CN103301181A - 一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种小花棘豆黄酮的制备方法，包括以下步骤：1)取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用；(2)称取步骤(1)中的小花棘豆100g，加浓度为60％乙醇300mL，超声浸提45min，超声波功率800w，温度45℃；(3)过滤后残渣再加浓度为60％乙醇300mL浸提1次，合并滤液，回收乙醇得到总浸膏；(4)将小花棘豆总浸膏用水充分溶解，向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入70％的乙醇溶液(V/V)，体积为树脂体积的2倍，流速为1倍树脂体积/min，用去离子水洗至无醇味，乙醇洗脱；(5)收集洗脱液，挥干后即得到小花棘豆黄酮。本发明中小花棘豆黄酮的安全性较好，适合推广应用。

Description

一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于医药和保健品技术领域，涉及一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用。

背景技术

小花棘豆(Oxytropis glabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆属(Oxytropis)植物，在新疆分布广泛。据蒙药典记载，小花棘豆是一种重要的中蒙药原料，具有麻醉、镇静和止痛作用，主治牙痛、关节痛、失眠、健忘、神经衰弱及皮肤瘙痒。如小花棘豆4.5g、北五加皮6g及地枸叶9g，水煎服，可治关节痛。

黄酮类化合物是小花棘豆的有效成分之一。目前，已从小花棘豆中分离得到了7种黄酮类化合物，均以黄酮苷的形式存在，且均为氧苷。苷元主要为山柰酚、槲皮素、鼠李素和异鼠李素等，糖取代基有D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-芸香糖等。并且发现小花棘豆的黄酮含量高于传统藏药“达夏”(镰形棘豆)，表明小花棘豆黄酮具有较好的开发利用前景。国内外研究认为黄酮类化合物除具有抗菌、抗炎、抗突变、降压、清热解毒、镇静、利尿等作用，在抗氧化、抗癌、抑制脂肪酶等方面有显著效果，同时也是大多数氧自由基的清除剂，对冠心病、心绞痛等疾病的治疗效果显著；而且黄酮类化合物安全性好、毒性小。而到目前为止，并未有小花棘豆黄酮在抗衰老作用的研究报道和专利申请。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用，提取得到新疆小花棘豆黄酮类成分，通过小花棘豆黄酮对衰老小鼠模型的抗衰老试验和饲喂安全性试验，发现小花棘豆黄酮具有较好的抗衰老作用，可以用于制备抗衰老药物及保健食品。

其具体技术方案为：

一种小花棘豆黄酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用；

(2)称取步骤(1)中的小花棘豆100g，加浓度为60％乙醇300mL，超声浸提45min，超声波功率800w，温度45℃；

(3)过滤后残渣再加浓度为60％乙醇300mL浸提1次，合并滤液，回收乙醇得到总浸膏；

(4)将小花棘豆总浸膏用水充分溶解；向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入浓度为70％的乙醇溶液(V/V)，体积为树脂体积的2倍，流速为1倍树脂体积/min，用去离子水洗至无醇味；

(5)用浓度为10％～100％的乙醇洗脱，收集浓度为50％～85％的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末即为小花棘豆黄酮。

本发明所述的小花棘豆黄酮在制备保肝和抗氧化药物及保健食品中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明建立了小花棘豆黄酮抗衰老作用的新用途，为进一步开发小花棘豆资源提供了新的思路。

(2)本发明中小花棘豆黄酮的安全性较好。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明

实施例1

一种小花棘豆黄酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用；

(2)称取步骤(1)中的小花棘豆100g，加浓度为60％乙醇300mL，超声浸提45min，超声波功率800w，温度45℃；

(3)过滤后残渣再加浓度为60％乙醇300mL浸提1次，合并滤液，回收乙醇得到总浸膏；

(4)将小花棘豆总浸膏用水充分溶解；向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入浓度为70％的乙醇溶液(V/V)，体积为树脂体积的2倍，流速为1倍树脂体积/min，用去离子水洗至无醇味；

(5)用浓度为10％的乙醇洗脱，收集浓度为50％的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末即为小花棘豆黄酮。

本发明所述的小花棘豆黄酮在制备保肝和抗氧化药物及保健食品中的应用。

实施例2

一种小花棘豆黄酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用；

(2)称取步骤(1)中的小花棘豆100g，加浓度为60％乙醇300mL，超声浸提45min，超声波功率800w，温度45℃；

(3)过滤后残渣再加浓度为60％乙醇300mL浸提1次，合并滤液，回收乙醇得到总浸膏；

(4)将小花棘豆总浸膏用水充分溶解；向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入浓度为70％的乙醇溶液(V/V)，体积为树脂体积的2倍，流速为1倍树脂体积/min，用去离子水洗至无醇味；

(5)用浓度为100％的乙醇洗脱，收集浓度为85％的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末即为小花棘豆黄酮。

实施例3

一种小花棘豆黄酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用；

(2)称取步骤(1)中的小花棘豆100g，加浓度为60％乙醇300mL，超声浸提45min，超声波功率800w，温度45℃；

(3)过滤后残渣再加浓度为60％乙醇300mL浸提1次，合并滤液，回收乙醇得到总浸膏；

(4)将小花棘豆总浸膏用水充分溶解；向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入浓度为70％的乙醇溶液(V/V)，体积为树脂体积的2倍，流速为1倍树脂体积/min，用去离子水洗至无醇味；

(5)用浓度为60％的乙醇洗脱，收集浓度为70％的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末即为小花棘豆黄酮。

小花棘豆黄酮抗衰老试验：

选取6～8周龄昆明种小白鼠为试验动物，将其随机分为正常对照组、衰老模型组、低剂量黄酮灌胃组、中剂量黄酮灌胃组和高剂量黄酮灌胃组。黄酮灌胃组分别按100、200、300mg/(kg·d)的剂量灌服小花棘豆黄酮生理盐水溶液，灌胃量0.2mL；除正常对照组外其余小鼠均每天皮下注射10g/L D-半乳糖生理盐水溶液，注射量0.2mL，正常对照组注射等剂量的生理盐水。30d后处死小鼠，测定小鼠血清、肝脏和脑组织的SOD、GSH-Px、CAT和MDA含量，以及脑组织中LP含量。

结果表明，小花棘豆黄酮可抑制D-半乳糖导致的SOD、GSH-Px和CAT活性降低，300mg/(kg·d)剂量的小花棘豆黄酮还可显著提高小鼠体内抗氧化作用能力；并且小花棘豆黄酮可显著降低小鼠血清和脏器中的MDA与LP含量，说明小花棘豆黄酮在组织水平具有较好的抗衰老作用。

表1小花棘豆黄酮对小鼠血清指标的影响(n＝10，X±S)

注：同列数据大写字母不同表示差异极显著(P＜0.01)，小写字母不同表示差异显著(P＜0.05)。

表2小花棘豆黄酮对小鼠肝脏指标的影响(n＝10，X±S)

表3小花棘豆黄酮对小鼠脑组织指标的影响(n＝10，X±S)

小花棘豆黄酮的安全饲喂试验：

选用48只6～8周龄，体重为(20±2)g的小鼠，随机分为4组，每组12只，雌雄各半。对照组饲喂全价饲料，试验I、II、III组在全价饲料中分别添加小花棘豆黄酮10、30、50mg/kg的日粮，试验期为30d。结果表明，小鼠采食小花棘豆黄酮后未见异常临床症状，小鼠血液学指标、血清生化指标和脏器系数均在正常范围内。说明小鼠日粮中添加小花棘豆黄酮未发现亚慢性毒性，可以被安全利用。

表4小花棘豆黄酮对小鼠体质量的影响(X±S，g)

表5小花棘豆黄酮对小鼠采食量的影响(X±S，g)

表6小鼠血清生化指标测定结果(X±S)

表7小鼠血液学指标测定结果(X±S)

表8小花棘豆黄酮对小鼠脏器系数的影响(X±S)

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (2)

1.一种小花棘豆黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用；

(2)称取步骤(1)中的小花棘豆100g，加浓度为60％乙醇300mL，超声浸提45min，超声波功率800w，温度45℃；

(3)过滤后残渣再加浓度为60％乙醇300mL浸提1次，合并滤液，回收乙醇得到总浸膏；

(4)将小花棘豆总浸膏用水充分溶解；向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入浓度为70％的乙醇溶液(V/V)，体积为树脂体积的2倍，流速为1倍树脂体积/min，用去离子水洗至无醇味；

(5)用浓度为10％～100％的乙醇洗脱，收集浓度为50％～85％的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末即为小花棘豆黄酮。

2.权利要求1所述的小花棘豆黄酮在制备保肝和抗氧化药物及保健食品中的应用。