CN103211832A - 含杨酶苷或/和杨梅素的药物组合物及其在制备帕金森治疗药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杨梅苷或/和其苷元杨梅素与左旋多巴，或与左旋多巴和卡比多巴的药物组合物，及杨梅苷或/和其苷元杨梅素作为增效剂在制备治疗帕金森症的药物中的用途。体外活性测定发现杨梅苷及其杨梅素抑制COMT酶的IC₅₀可达微摩尔-纳摩尔级。大鼠整体药代研究发现杨梅苷及其苷元杨梅素与左旋多巴联合使用后，可提高左旋多巴的血药浓度。而且，杨梅苷及其苷元杨梅素安全性高，其对人体主要脏器细胞也无明显毒性，且不会经代谢激活产生活性中间体而引发肝肾等脏器损伤，在帕金森症的辅助治疗中具有良好的用途前景。

Description

含杨酶苷或/和杨梅素的药物组合物及其在制备帕金森治疗药物中的用途

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其用途，尤其涉及一种含杨酶苷或/和苷元杨梅素的药物组合物及其在制备治疗帕金森症的药物中的用途。

背景技术

帕金森症(PD)是脑内多巴胺不足导致的一种慢性中枢神经系统退化性失调症，在老年人中的发病率高达1.7%(Neurology.2000;54:S24-7)。我国是世界上PD患者最多的国家，随着我国老龄化社会的来临，PD带来的医疗、家庭、社会等问题越发广泛和严峻，患者的生活质量受到巨大影响。

目前，治疗帕金森症（PD）最有效的治疗手段为多巴胺替代疗法，即通过前体药物左旋多巴（L-dopa）在患者脑中转变为多巴胺，以补充患者脑中多巴胺的不足。但由于L-dopa在外周组织中极易被代谢，单独使用时几乎没有药效，其需要与儿茶酚-O-甲基转移酶(Catechol-O-methyltransferase,COMT)抑制剂同服方可在体内发挥效果(Eur Neurol.2009;62:1-8)。然而，已上市的COMT酶抑制剂，如Tolcapone、Entacapone等，连续使用易引发严重的肝损伤等毒副作用(Neurology2004;62:39-46)。而PD患者需频繁用药，长期使用现有药物会引发严重肝损伤。因此开发安全高效的新型COMT抑制剂成为帕金森症药物治疗领域的热点之一。

COMT酶是一种镁离子依赖型酶，其以S-腺苷蛋氨酸即SAM作为甲基供体催化儿茶酚类底物的甲基化，生成相应的O-甲基化儿茶酚。目前，国内外已有诸多报道称，很多天然的儿茶酚类化合物都是COMT酶的底物，但部分底物还显现出了高效的COMT抑制活性，即其可通过与左旋多巴竞争COMT酶而减缓体内COMT酶对左旋多巴的代谢清除。

杨梅苷及其苷元杨梅素均为天然多羟基黄酮类化合物，来源广泛，在药物的研究与用途中具有资源优势。杨梅苷存在于杨梅科植物杨梅的果实、树皮、树叶和藤茶、蛇葡萄属植物及龙眼叶等其他多种药用植物叶中，具有收缩血管、降血糖、抗氧化、保肝、利胆、抗炎、抗突变、抗肿瘤等作用，极具研究价值(FoodResearch and Development，2007；28(2)：185-188)。杨梅素是杨梅科植物杨梅的树皮及叶的主要化学成分，也存在于洋葱、浆果和茶等天然植物中，是红酒中黄酮醇类的主要成分之一，杨梅素具有广泛的药理活性，同时具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、降血糖和保肝等多种功效，尤其在防治心血管疾病方面作用明显（国际药学研究杂志，2012；39（6）：483-487）。

发明内容

本发明人治疗帕金森症的长期研究中发现杨梅苷及其苷元杨梅素具有强效抑制COMT酶的活性和良好的安全性，同时兼具良好的抗炎及抗氧化活性。其能够与帕金森症治疗药物左旋多巴联合用于帕金森症的治疗中。

本发明的目的之一在于提供一种药物组合物，含有杨梅苷或/和其苷元杨梅素与左旋多巴。例如为杨梅苷与左旋多巴组成的药物组合物，或为杨梅素与左旋多巴组成的药物组合物，或为杨梅苷和其苷元杨梅素与左旋多巴组成的药物组合物。

作为优选技术方案，本发明所述的药物组合物，还含有卡比多巴。例如为杨梅苷与左旋多巴及卡比多巴组成的药物组合物，或为杨梅素与左旋多巴及卡比多巴组成的药物组合物，或为杨梅苷和其苷元杨梅素与左旋多巴及卡比多巴组成的药物组合物。

所述的杨梅苷及其苷元杨梅素具有以下结构：

本发明所述化合物杨梅苷及其苷元杨梅素为天然高效、安全的COMT酶抑制剂同时兼具良好的抗炎、抗氧化活性，可有效改善当前临床帕金森症治疗药物（尤其是Tolcapone等COMT酶抑制剂）存在的多种缺陷，如连续使用易引发肝、肾毒性等。

作为优选技术方案，所述药物组合物中杨梅苷或/和其苷元杨梅素与左旋多巴以任意比合用，比如为杨梅苷与左旋多巴任意比合用，或为杨梅素与左旋多巴任意比合用，或为杨梅苷和其苷元杨梅素与左旋多巴任意比合用，优选杨梅苷或/和其苷元杨梅素与左旋多巴以1:10～10:1的摩尔比合用，其中杨梅苷与左旋多巴的摩尔比，或杨梅素与左旋多巴的摩尔比，或杨梅苷和其苷元杨梅素的摩尔之和与左旋多巴的摩尔比可以为1:8、1:6、1:4、1:2、1:1、2:1、3.5:1、4:1、5:1、7:1、9:1等，进一步优选以3:1～6:1的摩尔比合用，特别优选以5:1的摩尔比合用。

本发明的目的之一还在于提供一种杨梅苷或/和其苷元杨梅素作为增效剂在制备治疗帕金森症的药物中的用途。

作为优选技术方案，本发明所述的药物为左旋多巴或左旋多巴与卡比多巴合用。杨梅苷及其苷元杨梅素作为左旋多巴增效剂，其可用于帕金森症的辅助治疗，杨梅苷及其苷元杨梅素可选任一与左旋多巴或左旋多巴与卡比多巴合用，也可以任意比例混合后使用，亦可与左旋多巴或左旋多巴与卡比多巴混合后作为药物组合物共同使用。杨梅苷及其苷元杨梅素作为强效COMT酶抑制剂，与左旋多巴或左旋多巴与卡比多巴共用时减缓其体内代谢进而提高左旋多巴的功效。

作为优选技术方案，本发明所述用途为杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴以任意比合用，优选杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴以1:10～10:1的摩尔比合用，例如为1:8、1:6、1:4、1:2、1:1、2:1、3.5:1、4:1、5:1、7:1、9:1等，进一步优选以3:1～6:1的摩尔比合用，特别优选以5:1的摩尔比合用。

作为优选技术方案，本发明所述用途为杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴/卡比多巴以任意比合用，比如为杨梅苷与左旋多巴和卡比多巴任意比合用，或为杨梅素与左旋多巴和卡比多巴任意比合用，或为杨梅苷和其苷元杨梅素与左旋多巴和卡比多巴任意比合用，优选杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴以1:10～10:1的摩尔比合用，例如为1:8、1:6、1:4、1:2、1:1、2:1、3.5:1、4:1、5:1、7:1、9:1等，进一步优选以3:1～6:1的摩尔比合用，特别优选以5:1的摩尔比合用。

作为优选技术方案，本发明所述的合用为将本发明4～7任一项所述的合用药物混合后做成药物组合物使用。

本发明的杨梅苷及其苷元杨梅素均为COMT酶抑制剂，杨梅苷及其苷元杨梅素可单独成剂型后与帕金森症治疗药物（左旋多巴、卡比多巴/左旋多巴）联合使用。也可与帕金森症治疗药物（左旋多巴、卡比多巴/左旋多巴）按比例混合后作为药物组合物使用。

本发明所述的药物组合物的剂型不限，凡适合于左旋多巴给药的剂型均可用于本发明，例如可选择片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂等适合本发明药物发挥功能的剂型。

作为优选技术方案，本发明所述药物组合物的剂型为片剂、缓释片、胶囊剂、滴丸。

本发明的杨梅苷及其苷元杨梅素作为COMT酶抑制剂的优点如下：

1、高安全性，杨梅苷及其苷元杨梅素毒性很小，其小鼠口服后的LD₅₀大于2.0g/kg(无毒级别)；同时其对人体主要脏器细胞也无明显毒性，且不会经代谢激活产生活性中间体而引发肝肾等脏器损伤；

2、COMT酶抑制活性显著，其半数抑制浓度IC₅₀可达纳摩尔-微摩尔级；体内药代实验亦显示杨梅苷及其苷元杨梅素与L-dopa联合用药后，L-dopa的AUC有显著增加；

3、杨梅苷及其苷元杨梅素兼具良好的抗氧化活性，可减缓患者长期用药引发的肝肾组织氧化损伤；

4、杨梅苷及其苷元杨梅素不易穿透血脑屏障，不会干扰中枢中内源性神经递质的甲基化代谢。

附图说明

图1杨梅苷及其苷元杨梅素对COMT酶抑制IC₅₀图；

图2杨梅苷及其苷元杨梅素对COMT酶抑制效应图：杨梅素与杨梅苷的Dixon作图。

图3杨梅苷及其苷元杨梅素对COMT酶抑制效应图：杨梅素与杨梅苷的Lineweaver-Burk作图。

具体实施方式

为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

实施例

实施例1杨梅苷及其苷元杨梅素单体对人COMT酶的抑制活性测定

以L-dopa甲基化反应为探针反应，借助人肝细胞浆体外孵育体系，测定杨梅苷及其苷元杨梅素对COMT酶抑制的IC₅₀，具体实验流程如下：

（1）200微升体外代谢反应体系中，加入5mM MgCl₂，2mM二硫苏糖醇，150μM底物L-dopa，人肝细胞浆蛋白浓度为1mg/ml，抑制剂终浓度范围为0.05μM-50μM，于37℃条件下预孵3分钟；

（2）向反应体系中加入S-腺苷蛋氨酸（终浓度为0.2mM），起始反应；于37℃条件下反应30分钟后，加入200μl乙腈，剧烈震荡后，终止反应；

（3）采用高速冷冻离心机，在20,000×g的条件下，高速离心上述体系20分钟后，取上清，进行HPLC-MS/MS检测分析；通过检测L-dopa3-位甲基化代谢产物离子对[M-H]⁺m/z212.2＞195.1，对甲基化代谢产物进行定量检测。

图1为杨梅苷及其苷元杨梅素对COMT酶抑制IC₅₀图，从图中可以看出杨梅苷及其苷元杨梅素对COMT酶均呈现出底物依赖性的抑制，杨梅素半数抑制浓度（IC₅₀）为0.45μM，杨梅苷的半数抑制浓度（IC₅₀）为1.0μM。由此可见，杨梅苷及其苷元杨梅素对COMT酶有较强的抑制活性，尤其是杨梅素（杨酶苷体内水解产物）的活性更为显著。此外，通过抑制动力学研究还发现，杨梅苷及杨梅素是COMT酶的混合型竞争性抑制剂（图2和图3）。

实施例2杨梅苷及其苷元杨梅素的毒性评估

选取昆明小鼠，体重178-22g。将小鼠随机分组，每组20只，雌雄各半，分别开展杨梅苷与杨梅素的小鼠口服急性毒性试验。杨梅苷或杨梅素分别混悬于0.5%CMC-Na中，。选择不同剂量口服给药（0.1～2g/kg）；并设置0.5%CMC-Na组做阴性对照。实验结果显示杨梅苷与杨梅素小鼠口服的LD₅₀值大于2.0g/kg，属于无毒级别。此外，体外细胞实验证实杨梅苷与杨梅素对人原代肝细胞及肾细胞无明显毒性。同时在加入辅因子NADPH或其生成体系的人肝微粒体孵育体系中，分别加入该杨梅苷及其苷元杨梅素（终浓度为100μM)及还原型谷胱甘肽（终浓度为1000μM），37℃下孵育120分钟后，借助AB Qtrap5500进行加合物检测证实无活性加合物形成，提示杨梅苷与杨梅素不会因代谢激活引发肝、肾毒性，具有良好的安全性。

实施例3杨梅苷及其苷元杨梅素与左旋多巴联用的药代动力学研究

杨梅苷或/和杨梅素作为COMT酶抑制剂，单独施用对于帕金森症没有治疗效果，只有和左旋多巴合用时才有意义。

选择24只Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g，随机分为4组：口服左旋多巴/卡比多巴对照组，口服杨梅苷/左旋多巴/卡比多巴组（杨梅苷与左旋多巴摩尔比为5:1）,口服杨梅素/左旋多巴/卡比多巴组（杨梅素与左旋多巴摩尔比为5:1），口服杨梅素-杨梅苷混合物/左旋多巴/卡比多巴组（杨梅苷和杨梅苷的摩尔之和与左旋多巴的摩尔比为5:1），6只/组开展L-dopa的整体药代学研究。口服剂量为2g/kg。分别在采集给药前血浆及给药后5、10、15、30、60、120、180、240分钟的大鼠血浆样品0.5ml左右，置于预先肝素化的1.5ml尖底棕色离心管中，4000×g离心10分钟后，分离血浆后加入等体积的甲醇沉淀蛋白并高速离心（20,000×g），取上清保存于-80℃冰箱待测。采用UFLC-MS/MS测定各样品中左旋多巴的血药浓度，用DAS2.0软件对血药浓度数据进行处理，并计算药代动力学参数。结果表明，相对于单独口服左旋多巴/卡比多巴对照组，杨梅苷及其苷元杨梅素都能明显提高大鼠血浆中左旋多巴的水平并延长其代谢半衰期。杨梅苷组药时曲线下面积（AUC）增大了31%，杨梅素组AUC增大了27%，杨梅素-杨梅苷混合物组AUC增大了30%。以上结果显示杨梅苷及其苷元杨梅素均发挥了左旋多巴增效剂的作用。另外，采用COMT酶抑制剂杨梅素或/和杨梅苷与左旋多巴摩尔比为10:1的比例进行上述相同实验，给药组的AUC增加量在20%以上；杨梅素或/和杨梅苷与左旋多巴摩尔比为1:10的比例进行上述相同实验发现给药组的AUC增加量在10%左右。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (9)

1.一种药物组合物，其特征在于，含有杨梅苷或/和其苷元杨梅素与左旋多巴。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，还含有卡比多巴。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中杨梅苷或/和其苷元杨梅素与左旋多巴以任意比合用，优选杨梅苷或/和其苷元杨梅素与左旋多巴以1:10～10:1的摩尔比合用，进一步优选以3:1～6:1的摩尔比合用，特别优选以5:1的摩尔比合用。

4.一种杨梅苷或/和其苷元杨梅素作为增效剂在制备治疗帕金森症的药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的药物为左旋多巴或左旋多巴与卡比多巴合用。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述用途为杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴以任意比合用，优选杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴以1:10～10:1的摩尔比合用，进一步优选以3:1～6:1的摩尔比合用，特别优选以5:1的摩尔比合用。

7.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述用途为杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴/卡比多巴以任意比合用，优选杨梅苷或/和杨梅素与左旋多巴以1:10～10:1的摩尔比合用，进一步优选以3:1～6:1的摩尔比合用，特别优选以5:1的摩尔比合用。

8.根据权利要求4～7任一项所述的用途，其特征在于，所述的合用为将4～7任一项所述的合用药物混合后做成药物组合物使用。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物组合物的剂型为片剂、缓释片、胶囊剂、滴丸。

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