CN102976962B

CN102976962B - L-鸟氨酸阿司匹林复盐及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102976962B
Application number: CN201210472148.6A
Authority: CN
Inventors: 万红贵; 黄志旭; 熊洋
Original assignee: Nanjing Tech University
Current assignee: Nanjing Tech University
Priority date: 2012-11-20
Filing date: 2012-11-20
Publication date: 2015-02-04
Anticipated expiration: 2032-11-20
Also published as: CN102976962A

Abstract

本发明属于医药领域，公开了L-鸟氨酸阿司匹林复盐及其制备方法和应用。该L-鸟氨酸阿司匹林是通过以下方法制备得到的：配制游离L-鸟氨酸的水溶液，再加入阿司匹林进行反应，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液，再将其以结晶的形式析出；或者将阿司匹林的乙醇溶液与游离L-鸟氨酸的乙醇溶液混合，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的沉淀，再将沉淀溶解，进行重结晶，即得。得到的晶体中L-鸟氨酸和阿司匹林的摩尔比为1:1。该制备方法简单易行、成本低、得率高、提高了L-鸟氨酸阿司匹林的质量。经动物实验研究证实，L-鸟氨酸阿司匹林具有降脂保肝功能，可用于制备降脂保肝药物。

Description

L-鸟氨酸阿司匹林复盐及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及L-鸟氨酸阿司匹林复盐及其制备方法和应用。

背景技术

高脂血症是由于人体脂质代谢紊乱，血浆内脂质浓度超过正常范围的一种病症，因脂质多与血浆中蛋白结合，故又称高脂蛋白血症。主要表现为血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平过高或高密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平过低。血浆中的胆固醇、甘油三酯是动脉粥样硬化斑块中的主要成分，高脂血症不但直接参与和促进动脉硬化的形成，而且通过改变血液流变性而促进微血栓的形成，引起微循环障碍，导致了心脑血管病的发生和发展，是心血管疾病的重要危险因素之一。因此，调节血脂和改善血液流变性对心血管病的防治具有重要意义。随着人们生活水平的提高，高脂血症的发病率逐年上升，已成为当前研究的热点。近年来，医药学的不断发展和研究，大规模临床实验强化降脂疗效和安全性结果的公布，他汀类药物成为降低血脂有效的药物，以作为临床心血管病防治的基础用药。然而，任何一种药物都会存在潜在的毒性和不良反应，并会随着剂量的增加而加大，而且降脂药物经过肝脏并不能减少肝脏的脂质沉积，有时反而会加重肝损害。因此，积极寻找一种有效降脂保肝的药物具有重大意义。

L-鸟氨酸在体内的主要作用是参与尿素循环，能迅速激活肝细胞内的尿素循环，将机体在病态下产生的有害的二氧化碳及氨通过尿素循环排出体外，使得肝脏内酶代谢逐步恢复，从而使得肝脏的活力得到恢复，起到保肝、护肝的作用。有研究资料证明，L-鸟氨酸能促进下丘脑分泌生长激素，而生长激素能够促进糖与脂肪的代谢以及蛋白质的合成，因此，L-鸟氨酸能够促进脂质代谢和激活尿素循环，为机体提供更多能量并降低血氨。而阿司匹林能使PG合成酶(环加氧酶)活性中心的丝氨酸乙酸化而失活，降低ADP、胶原和人凝血酶诱导的血小板聚集率，减少血小板中TAX₂(血栓素)的生成而抗血小板聚集及抗血栓形成，临床用于防治血栓形成及血栓栓塞性疾病。目前国内外未见L-鸟氨酸阿司匹林制备方法的报道，亦没有L-鸟氨酸阿司匹林用于制备降脂保肝药的报道。

发明内容

本发明的目的是针对上述技术问题，提供一种L-鸟氨酸阿司匹林复盐。

本发明的另一个目的是提供上述L-鸟氨酸阿司匹林复盐的制备方法。

本发明还有一个目的是提供上述L-鸟氨酸阿司匹林复盐在制备降脂保肝药中的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种L-鸟氨酸阿司匹林复盐，该复盐是通过下列方法制备得到的：

方法一：配制游离L-鸟氨酸的水溶液，再向其中加入阿司匹林进行反应，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液，再将其以结晶的形式析出；或者

方法二：将阿司匹林的乙醇溶液与游离L-鸟氨酸的乙醇溶液混合，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的沉淀，然后将沉淀溶解得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的水溶液，再进行重结晶，即得。

所述的L-鸟氨酸阿司匹林复盐，其晶体中L-鸟氨酸与阿司匹林的摩尔比为1:1。

所述的L-鸟氨酸阿司匹林复盐，该复盐中水杨酸含量在0.2Wt%以下。

所述L-鸟氨酸阿司匹林复盐的制备方法，该方法包括下列步骤：

方法一：配制游离L-鸟氨酸的水溶液，再向其中加入阿司匹林，使两者充分反应，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液，再将其以结晶的形式析出；或者

所述的制备方法，其中游离L-鸟氨酸是通过下列方法得到的：从发酵液中提取、化学合成、酶反应、或者将L-鸟氨酸盐通过脱盐得到。

所述的制备方法，其中反应物中L-鸟氨酸与阿司匹林的摩尔比为0.5~2：1，反应温度为10℃-25℃。

上述的制备方法的方法一中阿司匹林的投料方式为：阿司匹林的晶体或粉末或溶液投入游离L-鸟氨酸的水溶液。

所述的制备方法，其中结晶方法为：向L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液中添加溶析剂，或者降低溶液的温度，或者蒸发溶液的溶剂，或者向溶液中添加晶种使之析出结晶，或者这些方法的组合。

所述的制备方法，其中结晶方法中L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液为其水溶液，其质量浓度为30%~60%。

所述的制备方法，结晶过程中温度控制在-10℃~25℃，优选0~20℃。

所述的制备方法，其中溶析剂为亲水性有机溶剂，优选甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、丙酮、乙腈中的一种或多种；溶析剂的加入量为L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液体积的1~8倍，优选2~5倍。

所述的制备方法，其中溶析剂的加入速率为0.1mL.min^-1~1.5mL.min^-1，优选0.2mL.min^-1~0.8mL.min^-1，进一步优选为0.4mL.min^-1~0.6mL.min^-1。

所述制备方法，其中晶种加入时期为：流加的亲水性有机溶剂的体积为L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液体积的0.1~2.5倍时，优选为0.5~1.5倍时；晶种加入量为：相对反应液中含有的L-鸟氨酸阿司匹林盐的量的0.1~5wt%，优选为0.5~2.5wt%。

所述的L-鸟氨酸阿司匹林复盐在制备降脂保肝药中的应用。

进一步，本发明的详细技术方案为：

L-鸟氨酸阿司匹林为L-鸟氨酸和阿司匹林的复盐，化学结构式如下所示，外观为白色结晶性粉末。

1、L-鸟氨酸阿司匹林复合盐的制备方法。

第一步：制备游离L-鸟氨酸。

获得游离L-鸟氨酸的方法很多。可以是将L-鸟氨酸盐（包括盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐等，以及其它各种可能的形式的盐）通过脱盐得到。也可以是从发酵液或其它反应液（如化学合成及酶反应液）中得到，如将专利文献CN101955901B公开的发酵液经去除菌体、脱色、离子交换等工艺处理后得到。又如采用专利文献CN1661026报道的以L-精氨酸为原料的固定化细胞酶法制备L-鸟氨酸。

在某些实施方案中，可以将L-鸟氨酸盐酸盐的水溶液通过JK006强酸性阳离子交换树脂，L-鸟氨酸被吸附，再用一定量的水洗去树脂孔隙中的氯离子，最后用氨水洗脱，得到含有游离L-鸟氨酸的水溶液；或用330弱碱性环氧系阴离子交换树脂处理L-鸟氨酸盐酸盐的水溶液，氯离子被吸附，过滤除去其中的离子交换树脂，浓缩除氨，得到游离L-鸟氨酸的水溶液。

第二步：游离L-鸟氨酸和阿司匹林的反应。

阿司匹林在水中的稳定性不好，易水解生成水杨酸，而且酸碱都对水解反应都有一定的催化作用。因此二者的反应体系的选择十分重要，否则会导致产品中水杨酸含量超标。反应方程式：

可以采用以下两种方法实现这一反应，例如：

（1）先将游离L-鸟氨酸的水溶液浓缩到质量浓度为36%，再向其中投入24g阿司匹林（这里阿司匹林的存在形式可以为晶体、粉末、溶液等），使两者充分反应，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液；

（2）将阿司匹林的乙醇溶液与游离L-鸟氨酸的乙醇溶液混合，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的沉淀。然后将沉淀溶解得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液，重结晶。

两种方法中，反应时底物（L-鸟氨酸与阿司匹林）摩尔比为0.5~2:1，反应温度控制在10℃~25℃。

第三步：将L-鸟氨酸阿司匹林盐从溶液中结晶析出。

结晶采用的方法可以是，向上述L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液中添加溶析剂，或者降低上述溶液的温度，或者蒸发上述溶液的溶剂，或者向上述溶液中添加晶种，使之析出结晶。或者也可以通过组合实施这些方法使结晶析出。在一些实施方案中，优选为向上述L-鸟氨酸阿司匹林水溶液中添加亲水性有机溶剂作为溶析剂，使晶体析出。

在一些实施方案中，在向L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液中添加溶析剂使晶体析出的时候，优选为将该溶液质量浓度调整到30%~60%。

溶析剂可以是亲水性的有机溶剂，包括但不限于，甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、丙酮、乙腈等，或这些物质的组合。

溶析剂的用量可以为L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液的体积的1~8倍，优选为2~5倍。溶析剂的加入方式可以为在0~25℃下，向调节到上述浓度的L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液中缓缓流加。溶析剂的流加速度为：对于20mL的溶液，溶析剂流加速率可以控制在0.1mL.min^-1~1.5mL.min^-1，优选0.2mL.min^-1~0.8mL.min^-1，进一步优选为0.4mL.min^-1~0.6mL.min^-1。

晶种加入方式：在溶析剂体积为L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液体积的0.1~2.5倍时，优选为0.5~1.5倍时，添加一定量的晶种。

晶种添加量：相对该反应液中含有的L-鸟氨酸阿司匹林盐的量的0.1~5.0wt%，优选为0.5~2.5wt%。

L-鸟氨酸阿司匹林进入人体后水解成L-鸟氨酸和乙酰水杨酸，具有降血脂的作用，可用于制备降血脂药物。

本发明的有益效果：

本发明的制备方法具有简单可行、生产成本低、产品质量稳定等优点，L-鸟氨酸阿司匹林可用于制备降血脂药物，为降血脂药研发提供了新的选择。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步的阐述。

实施例1：制备L-鸟氨酸阿司匹林盐。

第一步：制备游离L-鸟氨酸；

例1：

将30g的L-鸟氨酸盐酸盐溶解在1000mL水中，调节pH到2.0，流过装填了JK006强酸性阳离子交换树脂的柱子。用300mL水冲洗柱子，洗去其中的氯离子等杂质，再用400mL的2mol/L的氨水洗脱L-鸟氨酸，浓缩除氨，得到游离的L-鸟氨酸水溶液。

例2：

将30g的L-鸟氨酸硫酸盐溶解在1000mL水中，调节pH到2.0，流过装填了JK006强酸性阳离子交换树脂的柱子。用300mL水冲洗柱子，洗去其中的硫酸根等杂质，再用400mL的2mol/L的氨水洗脱L-鸟氨酸，浓缩除氨，得到游离的L-鸟氨酸水溶液。

例3：

采用阴离子交换树脂静态吸附L-鸟氨酸盐酸盐水溶液中的氯离子，具体操作如下：将30g的L-鸟氨酸盐酸盐溶解在1000mL水中，加入330弱碱性环氧系阴离子交换树脂，室温下搅拌1.5h，用硝酸银检测其中氯离子含量，过滤除去树脂，得到游离的L-鸟氨酸水溶液。

例4：

依照专利文献CN101955901B公开的方法，得到含有L-鸟氨酸的发酵液，发酵液经去除菌体、色素处理后，得到含游离L-鸟氨酸的水溶液。

第二步：游离L-鸟氨酸与阿司匹林进行反应，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液，并调整其浓度。

例1：

将第一步得到的游离L-鸟氨酸水溶液浓缩到质量浓度为36%，20℃水浴下，搅拌，并向其中投加24g阿司匹林，得到的L-鸟氨酸阿司匹林盐的质量浓度约为55%。

例2：

将第一步得到的游离的L-鸟氨酸水溶液浓缩，再用25mL乙醇溶解。水浴控制温度为20℃，搅拌，将游离L-鸟氨酸的乙醇溶液流加到120mL浓度为200gL的阿司匹林的乙醇溶液中，过滤，干燥，得到L-鸟氨酸阿司匹林盐的白色固体。将上述白色固体（41.6g）溶解在适量的水中，使其质量浓度为55%。

第三步：L-鸟氨酸阿司匹林盐的结晶

结晶可以采用多种方法，可以采用向L-鸟氨酸阿司匹林盐的溶液中添加溶析剂，或者降低溶液的温度，或者蒸发溶液的溶剂，或者向溶液中添加晶种使之析出结晶，或者这些方法的组合。结晶过程中温度控制在-10℃~25℃，溶析剂的加入量控制在L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液体积的1~8倍，溶析剂的加入速率控制在0.1mL.min^-1~1.5mL.min^-1，晶种加入时期为：流加的亲水性有机溶剂的体积为L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液体积的0.1~2.5倍时，晶种加入量为：相对反应液中含有的L-鸟氨酸阿司匹林盐的量的0.1~5wt%。

例1：

在25℃及搅拌的条件下，向第二步例1得到的L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液中以1.5mL/min的速度流加无水乙醇，约30min后加入4.5g晶种，搅拌析晶30min，继续流加溶析剂，约100min后停止流加。过滤、干燥，得到白色针状的L-鸟氨酸阿司匹林盐的晶体，收率为80.5%，产品纯度为97.6%。

例2：

在10℃及搅拌的条件下，向第二步例1得到的L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液中以1.0mL/min的速度流加无水乙醇，约45min后加入4.5g晶种，搅拌析晶30min，继续流加溶析剂，约150min后停止流加。过滤、干燥，得到白色针状的L-鸟氨酸阿司匹林盐的晶体，收率为85.5%，产品纯度为96.9%。

例3：

在25℃及搅拌的条件下，向第二步例1得到的L-鸟氨酸阿司匹林盐溶液中以1.5mL/min的速度流加无水乙醇，约30min后加入9.0g晶种，搅拌析晶30min，继续流加溶析剂，约100min后停止流加。过滤、干燥，得到白色针状的L-鸟氨酸阿司匹林盐的晶体收率为81.2%，产品纯度为97.8%。

实施例2、L-鸟氨酸阿司匹林复盐的调血脂保肝作用研究

2.1实验材料：健康Wistar大白鼠60只，体重（269.2±50.9）g雌雄兼用。

饲料：普通饲料；高脂饲料配方为：基础饲料72.7%、胆固醇2%、蛋黄粉5%、猪油10%、丙硫氧嘧啶0.2%、蔗糖10%、胆酸钠0.1%。（质量百分比）

2.2动物分组与给药：购入的实验大鼠在实验室适应饲养1周，按称重顺序编原始号，查随机数字表随机分成空白对照组、模型对照组、L-鸟氨酸阿司匹林2mg/kg低剂量组，4mg/kg中剂量组，8mg/kg高剂量组，阳性药物（辛伐他汀1.5mg/kg）对照组。每组10只。从实验之日起空白对照组、模型对照组灌胃蒸馏水，给药组灌胃相应药物，1次/d，容积为10ml/kg，每周称1次体重，根据体重调整给药量。空白对照组喂饲普通饲料，其余各组喂饲高脂饲料，试验期间自由摄食、自由饮水，连续造模并预防给药8周。

2.3观测指标：末次给药后禁食12h，不禁水。3%戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉取血，离心分离血清，测血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、

谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）值。

2.4结果

a)L-鸟氨酸阿司匹林对大鼠血脂水平的影响

由表1可见，与正常组相比，模型组大鼠血清中TC、TG、LDL-C的水平明显升高（P＜0.05），呈现典型的脂质代谢紊乱，表明实验性高血脂模型复制成功。与模型组相比，治疗组能明显降低血清TC、TG、LDL-C含量（P＜0.05），并能显著升高血清HDL-C含量（P＜0.01）且呈现剂量依赖性。

表1各组大鼠血脂变化（n=10）

b)L-鸟氨酸阿司匹林对大鼠肝功能的影响

血清中ALT和AST可以反应肝脏功能。高脂饲料组ALT和AST明显高于基础饲料组(P<0.05)，说明肝脏有一定损害。而各给药组有明显降低，且与正常对照组相比，差异有非常显著性意义（P<0.01）；L-鸟氨酸阿司匹林组能降低脂肪肝大鼠的ALT及AST，与模型组对比，差异有极显著性意义（P<0.01），其结果见表2。

表2各组大鼠肝功能变化情况（n=10）

c)L-鸟氨酸阿司匹林对模型大鼠肝组织SOD、MDA含量的影响

与空白组比较，模型组大鼠血清SOD活性显著降低（P<0.01）、MDA含量明显升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组肝损伤模型大鼠血清SOD活性均有不同程度的升高，以L-鸟氨酸阿司匹林高剂量组最为显著（P<0.05），MDA含量明显降低（P<0.01），结果表明，L-鸟氨酸阿司匹林对高血脂大鼠有较好的抗脂质过氧化作用。其结果见表3。

表3各组血清SOD活性、MDA含量比较（n=10）

高脂血症时，体内肝细胞中的自由基代谢平衡就会失调，对自由基的防御能力也会下降，过多的自由基可与细胞膜中的类脂质发生过氧化作用，导致细胞膜的破坏，引起细胞死亡；同时脂质过氧化物的分解产物（MDA）还可与蛋白质和磷脂等物质结合，沉积于组织细胞，损伤细胞膜，引起细胞功能紊乱，最后导致细胞无法维持正常代谢而死亡。上述试验结果表明，模型组大鼠血清中的SOD活性显著低于正常组，而MDA含量则明显高于正常组，说明血脂的升高与脂质过氧化呈正相关，高脂血症大鼠灌服L-鸟氨酸阿司匹林后，其TC、TG、LDL-C含量明显降低，而HDL-C含量升高；血清中MDA含量明显降低，SOD活性明显升高；对高脂饲料造成的血清中ALT和AST的增高有抑制作用。说明L-鸟氨酸阿司匹林可以调节和改善自由基代谢平衡，促进了脂肪酸代谢，有一定的调脂护肝作用，并且其调血脂作用可能与其体内抗氧化作用有一定的关系，但其具体调节血脂机理有待进一步研究。

另外，L-鸟氨酸阿司匹林复盐的水溶性很好，其水溶液的pH为中性偏酸，可用于肌注和静注，避免了口服给药对胃肠道的刺激，可以在一定程度上降低肝毒性的发生率，尤其对肝功能受损危险度较高的高血脂患者。

Claims

1.L-鸟氨酸阿司匹林复盐在制备调血脂保肝药中的应用。