CN102827053A

CN102827053A - 芳族脒衍生物，其制备方法及作为药物的用途

Info

Publication number: CN102827053A
Application number: CN2012103513433A
Authority: CN
Inventors: 郭丽
Original assignee: TIANJIN JIAHONG TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: TIANJIN JIAHONG TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-09-20
Filing date: 2012-09-20
Publication date: 2012-12-19

Abstract

本发明芳族脒衍生物，其制备方法及作为药物的用途公开了一种人工合成多肽药物制剂的制备方法，其特征在于采用溶剂溶解多肽，然后与载体均匀混合，将混合液平铺于玻璃皿上为一薄层，置于干燥箱中，在其下放干燥剂，在0～40℃条件下抽真空干燥，直到恒重；其中所述溶剂为：甲醇、乙醇或丙酮；载体采用寡糖类、氨基酸、空微囊类或与多肽复配的药物；所述多肽与载体的重量份数比为0.1-1:1。本发明的制备方法简单，除去了冻干设备和运转费用，可大大降低制剂的成本，更有利于大规模的工业化生产。

Description

芳族脒衍生物,其制备方法及作为药物的用途

技术领域

本发明属于有机药物合成技术领域，具体涉及新颖化合物、其互变异构体及其盐类，尤其是其与无机的或有机的酸或碱的生理上可接受的盐类，这些化合物具有抗凝血的性质。

背景技术

心血管疾病是世界上导致人类死亡的首位疾病。世界卫生组织估计每年有1750万人死于心血管疾病和脑卒中，占世界总死亡人数的1/3。预计到2030年，这个数字将升至2420万人，也就是说，32.5%的死亡是由心血管疾病导致。因此心血管药物始终是世界各大医药公司研发的热点。在心血管疾病中，血栓一直是一种最常见的疾病。

凝血酶是凝血因子Ⅱ的激活形式，催化纤维蛋白原产生纤维蛋白导致凝血，形成血栓，在凝血级联反应中处于核心地位。长久以来抗凝金标准药物华法林一直作为一线抗血栓药物而使用。但其具有起效慢，而且需要抗血栓国际标准化比值（INR）监测，容易引起出血，且药物-药物、药物-食物相互作用多等缺点。另外两类在抗血栓治疗中应用广泛的药物为低分子肝素类和噻吩并吡啶类。但这两类药物同样具有容易引起出血和服用不方便、治疗窗窄等不足之处，因此亟需研发出一种新型、有效、方便、快捷的药物改变这种格局。AZD0837作为新一代口服直接凝血酶抑制剂，比维生素K拮抗剂和低分子肝素类更方便，起效迅速，体内生物利用度高，而且该药的耐受性和安全性都令人满意，是一种非常有前景的未来药物，但由于其口服剂量较大（150mg，300mg每天两次），因此有必须要对其结构进行改造，增强其活性，降低剂量。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种通式（Ⅰ）的新颖化合物、及互变异构体和其盐类。

本发明另一个目的在于提供一种通式（Ⅰ）新颖化合物的制备方法。

本发明再一个目的在于提供一种含有通式（Ⅰ）新颖化合物的药物组合物。

本发明还一个目的在于公开了通式（Ⅰ）化合物在制备治疗心血管疾病，特别是作为凝血酶抑制剂药物中的应用。

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

一种通式为（Ⅰ）的化合物，及其互变异构体和生理上可接受的盐：

（Ⅰ）

其中，R₁为氢原子、C_1-6-烷基，例如，甲基、乙基、丙基、己基等。

R₂为羟基、C_1-6-烷基氧基，例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、己氧基等。

C_1-6-烷基与C_1-6-烷基氧基含有多于2个碳原子的烷基也包括其具有支链的异构体，例如，异丙基、异丁基、叔丁基等。

本发明所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其中含有多于2个碳原子的烷基是异丙基、叔丁基和异丁基。

本发明所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其中所述的成用到的酸为：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、富马酸、丁二酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、琥珀酸、马来酸或苹果酸，典型成盐的化合物为

（1）将1.0g的（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基丙酯（Ⅰ-2）溶解于20ml的乙醇中，搅拌溶解，滴加饱和的盐酸乙醇溶液10ml，慢慢有白色固体析出，静置，过滤，乙醇洗涤，干燥。得到白色固体（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基丙酯盐酸盐1.02g。M/S 575(M+1)⁺。

（2）按照上述的试验方法可以制备（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基丙酯氢溴酸盐。M/S 619(M+1)⁺。（氢谱也是相同的）

通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其中所述的互变异构体如（Y）所示：

（Y）。

本发明涉及通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其典型的化合物为：

（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基乙酯（Ⅰ-1）；

（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基丙酯（Ⅰ-2）；

（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基异丁酯（Ⅰ-3）；

（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基丁酯（Ⅰ-4）；

（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-乙氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基丙酯（Ⅰ-5）；

（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-乙氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基异丁酯（Ⅰ-6）；

（R）-1-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-乙氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基丁酯（Ⅰ-7）。

本发明进一步公开了通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐的制备方法，其特征在于；

将13与氯乙酸反应得到终产物（Ⅰ）：

13 （Ⅰ）

其中，R₁为氢原子、C_1-6-烷基；

R₂为羟基、C_1-6-烷基氧基，C_1-6-烷基与C_1-6-烷基氧基含有多于2个碳原子的烷基也包括其具有支链的异构体。

本发明进一步公开了一种包含通式（Ⅰ）的化合物或盐类，任选一种或多种惰性载体及/或稀释剂混合的药物组合物。包括皮下给药或口服的制剂。

本发明涉及通式Ⅰ化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐类，适用的酸的实例包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、富马酸、丁二酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、琥珀酸、马来酸或苹果酸。

一种药物制剂，其所包含的化合物或盐类，任选一种或多种惰性载体及/或稀释剂混合。所述的口服制剂为片剂、颗粒剂、口含片、胶囊或口服液；注射剂为皮下注射或静脉注射。例如将药物组合物可以按照常规药物配制技术，将活性成分与可药用载体紧密混合来制备本发明的药物组合物，该载体可以依据想要的用于给药的形式采用广泛多样的制剂形式。

在制备口服剂型的组合物时，任何常用药物介质均可以使用。因此对于口服液体制剂如混悬液、酏剂和溶液剂，合适的载体和添加剂包括水、乙二醇、油、乙醇、调味剂、防腐剂、稳定剂、着色剂等等；对于口服固体制剂如散剂、胶囊剂、含片、软胶囊和片剂，合适的载体和添加剂包括淀粉、蔗糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。合适的粘合剂包括，不限于淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜料、天然和合成的胶如阿拉伯胶或油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等等。崩解剂包括，不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄单胞菌胶等等。因为易于给药，片剂和胶囊剂代表最方便的口服单元剂量形式，该类情况下明显使用固体药用载体。如果需要，片剂可以通过标准技术包糖衣或肠溶衣。

本发明的药物组合物每剂量单位例如片、胶囊、散剂、注射剂等等应包含必需释放如上所述的有效剂量的有效成分量。本发明的药物组合物每剂量单位例如片、胶囊、散剂、注射剂、含片等等应包含约1～1000 mg，优选约10～500 mg并且可以约0.001～5.0 mg/kg/day、优选约0.01～0.5 mg/kg/day。然而，剂量可以依据受试者的需要、所治疗疾病的严重度和使用的化合物改变。每日给药或周期后增量可以使用。本领域的技术人员可以容易地确定理想给药剂量，并且这些给药剂量将随着具体使用的量、给药模式、制剂的浓度以及疾病病症的进展而改变。另外与所治疗的具体患者相关的因素，包括患者年龄、体重、饮食和给药时间会导致需要调整剂量。

本发明化合物或其可药用盐可以单独或以药物组合物的形式给药。本发明药物组合物可根据给药途径配成各种适宜剂型。使用一种或多种生理学上可接受的载体，包含赋形剂和助剂，它们有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂。适当的制剂形式取决于所选择的给药途径，可以按照本领域熟知的常识进行制备。

给药途径可以是口服、非肠道或局部给药，优选口服和注射形式给药。可以口服的药物制剂包括胶囊剂和片剂等。本发明化合物也可以配制用于肠胃外给药或者透皮给药或者经粘膜给药，或者采用栓剂或者埋植剂的方式给药。本领域技术人员可以理解，本发明化合物可以采用合适的药物释放系统（DDS）以得到更有利的效果。

附图说明：

图1为通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐的结构式；

图2为通式（Ⅰ）化合物的互变异构体。

具体实施方式

下面结合实施例说明本发明，这里所述实施例的方案，不限制本发明，本领域的专业人员按照本发明的精神可以对其进行改进和变化，所述的这些改进和变化都应视为在本发明的范围内，本发明的范围和实质由权利要求来限定。

首先参考文献（WO03101423A1）方法合成式Ⅰ所示的化合物衍生物：

其中，R₁为氢原子、C_1-6-烷基，及R₂为羟基、C_1-6-烷基氧基，C_1-6-烷基与C_1-6-烷基氧基含有多于2个碳原子的烷基也包括其具有支链的异构体。

参考实施例1

在1中加入异丙醇和30% KOH溶液，加热回流，通入一氯二氟甲烷，反应 2 h。冷却至室温，用稀盐酸酸化，乙酸乙酯（EA）萃取。有机层用盐水洗，硫酸钠干燥，过滤，浓缩纯化得到2。2溶于二氯甲烷，冰浴至0℃，加入ZnI₂和三甲基氰硅烷，然后升至室温搅拌15h，反应液浓缩得到3。将3滴加入HCl/EtOH溶液中，搅拌15h，浓缩得到产物4。4溶解于THF，加入0.5 mol/L H₂SO₄，然后在40℃下搅拌65 h，冷却，混合物用Et₂O萃取，硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到5。将5和异丙醇在20% KOH溶液中常温搅拌15h，浓缩，用1 mol/L H₂SO₄酸化，Et₂O萃取，无水NA₂S0₄干燥，减压浓缩纯化得到固体；用氨水处理得铵盐，然后用EA/H₂O（1:1）溶解铵盐，2当量HCl酸化，有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到6。将7和8溶于EtOH/H₂O（2:1）溶液，冷却至0℃下加入NaOH，反应液室温搅拌过夜。然后蒸出乙醇，再加入适量水，用稀盐酸调pH = 3。然后用乙酸乙酯萃取，得到的产物用水洗，盐水洗，硫酸钠干燥。得到白色产物9。向9的DMF溶液中加入苯并三唑四甲基四氟硼酸（TBTU），0.5h后，加入4-(氨甲基)苯腈和N,N-二异丙基乙胺（DIEPA）的DMF溶液。反应液常温搅拌过夜，然后浓缩纯化得到10。10与甲氧胺盐酸盐溶于乙醇溶液中，反应加热回流6-12h。然后冷却，减压浓缩。剩余物溶解于乙醇中，用5% w/w Na₂CO₃ 水溶液洗。有机相硫酸镁干燥，浓缩，柱层析纯化得到11。向11的n-BuOAc/EtOH溶液中加入浓度为12 mol/L HCl。反应混合物加热至35℃。在3小时后混合物冷却至0℃，过滤，固体用n-BuOAc和EtOH洗，再用乙酸乙酯洗，40℃下真空干燥得到12的盐酸盐。6溶于无水乙醇中，搅拌下加入N-甲基吗啡啉，12和TBTU。搅拌过夜，反应完成后水洗，15%碳酸钾溶液洗，盐水和水洗，浓缩干燥得13。13再与氯乙酸反应得到终产物（Ⅰ）。

制备实施例 1

（R）-1-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基乙酯（Ⅰ-1）的合成

将3-氯-5-羟基苯甲醛1（7.5g，48mmol）溶于异丙醇（250ml）和30%KOH（100ml）溶液中，加热回流。然后向反应液中加入一氯二氟甲烷，继续搅拌2小时。反应液冷却，用1N HCl酸化，乙酸乙酯（2×100ml）提取。有机物用盐水洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤浓缩。经硅胶柱分离得到目的化合物2（4.6g，46%）。

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9.95 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.60 (t, 1H)。

将3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛2（4.6g，22.3 mmol）溶于CH₂Cl₂（200 mL），冷却至0℃。加入ZnI₂（1.8g，5.6mmol）和三甲基氰硅烷（2. 8 g, 27.9 mmol），反应液升至室温搅拌15小时。浓缩反应液得到液体目的产物，直接用于下一步。向2-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-（三甲基硅基）氧基）乙腈3（6.82g, 22.3 mmol）中滴加入HCl/EtOH溶液（500ml）。反应液搅拌15小时，然后减压真空部分浓缩得到液态的目的产物4，直接用于下一步。

将乙基2-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰亚胺4（6.24 g, 约 22.3 mmol）溶解于THF (250 mL)，加入0.5M 的H₂SO₄ (400 mL)，反应液于40℃下搅拌65小时，冷却，部分浓缩蒸出大部分THF。反应液然后用Et₂O (3 x 100 mL)提取，无水Na₂S0₄干燥，过滤浓缩后得到固体目的产物5，直接用于下一步。

将乙基-2-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酸盐5（6.25 g, 约 22.3 mmol）溶于异丙醇（175 ml）和20% KOH溶液（350 ml），室温搅拌15小时。反应液减压蒸除掉大部分异丙醇。剩余物用1M H₂SO₄酸化，Et₂O提取（3 x 100 ml），无水Na₂S0₄干燥，过滤浓缩后得到固体目的产物6（3.2 g，收率57%）。

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7.38 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6. 89(t, J = 71.1 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H)

将（S）-2-杂氮环丁烷羧酸8（1.0 g, 10.0 mmol）和二碳酸二叔丁酯7（2.83 g, 12.5 mmol）溶于乙醇（20 mL）和水（10ml）中，冷却至0℃，加入NaOH (420 mg, 10.5 mmol)。反应液室温搅拌过夜。蒸掉乙醇，加入水（20 mL），然后用稀盐酸酸化调pH=3，乙酸乙酯（3×50ml）提取。合并后的乙酸乙酯用水（30ml），饱和食盐水（30ml）洗，无水Na₂SO₄干燥，蒸干后得到1.98g（100%）固体目的产物9。

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.79 (m, 1H), 3.93 (m, 2H), 2.46 (m, 2H), 1.48 (s, 9H)。

向冰冷却的1-（二碳酸二叔丁酯）氮杂环丁烷-2-羧酸9（0.194 g, 0.96 mmol）的DMF（5ml）溶液中加入TBTU（0.50 g, 9.6 mmol）。30min后加入另一种溶液，4-氨甲基苯腈（0.17 g, 0.81 mmol）和二异丙基乙胺（0.326 g, 2.53 mmol）的DMF（7ml）溶液。生成溶液室温搅拌过夜。蒸干溶剂，产物用制备好的RPLC[ CH₃CN: 0.1M NH₄OAc (50: 50)]纯化。冷冻干燥得到0.237g（74%）目的产物10。

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7.70 (m, 1H), 7.35-7. 25 (m, 2H), 4.65-4. 35 (m, 3H), 4.0- 3.85 (m, 2H), 2.51 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.40 (s, 9H)

(S)-叔丁基2-((4-氰基苯基)胺甲酰基) 杂氮环丁烷基-1-羧酸10（3.28g，10.4mmol）通入饱和的盐酸乙醇溶液中，然后加入甲氧基胺盐酸盐（0.88g，10.4mmol），反应16h。反应液冷却后减压浓缩。剩余物溶于乙酸乙酯，用5%的Na₂CO₃溶液萃取。取有机相用MgSO₄干燥，蒸干后经柱层析纯化得到目标化合物11。

将(S)-叔丁基2-((4-氰基苯基)胺甲酰基) 杂氮环丁烷基-1-羧酸11溶于n-BuOAc/EtOH溶液中滴加浓盐酸（2.1ml，4eq。12M）。反应混合物升温至35℃。3小时后，反应物逐渐冷却至0℃然后保持在0℃至少1小时。过滤，晶体用n- BuOAc（5.3ml）和EtOH（1.6ml）的混合液洗涤，再用EtOAc（6.9ml）洗。于40℃下真空干燥得到1.50g产物12（4.47mmol，收率70.6%， HPLC纯度99.0%）。

取（R）-2-（3-氯-5-（二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酸6（12.6g，50mmol）溶于乙酸乙酯（126ml），0℃下搅拌，然后加入N-甲基吗啉（16.5ml，150mmol），（S，Z）-N-（4-（N′- 甲氧基脒基亚甲基）苯基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺盐酸盐12（16.8g，50mmol）。反应升温至室温，搅拌过夜。反应物之后用水洗，15%碳酸钾水溶液洗，饱和食盐水洗，干燥，浓缩。于40℃下向浓缩液（115ml）中加入苯磺酸（7.1g，45mmol），反应液40℃下搅拌2小时，之后室温搅拌过夜。待沉淀完全后过滤，固体洗涤后于40℃下真空干燥，得到目的产物13（22.6g，69%）。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 2.10(m, 1H), 2.22(m, 1H), 2.48(m, 1H), 2.62(m, 1H), 3.86(s, 3H), 3.94(m, 1H), 40.4(m, 1H), 4.12(m, 1H), 4.30(m, 1H), 4.40-4.60(m, 2H), 7.42(m, 1H), 5.08(s, 1H), 5.12(m, 1H), 5.15(s, 1H), 6.85(t, 1H), 6.90(t, 1H), 7.10-7.40(m, 7H)，M/S 533(M+1)⁺。

将（S）-1-（（R）-2-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰基）-N-（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺13（22.6g，45.55mmol）溶于二氯甲烷（300ml）中，加入适量碳酸钾，搅拌下滴加氯乙酸（4.3g，45.55mmol），室温反应，溶液蒸干，柱层析纯化，得到终产物（R）-1-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-（（S）-2-（（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氨基甲酰基）氮杂环丁基-1-基）-2-氧乙基乙酯（Ⅰ-1）25.3g。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 2.10(m, 1H), 2.22(m, 1H), 2.48(m, 1H), 2.62(m, 1H), 2.89(s, 1H), 3.86(s, 3H), 3.94(m, 1H), 40.4(m, 1H), 4.12(m, 1H), 4.30(m, 1H), 4.40-4.60(m, 2H), 7.42(m, 1H), 5.08(s, 1H), 5.12(m, 1H), 5.15(s, 1H), 6.85(t, 1H), 6.90(t, 1H), 7.10-7.40(m, 7H)，M/S 539(M+1)⁺；

13 （Ⅰ）。

实施例 2-7

参照实施例1的操作，区别在于选用不同的羟基化合物与不同的酸侧链反应，得到下述式Ⅰ的化合物：

实施例	不同的羟基化物（13）	酸侧链	产物	M/S (M+1)⁺
					2	（S）-1-（（R）-2-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰基）-N-（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺13a	丙酸	Ⅰ-2	553
3	（S）-1-（（R）-2-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰基）-N-（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺13a	异丁酸	Ⅰ-3	567
					4	（S）-1-（（R）-2-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰基）-N-（4-（（E）-N′-甲氧基脒基亚甲基）苄基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺13a	丁酸	Ⅰ-4	567
5	（S）-1-（（R）-2-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰基）-N-（4-（（E）-N′-乙氧基脒基亚甲基）苄基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺13b	丙酸	Ⅰ-5	567
					6	（S）-1-（（R）-2-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰基）-N-（4-（（E）-N′-乙氧基脒基亚甲基）苄基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺13b	异丁酸	Ⅰ-6	581
7	（S）-1-（（R）-2-（3-氯-5-二氟甲氧基）苯基）-2-羟基乙酰基）-N-（4-（（E）-N′-乙氧基脒基亚甲基）苄基）氮杂环丁烷-2-甲酰胺13b	丁酸	Ⅰ-7	581

实施例 8

本发明公开的通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐在制备作为凝血酶抑制剂药物中的应用主要做了抗凝活性评价-活化部分凝血活酶时间（aPPT）的测定：

将质量18-20g的昆明小鼠，随机分组，每组10只，禁食过夜。将AZD0837及待测目标化合物悬浮或溶解于1%的羧甲基纤维素钠的水溶液中，配成1mg/mL的浓度，按10mg/Kg的剂量（折合成AZD0837计算）灌胃给药，半小时后通过心脏穿刺取血，加入4%枸杞酸钠溶液至0.4%终浓度抗凝，12000r/min离心5分钟，取血浆0.1mL，加入aPPT试剂0.1mL，37℃预温3分钟后，加入37℃预温的氯化钙溶液0.1mL，用血小板聚集凝血因子分析仪测定凝固时间，即为aPPT值，结果见表1：

化合物	aPPT(sec)	剂量（mg）
			生理盐水	19.1±3.2	-
AZD0837	75.2±1.2	75
			Ⅰ-1	78.4±3.0	75
Ⅰ-2	33.7±4.5	50
			Ⅰ-3	121.3±2.1	75
Ⅰ-4	65.4±3.2	75
			Ⅰ-5	45.2±3.1	50
Ⅰ-6	88.0±2.5	75
			Ⅰ-7	103.5±2.6	50

表1 活化部分凝血活酶时间（aPPT）的测定结果。

结论：

活化部分凝血活酶时间是内源性凝血系统的一个较为敏感的筛选试验，主要反映内源性凝血是否正常。正常范围为32～43秒，较正常对照值延长或缩短10S以上为异常。从上面的实验结果可以看出：

（1）表1中化合物Ⅰ-1、Ⅰ-4和Ⅰ-6与AZD0837基本相当；

（2）化合物Ⅰ-2和Ⅰ-5在剂量降低的条件下，均能达到正常的aPPT水平，因此活性较好，可以达到降低剂量，增强活性的目的；

（3）而化合物Ⅰ-7即使在降低剂量的条件下其aPPT值也较大，在临床上容易出现出血的风险。

实施例9

本实施例用于说明本发明的化合物Ⅰ-2的药物组合物的制备。

处方： 100片

实施例2（Ⅰ-2） 5.0g

乳糖 8.0g

微晶纤维素 3.0g

交联聚维酮 0.4g

羟丙甲纤维素 0.2g

硬脂酸镁适量

将化合物Ⅰ-2过80目筛，辅料过60目筛。按处方量称取化合物Ⅰ-2、微晶纤维素和乳糖充分混合均匀，加入1 %（重量/体积）羟丙甲纤维素水溶液混合，制软材，过筛，制湿颗粒，于55℃干燥。将交联聚维酮和硬脂酸镁加到上述的颗粒中，测定中间体含量，压片，包装。

实施例10

处方： 100粒胶囊

实施例2（Ⅰ-2） 50.0g

乳糖 6.0g

预胶化淀粉 3g

微晶纤维素 2.0g

羧甲淀粉钠 0.4g

硬脂酸镁适量

将化合物Ⅰ-2过80目筛，辅料过60目筛。按处方量称取化合物Ⅰ-2、微晶纤维素、预胶化淀粉和乳糖充分混合均匀，加入1%（重量/体积）羟丙甲纤维素水溶液混合，制软材，过筛，制湿颗粒，于55℃干燥。将硬脂酸镁加到上述的颗粒中，测定中间体含量，装胶囊，包装。

实施例11

本实施例用于说明本发明的化合物Ⅰ-5的药物组合物的制备。

处方： 100袋颗粒

实施例5（Ⅰ-5） 50.0g

乳糖 6.0g

甘露醇 2.0g

阿司帕坦 0.005g

香精 0.005g

2 %羟丙甲纤维素（纯水配制）适量

将化合物Ⅰ-5过80目筛，辅料过60目筛。按处方量称取化合物Ⅰ-5、乳糖、甘露醇、阿司帕坦、香精充分混合，再加入2%（重量/体积）羟丙甲纤维素水溶液制软材，16目筛制粒，55℃干燥，14目筛整粒，测定中间体含量及水分，包装，共制得100袋颗粒剂。

实施例12

每片含100mg活性成分的片剂制备如下：

用量/片

实施例2（Ⅰ-2） 100 mg

微晶纤维素 55 mg

淀粉 45 mg

羟甲纤维素 4 mg

羧甲基淀粉钠盐 5 mg

硬脂酸镁 1 mg

滑石粉 1 mg

取适量各成分，将活性成分，淀粉和纤维素过筛，并充分混合，将羟甲纤维素溶液与上述的粉混合，过筛，制得湿颗粒于50-60℃干燥，将羧甲基淀粉钠盐，硬脂酸镁和滑石粉预先过筛，然后加入到上述的颗粒中压片。

实施例13

注射剂的制备

实施例5（Ⅰ-5） 100mg

柠檬酸钠 50mg

PEG3000 10mg

氢氧化钠适量

蒸馏水 10ml

使pH值为7.5-8.5过滤，滤液浓度为1毫克/毫升，按每安瓶2毫升分装，灭菌，即得注射剂。

Claims

1.一种通式为（Ⅰ）的化合物，及其互变异构体和生理上可接受的盐：

（Ⅰ）

其中，R₁为氢原子、C_1-6-烷基；

2.权利要求1所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其中含有多于2个碳原子的烷基是异丙基、叔丁基和异丁基。

3.权利要求1和2所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其中成盐用到的酸为：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、富马酸、丁二酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、琥珀酸、马来酸或苹果酸。

4.权利要求1和2所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其中所述的互变异构体如（Y）所示：

（Y）。

5. 权利要求1和2所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐，其典型的化合物为：

6.权利要求1所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐的制备方法，其特征在于；将13与氯乙酸反应得到终产物（Ⅰ）：

13 （Ⅰ）

其中，R₁为氢原子、C_1-6-烷基；

7.一种药物组合物，其包含权利要求1至3中任一项化合物或盐类，任选一种或多种惰性载体及/或稀释剂的混合。

8.权利要求7所述的药物组合物，其组合物为皮下给药或口服的制剂。

9.权利要求1-4任一项所述通式（Ⅰ）化合物及其互变异构体和生理上可接受的盐在制备作为凝血酶抑制剂药物中的应用。