CN102875466A

CN102875466A - 异喹啉酮衍生物,其制备方法及其医药用途

Info

Publication number: CN102875466A
Application number: CN2012101193638A
Authority: CN
Inventors: 向华; 刘飞; 王超; 严明; 肖红; 尤启冬; 张陆勇; 廖清江
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2012-04-23
Filing date: 2012-04-23
Publication date: 2013-01-16

Abstract

本发明涉及药物化学和有机化学领域，具体涉及一类异喹啉酮衍生物。这些化合物可以通过抑制雌激素受体α亚型(ERα)和血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR-2)双靶点来治疗多种与绝经后综合症相关的医学适应症，以及子宫纤维病变和动脉平滑肌细胞增生，特别是适用于治疗ER-(+)型乳腺癌。同时，该类化合物对肿瘤转移也具有明显抑制作用。

Description

异喹啉酮衍生物,其制备方法及其医药用途

技术领域

背景技术

“绝经后综合症”是指妇女正处于或已完成生理性变态即绝经时，因雌激素分泌量下降引起的多种病理情况。其主要表现在：骨质疏松、雌激素依赖性癌症(乳腺癌、子宫内膜癌和卵巢癌)、心血管疾病以及老年痴呆等。

针对绝经后雌激素水平的下降，过去采取的雌激素替代疗法(estrogen replacement therapy，ERT)，之后发展了雌、孕激素联合使用的性激素替代疗法。如果长期使用仍可能增加乳腺癌和子宫内膜癌的发生率，这些不良反应限制了ERT和HRT在临床上的长期应用。因此，人们力图寻找一种对骨骼和心血管系统具有雌激素样作用，而对子宫和乳腺表现出雌激素拮抗作用的药物。

乳腺癌是中老年妇女的另一个常见病，目前主要的化学疗法是使用选择性雌激素受体调节剂Selective Estrogen Receptor Modulators， (SERMs)，选择性雌激素受体调节剂是为了寻求更安全有效的治疗药物，在激素替代疗法(Hormone Replacement Therapy，HRT)基础上于上世纪90年代研究发展起来的一个新的药物领域。其中他莫昔芬(Tamoxifen)占主要地位。但他莫昔芬也有很大的缺点，它在子宫中表现出雌激素激动剂的性质，对子宫的癌细胞具有刺激作用。

按照经典的ER作用机制，SERMs与ER结合并形成二聚体，在细胞核内与靶基因上雌激素反应元件(ERE)结合，并募集共激活因子或共抑制因子，进而启动靶基因转录，在不同的组织中表现为ER激动剂或拮抗剂。但近年来的研究证实，除核受体经典作用模式外，SERMs还能与细胞膜上的ER或G蛋白偶联雌激素受体(GPER/GPR30)结合，通过启动丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、酪氨酸激酶的信号传导机制，或通过调节膜离子通道快速发挥生理效应。近期的实验研究成果发现ERK2不仅具有信号转导功能，还能直接参与ER对靶基因的转录调控。

MAPKs主要包括三条经典亚途径：ERK、p38和c-Jun。ERK通路是多种细胞生长因子(Growth factors)如血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、表皮生长因子受体(EGFR)、血小板源性生长因子受体(PDGFR)等酪氨酸激酶(RTKs)超家族成员下游的主要激酶链

血管内皮细胞生长因子(VEGF)作为刺激因子与VEGFR结合能激活ERK通路，促进内皮细胞分裂增殖，诱导肿瘤血管生成。VEGFR抑制剂就是一类能通过抑制MAPK信号转导通路来抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞凋亡的药物。

近期有文献报道Tamoxifen与VEGFR-2激酶抑制剂Brivanib联合用药比各自单独使用治疗ER-(+)乳腺癌的效果好，能降低子宫内膜增生副作用、减少耐药性。

具有ERα和VEGFR-2双靶点作用的化合物，通过调控ERα转录活性和抑制肿瘤新生血管形成，能抗ER-(+)乳腺癌细胞增殖，避免子宫内膜增生副作用或抑制ER-(+)子宫内膜癌，还有可能治疗绝经后综合症，对肿瘤转移也具有明显抑制作用。

发明内容

本发明公开了一类通式I的化合物异喹啉酮衍生物及其药学上可接受的盐：

通式I

其中R₁、R₂各自独立地表示H、OH、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₆烷氧羰基；

R₃、R₄各自独立地表示-CO(CH₂)₂CH₃、-CO(CH₂)₃CH₃或C₁-C₆烷基；或R₃和R₄及与其相连的氮原子结合成哌啶基、2-甲基哌啶基、高哌啶基、吗啉基、吡咯烷基、3-甲基吡咯烷基、3，3-二甲基吡咯烷基、3，4-二甲氧基吡咯烷基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、N-乙基哌嗪基、N-苯基哌嗪基、N-苄基哌嗪基。

X表示O、S、NH、CH₂或-CO-；

m＝0或1；

n＝2或3；

R₁、R₂优选表示OH或甲氧基。

R₃、R₄优选和N原子相连组成吡咯烷基、哌啶基或甲基哌嗪基、甲基、乙基、丙基、异丙基或正丁基。

X优选表示O。

本发明的通式I化合物可以用下列方法制备：

其中R₁、R₂、R₃、R₄、X、n、m的定义同前。

本发明的部分化合物的结构如下：

化合物代号	R₁	R₂	n	R₃，R₄
					Ia	CH₃O	CH₃O	2	CH₃
Ib	CH₃O	CH₃O	2	((CH₂)₂)₂NCH₃
					Ic	CH₃O	CH₃O	2	(CH₂)₅
Id	CH₃O	CH₃O	2	(CH₂)₄
					Ie	CH₃O	CH₃O	2	(CH₂)₂O(CH₂)₂
If	CH₃O	CH₃O	2	CH₂CH₃
					Ig	OH	OH	2	CH₃
Ih	OH	OH	2	(CH₂)₅
					Ii	OH	OH	2	(CH₂)₄
Ij	OH	OH	2	((CH₂)₂)₂NCH₃
					Ik	CH₃O	CH₃O	3	(CH₂)₄
Il	CH₃O	CH₃O	3	(CH₂)₅
					Im	OH	OH	3	(CH₂)₄
In	OH	OH	3	(CH₂)₅

本发明的化合物与盐形成的药学上可接受的盐同样包括在本发明内，通式I化合物可以与以下盐形成药用盐：盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐和马来酸盐等。

本发明进一步涉及通式I的化合物与药学上可接受的载体组成的药用组合物。本发明化合物可以单独或与一种或一种以上的药学上可以接受的载体组合制成制剂以供给药。可以用口服剂型给药，如片剂、胶囊、可分散粉末、颗粒剂等；也可制备成注射制剂。这些药用制剂中可以含有与载体组合的例如0.05％至90％重量的活性成分，更常见约15％至60％之间重量的活性成分。本发明化合物剂量可以是0.001-100mg/kg/天，可以根据疾病程度的不同或剂型的不同偏离此剂量范围。

药理试验显示，本发明化合物可用于减轻绝经后综合症的症状，特别是ER-(+)型乳腺癌，心血管相关的病理状态和骨质疏松。同时，本发明化合物也可明显抑制肿瘤转移。

本发明的化合物同样适用于抑制妇女的子宫纤维病变以及人的动脉平滑肌增生，特别是再狭窄。

下面是本发明部分化合物的部分药理学试验及结果：

1ER(α)亲和力实验

1.1实验材料

Estrogen Reeptor-alpha(ERα)Human Recombinant

荧光配基

ES2 Screening Buffer(Invitrogen，USA)

384孔黑色微孔板(Corning，USA)

枪头(Axygen，USA)

1.2实验步骤

1)Prepare Reagents

待测化合物每种精确称量，加入DMSO溶剂成母液，然后使用ES2 Screening Buffer配制待测化合物溶液至所需浓度

2)Prepare the 2X荧光配基/ERα Complex

使用ES2 Screening Buffer配制2X荧光配基与ERα混合液使最终荧光配基浓度为9nM，ERα浓度为30nM。

3)Perform the Competition Assay

先每孔加入50ul化合物，再每孔加入50ul 2X荧光配基与ERα混合溶液。同时加入50ul雌二醇溶液(1nM)，50ul 2X荧光配基与ERα混合溶液作为100％竞争结合对照、加入50ul Buffer，50ul 2X荧光配基与ERα混合溶液作为0％竞争结合对照以及加入100ulBuffer作为空白对照。避光操作。室温(20-25℃)孵育90min。

1.3数据处理

根据公式计算每个待测化合物对雌激素受体的抑制率(Inh％)

1.4活性结果(0.1mg/ml)

化合物代号	Inh％	化合物代号	Inh％
				他莫昔芬	100	Ih	87.14
Ia	63.12	Ii	95.93
				Ib	62.09	Ij	87.94
Ic	72.83	Ik	57.57
				Id	63.60	Il	59.65
Ie	64.84	Im	95.70
				If	69.10	In	99.89
Ig	88.57	-	-

以他莫昔芬为阳性对照，对合成的部分异喹啉酮-类化合物进行了ERα亲和力实验，实验结果表明，3、7位分别是对羟基苯基结构的化合物的活性要明显好于3、7位分别是对甲氧基苯基结构的化合物，推测是由于羟基与相关氨基酸残基的结合力要好于甲氧基与氨基酸残基的结合力。其中化合物Ii、Im、In进行复筛，IC50分别为3.1μM、2.3μM、1.3μM，阳性药他莫昔芬的IC50为1.9μM。

2KDR激酶抑制活性实验

2.1材料和方法：

2.1.1材料：

KDR激酶(Invitrogen，USA)

HTRF KinEASE-TK(Cisbio，USA)

ATP、MgCl2、MnCl2、DTT(国产)

384低体积白板(Corning，USA)

进口枪头(Axygen，USA)

2.1.2方法：

1)在反应容器中每孔加入KDR激酶溶液2μl，底物溶液2μl，缓冲液或待筛化合物4μl，ATP2μl。反应1小时。

2)每孔加入TK-Ab 5μl，SA-XL665 5μl，室温孵育1小时。

3)利用Beckman Coulter检测平台HTRF模块进行检测。

2.2待测样品及阳性化合物检测：

待测样品为向华教授课题组配置并提供的母液。

KDR阳性药选择抑制剂Sunitinib。

化合物代号	Inh％	化合物代号	Inh％
				舒尼替尼	100	Ih	84.83
Ia	66.07	Ii	49.87
				Ib	79.43	Ij	103.34
Ic	65.30	Ik	98.46
				Id	83.80	Il	72.75
Ie	51.19	Im	48.33
				If	92.54	In	100.26
Ig	79.43

以Sunitinib为阳性对照，对合成的部分异喹啉酮类化合物进行了KDR激酶抑制活性实验，研究结果表明，大部分化合物对KDR激酶均表现出一定的抑制活性，其中化合物Ij与In的活性最好，进行复筛，测其IC₅₀为分别为1.9μM与1.4μM，而Sunitinib的IC₅₀为1.03μM。

3MCF-7乳腺癌细胞增殖实验

参考文献Journal of Medicinal Chemistry.1997.40.1407-1416的方法，略加改动。

3.1实验材料

3.1.1细胞系

人乳腺癌细胞MCF-7，购自南京凯基生物技术公司

3.1.2试剂

RPMI1640培养基、青链双抗、小牛血清，购自GIBCO公司；

3-(4，5)-2-噻唑-(2，5)-二甲基溴化四氢唑蓝(MTT)，购自南京生兴生物公司；

其他试剂均为国产分析纯。

3.1.3主要实验仪器

美国Revco CO₂培养器；Labsystems Multiskan Ascent全自动酶标仪；德国Carl Ziess Axiovert 40 CFL型荧光倒置显微镜。

3.2实验方法

3.2.1细胞培养

MCF-7细胞用RPMI1640培养基(含10％小牛血清，100U/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素)于5％CO₂，37℃孵育箱中培养，约两天更换一次培养基，3-4天传一次代；传代细胞时，倒掉旧培养基，D-hanks洗两次(洗掉培养基中的酚红，因为酚红会影响胰酶的消化效果)，加入少量0.25％胰蛋白酶(25mg胰蛋白酶，100mlD-hanks)，铺平瓶底，37℃下消化约2分钟，倒置显微镜下观察到细胞变圆，倒掉胰酶，D-hanks洗一次，加入新鲜培养基，吹打混匀，分植入新的培养瓶中，继续培养。细胞计数，取少量细胞混悬液与0.4％台盼蓝溶液等体积混合，用吸管吹打混匀，取少许(15μl-20μl)混合物滴入计数板与盖玻片的上方空隙中，主要不要产生气泡，于200倍低倍显微镜下观察，死细胞可被台盼蓝染色，而活细胞不会，移动计数板至看到计数方格，数出各对角四个大格的未染色细胞数，记录包括压右线和上线的细胞，下线和左线不计，细胞数/ml＝25％格大格子细胞数×10⁴。

3.2.2MTT检测法

测定方法如下：将浓度为1×10⁵个/ml的MCF-7细胞分别接种至96孔板中，100μl/孔，培养24小时；加入100μl/孔的含药培养基，药物终浓度分别为1×10^-4mol/L，1×10^-5mol/L 1×10^-6mol/L 1×10^-7mol/L，每个浓度4个复孔，以同体积的培养基代替抗癌药物作为对照组，空白组为200μl培养基。培养48hr后加入5mg/mlMTT20μl/孔，继续培养4hr，小心吸出孔内液体，加入DMSO150μl/孔，570nm波长下测各孔吸光度OD值，计算细胞抑制率及IC₅₀。

化合物代号	IC₅₀(μM)	化合物代号	IC₅₀(μM)
				他莫昔芬	1.89E-6	Ih	3.63E-6
Ia	2.38E-3	Ii	1.18E-5
				Ib	4.29E-4	Ij	9.45E-6
Ic	3.22E-4	Ik	4.79E-4
				Id	8.63E-4	Il	5.29E-3
Ie	无效	Im	1.27E-5
				If	3.83E-4	In	2.73E-6
Ig	1.89E-5

以他莫昔芬为阳性对照，对合成的部分异喹啉酮类化合物进行了MCF-7细胞实验，研究结果表明，部分化合物对MCF-7细胞表现出较好的抑制活性，其中化合物In的活性最好，其IC₅₀为2.73μM。同时可以观察到3、7位分别是对羟基苯基结构的化合物的活性要明显好于3、7位分别是对甲氧基苯基结构的化合物，推测是由于羟基与相关氨基酸残基的结合力要好于甲氧基与氨基酸残基的结合力。这与之前ERα亲和力实验结果与KDR激酶抑制活性实验结果是一致的。

4MTT法测试HUVEC细胞增殖试验

测试方法：HUVEC以含10％胎牛血清的1640培养液培养，取对数生长期细胞用于实验。调整细胞密度为2×104个/mL，接种于96孔板，培养24小时后，加入100μl/孔的含药培养基，各个浓度4个复孔，以相同体积的培养基代替测试药物作为对照组，空白组为200μl培养基，混匀后继续培养48小时后，加入20μl/孔MTT(浓度为5mg/ml)。继续培养4h后，弃上清液，每孔加入DMSO 150μl/孔，酶标检测仪于570nm波长处测定每孔吸光度(A)值，按公式计算细胞增殖抑制率：抑制率＝(对照组A值-实验组A值)/(对照组A值-空白组A值)×100％，和计算IC50。

化合物代号	IC₅₀(μM)	化合物代号	IC₅₀(μM)
				他莫昔芬	5.3	Ih	8.52
Ia	3.14	Ii	4.18
				Ib	2.56	Ij	2.71
Ic	2.47	Ik	6.38
				Id	2.60	Il	3.53
Ie	7.8	Im	6.34
				If	1.15	In	2.79
Ig	2.20

结果：本发明的化合物显示出很好的抑制HUVEC活性，结合抗迁移活性实验，说明化合物能同时抑制细胞的迁移与增值。

5鸡胚绒毛尿囊膜试验检测药物的体内抗血管生成作用

取孵育第7天的鸡胚。通过光照找到胚头，用手钻轻轻剥去直径为1cm大小的蛋壳，同时在鸡胚气室处钻一小孔，负压吸引，使得剥去蛋壳的地方形成一个人工气室；小心去除壳膜，暴露绒毛尿囊膜(CAM)；分四个浓度梯度(3μM/枚，10μM/枚，30μM/枚)加药于制备好的无菌甲基纤维素滤纸薄片载体上，对照组加生理盐水，放入鸡胚气室尿囊绒膜上，将鸡胚气室用无菌透明胶带封上，放入恒温箱内培养，培养条件37℃、湿度60％。3d后取出鸡胚，局部采用丙酮和无水乙醇固定10min，剪下放有滤纸盘的CAM，去除滤纸。观察其新生血管分布情况，计数并拍照。重复实验3次。

附图说明：

图1是DMSO对照组鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图2是Sunitinib/3μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图3是Sunitinib/10μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图4是Sunitinib/30μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图5是Ij/3μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图6是Ij/10μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图7是Ij/30μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图8是Ij/3μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图9是Ij/10μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

图10是Ij/30μM鸡胚尿囊膜培养72小时的血管发育情况图

结果：鸡胚绒毛尿囊膜试验显示化合物Ij和In具有很好的体内抗血管生成的作用。

此外还进行了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外划痕实验，实验结果表明：多数化合物能抑制细胞的迁移，提示化合物对肿瘤的转移具有一定的抑制作用。

具体实施方式(所述实施例只是用来说明本发明，而不是用来限定本发明)

部分化合物的制备实例如下：

熔点用XT4型显微熔点测定仪；核磁共振氢谱仪为Bruker AV500型(TMS为内标)；质谱仪为岛津GCMS-QP2010型质谱仪或Mariner质谱仪；红外光谱仪为Nicolet Impact 410型(KBr压片)；元素分析仪为Elementar Vario EL III。

实施例1

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-异色烯-1-酮(IVa)的制备

间甲氧基高酞酸(0.18g，0.86mmol)，对甲氧基苯甲酰氯(0.09g，3.44mmol)，200℃搅拌6小时，加入50ml二氯甲烷，饱和碳酸钠洗涤，有机相旋干，柱层析得白色固体(0.092g，35％)。m.p.144-146℃

实施例2

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-羟基苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Va)的制备

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-异色烯-1-酮(1g，3.54mmol)，对羟基苯胺(1.93g，17.7mmol)，醋酸2ml，回流搅拌4小时，旋干，二氯甲烷溶解，1NHCl洗涤，有机相旋干，柱层析，得白色固体粉末0.67g，收率51.1％。m.p.236-240℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：3.76(s，3H，OCH3)，3.94(s，2H，OCH3)，6.67～7.75(m，12H，Ar-H&C4-H)，9.58(s，1H，OH)。EI-MS m/z：374[M]⁺。

实施例3

N-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐(VIa)的制备

将1.70g、相当于2ommol的哌啶，0.67ml、相当于10mmol的2-氯乙醇及2ml甲苯依次加入反应瓶中，升温至回流反应3h，冷却至室温，析出固体，抽滤，滤饼用1ml甲苯洗涤，滤液控温于75℃左右，滴加2ml二氯亚砜，滴毕，回流反应2h。冷却至室温，减压浓缩至干，残余物用无水乙醇重结晶，得到白色固体2.17g，收率59.2％。m.p.229-233℃。

实施例4

N-(3-氯丙基)哌啶盐酸盐(VIb)的制备

将1.72g、相当于20.3mmol的哌啶，2ml、相当于24.3mmol的3-氯丙醇及10ml甲苯依次加入反应瓶中，升温至回流反应4h，加入5％NaOH4ml，回流反应1h，冷却至室温，用5％NaOH溶液洗涤，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在冰浴下滴加3ml、相当于40.6mmol的二氯亚砜，滴毕，室温搅拌过夜反应。反应液减压浓缩至干，残余物用无水乙醇重结晶，得到土黄色固体2.4g，收率59％。m.p.218-220℃。

实施例5

2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(VIc)的制备

将16.1ml、相当于0.24mol的2-氯乙醇滴入13.4ml、相当于0.2mol的二甲胺中，滴毕，升温至回流反应4h，冷却至室温，加入40ml 4NNaOH溶液，30ml苯，剧烈搅拌后，静置分出苯层，水层用苯洗涤，合并苯层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到22ml油状物，加入40ml四氯化碳溶解，冰水浴冷却，滴加10ml二氯亚砜溶于10ml四氯化碳的溶液，滴毕，于室温反应4h，减压浓缩至干，残余物用乙酸乙酯重结晶，干燥得白色针状结晶17.5g，收率60.8％。m.p.199-203℃。

实施例6

3-二甲氨基氯丙烷盐酸盐(VId)的制备

将16.1ml、相当于0.24mol的3-氯丙醇滴入13.4ml、相当于0.2mol的二甲胺中，滴毕，升温至回流反应4h，冷却至室温，加入40ml 4NNaOH溶液，30ml苯，剧烈搅拌后，静置分出苯层，水层用苯洗涤，合并苯层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到22ml油状物，加入40ml四氯化碳溶解，冰水浴冷却，滴加10ml二氯亚砜溶于10ml四氯化碳的溶液，滴毕，于室温反应4h，减压浓缩至干，残余物用乙酸乙酯重结晶，干燥得白色针状结晶17.5g，收率60.8％。m.p.140-142℃。

实施例7

2-二乙氨基氯乙烷盐酸盐(VIe)的制备

将16.1ml、相当于0.24mol的氯乙醇滴入20.6ml、相当于0.2mol的二乙胺中，滴毕，升温至回流反应4h，冷却至室温，加入40ml 4NNaOH溶液，30ml苯，剧烈搅拌后，静置分出苯层，水层用苯洗涤，合并苯层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到22ml油状物，加入40ml四氯化碳溶解，冰水浴冷却，滴加10ml二氯亚砜溶于10ml四氯化碳的溶液，滴毕，于室温反应4h，减压浓缩至干，残余物用乙酸乙酯重结晶，干燥得白色针状结晶16.1g，收率46.6％。m.p.207-210℃。

实施例8

3-二乙氨基氯丙烷盐酸盐(VIf)的制备

将10ml甲苯，3ml、相当于28.9mmol的二乙胺和2.9ml、相当于34.6mmol的3-氯丙醇依次加入反应瓶中，升温至回流反应6h，冷却至室温，依次用5％NaOH溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在冰浴条件下滴加4.2ml，相当于57.7mmol的二氯亚砜，滴毕于室温搅拌过夜，反应液减压浓缩至干，残余物用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体2.1g，收率40％。m.p.80-82℃。

实施例9

N-(2-氯乙基)-4-甲基哌嗪二盐酸盐(VIg)的制备

将10ml、25％NaOH，和1ml、相当于9mmol的4-甲基哌嗪依次加入反应瓶中，升温至50℃，滴加1.8ml、相当于18mmol的1-溴-2- 氯乙烷，滴毕于50℃反应6h，冷却至室温，反应液用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，滴加少量的乙醇/氯化氢溶液，震摇，放置冰箱静置，减压浓缩至干，得到白色固体0.43g，收率23％。m.p.227-230℃。

实施例10

N-(3-氯丙基)-4-甲基哌嗪盐酸盐(VIh)的制备

将10ml25％NaOH，和1ml、相当于9mmol的4-甲基哌嗪依次加入反应瓶中，升温至50℃，滴加1.8ml、相当于18mmol的1-溴-3-氯丙烷，滴毕于50℃反应6h，冷却至室温，反应液用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，滴加少量的乙醇/氯化氢溶液，震摇，放置冰箱静置，减压浓缩至干，得到白色固体0.21g，收率11％。m.p.255-257℃。

实施例11

N-(2-氯乙基)四氢吡咯盐酸盐(VIi)的制备

将165ml、相当于2mol的四氢吡咯，67ml、相当于1mol的2-氯乙醇及200ml甲苯依次加入反应瓶中，升温至回流反应3h，冷却至室温，析出固体，抽滤，滤饼用20ml甲苯洗涤，滤液控温于75℃左右，滴加200ml二氯亚砜，滴毕，回流反应2h。冷却至室温，减压浓缩至干，残余物用无水乙醇重结晶，得到白色固体105g，收率62.3％。m.p.198-203℃。

实施例12

N-(2-氯乙基)四氢吡咯盐酸盐(VIj)的制备

将165ml、相当于2mol的四氢吡咯，67ml、相当于1mol的3-氯丙醇及200ml甲苯依次加入反应瓶中，升温至回流反应3h，冷却至室温，析出固体，抽滤，滤饼用20ml甲苯洗涤，滤液控温于75℃左右，滴加200ml二氯亚砜，滴毕，回流反应2h。冷却至室温，减压浓缩至干，残余物用无水乙醇重结晶，得到白色固体105g，收率62.3％。m.p.169-173℃。

实施例13

2-二异丙氨基氯乙烷盐酸盐(VIk)的制备

加入5ml、相当于35.7mmol的二异丙胺，滴加3.6ml、相当于53.6mmol的2-氯乙醇，滴毕，升温至回流反应5h，冷却至室温，加入8％KOH，10ml苯，搅拌，分出苯层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滴加5.2ml、相当于71.3mmol的二氯亚砜，滴毕，于室温反应12h，减压浓缩至干，得到白色固体2.73g，收率38％。m.p.129-131℃。

实施例14

N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(VIl)的制备

将5g、相当于57mmol的吗啉溶于15ml甲苯，滴加4.6ml、相当于69mmol的2-氯乙醇，滴毕，升温至回流5h，冷却，加入20ml5％NaOH洗涤，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于冰浴下冷却，滴加8.3ml、相当于114mmol的二氯亚砜，滴毕于室温下反应12h，减压浓缩至干，残余物用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体5.9g，收率55％。m.p.182-184℃。

实施例15

N-(3-氯丙基)吗啉盐酸盐(VIm)的制备

将5ml乙腈，2.3ml、相当于23mmol的1-溴-3-氯丙烷和1ml、相当于11.5mmol的吗啉依次加入反应瓶中，搅拌1h，加入0.5ml5％NaOH溶液，于室温搅拌反应12h，加入3ml浓盐酸，10ml水，下层弃去，上层用5％NaOH碱化，乙酸乙酯提取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，滴加少量的乙醇/氯化氢溶液，震摇，放置冰箱静置，减压浓缩至干，得到白色固体1.4g，收率60％。m.p.168-170℃。

实施例24

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(2-二甲胺基乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ia)的制备

将7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-羟基苯基)异喹啉-1(2H)-酮(0.3g，0.80mmol)，2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(0.22g，1.55mmol)，碳酸钾(0.49g，3.54mmol)和催化量碘化钾加入到丙酮(30ml)中，搅拌并加热至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体6a(0.12g，30％)。m.p.148-149℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.35(s，6H，NCH₃)，2.73(t，2H，NCH₂，J₁＝5.55，J₂＝5.25)，3.76(s，3H，OCH₃)，3.93(s，3H，OCH₃)，4.03(t，2H，OCH2，J₁＝5.46，J₂＝5.43)，6.53(s，1H，C4-H)，6.69～7.60(m，11H，Ar-H，)。EI-MS m/z：445[M] ⁺。

实施例25

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(2-(4-甲基哌嗪)乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ib)的制备

将0.27g、相当于0.72mmol的化合物V，0.2g、相当于1.44mmol的碳酸钾，0.14g、相当于1.44mmol的化合物VIg和30ml丙酮依次加入反应瓶中，升温至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，用20ml二氯甲烷溶解，滤掉不溶物，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.1g，收率28％。m.p.124-126℃。 ¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.38～2.67(m，11H，NCH₂NCH₃)，2.80(d，2H，NCH₂，J＝4.95)，3.73(s，3H，OCH₃)，3.90(s，3H，OCH₃)，4.03(d，2H，OCH2，J＝5.25)，6.52(s，1H，C4-H)，6.68～7.84(m，11H，Ar-H)。EI-MS m/z：500[M]⁺。

实施例26

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(2-哌啶乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ic)的制备

将0.27g、相当于0.72mmol的化合物V，0.2g、相当于1.44mmol的碳酸钾，0.29g、相当于1.44mmol的化合物VIb和30ml丙酮依次加入反应瓶中，升温至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，用20ml二氯甲烷溶解，滤掉不溶物，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.11g，收率31％。m.p.114-116℃。 ¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.17～1.78(m，6H，3，4-tetrahydropyridinyl-H)，2.97(s，2H，NCH2)，3.45(d，4H，2-tetrahydropyridinyl-H，J＝9.66)，3.69(s，3H，OCH₃)，3.87(s，3H，OCH₃)，4.33(s，2H，OCH2)，6.63(s， 1H，C4-H)，6.74～7.61(m，11H，Ar-H)。EI-MS m/z：485[M]⁺。

实施例27

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(2-吡咯烷乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Id)的制备

将0.27g、相当于0.72mmol的化合物V，0.2g、相当于1.44mmol的碳酸钾，0.25g、相当于1.44mmol的化合物VIi和30ml丙酮依次加入反应瓶中，升温至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，用20ml二氯甲烷溶解，滤掉不溶物，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.94g，收率28％。m.p.118-120℃。 ¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.88～2.01(m，4H，2-pyrrolidinyl-H)，3.09(s，2H，NCH2)，3.54(s，4H，3-pyrrolidinyl-H)，3.69(s，3H，OCH3)，3.88(s，3H，OCH3)，4.29(s，2H，OCH2)，6.63(s，1H，C4-H)，6.75～7.67(m，11H，Ar-H，)。EI-MS m/z：471[M]⁺。

实施例28

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(2-吗啉苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ie)的制备

将0.27g、相当于0.72mmol的化合物V，0.2g、相当于1.44mmol的碳酸钾，0.26g、相当于1.44mmol的化合物VIl和30ml丙酮依次加入反应瓶中，升温至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，用20ml二氯甲烷溶解，滤掉不溶物，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.1g，收率30％。m.p.80-82℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：3.19(s，2H，NCH₂)，3.46(s，4H，2-morpholinyl-H)，3.09(s，2H， NCH₂)，3.69(s，3H，OCH₃)，3.81(s，4H，3-morpholinyl-H)，3.87(s，3H，OCH₃)，4.37(s，2H，OCH2)，6.63(s，1H，C4-H)，6.69～7.70(m，11H，Ar-H，)。EI-MS m/z：487[M]⁺。

实施例29

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(2-二乙氨基乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(If)的制备

将0.27g、相当于0.72mmol的化合物V，0.2g、相当于1.44mmol的碳酸钾，0.27g、相当于1.44mmol的化合物VIf和30ml丙酮依次加入反应瓶中，升温至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，用20ml二氯甲烷溶解，滤掉不溶物，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.85g，收率25％。m.p.183-185℃。 ¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.29(t，6H，CH₃，J₁＝J₂＝7.05)，3.26(s，4H，NCH₂)3.52(s，2H，NCH₂)，3.93(s，3H，OCH₃)，3.88(s，3H，OCH₃)，4.36(s，2H，OCH2)，6.69(s，1H，C4-H)，6.81～7.77(m，11H，Ar-H，)。EI-MSm/z：473[M]⁺。

实施例30

7-羟基-3-(4-羟基苯基)-2-(4-(2-二甲胺基乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ig)的制备

将0.5g、相当于1.12mmol的化合物Ia，醋酸3ml，40％HBr1.5ml，回流搅拌24h，旋干柱层析得淡黄色固体0.38g，收率81％。m.p.188-190℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.76(s，6H，NCH₃)，2.79(s，2H，NCH₂)，4.24(s，2H，OCH₂)，6.54～7.70(m，12H，Ar-H&C4-H，)，9.55(s，1H， OH)，9.99(s，1H，OH)。EI-MS m/z：417[M]⁺。

实施例31

7-羟基-3-(4-羟基苯基)-2-(4-(2-哌啶乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ih)的制备

将0.54g、相当于1.12mmol的化合物Ic，醋酸3ml，40％HBr1.5ml，回流搅拌24h，旋干柱层析得淡黄色固体0.383g，收率75％。m.p.190-192℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.42～1.76(m，6H，CH₂&CH₃)，3.01～3.24(m，4H，NCH₂)，3.41(s，2H，N)，4.31(s，2H，OCH₂)，6.60～7.65(m，12H，Ar-H&C4-H)，9.60(s，1H，OH)，10.04(s，1H，OH)。EI-MS m/z：457[M]⁺。

实施例32

7-羟基-3-(4-羟基苯基)-2-(4-(2-吡咯烷乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ii)的制备

将0.53g、相当于1.12mmol的化合物Id，醋酸3ml，40％HBr1.5ml，回流搅拌24h，旋干柱层析得淡黄色固体0.39g，收率78％。m.p.180-182℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.88～2.01(m，4H，3，4-pyrrolidinyl-H)，3.10(s，2H，NCH₂)，3.56(s，4H，2-pyrrolidinyl-H1)，4.28(s，2H，OCH₂)，6.54～7.69(m，12H，Ar-H&C4-H)，9.58(s，1H，OH)，10.00(s，1H，OH)。EI-MS m/z：443[M]⁺。

实施例33

7-羟基-3-(4-羟基苯基)-2-(4-(2-(4-甲基哌嗪)乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ij)的制备

将0.56g、相当于1.12mmol的化合物Ib，醋酸3ml，40％HBr1.5ml，回流搅拌24h，旋干柱层析得淡黄色固体0.45g，收率85％。m.p.178-180℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.26(s，3H，NCH₃)，2.35(s，8H，NCH₂)，2.79(s，2H，NCH₂)，4.24(s，2H，OCH₂)，6.54～7.70(m，12H，Ar-H&C4-H，)，9.55(s，1H，OH)，9.99(s，1H，OH)。EI-MS m/z：472[M]⁺。

实施例34

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(3-吡咯烷基丙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Ik)的制备

将0.22g、相当于0.59mmol的化合物V，0.33g、相当于2.36mmol的碳酸钾，0.15g、相当于0.88mmol的化合物VIj和30ml丙酮依次加入反应瓶中，升温至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，用20ml二氯甲烷溶解，滤掉不溶物，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.1g，收率35％。m.p.140-142℃。 ¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.89～2.28(m，6H，2-pyrrolidinyl-H&3-pyrrolidinyl-H)，2.89(s，2H，2-pyrrolidinyl-H)，2.98(s，2H，NCH₂)，3.69(s，3H，OCH₃)，3.87(s，3H，OCH₃)，4.01(s，2H，OCH2)，6.62(s，1H，C4-H)，6.74～7.95(m，11H，Ar-H)。EI-MSm/z：485[M]⁺。

实施例35

7-甲氧基-3-(4-甲氧基苯基)-2-(4-(3-哌啶基丙氧基)苯基)异喹啉 -1(2H)-酮(Il)的制备

将0.22g、相当于0.59mmol的化合物V，0.33g、相当于2.36mmol的碳酸钾，0.15g、相当于0.88mmol的化合物VIb和30ml丙酮依次加入反应瓶中，升温至回流反应12h，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，用20ml二氯甲烷溶解，滤掉不溶物，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.11g，收率39％。m.p.128-130℃。 ¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.68～1.77(m，6H，3，4-tetrahydropyridinyl-H)，2.13(s，2H，2-tetrahydropyridinyl-H)，2.86(s，2H，2-tetrahydropyridinyl-H)，3.16(s，2H，NCH₂)，3.69(s，3H，OCH₃)，3.87(s，3H，OCH₃)，4.00(t，2H，OCH2，J₁＝5.46，J₂＝5.43)，6.62(s，1H，C4-H)，6.74～7.70(m，11H，Ar-H，)。EI-MS m/z：499[M]⁺。

实施例36

7-羟基-3-(4-羟基苯基)-2-(4-(3-吡咯烷丙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(Im)的制备

将0.54g、相当于1.12mmol的化合物Ik，醋酸3ml，40％HBr1.5ml，回流搅拌24h，旋干柱层析得淡黄色固体0.408g，收率80％。m.p.168-170℃。1H-NMR(CDCl3)δ：1.97(s，4H，3，4-pyrrolidinyl-H)，2.15(s，2H，2-pyrrolidinyl-H)，3.41(s，2H，2-pyrrolidinyl-H)，2.79(s，2H，NCH2)，4.17(s，2H，OCH2)，6.60～7.75(m，11H，Ar-H)，9.62(s，1H，OH)，10.07(s，1H，OH)。EI-MS m/z：457[M]+。

实施例37

7-羟基-3-(4-羟基苯基)-2-(4-(2-哌啶乙氧基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮(In)的制备

将0.56g、相当于1.12mmol的化合物Il，醋酸3ml，40％HBr1.5ml，回流搅拌24h，旋干，柱层析得淡黄色固体0.39g，收率75％。m.p.166-172℃。1H-NMR(CDCl3)δ：2.36(s，4H，3-morpholinyl-H)，2.79(s，2H，NCH2)，3.65(s，4H，2-morpholinyl-H)，4.01(s，2H，OCH2)，6.57～7.62(m，11H，Ar-H)，9.58(s，1H，OH)，10.01(s，1H，OH)。EI-MS m/z：471[M]+。

实施例38

取实施例29中所得化合物0.5g，淀粉2g，糊精1g混合，用适量30％乙醇作润湿剂，制粒，压片。

实施例39

取实施例30中所得化合物0.2g，溶于20ml二氯甲烷，25℃下搅拌并通入HCl气体，10min后将溶剂旋干，所得淡黄色固体即为化合物Ig的盐酸盐。

Claims

1.通式I的化合物或其药学上可接受的盐：

通式I

X表示O、S、NH、CH₂或-CO-；

m＝0或1；

n＝2或3；

2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中X表示O或S。

3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R₁、R₂各自独立地表示OH或甲氧基。

4.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3、R4和N原子相连组成吡咯烷基、哌啶基、甲基哌嗪基、甲基、丙基、异丙基或正丁基。

5.权利要求1的化合物的制备方法，包括：

其中R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y、Z、m、n的定义同权利要求1。

6.权利要求1的异喹啉酮化合物和其药学上可接受的盐，其中药学上可接受的盐是盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐和马来酸盐等。

7.一种治疗绝经后综合症、对肿瘤转移具有抑制作用的药物组合物，其中含有权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。

8.权利要求1的通式I化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗绝经后综合症、对肿瘤转移具有明显抑制作用药物的用途。

9.权利要求10的用途，其中绝经后综合症是骨质疏松、子宫肌瘤、雌激素依赖性乳腺癌、主动脉平滑肌细胞增殖或再狭窄。