CN102988346A

CN102988346A - Aphanamixoid A在抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用

Info

Publication number: CN102988346A
Application number: CN2012104686073A
Authority: CN
Inventors: 何晓涛
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-11-19
Filing date: 2012-11-19
Publication date: 2013-03-27

Abstract

本发明公开了AphanamixoidA在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用。经实验证明，AphanamixoidA对呼吸道合胞病毒RSV有显著的抑制作用，本发明为AphanamixoidA临床用于治疗呼吸道合胞病毒RSV感染性疾病提供实验依据，对研制抗呼吸道合胞病毒RSV的药物提供了一定的指导意义，具有重要的参考价值。

Description

Aphanamixoid A在抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用

技术领域

本发明涉及Aphanamixoid A在制备抗呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）的药物中的应用。

背景技术

RSV主要引起呼吸系统感染，在婴幼儿、老年以及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。

本发明涉及的化合物Aphanamixoid A是一个2012年发表（Cai, J. Y. et al., 2012. Aphanamixoid A, a Potent Defensive Limonoid, with a New Carbon Skeleton from Aphanamixis polystachya. Organic Letters 14 (10), 2524–2527.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及昆虫拒食活性（Cai, J. Y. et al., 2012. Aphanamixoid A, a Potent Defensive Limonoid, with a New Carbon Skeleton from Aphanamixis polystachya. Organic Letters 14 (10), 2524–2527.），对于本发明涉及的Aphanamixoid A在制备治疗呼吸道合胞病毒（RSV）药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于呼吸道合胞病毒（RSV）抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于呼吸道合胞病毒（RSV）的防治显然具有显著的进步。

发明内容

本发明提供了Aphanamixoid A在制药中的新用途：

Aphanamixoid A在制备抗RSV的药物中的应用。

所述化合物Aphanamixoid A结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）

经实验证明，Aphanamixoid A对RSV有显著的抑制作用：抑制RSV在HEK293细胞出现CPE效应（Cytopathic Effect，CPE），IC₅₀为2^-10.32，TI为1168.14。

本发明涉及的Aphanamixoid A在制备治疗呼吸道合胞病毒（RSV）药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于呼吸道合胞病毒（RSV）抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于呼吸道合胞病毒（RSV）的防治显然具有显著的进步。

具体实施方式

本发明所涉及化合物Aphanamixoid A的制备方法参见文献（Cai, J. Y. et al., 2012. Aphanamixoid A, a Potent Defensive Limonoid, with a New Carbon Skeleton from Aphanamixis polystachya. Organic Letters 14 (10), 2524–2527.）。

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：本发明所涉及化合物Aphanamixoid A片剂的制备：

取20克化合物Aphanamixoid A，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

实施例2：本发明所涉及化合物Aphanamixoid A胶囊剂的制备：

取20克化合物Aphanamixoid A，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

实验例：化合物Aphanamixoid A对呼吸道合胞病毒（RSV）的作用研究

（1）化合物Aphanamixoid A的配置：将化合物Aphanamixoid A溶于细胞维持液（含2%新生牛血清的MEM，GIBICO公司产品）中备用。

（2）细胞株与病毒株：

人胚肾细胞（HEK293，RSV病毒敏感细胞）购自美国Clontech公司；呼吸道合胞病毒（RSV）Long株引自中国CDC病毒病研究所。

（3）细胞毒性测定：

参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24（1）：25~27）的方法，将样品以2倍比做系列稀释（2^0~-5），然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀释度纵向重复3孔（A、B、C行），平行设微孔板D的1~6孔为细胞对照，7~12孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540 nm波长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度（TD₅₀）。

（4）抑毒试验：

参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24（1）：25~27）的方法，将样品按稀释顺序（2^-2~-13）横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100uL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID₅₀的病毒100uL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的1~12作为细胞对照。37℃、5%CO₂培养，每日观察CPE，连续观察4d。病毒对照出现90%以上CPE时，加1%中性红染色，用酶标仪在波长540 nm波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用Reed-Muench方法计算半数抑毒浓度（IC₅₀），最终将TD ₅₀和IC₅₀ 相比获得抑毒指数（TI）。

（5）结果：

①样品TD₅₀的测定：对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。化合物Aphanamixoid A对HEK293的TD₅₀为2^-0.13。

②抑毒实验：对照组细胞贴壁致密、形态良好。镜下观察发现，RSV病毒对照组在第2d出现90%以上的CPE，RSV在HEK293 CPE以折光性增强、变圆、脱落、破碎为主要特征。

而抑毒试验各组细胞，按照样品稀释梯度，梯度规律出现CPE：

RSV-HEK293试验组细胞在第9稀释度之前，细胞完全被保护，之后出现CPE，CPE随样品浓度减少逐渐加重。

将上述实验板用1%中性红染色、用酶标仪测450 nm的A值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值与细胞对照组A值相比获得IC₅₀，TD ₅₀与IC₅₀相比获得TI。抑制RSV在HEK293细胞发生CPE，IC₅₀为2^-10.32，TI为1168.14。

结论：Aphanamixoid A具有显著的抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV的作用，可以用来制备抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV药物。

Claims

1.Aphanamixoid A在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用，所述化合物Aphanamixoid A结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）。