CN103059002B - 具有Aurora激酶抑制活性的嘧啶衍生物及其制备方法以及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有Aurora激酶抑制活性的嘧啶衍生物及其制备方法以及应用。其中嘧啶衍生物包括由以下通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，在本发明中通过在嘧啶环的2,4,6-位，引入不同的药效团，提供一种新合成的嘧啶衍生物，这种新合成的嘧啶衍生物对Aurora激酶显示出较好的抑制活性。

Description

具有Aurora激酶抑制活性的嘧啶衍生物及其制备方法以及应用

技术领域

本发明涉及一类新的嘧啶衍生物，或此类化合物药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，它们的制备方法，以及它们作为Aurora激酶抑制剂的应用。

背景技术

Aurora激酶是一类在细胞生长周期中具有重要调控作用的丝氨酸/苏氨酸激酶，参与调节纺锤体形成、中心体成熟、染色体分化和胞质分裂过程，对维持基因组的稳定性具有关键作用。研究发现，Aurora激酶的过度表达易导致细胞有丝分裂异常，与肿瘤的形成密切相关。Aurora激酶在许多癌细胞（如肺癌、乳腺癌、直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌）中过度表达，抑制Aurora激酶的活性可以导致肿瘤细胞多倍体的聚集、促进细胞凋亡、阻断细胞增殖。以Aurora激酶为靶点进行抗肿瘤药物的研究开发也越来越受到人们的重视。Aurora激酶在有丝分裂中才被表达和激活，它们对于非增殖的细胞无效，而在人体中大多数正常细胞的增殖速度并不快。因此Aurora激酶抑制剂属于靶向抗肿瘤药物，与其它非特异性细胞毒药物相比，将具有更大的优势。

根据氨基酸序列的不同，人类Aurora激酶分为Aurora A、Aurora B和Aurora C三种亚型。这三种亚型具有非常保守的C-端催化区和N-端可变区，即具有高度同源的ATP结合位点（C-端催化区），但在N-末端的氨基酸长度和序列上有较大差异。

Aurora A位于复制的中心体和有丝分裂的纺锤体两端，调节中心体的成熟、纺锤体的组装以及有丝分裂的启动过程。AuroraA可以磷酸化细胞周期蛋白B1-Cdk1的调节因子Cdc25b，活化Cdc25b后调节细胞有丝分裂的启动过程。AuroraA还通过参与调节三种中心体蛋白，即中心体蛋白（centrosomin，CNN）、转化酸性卷曲螺旋蛋白（trans-formingacidic coiled-coilprotein，TACC）和纺锤体缺陷型蛋白（spindle defective-2，SPD-2）来保证有丝分裂过程中中心体的成熟。

Aurora B是一种染色体载体蛋白，在细胞有丝分裂过程中参与调节染色体和细胞骨架运动，在细胞内与Incenp、Borealin、Survivin等共同组成染色体载体蛋白复合物。Aurora B在细胞有丝分裂中影响染色体的精确分离和有丝分裂后期的胞质分裂过程。组蛋白H3是染色质浓缩过程的重要调节因子，Aurora B通过磷酸化组蛋白H3将其活化，从而间接调节有丝分裂过程中的染色质浓缩过程，使染色质浓缩形成两条姐妹染色单体，以保证遗传物质DNA的平均分配，在有丝分裂后期，Aurora B位于纺锤体的中心区域，活化细胞动力蛋白MKPL来调节胞质运动，促进细胞有丝分裂末期的顺利进行。干扰Aurora B会引起胞质分裂失败从而形成多倍体。

人们对Aurora C的认识较少，仅发现其在哺乳动物的睾丸组织中大量表达。对其功能的研究发现，Aurora C也是一种染色体过客蛋白，同时它还可以部分逆转由Aurora B缺失所引起的细胞缺陷，对于其与肿瘤之间的关系还有待深入研究。

自1998年科学家证实肿瘤的发生与Aurora激酶的过度表达有密切关系后，引发了学术界和制药工业界将Aurora激酶作为抗肿瘤药物作用靶点的研究热潮。随着Aurora激酶晶体结构研究的深入和计算机模拟技术的应用，人们发现大多数合成的Aurora激酶抑制剂属于ATP（三磷酸腺苷）竞争性激酶抑制剂，竞争结合激酶的ATP结合位点，切断激酶直接的能量来源，从而抑制其活性。

研究发现，ATP结构中的嘌呤环可结合于Aurora激酶结构的疏水口袋，并与连接区的氨基酸残基形成氢键。ATP结合口袋由以下几个区域组成：激酶铰链区、疏水口袋结合区、磷酸盐沟埋区、溶剂可及区以及核糖部分。

Aurora激酶家族ATP结合位点具有很高的同源性，这使得激酶抑制剂的选择性成为一个很大的挑战。许多报道的Aurora激酶抑制剂仍能体现出良好的选择性，其中一个重要原因是抑制剂除了通过ATP结合位点与激酶相互作用外，还作用于ATP结合口袋附近的区域，包括激酶后部的疏水口袋，所有这些作用区域氨基酸残基的不同共同决定了激酶抑制剂选择性的差异。已报道的激酶抑制剂的基本结构特点是：具有一个平面的杂环体系以竞争结合激酶的ATP口袋并模拟腺嘌呤与激酶的相互作用；抑制剂与激酶铰链区之间还可通过氢键作用形成“供体-受体-供体”作用模式；抑制剂的官能团往往能够进入激酶磷酸盐结合区域或者选择性结合口袋。从结构上看，目前合成的Aurora激酶抑制剂主要为嘧啶环类、吡咯并吡唑类、吲哚类、喹唑啉类、苯并氮并嘧啶类以及其它结构类化合物。

嘧啶类化合物是最早报道的Aurora激酶抑制剂，美国威泰克斯（Vertex）公司（US7361492B2，WO03092607A2）2003年首次报道了AuroraA激酶与嘧啶化合物N-(3-环丙基-1H-吡唑-5-基)-2-苯基喹唑啉-4-胺复合物晶体结构。专利中指出，该复合物吡唑环上的两个N原子与激酶的铰链区形成氢键作用，在激酶的甘氨酸富集区域，激酶与该复合物的苯环之间有π-π相互作用。Vertex公司的研究成果为后续合理设计Aurora激酶抑制剂打下了良好的基础。其中专利WO03092607A2中所涉及的化合物结构如下：

Vertex公司与默克（Merck）公司联合开发了第一个Aurora激酶抑制剂VX-680（又名MK-0457）(WO2004000833A1)。该分子结构呈Y状，中心的嘧啶环位于激酶的疏水区，与激酶氨基酸残基之间有疏水作用；含氨基吡唑的胳膊伸入激酶的铰链区域，吡唑环的氮原子与铰链区氨基酸残基有氢键作用；含苯基的胳膊伸入激酶活性位点口袋中，苯基末端的环丙基与Aurora A激酶的F275残基有疏水作用；哌嗪侧链则由酶的活性区域伸展到酶的溶剂可及区。研究发现，VX-680对AuroraA、B、和C都具有很好的抑制作用，IC₅₀值分别为0.6、18和4.6nM，能够抑制结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、颈部肿瘤、白血病等众多肿瘤细胞的增殖。2006年，VX-680进入了临床II期研究，主要用于治疗顽固的慢性骨髓性白血病和急性淋巴性白血病。研究发现该药物可引起病人的QTc延长风险（QTc为心电图上校正的T波与Q波之间的时间差，QTc延长容易导致心律失常），2007年11月默克终止了VX-680的II期临床试验（Expert Opin.Investing Drugs.2009,18,379）。

Vertex与Merck公司在此基础上发展了一系列嘧啶衍生的Aurora激酶抑制剂，主要在嘧啶环的2-位和6-位取代基进行结构修饰（WO07056163A2，WO07056164A2，WO07056221A2，WO07059299A1，WO07022384A2），如将2-位硫原子换成氧原子取代，6-位甲基哌嗪使用其它具有氮原子的吖丁啶、取代吖丁啶，2-位侧链苯环上对位取代基的使用位阻更大的基团取代等，其中很多化合物进入了临床研究。

基于同样的策略，Miikana公司开发了Aurora激酶抑制剂（WO2006055831A2)，其结构式如下所示，该化合物保留了VX-680的嘧啶骨架和4-位的氨基吡唑，5-位引入碱性的氨基，其对AuroraA的IC₅₀<100nM，对人类直肠癌细胞株HCT-116的GI₅₀<1μM。

当嘧啶2-位取代基变为苯乙烯基时，得到的化合物ENMD2076，显示出较好的细胞活性。EntreMed公司将其制成L-酒石酸盐，使之可口服，并且选择性地抑制AuroraA激酶，其IC₅₀为14nM。

其它嘧啶类Aurora激酶抑制剂。2,4-位双苯胺取代的嘧啶类化合物（Andrea G. Cochran,etal.J.Med.Chem.2009,52,3300；Nicholas J Lawrence,et al.J.Med.Chem.2012,55,7392）也有不错的Aurora激酶抑制活性，4-位单苯胺取代的嘧啶类Aurora激酶抑制剂（J.Med.Chem.2010,53,4367）也有较好的活性。

虽然在现有技术中存在一些Aurora激酶抑制剂，但进一步开发Aurora激酶抑制剂，为制备与Aurora激酶相关疾病的药物提供更多的选择依然是有必要的。

发明内容

本发明目的在于提供一种具有Aurora激酶抑制活性的嘧啶衍生物及其制备方法以及应用，以提供一种具有Aurora激酶抑制活性的新化合物。

为此，在本发明中的一个方面，提供了一种由以下通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，

其中，R¹是H，-COR，-CO₂R，-SO₂R，带有0-2个取代基的C1-3的脂肪烃类或者-C(H₂)(R⁵)；R²是H，取代或者没有取代的芳基或者杂环芳基，其中取代基是卤素，-NO₂，-CN，-C(R)=CR’₂，-C(R)=C(R’)(R”)，-C≡C-R，-OR，-SR，-S(O)R，-SO₂R，-SO₂N(R)₂，-N(R)₂，-OCO₂R，-OC(O)NR₂，-OC(O)R，-CO₂R，-C(O)R，-C(O)NR₂，-C(=NR)-NR₂，-C(=NR)-OR，-NRC(=NR)-NR₂，-NRSO₂R，-NRSO₂NR₂，-P(O)R₂，或者-P(O)(OR)2；R²中R、R’以及R”是H，未取代的低级烷基，苯基或者取代苯基。R³是5-6元环的杂环芳基或者非芳杂环，C1-6脂肪烃基，烷氧基烷基氨基，烷氧基烷基，氨基，烷基或二烷基氨基，烷基或二烷基氨基烷氧基，乙酰氨基，烷氧基羰基，烷基和二烷基氨基羰基，或者取代苯基；R⁴和R⁴’是氢，C1-4的脂肪烃基，烷氧基羰基，取代或未取代的苯基，羟基烷基，烷氧基烷基，氨基羰基，单烷基或双烷基的氨基羰基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，苯基氨基羰基，或（N-杂环）羰基；或者R⁴和R⁴’与通式（I）中吡唑形成双环的结构；R⁵是取代或者没有取代的芳基或者杂环芳基，其中取代基可以是卤素，-NO₂，-CN，-C(R)=CR’₂，-C(R)=C(R’)(R”)，-C≡C-R，-OR，-SR，-S(O)R，-SO₂R，-SO₂N(R)₂，-N(R)₂，-NRC(O)R’，-NRC(O)NR’₂，-NRCO₂R’，-OCO₂R，-OC(O)NR₂，-OC(O)R，-CO₂R，-C(O)R，-C(O)NR₂，-C(=NR)-NR₂，-C(=NR)-OR，-NRC(=NR)-NR₂，-NRSO₂R，-NRSO₂NR₂，-P(O)R₂，或者-P(O)(OR)₂；R⁵中R、R’以及R”是H，未取代的低级烷基，苯基或者取代苯基。

优选地，在上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药中R¹是H。

优选地，在上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药中R²是取代苯基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，其中取代基是4-COOH，4-COOMe，4-COOEt，4-COOiPr，3-OMe，4-OMe，2-OMe，2-Cl，3-Cl，4-Cl，3-Cl-4-COOMe，3-OMe-4-COOMe，2-Cl-2-OMe，2-CONH₂-3-F，3-CONH₂，2-CH₂OH，4-CONHMe，2,4-diOMe，2,5-diOMe，2-Me-4-OMe，2,4-diCl，3,4-diCl，2-吗啉基，3-吗啉基，4-吗啉基，3,4-亚甲二氧基，4-CH₂COOEt，4-NO₂，3-NO₂，2-NO₂，4-CN或者3-CF₃。

优选地，在上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药中R³是2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，吡咯基，哌啶基，吗啉基，吖丁啶基，羟基哌啶基，N-(4-羟基哌啶基)，O-(4-哌啶基)，哌嗪基，烷基哌嗪基，4-甲基哌嗪基，N-乙酰基哌嗪基，N-烷基羧基酰胺哌嗪基，N-甲磺酰基哌嗪基，N-(4-硝基苯基)磺酰基哌嗪基，N-三氟甲磺酰基哌嗪基，N-对甲苯磺酰基哌嗪基，N-对三氟甲基苯磺酰基哌嗪基，噻吩，呋喃，四氢呋喃，环[2.2.2]庚烯基，甲基，乙基，环丙基，异丙基，叔丁基，甲氧基乙基氨基，甲氧基甲基，甲氧基乙基乙基氨基，二甲基氨基，二甲基氨基丙氧基或者卤代苯基。

优选地，在上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药中R³含有氨基时，氨基的氮原子是自由碱形式或者药学可以接受的盐或者季铵盐。

优选地，在上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药中R⁴和R⁴’为甲基，环丙基，乙基，异丙基，丙基，叔丁基，环戊基，苯基，COOH，CO₂Me，CH₂OH，CH₂OMe，CH₂CH₂CH₂OH，CH₂CH₂CH₂OMe，CH₂CH₂CH₂OCH₂Ph，CH₂CH₂CH₂NH₂，CH₂CH₂CH₂NHCOOtBu，CONHiPr，CONHCH₂CH=CH₂，CONHCH₂CH₂OMe，CONHCH₂Ph，CONH(环己基)，CON(Et)₂，CON(Me)(CH₂Ph)，CONH(nPr)，CON(Et)(nPr)，CONHCH₂CH(CH₃)₂，CON(nPr)₂，CO(3-甲氧基甲基1-吡咯基)，CONH(3-甲苯基)，CONH(4-甲苯基)，CONHMe，CO(1-吗啉基)，CO(4-甲基1-哌嗪基)，CONHCH₂CH₂OH，CONH₂或者CO(1-哌啶基)；或者R⁴和R⁴与通式（I）中吡唑形成的双环结构为：

优选地，在上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药中化合物为下列结构式中的任一种：

在本发明的第二个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

在本发明的第三个方面，提供一种上述由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，或者上述药物组合物在抑制Aurora激酶的药物中的应用。

优选地，上述Aurora激酶为AuroraA激酶。

在本发明的第四个方面，提供一种抑制Aurora激酶的方法，包括将有效量的上述的由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药，或者上述药物组合物用于抑制Aurora激酶。

优选地，上述Aurora激酶为AuroraA激酶。

在本发明中通过在嘧啶环的2,4,6-位，引入不同的药效团，提供一种新合成的嘧啶衍生物，这种新合成的嘧啶衍生物对Aurora激酶显示出较好的抑制活性。

除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本发明作进一步详细的说明。

附图说明

附图构成本说明书的一部分、用于进一步理解本发明，附图示出了本发明的优选实施例，并与说明书一起用来说明本发明的原理。图中：

图1示出了根据本发明化合物对AuroraA激酶抑制实现结果对比图；

图2a示出了根据CTR阴性对照试验的细胞阻滞结果图；

图2b示出了根据本发明A-2化合物相对于实体瘤癌细胞CNE-1的细胞阻滞结果图；

图2c示出了根据本发明A-3化合物相对于实体瘤癌细胞CNE-1的细胞阻滞结果图；

图2d示出了根据本发明A-4化合物相对于实体瘤癌细胞CNE-1的细胞阻滞结果图；

图2e示出了根据本发明A-5化合物相对于实体瘤癌细胞CNE-1的细胞阻滞结果图；

图2f示出了根据本发明A-7化合物相对于实体瘤癌细胞CNE-1的细胞阻滞结果图；

图2g示出了根据本发明A-9化合物相对于实体瘤癌细胞CNE-1的细胞阻滞结果图；

图3a示出了根据本发明A-2化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图；

图3b示出了根据本发明A-3化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图；

图3c示出了根据本发明A-4化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图；

图3d示出了根据本发明A-5化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图；

图3e示出了根据本发明A-7化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图；

图3f示出了根据本发明A-9化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图；

图3g示出了根据本发明B-1化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图；以及

图3h示出了根据本发明C-1化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制活性结果图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明的实施例中的技术方案进行详细的说明，但如下实施例以及附图仅是用以理解本发明，而不能限制本发明，本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。

在本发明的一种实施方式中，提供了一种由通式（I）结构表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，

在上述化合物中，R¹是H，-COR，-CO₂R，-SO₂R，带有0-2个取代基的C1-3的脂肪烃类，或者-C(H₂)(R⁵)；其中优选是H。

在R¹是-C(H₂)(R⁵)时，R⁵是取代或者没有取代的芳基或者杂环芳基，其中取代基可以是卤素，-NO₂，-CN，-C(R)=CR’₂，-C(R)=C(R’)(R”)，-C≡C-R，-OR，-SR，-S(O)R，-SO₂R，-SO₂N(R)₂，-N(R)₂，-NRC(O)R’，-NRC(O)NR’₂，-NRCO₂R’，-OCO₂R，-OC(O)NR₂，-OC(O)R，-CO₂R，-C(O)R，-C(O)NR₂，-C(=NR)-NR₂，-C(=NR)-OR，-NRC(=NR)-NR₂，-NRSO₂R，-NRSO₂NR₂，-P(O)R₂，或者-P(O)(OR)₂；R⁵中R、R’以及R”是H，未取代的低级烷基，苯基或者取代苯基。

在上述化合物中，R²可以是H，也可以是取代或者没有取代的芳基或者杂环芳基。当R²为取代或者没有取代的芳基或者杂环芳基时，取代基是卤素，-NO₂，-CN，-C(R)=CR’₂，-C(R)=C(R’)(R”)，-C≡C-R，-OR，-SR，-S(O)R，-SO₂R，-SO₂N(R)₂，-N(R)₂，-OCO₂R，-OC(O)NR₂，-OC(O)R，-CO₂R，-C(O)C(O)R，-C(O)R，-C(O)NR₂，-C(=NR)-NR₂，-C(=NR)-OR，-NR-NR₂，-NRC(=NR)-NR₂，-NRSO₂R，-NRSO₂NR₂，-P(O)R₂，或者-P(O)(OR)₂；R⁵中R、R’以及R”是H，未取代的低级烷基，苯基或者取代苯基。

在本发明所提供的化合物中R²优选是取代苯基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基。其上取代基包括4-COOH，4-COOMe，4-COOEt，4-COOiPr，3-OMe，4-OMe，2-OMe，2-Cl，3-Cl，4-Cl，3-Cl-4-COOMe，3-OMe-4-COOMe，2-Cl-2-OMe，2-CONH₂-3-F，3-CONH₂，2-CH₂OH，4-CONHMe，2,4-diOMe，2,5-diOMe，2-Me-4-OMe，2,4-diCl，3,4-diCl，2-吗啉基，3-吗啉基，4-吗啉基，3,4-亚甲二氧基，4-CH₂COOEt，4-NO₂，3-NO₂，2-NO₂，4-CN或者3-CF₃。

在上述化合物中，R³包括5-6元环的杂环芳基或者非芳杂环，如2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，吡咯基，哌啶基，吗啉基，吖丁啶基，羟基哌啶基，N-(4-羟基哌啶基)，O-(4-哌啶基)，哌嗪基，烷基哌嗪基，4-甲基哌嗪基，N-乙酰基哌嗪基，N-烷基羧基酰胺哌嗪基，N-甲磺酰基哌嗪基，N-(4-硝基苯基)磺酰基哌嗪基，N-三氟甲磺酰基哌嗪基，N-对甲苯磺酰基哌嗪基，N-对三氟甲基苯磺酰基哌嗪基，噻吩，呋喃，四氢呋喃，环[2.2.2]庚烯基；C1-6脂肪烃基如甲基、乙基、环丙基、异丙基或叔丁基；烷氧基烷基氨基如甲氧基乙基氨基；烷氧基烷基如甲氧基甲基或甲氧基乙基；氨基，烷基或二烷基氨基如乙基氨基或二甲基氨基；烷基或二烷基氨基烷氧基，如二甲基氨基丙氧基；乙酰氨基；烷氧基羰基；烷基和二烷基氨基羰基；优选的取代苯基是卤代的苯基。其中R³中含有氨基时，氨基含有氨基时，氨基的氮原子可以是自由碱形式，也可以是一种药学可以接受的盐或者季铵盐。

在上述化合物中，R⁴和R⁴’可以是氢，C1-4的脂肪烃基，烷氧基羰基，取代或未取代的苯基，羟基烷基，烷氧基烷基，氨基羰基，单烷基或双烷基的氨基羰基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，苯基氨基羰基，（N-杂环）羰基，R⁴和R⁴’也可以是它们与通式（I）中吡唑形成双环的结构。

在本发明所提供的化合物中R⁴和R⁴’甲基，环丙基，乙基，异丙基，丙基，叔丁基，环戊基，苯基，COOH，CO₂Me，CH₂OH，CH₂OMe，CH₂CH₂CH₂OH，CH₂CH₂CH₂OMe，CH₂CH₂CH₂OCH₂Ph，CH₂CH₂CH₂NH₂，CH₂CH₂CH₂NHCOOtBu，CONHiPr，CONHCH₂CH=CH₂，CONHCH₂CH₂OMe，CONHCH₂Ph，CONH(环己基)，CON(Et)₂，CON(Me)(CH₂Ph)，CONH(nPr)，CON(Et)(nPr)，CONH(iBu)，CON(nPr)₂，CO(3-甲氧基甲基1-吡咯基)，CONH(3-甲苯基)，CONH(4-甲苯基)，CONHMe，CO(1-吗啉基)，CO(4-甲基1-哌嗪基)，CONHCH₂CH₂OH，CONH₂，或者CO(1-哌啶基)；R⁴和R⁴’与通式（I）中吡唑形成的双环结构包括但不限于如下结构：

优选地，在本发明中R⁴和R⁴’是氢。

在本发明的一种优选实施方式中，具有Aurora激酶抑制活性的嘧啶衍生物具有如下结构。

在本发明中上述由通式（I）结构表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药通过在嘧啶环的2,4,6-位，分别引入不同的药效团，形成一种新的新嘧啶衍生物结构，这种新嘧啶衍生物对Aurora激酶具有较好的抑制活性。

本发明所提供的上述由通式（I）结构表示的化合物可以通过多种方式制备，在本发明中提供一种优选地制备方法，具体包括如下步骤：

（一）、以2,4,6-三卤代嘧啶为起始原料（优选采用以2,4,6-三氯嘧啶为起始原料），与具有式（1）中结构的化合物反应引入4-位的取代基团得到具有式（2）中结构的中间体C，其中，式（1）和式（2）如下，式（2）中X为卤素；

式（1）                           式（2）

（二）、将该中间体C在催化剂的催化下，与具有式（3）中结构的化合物反应引入2-位的取代基团，得到的具有式（4）中结构的中间体D，其中，式（3）和式（4）如下，式（4）中X为卤素；

式（3）                            式（4）

（三）将该中间体D在微波条件下，与具有R³H结构的化合物反应，引入6-位上的取代基团，得到由通式（I）表示的化合物，

在上述制备步骤中式（1）至式（5）中每个取代基R¹、R²、R³、R⁴、R⁴’的定义与由通式（I）表示的化合物中取代基R¹、R²、R³、R⁴、R⁴’相同。

同时，在本发明的一种实施方式中还提供了一种药物组合物，这种药物组合物包括上述的由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

下面将详细描述本发明的示例性实施方案。然而，这些实施方案仅为说明目的，并不旨在限制本发明的范围。

如本文所使用的，如果为提供具体的限定，本发明的术语具有下述含义。

“卤素”包括氟，氯，溴和碘。

“烷基”是指直链或支链的饱和烃基团，如C1-20烷基，优选为C1-12烷基，更优选为C1-6烷基，再优选为C1-4烷基，尤其是例如甲基（Me)，乙基（Et)，丙基（例如，正丙基和异丙基)，丁基（例如，正丁基，异丁基，叔丁基)，戊基（例如，正戊基，异戊基，新戊基），正己基等。其中，在各取代烷基或烷基取代的基团中，烷基定义同上。

“治疗有效量”指的是在给予需要这样的治疗的哺乳动物时，足以有效治疗的通式化合物的量。治疗有效量将依赖于所用的治疗药剂的特定活性、患者的年龄、生理状况、其它疾病状态的存在、和营养状况而变化。此外，患者可能正接受的其它药物治疗将影响要给予的治疗药剂的治疗有效量的确定。

“治疗”意味着对于哺乳动物体内疾病的任何治疗，包括：

(i)防止疾病，即造成疾病的临床症状不发展；

(ii)抑制疾病，即，阻止临床症状的发展；和/或

(iii)减轻疾病，即，造成临床症状的消退。

在许多情况下，本发明的化合物能够由于氨基和/或羧基基团、酸根、或与此类似的基团的存在而形成酸和/或碱性盐。

本发明的化合物还包括互变异构体形式。互变异构体形式来源于一个单键与相邻的双键交换并一起伴随一个质子的迁移。

本发明的化合物还包括药学上可接受的盐。药学上可接受的盐是指把母体化合物中的碱性基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱性基团例如胺（氨）基的无机或有机酸盐类。本发明药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂系统中反应。合适的盐列举在Remington’s PharmaceuticalSciences,17th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418和Journal ofPharmaceutical Science,66,2(1977)中。

药学上可接受的酸加成盐可以由无机和有机酸制备。由衍生酸加成盐的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由衍生酸加成盐的有机酸包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、苯磺酸等。衍生酸加成盐的无机酸和有机酸尤其选自盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、高氯酸、氢溴酸、乙酸、苯甲酸、和对甲苯磺酸。

如本文所用的，“药学上可接受的载体”包括任何和全部的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌药剂、等渗和吸收延迟剂等。这样的介质和药剂用于药学活性物质在本领域是众所周知的。除非任何常规介质或药剂与活性成分不相容，其在治疗组合物中的应用是可预期的。补充的活性成分也可以并入组合物中。

该组合物优选被配制成单位剂型。术语“单位剂型”指的是适于用作给予人类受试者和其他哺乳动物的单一剂量的物理离散单位，每一单位含有计算出用以产生所需要的治疗有效的活性物质的预定的量以及相关的合适的药用赋形剂（如片剂、胶囊、安瓿）。通式（I）的化合物在广泛的剂量范围内是有效的并且通常给予有效药物量。优选地，对于口服给药，每个剂量单位包含10mg至2g的通式（I）化合物，更优选为10至700mg，而对于肠胃外给药，优选为10至700mg的通式（I）化合物，更优选约50至200mg。然而，应当明了，实际给予的通式（I）化合物的量将由医师根据有关的情况来确定，包括要治疗的病症，选择的给药途径，给予的实际化合物以及其相对活性，各个患者的年龄、体重、以及反应，患者症状的严重性等。

为了制备固体组合物如片剂，将主要的活性组分与药物赋形剂（或载体）进行混合以形成固体预配制组合物，其包含本发明的化合物的均匀混合物。当称这些预配制组合物为均匀的时候，它是指活性组分被均匀分散在整个组合物中，以致组合物可以容易地被细分成相同有效的单位剂型如片剂、丸剂以及胶囊剂。

本发明的片剂或丸剂可以被涂布或用其它方式被复合以提供一种具有延长作用优点的剂型，或保护片剂或丸剂免受胃中酸性条件的作用。例如，片剂或丸剂可以包括内剂量和外剂量成分，后者具有在前者之上的外皮的形式。可以用肠溶层来分隔两种成分，其中肠溶层用来阻止在胃中的崩解以及允许内成分完整进入十二指肠或被延迟释放。各种材料可以用于这样的肠溶层或涂层，上述材料包括许多高分子酸以及高分子酸与这样的材料如虫胶、十六烷醇、以及醋酸纤维素的混合物。

用于吸入法或吹入法的组合物包括在药学上可接受的含水溶剂或有机溶剂、或其混合物中的溶液和悬浮液，以及散剂。液体或固体组合物可以包含如上文所述的适宜的药用赋形剂。优选地，通过口服或鼻呼吸途径给予这些组合物以获得局部或全身效应。可以通过使用惰性气体来雾化在优选的药学可接受的溶剂中的组合物。可以直接从雾化装置吸入雾化溶液，或雾化装置可以连接于面罩帐状物、或间歇正压呼吸机。可以由以适当方式递送剂型的装置，优选口服或鼻途径，给予溶液、混悬剂、或散剂组合物。

本发明的化合物和药学上可接受的盐还包括溶剂化物或水合物的形式。一般来说，溶剂化物或水合物的形式与非溶剂化的或非水合的形式等同，并涵盖在本发明的范围内。本发明中的某些化合物有可能存在多晶体或无定形的形式。总的来说，所有的物理形式具有同等的用途，并且涵盖在本发明的范围内。

本发明还包括所述化合物的前药。前药是一个药理物质(药物)，由母体药物衍生而来。一旦进入体内，前药就被代谢转变成母体药物。前药可通过对母体药物的一个或多个官能团进行取代而制备，其取代基团在体内将被降解而释放出母体化合物来。前药的制备和使用可以在T.Higuchi and V. Stella,“Pro-drugs as Novel Delivery Systems,”Vol.14of the A.C.S.Symposium Series,和Bioreversible Carriers in Drug Design,ed.Edward B.Roche,AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press,1987中找到。

本发明还提供包括通式（I）化合物或其药学可接受的盐或其前药以及至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。本发明的药物组合物可口服，针剂注射，喷雾吸入，皮外用，直肠用，鼻腔用，阴道用，腹腔用，或通过植入储液囊或透皮贴剂等途径而使用。

在另一个方面，本发明的具有由通式（I）表示的化合物或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，或者包括由通式（I）表示的化合物的药物组合物在抑制Aurora激酶的药物中的应用，尤其是在抑制Aurora A激酶的药物中的应用。

在另一个方面，本发明提供用通式（I）化合物抑制Aurora激酶的方法。包括将有效量的上述的由通式（I）表示的化合物，或其药学上可以接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药，或者包括由通式（I）表示的化合物的药物组合物用于抑制Aurora激酶。

此处的“抑制Aurora激酶活性”术语意味着，Aurora激酶一旦与本发明的2,4,6-位取代的嘧啶衍生物接触，其活性相对于没有与该化合物接触的情况下有所下降。因此，本发明提供了一种用2,4,6-位取代的嘧啶衍生物与Aurora激酶接触来抑制Aurora激酶活性的方法。本发明的具有通式（I）的化合物主要用以抑制AuroraA激酶活性。本发明的具有通式（I）的化合物可用于抑制肿瘤细胞生长。

以下将结合具体的实施例进一步证明本发明的有益效果。

一、制备如下表1中化合物A-1至A-16、B-1、C-1以及C-2。

（1）化合物A-2的合成方法

化合物A-2的合成路线如下：

上述合成路线中中间体C的合成方法：称取2,4,6-三氯嘧啶A（1.83g,10mmol），3-氨基-5-甲基吡唑B（0.97g,10mmol）溶于100mL无水乙醇中，加入1.4mL三乙胺，0℃下搅拌反应12h。停止反应后，往反应溶液中加入150mL水，立即析出大量的白色固体，抽滤，并依次用50mL冰水和20mL冰甲醇洗涤，干燥后得到白色固体C（1.82g,75%）。不需柱色谱纯化，直接用于下一步反应。

所得到的白色固体C的核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：12.21(s,1H),10.63(s,1H),7.74and6.76(m,1H),6.38and5.78(m,1H),2.21(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：161.1,159.7,158.4,147.1,139.0,102.6,95.2,10.4ppm。由该数据可知，所得到的白色固体具有如上化合物C的结构。

上述合成路线中中间体D的合成方法：称取化合物C（244mg,1mmol）,对氨基苯甲酸甲酯（181mg,1.2mmol），对甲苯磺酸（152mg,0.8mmol），溶于10mL正丁醇中，130℃下回流反应12h，冷却至室温后加入2.5mL饱和NaHCO₃溶液，中和至pH=7-8，使用乙酸乙酯萃取（200mL×3），饱和食盐水（50mL×3）洗涤有机层，最后用无水Na₂SO₄干燥，旋干溶剂，柱色谱纯化（PE:EA=3:1-1:2）得到白色固体D（233mg,65%）。

所得到的白色固体D的核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：12.09(s,1H),9.92(s,2H),7.87(t,J=8.3Hz,4H),6.25(s,2H),3.80(s,3H),2.23(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：166.0,160.8,158.7,144.9,130.0,122.0,118.2,96.3,51.7,10.8ppm。由该数据可知，所得到的白色固体具有如上化合物D的结构。

上述合成路线中化合物A-2的合成方法：称取化合物D（179mg,0.5mmol），1-甲基哌嗪（0.55mL,5mmol），溶于4mL的1,4-二氧六环中，140℃下微波反应30min，旋干溶剂，使用反相硅胶柱纯化（H₂O:MeOH=80:20-40:60），得到白色固体A-2（180mg,85%）。

所得到的化合物A-2的核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：11.84(s,1H),9.12(s,1H),8.94(s,1H),7.91(s,2H),7.84(s,2H),6.19(s,1H),6.11(s,1H),3.80(s,3H),3.49(s,4H),2.39(s,4H),2.22(s,6H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：166.1,163.3,160.6,158.3,149.2,146.1,138.1,130.0,120.5,117.3,95.3,77.7,54.2,51.5,45.7,43.8,10.7ppm.所得到的白色固体A-2高分辨质谱数据为HRMS(ESI-TOF):m/z calcd.for C₂₁H₂₅N₈O₂[M-H]^-:421.2100;found:421.2103。由该数据可知，所得到的白色固体A-2具有如上结构。

（2）化合物A-1的合成方法

该化合物A-1是在化合物A-2的基础上进一步制备的，化合物A-1的合成路线如下：

上述合成路线中化合物A-1的合成方法：称取化合物A-2（100mg,0.24mmol），加入LiOH水溶液（2N,2mL），并加入3mL THF，回流反应36h，TLC监测反应完全。旋干THF，水相在搅拌下加入阳离子交换树脂（Amberite）调节pH=6，析出白色絮状沉淀。过滤，40℃真空干燥过夜，得到白色固体A-1（30mg,30%）。

所得到的化合物A-1的核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：9.05(s,1H),9.01(s,1H),7.59(s,4H),6.28(s,1H),5.80(s,2H),3.24(s,4H),2.30(s,3H),2.26(s,3H),2.28(s,4H)；¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：167.2,162.8,160.9,158.5,147.3,145.5,139.8,130.2,122.0,117.5,94.5,78.1,51.9,42.3,41.3,11.3ppm.所得到的白色固体A-1高分辨质谱数据为HRMS(ESI-TOF):m/z calcd.for C₂₀H₂₅N₈O₂[M+H]⁺:409.2100;found:409.2093。由上述数据可知，所得到的白色固体A-1具有如上结构。

（3）化合物A-11的合成方法

化合物A-11的合成路线如下：

上述合成路线中中间体C的合成方法：同化合物A-2中中间体C的合成方法；

上述合成路线中中间体E的合成方法：称取化合物C（244mg,1mmol），2-氯-4-氨基苯甲酸甲酯（223mg,1.2mmol），一水合对甲苯磺酸（152mg,0.8mmol），溶于10mL的1,4-二氧六环中，100℃下回流反应48h。停止反应冷却至室温，搅拌下加入2.5mL饱和NaHCO₃溶液，调节pH=7-8，使用乙酸乙酯萃取（100mL×3），合并有机相后使用饱和食盐水（50mL×2）洗涤，无水Na₂SO₄干燥，旋干溶剂，使用正相柱色谱纯化，梯度洗脱（PE:EA=3:1-1:2），得到白色固体E（59mg,15%）。

所得到的白色固体E的高分辨质谱数据为LC/Mass(ESI)[M+H]⁺:393.1。由该数据可知所得到的白色固体具有如上化合物E中结构。

上述合成路线中化合物A-11的合成方法：称取上述中间体E（59mg,0.15mmol），使用1mL注射器量取1-甲基哌嗪（0.165mL,1.5mmol），溶于2mL的1,4-二氧六环中，密闭下170℃微波反应30min，TLC监测反应完全，将溶剂旋干，使用反相柱色谱纯化（H₂O:MeOH=80:20-40:60）获得白色固体A-11（21mg,31%）。

所得到的白色固体A-11核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：9.34(s,1H),9.10(s,1H),8.16(d,J=1.7Hz,1H),7.81-7.78(d,J=8.7Hz,1H),7.70(d,J=8.5Hz,1H),6.05(s,1H),3.81(s,3H),3.50(s,4H),2.40(s,4H),2.22(s,3H),2.20(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：165.0,163.3,160.9,158.3,146.1,133.6,132.4,119.5,119.2,116.1,78.1,54.3,52.0,45.9,44.0,11.4ppm.所得到的白色固体A-11高分辨质谱数据为HRMS(ESI-TOF):m/z calcd forC₂₁H₂₆ClN₈O₂[M+H]⁺:457.1862;found:457.1874.由上述数据可知，所得到的白色固体A-11具有如上结构。

（4）化合物A-10的合成方法

化合物A-10的合成路线如下：

上述合成路线中中间体C合成方法：同化合物A-2中中间体C合成方法；

上述合成路线中中间体F的合成方法：称取化合物C（244mg,1.0mmol），4-氨基苯甲酰胺（180mg,1.2mmol），一水合对甲苯磺酸（152mg,0.8mmol），溶于10mL正丁醇中，125℃下回流反应18h。停止反应后搅拌加入NaHCO₃固体（156g,1.86mmol），调节pH=8，过滤，脱除溶剂，柱色谱纯化（CH₂Cl₂:MeOH=60:1-30:1），最终得到白色固体F（150mg,39%）。

所得到的白色固体F的核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：12.10(s,1H),9.91(s,1H),9.78(s,1H),8.27(d,J=12Hz,1H),7.83-7.78(m,4H),6.34(s,2H),2.80(d,J=4.3Hz,3H),2.25(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：166.4,160.8,158.8,147.7,142.7,128.1,127.6,127.2,125.5,118.1,95.8,26.1,10.7ppm。由该数据可知所得到的白色固体具有如上化合物F中结构。

上述合成路线中化合物A-10的合成方法：称取F（150mg,0.42mmol），与1-甲基哌嗪（0.46mL,4.2mmol）溶于4mL的1,4-二氧六环中，150℃下反应50min，旋干溶剂，反相柱色谱纯化（H₂O:MeOH=80:20-40:60），得到白色化合物A-10（70mg,28%）。

所得到的白色固体A-10的核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：11.87-11.86(br，1H),9.04(s,2H),8.22(d,J=4.3Hz,1H),7.81(d,J=7.8Hz,2H),7.75(d,J=8.4Hz,2H),6.03(s,1H),3.49(s,4H),2.77(d,J=4.2Hz,3H),2.38(s,4H),2.20(s,1H),2.19(s,1H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：166.5,163.3,160.5,158.5,144.1,127.6,125.8,117.2,77.4,54.8,54.2,45.7,43.8,26.1,11.0ppm.所得到的白色固体A-10高分辨质谱数据为HRMS(ESI-TOF):m/z calcd.for C₂₁H₂₈N₉O[M+H]⁺:422.2411;found:422.2390.由上述数据可知，所得到的白色固体具有表1中A-10中结构。

（4）化合物B-1的合成方法

化合物B-1的合成路线如下：

上述合成路线中中间体D的合成方法：同化合物A-2中中间体D的合成方法；

上述合成路线中化合物B-1的合成方法：称取D（72mg,0.2mmol），加入吗啡啉（0.22mL,2mmol），溶于2mL的1,4-二氧六环中，170℃微波反应40min，TLC监测反应完全，旋干溶剂，使用反相柱色谱纯化（H₂O:MeOH=80:20-40:60）获得白色固体B-1（38mg,45%）。

所得到的白色固体B-1的核磁数据为¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：11.85(s,1H),9.15(s,1H),8.98(s,1H),7.89-7.85(m,4H),6.13(s,2H),3.81(s,3H),3.70(s,4H),3.46(s,4H),2.20(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ：164.6,162.9,160.5,157.9,145.7,133.2,132.0,119.1,118.8,115.7,77.8,54.0,51.6,45.5,11.1ppm.所得到的白色固体B-1高分辨质谱数据为HRMS(ESI-TOF):m/z calcd.for C₂₀H₂₄N₇O₃[M+H]⁺:410.1935;found:410.1942.由上述数据可知，所得到的白色固体具有表1中B-1中结构。

（5）化合物C-1的合成方法

化合物C-1的合成路线如下：

上述合成路线中中间体C的合成方法：同化合物A-2中中间体C的合成方法；

上述合成路线中中间体G的合成方法：称取化合物C（244mg,1.0mmol），4-(氨甲基)-苯甲酸甲酯（198mg,1.2mmol），N,N-二异丙基乙胺（174μL，1mmol），溶于10mL的无水正丁醇中，回流反应36h停止反应，冷却至室温后加入2.5mL饱和NaHCO₃溶液调节pH=7-8，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机层，无水Na₂SO₄干燥，柱色谱纯化（CH₂Cl₁₂:MeOH=100:1-60:1）得到中间体G（242mg,65%）。所得到的白色固体G的核磁数据为¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：11.90(s,1H),9.61(s,1H),7.92(d,J=8.0Hz,2H),7.45(d,J=8.0Hz,2H),6.00-5.77(m,2H),4.54(s,2H),3.83(s,3H),2.12(s,3H)。

上述合成路线中化合物C-1的合成方法：将中间体G与吗啡啉（0.72mL,6.5mmol）在1,4-二氧六环中150℃下微波反应50min，使用柱色谱纯化（CH₂Cl₂:MeOH=60:1-20:1）得到白色固体C-1（80mg,29%）。

所得到的白色固体C-1的核磁数据为¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：11.71(s,1H),8.74(s,1H),7.90(d,J=13.1Hz,2H),7.45(d,J=13.1Hz,2H),6.88(s,1H),5.81(s,2H),4.52(d,J=5.8Hz,2H),3.82(s,3H),3.60(s,4H),3.34(s,4H),2.12(s,3H)ppm。所得到的白色固体C-1高分辨质谱数据为HRMS(ESI-TOF):m/z calcd.for C₂₁H₂₆N₇O₃,[M+H]⁺:424.2092;found:424.2096.由上述数据可知，所得到的白色固体C-1具有如上结构。

在本发明中同时还制备了如下表1中其它化合物，这些化合物的合成方法参照上述方法。这些化合物的表征数据，包括核磁数据和高分辨质谱数据如表1所示。

表1

二、本发明所合成的化合物对AuroraA激酶抑制实验

AuroraA激酶抑制实验（K-LISATMAuroraActivity Kit，Calbiochem）主要实验方法：第一步，在96孔板中先后加入10μL反应溶液、10μL Aurora A激酶、10μL底物、10μL待测化合物溶液、10μLATP溶液，混匀后30℃孵育30分钟；第二步，在每个孔板中加入10μL激酶反应终止溶液；第三步，每个孔板中加入100μL磷酸-组蛋白H3抗体，在25℃孵育60分钟；第四步，每个孔板中加入100μLHRP-抗体螯合剂溶液，在25℃孵育60分钟；第五步，每个孔板中加入100μLTMB底物（显色剂），在25℃孵育10分钟：第六步，每个孔板中加入100μL ELISA终止溶液，用酶联免疫检测仪记录450nm的读数。以不加药物的溶剂空白作为阴性对照，以VX-680为阳性对照。

比照关系：加入VX-680后，AuroraA激酶磷酸化底物的能力视为1，加入化合物后，激酶磷酸化底物的能力以VX-680为参比，小于1时表明化合物抑制活性比VX-680好，反之比VX-680差。

上述表1中各化合物都具有Aurora A激酶抑制作用，在图1中仅提供了化合物A-2至A-11以及B-1、C-1、C-2与VX-680的Aurora A激酶抑制效果的对比。如图1所示，本发明所合成的表1中化合物A-2至A-11以及B-1、C-1、C-2都具有Aurora A激酶抑制作用。其中化合物A-2、A-3、A-4、A-5、A-11的抑制效果明显比VX-680好；化合物A-6、A-7、A-8、A-9抑制效果与VX-680相当；化合物A-10、B-1、C-1、C-2比VX-680稍差。

三、本发明所合成的化合物相对于实体瘤细胞CNE-1的细胞周期阻滞实验

将所合成的化合物在实体瘤细胞CNE-1中进行了细胞周期阻滞实验。

细胞周期阻滞实验方法：不同浓度的药物处理细胞，24小时后收集细胞，70%乙醇固定后用50mg/mL PI染色，采用流式细胞仪进行细胞周期检测。每个化合物3个浓度，分别为0.01μM、0.1μM、1.0μM，通过细胞G2/M期的阻滞率判断化合物抑制活性，G2/M阻滞>90%被认为有效。

上述表1中各化合物相对于实体瘤细胞CNE-1细胞周期都具有阻滞作用。图2a至图2g为本发明所合成的化合物A-2至A-5、A-7、A-9相对于实体瘤细胞CNE-1的细胞周期阻滞的结果，图中的C代表细胞生长周期的G0/G1期，D代表S期，E代表G2/M期，F代表多倍体期，对应的百分数表示处于该时期的细胞数目百分比。CTR为阴性对照实验。

如图2a至图2g所示，化合物A-4、A-5、A-7的相对于实体瘤细胞CNE-1的细胞周期阻滞效果良好，在1.0μM时G2/M阻滞都达到90%以上，分别为92.5%、90.6%、90.5%；化合物A-2、A-9的效果略低，分别为84.3%、89.0%；化合物A-3为49.0%。化合物A-3、A-4、A-5的结果表明，嘧啶2-位侧链苯环上取代基的位置对化合物抑制活性有重要影响，3-位和4-位取代有利于抑制活性；化合物A-4、A-7结果表明苯环3-位上有甲氧基或氯原子取代，对抑制活性都有利。

四、本发明所合成的化合物相对于白血病细胞HL-60的抑制实验

细胞株HL-60培养方法：将细胞株HL-60培养在含10%优级胎牛血清、100U·mL^-1青霉素、100U·mL^-1链霉素、pH7.4的RPMI1640培养液中，置37°C，5%CO₂培养箱内。细胞培养2d后换液，取对数生长期的细胞用于试验。

细胞增殖活性测定方法：细胞于10⁴/100mL的密度培养在96孔板中，采用不同浓度的药物处理24小时后加入10mL WST-8（Dojindo），37°C培养4小时后用酶标仪450nm波长下测定吸光度（OD）。根据下式计算药物对细胞生长的抑制率：

抑制率=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%

上述表1中各化合物相对于白血病细胞HL-60都具有抑制作用。在图3a至3h中给出了本发明所合成的化合物A-2至A-5、A-7、A-9、B-1、C-1相对于白血病细胞HL-60的抑制结果。该抑制实验研究可发现本发明所合成的化合物均能不同程度地抑制HL-60的生长。其中A-5的抑制活性最强，IC₅₀为5.4μM，A-7和A-9的抑制效果也不错，IC₅₀分别为6.7μM和5.8μM。

五、本发明所合成的化合物对其它肿瘤细胞株的活性实验

肿瘤细胞株包括：人胃癌细胞BGC823，淋巴瘤细胞U973，白血病细胞K562，急性淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4，人非小细胞肺癌细胞HCC827，肺腺癌上皮细胞A549。

实验方法：采用Denizot和Lang的MTT（四甲基偶氮唑盐）法，取对数生长期肿瘤细胞株接追踪在96孔培养板上进行培养。待贴壁后加入受试化合物，培养72h，加入MTT。4h后，去除培养液，加入酸化异丙醇，振荡后在酶标仪570nm波长下测定吸光度（OD）。根据下式计算抑制率：

抑制率=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%

实验以曲古菌素A（TSA）和紫杉醇（TAXOL）为阳性对照，化合物A-4、A-6及对照物的IC₅₀值如下表所示。

表2

由表2中数据可知，A-4、A-6对所测肿瘤细胞均具有显著抑制活性。其中化合物A-4在白血病细胞K562中具有与TSA相当的抑制活性，其IC₅₀为0.5095μM。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种由以下通式(I)表示的化合物，或其药学上可以接受的盐或互变异构体：

其特征在于，所述化合物为下列结构式中的任一种：

2.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1所述的由通式(I)表示的化合物，或其药学上可以接受的盐或互变异构体。

3.一种权利要求1所述的由通式(I)表示的化合物，或其药学上可以接受的盐或互变异构体，或者权利要求2中所述的药物组合物在制备抑制Aurora激酶的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，Aurora激酶为Aurora A激酶。