13描绘：(A)未刺激和经H2O2刺激的心脏纤维母细胞中的IL-1β含量的西方印迹；和(B)IL-1β含量的密度，表明NS2在所有剂量下使未刺激的纤维母细胞与经H2O2刺激的纤维母细胞中的IL-1β含量均明显降低。
图14描绘了MAPK蛋白质家族成员的西方印迹：(A)ERK和磷酸化ERK；(B)JNK和磷酸化JNK；和(C)p38和磷酸化p38。未发现磷酸化发生明显的变化。
图15描绘了在NS2和本发明的示例性化合物存在下，在23小时时间段期间的醛加成物形成速率。
图16描绘了在NS2和本发明的示例性化合物存在下，4HNE随时间(23小时形成期间)的消耗。
图17描绘了在NS2和本发明的示例性化合物存在下，在1周时间段期间的醛加成物形成速率，以测量化合物是否达到平衡。在此时间段期间，5个样品中有3个达到了平衡。
图18描绘了在NS2和本发明的示例性化合物存在下，在1周时间段期间的4HNE消耗，以测量化合物在此时间段期间是否达到平衡。样品似乎达到平衡，4HNE量持续减少的原因可能是存在另一种降解路径。
具体实施方式
1.本发明某些方面的一般描述
如上文所述，生物学上有关的醛是与多种病症相关。另外，本文中详细描述的具有氨基甲醇部分的某些化合物适用作“醛捕获剂”。此类含有氨基甲醇的化合物能与醛部分在试管内或活体内发生反应，从而有效地“捕获”生物学上有关的醛且使得其无反应性。因此，在一些实施例中，本发明提供了一种方法，包含以下步骤：
(a)提供式A化合物：
Figure BDA0003354581690000051
或其医药学上可接受的盐，其中：
骨架是与氨基和甲醇基团连接的部分，以便所产生的氨基-甲醇部分能够捕获醛部分；和
(b)使式A化合物与生物学上有关的醛接触以形成式I结合物：
Figure BDA0003354581690000052
其中：
R1是生物学上有关的醛的侧链。
2.定义
本发明化合物包括上文大体描述的那些化合物，且通过本文所公开的类别、子类和种类进一步说明。除非另外指明，否则应该应用如本文所用的以下定义。出于本发明的目的，化学元素是根据元素周期表，CAS版，化学与物理手册(Handbook of Chemistry andPhysics)，第75版来鉴别。另外，有机化学的一般原理描述于“有机化学(OrganicChemistry)”，托马斯索雷尔(Thomas Sorrell)，大学科学书籍(University ScienceBooks)，索萨利托(Sausalito)：1999，和“马奇高等有机化学(March's Advanced OrganicChemistry)”，第5版，编辑：史密斯M.B.(Smith,M.B.)和马奇J.(March,J.)，约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons),纽约：2001中，这些文献的全部内容特此以引用的方式并入。
如本文所用，术语“脂肪族”或“脂肪族基团”是指完全饱和或含有一或多个不饱和单元的被取代或未被取代的直链(即，非分支链)或分支链烃链，或完全饱和或含有一或多个不饱和单元的单环烃或双环烃，但所述单环烃或双环烃不是芳香族(在本文中也称为“碳环”、“环脂肪族”或“环烷基”)，其具有单个连接点连到分子的其余部分。除非另外说明，否则脂肪族基团含有1-6个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基团含有1-5个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1-4个脂肪族碳原子。在另外的其它实施例中，脂肪族基团含有1-3个脂肪族碳原子，且在又其它实施例中，脂肪族基团含有1-2个脂肪族碳原子。在一些实施例中，“环脂肪族”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一或多个不饱和单元、但不是芳香族的单环C3-C6烃，其具有单个连接点连到分子的其余部分。适合的脂肪族基团包括(但不限于)被取代或未被取代的直链或分支链烷基、烯基、炔基和其混合物，如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
术语“低碳数烷基”是指C1-4直链或分支链烷基。示例性低碳数烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
术语“低碳数卤烷基”是指经一或多个卤素原子取代的C1-4直链或支链烷基。
术语“杂原子”是指氧、硫、氮、磷或硅中的一或多种(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环中的可取代氮，例如N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或NR+(如N上被取代的吡咯烷基中))。
如本文所用，术语“不饱和”是指具有一或多个不饱和单元的部分。
如本文所用，术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和、直链或分支链烃链”是指如本文中所定义的直链或分支链二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即，-(CH2)n-，其中n是正整数，优选1到6、1到4、1到3、1到2，或2到3。被取代的亚烷基链是聚亚甲基，其中一或多个亚甲基氢原子被取代基置换。适合的取代基包括下文关于被取代的脂肪族基团所述的取代基。
术语“亚烯基”是指二价烯基。被取代的亚烯基链是含有至少一个双键的聚亚甲基，其中一或多个氢原子被取代基置换。适合的取代基包括下文关于被取代的脂肪族基团所述的取代基。
术语“卤素”是指F、Cl、Br或I。
如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中单独或作为较大部分的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共五到十四个环成员的单环或双环系统，其中系统中的至少一个环是芳族并且其中系统中的每个环含有3到7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。
如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中单独或作为较大部分的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共五到10个环成员的单环和双环系统，其中系统中的至少一个环是芳香族并且其中系统中的每个环含有三到七个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。在本发明的某些实施例中，“芳基”是指芳香族环系统，其包括(但不限于)苯基、联苯基、萘基、蒽基等，其可以具有一或多个取代基。如本文所用，在术语“芳基”范围内还包括芳环与一或多个非芳香族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、啡啶基或四氢萘基等。
单独或作为较大部分(例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”)的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”是指具有5到10个环原子、优选5、6或9个环原子的基团；其环状阵列共用6、10或14个π电子；且除碳原子之外，还具有一到五个杂原子。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包括(但不限于)噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基及蝶啶基。如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括杂芳香族环与一或多个芳基、环脂肪族或杂环基环稠合的基团，其中连接基团或点位于杂芳香族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单环或双环。术语“杂芳基(heteroaryl)”与术语“杂芳基环(heteroaryl ring)”、“杂芳基(heteroaryl group)”或“杂芳香族(heteroaromatic)”可以互换使用，这些术语中的任一个都包括任选被取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中烷基和杂芳基部分独立地任选被取代。
如本文所用，术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基(heterocyclic radical)”和“杂环(heterocyclic ring)”可互换使用并且是指饱和或部分不饱和的稳定5到7元单环或7到10元双环杂环部分，并且除碳原子之外，还具有一或多个、优选一到四个如上文所定义的杂原子。当作为杂环的环原子使用时，术语“氮”包括被取代的氮。作为一个实例，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或+NR(如N上被取代的吡咯烷基中)。
杂环可以在任何杂原子或碳原子处连接到其侧基，从而产生稳定结构，且任何环原子可以任选地被取代。此类饱和或部分不饱和杂环基的实例包含(但不限于)四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧杂环戊烷基、二氮呯基、噁氮呯基、噻氮呯基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基环(heterocyclylring)”、“杂环基团(heterocyclic group)”、“杂环部分(heterocyclic moiety)”和“杂环基(heterocyclic radical)”在本文中可互换使用，并且还包括其中杂环基环与一或多个芳基、杂芳基或环脂肪族环稠合的基团，如吲哚啉基、3H-吲哚基、色满基、啡啶基或四氢喹啉基，其中连接基团或连接点位于杂环基环上。杂环基可以是单环或双环。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中烷基和杂环基部分独立地任选被取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”是指包括至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但并非旨在包括如本文中所定义的芳基或杂芳基部分。
如本文所述，本发明化合物可以含有“任选被取代”的部分。一般来说，术语“被取代”无论前面有还是没有术语“任选地”，都意指所指定部分中的一或多个氢被适合的取代基置换。除非另外指明，否则“任选被取代”的基团可以在基团的每个可取代位置处具有适合的取代基，并且当任何既定结构中的超过一个位置可以被超过一个选自指定基团的取代基取代时，取代基在每一位置处可以是相同或不同的。本发明所设想的取代基组合优选引起稳定或化学上可行的化合物形成的取代基组合。如本文所用，术语“稳定”是指化合物在经历允许其产生、检测和在某些实施例中其回收、提纯和用于本文中所公开的一或多种目的的条件时基本上不发生改变。
“任选地被取代的”基团的可取代碳原子上的适合单价取代基独立地是卤素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro、-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；-(CH2)0- 4SRo；-(CH2)0-4Ph，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可以被Ro取代；-CH＝CHPh，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶，其可以被Ro取代；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)Ro；-C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSiRo 3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SR-、SC(S)SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)NRo 2；-C(S)NRo 2；-C(S)SRo；-SC(S)SRo,-(CH2)0-4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2NRo 2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NH)NRo 2；-P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-OP(O)Ro 2；-OP(O)(ORo)2；SiRo 3；-(C1-4直链或分支链亚烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-4直链或分支链亚烷基)C(O)O-N(Ro)2，其中每个Ro可以如下文所定义被取代且独立地是氢、C1-6脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5-6元杂芳基环)，或5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，其具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子，或尽管上文有定义，但两个独立存在的Ro与其中间原子一起形成3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子，可以如下文所定义被取代。
Ro(或通过将两个独立存在的Ro与其中间原子连在一起所形成的环)上的适合单价取代基独立地是卤素、-(CH2)0-2R·、-(卤基R·)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR·、-(CH2)0-2CH(OR·)2、-O(卤基R·)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R·、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR·、-(CH2)0-2SR·、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR·、-(CH2)0-2NR· 2、-NO2、-SiR· 3、-OSiR· 3、-C(O)SR·、-(C1-4直链或分支链亚烷基)C(O)OR·，或-SSR·，其中每个R·未被取代或在前面存在“卤基”的情况下，只被一或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。Ro的饱和碳原子上的适合二价取代基包括＝O和＝S。
“任选被取代的”基团的饱和碳原子上的适合二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-，或-S(C(R* 2))2-3S-，其中每个独立存在的R*选自氢、可以如下文所定义被取代的C1-6脂肪族，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。结合到“任选被取代”基团的邻位可取代碳的适合二价取代基包括：-O(CR* 2)2-3O-，其中每个独立存在的R*选自氢、可如下文所定义被取代的C1-6脂肪族，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
R*的脂肪族基团上的适合取代基包括卤素、-R·、-(卤基R·)、-OH、-OR·、-O(卤基R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中每个R·未被取代或在前面存在“卤基”的情况下，只被一或多个卤素取代，且独立地是C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
“任选被取代的”基团的可取代氮上的适合取代基包括
Figure BDA0003354581690000091
Figure BDA0003354581690000092
或
Figure BDA0003354581690000093
其中每个
Figure BDA0003354581690000094
独立地是氢、可以如下文所定义被取代的C1-6脂肪族、未被取代的-OPh，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或尽管上文有定义，但两个独立存在的
Figure BDA0003354581690000101
与其中间原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
Figure BDA0003354581690000102
的脂肪族基团上的适合取代基独立地是卤素、-R·、-(卤基R·)、-OH、-OR·、-O(卤基R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中每个R·未被取代或在前面存在“卤基”的情况下，只被一或多个卤素取代，且独立地是C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
如本文所用，术语“医药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内适用于与人类和低等动物的组织接触而无不当毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的效益/风险比相称的那些盐。医药学上可接受的盐在所属领域中众所周知。举例来说，S.M.贝尔奇(S.M.Berge)等人在医药科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)，1977，66，1-19中详细描述了医药学上可接受的盐，所述文献以引用的方式并入本文中。本发明化合物的医药学上可接受的盐包括衍生自适合无机酸和有机酸和无机碱和有机碱的盐。医药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸)或有机酸(例如乙酸、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用所属领域中所用的其它方法(例如如离子交换)形成的盐。医药学上可接受的其它盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)、苯甲酸盐、苯磺酸盐(besylate)、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
由适当的碱衍生的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。医药学上可接受的其它盐在适当时包括使用平衡离子(例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳数烷基磺酸根和芳基磺酸根)形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。
除非另有说明，否则本文中所描绘的结构还意图包括所述结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构形异构))形式；例如，关于每个不对称中心的R与S构形、Z与E双键异构体，以及Z与E构形异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体以及几何异构体(或构形异构体)混合物都在本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。
3.示例性化合物的描述
如上文所述，生物学上有关的醛是与多种病症相关。另外，某些化合物，如下文详细描述的具有氨基甲醇部分的式II、III、IV-A和IV-B的化合物，适用作“醛捕获剂”。此类含有氨基甲醇的化合物能与醛部分在试管内或活体内发生反应，从而有效地“捕获”生物学上有关的醛且使得其无反应性。因此，在一些实施例中，本发明提供了一种方法，包含以下步骤：
(a)提供式A化合物：
Figure BDA0003354581690000111
或其医药学上可接受的盐，其中：
骨架是与氨基和甲醇基团连接的部分，以便所产生的氨基-甲醇部分能够捕获醛部分；和
(b)使式A化合物与生物学上有关的醛接触以形成式I结合物：
Figure BDA0003354581690000112
其中：
R1是生物学上有关的醛的侧链。
在一些实施例中，骨架提供了式A化合物，其选自所公开的国际专利申请WO2014/116836(PCT/US2014/012762)中所述的任一种，本文中称为'836公开，所述文献以引入的方式并入本文中。
在一些实施例中，骨架提供了式A化合物，其选自美国专利US 7,973,025中所述的任一种，所述专利以引入的方式并入本文中。
在一些实施例中，骨架提供了式A化合物，其选自式II化合物：
Figure BDA0003354581690000121
或医药学上有关的盐，其中：
Figure BDA0003354581690000122
是连到胺基团的连接点；
#是连到甲醇基团的连接点；
每个W、X、Y或Z独立地选自N、O、S、CU或CH；
k是0、1、2、3或4；
每个U独立地选自卤素、氰基、-R、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
相邻碳原子上存在的两个U可以形成任选被取代的稠合环，所述稠合环选自稠合的苯环；稠合的5-6元饱和或部分不饱和杂环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或稠合的5-6元杂芳基环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；且
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
如上文所定义和本文所述，
Figure BDA0003354581690000123
是连到胺基团的连接点。在一些实施例中，
Figure BDA0003354581690000124
是连到胺基团的连接点。
如上文所定义和本文所述，#是连到甲醇基团的连接点。在一些实施例中，#是连到甲醇基团的连接点。
如上文所定义和本文所述，W独立地选自N、O、S、CU或CH。在一些实施例中，W是N。在一些实施例中，W是O。在一些实施例中，W是S。在一些实施例中，W是CU。在一些实施例中，W是CH。
如上文所定义和本文所述，X独立地选自N、O、S、CU或CH。在一些实施例中，X是N。在一些实施例中，X是O。在一些实施例中，X是S。在一些实施例中，X是CU。在一些实施例中，X是CH。
如上文所定义和本文所述，Y独立地选自N、O、S、CU或CH。在一些实施例中，Y是N。在一些实施例中，Y是O。在一些实施例中，Y是S。在一些实施例中，Y是CU。在一些实施例中，Y是CH。
如上文所定义和本文所述，Z独立地选自N、O、S、CU或CH。在一些实施例中，Z是N。在一些实施例中，Z是O。在一些实施例中，Z是S。在一些实施例中，Z是CU。在一些实施例中，Z是CH。
如上文所定义且如本文所述，k是0、1、2、3或4。在一些实施例中，k是0。在一些实施例中，k是1。在一些实施例中，k是2。在一些实施例中，k是3。在一些实施例中，k是4。
如上文所定义且如本文所述，每个U独立地选自卤素、氰基、-R、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，U是卤素。在一些实施例中，U是氟。在一些实施例中，U是氯。在一些实施例中，U是溴。
在一些实施例中，U是-R。在一些实施例中，U是氢。在一些实施例中，U是氘。在一些实施例中，U是任选地被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，U是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，U是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，U是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，U是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，U是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，U是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，U是-S(O)2R。在一些实施例中，U是-S(O)2CH3。
在一些实施例中，U是任选被取代的苯基环。在一些实施例中，U是任选地被卤素取代的苯环。在一些实施例中，U是任选地被氟取代的苯环。在一些实施例中，U是任选地被氯取代的苯环。
如上文所定义且如本文所述，相邻碳原子上存在的两个U可以形成任选被取代的稠合环，所述稠合环选自稠合的苯环；稠合的5-6元饱和或部分不饱和杂环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或稠合的5-6元杂芳基环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被1或更多个卤素原子取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被一个卤素原子取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被氟取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被氯取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被2个卤素原子取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被2个氟取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被2个氯取代的稠合苯环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被氟和氯取代的稠合苯环。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的5-6元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合5-6元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的5元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成含有一个氮和一个氧杂原子的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有一个氮和一个氧杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有一个氮和一个氧杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被甲苯磺酰基取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有一个氮和一个氧杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被环丙基取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有一个氮和一个氧杂原子。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成含有一个氮和一个硫杂原子的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有一个氮和一个硫杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有一个氮和一个硫杂原子。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成含有两个氮杂原子的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有两个氮杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被甲基取代的稠合5元杂芳基环，所述环含有两个氮杂原子。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的6元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合6元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成含有一个氮杂原子的稠合6元杂芳基环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合6元杂芳基环，所述环含有一个氮杂原子。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成含有两个氮杂原子的稠合6元杂芳基环。在一些实施例中，相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合6元杂芳基环，所述环含有两个氮杂原子。
在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是喹唑啉基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是任选被取代的喹唑啉基。
在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是喹啉基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是任选被取代的喹啉基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是喹啉基，其任选地被1-2个卤素原子取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是喹啉基，其任选地被1个卤素原子取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是喹啉基，其任选地被氟取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是喹啉基，其任选地被氯取代。
在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并噁唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是任选被取代的苯并噁唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并噁唑基，其任选地被苯基取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并噁唑基，其任选地被苯基和一个卤素原子取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并噁唑基，其任选地被苯基和氯取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并噁唑基，其任选地被甲苯磺酰基和氯取代。
在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并异噁唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是任选被取代的苯并异噁唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并异噁唑基，其任选地被苯基取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并异噁唑基，其任选地被环丙基和一个卤素原子取代。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并异噁唑基，其任选地被环丙基和氯取代。
在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并噻唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是任选被取代的苯并噻唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并噻唑基，其任选地被苯基取代。
在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并异噻唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是任选被取代的苯并异噻唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并异噻唑基，其任选地被苯基取代。
在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并咪唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是任选被取代的苯并咪唑基。在一些实施例中，通过相邻碳原子上存在的两个U所形成的稠合环系统是苯并咪唑基，其任选地被苯基取代。
在一些实施例中，W、X、Y及Z提供苯环。在一些实施例中，W、X、Y和Z提供被k个存在的U取代的苯环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z提供吡啶基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z提供被k个存在的U取代的吡啶基环。
在一些实施例中，W、X、Y或Z中的一或多个是CH；且k是0。在一些实施例中，W、X或Y中的一或多个是CH；Z是N；且k是0。
在一些实施例中，W、X、Y或Z中的一或多个是CH；k是1；且U是卤素。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是1；且U是氟。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是1；且U是氯。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是1；且U是溴。
在一些实施例中，W、X和Y中的一或多个是CH；Z是N；k是1；且U是任选被取代的苯基。在一些实施例中，W、X和Y中的一或多个是CH；Z是N；k是1；且U是任选地被卤素取代的苯基。在一些实施例中，W、X和Y中的一或多个是CH；Z是N；k是1；且U是任选地被氟取代的苯基。
在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是1；且U是任选被取代的苯基。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是1；且U是任选地被卤素取代的苯基。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是1；且U是任选地被氟取代的苯基。
在一些实施例中，W、X和Y中的一或多个是CH；Z是N；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环。在一些实施例中，W、X和Y中的一或多个是CH；Z是N；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合苯环。在一些实施例中，W、X和Y中的一或多个是CH；Z是N；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，所述苯环任选地被卤素取代。在一些实施例中，W、X和Y中的一或多个是CH；Z是N；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，所述苯环任选地被氯取代。
在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合苯环。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，所述苯环任选地被卤素取代。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，所述苯环任选地被氟取代。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，所述苯环任选地被氯取代。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，所述苯环任选地被氯和氟取代。在一些实施例中，W中的一或多个是N；X、Y和Z是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，所述苯环任选地在2位置上被氯取代。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的5-6元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合5-6元杂芳基环，所述环含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成含有一个氮杂原子的任选被取代的稠合6元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的吡啶环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合吡啶环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成含有两个氮杂原子的任选被取代的稠合6元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的嘧啶环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合嘧啶环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成具有2个杂原子的稠合芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成5元稠合噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的5元稠合噁唑环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成含有一个氮和一个氧杂原子的任选被取代的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的含有一个氮和一个氧杂原子的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被甲苯磺酰基取代的含有一个氮和一个氧杂原子的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被环丙基取代的含有一个氮和一个氧杂原子的稠合5元杂芳基环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的稠合噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被甲苯磺酰基取代的稠合噁唑环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合异噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的稠合异噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被环丙基取代的稠合异噁唑环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成含有一个氮和一个硫杂原子的任选被取代的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成含有一个氮和一个硫杂原子的任选被苯基取代的稠合5元杂芳基环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合噻唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的稠合噻唑环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成含有两个氮杂原子的任选被取代的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选被取代的稠合咪唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是2；且相邻碳原子上存在的两个U形成任选地被苯基取代的稠合咪唑环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成含有一个氮和一个氧杂原子的任选被取代的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成任选地被苯基取代的含有一个氮和一个氧杂原子的稠合5元杂芳基环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成任选地被甲苯磺酰基取代的含有一个氮和一个氧杂原子的稠合5元杂芳基环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成任选被取代的稠合噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成任选地被苯基取代的稠合噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成任选地被甲苯磺酰基取代的稠合噁唑环。
在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成任选被取代的稠合异噁唑环。在一些实施例中，W、X、Y和Z中的一或多个是CH；k是3；U1是氯且相邻碳原子上的U2和U3形成任选地被环丙基取代的稠合异噁唑环。
如上文所定义且如本文所述，每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R是氢。在一些实施例中，R是氘。在一些实施例中，R是C1-6脂肪族。在一些实施例中，R是甲基。在一些实施例中，R是乙基。在一些实施例中，R是任选地被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R是任选被取代的甲基。在一些实施例中，R是任选被取代的乙基。在一些实施例中，R为苯基。在一些实施例中，R是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R是任选地被卤素取代的苯基。在一些实施例中，R是任选地被氟取代的苯基。
在一些实施例中，本发明提供捕获醛的式V化合物：
Figure BDA0003354581690000201
或其医药学上可接受的盐，其中：
环A是含有1-3个氮原子、1或2个氧原子、1个硫原子或1个氮和1个硫原子的5元部分不饱和杂环或杂芳环；或含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6元部分不饱和杂环或杂芳环；或含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的7元部分不饱和杂环或杂芳环；
R1是H、D、卤素、-CN、-OR、-SR，或任选被取代的C1-6脂肪族；
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；
R2不存在或选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
R3不存在或选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
R4不存在或选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
R6是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族；且
R7是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族；或R6和R7与其所连接的碳原子一起形成3-8元环烷基或含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的杂环基环。
如上文一般性定义，环A是含有1-3个氮原子、1或2个氧原子、1个硫原子或1个氮和1个硫原子的5元部分不饱和杂环或杂芳环；或含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6元部分不饱和杂环或杂芳环；或含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的7元部分不饱和杂环或杂芳环。
在一些实施例中，环A是含有1-3个氮原子、1或2个氧原子、1个硫原子或1个氮和1个硫原子的5元部分不饱和杂环或杂芳环。在一些实施例中，环A是具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6元部分不饱和杂环或杂芳环。在一些实施例中，环A是具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的7元部分不饱和杂环或杂芳环。
在一些实施例中，环A是咪唑或三唑。在一些实施例中，环A是噻唑。在一些实施例中，环A是噻吩或呋喃。在一些实施例中，环A是吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪或1,2,4-三嗪。在一些实施例中，环A是吡啶。
如上文中一般定义，R1是H、D、卤素、-CN、-OR、-SR，或任选被取代的C1-6脂肪族。
在一些实施例中，R1是H。在一些实施例中，R1是D。在一些实施例中，R1是卤素。在一些实施例中，R1是-CN。在一些实施例中，R1是-OR。在一些实施例中，R1是-SR。在一些实施例中，R1是任选被取代的C1-6脂肪族。
如上文一般描述，R2不存在或选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，R2不存在。在一些实施例中，R2是-R。在一些实施例中，R2是卤素。在一些实施例中，R2是-CN。在一些实施例中，R2是-OR。在一些实施例中，R2是-SR。在一些实施例中，R2是-N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)C(O)R。在一些实施例中，R2是-C(O)N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)C(O)N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)C(O)OR。在一些实施例中，R2是-OC(O)N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)S(O)2R。在一些实施例中，R2是-SO2N(R)2。在一些实施例中，R2是-C(O)R。在一些实施例中，R2是-C(O)OR。在一些实施例中，R2是-OC(O)R。在一些实施例中，R2是-S(O)R。在一些实施例中，R2是-S(O)2R。
在一些实施例中，R2是氢。在一些实施例中，R2是氘。在一些实施例中，R2是任选被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R2是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，R2是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R2是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，R2是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R2是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R2是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R2是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R2是Cl或Br。在一些实施例中，R2是Cl。
如上文一般定义，R3不存在或选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，R3不存在。在一些实施例中，R3是-R。在一些实施例中，R3是卤素。在一些实施例中，R3是-CN。在一些实施例中，R3是-OR。在一些实施例中，R3是-SR。在一些实施例中，R3是-N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)C(O)R。在一些实施例中，R3是-C(O)N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)C(O)N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)C(O)OR。在一些实施例中，R3是-OC(O)N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)S(O)2R。在一些实施例中，R3是-SO2N(R)2。在一些实施例中，R3是-C(O)R。在一些实施例中，R3是-C(O)OR。在一些实施例中，R3是-OC(O)R。在一些实施例中，R3是-S(O)R。在一些实施例中，R3是-S(O)2R。
在一些实施例中，R3是氢。在一些实施例中，R3是氘。在一些实施例中，R3是任选被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R3是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，R3是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R3是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，R3是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R3是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R3是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R3是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R3是Cl或Br。在一些实施例中，R3是Cl。
如上文一般定义，R4不存在或选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，R4不存在。在一些实施例中，R4是-R。在一些实施例中，R4是卤素。在一些实施例中，R4是-CN。在一些实施例中，R4是-OR。在一些实施例中，R4是-SR。在一些实施例中，R4是-N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)C(O)R。在一些实施例中，R4是-C(O)N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)C(O)N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)C(O)OR。在一些实施例中，R4是-OC(O)N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)S(O)2R。在一些实施例中，R4是-SO2N(R)2。在一些实施例中，R4是-C(O)R。在一些实施例中，R4是-C(O)OR。在一些实施例中，R4是-OC(O)R。在一些实施例中，R4是-S(O)R。在一些实施例中，R4是-S(O)2R。
在一些实施例中，R4是氢。在一些实施例中，R4是氘。在一些实施例中，R4是任选被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R4是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，R4是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R4是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，R4是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R4是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R4是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R4是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R4是Cl或Br。在一些实施例中，R4是Cl。
如上文中一般描述，R6是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R6是C1-4脂肪族。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个氘原子取代的C1-4脂肪族。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R6是C1-4烷基。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个卤素原子取代的甲基或乙基。在一些实施例中，R6是甲基。
如上文中一般定义，R7是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R7是C1-4脂肪族。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个氘原子取代的C1-4脂肪族。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R7是C1-4烷基。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个卤素原子取代的甲基或乙基。在一些实施例中，R7是甲基。
如上文中一般定义，在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的3-8元环烷基或杂环基环。
在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成3-8元环烷基。在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的3-8元杂环基环。
在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基或环戊基环。在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丙烷、氧杂环丁烷、四氢呋喃或氮杂环丙烷。
在一些实施例中，R6和R7是甲基。
在另一个方面中，本发明提供捕获醛的式VI化合物：
Figure BDA0003354581690000241
或其医药学上可接受的盐，其中：
R2选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；
R3选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
R4选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
R5选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
R6是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族；且
R7是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族；或R6和R7与其所连接的碳原子一起形成3-8元环烷基或含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的杂环基环。
如上文中一般描述，R2选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，R2是-R。在一些实施例中，R2是卤素。在一些实施例中，R2是-CN。在一些实施例中，R2是-OR。在一些实施例中，R2是-SR。在一些实施例中，R2是-N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)C(O)R。在一些实施例中，R2是-C(O)N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)C(O)N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)C(O)OR。在一些实施例中，R2是-OC(O)N(R)2。在一些实施例中，R2是-N(R)S(O)2R。在一些实施例中，R2是-SO2N(R)2。在一些实施例中，R2是-C(O)R。在一些实施例中，R2是-C(O)OR。在一些实施例中，R2是-OC(O)R。在一些实施例中，R2是-S(O)R。在一些实施例中，R2是-S(O)2R。
在一些实施例中，R2是氢。在一些实施例中，R2是氘。在一些实施例中，R2是任选被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R2是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，R2是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R2是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，R2是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R2是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R2是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R2是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R2是Cl或Br。在一些实施例中，R2是Cl。
如上文中一般定义，R3选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，R3是-R。在一些实施例中，R3是卤素。在一些实施例中，R3是-CN。在一些实施例中，R3是-OR。在一些实施例中，R3是-SR。在一些实施例中，R3是-N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)C(O)R。在一些实施例中，R3是-C(O)N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)C(O)N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)C(O)OR。在一些实施例中，R3是-OC(O)N(R)2。在一些实施例中，R3是-N(R)S(O)2R。在一些实施例中，R3是-SO2N(R)2。在一些实施例中，R3是-C(O)R。在一些实施例中，R3是-C(O)OR。在一些实施例中，R3是-OC(O)R。在一些实施例中，R3是-S(O)R。在一些实施例中，R3是-S(O)2R。
在一些实施例中，R3是氢。在一些实施例中，R3是氘。在一些实施例中，R3是任选被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R3是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，R3是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R3是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，R3是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R3是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R3是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R3是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R3是Cl或Br。在一些实施例中，R3是Cl。
如上文中一般定义，R4选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，R4是-R。在一些实施例中，R4是卤素。在一些实施例中，R4是-CN。在一些实施例中，R4是-OR。在一些实施例中，R4是-SR。在一些实施例中，R4是-N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)C(O)R。在一些实施例中，R4是-C(O)N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)C(O)N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)C(O)OR。在一些实施例中，R4是-OC(O)N(R)2。在一些实施例中，R4是-N(R)S(O)2R。在一些实施例中，R4是-SO2N(R)2。在一些实施例中，R4是-C(O)R。在一些实施例中，R4是-C(O)OR。在一些实施例中，R4是-OC(O)R。在一些实施例中，R4是-S(O)R。在一些实施例中，R4是-S(O)2R。
在一些实施例中，R4是氢。在一些实施例中，R4是氘。在一些实施例中，R4是任选被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R4是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，R4是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R4是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，R4是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R4是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R4是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R4是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R4是Cl或Br。在一些实施例中，R4是Cl。
如上文中一般定义，R5选自-R、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R。
在一些实施例中，R5是-R。在一些实施例中，R5是卤素。在一些实施例中，R5是-CN。在一些实施例中，R5是-OR。在一些实施例中，R5是-SR。在一些实施例中，R5是-N(R)2。在一些实施例中，R5是-N(R)C(O)R。在一些实施例中，R5是-C(O)N(R)2。在一些实施例中，R5是-N(R)C(O)N(R)2。在一些实施例中，R5是-N(R)C(O)OR。在一些实施例中，R5是-OC(O)N(R)2。在一些实施例中，R5是-N(R)S(O)2R。在一些实施例中，R5是-SO2N(R)2。在一些实施例中，R5是-C(O)R。在一些实施例中，R5是-C(O)OR。在一些实施例中，R5是-OC(O)R。在一些实施例中，R5是-S(O)R。在一些实施例中，R5是-S(O)2R。
在一些实施例中，R5是氢。在一些实施例中，R5是氘。在一些实施例中，R5是任选被取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R5是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施例中，R5是任选被取代的苯基。在一些实施例中，R5是任选被取代的8-10元双环芳基环。在一些实施例中，R5是任选被取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R5是任选被取代的5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R5是任选被取代的6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。在一些实施例中，R5是任选被取代的7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
在一些实施例中，R5是Cl或Br。在一些实施例中，R5是Cl。
如上文中一般描述，R6是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R6是C1-4脂肪族。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个氘原子取代的C1-4脂肪族。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R6是C1-4烷基。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R6是任选地被1、2或3个卤素原子取代的甲基或乙基。在一些实施例中，R6是甲基。
如上文中一般定义，R7是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R7是C1-4脂肪族。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个氘原子取代的C1-4脂肪族。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4脂肪族。
在一些实施例中，R7是C1-4烷基。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个卤素原子取代的C1-4烷基。在一些实施例中，R7是任选地被1、2或3个卤素原子取代的甲基或乙基。在一些实施例中，R7是甲基。
如上文中一般定义，在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的3-8元环烷基或杂环基环。
在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成3-8元环烷基。在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的3-8元杂环基环。
在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基或环戊基环。在一些实施例中，R6和R7与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丙烷、氧杂环丁烷、四氢呋喃或氮杂环丙烷。
在一些实施例中，R6和R7是甲基。
在另一个方面中，本发明提供捕获醛的式V-a、V-b、V-c或V-d化合物：
Figure BDA0003354581690000291
或其医药学上可接受的盐，其中：
R、R1、R2、R3、R4、R6和R7各自如上文所定义且以单独和组合形式描述于本文实施例中。
在一些实施例中，所述化合物具有上述式V-a。
在一些实施例中，R1和R4是H。
在一些实施例中，R2是H。
在一些实施例中，R6和R7是任选被1、2或3个氘或卤素原子取代的C1-4烷基，或R6和R7与其所连接的碳一起形成3-8元环烷基环。
在一些实施例中，R3是H、C1-4烷基、卤素、-NR、-OR、-SR、-CO2R或-C(O)R，其中R是H、任选被取代的C1-4烷基，或任选被取代的苯基。
在另一个方面中，本发明提供捕获醛的式V-e、V-f、V-g或V-h化合物：
Figure BDA0003354581690000292
或其医药学上可接受的盐，其中：
R、R1、R2、R3和R4各自如上文所定义且以单独和组合形式描述于本文实施例中。
在另一个方面中，本发明提供捕获醛的式V-i、V-j、V-k、V-l、V-m或V-n化合物：
Figure BDA0003354581690000293
Figure BDA0003354581690000301
或其医药学上可接受的盐，其中：
R、R1、R2、R3、R4、R6和R7各自如上文所定义且以单独和组合形式描述于本文实施例中。
在另一个方面中，本发明提供捕获醛的式VI-a化合物：
Figure BDA0003354581690000302
或其医药学上可接受的盐，其中：
R、R3、R6和R7各自如上文所定义且以单独和组合形式描述于本文实施例中。
在一些实施例中，式II骨架选自下表1中所描绘的那些基团：
表1：式II的示例性骨架基团
Figure BDA0003354581690000303
Figure BDA0003354581690000311
Figure BDA0003354581690000321
Figure BDA0003354581690000331
其中
Figure BDA0003354581690000335
是连到胺基团的连接点且#是连到甲醇基团的连接点。
在一些实施例中，骨架选自
Figure BDA0003354581690000332
在一些实施例中，骨架具有式III：
Figure BDA0003354581690000333
或医药学上有关的盐，其中：
Figure BDA0003354581690000336
是连到胺基团的连接点；
#是连到甲醇基团的连接点；
每个Q、T和V独立地选自N或NH、S、O、CU或CH；
Figure BDA0003354581690000334
表示环内的两个双键，其符合存在于环中的原子和杂原子的价数要求；
k是0、1、2、3或4；且
每个U独立地选自卤素、氰基、-R、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
相邻碳原子上存在的两个U可以形成任选被取代的稠合环，所述稠合环选自稠合的苯环；稠合的5-6元饱和或部分不饱和杂环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或稠合的5-6元杂芳基环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；且
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
每个
Figure BDA0003354581690000343
#、k、U和R如上文所定义和描述。
如上文所定义且如本文所述，Q选自N或NH、S、O、CU或CH。在一些实施例中，Q选自N或NH、S、O、CU或CH。在一些实施例中，Q是N或NH。在一些实施例中，Q是S。在一些实施例中，Q是O。在一些实施例中，Q是CU。在一些实施例中，Q是CH。
如上文所定义且如本文所述，T选自N或NH、S、O、CU或CH。在一些实施例中，T选自N或NH、S、O、CU或CH。在一些实施例中，T是N或NH。在一些实施例中，T是S。在一些实施例中，T是O。在一些实施例中，T是CU。在一些实施例中，T是CH。
如上文所定义且如本文所述，V选自N或NH、S、O、CU或CH。在一些实施例中，V选自N或NH、S、O、CU或CH。在一些实施例中，V是N或NH。在一些实施例中，V是S。在一些实施例中，V是O。在一些实施例中，V是CU。在一些实施例中，V是CH。
如上文所定义且如本文所述，k是0、1、2、3或4。在一些实施例中，k是0。在一些实施例中，k是1。在一些实施例中，k是2。在一些实施例中，k是3。在一些实施例中，k是4。
如上文所定义且如本文所述，
Figure BDA0003354581690000342
表示环内的两个双键，其符合存在于环内的原子和杂原子的价数要求。在一些实施例中，所形成的环是噻吩。在一些实施例中，所形成的环是噁唑。在一些实施例中，所形成的环是异噻唑。
在一些实施例中，Q和V中的一或多个是CH；T是S；
Figure BDA0003354581690000353
经布置以形成噻吩；且k是0。在一些实施例中，Q中的一或多个是CH；T是N或NH；V是O；
Figure BDA0003354581690000354
经布置以形成异噁唑；且k是0。在一些实施例中，Q中的一或多个是S；T和V是CH；
Figure BDA0003354581690000355
经布置以形成噻吩；k是1；且U是-S(O)2R。在一些实施例中，Q中的一或多个是S；T和V是CH；
Figure BDA0003354581690000356
经布置以形成噻吩；k是1；且U是-S(O)2CH3。在一些实施例中，Q中的一或多个是CH；T是N或NH；V是S；
Figure BDA0003354581690000357
经布置以形成异噻唑；且k是0。
在一些实施例中，式III骨架选自下表2中所描绘的那些基团：
表2：式III的示例性骨架基团
Figure BDA0003354581690000351
其中
Figure BDA0003354581690000358
是连到胺基团的连接点且#是连到甲醇基团的连接点。
在一些实施例中，骨架具有式IV-A或IV-B：
Figure BDA0003354581690000352
或其医药学上可接受的盐，其中：
Figure BDA0003354581690000359
是连到胺部分的连接点；
#是连到甲醇部分的连接点；
k是0、1、2、3或4；且
每个U独立地选自卤素、氰基、-R、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
相邻碳原子上存在的两个U可以形成任选被取代的稠合环，所述稠合环选自稠合的苯环；稠合的5-6元饱和或部分不饱和杂环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或稠合的5-6元杂芳基环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；且
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
Figure BDA0003354581690000364
#、k、U和R各如上文所定义和描述。
在一些实施例中，式IV-A或IV-B骨架选自下表3中所描绘的那些基团：
表3：式IV的示例性骨架基团
Figure BDA0003354581690000361
其中
Figure BDA0003354581690000363
是连到胺基团的连接点且#是连到甲醇基团的连接点。
如上文所定义且如本文所述，所述方法需要使式A化合物与生物学上有关的醛接触以形成式I结合物的步骤。
在一些实施例中，生物学上有关的醛选自甲醛、乙醛、丙烯醛、乙二醛、甲基乙二醛、十六醛、十八醛、十六烯醛、丁二酸半缩醛、丙二醛、4-羟基壬烯醛、4-羟基-2E-己烯醛、4-羟基-2E,6Z-十二碳二烯醛、视黄醛、白三烯B4醛，和十八烯醛。
在一些实施例中，生物学上有关的醛是甲醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是乙醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是丙烯醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是乙二醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是甲基乙二醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是十六醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是十八醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是十六烯醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是丁二酸半缩醛(SSA)。在一些实施例中，生物学上有关的醛是丙二醛(MDA)。在一些实施例中，生物学上有关的醛是4-羟基壬烯醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是视黄醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是4-羟基-2E-己烯醛。在一些实施例中，生物学上有关的醛是4-羟基-2E,6Z-十二碳二烯醛。在一些实施例中，所述醛是白三烯B4醛。在一些实施例中，所述醛是十八烯醛。
在一些实施例中，生物学上有关的醛选自下表4中所描绘的那些化合物：
表4：示例性的生物学上有关的醛
Figure BDA0003354581690000371
在一些实施例中，式A化合物是
Figure BDA0003354581690000381
且生物学上有关的醛选自甲醛、乙醛、丙烯醛、乙二醛、甲基乙二醛、十六醛、十八醛、十六烯醛、丁二酸半缩醛、丙二醛、4-羟基壬烯醛、4-羟基-2E-己烯醛、4-羟基-2E,6Z-十二碳二烯醛、视黄醛、白三烯B4醛，和十八烯醛。在一些实施例中，式A化合物是
Figure BDA0003354581690000382
且生物学上有关的醛选自表4内的那些醛。在一些实施例中，式A化合物是
Figure BDA0003354581690000383
且生物学上有关的醛是丁二酸半缩醛。
在一些实施例中，所提供的方法引起式I化合物的形成：
Figure BDA0003354581690000384
其中：
骨架如上文所定义且如本文所述；且
R1选自如上文所定义且如本文所述的生物学上有关的醛的侧链。
如上文所定义且如本文所述，R1选自如上文所定义的生物学上有关的醛的侧链。如上文所定义且如本文所述，R1选自下述那些基团：
Figure BDA0003354581690000385
Figure BDA0003354581690000391
其中*表示R1的连到分子其余部分的连接点。
在一些实施例中，所提供的方法引起式I结合物的形成，所述式I结合物选自下表5中所描绘的那些化合物：
表5：示例性式I结合物
Figure BDA0003354581690000392
Figure BDA0003354581690000401
在一些实施例中，本发明提供式I结合物：
Figure BDA0003354581690000402
其中：
骨架是与氨基和甲醇基团连接的部分，以便所产生的氨基-甲醇部分能够捕获醛部分；和
R1是生物学上有关的醛的侧链。
骨架和R1各自如上文所定义和描述。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗有需要的患者的方法，包含
(a)投与式A化合物：
Figure BDA0003354581690000403
或其医药学上可接受的盐，其中：
骨架是与氨基和甲醇基团连接的部分，以便所产生的氨基-甲醇部分能够捕获醛部分；和
(b)使所述式A化合物与生物学上有关的醛接触以形成式I结合物：
Figure BDA0003354581690000411
其中：
R1是生物学上有关的醛的侧链。
骨架、式A化合物、生物学上有关的醛、式I结合物、R1或其任何组合各自如本文中所定义和描述。
在一些实施例中，本发明提供一种方法：
(a)使式A化合物接触：
Figure BDA0003354581690000412
或其医药学上可接受的盐，其中：
骨架是与氨基和甲醇基团连接的部分，以便所产生的氨基-甲醇部分能够捕获醛部分；和
(b)使所述式A化合物与生物学上有关的醛原位接触以形成式I结合物：
Figure BDA0003354581690000413
其中：
R1是生物学上有关的醛的侧链。
骨架、式A化合物、生物学上有关的醛、式I结合物、R1或其任何组合各自如本文中所定义和描述。
在一些实施例中，本发明提供一种方法：
(a)使式A化合物接触：
Figure BDA0003354581690000421
或其医药学上可接受的盐，其中：
骨架是与氨基和甲醇基团连接的部分，以便所产生的氨基-甲醇部分能够捕获醛部分；和
(b)使所述式A化合物与生物学上有关的醛在活体内接触以形成式I结合物：
Figure BDA0003354581690000422
其中：
R1是生物学上有关的醛的侧链。
骨架、式A化合物、生物学上有关的醛、式I结合物、R1或其任何组合各自如本文中所定义和描述。
4.化合物和其医药学上可接受的组合物的用途
在某些实施例中，本发明提供用于治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的疾病、病症或病状和/或减少其风险的化合物、组合物和方法。在一些实施例中，此类化合物包括本文所述式的那些化合物，或其医药学上可接受的盐，其中每个变量如本文中所定义和描述。根据一个方面，本发明提供了一种使生物学上有关的醛与含有氨基-甲醇的化合物接触以形成式I结合物的方法。
发现本文所述的某些化合物适用于清除毒性醛，如MDA和HNE。本文所述的化合物与MDA、HNE或其它毒性醛经历希夫碱(Schiff base)缩合反应，并且与醛按照能量上有利的反应形成络合物，从而减少或消除可用于与蛋白质、脂质、碳水化合物或DNA反应的醛。重要的是，本文所述的化合物能与醛反应而形成具有闭环结构的含醛化合物，从而捕获醛并且防止醛被释放回到细胞环境中。
如本文中所用，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”和“治疗(treating)”是指逆转、减轻如本文所述的疾病或病症或其一或多种症状，延迟其发作，或抑制其进展。在一些实施例中，在一或多种症状已经出现之后投与疗法。在其它实施例中，在缺乏症状的情况下投与疗法。举例来说，在症状发作之前，向易感个体投与疗法(例如根据症状病史和/或根据遗传学或其它易感因素)。症状已消退之后，还继续治疗，例如以预防、延迟或减轻其复发的严重程度。
本发明涉及用于治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的疾病、病症或病状和/或减少其风险的本文所述化合物。
醛毒性所牵涉的疾病、病症或病状的实例包括眼部疾病、病症或病状，包括(但不限于)角膜疾病(例如干眼综合症、白内障、圆锥形角膜、大疱和其它角膜病变以及富克氏内皮营养不良)、其它眼部病症或病状(例如过敏性结膜炎、眼部瘢痕性类天疱疮；与PRK愈合和其它角膜愈合相关的病状；以及与泪脂质降解或泪腺机能不良相关的病状)，以及与炎症引起的醛含量高相关的其它眼部病状(例如葡萄膜炎、巩膜炎、史蒂文琼森眼综合症(ocular Stevens Johnson Syndrome)、眼部红斑痤疮(伴有或不伴有睑板腺机能不良))。在一个实例中，眼部疾病、病症或病状不是黄斑变性，如年龄相关性黄斑变性(“AMD”)或斯塔加特氏病(Stargardt's disease)。在另一实例中，眼部疾病、病症或病状是干眼综合症、眼部红斑痤疮或葡萄膜炎。
醛毒性所牵涉的疾病、病症、病状或适应症的实例还包括非眼部病症，包括牛皮癣、局部(盘状)狼疮、接触性皮炎、异位性皮肤炎、过敏性皮炎、辐射性皮炎、寻常痤疮、休格连-拉森综合症和其它鱼鳞癣、日光性弹性组织变性/皱纹、肤色紧致、浮肿、湿疹、烟尘或刺激物诱发皮肤变化、真皮切口、与灼伤和/或创伤相关的皮肤病状、狼疮、硬皮病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、发炎性肠病、败血症、动脉粥样硬化、局部缺血再灌注损伤、帕金森病、阿兹海默氏病、丁二酸半缩醛脱氢酶缺乏症、多发性硬化症、肌肉萎缩性侧索硬化、糖尿病、代谢综合症、年龄相关的病症，和纤维化疾病。在另一实例中，非眼部病症是选自接触性皮炎、异位性皮炎、过敏性皮炎和辐射性皮炎的皮肤疾病、病症或病状。在另一实例中，非眼部病症是皮肤疾病、病症或病状，其选自休格连-拉森综合症和与灼伤和/或创伤相关的美容适应症。
在另一实例中，醛毒性所牵涉的疾病、病症或病状是与年龄有关的病症。与年龄有关的疾病、病症或病状的实例包括皮肤的皱纹、干燥和色素沉着。
醛毒性所牵涉的疾病、病症或病状的实例进一步包括与糜烂性毒剂的毒性效应或碱性试剂灼伤相关的病状。本文所述的化合物减少或排除毒性醛，从而治疗、预防这些疾病或病症和/或减少其风险。
在一个实施例中，本发明涉及治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的眼部疾病、病症或病状和/或减少其风险，包含向有需要的个体投与本文所述的化合物。所述眼部疾病、病症或病状包括(但不限于)角膜疾病(例如干眼综合症、白内障、圆锥形角膜、大疱和其它角膜病变以及富克氏角膜内皮营养不良)、其它眼部病症或病状(例如过敏性结膜炎、眼部瘢痕性类天疱疮、与PRK愈合和其它角膜愈合相关的病状，以及与泪脂质降解或泪腺机能不良相关的病状)，以及炎症导致醛含量高的其它眼部病状(例如葡萄膜炎、巩膜炎、史蒂文琼森眼综合症、眼部红斑痤疮(伴有或不伴有睑板腺机能不良))。眼部疾病、病症或病状不包括黄斑变性(如AMD)或斯塔加特氏病。在一个示例中，在眼部疾病、病症或病状中，眼部组织或细胞中的MDA或HNE的量或浓度增加。举例来说，醛(例如MDA或HNE)的量或浓度相较于正常眼部组织或细胞增加至少1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、5倍、10倍。本文所述化合物使醛(例如MDA和HNE)浓度按照时间相关方式减少。醛(例如MDA或HNE)的量或浓度可以通过所属领域中已知的方法或技术测量，如图克赞(Tukozkan)等人，Furat TipDergisi 11:88-92(2006)中所述的方法或技术。
在一类中，眼部疾病、病症或病状是干眼综合症。在第二类中，眼部疾病、病症或病状是与PRK愈合和其它角膜愈合相关的病状。举例来说，本发明涉及促进PRK愈合或其它角膜愈合，包含向有需要的个体投与本文所述的化合物。在第三类中，眼部疾病、病症或病状是与炎症引起的醛含量高相关的眼部病状(例如葡萄膜炎、巩膜炎、史蒂文琼森眼综合症和眼部红斑痤疮(伴有或不伴有睑板腺机能不良))。在第四类中，眼部疾病、病症或病状是圆锥形角膜、白内障、大疱和其它角膜病变、富克氏内皮营养不良、眼部瘢痕性类天疱疮或过敏性结膜炎。本文所述的化合物可以体表或全身性投与，如下文所述。
在第二实施例中，本发明涉及治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的皮肤病症或病状或美容适应症和/或减少其风险，包含向有需要的个体投与本文所述的化合物。所述皮肤病症或病状包括(但不限于)牛皮癣、硬皮病、局部(盘状)狼疮、接触性皮炎、异位性皮炎、过敏性皮炎、辐射性皮炎、寻常痤疮和休格连-拉森综合症以及其它鱼鳞癣，且美容适应症是日光性弹力组织变性/皱纹、肤色紧致、浮肿、湿疹、烟尘或刺激物诱发的皮肤变化、真皮切口，或与灼伤和/或创伤相关的皮肤病状。在一些实施例中，本发明涉及年龄相关的皮肤疾病、病症或病状，如本文所述。
各种皮肤病症或病状，如异位性皮肤炎、局部(盘状)狼疮、牛皮癣和硬皮病，均以MDA和HNE含量高为特征(丹羽(Niwa)等人，2003，英国皮肤病学杂志(Br J Dermatol.)149:248；丝卡艾柯特(Sikar Aktürk)等人，2012，欧洲皮肤病与性病学会杂志(J Eur AcadDermatol Venereol.)26:833；Tikly等人，2006，临床风湿病学(Clin Rheumatol.)25(3):320-4)。另外，休格连-拉森综合症(SLS)的鱼鳞癣特征来源于脂肪醛的积聚，所述脂肪醛积聚破坏板层体(LB)的正常功能和分泌并且导致角质层(SC)中产生细胞间脂质沉积物且导致表层产生有缺陷的阻水性(里索等人，2010，皮肤病症相关档案研究，302(6):443-51)。使醛代谢的酶脂肪醛脱氢酶在SLS患者中功能异常。因此，减少或消除醛的化合物(例如本文所述的化合物)可以用于治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的皮肤病症或病状(如本文所述的皮肤病症或病状)，和/或减少其风险。此外，在改善阻水性和预防醛介导发炎的情况下(包括纤维化和弹性组织变性(切尔普托(Chairpotto)等人(2005))，许多美容适应症(如日光性弹性组织变性/皱纹、肤色、紧致(浮肿)、湿疹、烟尘或刺激物诱发的皮肤变化以及真皮切口美容术)以及与灼伤和/或创伤相关的皮肤病状可以使用本发明的方法治疗。
在一类中，皮肤疾病、病症或病状是牛皮癣、硬皮病、局部(盘状)狼疮、接触性皮炎、异位性皮炎、过敏性皮炎、辐射性皮炎、寻常痤疮或休格连-拉森综合症以及其它鱼鳞癣。在一个示例中，皮肤疾病、病症或病状是接触性皮炎、异位性皮炎、过敏性皮炎、辐射性皮炎或休格连-拉森综合症以及其它鱼鳞癣。在第二类中，美容适应症是日光性弹力组织变性/皱纹、肤色紧致、浮肿、湿疹、烟尘或刺激物诱发的皮肤变化、真皮切口，或与灼伤和/或创伤相关的皮肤病状。
在第三实施例中，本发明涉及治疗、预防醛毒性发病机制中涉及的与糜烂性毒剂的毒性效应或碱性试剂灼伤相关的病状和/或减少其风险，包含向有需要的个体投与本文所述的化合物。
糜烂性毒剂包括(但不限于)硫芥、氮芥和光气肟。糜烂性毒剂的毒性或有害效应包括皮肤、眼睛和/或粘膜的疼痛、刺激和/或流泪，以及结膜炎和/或眼角膜损伤。硫芥是化合物双(2-氯乙基)硫醚。氮芥包括化合物双(2-氯乙基)乙胺、双(2-氯乙基)甲胺以及三(2-氯乙基)胺。硫芥或其类似物能引起氧化应激增强，具体地说，引起HNE含量提高，且通过耗乏抗氧化防御系统且借此增强脂质过氧化反应，可以诱导氧化应激反应且从而提高醛含量(贾法里(Jafari)等人，2010，临床毒理学(费城)(Clin Toxicol(Phila))48(3):184-92；帕耳(Pal)等人，2009，自由基生物学和医药，47(11):1640-51)。体表施药时，抗氧化剂(如水飞蓟宾(Silibinin))减轻由暴露于硫芥或其类似物所诱发的皮肤损伤，并且抗氧化酶活性增强可以是对硫芥所产生的活性氧种类的补偿反应(贾法里等人，同上；特瓦芮-辛格(Tewari-Singh)等人(2012)，科学公共图书馆综合卷(PLoS One)7(9):e46149)。此外，减少自由基种类的干预是暴露后针对光气诱发肺损伤的有效疗法(舒托(Sciuto)等人(2004))。因此，减少或消除醛的化合物(如本文所述的化合物)可以用于治疗、预防与糜烂性毒剂(如硫芥、氮芥和光气肟)的毒性效应相关的病状，和/或减少其风险。
碱性试剂包括(但不限于)石灰、碱液、氨以及排水渠清洁剂。减少或消除醛的化合物(如本文所述的化合物)可以用于治疗、预防与碱性剂灼伤相关的病状，和/或减少其风险。
在第四实施例中，本发明涉及治疗、预防发病机制中涉及醛毒性的自体免疫、免疫介导、炎性、心血管或神经疾病、病症或病状，或代谢综合症，或糖尿病，和/或减少其风险，包含向有需要的个体投与本文所述的化合物。自体免疫或免疫介导疾病、病症或病状包括(但不限于)狼疮、硬皮病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和类风湿性关节炎。发炎疾病、病症或病状包括(但不限于)类风湿性关节炎、炎性肠病(例如克罗恩氏病(Crohn's disease)和溃疡性结肠炎)、败血症和纤维化(例如肾、肝、肺和心脏纤维化)。心血管疾病、病症或病状包括(但不限于)动脉粥样硬化和局部缺血再灌注损伤。神经疾病、病症或病状包括(但不限于)帕金森病、阿兹海默氏病、丁二酸半缩醛脱氢酶缺乏症、多发性硬化症、肌肉萎缩性侧索硬化，和休格连-拉森综合症的神经病学方面(认知迟缓和痉挛)。
技术人员将理解，本文中所列的疾病、病症或病状可能涉及超过一种病理学机制。举例来说，本文中所列的疾病、病症或病状可能涉及免疫反应和发炎反应中的调节异常。因此，疾病、病症或病状的上述分类不是绝对的，并且所述疾病、病症或病状可以视为免疫、炎性、心血管、神经和/或代谢疾病、病症或病状。
发现醛脱氢酶缺乏的个体具有较高的醛含量和增强的帕金森病风险(菲兹摩瑞士(Fitzmaurice)等人，2013，美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)，110(2):636-41)和阿兹海默氏病(卡米诺(Kamino)等人，2000，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem Biophys Res Commun.)273:192-6)。在帕金森病中，醛尤其干扰多巴胺生理学(里德(Reed)，2011，自由基生物学和医药，51:1302-19；扎尔科夫(Zarkovic)等人，2003，医药的分子方面(Mol Aspects Med.)24:293-303；伍德(Wood)等人，2007，脑研究(BrainRes.)1145:150-6)。另外，多发性硬化症、肌肉萎缩性侧索硬化、自体免疫疾病(如狼疮、类风湿性关节炎、狼疮、牛皮癣、硬皮病和纤维化疾病)中的醛含量升高，且HNE和MDA的含量增加牵涉到动脉粥样硬化和糖尿病的进展(艾尔迪尼(Aldini)等人，2011，细胞与分子医学杂志(J Cell Mol Med.)15:1339-54；王(Wang)等人，2010，关节炎与风湿病(ArthritisRheum.)62:2064-72；阿玛拉(Amara)等人，临床实验免疫学(Clin Exp Immunol.)101:233-8(1995)；哈桑(Hassan)等人，2011，国际风湿性疾病杂志(Int J Rheum Dis.)14:325-31；丝卡(Sikar)等人，2012，欧洲皮肤病与性病学会杂志，26(7):833-7；提克里(Tikly)等人，2006，临床风湿病学(Clin Rheumatol.)25:320-4；艾尔班(Albano)等人，2005，肠道，54:987-93；波齐(Pozzi)等人，2009，美国肾脏病学会杂志(J Am Soc Nephrol)，20:2119-25)。MDA进一步牵涉到泡沫细胞的形成增加，其引起动脉粥样硬化(雷本古特(Leibundgut)等人，2013，药理学当前观点(Curr Opin Pharmacol.)13:168-279)。此外，醛相关毒性在许多炎性肺疾病(例如哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD))的发病机制中起重要作用(巴托丽(Bartoli)，2011，炎症介体(Mediators of Inflammation)2011，论文891752)。因此，减少或消除醛的化合物(例如本文所述的化合物)可以用于治疗、预防自体免疫、免疫介导、炎性、心血管或神经疾病、病症或病状或代谢综合症或糖尿病，和/或减少其风险。举例来说，本文所述的化合物(如II-5)预防醛介导神经元发生细胞死亡。此外，本文所述的化合物(如II-5)下调广谱的促炎性细胞因子且/或上调抗炎性细胞因子，这表明本文所述的化合物适用于治疗发炎疾病，如多发性硬化症和肌肉萎缩性侧索硬化。
如上文所论述，可以将所公开的组合物投与个体以便治疗或预防黄斑变性和病源学涉及A2E和/或脂褐质积聚的其它形式的视网膜疾病。以A2E积聚为特征的其它疾病、病症或病状可以按类似方式治疗。
在一个实施例中，将化合物投与个体，从而减少A2E形成。举例而言，所述化合物可以和PE竞争与反式-RAL的反应，借此减少A2E的形成量。在另一个实施例中，将化合物投与个体，从而防止A2E积聚。举例来说，所述化合物如此成功地和PE竞争与反式-RAL的反应，未形成A2E。
待治疗的个体分成三组：(1)临床上基于视觉缺陷(包括(但不限于)暗适应、对比敏感性和敏锐度)(如通过视觉检查和/或视网膜电图所确定)和/或视网膜健康状况(如通过眼底检查视网膜和RPE组织的脉络膜小疣堆积物、组织萎缩和/或脂褐质荧光)诊断而患有黄斑变性或病源学涉及A2E和/或脂褐质积聚的其它形式的视网膜疾病的个体；(2)出现黄斑变性疾病的前期症状、但基于所述相同测量项目的异常结果被认为处于风险中的个体；和(3)出现前期症状、但基于黄斑变性疾病家族史和/或基因分型结果被认为处于遗传风险中的个体，所述基因分型结果展示与所述疾病相关的一或多种等位基因或多态性。每个月、每周或每天体表或全身投与组合物。为了避免副作用(若存在)，可以根据暗适应的视觉表现来选择剂量。治疗持续至少一个月、三个月、六个月或十二个月或更长的时间段。可以按照一、三、六或十二个月或更长的时间间隔来测试患者以评估安全和功效。通过如上文所述检查视觉表现和视网膜健康状况来测量功效。
在一个实施例中，个体经诊断而患有黄斑变性症状，然后投与所公开的化合物。在另一个实施例中，个体可以经鉴定处于出现黄斑变性的风险中(风险因素包括吸烟史、年龄、女性和家族史)，然后投与所公开的化合物。在另一个实施例中，个体双眼可能患有干性AMD，然后投与所公开的化合物。在另一个实施例中，个体可能一只眼患有湿性AMD，而另一只眼患有干性AMD，然后投与所公开的化合物。在又另一个实施例中，个体可以经诊断而患有斯塔加特氏病，然后投与所公开的化合物。在另一个实施例中，个体经诊断而患有其它形式的视网膜疾病的症状，所述视网膜疾病的病源学涉及A2E和/或脂褐质的积聚，然后投与所述化合物。在另一个实施例中，个体可以经鉴定处于出现其它形式的视网膜疾病的风险中，所述视网膜疾病的病源学涉及A2E和/或脂褐质的积聚，然后投与所公开的化合物。在一些实施例中，预防性投与化合物。在一些实施例中，个体在视网膜明显损伤之前已经诊断患有所述疾病。举例来说，在任何眼科病征显现之前，发现个体携带ABCA4的基因突变且经诊断处于斯塔加特氏病的风险中，或在个体意识到对视力的任何影响之前，发现个体存在指示黄斑变性的早期黄斑变化。在一些实施例中，人类个体可能知道他或她需要黄斑变性治疗或预防。
在一些实施例中，可以监测个体的黄斑变性程度。可以通过多种方式监测个体，如通过眼睛检查、散瞳检查、眼底检查、视敏度测试和/或活组织检查。监测可以在多个时间进行。举例来说，可以在投与化合物之后监测个体。举例来说，监测可以在化合物首次投与之后的一天、一周、两周、一个月、两个月、六个月、一年、两年、五年或任何其它时间段进行。可以反复地监测个体。在一些实施例中，可响应于监测改变化合物的剂量。
在一些实施例中，可以将所公开的方法与用于治疗或预防黄斑变性或病源学涉及A2E和/或脂褐质积聚的其它形式的视网膜疾病的其它方法(如光动力疗法)组合。举例来说，患者可以针对一或多种疾病或病症用超过一种疗法治疗。举例来说，患者的一只眼睛可能罹患干式AMD，其用本发明化合物治疗，而另一只眼睛罹患湿式AMD，其用例如光动力疗法治疗。
在一些实施例中，可以长期投与用于治疗或预防黄斑变性或病源学涉及A2E和/或脂褐质积聚的其它形式的视网膜疾病的化合物。所述化合物可以每天投与，每天超过一次，一周两次，一周三次，每周一次，每两周一次，每月一次，每两个月一次，半年一次，每年一次和/或每两年一次。
神经鞘胺醇1-磷酸酯(一种具有多种细胞功能的生物活性信号传导分子)被内质网酶神经鞘胺醇1-磷酸酯裂解酶不可逆地降解，产生反式-2-十六烯醛和磷酸乙醇胺。已经证明，反式-2-十六烯醛在多种细胞类型通过JNK依赖性路径引起细胞骨架重组织、脱离和细胞凋亡。参见乌帕德亚雅(Upadhyaya)等人，2012，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem Biophys Res Commun.)，424(1):18-21。这些结果和相关α,β-不饱和醛的已知化学性质使得反式-2-十六烯醛与其它细胞组分相互作用的可能性提高。已经表明，其容易和脱氧鸟苷和DNA发生反应，产生非对映异构的环状1,N(2)-脱氧鸟苷加成物3-(2-脱氧-β-d-赤-戊呋喃糖基)-5,6,7,8-四氢-8R-羟基-6R-十三烷基嘧啶并[1,2-a]嘌呤-10(3H)酮和3-(2-脱氧-β-d-赤-戊呋喃糖基)-5,6,7,8-四氢-8S-羟基-6S-十三烷基嘧啶并[1,2-a]嘌呤-10(3H)酮。这些结果证明，神经鞘胺醇1-磷酸酯裂解酶内源性产生的反式-2-十六烯醛和DNA直接发生反应，从而形成醛衍生的DNA加成物，潜在地引起突变诱发后果。
丁二酸半缩醛脱氢酶缺乏症(SSADHD)，也称为4-羟基丁酸尿症或γ-羟基丁酸尿症，是GABA代谢的最流行常染色体隐性遗传病症(沃格尔(Vogel)等人，2013，遗传代谢疾病杂志(J Inherit Metab Dis.)36(3):401-10)，显现了早期儿童期的发育迟缓和张力减退表型，以及青春期和成人期的重度表达语言障碍和强迫症表型。一半患者存在癫痫症，因为通常发生全身性的强直阵挛发作(虽然有时不存在)和肌阵挛发作(佩尔(Pearl)等人，2014，发展医学与儿童神经病学(Dev Med Child Neurol.)，doi:10.1111/dmcn.12668.)。大于三分之二的患者在青春期和成人期显现神经精神问题(即，ADHD、OCD和攻击性)，可能成为残废。在代谢上，主要抑制性神经传递素GABA和γ-羟基丁酸酯(GHB)(一种神经调节性单羧酸)发生积聚(斯奈德(Snead)和吉布森(Gibson)，2005，新英格兰医学杂志(N Engl JMed.)352(26):2721-32)。另外，患者和相应的鼠类模型中均已检测到这种病症所特有的若干其它中间体。氨己烯酸(Vigabatrin，VGB；γ-乙烯基GABA)，GABA转氨酶的一种不可逆抑制剂，是治疗SSADH缺乏症的合理选择，原因是其防止GABA转化成GHB。结果已经混合，且在所选患者中，治疗已引起恶化(古德(Good)，2011，美国儿童眼科和斜视协会杂志(JAAPOS.)15(5):411-2；佩罗克(Pellock)，2011，神经病精神病生命科学医学增刊(ActaNeurol Scand Suppl.)192:83-91；埃斯喀勒(Escalera)等人，2010，儿科学纪事(AnPediatr(Barc))72(2):128-32；卡萨拉诺(Casarano)等人，2011，JIMD Rep.2:119-23；玛藤(Matern)等人，1996，遗传代谢疾病杂志(J Inherit Metab Dis.)19(3):313-8；艾尔伊萨(Al-Essa)等人，脑发育(Brain Dev.)2000，22(2):127-31.2000).SSADH缺乏症的靶向疗法仍难以实现且干预是姑息性的。
因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的SSADHD的方法，包含向所述患者投与式A化合物或其医药学上可接受的盐。
5.医药学上可接受的组合物
使用有效治疗上文所提供的病症或减轻其严重程度的任何量和任何投药途径来投与根据本发明方法的化合物和组合物。所需的确切量将因个体而异，这取决于个体的物种、年龄和一般状况、感染的严重程度、特定药剂、其投药模式等。为了便于投药和剂量均一性，本发明的化合物优选配制成单位剂型。如本文所用，表述“单位剂型”是指适于所治疗患者的实体上离散药剂单元。然而，应了解，本发明化合物和组合物的每日总用量将由主治医师在合理医学判断范围内决定。针对任何特定患者或生物体的特定有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和所述病症的严重程度；所用特定化合物的活性；所用特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用特定化合物的投与时间、投与途径和排泄速率；治疗持续时间；与所用特定化合物组合或同时使用的药物；和医学领域中熟知的类似因素。
本发明的医药学上可接受的组合物可以经口、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、体表(如通过散剂、软膏或滴剂)、经颊、口服或鼻喷雾等投与人类及其它动物，这取决于所治疗感染的严重程度。在某些实施例中，按每天每千克个体体重约0.01毫克到约50毫克且优选约1毫克到约25毫克，一天一或多次的剂量水平经口或肠胃外投与本发明化合物，以达到所期望的治疗效果。
口服液体剂型包括(但不限于)医药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物外，液体剂型还可以含有本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(具体地说，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯，和其混合物。除惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可以根据已知技术，使用适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以是存在于肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如存在于1,3-丁二醇中的溶液形式。可以采用的可接受媒剂和溶剂是水、林格氏溶液(U.S.P.)和等张氯化钠溶液。另外，通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于这个目的，可以使用任何温和不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，使用脂肪酸(例如油酸)制备可注射剂。
可注射调配物可以通过例如经由细菌截留过滤器过滤，或通过并入灭菌剂来灭菌，所述灭菌剂呈无菌固体组合物形式，其在使用前可以溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。
为了延长本发明化合物的作用，往往期望皮下或肌肉内注射的化合物缓慢吸收。这可以通过使用水溶性不良的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率又可以取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒剂中来实现肠胃外投与的化合物形式的延迟吸收。通过形成化合物在生物可降解聚合物(如聚丙交酯-聚乙交酯)中的微胶囊基质来制造可注射积存形式。依据化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物的释放速率。其它生物可降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将化合物截留于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备积存可注射调配物。
用于直肠或阴道投与的组合物优选栓剂，所述栓剂可以通过将本发明化合物与适合的无刺激性赋形剂或载剂混合而制备，如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡，所述赋形剂或载剂在环境温度下是固体，但在体温下是液体并且因此在直肠或阴道腔中熔融并且释放活性化合物。
口服固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂及颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与以下各者混合：至少一种医药学上可接受的惰性赋形剂或载剂，如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶解延迟剂，例如石蜡；f)吸收促进剂，如季铵化合物；g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，例如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。
在使用如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中，也可以使用相似类型的固体组合物作为填充剂。可以用包衣和外壳(例如肠溶衣和医药配制领域中众所周知的其它包衣)来制备片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型。其可以任选地含有遮光剂，并且其组成也可以使其任选地在肠道某一部分中以延迟方式仅释放或优先释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。在使用如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中，也可以使用相似类型的固体组合物作为填充剂。
活性化合物还可以呈与一或多种如上文所提及的赋形剂形成的微胶囊化形式。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂以及颗粒的固体剂型可以用包衣和外壳(例如肠溶衣、释放控制包衣以及医药配制领域中众所周知的其它包衣)来制备。在这些固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。按惯例，这些剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的其它物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。其可以任选地含有遮光剂，并且其组成也可以使其任选地在肠道某一部分中以延迟方式仅释放或优先释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于体表或透皮投与本发明化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。需要时，将活性组分与医药学上可接受的载剂和任何所需防腐剂或缓冲剂在无菌条件下混合。本发明的范围内还涵盖眼科调配物、滴耳剂和滴眼剂。另外，本发明涵盖了使用透皮贴片，其具有使化合物可控制地递送到身体的的附加优点。这些剂型可以通过将化合物溶解或分配于适当介质中来制备。还可以使用吸收增强剂来提高化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。
本发明化合物也可以体表投与，如直接投与眼睛，例如以滴眼剂或眼用软膏形式。滴眼剂典型地包含有效量的至少一种本发明化合物和能够安全地施加到眼睛的载剂。举例来说，滴眼剂呈等张溶液的形式，并且溶液的pH经调节以使得眼睛不受到刺激。在许多情况下，上皮屏障干扰分子渗透到眼睛中。因此，目前使用的大部分眼用药物都补充有某种形式的渗透增强剂。这些渗透增强剂通过使最上面的上皮细胞的紧密连接松开而起作用(伯斯坦(Burstein)，1985，英国眼科学会会刊(Trans Ophthalmol Soc U K)104(Pt4):402-9；艾什顿(Ashton)等人，1991，药理学与实验治疗学杂志(J Pharmacol Exp Ther.)259(2):719-24；格林(Green)等人，1971，美国眼科学杂志(Am J Ophthalmol.)72(5):897-905)。最常用的渗透增强剂是苯扎氯铵(benzalkonium chloride)(唐(Tang)等人，1994，药学杂志(J Pharm Sci.)83(1):85-90；伯斯坦等人，1980，眼科研究与视力学(Invest OphthalmolVis Sci.)19(3):308-13)，其也具有针对微生物污染的防腐剂作用。其添加的最终浓度典型地是0.01-0.05％。
如本文所用，术语“生物样品”包括(但不限于)细胞培养物或其提取物；由哺乳动物获得的活组织检查材料或其提取物；和血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其它体液或其提取物。
本发明各方面的所有特征作必要的修正即适用于所有其它方面。
为了可以更全面地理解本文中所述的本发明，阐述以下实例。应了解，这些实例仅用于说明性目的并且不应理解为以任何方式限制本发明。
范例
如下文实例中所描绘，在某些示范性实施例中，根据以下通用程序制备化合物。应了解，虽然一般方法描绘了某些本发明化合物的合成，但以下一般方法和本领域普通技术人员已知的其它方法可以适用于如本文中所述的所有化合物和这些化合物中的每一者的子类和种类。
实例1：式II的某些化合物的通用反应顺序
如美国专利公开第US 2013/0190500号(2013年7月25日公开)中所述，如流程1中所示，制备醛捕获剂，所述专利由此以引用的方式并入本文。“R”表示如上文所定义的U上的任选被取代基团，且“n”表示所述任选被取代的基团的出现次数。示例性此类方法在下文进一步描述。
流程1
Figure BDA0003354581690000531
实例2：II-5的合成
Figure BDA0003354581690000532
1-(3-乙氧基-2,3-二氧代丙基)吡啶-1-鎓溴化物(A-1)的合成。将乙醇(220mL)和吡啶(31g，392mmol)装入2L圆底烧瓶中，且所得溶液在氮气下按中度搅拌速率搅拌。将溴代丙酮酸乙酯(76.6g，354mmol)按缓慢、稳定的物料流添加到此溶液中。允许反应混合物在65±5℃搅拌2小时。
1-(6-氯-2-(乙氧基羰基)喹啉-3-基)吡啶-1-鎓溴化物(A-2)的合成。前一反应完成2小时搅拌时间后，将反应混合物缓慢冷却到18-22℃。将烧瓶抽真空-吹扫三次，此时使用长塑料漏斗将2-氨基-5-氯-苯甲醛(ACB)(50.0g，321mmol)作为固体直接添加到反应烧瓶中。添加吡啶(64.0g，809mmol)，随后添加EtOH冲洗液(10mL)且在氮气下，在80±3℃加热反应混合物约16小时(整夜)，此时HPLC分析指示反应有效完成。
3-氨基-6-氯喹啉-2-甲酸乙酯(A-3)的合成。将得自前一反应的反应混合物冷却到约70℃且使用加料漏斗将吗啉(76.0g，873mmol)添加到2L反应烧瓶中。反应混合物在80±2℃加热约2.5小时，此时根据HPLC分析，反应视为完成(A-3的面积％停止增加)。将反应混合物冷却到10-15℃以便进行淬灭、处理和分离。
使用加料漏斗，历经30-60分钟将水(600g)装入2L反应烧瓶中，通过调整添加速率和使用冷却浴保持温度低于15℃。反应混合物在10-15℃搅拌另外45分钟，然后使用布氏漏斗(Buchner funnel)过滤分离出粗A-3。滤饼用水(100mL×4)洗涤，每次允许水渗透滤饼，随后施加真空。使滤饼风干，得到几乎干燥的褐色固体粗A-3。将滤饼返回到2L反应烧瓶中且添加庚烷(350mL)和EtOH(170mL)，且将混合物加热到70±3℃维持30-60分钟。将浆液冷却到0-5℃且在真空下过滤分离。A-3在真空干燥烘箱中、在真空下和35±3℃干燥整夜(16-18小时)，得到墨绿色固体A-3。
2-(3-氨基-6-氯喹啉-2-基)丙-2-醇(II-5)的合成。将甲基氯化镁(200mL于THF中的3.0M溶液，600mmol)装入2L圆底烧瓶中。使用冰浴将溶液冷却到0-5℃。
将得自前一反应的22.8克A-3和THF(365mL)装入500mL烧瓶(磁力搅拌)中，搅拌到溶解，然后转移到2L反应烧瓶上的加料漏斗中。历经5.75小时将A-3溶液逐滴添加到反应烧瓶中，在整个添加期间保持反应烧瓶温度在0-5℃之间。添加结束时，烧瓶内容物在0-5℃搅拌另外15分钟，然后移去冷却浴且将反应物在环境温度下搅拌整夜。
烧瓶在冰浴中冷却且小心地通过向反应混合物中逐滴添加EtOH(39.5g，857mmol)来淬灭反应混合物，在添加过程期间保持反应混合物温度低于15℃。然后小心地添加NH4Cl水溶液(84.7g NH4Cl于415mL水中)且在适度搅拌下搅拌混合物约30分钟，然后转移到分液漏斗中以允许各层分离。固体存在于水相中，因此添加HOAc(12.5g)且轻轻地涡旋内容物，获得几乎均匀的下部水相。将下部水层转移回到2L反应烧瓶中且在适度搅拌下与2-甲基THF(50mL)一起搅拌约15分钟。使用旋转式蒸发器在≤40℃和真空(需要时)下使最初的上部有机层的体积减小到约40mL。分离分液漏斗中的各相且将上部2-MeTHF相与产物残余物合并，转移到500mL烧瓶中，且真空蒸馏到25mL的大致体积。向此残余物中添加2-MeTHF(50mL)且蒸馏到50mL的大致体积。粗化合物II-5溶液用2-MeTHF(125mL)稀释，冷却到5-10℃，且缓慢添加2M H2SO4(aq)(250mL)且搅拌混合物30分钟，同时允许温度恢复到环境温度。装入庚烷(40mL)且反应混合物搅拌另外15分钟，然后转移到分液漏斗中且允许各层分离。下部水性产物层用额外的庚烷(35mL)萃取，然后将下部水相转移到装备有机械搅拌器的1L反应烧瓶中，且将混合物冷却到5-10℃。丢弃合并的有机层。制备25％NaOH溶液(水溶液)(NaOH 47g，水200mL)且缓慢添加到1L反应烧瓶中，使pH达到6.5-8.5的范围。
添加EtOAc(250mL)且搅拌混合物整夜。将混合物转移到分液漏斗中且丢弃下部相。上部有机层用盐水(25mL)洗涤，然后使上部有机产物层在旋转式蒸发器上使体积减小，获得呈深色油状的粗化合物II-5，其在几分钟内凝固。将粗化合物II-5溶解于EtOAc(20mL)中且通过硅胶塞(23g)用3/1庚烷/EtOAc洗脱直至所有化合物II-5洗脱(需要约420mL)来过滤以除去大部分深色化合物II-5。真空除去溶剂，得到14.7g呈褐色固体状的化合物II-5。将化合物II-5吸收于EtOAc(25mL)中且通过矽胶柱(72g)、使用7/1庚烷/EtOAc到3/1庚烷/EtOAc(总共1400mL)的流动相梯度洗脱。将含有化合物II-5的溶剂洗脱份汽提。化合物II-5用EtOAc(120mL)稀释且在具有Darco G-60脱色碳(4.0g)的烧瓶中搅拌约1小时。使用烧结漏斗使混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc(3×15mL)冲洗滤饼。合并的滤液在旋转式蒸发器上汽提且将化合物II-5溶解于76℃的庚烷(160mL)/EtOAc(16mL)中。将均相溶液缓慢冷却到0-5℃，保持2小时，然后通过过滤分离化合物II-5。在真空烘箱中、在最佳真空下、在35℃干燥5小时之后，获得呈白色固体状的化合物II-5。
HPLC纯度：100％(AUC)
HPLC(使用标准条件)：
A-2：7.2分钟
A-3：11.6分钟
2-氨基-5-氯苯甲醛(ACB)的合成。
Figure BDA0003354581690000551
N2气氛已经建立且使微弱的N2气流流经容器之后，将干燥的还原硫化铂(5wt％/碳)(9.04g，3.0wt％，相对于硝基底物)添加到装备有大磁力搅拌棒和热电偶的5L厚壁压力容器中。添加MeOH(1.50L)、5-氯-2-硝基苯甲醛(302.1g，1.63mol)、额外的MeOH(1.50L)和Na2CO3(2.42g，22.8mmol，0.014当量)。密封烧瓶且开始进行450rpm的搅拌。将溶液抽空且用N2(35psi)再加压2次。将烧瓶抽成真空且用H2再加压到35psi。溶液温度在20分钟内达到30℃。然后用水浴冷却溶液。将冰添加到水浴中以维持温度低于35℃。每2个小时通过抽真空和用N2(5psi)再加压2次、随后敞开来监测反应。反应进展可以依据TLC追踪：5-氯-2-硝基苯甲醛(Rf＝0.60，CH2Cl2，UV)和中间体(Rf＝0.51，CH2Cl2，UV和Rf＝0.14，CH2Cl2，UV)消耗而得到ACB(Rf＝0.43，CH2Cl2，UV)。5小时时，反应已进行到98％完成(GC)，且视为完成。向3L中号烧结漏斗中添加硅藻土(约80g)。此硅藻土用MeOH(约200mL)沉降且在真空下蒸发。浓缩的溶液通过导管转移到漏斗中，同时使用轻微的真空拉吸溶液通过硅藻土塞。此硅藻土柱用MeOH(150mL，4次)冲洗。溶液转移到5L三颈圆底烧瓶中。在旋转蒸发器上，在30℃，在减压下除去溶剂(约2L)。施加N2气层。将溶液转移到装备有机械式搅拌棒和加料漏斗的5L四颈圆底烧瓶中。历经4小时将水(2.5L)逐滴添加到剧烈搅拌的溶液中。使用最小量的真空过滤浆液。所收集的固体用水(1.5L，2次)、iPA(160mL)洗涤，然后用己烷(450mL，2次)洗涤。所收集的固体(淡黄色，粒状固体)转移到150×75再结晶盘中。固体然后在真空烘箱中、在减压(26-28in Hg)下、在40℃干燥整夜。ACB(>99％，依据HPLC)在N2气氛下、在5℃储存。
实例3：式II的某些化合物的通用反应顺序
以下醛捕获剂如‘836公开中所述制备。示例性方法在下文进一步描述。
实例4：II-7的合成
Figure BDA0003354581690000561
(E)-和(Z)-3-氯-2-氟-6-(2-硝基乙烯基氨基)苯甲酸(7-1)的合成。将37.19g粗湿硝基乙醛肟(通过G.B.巴克曼(G.B.Bachman)等人，美国化学学会杂志(J.Am.Chem.Soc.)69,365-371(1947)的方法制备)与50g 6-氨基-3-氯-2-氟苯甲酸(巴特帕克有限公司(ButtPark Ltd.)，英国康沃尔郡卡姆尔福德(Camelford,Cornwall,UK))和750mL丙酮混合并且振荡直到形成透明溶液。向溶液中依序添加200mL水和200mL 12N HCl，并且溶液在室温下保持3天。混合物用2L水稀释并且过滤。蒸发滤液以除去丙酮并且过滤。合并的固体用水(4×200mL)洗涤并且在60℃、高真空下干燥，得到7-1，其为E-异构体与Z-异构体的4.5:1混合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ
Figure BDA0003354581690000575
E-异构体6.79(d,1H,J＝6.4Hz),7.58(d,1H,J＝8.4Hz),7.83(t,1H,J＝8.4Hz),7.99(dd,1H,J＝6.4,13.2Hz),12.34(d,1H,NH,J＝13.2Hz),14.52(br,1H,OH)。Z-异构体7.39(d,1H,J＝11.2Hz),7.42(d,1H,J＝9.6Hz),7.71(t,1H,J＝8.4Hz),8.49(t,1H,J＝11.6Hz),10.24(d,1H,NH,J＝12.4Hz),14.52(br,1H,OH)。LC-MS:259[(M-H)-]。
6-氯-5-氟-3-硝基喹啉-4-醇(7-2)的合成。62.0g(7-1)、55.2g N-乙基-N'-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和30.1g N-羟基丁二酰亚胺(HOSu)于1L绝对二甲基甲酰胺(DMF)中的混合物在室温下搅拌1小时。添加4-二甲氨基吡啶(DMAP，38.7g)并且在室温下搅拌混合物2小时。过滤混合物，并且固体用10％HOAc(4×200mL)洗涤，风干整夜，然后在60℃、在高真空下干燥，得到呈浅黄色粉末状的(7-2)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ
Figure BDA0003354581690000576
7.52(dd,1H,J＝0.8,8.8Hz),7.91(dd,1H,J＝7.2,8.8Hz),9.15(s,1H),13.0(br,1H,OH).LC-MS:242.9(MH)+,264.9(MNa)+。
4-溴-6-氯-5-氟-3-硝基喹啉(7-3)的合成。40g(7-2)与71g POBr3于150mL无水DMF中的混合物在80℃搅拌1小时。混合物冷却到室温，用2L CH2Cl2稀释，并且转移到含有1.5L冰水的分液漏斗中。分离出有机层，用冰水(3×1.5L)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发，得到呈浅褐色固体状的粗(7-3)，其不经进一步提纯即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000578
4.70(br,2H,NH2),7.42(dd,1H,J＝6.0,9.0Hz),7.73(dd,1H,J＝1.8,8.8Hz).LC-MS:274.8(MH)+,276.8[(M+2)H]+,278.8[(M+4)H]+。
4-溴-6-氯-5-氟喹啉-3-胺(7-4)的合成。在Ar下将粗(7-3)(51.2g)溶解于40mL冰HOAc中，添加3g Fe粉末，并且在60℃搅拌混合物10分钟。混合物用200mL EtOAc稀释，通过硅藻土过滤并且用EtOAc充分地洗涤硅藻土。使合并的滤液通过短硅胶柱，并且用EtOAc洗涤柱直到所有(7-4)都被回收。将合并的EtOAc洗脱份蒸干，得到粗(7-4)，从己烷-EtOAc中结晶，得到呈浅褐色固体状的(7-4)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000577
4.70(br,2H,NH2),7.42(dd,1H,J＝6.0,9.0Hz),7.73(dd,1H,J＝1.8,8.8Hz)。LC-MS:274.8(MH)+,276.8[(M+2)H]+,278.8[(M+4)H]+。
2-(3-氨基-6-氯-5-氟喹啉-4-基)丙-2-醇(II-7)的合成。干燥的1L圆底烧瓶用氩气吹扫并且在干冰/丙酮浴中冷却到-78℃。注射无水四氢呋喃(THF，300mL)，随后注射72.6mL2.5M n-BuLi/己烷。在剧烈搅拌下，历经2小时逐滴添加含有(7-4)(20g)的300mL无水THF，得到4-喹啉锂的暗红色溶液。历经10分钟逐滴添加超级无水丙酮(27mL)，并且搅拌溶液额外10分钟。添加20g NH4Cl于100mL水中的溶液并且使混合物升温到室温，转移到含有300mL EtOAc的分液漏斗中并且充分地振荡。分离出有机层且用EtOAc(2×250mL)萃取水层。合并的有机层用无水MgSO4干燥并且蒸发成深棕色残余物，所述残余物通过硅胶柱色谱法、用己烷-EtOAc洗脱而部分提纯，得到含有6-氯-5-氟喹啉-3-胺和(II-7)的混合物。通过从己烷-EtOAc中结晶而分离出II-7。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ
Figure BDA0003354581690000586
1.79(s,3H),1.80(s,3H),7.36(dd,1H,J＝7.2,8.8Hz),7.61(dd,1H,J＝1.6,9.0Hz),8.35(s,1H)。13C NMR(100MHz,CD3OD)δ
Figure BDA0003354581690000585
29.8,29.9,76.7,120.4(d,JC-F＝12Hz),120.5(d,JC-F＝4Hz),125.4,126.1(d,JC-F＝3Hz),126.6(d,JC-F＝3Hz),143.1,143.2(d,JC-F＝5Hz),148.3,152.7(d,JC-F＝248Hz)。LC-MS:254.9(MH)+,256.9[(M+2)H]+。
实例5：II-8的合成
Figure BDA0003354581690000581
6-氯-3-硝基喹啉-4-醇(8-1)的合成。顺-5-氯-2-(2-硝基乙烯基氨基)苯甲酸和反-5-氯-2-(2-硝基乙烯基氨基)苯甲酸(68.4g，苏斯(Sus)等人，利比希化学纪事(LiebigsAnn.Chem.)583:150(1953))、73g EDC与35.7g HOSu于1L无水DMF中的混合物在室温下搅拌1小时。添加45.8g DMAP之后，在室温下搅拌混合物2小时。向经搅拌混合物中缓慢添加1L10％HOAc，并且将所得悬浮液倒入2L 10％HOAc中。滤出固体，用10％HOAc(4×400mL)洗涤并且在80℃、在高真空下干燥，得到呈褐色粉末状的(8-1)。
4-溴-6-氯-喹啉-3-胺(8-2)的合成。25g(8-1)与50g POBr3于100mL无水DMF中的混合物在80℃搅拌1小时。将反应混合物冷却到室温，用2L CH2Cl2稀释，并且转移到含有1L冰水的分液漏斗中。分离出有机层，用冰水(3×1L)洗涤，用MgSO4干燥且蒸发，提供呈浅棕色固体状的粗4-溴-6-氯喹啉-4-醇(38g，100％粗产率)。将喹啉醇溶解于750mL冰HOAc中，添加36g铁粉，并且经搅拌的混合物在Ar下、在60℃加热直到颜色变成灰色。混合物用2LEtOAc稀释，通过硅藻土过滤并且用EtOAc洗涤硅藻土。使合并的滤液通过短硅胶柱，并且用EtOAc洗涤柱直到所有(8-2)都被回收。将合并的洗脱份蒸干并且使残余物从己烷-EtOAc结晶，得到呈褐色固体状的(8-2)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000587
4.47(br,2H,NH2),7.41(dd,1H,J＝2.4,8.8Hz),7.89(d,1H,J＝9.2Hz),7.96(d,1H,J＝2.4Hz),8.45(s,1H)。LC-MS:256.7(MH)+,258.7[(M+2)H]+,260.7[(M+4)H]+。
2-(3-氨基-6-氯喹啉-4-基)丙-2-醇(II-8)的合成。在60℃搅拌20g(8-2)与800mL二噁烷的混合物直到溶液形成，使所述溶液冷却到室温并且用干燥HCl喷射5分钟。蒸发溶剂，添加500mL二噁烷并且蒸发，得到4-溴-6-氯喹啉-3-铵盐酸盐。将产物与100g NaI和600mL无水MeCN混合并且回流整夜。蒸发溶剂并且残余物在500mL EtOAc与10gNaHCO3于500mL水中的溶液之间分配。分离出有机层，且用EtOAc(2×200mL)萃取水层。合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸发，得到呈褐色固体状的6-氯-4-碘喹啉-3-胺。干燥的1L圆底烧瓶用氩气吹扫并且在干冰/丙酮浴中冷却到-78℃。在剧烈搅拌下，添加无水THF(350mL)，随后添加188mL 1.7M t-BuLi/戊烷。向经搅拌的混合物中逐滴添加25.8g粗6-氯-4-碘喹啉-3-胺于350mL无水THF中的溶液。当添加完成时，在-78℃搅拌反应混合物5分钟。逐滴添加超级无水丙酮(50mL)并且在添加完成之后，在-78℃搅拌溶液10分钟。添加20g NH4Cl于200mL水中的溶液，并且使混合物升温到室温，转移到含有300mL EtOAc的分液漏斗中。分离出有机层且用EtOAc(2×250mL)萃取水层。合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸发成深棕色残余物。残余物通过硅胶柱色谱、用己烷-EtOAc洗脱来部分提纯。合并所有含有(8-3)的洗脱份且蒸发，得到呈红色油状的粗(8-3)。
将单独合成获得的一批粗ii)(约2g)添加到此产物中，并且使合并的批料溶解于50mL EtOAc中并且过滤。合并滤液与洗涤液且浓缩成油状物，所述油状物用10mL热己烷稀释，用EtOAc逐滴处理直到形成透明溶液，并且在室温下、在通风橱中蒸发整夜。除去油性母液，并且用最小体积的3:1己烷-EtOAc洗涤固体。从己烷-EtOAc中再结晶两次之后，获得呈灰白色晶体状的第一批纯(II-8)。合并所有母液和洗涤液并且添加EtOAc(约50mL)，形成了透明溶液，所述透明溶液用0.5N HCl水溶液(4×100mL)萃取。合并水层并且用20％NaOH中和到pH 8。所得悬浮液用EtOAc(3×50mL)萃取并且合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸干。残余物通过柱色谱法和从己烷-EtOAc中结晶两次来提纯，得到第二批(8-3)。通过将合并的母液与洗涤液从己烷-EtOAc中分步结晶来获得第三批(8-3)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000593
1.93(s,6H),3.21(br,1H,OH),5.39(br,2H,NH2),7.29(dd,1H,J＝2.0,8.8Hz),7.83(d,1H,J＝8.8Hz),7.90(d,1H,J＝2.0Hz),8.21(s,1H)。13C NMR(100MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000594
31.5,76.5,123.2,124.6,125.7,127.5,131.5,131.9,138.8,141.5,146.5。LC-MS:236.9(MH)+,238.9[(M+2)H]+。
实例6：II-39的合成
Figure BDA0003354581690000601
4-苯甲酰基氨基-5-羟基-2-硝基苯甲酸乙酯(39-1)的合成。2.26g粗4-氨基-5-羟基-2-硝基苯甲酸乙酯(40-4，参见下文)和1.91g苯甲酰氯于25mL 1,4-二噁烷中的混合物在95℃搅拌1小时。除去溶剂且残余物随EtOH一起蒸发两次。残余物进一步随EtOAc蒸发两次，然后在60℃、在高真空下干燥，得到呈褐色固体状的粗(39-1)。
4-苯甲酰基氨基-2-氯-3-羟基-6-硝基苯甲酸乙酯(39-2)的合成。搅拌3.23g(39-1)于100mL二噁烷中的悬浮液直到形成透明溶液。向溶液中添加70μL DIPA，并且搅拌溶液直到50℃，随后添加2.03mL SO2Cl2。将反应混合物在氩气下、在50℃搅拌1小时，冷却到室温，用200mL EtOAc稀释，用水(3×100mL)洗涤，然后用MgSO4干燥。蒸发溶剂并且在60℃、在高真空下干燥残余物，得到呈棕色固体状的粗(39-2)。
7-氯-5-硝基-2-苯基苯并噁唑-6-甲酸乙酯(39-3)的合成。在室温下搅拌3.74g粗(39-2)与3.93g Ph3P于50mL无水THF中的混合物直到形成溶液。向溶液中添加6.7mL 40％DEAD/甲苯，且在70℃搅拌混合物1小时。用EtOH稀释混合物并且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的(39-3)。
5-氨基-7-氯-2-苯基苯并噁唑-6-甲酸乙酯(39-4)的合成。0.89g(39-3)、2.0g铁粉与25mL冰HOAc的混合物在剧烈搅拌下、在60℃加热1.5小时。用200mL EtOAc稀释混合物。使浆液通过硅藻土团粒，并且用EtOAc洗涤硅藻土。使合并的滤液通过短硅胶柱，并且用EtOAc洗脱柱。蒸发合并的黄色洗脱份，并且使残余物从己烷-EtOAc中结晶，得到呈亮黄色固体状的纯(39-4)。
2-(5-氨基-7-氯-2-苯基苯并噁唑-6-基)丙-2-醇(II-39)的合成。6mL3.0MMeMgCl/THF与6mL THF的混合物置于氩气下保护，并且在剧烈搅拌下、在冰浴中冷却。向其中逐滴添加638mg(39-4)于50mL THF中的溶液。完成添加后，在0℃搅拌混合物5分钟。在冷却和剧烈搅拌的情况下向所述混合物中添加100mL饱和NH4Cl。分离出有机层，且用DCM(3×100mL)萃取水层。合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸发。以MeOH-DCM作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法来提纯粗产物，然后从庚烷-DCM中结晶，得到呈浅黄色固体状的纯(II-39)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000602
1.92(s,6H),4.69(br,3H,NH2和OH),6.87(s,1H),7.48-7.54(3H),8.21(m,2H)。13C NMR(100MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000612
31.0,77.0,106.3,113.6,126.8,126.9,127.7,128.9,131.6,140.9,143.0,145.4,163.9。LC-MS:303.1(MH)+,305.0[(M+2)H]+。
实例7：II-40的合成
Figure BDA0003354581690000611
3-甲氧基-4-(三氟乙酰基氨基)苯甲酸(40-1)的合成。在搅拌下，向5.0g 4-氨基-3-甲氧基苯甲酸于200mL EtOAc中的悬浮液中添加5.0mL(CF3CO)2O于50mL EtOAc中的溶液。完成添加后，在室温下进一步搅拌反应混合物2小时。过滤溶液，且将滤液蒸干。将残余物溶解于EtOAc中并且蒸发两次。在高真空下干燥最终残余物，得到呈白色固体状的纯(40-1)。
5-甲氧基-2-硝基-4-(三氟乙酰基氨基)苯甲酸(40-2)的合成。在室温下搅拌7.55g(40-1)于80mL 96％H2SO4中的悬浮液直到形成均相溶液。在搅拌下用冰浴冷却溶液，同时在冷却下逐滴添加2.03g 90.6％发烟HNO3于20mL 96％H2SO4中的溶液。维持温度低于10℃。完成添加后，进一步搅拌混合物10分钟，然后在剧烈搅拌下缓慢添加到200g冰上。用NaCl使混合物饱和并且用EtOAc(3×100mL)萃取。合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，然后蒸发，得到呈浅棕色固体状的纯(40-2)。
4-氨基-5-羟基-2-硝基苯甲酸(40-3)的合成。6.94g(40-2)于35mL 20％NaOH水溶液中的混合物在氩气下、在100℃搅拌整夜。将混合物冷却到室温。在冰浴冷却下向其逐滴添加20mL 12N HCl。完成添加后，蒸发溶液，并且用200mL无水EtOH萃取残余物。滤出固体NaCl，并且蒸发滤液，得到呈深灰色固体状的(40-3)的粗HCl盐。
4-氨基-5-羟基-2-硝基苯甲酸乙酯(40-4)的合成。将上述6.95g(40-3)的粗HCl盐溶解于250mL无水EtOH中。用干燥HCl吹扫溶液直到几乎饱和，然后在80℃搅拌36小时。蒸发溶剂，并且残余物在200mL EtOAc与200mL盐水之间分配。用EtOAc(2×100mL)萃取水层。合并的有机层用Na2SO4干燥，用2mL HOAc酸化，然后通过短硅胶柱。柱用1％HOAc/EtOAc洗脱。将合并的黄色洗脱份蒸发，得到呈红色粘油状的粗(40-4)。
5-羟基-4-(4-甲基苯甲酰氨基)-2-硝基苯甲酸乙酯(40-5)的合成。2.26粗(40-4)与2.1g对甲苯甲酰氯于25mL 1,4-二噁烷中的混合物在95℃搅拌1.5小时。除去溶剂，并且残余物随EtOH一起蒸发两次，然后随EtOAc一起蒸发两次。最终残余物在60℃、在高真空下干燥，得到呈褐色固体状的粗(40-5)。
2-氯-3-羟基-4-(4-甲基苯甲酰氨基)-6-硝基苯甲酸乙酯(40-6)的合成。搅拌3.35g(40-5)于100mL二噁烷中的悬浮液直到形成透明溶液，然后添加70μL二异丙基胺(DIPA)。在50℃搅拌溶液，同时添加1.96mL SO2Cl2。反应混合物在氩气下在50℃搅拌1小时，冷却到室温，用200mL EtOAc稀释，用水(3×100mL)洗涤，并且用MgSO4干燥。蒸发溶剂并且在60℃、在高真空下干燥残余物，得到呈棕色固体状的粗(40-6)。
7-氯-5-硝基-2-(对甲苯基)苯并噁唑-6-甲酸乙酯(40-7)的合成。在室温下搅拌4.35g粗(40-6)与3.93g Ph3P于50mL无水THF中的混合物直到形成溶液。向溶液中添加6.7mL 40％DEAD/甲苯，且在70℃搅拌混合物1小时。混合物用50mL EtOH稀释且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的纯(40-7)。
5-氨基-7-氯-2-(对甲苯基)苯并噁唑-6-甲酸乙酯(40-8)的合成。1.17g(40-7)、1.07g铁粉与25mL冰HOAc的混合物在剧烈搅拌下、在60℃加热3小时。用200mL EtOAc稀释反应混合物。使浆液通过硅藻土团粒，并且用EtOAc洗涤硅藻土。使合并的滤液通过短硅胶柱，并且用EtOAc洗脱柱。蒸发合并的黄色洗脱份，并且使残余物从己烷-EtOAc中结晶，得到呈亮黄色固体状的纯(40-8)。
2-(5-氨基-7-氯-2-(对甲苯基)苯并噁唑-6-基)丙-2-醇(II-40)的合成。7.0mL3.0MMeMgCl/THF与6mL THF的混合物置于氩气下保护，并且在剧烈搅拌下、在冰浴中冷却。向其中逐滴添加886mg(40-8)于50mL THF中的溶液。完成添加后，在0℃搅拌混合物5分钟。在冰浴冷却和剧烈搅拌下向所述混合物中添加100mL饱和NH4Cl。分离出有机层，且用CH2Cl2(DCM)(3×100mL)萃取水层。合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸发。以MeOH-DCM作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法来提纯粗产物，然后从庚烷-DCM中结晶，得到呈灰白色固体状的纯(II-40)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000624
1.89(s,6H),2.41(s,3H),4.45(br,3H,NH2和OH),6.81(s,1H),7.27(d,1H,J＝8.8Hz),8.07(d,1H,J＝8.4Hz)。13C NMR(100MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000625
21.7,31.0,76.9,106.2,113.5,124.0,126.8,127.6,129.6,140.9,142.2,142.9,145.3,164.1。LC-MS:317.0(MH)+,319.0[(M+2)H]+。
实例8：II-41的合成
Figure BDA0003354581690000621
(2-氯-4,6-二甲氧基苯基)环丙基甲酮(41-1)的合成。28.28g 1-氯-3,5-二甲氧基苯和17.8mL环丙烷碳酰氯于300mL无水1,2-二氯乙烷(DCE)中的溶液用氩气保护，并且在干冰/丙酮浴中冷却到-30℃到-40℃。在剧烈搅拌下向其中分数份添加32.4g AlCl3粉末。完成添加后，在-30℃到-40℃搅拌溶液30分钟，然后使其升温到室温。进一步在室温下搅拌20分钟之后，在搅拌下将混合物添加到1kg冰上。用乙醚(3×300mL)萃取混合物。合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸发。以己烷/EtOAc作为洗脱剂、通过柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的纯(41-1)。
(2-氯-6-羟基-4-甲氧基苯基)环丙基甲酮(41-2)的合成。用氩气13.45g(41-1)于100mL无水DCM中的溶液保护，并且在搅拌下、在-78℃(干冰/丙酮浴)冷却。向其中添加62mL1M BBr3/DCM。完成添加后，进一步在-78℃搅拌混合物1小时。在干冰/丙酮浴冷却和剧烈搅拌下向所述混合物中缓慢注入50mL MeOH。完成添加后，进一步在-78℃搅拌混合物10分钟，然后使其升温到室温。将混合物在500mL DCM与500mL盐水之间分配。分离出有机层，用盐水(2×100mL)洗涤，然后与4.0g NaOH于300mL水中的溶液混合。在室温下搅拌1小时之后，在搅拌下用10mL 12N HCl水溶液使混合物酸化。分离出有机层，经MgSO4干燥，并且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的(41-2)。
(E)-和(Z)-(2-氯-6-羟基-4-甲氧基苯基)环丙基甲酮肟(41-3)的合成。10.38g(41-2)与15.95g NH2OH·HCl于150mL无水吡啶中的混合物置于氩气下保护，并且在80℃搅拌20小时。蒸发溶剂，并且残余物在400mL 0.1N HCl/盐水与400mL Et2O之间分配。分离出有机层，用水(2×50mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发。使残余物从庚烷-EtOAc中结晶，得到呈白色固体状的纯(41-3)。
(E)-和(Z)-(2-氯-6-羟基-4-甲氧基苯基)环丙基甲酮O-乙酰基肟(41-4)的合成。在搅拌下，在室温下，向9.75g(41-3)于40mL EtOAc中的悬浮液中添加6.5mL Ac2O。完成添加后，在室温下搅拌混合物1小时。向混合物中添加50mL MeOH和20mL吡啶，并且在室温下搅拌混合物30分钟。蒸发溶剂，并且残余物在300mL 1N HCl/盐水与300mL EtOAc之间分配。分离出有机层，用水(2×50mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发，得到呈浅棕色油状的粗(41-4)。
4-氯-3-环丙基-6-甲氧基苯并异噁唑(41-5)的合成。粗(41-4)置于氩气下保护，且在150℃油浴中加热3小时。粗产物通过使用己烷-EtOAc作为洗脱剂的硅胶柱色谱法提纯，得到呈浅褐色固体状的纯(41-5)。
4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-醇(41-6)的合成。7.61g(41-5)于75mL无水DCM中的溶液置于氩气下保护，并且在干冰/丙酮浴中冷却到-78℃。在剧烈搅拌下，向其中逐滴添加含80mL 1M BBr3的DCM。完成添加后，使混合物升温到室温，然后在室温下搅拌1小时。混合物于干冰/丙酮浴中再次冷却到-78℃。在剧烈搅拌下向混合物中添加20mL MeOH。完成添加后，使反应混合物升温到室温，然后在1.5L盐水与1.5L EtOAc之间分配。分离出有机层，且用EtOAc(2×300mL)萃取水层。合并的有机层用MgSO4干燥，并且通过用EtOAc洗脱的短硅胶柱。蒸发合并的洗脱份，得到呈浅棕色油状的纯(41-6)，静置后凝固。
三氟甲烷磺酸4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-基酯(41-7)的合成。6.88g(41-6)与4mL吡啶于50mL DCM中的混合物置于氩气下保护并且在冰浴中、在0℃搅拌。在剧烈搅拌下向其中逐滴添加6.73mL Tf2O。完成添加后，使混合物升温到室温。在室温下进一步搅拌10分钟之后，将混合物在200mL 1N HCl与300mL DCM之间分配。分离出有机层，依序用100mL1N HCl、100mL盐水、100mL 5％NaHCO3水溶液和100mL盐水洗涤，用MgSO4干燥，然后蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过柱色谱提纯残余物，得到呈灰白色固体状的纯(41-7)。
(4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯(41-8)的合成。用氩气吹扫8.02g(41-7)、2.87g氨基甲酸叔丁酯、2.37g tBuONa、1.08g三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2dba3)、2.0g 2-二-叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(叔丁基Xphos)与7g
Figure BDA0003354581690000641
分子筛于120mL无水甲苯中的混合物，然后在剧烈搅拌下、在110℃加热20分钟。反应混合物用300mL EtOAc稀释，并且通过硅藻土团粒，然后用EtOAc洗涤。蒸发合并的溶液并且以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈浅棕色油状的粗(41-8)。
6-氨基-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑(41-9)的合成。将4.09g粗(41-8)溶解于10mLDCM中，随后添加10mL TFA。在室温下搅拌混合物30分钟。除去溶剂，并且残余物在200mLDCM与200mL 10％NaHCO3之间分配。分离出有机层，用水(2×50mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的纯(41-9)。
5-溴-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-基胺(41-10)和7-溴-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-基胺(43-1，参见下文)的合成。在剧烈搅拌下、在室温下向1.96g(41-9)于100mLDCM中的溶液中以小份添加1.67g固体NBS。完成添加后，在室温下进一步搅拌混合物30分钟，用100mL DCM稀释，依次用10％NaHSO3水溶液(200mL)和水(2×200mL)洗涤，用MgSO4干燥，并且蒸发，得到(41-10)与(43-1)的1:1混合物，其呈褐色油状，静置时凝固。
6-氨基-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-5-甲腈(41-11)和6-氨基-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-7-甲腈(43-2，参见下文)的合成。用氩气吹扫2.72g(41-10)与(43-1)混合物、1.70g CuCN和3.62g CuI于25mL无水DMF中的悬浮液，然后在油浴中、在剧烈搅拌下、在110℃加热15小时。将混合物冷却到室温。向其中添加100mL 30％NH3水溶液。在室温下搅拌1小时之后，混合物用300mL水稀释且用EtOAc(2×500mL)萃取。合并的有机层用水(3×200mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂，通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈浅黄色固体状的(41-11)和呈浅褐色固体状的(43-2)。
4-氯-5-氰基-3-环丙基-6-(三苯甲基氨基)苯并异噁唑(41-12)的合成。在搅拌下，在室温下，向435mg(41-11)与700μL TEA于20mL DCM中的混合物中以小份添加1.09g固体三苯甲基氯。完成添加后，在室温下进一步搅拌混合物30分钟。反应混合物用300mL DCM稀释，用水(4×200mL)洗涤，用MgSO4干燥，然后蒸发。以DCM作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的纯(41-12)。
4-氯-3-环丙基-6-(三苯甲基氨基)苯并异噁唑-5-甲醛(41-13)的合成。481mg(41-12)于13mL无水THF中的溶液在冰浴中、在搅拌下冷却。向溶液中逐滴添加7mL1MDIBAL/甲苯。完成添加后，在0℃搅拌反应混合物2.5小时。用100mL 1％酒石酸水溶液淬灭反应，并且用DCM(3×100mL)萃取混合物。有机层用水(3×100mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发。将残余物溶解于DCM中并且吸附于硅胶上。风干混合物并且通过以己烷-EtOAc作为溶离剂的硅胶柱色谱法进行分离，得到呈黄色固体状的粗(41-13)。
1-[4-氯-3-环丙基-6-(三苯甲基氨基)苯并异噁唑-5-基]乙醇(41-14)的合成。将上述257.8mg粗(41-13)溶解于10mL无水THF中，并且在0℃(冰浴)下，在搅拌下将溶液添加到2.0mL 3M MeMgCl/THF与2mL无水THF的混合物中。完成添加后，进一步在0℃搅拌混合物5分钟，然后在冰浴冷却下用100mL 5％NH4Cl淬灭。混合物用DCM(3×100mL)萃取，用MgSO4干燥并且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的纯(41-14)。
1-[4-氯-3-环丙基-6-(三苯甲基氨基)苯并异噁唑-5-基]乙酮(41-15)的合成。在室温下，在剧烈搅拌下，向150.5mg(41-14)于20mL无水DCM中的溶液中以小份添加271mg固体戴斯-马丁高碘烷(1,1,1-三乙酰氧基-1,1-二氢-1,2-苯并碘氧杂环戊-3(1H)-酮，DMP)。完成添加后，进一步在室温下搅拌反应混合物10分钟。反应混合物用300mL DCM稀释，用水(4×200mL)洗涤，用MgSO4干燥且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈浅黄色固体状的纯(41-15)。
1-(6-氨基-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-5-基)乙酮(41-16)的合成。在搅拌下，在室温下向182mg(41-15)于20mL无水DCM中的溶液中逐滴添加2mL TFA。在室温下搅拌溶液10分钟，用200 mL DCM稀释，用水(4×100 mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发，得到呈白色固体状的粗(41-16)。
2-(6-氨基-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-5-基)丙-2-醇(II-41)的合成。将174.7mg粗(41-16)溶解于20 mL无水THF中，并且在0℃(冰浴)下将溶液逐滴添加到2.5 mL3MMeMgCl/THF与2 mL THF的经充分搅拌的混合物中。完成添加后，进一步在0℃搅拌混合物5分钟。在冰浴冷却和搅拌下向其中逐滴添加100 mL 5％NH4Cl水溶液。混合物用DCM(3×100 mL)萃取，用MgSO4干燥并且蒸发。以MeOH-DCM作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法来提纯粗产物，然后从庚烷-DCM中结晶，得到呈白色固体状的纯(II-41)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000663
1.10(m,2H),1.20(m,2H),1.91(s,6H),2.18(m,1H),4.28(br,2H,NH2),6.57(s,1H).13CNMR(100 MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000662
8.68,9.35,30.0,77.4,97.4,121.2,125.1,133.1,145.7,149.3,166.4.LC-MS:266.9(MH)+,269.0[(M+2)H]+。
实例9：II-42的合成
Figure BDA0003354581690000661
环丙烷甲酸甲氧基甲酰胺(42-1)的合成。9.75 g N,O-二甲基羟胺盐酸盐和9.7mL吡啶于200 mL DCM中的悬浮液在室温下搅拌10分钟，然后在搅拌下在冰浴中冷却。在剧烈搅拌下，向悬浮液中逐滴添加9.03 mL环丙烷碳酰氯于40 mL DCM中的溶液。完成添加后，在0℃搅拌混合物30分钟，然后在室温下搅拌1小时。溶液用100 mL DCM稀释，用盐水(3×200 mL)洗涤，并且用MgSO4干燥。蒸发溶剂，并且真空蒸馏残余物。在43-45℃/l mmHg下收集洗脱份，得到呈无色液体状的(42-1)。
2-(3-氯-4-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六甲基二硅氮烷(42-2)的合成。7.3 g 3-氯-4-氟苯胺于100 mL无水THF中的溶液置于氩气下保护并且在-78℃(干冰/丙酮浴)冷却。在剧烈搅拌下，向溶液中缓慢添加21 mL含2.5 M nBuLi的己烷。完成添加后，进一步在-78℃搅拌悬浮液10分钟。在剧烈搅拌下向后者中缓慢添加6.65 mL氯三甲基硅烷(TMSCl)。完成添加后，进一步在-78℃搅拌混合物30分钟。在剧烈搅拌下，向后者中再次添加24 mL 2.5MnBuLi，随后添加7.65 mL TMSCl。在-78℃下搅拌混合物30分钟，然后使其升温到室温。除去溶剂并且真空蒸馏残余物。在低于95℃/l mmHg下收集洗脱份，合并，得到呈无色液体状的(42-2)。
(5-氨基-3-氯-2-氟苯基)(环丙基)甲酮(42-3)的合成。在氩气下，将9.11 g(42-2)于100mL无水THF中的溶液在干冰/丙酮浴中冷却到-78℃。在剧烈搅拌下，向其中逐滴添加15.7mL含2.5M nBuLi的己烷。完成添加后，在-78℃搅拌混合物2小时。在搅拌下，向混合物中缓慢添加5.2g(42-1)。完成添加后，在-78℃搅拌反应混合物1小时，然后使其升温到室温。在搅拌下将反应混合物倒入400mL冷1:1MeOH/1N HCl中。进一步搅拌30分钟之后，用DCM(3×200mL)萃取混合物。合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸发，得到呈浅棕色油状的粗(42-3)。
N-[3-氯-5-(环丙基羰基)-4-氟苯基]乙酰胺(42-4)的合成。将粗(42-3)(6.09g)溶解于100mL DCM中。在冰浴冷却和剧烈搅拌下向其中依次添加6mL乙酸酐(Ac2O)和9.6mL三乙胺(TEA)。完成添加后，进一步在室温下搅拌反应混合物1小时，用200mL DCM稀释，并且用0.1N HCl(3×200mL)洗涤。用MgSO4干燥有机层并且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法来提纯粗产物，然后从己烷-EtOAc中结晶，得到呈白色固体状的纯(42-4)。
(E)-和(Z)-N-{3-氯-5-[环丙基(羟亚胺基)甲基]-4-氟苯基}乙酰胺(42-5)的合成。2.28g(42-4)、3.1g NH2OH·HCl、30mL吡啶和30mL EtOH的混合物在50℃搅拌22小时。蒸发EtOH，并且将残余物分配于200mL Et2O与200mL 1N HCl/盐水之间。分离有机层，用水(2×20mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发，得到呈灰白色无定形固体状的纯(42-5)。
N-(7-氯-3-环丙基苯并异噁唑-5-基)乙酰胺(42-6)的合成。2.01g(42-5)于40mL无水DMF中的溶液用氩气保护并且在冰浴冷却下搅拌。在剧烈搅拌下，向溶液中分数份添加1.48g含60％NaH的矿物油。完成添加后，在室温下搅拌反应混合物1.5小时，然后在搅拌下小心地添加到300mL饱和NaHCO3与300mL EtOAc的混合物中。分离出有机层，用水(3×50mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发。以己烷-EtOAc作为洗脱剂、通过柱色谱法分离残余物，得到呈白色固体状的纯(42-6)。
乙酰基(7-氯-3-环丙基苯并异噁唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯(42-7)的合成。789.3mg(42-6)、808mg Boc2O与38mg DMAP于40mL无水DCM中的混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，得到呈白色固体状的粗(42-7)。
(7-氯-3-环丙基苯并异噁唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯(42-8)的合成。将上述粗(42-7)溶解于100mL MeOH中。用0.1mL 25wt.％NaOMe/MeOH使溶液碱化，然后在室温下搅拌30分钟。向溶液中添加1g固体NH4Cl，并且蒸发溶剂。将残余物分配于300mL 0.1N HCl/盐水与300mL EtOAc之间。分离有机层，依次用100mL 0.1N HCl/盐水、100mL水、100mL饱和NaHCO3以及100mL水洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发。使残余物从庚烷-EtOAc中结晶，得到呈白色固体状的纯(42-8)。
5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-7-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-甲酸(42-9)的合成。770mg(42-8)于50 mL无水THF中的溶液置于氩气下保护，并且在干冰/丙酮浴冷却下搅拌。在剧烈搅拌下，向溶液中逐滴添加5.9 mL 1.7 M tBuLi/戊烷。完成添加后，进一步在78℃搅拌混合物5分钟。在剧烈搅拌下向后者一次性添加7.2 g新压碎的干冰。在-78℃搅拌混合物5分钟，然后使其升温到室温。将反应混合物分配于300 mL 1 N HCl/盐水与300mL EtOAc之间。分离有机层，用100 mL 0.1 N HCl/盐水洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发。通过用己烷/EtOAc/HOAc作为溶离剂的硅胶柱色谱法分离残余物，得到呈灰白色泡沫状的(42-9)。
5-[(叔丁氧基羰基)氨基-7-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-甲酸甲酯(42-10)的合成。在冰浴冷却下搅拌815 mg(42-9)和5 mL MeOH于10 mL DCM中的溶液。在搅拌下，向溶液中逐滴添加2.31 mL含2 M三甲基硅烷基重氮甲烷(TMSCHN2)的己烷。完成添加后，在室温下搅拌溶液10分钟并且蒸发。将残余物溶解于100 mL DCM中，并且使溶液通过短硅胶柱。柱用MeOH-DCM洗脱，并且蒸发合并的洗脱份，得到呈灰白色固体状的(42-10)。
5-氨基-7-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-甲酸甲酯(42-11)的合成。在冰浴冷却下搅拌813mg(42-10)于10 mL DCM中的溶液。在搅拌下，向其中逐滴添加10 mL TFA。完成添加后，在室温下搅拌混合物30分钟并且蒸发。将残余物分配于200 mL饱和NaHCO3与200mLEtOAc之间。分离有机层，用水(2×50 mL)洗涤，用MgSO4干燥并且蒸发，得到呈黄色油状的(42-11)，其在静置时凝固。
2-(5-氨基-7-氯-3-环丙基苯并异噁唑-6-基)丙-2-醇(II-42)的合成。7.73 mL 3MMeMgCl/THF于6 mL无水THF中的溶液置于氩气下保护并且在冰浴冷却下搅拌。在剧烈搅拌下向其中逐滴添加620 mg(42-11)于50 mL无水THF中的溶液。完成添加后，使混合物升温，然后在室温下搅拌1小时。在搅拌和冰浴冷却下小心地将混合物添加到300mL NH4Cl饱和水溶液中。混合物用DCM(3×100 mL)萃取，用MgSO4干燥并且蒸发。以MeOH-DCM作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法来提纯粗产物，然后从庚烷-DCM中结晶，得到呈灰白色固体状的纯(II-42)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000681
1.10(m,2H),1.15(m,2H),1.91(s,6H),2.09(m,1H),4.33(br,3H,NH2和OH),6.70(s,1H)。13C NMR(100MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000682
7.11,7.25,30.7,77.1,105.6,113.7,120.4,132.5,144.4,155.4,160.5.LC-MS:267.1(MH)+,269.1[(M+2)H]+。
实例10：II-43的合成
Figure BDA0003354581690000691
1-(6-氨基-4-氯-3-环丙基-苯并异噁唑-7-基)乙酮(43-3)的合成。在搅拌和冰浴冷却下向636 mg(43-2)与43 mg CuI的混合物中缓慢添加8.16 mL 3 M MeMgCl/THF。悬浮液置于氩气下保护并且在油浴中、在70℃加热15分钟。在冰浴中将混合物冷却到0℃。向其中添加136 mL MeOH，随后添加2.17 g固体NH4Cl和13.6 mL水。在搅拌下使混合物升温到室温，得到透明溶液，使其吸附到硅胶上，风干并且通过用己烷-EtOAc作为洗脱剂的硅胶柱色谱法分离，得到呈黄色固体状的(43-3)。
2-(6-氨基-4-氯-3-环丙基苯并异噁唑-7-基)丙-2-醇(II-43)的合成。1.54 mL 3MMeMgCl/THF与5 mL无水THF的混合物置于氩气下保护并且在冰浴冷却下搅拌。在剧烈搅拌下，向其中逐滴添加387.1 mg(43-3)于15 mL无水THF中的溶液。完成添加后，进一步在0℃搅拌溶液20分钟。在冰浴冷却和剧烈搅拌下，向溶液中添加100 mL饱和NH4Cl水溶液。使混合物升温到室温并且用DCM(3×100 mL)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥并且蒸发。以MeOH-DCM作为洗脱剂、通过硅胶柱色谱法来提纯粗产物，然后从庚烷-DCM中结晶，得到呈浅褐色固体状的纯(II-43)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000694
1.12(m,2H),1.18(m,2H),1.78(s,6H),2.17(m,1H),4.86(br,2H,NH2),6.60(s,1H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ
Figure BDA0003354581690000695
8.81,9.26,30.1,74.1,112.7,114.4,121.8,131.3,143.8,148.6,166.1。LC-MS:267.0(MH)+,268.9[(M+2)H]+。
实例11：制备IV-1和IV-2的通用反应顺序
Figure BDA0003354581690000692
本发明化合物(例如式(IV-1)和(IV-2))可以如流程2-1和2-2中所示制备。
流程2-1
Figure BDA0003354581690000693
起始物质可以通过所属领域中已知的方法制得，如吉Z.(Ji Z.)等人，生物有机化学与医药化学通讯(Bioorg.&Med.Chem.Let.)(2012)，22，4528中所述的方法。
流程2-2
Figure BDA0003354581690000701
起始物质可以通过所属领域中已知的方法制得，如斯莫利R.K.(Smalley,R.K.)，合成科学(Science of Synthesis)(2002)11:289中所述的方法。
实例12：NS2-SSA结合物的合成
Figure BDA0003354581690000702
将NS2和丁二酸半缩醛(SSA)溶液添加到乙腈、水和盐酸的混合物中且在室温下培育1小时，形成NS2-SSA结合物。此溶液直接输注到Sciex 6500上用于质谱仪优化。解耦电位：30V；气帘：20；CAD：高；离子喷雾电压：4500V；源温：450℃；离子源气体1：50；离子源气体2：50；入口电位：10V。NS2是使用237.0片段量化，而NS2-SSA是使用321.1片段量化。
实例13：试管内分析
LDH细胞毒性分析
将原代大鼠皮层培养物在培育箱中放置24或48小时并且用各种浓度的所公开化合物处理。然后移出20μL培养基以便进行如贝格迈尔(Bergmeyer)等人，酶分析方法(Methods of Enzymatic Analysis)，第3版(1983)中所述的LDH分析。
测定循环细胞因子的量的ELISA分析
雄性C57BI/6小鼠在其暴露于LPS(20mg/kg)之前给与所公开的化合物30分钟。在LPS暴露之后两小时，收集小鼠血液并且进行ELISA以测定循环细胞因子的量。用所公开的化合物处理使得促炎性细胞因子(如IL-5和IL-1β、IL-17和TNF)减少。另外，用所公开的化合物处理引起抗炎性细胞因子(如IL-10)升高。另外，用所公开的化合物处理还使多种其它趋化因子减少，如嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)、IL-12、IP-10、LIF、MCP-1、MIG、MIP和RANTES。
评估接触性皮炎治疗功效的分析
为了测定所公开的化合物治疗接触性皮炎的功效，将肉豆蔻酸佛波醇乙酸酯(phorbol myristate acetate，“PMA”)体表施加(2.5μg/20μL)到小鼠右耳廓的前部与后部(N＝10/组)。作为对照，左耳廓的前部与后部均接受20μL乙醇(PMA赋形剂)。在PMA施加之后六小时，测定右耳廓与左耳廓厚度。两只耳朵的相同区域至少测定两次，注意不包括毛发或折叠的耳廓。
评估过敏性皮炎治疗功效的分析
为了测量所公开的化合物治疗过敏性皮炎的功效，向小鼠已剃毛的腹部施加噁唑酮(“OXL”)(1.5％，100μL于丙酮中)。七天后，测定经OXL处理的小鼠的耳廓厚度。然后向小鼠腹膜内投与所公开的化合物(100mg/kg)或媒剂(即，卡布迪索(Captisol))，随后在30分钟后向右耳廓的前部与后部均体表施加OXL(1％，20μL)。作为对照，左耳廓的前部与后部均接受20μL丙酮(OXL赋形剂)。24小时后再次测量两只耳朵的耳廓厚度。N＝10/组。
测量醛捕获率的分析
向单独的反应瓶中添加各种所公开的化合物(0.064mmol)、MDA盐(22.7％MDA，0.064mmol)和三油酸甘油酯(600mg)。向混合物中添加含20wt％卡布迪索的PBS水溶液(约2.5ml)，随后添加亚油酸(600mg)。在环境温度下剧烈搅拌反应混合物并且通过LC/MS监测。所公开的化合物与MDA快速反应而形成MDA加成物。
希夫碱确认
使用UV/VIS光谱法监测RAL与本发明化合物的伯胺发生的希夫碱缩合反应。对所公开的化合物与RAL的希夫碱缩合产物进行试管内分析。
在溶液相分析中，测量游离化合物与RAL希夫碱缩合产物(RAL-SBC)的λmax值，以及RAL-SBC的τ值。如本文所用，“RAL-SBC”是指RAL与RAL化合物的希夫碱缩合产物。使用化合物与RAL的100:1混合物，使用所属领域中已知的方案，进行溶液相分析。测试若干种溶剂系统，包括水溶液、乙醇、辛醇和三氯甲烷:甲醇(各种各样，例如2:1)。测量溶液动力学且发现其高度依赖于溶剂条件。
还使用化合物与RAL的1:1混合物，对希夫碱缩合进行固相分析。使用所属领域中已知的方案进行固相分析。在氮气下干燥混合物且缩合反应进行至完成。
使用所属领域中已知的方案进行脂质相分析且测量λmax、τ(RAL-SBC相对于APE/A2PE)和竞争性抑制。脂质体条件更接近原位条件。
对暗适应的ERG分析
暗适应是曝露于光之后的视觉敏感性的恢复。暗适应具有多个部分，包括快速(神经元)过程和缓慢(光化学)过程。
视色素的再生涉及缓慢的光化学过程。针对若干原因来测量暗适应速率。夜盲归因于暗适应丧失(视觉光敏性损失)。可以通过测量药物对暗适应的视觉光敏性的影响来找到针对夜间视力的安全剂量。
使用视网膜电图(ERG)测量正常条件相对于药物条件下的暗适应。ERG是视网膜神经元在其对实验上所定义的光刺激物作出反应期间所发出的电场电位的量度。更具体地说，ERG测量了闪光(例如50ms)之后的角膜处的视网膜电场电位。电场电位是102到103微伏，其起源于视网膜细胞。
ERG是一种无创测量，其可以针对活的个体(人类或动物)或已从活动物中手术移出的存于溶液中的半切眼进行。ERG需要减慢暗适应的全身麻醉且必须按照实验设计计算。
在暗适应实验的典型ERG分析中，每只大鼠暗适应数小时以达到一致的光敏状态。然后对大鼠进行“光漂白”，即，短暂曝露于足以使视网膜中的游离11-顺-RAL瞬时耗乏(例如在300lux下，2分钟)的强光。然后立即使大鼠返回到黑暗中以开始暗适应，即，光敏性因视色素再生而恢复。使用ERG测量大鼠多快适应黑暗和恢复光敏性。具体地说，针对光敏性定义标准反应变量。
事先通过动力学分析所测定的漂白后暗恢复的特定持续时间(例如30分钟)之后，进行ERG测量。使用曲线拟合法计算敏感性变量值且展示同一个大鼠在麻醉情况下的恢复，包括暗适应动力学Y50和σ。光敏性越弱，观察到的适应就越慢，其中Y50达到-4.0且τ＝22.6分钟。光敏性越强，观察到的适应越快，其中Y50达到-5.5且τ＝9.2分钟。
依循如上文所述的相同范例在ERG剂量范围方案中的剂量范围，腹膜內化合物使得暗适应大鼠的光敏性按照剂量依赖性方式降低。3小时之后，对视力的影响减少。
对RAL反应的NMR分析
使用NMR光谱法监测RAL与本发明化合物的伯胺发生的希夫碱缩合反应和环形成。
A2E形成的抑制
此实验是为了建立以下概念验证而设计：捕获RAL的化合物的慢性腹膜內注射使A2E在野生型史泊格多利大鼠(Sprague Dawley rats)中的积聚速率降低。这些实验是对捕获RAL的化合物与对照化合物的治疗功效和缺乏治疗进行比较。
材料和方法：
使用野生型史泊格多利大鼠进行研究。大鼠处理组包括例如每种处理条件8只性别混合的大鼠。每只动物利用以下条件之一进行处理：
·对照组：(1)抑制视觉周期蛋白质的类视黄醇结合位点的13-顺式视黄酸作为方案对照组，其中此类处理使所释放且从而可用于形成A2E的游离反式-RAL的量减少，但具有夜盲的不良副作用，和(2)临床上已知可调节人视网膜功能且在实验上已知可与游离RAL在试管内和动物模型活体内形成希夫碱加成物的市售化合物。
·媒剂
·化合物
·未处理
在包括1、5、15和50mg/kg的剂量范围内测试所公开的化合物。处理每天通过腹膜內注射投与8周。
化学：
实验使用多种化学操作。举例来说，这些实验使用配有分析说明书以表征杂质的市售化合物。还合成了化合物。制备数量对于所需剂量来说足够的化合物。化合物的调配物适用于涉及腹膜内(i.p.)注射的初步动物安全性研究。确定反式-RAL与本发明化合物形成的希夫碱反应产物的以下三种属性：
·就反应速率而言的稳定性
·吸收特性，具体地说，紫外-可见光吸收最大值和消光系数(参见例如拉普(Rapp)和巴辛格(Basinger)，视力研究(Vision Res.)22:1097，1982中的图5)或反应动力学的NMR谱分析
·log P和log D溶解度值，例如所计算的数值
生物学和生物化学：
本文所述的实验使用多种生物学和生物化学操作。确立本发明化合物按照滴眼剂调配物进行日常处理的“无作用水平”(NOEL)剂量，例如对兔使用眼部刺激方案和对啮齿动物使用ERG测量作为对光刺激的视觉反应的暗适应。处理之后且在眼摘除之前，对动物(例如兔)进行以下无创分析：
·RPE和感光细胞变性，如根据眼底摄影所显而易见(卡兰(Karan)等人，2005，美国国家科学院院刊102(11):4164-9)
·细胞外脉络膜小疣和细胞内脂褐质，如根据眼底荧光摄影所测量(卡兰等人，2005)
光反应用ERG表征(翁(Weng)等人，1999，细胞(Cell)98:13)。根据治疗方案的结论，使用如以下文献中所述的那些分析方法测量所有经处理动物的视网膜RPE细胞萃取物的细胞内A2E浓度：卡兰等人，2005，美国国家科学院院刊102(11):4164-9；那杜(Radu)等人，2003，美国国家科学院院刊100(8):4742-7；和帕里什(Parish)等人，1998，美国国家科学院院刊95(25):14609-13。举例来说，对于经处理动物的样品，分析一只眼，而另一只眼加以保存以供组织学分析(如下文所述)。对于其余动物而言，两只眼均分别分析其A2E形成。
对于搁置一旁供组织学分析用的处理后眼(如上文所述)，利用光学显微术组织学技术(卡兰等人，同上，例外之处为本文所述的实验中不使用电子显微术)评估视网膜形态和RPE。
评估处理方案的安全性，例如使用以下的组合来评估：
·在整个处理期间，每天记录动物行为和摄食习惯的观察结果
·处理期结束时的视觉表现，如依据ERG所测量
·处理结束时的眼部组织学
实例14：对缺乏SSADH的小鼠模型中的NS2的临床前测试
由于SSADH是醛代谢酶，且由于其底物SSA已知在SSADH缺乏症中积聚且假设引起其它下游代谢物积聚，因此假设用NS2处理SSADH剔除式小鼠可以引起NS2-SSA加成物产生且调节目标器官中的各种代谢物，以及引起所述模型的表型改善。
本实验的目标是评估NS2的初步药物动力学以及测量和比较SSADH剔除式小鼠和其野生型对应物在NS2或媒剂的单次腹膜内(i.p.)剂量之后八小时的各种SSA代谢物。
概述：
首先进行药物动力学研究以证明NS2-SSA加成物的确能够在活体内形成。将一次腹膜內剂量的NS2(10mg/kg)或媒剂(DMSO，7.8±1.4％；在PBS中稀释到100μL总体积)注射到野生型小鼠中。小鼠在处理当天是41-46日龄，且各组(n＝3)已根据年龄、性别和初始体重(18±3g)予以平衡。在以初始NS2药物动力学和活体内形成NS2-SSA加成物为主要目标的此24小时单次剂量研究中，这些小鼠耐受NS2。此研究的结果表明后续8小时单次剂量研究的设计可在缺乏SSADH的小鼠与野生型同窝幼仔中测得另外的生物化学结果(GHB和相关代谢物)。
小鼠中的SSADH损失引起人类疾病的严重呈现，包括第15天之后体重未能增加、体型小、缺少脂肪质量，和神经障碍。它们的特征是第16-22天之间的关键期包括全身强直-阵挛发作。3-4周龄时的死亡率100％(因群落而异)。在这些小鼠中，脑GABA的含量是野生型小鼠的2-3倍且脑GHB含量是野生型小鼠的20-60倍。关于SSADH基因剔除小鼠的其它信息，参见霍吉玛(Hogema)等人，2001，自然遗传学(Nat Genet.)29:212-16。
实验设计：
小鼠模型：B6.129-Aldh5a1tm1Kmg/J。Aldh5a1基因剔除同型接合小鼠展现体重降低、共济失调、癫痫发作、海马体神经胶质增生，和最终的持续性癫痫。从19-26日龄，反复性的强直-阵挛癫痫发作引起大于95％的死亡率。生物化学分析表明，同型突变体小鼠的脑、肝脏、心脏和肾脏中的内源酶活性完全消除。同型接合子的肝脏和脑组织中以及尿液中的GHB和GABA含量增加。可以利用多种医药治疗和基因治疗方法，在不同程度上拯救表型。虽然异型接合小鼠的内源酶活性是野生型小鼠的约50％，但是其可存活且能繁殖。具有此靶向突变的小鼠可以适用于研究丁二酸半缩醛脱氢酶(SSADH)缺乏症和探究GABA和GHB积聚对中枢神经系统发育和功能的影响。
测试制品是NS2 API粉末批号BR-NS2-11-01。材料在-80℃储存。称取材料且溶解于100％DMSO中以产生25mg/ml储备溶液，需要时在PBS中进一步稀释以维持恒定的剂量体积(依据体重)。将最终的NS2给药溶液剧烈振荡且涡旋，但不过滤。使用无菌技术操纵溶液。DMSO用作媒剂且获自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)。
在SSADH剔除式小鼠和其野生型同窝幼仔腹膜內注射一次剂量的NS2(10mg/kg)或媒剂(DMSO，在PBS中稀释到50μL总体积；5.9±2.3％DMSO)。小鼠在处理当天是22-23日龄，且各组(n＝3)根据年龄和性别予以平衡。在以初始NS2药物动力学和SSA代谢物测量为主要目标的此8小时研究中，这些小鼠对NS2具有良好耐受性。使用此模型的未来研究将涵盖寻剂量范例以确保足够的目标暴露；在生命更早期给药；和增加群组规模。
群组分配和处理：
A.野生型小鼠的初步单次剂量腹膜内药物动力学研究
对野生型C57Bl6小鼠的单次剂量腹膜內药物动力学(PK)进行初步评估。小鼠在给药时是41-46日龄。向小鼠投与10mg/kg NS2且在给药之后(基线、0.5、1、1.5、3、7、12、22小时)取样分析NS2和NS2-SSA加成物。每个时间点使用三只小鼠进行药物动力学分析。研究设计概述于下表6中。
表6：野生型小鼠的初步单次剂量腹膜內药物动力学研究设计
分组 时间点 NS2(mg/kg) 剂量体积(mL/kg) 小鼠数目 RoA
1 0，基线 0 0.4 3 i.p.
2 0.5 100 0.5 3 i.p.
3 1 100 0.4 3 i.p.
4 1.5 100 0.4 3 i.p.
5 3 100 0.4 3 i.p.
6 7 100 0.4 3 i.p.
7 12 100 0.4 3 i.p.
8 22 100 0.4 3 i.p.
RoA＝投药路径
B.NS2对野生型和SSADH剔除式小鼠中的所选代谢物的影响
向野生型和SSADH剔除式小鼠投与单次腹膜内(i.p.)剂量的NS2(10mg/kg)或媒剂(0.4μL DMSO/g体重，100％于PBS中)。给药之后八小时，处死动物且收集组织(肝脏、肾脏、脑和血液)分析NS2浓度和代谢物浓度。研究设计展示于表7中。
表7：八小时NS2处理研究设计
Figure BDA0003354581690000761
RoA＝投药路径
研究设计如下：
·处理组根据出生日期、性别和体重予以平衡。
ο通过使缺乏SSADH的异型接合小鼠杂交来产生SSADH剔除式小鼠。剔除式后代的预期数目是1/4。此育种产生了七只SSADH剔除式小鼠，其中三只分配给第3组且四只分配给第4组。通过在出生后第9或10天剪尾，根据基因分型来确定SSADH状态。
ο处理组在给药之前随机分组。
ο平衡各处理组的给药次序且在整个研究期间维持。
ο投药路径是使用25号针进行的腹膜内(i.p.)注射。
ο媒剂或NS2通过腹膜內注射全身性投与。
测试制品制备和给药：
ο给药当天，使NS2和媒剂达到室温。一旦达到室温，即通过将25mg NS2溶解于1mL100％DMSO中以产生25mg/mL工作溶液来制备NS2工作溶液。此工作溶液是在室温下使用动物给药套件中的无菌技术制备，且在制备一小时内使用。
ο对于突变型和野生型个体来说，给药体积均是约0.4μL/g体重(注释：SSADH剔除式小鼠的平均体重是约4.9±0.9g，且年龄匹配的野生型同窝幼仔的平均体重是10.2±0.9g)。DMSO总剂量相对于体重归一化。
ο丢弃残余的工作溶液。
动物监测：
在笼侧评估所有小鼠在处死之前的总体健康状况：
ο标准膳食和水可以随意获取。
研究终止：
οNS2或媒剂投与之后8小时处死动物。
ο动物通过投与二氧化碳(1-2分钟)实施安乐死，随后实施颈脱臼。
ο收集肝脏、肾脏和脑。使器官在液氮中快速冷冻供生物化学分析用且在-80℃储存。
ο用标准微量采血器获得末梢的心血样品以便收集血清。通过按1,000rpm(2500×g)离心10分钟来制备血清且在-80℃储存直至分析。
方法：
基因分型：
如例如霍吉玛(Hogema)等人，2001，自然遗传学(Nat Genet)29:212-216中所述进行基因分型。
组织均质化：
对于肝脏而言，使用清洁的手术剃刀产生约100mg冷冻组织的切片且称重，添加5倍(体积相对于重量)冷磷酸盐缓冲生理盐水(PBS，pH＝7.4)且用机械式均质器使组织均质化。按相同方式称取和制备一个肾脏和脑的一半(左)(重量各近似100mg)。
NS2分析和NS2-SSA加成物分析：
用含有0.1％甲酸的冷乙腈(900μL)使匀浆(100μL)中的蛋白质沉淀。用425μL含有0.1％甲酸的冷乙腈使血清样品(25μL)中的蛋白质沉淀。样品按2,500×g离心，然后将上清液转移到清洁管中且在恒定的热氮气流动(50℃)下干燥。样品用100μL流动相A(含有0.1％甲酸的水，LC-MS/MS级试剂)复水。通过将已知浓度加入空白血清或组织匀浆中来制备NS2的校准标准物。利用原位研究获得NS2和NS2-SSA的最佳碎片资料，最后通过使用237.0/218.9m/z(NS2)和321.1/167.9m/z(NS2-SSA)的多反应监测(MRM)来量化。
将样品(3μL)注射到Kinetix PFP UPLC柱(2.1×50mm)上，用梯度方法获得色谱分离，所述方法包含：首先为95％流动相A和5％流动相B(含有0.1％甲酸的甲醇)，将此保持0.5分钟，然后历经2.2分钟线性增加到95％流动相B，保持恒定0.5分钟，然后历经6秒返回到初始条件且在初始条件下维持5分钟的总运行时间。将洗脱剂引入API Sciex6500质谱仪中，所述质谱仪按照使用237.0/218.9m/z(对于NS2)和321.1/167.9m/z(NS2-SSA)的多反应监测模式操作。
SSA、GHB、D-2-HG分析：
2015年5月11日，血浆和组织匀浆装运到所罗门伽佳(Gajja Salomons)教授的实验室(VU医学中心，荷兰阿姆斯特丹(Amsterdam,the Netherlands))。在所罗门实验室中，使用以下公开方法分析SSA、GHB和D2HG含量：1)“4-羟基丁酸的稳定同位素稀释分析：一种量化生理流体和产前诊断4-羟基丁酸尿症的准确方法”吉布森(Gibson)等人，1990，生物医学与环境质谱(Biomed Environ Mass Spectrom.)19(2):89-93；2)“D-和L-2-羟基戊二酸的稳定同位素稀释分析：应用于D-和L-2-羟基戊二酸尿症的检测和产前诊断”吉布森等人，1993，儿科研究(Pediatr Res.)34(3):277-80；3)“哺乳动物中的γ-羟基丁酸酯代谢为d-2-羟基戊二酸酯：关于d-2-羟基戊二酸酯转氢酶的进一步证据”，施特鲁斯(Struys)等人，2006，代谢(Metabolism)55(3):353-8；4)“通过二硝基苯肼衍生化和液相色谱-串联质谱测定尿液和脑脊髓液中的GABA类似物丁二酸半缩醛：应用于SSADH缺乏症”，施特鲁斯等人，2005，遗传代谢疾病杂志(J Inherit Metab Dis.)28(6):913-20。
组织分析：
执行组织分析的科学工作者对于处理ID不知情。这如下实现：从解剖表单中略去处理组(对于装运到VU医学中心的样品)，且使用华盛顿州立大学(Washington StateUniversity)的尚未触及生命期数据记录的人执行组织分析。标绘资料和执行统计学分析的个人不对基因型和处理不知情。
结果：
24小时(0.5、1、1.5、3、7、12、22小时)、单次剂量PK研究或8小时处理研究期间，无动物死亡，也无动物中毒的任何迹象。
在初步PK研究中，向个体投与单次剂量的NS2(10mg/kg；剂量范例类似于8小时代谢物研究中所用的剂量)，以便对NS2进行药物动力学分析(图1)和测量NS2-SSA加成物形成。这些研究仅对野生型C57Bl6小鼠(n＝21)进行。以腹膜內推注形式向动物投与10mg/kgNS2且在指定的时间点收集(方法依循上述方案)。制备存在于DMSO中的NS2(25mg/mL)，在PBS中稀释，且按100微升体积投与。小鼠年龄的范围为41-46日龄。
由于NS2-SSA加成物的可靠标准未获得，因此以相对于内标(PAR，或峰面积比率)归一化的分析物信号来表示脑和肝脏中的NS2含量以及血清、脑和肝脏中的NS2-SSA加成物含量；血清NS2是以微摩尔/升表示。
图1中所示的数据表示NS2的一级药物动力学。数据表明腹膜內投与之后，NS2快速(0.5小时)达到峰值血清浓度(43.1±15.4μM)。脑和肝脏中的峰值浓度类似于血清中的观察值(分别为52.4±22.9和116±3.1)且也达到了。血清中的NS2含量截至24小时下降到小于LLOQ(LLOQ 50nM)。血清、脑和肝脏中的NS2-SSA加成物在24小时研究期间维持在近似最大含量。
对NS2-SSA加成物的分析显示，血清、脑和肝脏中的NS2-SSA加成物形成呈现时间依赖性增加。NS2给与之后，NS2-SSA加成物在血清中的最大含量是在第3小时观察到，在脑中的最大含量是在第8小时观察到且在肝脏中的最大含量是在第3小时观察到。
在代谢物研究中，野生型与SSADH剔除式小鼠均投与单次腹膜内剂量的NS2(10mg/kg)。基于在初步PK研究过程中在血清、肝脏和脑中所观察到的NS2和NS2-SSA加成物浓度，选择给药后8小时时间点进行组织收集。
如图2中所示，野生型组织和突变型动物中均发现了NS2-SSA加成物。野生型与剔除式小鼠之间在任何测量结果上均无显著差异，不过剔除式小鼠肝脏中的加成物含量倾向于更高。图3描绘了NS2按单次剂量投与SSADH基因剔除小鼠之后，脑、肝脏和肾脏中的NS2-SSA加成物含量的另一视图。
在所罗门伽佳教授的实验室(VU医学中心，阿姆斯特丹)中，在代谢物研究中对动物组织中的GHB、SSA和D-2-HG进行分析(参见下述图4)。在经NS2处理的SSADH剔除式小鼠中，肝脏中的GHB和D-2-HG存在减少的倾向，但这些代谢物的含量无统计显著变化。
图5描绘了相较于野生型小鼠，接受一次剂量的10mg/kg NS2或媒剂(IP)的SSADH剔除式小鼠(22-23日龄)的GHB/SSA和D-2-HG/SSA含量。处理之后8小时，收集脑、肝脏和肾脏(统计分析：司徒登氏t检验(**p<0.01))。
图6描绘了经媒剂或NS2处理的野生型和SSADH剔除式小鼠的组织中的NS2-SSA加成物含量。
讨论：
此研究分两个阶段进行。首先，用野生型小鼠进行初步单次剂量腹膜內药物动力学研究，以评估NS2的药物动力学概况和NS2-SSA加成物形成速率和程度。利用这些数据选择第二研究中的组织分析时间点，以研究NS2在野生型和SSADH剔除式小鼠中对所选代谢物(包括SSA)形成的影响。
在初步药物动力学研究中，NS2在血清中展示典型的药物动力学概况，证明了NS2在单次剂量之后出现一级消除动力学。由于脑和肝脏是缺乏SSADH的小鼠中的目标器官，因此也测量那些组织中的NS2且其在所有组织中均显示一级动力学，且脑渗透良好。脑和肝脏中的NS2快速达到最大浓度，随后下降到在24小时研究期间持续不变的含量。还测量NS2-SSA加成物形成，但是由于可靠的校准标准物不可获得，因此所述数据只能被视为半量化的。NS2投与之后，检测到NS2-SSA加成物，这表明即使在可能具有足够SSADH活性的野生型小鼠中，也存在大量游离SSA可供与NS2共价加成。所述三种组织中的峰值加成物形成时序似乎稍微滞后于所述组织中的峰值NS2浓度时序。所观察到的持续不变的加成物含量在24小时研究期间均进行观察。这能反映加成物的恒定稳态产生、组织中已形成的加成物的稳定性和较慢清除，或这两者。NS2-SSA加成物在肝脏和血清中的含量最高，而在脑中的含量较低。脑中所观察到的较低含量不能归因于NS2接近脑受阻，因为在血清、脑和肝脏中观察到了大致相等的NS2含量。或者，如果在野生型小鼠脑中观察到的SSA含量低于肝脏和血清，那么可能预计会看到所述加成物在脑中的含量低于血清和肝脏。然而，由于SSA在此研究中并非独立地测量，因此无法立刻清楚为何加成物在脑中的含量较低。
由于NS2含量在给药后八小时仍然高且NS2-加成物含量在给药后第八小时达到峰值，因此选择第八小时为代谢物研究的收集时间点。在此8小时代谢物研究中，使用缺乏SSADH的小鼠确定投与单次剂量的NS2是否调节GHB、SSA和D-2-HG(D-2-羟基戊二酸)的含量。相信NS2能够靶向和调节SSA含量且相应地靶向和调节GHB、D-2-HG和甚至DHHA(4,5-二羟基己酸；此研究中不测量)的含量，这些物质假设是由SSA产生。同时定性地估算相同组织中的NS2-SSA加成物含量。
如同在初步PK研究中，在野生型小鼠的脑和肝脏中检测到NS2-SSA加成物。其在第三种目标器官(肾脏)中也检测到。在SSADH剔除式小鼠的这些三种目标器官中检测到类似含量。
SSADH剔除式小鼠脑中的SSA含量明显高于其野生型对应物，但是野生型和SSADH剔除式小鼠的肝脏和肾脏中的SSA含量的比较未能产生明确的关系。相比之下，正如所料，在SSADH剔除式小鼠的脑、肝脏和肾脏中观察到的GHB与D-2-HG含量高于野生型同窝幼仔。
在经NS2处理的SSADH剔除式小鼠中观察到肝脏中的GHB与D-2-HG含量均有降低的倾向，然而在统计学上不显著(或许是因为群组规模非常小)，这表明首次令人关注地看到了NS2潜在地通过与过量的游离SSA加成来降低被假设在SSADH缺乏症病理学中起作用的代谢物的含量。这些数据与所涉及的代谢路径的复杂性一起支持了对NS2在SSADH中的进一步研究。
结论：
结论是，NS2在腹膜內投与之后能够快速进入周边循环中，且其能够快速渗入脑和肝脏。NS2经证明可在野生型与SSADH剔除式小鼠的已知目标器官中与SSA发生活体内结合。在此所述的初始数据表明仅在单次投药之后，NS2便介导肝脏中的GHB和D-2-HG发生可能的减少，这支持了对NS2在SSADH中的进一步研究。采用此模型的未来研究希望涵盖寻剂量阶段和重复给药，以确保足够的目标暴露，且包括较大群组规模以确保结果能得到正确解释。
实例15：使用NS2抑制纤维母细胞活化成肌纤维母细胞表型
此研究是检查NS2对纤维化模型系统(静态纤维母细胞在试管内活化成活化肌纤维母细胞表型)的影响。在此证明NS2限制了纤维母细胞活化成肌纤维母细胞表型。对涉及此抑制作用的路径的检查表明，NS2处理心脏纤维母细胞限制了NFκB迁移至核，NFκB迁移至核是引起纤维母细胞活化和后续纤维化的发炎级联反应中的关键步骤。这些数据表明使用NS2限制受伤组织中的纤维母细胞活化可能有助于限制纤维化和结疤。
方法：
新生儿纤维母细胞的分离。将三十个新生儿大鼠心脏剁碎且消化(新生儿心肌细胞分离系统(Neonatal Cardiomyocyte Isolation System)，LK003303，沃辛顿(Worthington))。组织消化和细胞解离之后，将细胞悬浮液涂铺到35mm培养皿中或24孔板的各孔的盖玻片上。向细胞悬浮液中添加无血清DMEM且允许细胞粘附2小时。两小时之后，除去细胞悬浮液且贴壁细胞用含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM喂养。细胞在处理之前，在DMEM+10％FBS中维持24小时。处理持续时间是24小时。
给药。细胞样品分成2组，用H2O2刺激或不用H2O2刺激。每组采用DMEM中的四种测试条件(对照物、10uM NS2、100uM NS2和1mM NS2)。经H2O2处理的细胞以0.001％的最终浓度包含于孔中。将药物溶解于9.5％
Figure BDA0003354581690000821
中，直至5mg/ml的储备浓度。
Figure BDA0003354581690000822
在1mM NS2和对照孔中的最终浓度是0.95％。
Figure BDA0003354581690000823
在100uM和10uM NS2孔中的最终浓度分别是0.095％和0.0095％。处理细胞24小时，然后固定用于免疫染色，或作为溶解物收集用于西方印迹分析。
免疫染色。处理24小时之后，盖玻片上的细胞用PBS冲洗两次，在1％多聚甲醛中固定10分钟，然后用PBS冲洗用于免疫染色。细胞在含有0.1％Triton-X 100的PBS中渗透18分钟，然后用PBS冲洗三次，各15分钟。冲洗之后，盖玻片在Image-IT FX信号放大器(英杰公司(Invitrogen))中培育，以减少影像中的背景强度。随后，细胞用PBS洗涤三次各15分钟，随后在10％正常山羊血清细胞和0.05％Triton-X 100中阻断一小时，然后与在含有2％正常山羊血清和0.05％Triton-X 100的PBS中稀释的一级抗体一起在4℃培育整夜。抗体按以下浓度施加：α-平滑肌肌动蛋白1:200(V5228，西格玛-奥德里奇公司)、波形蛋白1:200(V6630，西格玛-奥德里奇公司)和NFκB 1:200(C-20，圣克鲁兹生物技术公司(Santa CruzBiotech))。培育整夜之后，使盖玻片历经10分钟达到室温，然后用PBS冲洗15分钟。在黑暗中与二级抗体(1:100于PBS中，A-21127和A-21136，生命技术公司(Life Technologies))一起培育1小时之后，盖玻片用PBS冲洗3次各15分钟，在黑暗中与DAPI(英杰公司，1:600)一起培育10分钟，然后用PBS冲洗3次。然后将盖玻片颠倒着安放在载玻片上且使用装备有10倍空气透镜的Leica SP8共聚焦显微镜检查。如所述摄影且分成通道。每个通道用眼检视以确定NFκB是否处于核中或处于细胞溶质中。
西方印迹。西方印迹法使用全细胞溶解物；不制备核和细胞溶质洗脱份。从35mm培养板中所涂铺的细胞除去DMEM，细胞用PBS快速冲洗，然后在500ul冷RIPA缓冲液中、在4℃、在轻微摇荡下培育20-30分钟。RIPA培育之后，使用细胞刮刀从培养皿中刮下细胞且在-80℃冷冻整夜以增加细胞溶解。细胞一经解冻，即在80％最大功率(Biologics型号150B/T)下声波处理1分钟。样品在4℃按13K离心10分钟，然后将上清液与离心块分离以便利用凝胶电泳进行分析。进行BCA蛋白质分析以测定总蛋白质，样品相对于0.2ug/uL归一化，然后装载到Novex 8％Bolt凝胶上。凝胶在MOPS缓冲液中、在200V跑电泳35分钟或直至较低分子量带到达凝胶底部。然后使蛋白质历时1小时转移到Hybond 0.45uM硝化纤维素(通用电气医疗集团(GE Healthcare))。在室温下，在5％BSA/TBSt中阻断印迹1小时。随后，我们将印迹与如上文针对免疫标记所述的一级抗体(波形蛋白，1:20K；α-SMA，1:500；纽蛋白，1:60K，NFκB1:200和1L-1β1:200(圣克鲁兹生物技术公司))一起在阻断溶液中、在4℃培育72小时。印迹用TBSt洗涤三次各15分钟。含有二级抗体(AB97040，Abcam，1:30K)的TBst在室温下涂覆1小时。使印迹暴露于Advansta WesternBrightTMECL试剂(E-1119-50，Bioexpress)。使用Bio-Rad Chemidoc系统对印迹进行数字显影。
统计分析。司徒登氏t检验(双尾)；显著性经评估为p<0.05和p<0.01
结果：
NS2抑制纤维母细胞活化成肌纤维母细胞表型
免疫组织化学.
培养中的纤维母细胞已知在大约24小时期间增殖且转化成肌纤维母细胞表型，不论以任何有毒物质刺激。H2O2处理纤维母细胞已知可提高此转化速率。使用波形蛋白(红色)作为纤维母细胞的标记和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA；绿色)作为活化肌纤维母细胞的标记来检查未刺激或经H2O2刺激的心脏纤维母细胞的活化(图7)。涂铺时，纤维母细胞是小圆形细胞，其含有波形蛋白阳性细胞质，但免疫染色时可检测到的α-SMA极少直至没有(图7A)。在仅含媒剂的培养基中培育24小时之后，未刺激的细胞外形更扁平且具有大量丝状伪足，表明为游动细胞类型。另外，所述细胞自发地开始转化成α-SMA阳性细胞，表明活化成肌纤维母细胞表型(图7B)。经H2O2刺激的细胞培养24小时之后也展示α-SMA的表达(图7C)。
为了确定NS2处理是否能限制纤维母细胞转化成肌纤维母细胞，所培养的细胞用10μM、100μM或1mM NS2处理且与未处理、但在单独媒剂中培育的细胞进行比较(图8)。未处理的细胞在细胞涂铺之后的24小时展示存在α-SMA(图8A)。用10μM NS2处理这些细胞似乎极少影响到α-SMA产生(图8B)。相比之下，100μM NS2处理使α-SMA产生受到抑制，同时不限制细胞增殖(图8C)。NS2含量提高到1mM似乎也限制了α-SMA产生，而且使得细胞不增殖或经历细胞死亡。剩余很少的细胞似乎是非活化纤维母细胞表型。较高放大倍率影像显示，活化肌纤维母细胞的细胞形状呈扁平状且具有多个接触点(图8E)，其不因10μM NS2处理而变化(图8F)。NS2增加到100μM引起细胞形态更多地像非活化纤维母细胞形态(参见图7)，而非活化肌纤维母细胞形态(图8G)经1mM NS2处理的细胞的影像(图8H)显示细胞比含有未处理细胞的孔或含有已经媒剂(0.95％Captisol6)、10μM或100μM NS2处理的细胞的孔中所观察到的细胞少。细胞是否未增殖或死亡不能确定。
H2O2刺激心脏纤维母细胞展示非常类似的结果(图9)。经H2O2刺激、但未经NS2处理的细胞展示出α-SMA的强烈活化(图9A)。如同未刺激的细胞，仅经10μM NS2处理的细胞对α-SMA产生或符合肌纤维母细胞表型的形态变化展示极少的影响(图9B)。用100μM NS2处理经H2O2刺激的心脏纤维母细胞使得α-SMA产生受到明显的抑制(图9C)。用1mM NS2处理之后，细胞(经H2O2刺激或未刺激)展示非活化纤维母细胞的形态，但在这些细胞中观察到一些α-SMA(图9D)。虽然出现此结果的一种可能原因是1mM NS2引起与正常纤维母细胞活化无关的细胞损伤，尚无实验测试此假设或针对此提出其它原因。如同未经H2O2刺激的细胞，NS2处理限制了与活化相关的形态变化(图9E-无NS2；图9F-10μM NS2；图9G-100μM NS2；和图9H-1mMNS2)。
α-SMA的西方印迹.
将心脏纤维母细胞涂铺于35mm培养皿上以便收集细胞溶解物用于西方印迹分析。培养板按照与针对免疫染色所涂铺的细胞相同的方式加以处理，也就是说，将细胞分成两组(未刺激或经H2O2刺激)，然后用10μM、100μM或1mM NS2处理。α-SMA的印迹被染色(图10)。还将GAPDH、纽蛋白或辅肌动蛋白的印迹进行对比染色，以试图找到管家蛋白来确保用于分析的印迹归一化。遗憾的是，所检查的全部管家蛋白均因培养条件、NS2的存在或两者而发生变化。分析所有样品中的蛋白质含量且将等量的蛋白质加载到0、10μM、100μM NS2中，而1mM NS2样品中仅加载蛋白质的一半，原因是这些样品中发现的蛋白质含量较低。1mM处理细胞中的蛋白质低含量使得数据可疑，但为了完整性，将其纳入分析中。相较于对照，在未刺激的心脏纤维母细胞中，NS2处理引起α-SMA显著减少(图10B)。在经H2O2刺激的心脏纤维母细胞中，在10μM NS2情况下无显著变化，但增加NS2剂量引起α-SMA发生进一步的显著减少(p<0.01)。由于1mM NS2处理的培养皿中的剩余细胞含量低，因此α-SMA的数据不大可能有效，但是如果进一步对更多细胞进行西方印迹分析，那么基于免疫染色中的细胞外形，所述数据可能会受到支持。图10A的西方印迹分析中所分析的样品如下：泳道1-媒剂对照物；泳道2-未刺激，经10μM NS2处理；泳道3-未刺激，经100μM NS2处理；泳道4-未刺激，经1mMNS2处理；泳道5-经H2O2刺激的媒剂对照物；泳道6-经H2O2刺激，经10μM NS2处理；泳道7-经H2O2刺激，经100μM NS2处理；泳道8-经H2O2刺激，经1mM NS2处理。
NS2对NFκB迁移到核的影响.
多种刺激引起细胞中的炎性体活化，但所有上游路径均会聚于NFκB，从而引起NFκB迁移到细胞核中，在细胞核中其参与促炎性基因的活化。为了确定NS2是否阻断NFκB迁移，我们检查经NS2处理的所培养纤维母细胞且寻找NFκB在核中的定位(图11A)。培养24小时的细胞(未经H2O2刺激)在大部分细胞的核中展示NFκB的高含量(76.6％)。NS2处理使NFκB在经10μM NS2处理的细胞的细胞核中的定位明显减少到30.7％且使NFκB在经100μM NS2处理的细胞的细胞核中的定位明显减少到35.7％。1mM NS2处理组中不存在含有核NFκB的细胞，但同样，这些样品中的细胞根本就非常少且因此，此剂量下的结果不具有结论性(图11B，p<0.05)。
NS2对NFκB含量的影响.
为了确定NFκB到核的损失是否归因于蛋白质总体损失，利用西方印迹法检查NFκB含量(图12A)。对全细胞溶解物的西方印迹分析主要检测细胞质蛋白质含量，其表明NS2使未刺激细胞中的NFκB明显减少(图12B)。在经H2O2刺激的细胞中，仅100μM或1mM NS2处理展示NFκB显著减少，但如同此处的其它分析，1mM剂量可能得不到可靠数据(图12B)。这些数据表明NFκB迁移的至少一些损失归因于未刺激细胞中的蛋白质损失。图12A的西方印迹分析中所分析的样品如下：泳道1-媒剂对照物；泳道2-未刺激，经10μM NS2处理；泳道3-未刺激，经100μM NS2处理；泳道4-未刺激，经1mM NS2处理；泳道5-经H2O2刺激的媒剂对照物；泳道6-经H2O2刺激，经10μMNS2处理；泳道7-经H2O2刺激，经100μM NS2处理；和泳道8-经H2O2刺激，经1mM NS2处理。
NS2处理心脏纤维母细胞抑制了介白素1-β表达。
NFκB迁移到核引起多种促炎性细胞因子上调，包括介白素-1β(IL-1β)，其能刺激纤维母细胞转化成肌纤维母细胞(鲍姆(Baum)等人，2012，生理学前沿(Front.Physiol.)3:272(电子杂志)。为了确定利用NS2阻断NFκB迁移是否对此路径具有功能性影响，检查NS2处理对未刺激与经H2O2刺激的心脏纤维母细胞中的IL-1β含量的影响。发现未刺激与经H2O2刺激的细胞在涂铺之后的24小时均展示IL-1β的高表达(图13)。未刺激和经H2O2刺激的细胞在NS2处理之后展示出IL-1β含量显著减少(图13B)(p<0.01)。这些数据表明，NS2通过阻断NFκB迁移和随后的IL-1β上调来改变发炎路径。此促炎性路径的关闭可能起到了抑制纤维母细胞活化成肌纤维母细胞表型的作用。图13A的西方印迹分析中所分析的样品如下：泳道1-媒剂对照物；泳道2-未刺激，经10uM NS2处理；泳道3-未刺激，经100uM NS2处理；泳道4-未刺激，经1mM NS2处理；泳道5-经H2O2刺激的媒剂对照物；泳道6-经H2O2刺激，经10uM NS2处理；泳道7-经H2O2刺激，经100uM NS2处理；和泳道8-经H2O2刺激，经1mM NS2处理。
NS2对心脏纤维母细胞中的MAPK信号传导路径活化的影响.
此前已表明MAPK路径活化涉及肌纤维母细胞活化(朵玛托娃(Dolmatova)等人，2012，美国生理学杂志：心脏和循环系统生理学(Am.J.Physiol Heart Circ Physiol)303(10):H1208-1218.)。为了确定这些路径是否涉及这些特定细胞，即，心脏纤维母细胞，检查ERK、JNK和p38的含量和磷酸化状态(图14)。由于只有一个西方印迹成功，因此不可能是可靠的分析。p38抗体的运作非常不好，且因此从西方印迹中无法确定关于p38的信息。JNK-pJNK的西方印迹表明任何浓度的NS2处理均无变化。ERK/pERK的确展示了ERK磷酸化程度的变化，但仅凭一个西方印迹，无法作出明确结论。然而，由于在细胞溶解期间保持酶磷酸化状态的磷酸酶抑制剂不存在于细胞溶解缓冲液中，因此无法得出关于MAP激酶同功异型物的磷酸化状态变化的结论。图14A-C的西方印迹分析中所分析的样品如下：泳道1-媒剂对照物；泳道2-未刺激，经10uM NS2处理；泳道3-未刺激，经100uM NS2处理；泳道4-未刺激，经1mM NS2处理；泳道5-经H2O2刺激的媒剂对照物；泳道6-经H2O2刺激，经10uM NS2处理；泳道7-经H2O2刺激，经100uM NS2处理；泳道8-经H2O2刺激，经1mM NS2处理。
论述：
使用小分子醛捕获剂NS2的研究已表明，利用所述捕获剂清除醛引起促炎性细胞因子的活化减弱。在小鼠LPS炎症模型中，NS2处理使IL-1β、IL-17和TGF-β的活化明显减弱，抗炎性细胞因子介白素10(IL-10)的含量明显增加。更重要的是，在辐射仓鼠颊囊引起的口腔粘膜炎炎症模型中，NS2处理使得损伤恢复速率显著增加且使损伤部位的总体纤维化随时间减少。基于此前研究表明NS2在鼠类LPS模型中限制IL-1β活化，已预测NS2通过限制NFκB迁移到细胞核来起作用。本文中已表明，此机制发挥的作用是NS2能够限制纤维母细胞活化成肌纤维母细胞表型。此活化模型可以理想地用于进一步测试NS2类似物活性。
所培养的纤维母细胞展现自体转化成活化肌纤维母细胞表型。此转化被认为是归因于粘着斑部位与其在传统上所涂铺的细胞培养皿或盖玻片的塑料的相互作用。细胞将与塑料的接触“视为”损伤且上调损伤路径，如发炎路径和MAPK信号传导路径。这引起细胞形状发生变化，增强迁移性，增加粘着斑的存在和α-SMA的存在。α-SMA是活化肌纤维母细胞表型的标记。实际上，其被认为是纤维母细胞活化的“金标准”标记。10μM NS2处理之后，对细胞中的α-SMA蛋白质含量进行的西方印迹分析表明α-SMA蛋白质含量显著减少。用10μM NS2处理之后，总细胞蛋白质含量不减少。西方印迹数据更多地指示在较大样品规模上发生什么。这些数据总体上明确展示出NS2抑制α-SMA，表明其具有阻断纤维母细胞活化成肌纤维母细胞的作用。
检查NS2对炎性体活化的影响表明，NS2使NFκB向所影响细胞的核的迁移明显减少，所述迁移是促炎性细胞因子IL-1β的早期事件，此前已证明所述促炎性细胞因子引起纤维母细胞活化。此迁移损失引起促炎性细胞因子IL-1b显著下调，此前已证明所述促炎性细胞因子引起纤维母细胞活化。综合而言，NS2限制纤维母细胞活化的能力似乎是通过在NFκB的层面上阻断炎性体活化。对MAPK同功异型物磷酸化状态的分析受碍于技术困难。然而，未来研究应该也调查MAPK同功异型物在早得多的时间点发生的磷酸化，因为这些酶通常在纤维化过程中的早期活化。
用过氧化氢刺激.
在此处所进行的大部分研究中，在两种条件下测试细胞。第一种是未刺激的细胞，所述细胞在培养时随时间发生自动活化。添加H2O2引起细胞更快且更多地活化。在心脏纤维母细胞经H2O2刺激的研究中，用NS2处理不能始终限制α-SMA和NFκB含量的变化。这可能归因于培养基中不断地存在H2O2，其引起连续活化。在NS2阻断迁移和随后炎性体活化的时间给定的情况下，未刺激的细胞活化更缓慢且活化程度更小。在使用纤维母细胞的未来研究中，可以通过使用未刺激的细胞、而非通过使细胞暴露于H2O2而刺激所述路径来获得更一致且生理学上相关的数据。
纤维母细胞活化作为研究药物类似物的模型.
所培养的纤维母细胞容易获得，容易培养且容易处理。可以利用产生相对更少的起作用的细胞的本文所述方法来获得细胞，或其通过从新生儿连在一起的“红色组织”(心脏、肺、肝脏)中提取来获得。另外，纤维母细胞可以购自ATCC，试管内细胞的重要来源(www.atcc.org)。ATCC可以是表皮、膀胱、子宫和其它来源(鼠类与人类)的纤维母细胞的来源。虽然对NS2的初步测试需求重复进行以确认在新细胞类型中的活性，但根据文献中对多种来源的多种纤维母细胞中的α-SMA的研究，很少怀疑其按照本研究中所发现的类似方式起作用。这些细胞中的活化容易测定，这使得确定NS2或NS2的任何类似物是否起作用变得简单。可以基于所培养的纤维母细胞和针对α-SMA的抗体来开发简单的色度分析。此分析可以小型化和自动化，这使得其成为测试任何化合物的活性的简单廉价模型，所述任何化合物被认为可限制纤维母细胞活化。确认自动化分析的结果也是简单的，其只需要针对NFκB迁移的几个西方印迹和/或微观分析。另外，还可以进行核萃取物研究以确定化合物是否限制NFκB迁移。
结论：
这些前述研究表明，NS2通过阻断NFκB迁移到核来限制纤维母细胞活化成肌纤维母细胞表型，从而限制促炎性路径活化和随后的纤维化。另外，这些研究得到一个简单模型用于鉴定可以具有类似于NS2的活性的其它化合物。针对动物模型的进一步研究可以用于确认NS2是否能活体内限制纤维母细胞活化和限制基于损伤的纤维化。
实例15：关于醛加成物形成、4HNE消耗和随时间平衡的分析结果
检查五种化合物：
2-(3-氨基喹啉-2-基)丙-2-醇
2-(3-氨基-5-氯喹啉-2-基)丙-2-醇
2-(3-氨基-7-氯喹啉-2-基)丙-2-醇
2-(3-氨基-8-氯喹啉-2-基)丙-2-醇
2-(3-氨基-6-溴喹啉-2-基)丙-2-醇
还检查NS2以便比较。
图15描绘了NS2和示例性化合物在23小时时间段内的醛加成物形成速率。发现所有样品都结合(产物HPLC峰值随时间积极增加)，但是一个样品的结合不如其它样品好。无法断定这是否是不良解离(从环糊精中)或与醛发生不良相互作用的结果。此期间的最佳拟合线与数据达到极佳的拟合。产物峰值增加速率可用作结合动力学的近似值；然而，其不能提供任何方式将解离(从环糊精中)动力学和结合动力学分开。其可以用于对所检查的各样品(包括NS2)进行相对排序。首先评估7小时时间窗内的数据。由此得到从最有效到最小有效的以下排序：
Figure BDA0003354581690000881
当时窗延长到23小时时，获得类似的结果。然而，所述化合物中有两种在此背景下产生较低的R.Sq.值。
Figure BDA0003354581690000882
一种可能的解释是，两种动力学分量(解离和结合)不再平衡且一种是决定因素。后续实验在60-70次注射期间密切地追踪一种样品，以确定斜率变化发生之处(这潜在地得到将解离动力学分量和结合动力学分量分开的切入点)。
图16描绘了NS2和其它示例性化合物使4HNE随时间(23小时形成期)发生的消耗。6个样品中有5个展示4HNE消耗。在使用本发明方法的情况下，一个样品(2-(3-氨基喹啉-2-基)丙-2-醇)与4HNE HPLC峰重叠。此期间的最佳拟合线与数据的拟合比产物形成数据更差。4HNE消耗速率可用作结合动力学的近似值。如前所述，所述数据不提供任何方式将解离(从环糊精中)动力学与结合动力学分开。利用所述数据对所检查的各样品进行相对排序，包括NS-2，但不包括2-(3-氨基喹啉-2-基)丙-2-醇。在前7小时期间，所述数据产生从最有效到最小有效(在254nm分析)的以下排序：
Figure BDA0003354581690000891
23小时时的分析提供从最有效到最小有效的以下排序：
Figure BDA0003354581690000892
注意，黑体数字之间的差异极小(梯度数字取整为所示值)。
下表概括了上述数据：
表2
Figure BDA0003354581690000893
Figure BDA0003354581690000901
Figure BDA0003354581690000902
评级1-4的样品之间的差异小，基本上相同
图17描绘了在NS2和本发明的示例性化合物存在下，在1周时间段期间的醛加成物形成速率，以测量化合物是否达到平衡。在此时间段期间，5个样品中有3个达到了平衡。
图18描绘了在NS2和本发明的示例性化合物存在下，在1周时间段期间的4HNE消耗，以测量化合物在此时间段期间是否达到平衡。样品似乎达到平衡，HNE量持续减少的原因可能是存在另一种降解路径。这是因为至少对于2-(3-氨基-8-氯喹啉-2-基)丙-2-醇和2-(3-氨基-7-氯喹啉-2-基)丙-2-醇而言，HNE的减少大于加成物的相应增加(图17中所示)。
本申请中所引用的所有出版物、专利、专利申请和/或其它文献都以全文引用的方式并入本文中以用于所有目的，其引用的程度就如同个别地指示将各个别出版物、专利、专利申请和/或其它文献以引用的方式并入以用于所有目的。

Claims (10)

1.一种方法，包含以下步骤：
(a)提供式A化合物：
Figure FDA0003354581680000011
或其医药学上可接受的盐，其中：
骨架是与氨基和甲醇基团连接的部分，以便所产生的氨基-甲醇部分能够捕获醛部分；和
(b)使所述式A化合物与生物学上有关的醛接触以形成式I结合物：
Figure FDA0003354581680000012
其中：
R1是生物学上有关的醛的侧链。
2.根据权利要求1所述的方法，其中骨架选自式II基团：
Figure FDA0003354581680000013
或医药学上有关的盐，其中：
Figure FDA0003354581680000014
是连到胺基团的连接点；
#是连到甲醇基团的连接点；
每个W、X、Y或Z独立地选自N、O、S、CU或CH；
k是0、1、2、3或4；
每个U独立地选自卤素、氰基、-R、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
相邻碳原子上存在的两个U可以形成任选被取代的稠合环，所述稠合环选自稠合的苯环；稠合的5-6元饱和或部分不饱和杂环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或稠合的5-6元杂芳基环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；且
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
3.根据权利要求2所述的方法，其中W、X、Y和Z是CH。
4.根据权利要求3所述的方法，其中k是2。
5.根据权利要求4所述的方法，其中相邻碳原子上存在的两个U形成稠合的苯环，任选地被氯取代。
6.根据权利要求2所述的方法，其中式II骨架选自下文所描绘的那些基团：
Figure FDA0003354581680000021
Figure FDA0003354581680000031
Figure FDA0003354581680000041
Figure FDA0003354581680000051
7.根据权利要求2所述的方法，其中式II骨架是：
Figure FDA0003354581680000052
8.根据权利要求1所述的方法，其中式A和式I的骨架选自式III基团：
Figure FDA0003354581680000053
或医药学上有关的盐，其中：
Figure FDA0003354581680000054
是连到胺基团的连接点；
#是连到甲醇基团的连接点；
每个Q、T和V独立地选自N或NH、S、O、CU或CH；
Figure FDA0003354581680000061
表示环内的两个双键，其符合存在于所述环中的原子和杂原子的价数要求；
k是0、1、2、3或4；且
每个U独立地选自卤素、氰基、-R、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
相邻碳原子上存在的两个U可以形成任选被取代的稠合环，所述稠合环选自稠合的苯环；稠合的5-6元饱和或部分不饱和杂环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或稠合的5-6元杂芳基环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；且
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
9.根据权利要求8所述的方法，其中式III骨架选自下文所描绘的那些基团：
Figure FDA0003354581680000062
10.根据权利要求1所述的方法，其中式A和式I的骨架选自式IV-A或IV-B基团：
Figure FDA0003354581680000071
Figure FDA0003354581680000072
是连到胺部分的连接点；
#是连到甲醇部分的连接点；
k是0、1、2、3或4；且
每个U独立地选自卤素、氰基、-R、-OR、-SR、-N(R)2、-N(R)C(O)R、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-OC(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R、-SO2N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-S(O)R或-S(O)2R；
相邻碳原子上存在的两个U可以形成任选被取代的稠合环，所述稠合环选自稠合的苯环；稠合的5-6元饱和或部分不饱和杂环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或稠合的5-6元杂芳基环，其含有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；且
每个R独立地选自氢、氘或任选被取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；苯基；8-10元双环芳基环；3-8元饱和或部分不饱和单环杂环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；5-6元单环杂芳基环，其具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；6-10元双环饱和或部分不饱和杂环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或7-10元双环杂芳基环，其具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
CN202111347099.9A 2015-08-21 2016-08-22 醛结合物和其用途 Pending CN114085236A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562208278P 2015-08-21 2015-08-21
US62/208,278 2015-08-21
US201662315455P 2016-03-30 2016-03-30
US62/315,455 2016-03-30
US201662347464P 2016-06-08 2016-06-08
US62/347,464 2016-06-08
CN201680059226.6A CN108135867A (zh) 2015-08-21 2016-08-22 醛结合物和其用途

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680059226.6A Division CN108135867A (zh) 2015-08-21 2016-08-22 醛结合物和其用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114085236A true CN114085236A (zh) 2022-02-25

Family

ID=58100899

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111347099.9A Pending CN114085236A (zh) 2015-08-21 2016-08-22 醛结合物和其用途
CN201680059226.6A Pending CN108135867A (zh) 2015-08-21 2016-08-22 醛结合物和其用途

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680059226.6A Pending CN108135867A (zh) 2015-08-21 2016-08-22 醛结合物和其用途

Country Status (14)

Country Link
US (3) US20180250306A1 (zh)
EP (1) EP3337470A4 (zh)
JP (2) JP6959650B2 (zh)
KR (1) KR20180073553A (zh)
CN (2) CN114085236A (zh)
AU (1) AU2016311163A1 (zh)
BR (1) BR112018003264A2 (zh)
CA (1) CA2996186A1 (zh)
CL (1) CL2018000462A1 (zh)
CO (1) CO2018002841A2 (zh)
HK (1) HK1256143A1 (zh)
IL (1) IL257615A (zh)
MX (1) MX2018002157A (zh)
WO (1) WO2017035082A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN121243414A (zh) * 2025-12-03 2026-01-02 通化安睿特生物制药股份有限公司 小分子活性醛清除剂-白蛋白偶联药物、其制备方法及应用

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1888548E (pt) 2005-05-26 2012-10-30 Neuron Systems Inc Derivado de quinolina para o tratamento de doenças da retina
CA2782015C (en) 2009-12-11 2020-08-25 Neuron Systems, Inc. Topical ophthalmic compositions and methods for the treatment of macular degeneration
CA3195807A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Aldeyra Therapeutics, Inc. Toxic aldehyde related diseases and treatment
MX2018002155A (es) 2015-08-21 2018-06-08 Aldeyra Therapeutics Inc Compuestos deuterados y usos de los mismos.
CN109069530A (zh) 2016-02-28 2018-12-21 奥尔德拉医疗公司 用环糊精治疗过敏性眼部病状
WO2017196881A1 (en) 2016-05-09 2017-11-16 Aldeyra Therapeutics, Inc. Combination treatment of ocular inflammatory disorders and diseases
AU2017317524A1 (en) * 2016-08-22 2019-02-21 Aldeyra Therapeutics, Inc. Aldehyde trapping compounds and uses thereof
AU2018234919A1 (en) * 2017-03-16 2019-09-19 Aldeyra Therapeutics, Inc. Polymorphic compounds and uses thereof
JP7311162B2 (ja) * 2017-10-10 2023-07-19 アルデイラ セラピューティクス， インコーポレイテッド 炎症性障害の処置
US12006298B2 (en) 2018-08-06 2024-06-11 Aldeyra Therapeutics, Inc. Polymorphic compounds and uses thereof
CN113056353B (zh) 2018-09-25 2022-11-01 奥尔德拉医疗公司 用于治疗干眼病的调配物
EP3890732A4 (en) * 2018-12-05 2022-08-24 Aldeyra Therapeutics, Inc. INJECTABLE FORMULATIONS
WO2020125659A1 (zh) * 2018-12-18 2020-06-25 南京明德新药研发有限公司 用于视网膜疾病的化合物
US11786518B2 (en) 2019-03-26 2023-10-17 Aldeyra Therapeutics, Inc. Ophthalmic formulations and uses thereof
WO2020223717A1 (en) 2019-05-02 2020-11-05 Aldeyra Therapeutics, Inc. Process for preparation of aldehyde scavenger and intermediates
CN113784954A (zh) * 2019-05-02 2021-12-10 奥尔德拉医疗公司 多晶型化合物和其用途
CN115605476B (zh) * 2019-12-27 2024-05-24 鲁宾有限公司 取代的三环化合物
US20230021669A1 (en) * 2019-12-30 2023-01-26 The National Institutes of Pharmaceutical R&D Co., Ltd. Tricyclic compound, and preparation method therefor and medical use thereof
WO2021195211A1 (en) * 2020-03-24 2021-09-30 Aldeyra Therapeutics, Inc. Quinoline compounds for treating respiratory disorders and viral infections
WO2021211625A1 (en) * 2020-04-13 2021-10-21 Aldeyra Therapeutics, Inc. Quinoline compounds for treating lung, liver, and kidney diseases, disorders, or conditions
JP2023526016A (ja) 2020-05-13 2023-06-20 アルデイラ セラピューティクス， インコーポレイテッド 医薬製剤およびその使用
US11753377B2 (en) 2020-06-17 2023-09-12 Zhuhai United Laboratories Co., Ltd. Crystal form of 2-methyl-2-propanol and amino-substituted aryl compound
WO2021254453A1 (zh) * 2020-06-17 2021-12-23 南京明德新药研发有限公司 氨基吡啶类化合物
CN116406263B (zh) 2020-09-28 2025-08-26 珠海联邦制药股份有限公司 吡啶苯基类化合物的晶型及其制备方法
US20240092744A1 (en) * 2020-12-29 2024-03-21 The National Institutes of Pharmaceutical R&D Co., Ltd. Tricyclic compound, and preparation method therefor and medical use thereof
WO2022267930A1 (zh) * 2021-06-25 2022-12-29 中国医药研究开发中心有限公司 三环化合物及其制备方法和医药用途
MX2023014509A (es) * 2021-07-02 2024-01-26 Aldeyra Therapeutics Inc Compuestos atrapadores de aldehidos heterociclicos y usos de los mismos.
JP2025538598A (ja) * 2022-11-26 2025-11-28 チューハイ ユナイテッド ラボラトリーズ シーオー．，エルティーディー． ピリジンフェニル化合物を含有する眼科用製剤、その調製方法および使用
WO2025152743A1 (zh) * 2024-01-16 2025-07-24 珠海联邦制药股份有限公司 一种含有吡啶苯基类化合物的口服制剂及其制备方法和应用
CN120424003A (zh) * 2024-02-02 2025-08-05 深圳新锐基因科技有限公司 一种基于ai设计的活性醛类物质抑制剂及其应用
CN120607478A (zh) * 2024-03-06 2025-09-09 深圳湾实验室 预防和治疗醛代谢紊乱引起的相关疾病的化合物及其用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6358948B1 (en) * 1999-05-04 2002-03-19 American Home Products Corporation Quinazolinone and benzoxazine derivatives as progesterone receptor modulators
CN101321742A (zh) * 2005-05-26 2008-12-10 神经元系统公司 用于治疗视网膜疾病的组合物和方法
WO2014100425A1 (en) * 2012-12-20 2014-06-26 Aldexa Therapeutics, Inc. Peri-carbinols
WO2014116836A2 (en) * 2013-01-23 2014-07-31 Aldexa Therapeutics, Inc. Toxic aldehyde related diseases and treatment

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5793459B2 (ja) * 2012-03-30 2015-10-14 新日鐵住金ステンレス株式会社 加工性に優れた耐熱フェライト系ステンレス冷延鋼板、冷延素材用フェライト系ステンレス熱延鋼板及びそれらの製造方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6358948B1 (en) * 1999-05-04 2002-03-19 American Home Products Corporation Quinazolinone and benzoxazine derivatives as progesterone receptor modulators
CN101321742A (zh) * 2005-05-26 2008-12-10 神经元系统公司 用于治疗视网膜疾病的组合物和方法
WO2014100425A1 (en) * 2012-12-20 2014-06-26 Aldexa Therapeutics, Inc. Peri-carbinols
WO2014116836A2 (en) * 2013-01-23 2014-07-31 Aldexa Therapeutics, Inc. Toxic aldehyde related diseases and treatment

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
E. V. GROMACHEVSKAYA等: "4H-3,I-BENZOXAZlNES.2.* SYNTHESIS OF 2,4-SUBSTITUTED 1,2-DIHYDRO-4H-3,I-BENZOXAZINES", 《HTTP://LINK.SPRINGER.COM/CONTENT/PDF/10/1007/BF00475610.PDF》, pages 692 - 697 *
GAE¨LLE SPAGNOL等: "Efficient Synthesis of Tricyclic Benzobisoxazines by Silica Gel Catalysis", 《J. ORG. CHEM.》, vol. 72, pages 1867 - 1869, XP055541545, DOI: 10.1021/jo062670e *
PUWEN ZHANG等: "Potent Nonsteroidal Progesterone Receptor Agonists: Synthesis and SAR Study of 6-Aryl Benzoxazines", 《BIOORGANIC& MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》, vol. 12, pages 787, XP055541868, DOI: 10.1016/S0960-894X(02)00025-2 *
SAYED等: "Metabolic activation of R,S-1-(tetrahydro-2-furanyl)-5-fluorouracil(ftorafur) to 5-fluorouracil by soluble enzymes", 《CANCER RESEARCH》, vol. 43, pages 4039 - 4044, XP055366567 *
YOUSRY M E1 SAYED2等: "Metabolic activation of RS-1-(tetrahydro-2-furanyl)-5-fluorouracil(Ftorafur) to 5-fluorouracil by soluble enzymesl", 《CANCER RESEARCH》, pages 4039 - 4044 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN121243414A (zh) * 2025-12-03 2026-01-02 通化安睿特生物制药股份有限公司 小分子活性醛清除剂-白蛋白偶联药物、其制备方法及应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20180250306A1 (en) 2018-09-06
EP3337470A4 (en) 2019-02-27
CA2996186A1 (en) 2017-03-02
JP2022000469A (ja) 2022-01-04
AU2016311163A1 (en) 2018-04-05
JP6959650B2 (ja) 2021-11-02
CO2018002841A2 (es) 2018-07-10
JP7332186B2 (ja) 2023-08-23
CL2018000462A1 (es) 2018-08-17
US20200246345A1 (en) 2020-08-06
HK1256143A1 (zh) 2019-09-13
WO2017035082A1 (en) 2017-03-02
KR20180073553A (ko) 2018-07-02
JP2018530524A (ja) 2018-10-18
IL257615A (en) 2018-04-30
BR112018003264A2 (pt) 2018-09-25
US20220354857A1 (en) 2022-11-10
CN108135867A (zh) 2018-06-08
MX2018002157A (es) 2018-06-08
EP3337470A1 (en) 2018-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7332186B2 (ja) アルデヒドコンジュゲートおよびその使用
TWI805664B (zh) Ｔｌｒ７/８拮抗劑及其用途
EP3596040B1 (en) Polymorphic salt of 6-chloro-3-amino-2(2-hydroxypropyl)quinoline and uses thereof
CN103119047B (zh) 三环类蛋白酶体活性增强化合物
US20200062712A1 (en) Aldehyde trapping compounds and uses thereof
CA3032609A1 (en) Aldehyde trapping compounds and methods of use thereof
JP2022530967A (ja) 多形化合物およびその使用
KR20240032926A (ko) 헤테로사이클릭 알데하이드 트랩핑 화합물 및 이의 용도
JP2008515778A (ja) 眼の状態を１３−シス−レチニル誘導体で処置するための組み合わせ方法、組成物および治療
CN102665716B (zh) 用于治疗唐氏综合征的方法和药物组合物
EP3049077A2 (en) Kynurenine-3-monooxygenase inhibitors, pharmaceutical compositions, and methods of use thereof
CN115515682A (zh) 用于治疗神经退行性疾病和线粒体疾病的组合物及其使用方法
JP2024170448A (ja) メイソインジゴの多形体およびメイソインジゴの改変された製剤
EP1305035A1 (en) Naadp analogues for modulating t-cell activity
HK40086209B (zh) 用於治疗神经退行性疾病和线粒体疾病的组合物及其使用方法
HK40086209A (zh) 用於治疗神经退行性疾病和线粒体疾病的组合物及其使用方法
HK40021209B (zh) 6-氯-3-氨基-2(2-羥丙基)喹啉多晶型鹽類及其用途
HK40021209A (zh) 6-氯-3-氨基-2(2-羥丙基)喹啉多晶型鹽類及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20220225

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication